Kamphues J. - IFA
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Tagungsband 7. BOKU-Symposium TIERERNÄHRUNG Tierernährung im Spannungsfeld zwischen Lebensmittelproduktion, Energieerzeugung und Umweltschutz 4. Dezember 2008, Wien Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Department für Lebensmittelwissenschaften und -technologie BOKU – University of Natural Resources and Applied Life Sciences, Vienna Universität für Bodenkultur Wien Tagungsband: 7. BOKU-Symposium TIERERNÄHRUNG Tierernährung im Spannungsfeld zwischen Lebensmittelproduktion, Energieerzeugung und Umweltschutz 4. Dezember 2008, Wien Herausgeber: Dr. Karl Schedle Margit Kraft Univ.-Prof. Dr. Wilhelm Matthias Windisch Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Department für Lebensmittelwissenschaften und -technologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel-Strasse 33, A-1180 Wien www.dlwt.boku.ac.at/tte.html [email protected] Eigenverlag: Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Department für Lebensmittelwissenschaften und -technologie der BOKU Wien ISBN 978-3-900962-78-4 2. Auflage Für den Inhalt der Beiträge sind allein die Autoren verantwortlich Seite II 7. BOKU-Symposium Tierernährung Inhalt Inhaltsverzeichnis Übersichtsvorträge Heißenhuber A., Rauh S. Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie 1 Flachowsky G., Meyer U. CO2-Foodprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren 14 Schnieke A. Gene technology in raising livestock 26 Bürstmayr H., Lemmens M. Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel 34 Schwarz F. Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung 40 Kamphues J. Futtermittelsicherheit als eine Vorraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen 47 Novalin S., Zweckmair T. Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie 60 Kolar V. Das europäische Schnellwarnsystem im Rahmen der amtlichen Futtermittelkontrolle 67 Poster: Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Wendler K.R., Perner J., Asamer A. Performance improvement in weaned piglets by the phytogenic feed additive FRESTA F Conc 72 Zeman L., Mareš P., Večerek M., Novák L. Interaction between phytogenic feed additives and growth intensity of pigs 77 Wetscherek W., Windisch W., Oswald J., Kroismayr A., Zitterl-Egelseer K. Transfer von Carvacrol beim Schwein 84 Ionescu C., Mazuranok L., Naciri M., Vikari A., Bravo B. Effects of five plant extracts on broiler performance during coccidiosis 89 Steiner T., Perić L., Milošević N., Dukić-Stojčić M., Bjedov S. Efficacy of a phytogenic feed additive in a performance trial with broilers 95 Bravo D., Rodriguez-Prado M., Calsamiglia S., Ferret A., Zwieten J., Vikari A., Gonzales L. Effects of the dose of capsicum extract on intake, water consumption and rumen fermentation of beef heifers fed a high-concentrate diet 101 Chrastinová L., Chrenková M., Lauková A., Raffay J., Simonová M., Szabóová R., Strompfová V., Ondruška L., Chlebec I., Vasilková Z., Faix S., Plachá I. Dietary effect of plant extracts on performance, meat quality and health status of rabbits 108 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite III Inhalt Poster: Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary Fibre Ganner A., Nitsch S., Erlacher K., Acosta Aragon A., Klimitsch A., Schatzmayr G. Ex vivo effect of yeast beta-glucan on lymphocyte viability of weaning piglets 114 Kroismayr A., Neufeld K., Affentranger P. Einfluss einer neuartigen Lignocellulose auf Leistungsparameter in der Ferkelaufzucht 118 Sarandan H., Neufeld N., Kroismayr A., Neufeld K., Leibetseder J. Einsatz einer neuen Lignocellulose Formulierung bei der Zuchtsau: Einfluss auf MMA-Symptomatik, Reproduktionsleistung und Kotqualität 124 Kroismayr A., Neufeld N., Neufeld K. Einfluss einer neuen Lignocellulose Formulierung auf die Leistungsdaten beim Broiler 131 Krieg R., Schüle St., Dohms J. Lignocellulose als sichere Rohfaserquelle zur Leistungsstabilisierung bei Häsinnen und Jungtieren in der Kaninchenzucht 136 Poster: Probiotika / Probiotics Mair C., Windisch W., Pfaffl M., Plitzner C. Wirkung eines probiotischen Mehrstammproduktes und eines prebiotischen Trägerstoffes auf die intestinale Morphologie von Absetzferkeln 146 Wegl G., Sattler V.A., Plitzner C., Nitsch S., Loibner A.P., Schatzmayr G., Klose V. DGGE Fingerprinting of the total bacterial and bifidobacterial gut microflora in piglets in response to feeding with probiotics and prebiotics 152 Petersson A., Domig K.J., Nagel P., Zollitsch W., Hagmülller W., Kneifel W. Nachweis von Bifidobacterium animalis subsp. lactis Ra 18 im Rahmen eines probiotischen Fütterungsversuchs mit Bio-Mastschweinen 157 Mosonia P., Chaucheyras-Duranda F., Béra-Mailleta C., Foranoa E. Quantification by real-time PCR of cellulolytic bacteria in the rumen of sheep after supplementation of a forage diet with readily fermentable carbohydrates – Effect of a yeast additive 163 Chaucheyras-Durand F., Masseglia S., Fonty G., Forano E. Development of hydrogenotrophic microorganisms and H2 utilisation in the rumen of gnotobiotically-reared lambs. Influence of the composition of the cellulolytic microbial community and effect of the feed additive Saccharomyces cerevisiae I-1077 164 Poster: Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and Other Additives Urbaityte R., Roth N., Wieser M. Effect of glycerides of butyric, caprylic and capric acid on growth performance in weaned pigs 166 Roth N., Urbaityte R., Encarnacao P. Effect of an organic acid blend on a slow release medium on catfish performance 173 Kurtz H., Raab L., Mathies E. Einfluss des „SGW-Faktors“ auf die Leistungsparameter Futteraufnahme, tägliche Zunahmen und Tiergesundheit von Aufzuchtkälbern 178 Danek P., Rozkot M. Lecithin emulsifier in nutrition of piglets 187 Hutterer F., Windisch W., Ettle T. Effekte einer L-Carnitin-Zulage bei variierenden Energiegehalten des Futters auf Mastund Schlachtleistung sowie Fettsäuremuster in verschiedenen Geweben beim Mastschein 191 Seite IV 7. BOKU-Symposium Tierernährung