LES HELMINTHES PARASITES

LES HELMINTHES PARASITES
INRB avril 2009
Philippe Gillet
Department of Clinical Sciences, Unit of Tropical Laboratory Medicine
Examens
parasitologiques
(Pour les helminthes intestinaux...)
SELLES : Prélèvement
Volume
minimum : 5 g « une prune »
Pas recueillies (ou conservées) sur du matériel
absorbant .
Si examen différé, conservez de préférence à +
4°C.
Fixation des selles (SAF Sodium acétate/Acide acétique/formol
ou MIFmerthiolate iode formol) :
? Pas nécessaire pour les helminthes sauf si
l’examen doit être différé (envoi par la poste,…).
METHODES
SANS
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Examen direct
Spécifiques
DE
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Spécifiques
EXAMEN DIRECT
Petite quantité de selles mises en suspension sur la lame dans une
goutte d'eau physiologique.
Recouvrez le tout d'une lamelle (20 mm x 20 mm).
Examinez systématiquement 100 x. (détails 400 x).
Examen au lugol Seul avantage pour les helminthes : immobilisation des
larves et coloration.
Examen systématique d'une lamelle 20 mm x 20 mm = +/- 2 mg de selles.
METHODES
SANS
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Spécifiques
Examen direct
Kato-Katz
Tape test
DE
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Spécifiques
Kato-Katz (1)
Principe :
« décoloration »
Kato-Katz (2)
De 20 à 50 mg de selles sur une lame.
Recouvrez d’un papier cellophane imbibé de glycérol-vert de malachite
(cellophane 30 mm x 20 mm trempé pendant au moins 24 heures dans
la solution glycérinée).
Aplatissez par pression.
Après un temps d’éclaircissement de 30 minutes à 24 heures,
examinez systématiquement au microscope 100x.
Le temps d’éclaircissement dépend du type d’œuf recherché et de la
concentration en glycérol.
Uniquement pour la recherche d’helminthes
pas examen de routine
Quantitative si usage d’un gabarit
Kato-Katz
Tape-test (1)
Principe : « attrape mouche »
Tape-test (2)
Avant défécation ou toilette.
Papier collant transparent sur tube à essai, face
collante vers l’extérieur.
Appliquez en péri-anal.
Collez sur une lame.
(Eau physiologique entre la lame et le ruban adhésif).
Examinez à l’objectif 10x).
GANTS + LAVAGE DES MAINS
T. saginata
METHODES
SANS
CONCENTRATION
DE
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Spécifiques
Non- spécifiques
Examen direct
Kato-Katz
Sédimentation
Tape test
Flottation
Spécifiques
Sédimentation RITCHIE (1)
Principe :
1 Solubilisation
2 Sédimentation
Concentration RITCHIE (2)
3 g de selles + 42 ml d’eau
physiologique.
Homogénéisation.
1,5 ml dans un tube à fond
conique.
3,5 ml d’eau physiologique.
5 ml d’éther.
(2 gouttes de xylol).
Mélangez vigoureusement 1
minute.
Centrifugez 3 – 5 minutes à
2.000 RPM (650g).
Concentration RITCHIE (3)
Après centrifugation, on retrouve 4 couches :
← Ether et graisses
← Débris
← Eau physiologique (formolée)
← Culot de sédimentation contenant les
parasites éventuels
Concentration RITCHIE (4)
Résultat quantitatif : OPG (nombre d’œufs par gramme
de selles) :
3 grammes de selles dans un volume final de 45 ml.
Examen systématique du culot de centrifugation de 1,5 ml de
cette dilution.
Nombre d’œufs présents dans 0,1 gramme de selles.
En multipliant donc le nombre d’œufs comptés dans tout le
sédiment par 10, on obtient le nombre d’œufs par gramme de
selles.
L’OPG n’est PAS utile pour les cestodes, Enterobius
vermicularis et Ascaris lumbricoides.
Sedimentation (6)
Formol - éther
Formol – éthylacétate
commercialisé :
PARASEP ®
FPC ®
Flottation (1)
PRINCIPE : « mer rouge »
Flottation (2)
±5 g de selles
+ 100 ml d’une solution saturée de NaCl
(ou ZnSO4).
Homogénéisez (tamisez si nécessaire).
Versez la suspension dans un tube à essai
à ras bord.
Appliquez une lamelle sur l’ouverture du
tube.
Après 30 minutes, transférez la lamelle
(toujours en position horizontale) sur une
lame.
Observez systématiquement 100x.
Pas pour trématodes (poids spécifique).
Flottation (3)
Commercialisé :
Flotac ®
METHODES
SANS
CONCENTRATION
DE
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Spécifiques
Non- spécifiques
Examen direct
Kato-Katz
Sédimentation
Tape test
Flottation
Spécifiques
Baermann
Baermann (1)
Principe : «bain d’eau chaude »
Baermann (2)
20 g de selles dans une passoire.
Remplir l’entonnoir d’eau tiède (3035°C).
Attendre au moins 6 heures.
Recueillir environ 10 ml de l’eau du
fond de l’entonnoir dans un tube à
centrifuger.
Centrifuger 10 minutes 2.000 rpm
(650 g).
Décanter le surnageant.
Examiner le culot au microscope,
100 x.
(les larves sont souvent encore
vivantes)
Baermann (3)
Conditions :
Min 20 g de selles.
Selles fraîches (< 5 heures).
Selles non réfrigérées.
Selles non fixées.
Pas après Barium.
Selles moulées.
METHODES
SANS
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Spécifiques
DE
CONCENTRATION
Non- spécifiques
Spécifiques
examen macroscopique
examen du crachat
examen de l’urine... (sédimentation / filtration)