Inhalt Poster: Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Schedle K., Plitzner C., Figl-Wolfsberger T., Windisch W. Experimentelle Untersuchungen zur Einsatzmöglichkeit von Weizentrockenschlempe (DDGS) in der Schweinemast 198 Nitrayová S., Patráš P., Brestenský M., Zelenka J., Heger J. Chemical and nutritional characteristics of byproducts from ethanol fuel industry for pigs 204 Chrenková M., Čerešňáková Z., Mlyneková Z., Poláčiková M., Tomiková A. Nutritive assessment of by-products from biofuel production in ruminants 210 Kulpys J., Paulauskas E., Mikulioniene S., Stankevičius R. Einfluss der getrockneten Bierhefe (Saccharomyces cerevisiae) auf Milchleistung, Milchzusammensetzung und –qualität 216 Poster: Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Schlegel P., der Kinderen L., Mul A.J., Ubbink-Blanksma M., Durosoy S., Bruininx E. Effect of supplemented trace mineral (Fe, Cu, Mn, Zn) source and dose on growth performance in weaned piglets 225 Durosoy S., Fuchs B. Effects of supplemental trace mineral (Zn, Cu, Mn, Fe) source and dose on the status and performances of sows 230 Bunge J., Sommer W., Griep W. Selenhefe (Sel-Plex®) in der Sauenfütterung – Auswirkungen auf Wurfgröße und Produktivität in der Praxis 236 Křížová S., Kratochvílová P., Večerek M., Vašátková A., Zeman L. Supplementation of chelate form of microelements into broiler feed mixture 244 Wagner V., Windisch W., Swoboda S., Ettle T. Auswirkungen von unterschiedlichen Jodquellen und Joddosierungen auf Jodakkumulation im Gewebe und den Status der Schilddrüsenhormone am Modell der wachsenden Ratte 248 ., Zeman L. Mineral supplementation in horse nutrition 256 Tossenberger J., Babinszky L., Kühn I. The effect of dietary phosphorous level and phytase activity on the performance, phosphorous retention and eggshell quality in layers during the post peak production stage 260 Poster: Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene Safety Aspects Hofstetter U., Rodrigues I. Occurrence of mycotoxins in DDGS 268 Awad W., Böhm J., Zentek J. Ingestion of deoxynivalenol (DON) contaminated feed alters the chicken immune responses 272 Müller U., Brüssel H., Sauerwein H., Steinbeck A. In-vitro-Versuche zur Reduktion von Salmonellen im Schweinefutter 276 Petersson A., Domig K.J., Nagel P., Zollitsch W., Hagmülller W., Kneifel W. DGGE basiertes Monitoring der Darmmikrobiota des Schweins 282 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite V Inhalt Mayrhofer S., Domig K.J., Mair C., Amtmann E., Kneifel W. Vergleich des Antibiotikaresistenzverhaltens von LaktobazillenIsolaten tierischer und menschlicher Herkunft 287 Banemann D., Scheikl G., Nelles M. Biogasverluste durch Nacherwärmung 292 ., Mikulionienė S. Bacterial contamination of milk from the milking environment 297 Matyžiūtė-Jodkonienė, Juknevičius S., Jodkonis L. Concentration of heavy metals (Pb, Cd, Cr, Ni) in soil and grass along the main roads in Lithuania 302 Poster: Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Flachowsky G., Dänike S. Erzeugung von Lebensmitteln tierischer Herkunft und Treibhausgase – Nutztiere als „Mittäter“ und „Opfer“ 309 Lebzien P., Flachowsky G. Zur Bewertung des Methanreduzierungspotenzials von Futtermitteln und -zusatzstoffen im Pansen 316 Schöndorfer K., Böck G., Aragón Y.A., Klimitsch A., Schatzmayr G. The effects of bacterial and chemical silage additives to grass silage to fermentation quality and aerobic stability 322 Poster: Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Gasteiner J., Fallast S., Rosenkranz J., Häusler T., Schneider M., Guggenberger T. Messung des Pansen-pH-Wertes und der Temperatur mit einer intraruminalen, kabellosen Messeinheit – Anwendung unter verschiedenen Rationsbedingungen bei Rindern 326 Brandner B., Wetscherek W. Einfluss der Stalltemperatur auf die Leistung von Mastschweinen 339 Vašátková A., Krizova S., Vojtech A., Kalhotka L., Zeman L. The effect of naturally moulded feedstuffs on nutrients utilization 345 Rutzmoser K., Ettle T., Obermaier A. Vergleich der Rohproteinaufnahme mit dem Bedarf in der Aufzucht männlicher Fleckviehkälber 349 Novak L., Zeman L., Mareš P. The velocity of body weight growth and dynamic phenotype expressions in pigs 355 Seite VI 7. BOKU-Symposium Tierernährung Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Alois Heißenhuber und Stefan Rauh Lehrstuhl für Wirtschaftslehre des Landbaues, TU München in Freising-Weihenstephan Einleitung Die seit einigen Jahren deutlich gestiegenen Rohölpreise, die hohe Importabhängigkeit sowie insbesondere die Erkenntnis, den Klimawandel durch eine Reduzierung der Kohlendioxidemission bremsen zu müssen, werden als Argumente für den Einsatz erneuerbarer Energieträger und dabei wiederum für den Einsatz nachwachsender Rohstoffen aufgeführt. Damit sollen die genannten Probleme zumindest gemindert und gleichzeitig in der Land- und Forstwirtschaft neue Einkommensmöglichkeiten erschlossen werden. Nicht zuletzt könnten damit neue Arbeitsplätze speziell im ländlichen Raum entstehen. Ganz nebenbei würde der Einsatz agrarischer Rohstoffe auch noch zu einer Stabilisierung der Erzeugerpreise führen. Kontrovers diskutiert wird die Konkurrenz zwischen der Erzeugung von Bioenergie und von Nahrungsmitteln. Politische Vorgaben Der bis zur Mitte des Jahres 2008 zu beobachtende Anstieg des Rohölpreises ließ die Erwartung aufkommen, dass Bioenergie bereits konkurrenzfähig sei. Die in Abb. 1 angegebenen Gleichgewichtsbedingungen geben einen Hinweis, bei welchem Rohölpreis welche Variante an Biokraftstoff gerade wettbewerbsgleich ist. Den Kalkulationen zu Abb. 1 liegt das Agrarpreisniveau aus dem Jahr 2005 zu Grunde. Da sich die Agrarpreise aber in den Jahren 2006 auf 2007 deutlich nach oben verändert haben, galten zwar noch die Wettbewerbsverhältnisse, aber das Gleichgewichtsniveau verschob sich nach oben. Konkret heißt das, dass trotz eines zwischenzeitlich auf über 140 $ pro Barrel angestiegenen Erdölpreises Bioalkohol in Europa noch nicht wettbewerbsfähig war, weil die Agrarpreise gegenüber 2005 auf einem mehr als doppelt so hohen Niveau lagen. Mittlerweile liegt der Ölpreis allerdings wieder im Bereich des Jahres 2005 (ca. 60 $/Barrel). Auf der anderen Seite konnten auch die Agrarpreise das hohe Niveau nicht halten, sind aber nach wie vor vergleichsweise teuer. Deswegen erfolgt in vielen Ländern die Verwendung der Biokraftstoffe nur aufgrund von Markteingriffen seitens der Politik. In gleicher Weise gilt das auch für einige andere erneuerbare Energieträger, wie z. B. elektrischen Strom aus Biogasanlagen. Demgegenüber ist z. B. in Brasilien die 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 1 Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Erzeugung von Biosprit aufgrund der sehr günstigen Produktionsmöglichkeiten für Zuckerrohr schon ohne staatliche Stützung wirtschaftlich. Quelle: SCHMIDHUBER 2006 Abb. 1: Paritätspreise zwischen Rohöl, Benzin und Biotreibstoffen Damit Bioenergie zum Einsatz kommt, wurden seitens der Politik folgende Ansätze aufgegriffen: a) Verteuerung fossiler Energieträger b) Verbilligung der Bioenergie c) Abnahmeverpflichtung von Bioenergie zu einem festgelegten Preis d) Beimischungsverpflichtung von Bioenergie zu a) Die Verteuerung fossiler Energieträger erfolgt bereits z. B. durch die Mineralölsteuer sowie durch die Ökosteuer. Die Belastungen sind aber sehr unterschiedlich. Benzin wird am stärksten belastet, Diesel etwas weniger (dafür ist die Kfz-Steuer höher), Heizöl wird deutlich weniger belastet. Eine für alle Energieträger gleich hohe Belastung ist nicht zuletzt aus sozialen Gründen politisch schwer durchsetzbar. Seite 2 7. BOKU-Symposium Tierernährung Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie zu b) Eine Verbilligung der Bioenergie ist entweder durch direkte Subventionierung oder durch geringere Steuerbelastung möglich. Politisch am einfachsten durchsetzbar war wohl die Steuerbefreiung von Biotreibstoffen. Dieser Weg wurde zuerst bei Biodiesel (aus Rapsöl) begangen. An der Tankstelle konnte deshalb dieser Treibstoff etwas günstiger angeboten werden als das herkömmliche Dieselöl. Dem Staat entgingen dabei die entsprechenden Einnahmen an Mineralölsteuer, in der Bevölkerung entstand der Eindruck, Biodiesel sei kostengünstiger als Diesel. Zwischenzeitlich wurde, entgegen der ursprünglichen Vereinbarungen, auch bei Biokraftstoffen eine Besteuerung eingeführt. zu c) Die Festlegung einer Abnahmeverpflichtung zu einem festgelegten Preis belastet den Konsumenten im Gegensatz zum Steuerzahler, der bei Variante b) betroffen ist. Dieser Weg wurde in erster Linie bei elektrischem Strom aus erneuerbaren Energiequellen begangen. Da der Anteil der erneuerbaren Energie noch relativ klein ist, fällt es beim Verbraucher (noch) nicht so deutlich auf, dass z. B. für Solarstrom mit ca. 45ct/kWh ein sehr hoher Preis bezahlt werden muss. Für die Landwirtschaft von großer Bedeutung war die Festlegung der Einspeisetarife für Strom aus Biogasanlagen. Insbesondere der sogenannte NawaRo-Bonus von ca. 6 ct/kWh zusätzlich zu einer Grundvergütung von ca. 10ct/kWh aus agrarischen Rohstoffen. Noch dazu wird dieser Tarif für die Dauer von 20 Jahren zugesichert. Ab Januar 2009 tritt eine novellierte Fassung des EEG (Erneuerbare-Energien-Gesetz) in Kraft, bei dem der NawaRo-Bonus um 1 ct/kWh erhöht und zugleich ein Gülle-Bonus in Höhe von 4 ct/kWh neu eingeführt wurde. Inklusive weiterer Boni sind somit bis zu 30 ct/kWh erzielbar (vgl. Abb. 2). Quelle: eigene Darstellung nach IE, 2004, BMU 2008, BGBL 2008 Abb. 2: Einspeisevergütung für Biogas in ausgewählten Ländern 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 3 Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie zu d) Die Festlegung einer bestimmten Beimischungsquote wird seit 2007 bei Biotreibstoffen durchgeführt. Aufgrund der geringen Rohstoffverfügbarkeit zur Erfüllung der Quoten, beschloss die Bundesregierung die Gesamtquote für 2009 um einen Prozentpunkt auf 5,25 % zu senken und sie ab 2010 bei 6,25 % zu belassen. Ursprünglich war eine stufenweise Steigerung auf 8 % vorgesehen. In Abb. 3 sind die für Deutschland festgelegten Beimischquoten umgerechnet auf die erforderlichen Produktionsflächen dargestellt. Da es den Mineralölkonzernen freigestellt ist, wo sie den Biosprit einkaufen, steht hier nicht mehr die einheimische Produktion im Vordergrund. Letztlich geht es hier nur um den Klimaschutz, wenn man davon ausgeht, dass Biotreibstoffe das Klima weniger belasten als fossile Treibstoffe. Quelle: eigene Berechnungen nach MWV 2007 Abb. 3: Beimischquoten für Biokraftstoffe in Deutschland Als Zwischenfazit bleibt festzuhalten, dass die genannten politischen Eingriffe den Einsatz regenerativer Energien deutlich forciert haben. Dies betrifft nicht nur die Landwirtschaft, sondern auch die Anlagenhersteller, welche nicht nur den Inlandsmarkt sondern zunehmend auch Märkte außerhalb Deutschlands beliefern. Es erscheint aber unbedingt notwendig, nach einer Phase der breit gestreuten Förderung erneuerbarer Energien die Förderpolitik zu überprüfen und unter Berücksichtigung der gesammelten Erfahrungen und der Nebenwirkungen neu auszurichten. In der Zwischenzeit wird deutlich, dass nicht alle formulierten Ziele mit dem Einsatz von Bioenergie gleichzeitig erreicht werden können, es treten Zielkonflikte auf, die eine Prioritätensetzung erfordert. In Abb. 4 sind ausgewählte Verfahren der Seite 4 7. BOKU-Symposium Tierernährung Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Bioenergieerzeugung vergleichend dargestellt. Große Unterschiede bestehen speziell im Energieertrag je Flächeneinheit. Folgende Fragen werden heute teilweise kontrovers diskutiert: Ist es sichergestellt, dass Bioenergie dem Klimaschutz dient? Sind die gesellschaftlichen Kosten des Einsatzes von Bioenergie zur Minderung der Kohlendioxidemission gerechtfertigt? Verursacht der Einsatz von Biosprit eine Verteuerung der Lebensmittel? Ausgewählte Verfahren der Bioenergieproduktion Für den landwirtschaftlichen Betrieb steht eine Reihe von Verfahren zur Produktion von Bioenergie zur Verfügung. In Abb. 4 sind die wichtigsten Kennziffern ausgewählter Verfahren dargestellt. Wesentliche Unterschiede bestehen im Anteil der nutzbaren Endenergie sowie im Hektarertrag. Es zeigt sich generell, dass die Erzeugung von Biokraftstoff durchwegs einen geringeren Hektarertrag ermöglicht als die Erzeugung von Wärme, da im einen Fall durch die Konversion ein höherer Umsetzungsverlust erfolgt gegenüber der Substitution im Falle der Wärmeerzeugung. Bei der Biokraftstofferzeugung fallen als Nebenprodukt auch noch Futtermittel an. Im Falle der Biogaserzeugung ist es von entscheidender Bedeutung, inwieweit auch die anfallende Wärme genutzt werden kann. Eine neuere Variante besteht darin, das erzeugte Biogas nach Aufbereitung in das Ergasnetz einzuspeisen. Damit erhöht sich der Ausnutzungsgrad der erzeugten Biomasse. Die Aufbereitung verursacht zusätzliche Kosten und kann deshalb erst bei größeren Anlagen sinnvoll betrieben werden. Von den in Abb. 4 aufgeführten Verfahren ergibt sich die schärfste Konkurrenz zwischen Nahrungsund Energieerzeugung im Biogasbereich. Da sich der Silomais sowohl für die Rinderhaltung als auch für die Biogasanlage bestens eignet, wird bei Ausweitung der Biogasproduktion der Silomaisanbau teilweise deutlich ausgedehnt oder die Rinderhaltung eingeschränkt. Wie Abb. 5 für das Bundesland Bayern verdeutlicht, gibt es in einigen Regionen eine hohe Viehdichte und zugleich eine deutliche Konzentration von Biogasanlagen Auf jeden Fall führt diese Konkurrenz um die Fläche zu ansteigenden Pachtpreisen bzw. zu steigenden Preisen für die Biomasse, was die Wirtschaftlichkeit der betroffenen Verfahren belastet. Ein Argument für die Ausweitung der Bioenergieproduktion wird in der Schaffung zusätzlicher Arbeitsplätze gesehen. In Abb. 6 sind für wichtige Verfahren der tierischen Erzeugung die auf dem landwirtschaftlichen Betrieb erforderlichen Arbeitsstunden dargestellt. Des Weiteren sind die zur Verarbeitung des auf einer Flächeneinheit erzeugten Menge an landwirtschaftlichen Erzeugnissen anfallenden Arbeitsstunden in der Molkerei bzw. im Schlachthof dargestellt. Daneben ist auch die Variante Biogas dargestellt. Aus diesem Vergleich geht hervor, dass durch die Ausweitung der Bioenergieproduktion, darstellt am Beispiel Biogas, zusätzliche Arbeitsplätze nur dann entstehen, wenn das Biogas zusätzlich erzeugt wird, ohne die Produktion von Milch oder Fleisch einzuschränken. Dies ist dann möglich, wenn z. B. Gülle oder Reststoffe verwendet werden. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 5 Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie 300 GJ/ha 250 200 150 100 50 0 Kultur Weizen Zuckerrübe Raps Mais Pappel Weizen Hauptprodukt Korn Rübe Korn Silage Holz Korn Ertrag [t FM/ha] 7,7 60 3,5 45 20 7,7 Nebenprodukt Stroh --- Stroh --- --- Stroh Ertrag [t FM/ha] 5,9 3,3 5,9 Verwendung Hauptprodukt Ethanol Ethanol RME Biogas Hackschnitzel Menge je ha 2.962 l 6.129 l 1.458 l 7.895 m³ 20 t 7,7 t Äquivalent Benzin Benzin Diesel Heizöl Heizöl Heizöl Äquivalent-Ertrag in l Festbrennstoff 1.948 l 4.031 l 1.328 l 4.229 l 5.216 l 3.286 l Nutzenergieform Fortbewegung Fortbewegung Fortbewegung Strom+Wärme Wärme Wärme Nebenprodukt Festbrennstoff Festbrennstoff 5,9 t 3,3 t 5,9 t Äquivalent Heizöl Heizöl Heizöl Äquivalent-Ertrag in l 2.473 l 1.379 l 2.473 l Menge je ha Festbrennstoff Erläuterungen zur Grafik: jeweils 1. Säule = Produkt(e)/Rohstoff(e) der Kulturen, 2. Säule = Verwertungsprodukt(e) aus den Rohstoffen, 3. Säule = 2. Stufe der Umwandlung (Biogas zu Strom und Wärme) Legende: Korn Stroh/Silage/Holz Rübe Biotreibstoff Biogas Wärme el. Strom Quelle: BERENZ 2008 nach BMVEL 2006, QUIRIN et al. 2004, FNR 2005 Abb. 4: Primär- und Endenergiegehalte verschiedener Kulturen Seite 6 7. BOKU-Symposium Tierernährung Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Biogasanlage Abb. 5: Viehbesatz und Biogasanlagen in Bayern (2006) Quelle: RÖHLING, KEYMER 2007 Quelle: RAUH 2007 nach AUER 2007, BERENZ et al. 2007, BVDF 2007, MÜLLER 2007, BMELV 2006, KTBL 2006ab, WEINDLMEIER 2006, FNR 2005, LFL 2003 Abb. 6: Arbeitszeitbedarf je Hektar ausgewählter Wertschöpfungsketten der Landwirtschaft 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 7 Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Neben der Biogaserzeugung (in Deutschland 2007 ca. 0,5 Mio. ha) nimmt die Produktion von Biokraftstoff mit ca. 1,0 Mio. ha für Biodiesel und 0,3 Mio. ha für Bioethanol den größten Flächenumfang ein. Aus der Sicht des Rohstoffproduzenten hat sich in der jüngsten Zeit die Situation gravierend geändert. Während in der Vergangenheit der Getreidepreis bei etwa 10 Euro pro 100 kg lag, waren 2007 über 20 Euro pro 100 kg und aktuell 15 Euro pro 100 kg zu erlösen. Für den Bioethanolhersteller haben sich damit die Produktionskosten deutlich erhöht. Wie Abb. 7 zeigt, liegt bei dem jetzigen Erdölpreis der Benzinpreis (inkl. Steuern) bei über 1,20 €/l. Dieses Benzin entspricht einem Preis von Bioethanol von etwa 0,50 bis 0,60 €/l (ohne Mineralölsteuer). Der Erzeuger von Bioethanol bei diesen Produktionskosten mit importiertem Biotreibstoff nur konkurrieren, da dieser mit einem erheblichen Importzoll belegt ist. Somit stellt sich die wirtschaftliche Situation der einheimischen Biokraftstofferzeuger vergleichsweise ungünstig dar. 200 Benzin ct/l Weizenpreis €/dt 07 Preis DDGS 16,50 €/dt (22,00 €/dt Sojaschrot) 08 05 EtOH aus Brasilien cif Hafen EU inkl. Zoll Herstellungskosten EtOH Brasilien Quelle: BERENZ 2008 nach IGELSPACHER 2003, MWV 2007 Abb. 7 Bioethanol aus Weizen als Benzinersatz Ökologische Aspekte der Erzeugung von Bioenergie Die Nutzung der Bioenergie wird mit der Einsparung von fossilen Energieträgern und mit einer Reduzierung der Emission klimawirksamer Gase begründet. In Abb. 8 sind am Beispiel Biodiesel (RME) sowohl die Energie- als auch die Treibhausgasbilanz dargestellt. Demnach führt der Einsatz von Biodiesel zu einer Einsparung an fossilem Treibstoff. Als wesentliche Ursache ist die Nutzung der in den Pflanzen gespeicherten Sonnenenergie zu nennen. Es sei noch darauf hingewiesen, dass bei der Nutzung des Öls aus den Rapskörnern noch Nebenprodukte anfallen, im Beispiel des Biodiesels ist das der als Pressrückstand verbleibende Rapskuchen. Dies gilt es bei der Bilanzierung zu berücksichtigen. Nicht so eindeutig gestaltet sich die Bilanzierung der klimawirksamen Gase. Insbesondere die freiwerdende Menge an Lachgas (N2O) schwankt in einem relativ großen Bereich. Da aber Lachgas Seite 8 7. BOKU-Symposium Tierernährung Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie annähernd 300-fach klimawirksamer ist als Kohlendioxid, ergibt sich durch den Rapsanbau mit anschließender Nutzung des Biodiesels im Vergleich zum fossilen Diesel eine mehr oder weniger große Klimaentlastung. Daraus ist zu folgern, dass die Verfahren der pflanzlichen Produktion bezüglich der Lachgasemission noch optimiert werden müssen. Dies gilt in gleicher Weise für die Erzeugung nachwachsender Rohstoffe als auch für die Erzeugung von Nahrungsmitteln. Energie Treibhausgase 100 10,0 GJ/ha 75 t CO2eq/ha 7,5 2.000 kg Schrot 1.500 kg 50 5,0 1.650 l RME 25 1.500 l 0 2,5 0,0 Input Berücksichtigt: Output Diesel und Biodiesel und Sojaschrot Rapsschrot Saatgut Düngung (50% Nährstoffrücklieferung) Pflanzenschutz Diesel Mechanisierung Lachgas N-Düngung (2,4 – 7,2 kg N2O ha-1 a-1) Energieträger Pflanzenölgewinnung bis RME-Erzeugung Hexan, Bleicherde, Säuren und Laugen, Methanol Pflanzenölpresse und RME-Anlage Koppelprodukt Rapsschrot als Substitut für Sojaextraktionsschrot Quelle: Berenz 2008 Abb. 8: Energie- und Treibhausgasbilanz von Biodiesel (RME) Entsprechende Berechnungen für andere Bioenergielinien (z. B. der Wärmegewinnung von schnell wachsenden Hölzern) haben ergeben, dass dort eine günstigere Treibhausgasbilanz zu erreichen ist. Generell sind Verfahren, die fossile Rohstoffe direkt ersetzen (Substitution) den Verfahren überlegen, die einen chemischen Umbau (Konversion) erfordern. Diese Unterschiede kommen schließlich in den Kosten der Klimaentlastung (CO2-Minderung) zum Ausdruck. Diese belaufen sich in der Wärmeerzeugung durchwegs auf einem niedrigeren Niveau als in der Erzeugung von Biokraftstoffen. Konkurrenz zwischen Nahrung und Energie Die Konkurrenz zwischen Nahrung und Energie oder zwischen „Brot und Sprit“ wird auch in Deutschland aber noch viel intensiver in anderen Ländern diskutiert. Durch Pressestimmen wie „BioSprit lässt Tortilla-Preise in Mexiko explodieren“ oder „Ethanol-Durst der USA löst Tortilla-Krise aus“ 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 9 Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie (Die Welt, 22.1. bzw. 25.2.07) wurde die Diskussion ausgelöst. Die steigenden Nahrungspreise haben aber mehrere Ursachen, die Konsequenzen sind jedoch in den Ländern mit niedrigem Einkommen sehr viel gravierender. In Deutschland wird seitens der Nahrungsmittelindustrie auch gefordert, Nahrung müsse Vorrang haben. In diesem Zusammenhang ist anzumerken, dass schon vor 25 Jahren der Weizenpreis mit rund 25 € pro Dezitonne auf einem doppelt so hohen Niveau lag wie 2006 (Abb. 9). Seitdem war eine starke Talfahrt zu verzeichnen. Zum Ausgleich bekamen die Landwirte produktbezogene Direktzahlungen in Höhe von etwa 300 € je Hektar. Der Tiefpunkt lag im Jahr 2005 bei 10 € pro Dezitonne Weizen, ein nicht mehr Gewinn bringender Preis für die Landwirtschaft. Insofern ist der jetzige Preisanstieg eine Notwendigkeit und nicht in erster Linie die Folge der Bioenergieausweitung. 30 Erzeugerpreis Weizen incl. MwSt. €/dt zuordenbare Ausgleichszahlungen 25 20 15 10 5 0 1980 1985 1990 1995 2000 2005 2008 Anmerkung: Preise jeweils zur Ernte Quelle: eigene Darstellung nach ZMP, versch. Jahrgänge Abb. 9: Entwicklung des Erzeugerpreises für Weizen (in €/dt) von 1980 bis 2008 Gehen wir noch einen Schritt weiter und betrachten verschiedene Produkte, die auf den gleichen landwirtschaftlichen Rohstoffen basieren, nämlich auf Getreide (Abb. 10). Bei Bier beträgt der Anteil des Getreides am Endprodukt ca. 4 % und bei Brot ca. 6 %, der Rest der Kosten fällt auf den nachgelagerten Bereich. Demgegenüber beträgt bei Ethanol der Anteil des landwirtschaftlichen Rohstoffes Getreide fast 40 % und bei RME beruhen sogar 50 % der Kosten auf denen von Raps. In Deutschland hat demzufolge der Anstieg der Getreidepreise keinen so gravierenden Einfluss auf den Preis der Lebensmittel als auf den Preis der Biotreibstoffe. Anders stellt sich die Situation in einkommensschwächeren Ländern dar, weil der Anteil der Ausgaben für Lebensmittel an den Lebenshaltungskosten viel höher ist und weil z. B. in Mexiko der Anteil des Maismehls am fertigen Produkt (der Tortillas) relativ groß ist (vgl. Abb. 10). Es gilt generell: Steigt der Seite 10 7. BOKU-Symposium Tierernährung Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Verbraucherausgaben für Nahrungsmittel und Preisanteil des Rohstoffs Preis für den agrarischen Rohstoff an, werden die Nahrungsmittelpreise umso stärker belastet, je höher der Kostenanteil des Rohstoffs. Zudem werden diejenigen Bevölkerungsgruppen stärker belastet, die einen höheren Anteil des Einkommens für die Lebenshaltung ausgeben müssen. 100% 90% Mexiko Deutschland 80% 70% 60% 50% 40% 72% 30% 20% 10% 35% 40% 14% 4% 0% Ausgaben für Lebensmittel Anteil Gerste am Bierpreis 6% Anteil Getreide Anteil Getreide am Brotpreis am Ethanolpreis Ausgaben für Lebensmittel Anteil Mais an der Tortilla Quelle: eigene Berechnungen und Darstellung nach SNIIM, 2008, BMELV, 2006 Abb. 10: Verbraucherausgaben für Nahrungsmittel und Preisanteil des Rohstoffs – Beispiel Mexiko und Deutschland Zusammenfassung Der Einsatz von Bioenergie erfolgt vor allem in den europäischen Ländern aufgrund staatlicher Einflüsse. Als Gründe für die staatliche Einflussnahme werden vorwiegend die Minderung der CO2Emission und die Verringerung der Abhängigkeit von Energieimporten aufgeführt. Die seit vielen Jahren gegebene Überschusssituation auf den Agrarmärkten war eine Begründung für die staatliche Förderung der Bioenergie. Mit der zwischenzeitlich auf den Agrarmärkten eingetretenen Angebotsverknappung erscheint die Politik zur Förderung der Bioenergie in einem anderen Licht. Es verstärkt sich der Druck, die bisherige Politik kritisch zu hinterfragen. Einerseits wird die klimaschützende Wirkung der Bioenergie kontrovers diskutiert, andererseits wird ein Vorrang des Lebensmittelbereichs verlangt. Vor diesem Hintergrund werden auch die Beimischungsquoten für Biokraftstoffe kritisch gesehen. Bei den deutlich angestiegenen Rohstoffpreisen wird die einheimische Erzeugung in geringerem Umfang in die Bioenergieschiene fließen. Der zusätzliche Bedarf wird über Importe abgedeckt. Politisch wird der Druck steigen, die Förderung der Bioenergie aus unterschiedlichen Gründen zurückzunehmen, um einen Preisanstieg nicht zusätzlich zu forcieren. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 11 Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie Als Fazit bleibt: Die Erzeugung von Lebensmitteln aus agrarischen Rohstoffen sollte vorrangig sein. Ein Hinweis darauf sind die Preisentwicklungen der letzten Jahre. Die höhere Wettbewerbskraft bezüglich der Verwendung agrarischer Rohstoffe liegt zwar beim Nahrungsmarkt, jedoch umgehen bestimmte staatliche Maßnahmen, wie die Beimischungsverpflichtung, den Marktmechanismus. In anderen Ländern, wie z.B. Brasilien und Indonesien, sorgt bereits ein hoher Erdölpreis für eine starke Konkurrenz der Bioenergie gegenüber dem Nahrungsmarkt. Für die Landwirtschaft und den ländlichen Raum besteht vor allem die Chance der Nutzung von biogenen Reststoffen bzw. in der Doppelnutzung von agrarischen Rohstoffen. Literatur Auer, H. (2007): Arbeitszeiten in der Erfassung und Schlachtung. Geschäftsführer der Erzeugergemeinschaft Oberbayern Ost und Niederbayern eG, persönliche Mitteilung, 31.07.2007. Berenz, S. (2008): Die Ableitung eines optimierten Biomasse-Mix. Dissertation, Technische Universität München, FreisingWeihenstephan (unveröffentlichtes Manuskript). Berenz, S.; Hoffmann, H. und Pahl, H. (2008): Konkurrenzbeziehungen zwischen der Biogaserzeugung und der tierischen Produktion. In: Heißenhuber, A.; Kirner, L.; Pöchtrager, S.; Salhofer, K.: Agrar- und Ernährungswirtschaft im Umbruch, Gesellschaft für Wirtschafts- und Sozialwissenschaften des Landbaues e.V., Band 42, Landwirtschaftsverlag Münster-Hiltrup, Weihenstephan, S. 407-506. BGBL - Bundesgesetzblatt Teil 1 (2008): Gesetz zur Neuregelung des Rechts der Erneuerbaren Energien im Strombereich und zur Änderung damit zusammenhängender Vorschriften vom 31.10.2008, S. 2074. BMELV - Bundesministerium für Landwirtschaft, Ernährung und Verbraucherschutz (Hrsg.) (2006): Statistisches Jahrbuch über Ernährung, Landwirtschaft und Forsten der Bundesrepublik Deutschland 2006. Landwirtschaftsverlag GmbH Münster-Hiltrup, Bonn. BMU - Bundesministerium für Umwelt, Naturschutz und Reaktorsicherheit (2008): Rechtsquellen Erneuerbarer Energien. http://res-legal.eu/ (Abrufdatum: 12.10.2008). FNR - Fachagentur für Nachwachsende Rohstoffe e.V. (Hrsg.) (2005): Leitfaden Bioenergie - Planung, Betrieb und Wirtschaftlichkeit von Bioenergieanlagen. Gülzow. IE - Institut für Energetik und Umwelt (2004): Fortschreibung der Daten zur Stromerzeugung aus Biomasse Bericht für die Arbeitsgruppe Erneuerbare Energien Statistik (AGEE-Stat). http://www.bmu.de/files/pdfs/allgemein/application/pdf/bericht_stromerzeugung_biomasse.pdf (Abrufdatum: 06.03.06). Igelspacher, R. (2003): Ganzheitliche Systemanalyse zur Erzeugung und Anwendung von Bioethanol im Verkehrssektor. Bayerisches Staatsministerium für Landwirtschaft und Forsten, Gelbes Heft 76, München. KTBL - Kuratorium für Technik und Bauwesen in der Landwirtschaft e.V. (Hrsg.) (2006a): Betriebsplanung Landwirtschaft 2006/07. 20. Auflage, Darmstadt. KTBL - Kuratorium für Technik und Bauwesen in der Landwirtschaft e.V. (Hrsg.) (2006b): Energiepflanzen - Daten für die Planung des Energiepflanzenanbaus. Darmstadt. LfL - Bayerische Landesanstalt für Landwirtschaft (Hrsg.) (2003): Leitfaden für die Düngung von Acker- und Grünland. Freising. Müller, H. (2007): Arbeitszeiten Verarbeitung Fleischwaren. Qualitätsmanager bei VION, persönliche Mitteilung, 08.08.2007. MWV - Mineralölwirtschaftsverband e.V. (2007): Preise-Statistiken. http://www.mwv.de/cms/front_content.php?idcat=14 (Abrufdatum: 29.08.2007). Quirin, M.; Gärtner, S.; Pehnt, M. und Reinhardt, G. (2004): CO2-Studie: CO2-neutrale Wege zukünftiger Mobilität durch Biokraftstoffe: Eine Bestandsaufnahme. Forschungsvereinigung Verbrennungskraftmaschinen e.V. (FVV), Frankfurt. Röhling, I. und Keymer, U. (2007): Biogasanlagen in Bayern 2006 - Ergebnisse einer Umfrage. Bayerische Landesanstalt für Landwirtschaft (LfL), Freising-Weihenstehan. Schmidhuber, J. (2006): Impact of an increased biomass use on agricultural markets, prices and food security: A longer-term perspective. International symposium of Notre Europe, 27.-29. 11. 2006, Paris. SNIIM - Sistema Nacional de Información e Integración de Mercados (2008): Mercados Nacionales. www.economiasniim.gob.mx (Abrufdatum: 15.05.2008). Weindlmeier, J. (2006): Arbeitszeitaufwand für Milcherfassung und -verarbeitung in Molkereien. Leiter der Professur für Betriebswirtschaftslehre der Milch- und Ernährungsindustrie in Weihenstephan, persönliche Mitteilung, 07.11.2006. Seite 12 7. BOKU-Symposium Tierernährung Heißenhuber und Rauh: Landwirtschaft im Spannungsfeld zwischen Ernährung und Bioenergie ZMP - Zentrale Markt- und Preisberichtstelle GmbH (Hrsg.) (versch. Jahrgänge): ZMP Marktbilanz; Getreide Ölsaaten Futtermittel; Deutschland Europäische Union Weltmarkt. Bonn. Anschrift der Autoren Prof. Dr. Dr. h. c. Alois Heißenhuber, Dipl. Ing. agr. Stefan Rauh Lehrstuhl für Wirtschaftslehre des Landbaues Alte Akademie 14, 85350 Freising - Weihenstephan Tel.: 08161-713410 (Heißenhuber) Tel.: 08161-713413 (Rauh) E-Mail: [email protected] [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 13 Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren CO2-Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissenstand und Einflussfaktoren G. Flachowsky und U. Meyer Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit Braunschweig Einleitung Die jährliche Zuwachsrate an klimarelevanten Gasen wird weltweit mit etwa 1 Mrd t CO2Äquivalenten angegeben. Dieser Anstieg resultiert vor allem aus der Verbrennung von fossilem Kohlenstoff, aber auch anderen Emitenten. Diese Entwicklung hat zu einem Anstieg der Kohlenstoffdioxid (CO2)Konzentration in der Atmosphäre geführt (von ≈ 280, um 1800; auf ≈ 380, gegenwärtig; auf vielleicht 550 ppm, um 2050; IPCC 2006). CO2 gehört zu den Treibhausgasen (klimarelevante Gase), die bei zunehmender Erhöhung in der Atmosphäre infolge der Absorptionsfähigkeit im InfrarotSpektralbereich die Rückstrahlung von Wärmestrahlen vermindern und so zu einem Anstieg der Temperatur auf der Erde beitragen. Diese Entwicklung drückt sich nach IPCC (2006) u.a. im Anstieg der globalen mittleren Oberflächentemperatur um 0,74oC im Laufe der vergangenen 100 Jahre und in der Beschleunigung des weltweiten Anstieges des Meeresspiegels aus (1,8 mm/Jahr im Zeitraum 1961 bis 2003; 3,1 mm/Jahr im Zeitraum 1993 bis 2003). Für Deutschland wird der Temperaturanstieg seit 1901 im Gesamtjahr mit 0,93oC angegeben (DWD 2008). Neben CO2 haben auch andere Gase ein Treibhauspotenzial, das deutlich höher als das von CO2 ist (Tab. 1). Die Methan-Konzentration in der Atmosphäre beträgt gegenwärtig ≈ 1,7 ppm mit einem jährlichen Konzentrationsanstieg von ≈ 0,01 ppm, die von Lachgas wird mit 312 ppb angegeben (Bockisch et al. 2000). Tabelle 1: Treibhauspotenzial von Gasen, die aus der Landwirtschaft emittiert werden (von IPCC 2006 empfohlene Werte) Treibhausgas Seite 14 Summenformel Treibhauspotenzial (CO2 = 1) Kohlenstoffdioxid CO2 1 Methan CH4 23 Lachgas N2O 296 7. BOKU-Symposium Tierernährung Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Das Erkennen dieser Zusammenhänge führte dazu, die CO2-Emissionen bzw. die von CO2Äquivalenten zu erfassen und eine gewisse Wichtung der Quellen vorzunehmen sowie wirksame Reduzierungsmöglichkeiten zu erarbeiten und anzuwenden. Der Anteil der Landwirtschaft an den gesamten CO2-Emissionen wird in Deutschland nach verschiedenen Quellen mit 6 bis 15 % angegeben. Global wird der Anteil der Landwirtschaft an den CO2Äq-Emissionen mit nahezu einem Drittel der Gesamtemissionen angegeben (13,4 Mrd. t von 41,4 Mrd. t CO2Äq pro Jahr, Isermeyer et al. 2008). Infolge der Veredelungsverluste bei der Erzeugung von Lebensmitteln tierischer Herkunft wird die Frage nach den CO2-Emmissionen vor allem bei diesen Lebensmitteln gestellt. Dadurch soll einerseits eine Information für die Verbraucher gegeben werden, andererseits wird durch Sensibilisierung von Erzeugern und Verbrauchern eine Reduzierung der Emissionen angestrebt. Diese Zusammenhänge können dann bedeutungsvoll werden, wenn der Handel mit Emissionsrechten auch die Landwirtschaft erfasst (s. Engels, 2008). Im Beitrag wird versucht, den Wissenstand bezüglich der Emissionen an CO2-Äquivalenten bei der Erzeugung von Lebensmittel tierischer Herkunft (CO2Footprints) zusammenzutragen, mögliche Schwachstellen und entsprechenden Forschungsbedarf aufzuzeigen sowie auf vorhandene Reduzierungspotenziale hinzuweisen. Derartige komplexe Studien scheinen dringend erforderlich, da verschiedene Einrichtungen bzw. Autoren bereits bei mangelnder Datenbasis „präzise“ Angaben über Klimabilanzen für Lebensmittel tierischer Herkunft bereitstellen, wie Abbildung 1 exemplarisch zeigt. Solche Bewertungen beim gegenwärtigen Wissenstand sind nicht unproblematisch, da dadurch vor allem bei der Politik der Eindruck entstehen kann, dass - ausreichend Primärdaten zur Bewertung vorhanden sind und kein weiterer Forschungsbedarf besteht, methodisch das Herangehen abgestimmt und einheitlich ist (z.B. Verwendung der Systemgrenzen), vorschnelle (und vielleicht falsche) Schlussfolgerungen zur ökologischen Be-/Verurteilung verschiedener Lebensmittel tierischer Herkunft bzw. Ihrer Produktionsform vorgenommen werden können. Verschiedene Details der in Abbildung 1 dargestellten Säulen wurden kürzlich bewertet (Flachowsky, 2008). Ausgehend von dieser Situation sollen nachfolgend die Voraussetzungen für die Erarbeitung „belastbarer“ CO2-Footprints exemplarisch dargestellt werden. Der Begriff „Kette“ sollte eigentlich durch „Netzwerk“ ersetzt werden, da die Nahrungsmittelerzeugung viel komplexer und vernetzter ist, als es der Begriff „Kette“ ausdrückt (z.B. Beziehungen zu vor- und nachgelagertem Bereich, Berücksichtigung von Gebäuden und Maschinen). Die Unterschiede in den Ergebnissen verschiedener Analysten (Milch, Fleisch, Eier, s. Abb. 1) können u.a. durch unterschiedliche Systemgrenzen verursacht werden. Deshalb ist die Beschreibung der Rahmenbedingungen Voraussetzung für die Interpretation und die Reproduzierbarkeit verschiedener Ergebnisse. Aus Platzgründen kann auf Details der im Beitrag berücksichtigten Ein- und Austräge nicht eingegangen werden (s. Flachowsky 2008). Die Höhe des Futtereinsatzes und die Leistungshöhe der Lebensmittel liefernden Tiere sind wesentliche Kriterien für die nährstoffökonomische und ökologische Bewertung der Lebensmittelerzeugung. Da die Erzeugung von essbarem Protein tierischer Herkunft das Hauptziel der Nutztierhaltung in Europa darstellt, wird diesem Parameter bei der Kalkulation entsprechender Aufwandsdaten besondere Aufmerksamkeit gewidmet (s. Tab. 2). Die Bezugsbasis essbares Protein hat gegenüber den Lebensmitteln (Milch, Fleisch, Eier; s. Abb. 1) auch den Vorteil der unmittelbaren Vergleichbarkeit der verschiedenen Formen der Erzeugung von Lebensmitteln tierischer Herkunft. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 15 Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren 20,0 Defra (2006), konv. " 18,0 " 16,0 , ökolog. Heissenhuber (2008), konv. " 14,0 kg CO2/kg Rohstoff , ökolog. Fritsche u. Eberle (2007), konv. , ökolog. Hirschfeld et al. (2008), konv. " , ökolog. 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 Milch Rindfleisch Schweinefleisch Geflügelfleisch Eier Abbildung 1: CO2Äq-Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft aus herkömmlicher oder ökologischer Erzeugung nach verschiedenen Autoren Material und Methoden Für Kalkulationen zur Ermittlung von CO2Äq-Footprints sind Kenntnisse bzw. nachvollziehbare Ableitungen entlang der gesamten Nahrungskette (Wertschöpfungskette) erforderlich (Abb. 2). Eintrag (Input) Dünger, Kraftstoff, Pflanzenschutzmittel, Saatgut, Wasser Kraftstoff, Elektroenergie Kraftstoff, Elektroenergie Kraftstoff, Elektroenergie (CO2)1) Kettenglieder Austrag an klimarelevanten Gasen (Output) Seite 16 Futtermittel, Ernte, Lagerung Boden/ Pflanze CO2 N2O CO2 Mischfutter, Nebenprodukte CO2 Kraftstoff, Elektroenergie Lebensmittel tierischer Herkunft Mensch Exkremente Biogas, Dünger Tier CH4 (CO 2)1) CH4 N2O CO2 CH4 7. BOKU-Symposium Tierernährung Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Ergebnisse Zur Berechnung der Footprints sind Kenntnisse über die klimarelevanten Austräge entlang der Nahrungskette (s. Abb. 2) bzw. des jeweiligen Bezugssystems erforderlich. Im Falle der Erzeugung von Lebensmitteln tierischer Herkunft sind das vor allem Betriebsmittel-bedingte Emissionen beim Futterbau, bei der Ernte, Konservierung, Aufbereitung und dem Transport der Futtermittel sowie bei der Tierhaltung. Dazu kommen tierbedingte Emissionen (vor allem Methan, CH4) und Emissionen beim Exkrementmanagement. Nachfolgend wird exemplarisch auf einige Emissionsquellen eingegangen. Betriebsmittel-bedingte Emissionen Der Umfang der Betriebsmittel-bedingten Emissionen hängt von der Intensität des Landbaus und dabei vor allem von der Düngungsintensität ab. Bei Bezug auf das Produkt (je t bzw. kg Trockensubstanz, T), der in vorliegender Ausarbeitung die Basis ist, hat die Ertragshöhe erheblichen Einfluss auf die Emissionen. Auf diesbezügliche Details soll im vorliegenden Beitrag nicht näher eingegangen werden. Die für die Kalkulationen verwendeten Werte (z.B. 120 kg CO2/t Grundfutter-T; 220 kg CO2/t Kraftfutter T) wurden aus vergleichenden Auswertungen verschiedener Studien gewonnen (z.B. Bockisch et al. 2000, Brunsch et al. 2008, Defra 2006,Hirschfeld et al. 2008, Kraatz et al. 2007, Wechselberger 2000, Woitowicz 2007), wobei zwischen den Quellen erhebliche Unterschiede in den Angaben bestehen. Futterlagerung und-bearbeitung Relativ wenige belastbare Studien liegen zum CO2-Austrag bei verschiedenen Verfahren der Futterlagerung und –aufbereitung vor (Feil 2005). Wenig umfangreich ist auch die Datenbasis bezüglich der Aufwendungen bzw. Emissionen bei der Futtertrocknung, Vermahlung und Mischfutterherstellung, so dass auf die bei Bockisch et al. (2000) mitgeteilten Daten zurückgegriffen wird. Tierhaltung Bezüglich der Tierhaltung wird in direktem Energieaufwand bzw. direkte Emissionen und indirekte Angaben unterschieden. Nach verschiedenen Quellen (Zus. bei Brunsch et al. 2008, Hirschfeld et al. 2008) variiert der Energieaufwand für Milchentzug, -lagerung und Reinigung der Anlage zwischen 18 bis 22 MJ/100 kg FCM für konventionelle Melksysteme und ist für automatische Melksysteme um 2 bis 4 MJ/100 kg FCM höher. Bei Unterstellung einer CO2-Emission von ≈ 200 g/MJ Elektroenergie (Bockisch et al. 2000) entspricht der Energieeinsatz 3,6 bis 4,4 kg CO2/100 kg FCM bzw. ≈ 40 g CO2/kg FCM. Der indirekte Energieaufwand bzw. die CO2-Emission, z.B. für Gebäude, Einrichtungen und Melktechnik umfasst nur etwa ein Hundertstel der direkten Werte (Brunsch et al. 2008) und wird bei den weiteren Betrachtungen vernachlässigt. Nach Hea (1996) entfallen ≈ 60 % des Gesamtenergieverbrauches in der Milchviehhaltung auf die Milchgewinnung, ≈ 35 % auf die Fütterung, ≈ 2 % auf die Entmistung und ≈ 3 % auf die Beleuchtung. In der Sauenhaltung werden 1 % für Reinigung, 1 % für Entmistung, 5 % für Beleuchtung, 11 % für Stallklima, 12 % für Fütterung und 70 % für die Ferkelnestbeheizung aufgewendet. Weitere Details zum Energieeinsatz in der Tierhaltung können Bockisch et al. (2000) und Hirschfeld et al. (2008) entnommen werden. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 17 Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Tabelle 2: Produktion von essbarem Protein tierischer Herkunft mit verschiedenen Tierarten/ -kategorien und N-Ausscheidung in Abhängigkeit von der Leistungshöhe (nach Flachowsky 2002) Eiweißquelle Leistung (Lebendmasse) je Tag Futteraufnahme Höhe (kg T/Tag) GF:KF (auf T- Essbare Protein- Essbares Protein Fraktion gehalt in (g/Tag) (%) essbarer (g/kg LM) Fraktion Basis,%) N-Ausscheidung (kg/kg (% der essbares N- Protein) Aufnahme) (g/kg FM) Milchkuh 10 kg Milch 12 90/10 (650 kg) 20 kg Milch 16 40 kg Milch Milchziege 95 323 0,5 0,65 75 75/25 646 0,9 0,48 70 25 50/50 1292 2,0 0,35 65 2 kg Milch 2 80/20 68 1,1 0,40 70 (60 kg) 5 kg Milch 2,5 50/50 170 2,8 0,23 60 Mastrind 500 g LMZ 6,5 95/15 48 0,12 2,5 90 (350 kg) 1000 g LMZ 7 85/15 95 0,24 1,6 84 1500 g LMZ 7,5 70/30 143 0,36 1,2 80 Mastschwein 500 g LMZ 1,8 20/80 45 0,55 0,8 85 (80 kg) 700 g LMZ 2 10/90 63 0,8 0,7 80 900 g LMZ 2,2 0/100 81 1,0 0,6 75 Mastküken 40 g LMZ 0,07 10/90 4,8 3,2 0,4 70 (1,5 kg) 60 g LMZ 0,08 0/100 7,2 4,8 0,3 60 Legehenne 50 % LL 0,10 20/80 3,6 2,0 0,6 80 (1,8 kg) 70 % LL 0,11 10/90 5,1 2,8 0,35 65 90 % LL 0,12 0/100 6,6 3,7 0,2 55 95 50 60 60 95 34 36 190 150 200 120 GF= Grundfutter, KF=Kraftfutter, LM=Lebendmasse, LMZ=Lebendmassezunahme, LL=Legeleistung Tierbedingte Emissionen Methan (CH4) Es ist allgemein anerkannt, dass Methan als natürliches Nebenprodukt der mikrobiellen Fermentation im Pansen von Wiederkäuern anfällt. In Abhängigkeit zu der Rationsgestaltung können 4 bis 10 % der Bruttoenergie bzw. 10 – 40 g CH4/kg T-Aufnahme entstehen (Tab. 3). Da wir kürzlich (Flachowsky und Brade 2007) in einem Review auf Methanbildung und Einflussfaktoren detailliert eingegangen sind, sollen hierzu keine weiteren Ausführungen folgen. Verschiedene Autoren halten es für realistisch, durch unterschiedliche Maßnahmen die Methanemission aus dem Verdauungstrakt der Wiederkäuer um bis zu 30 % zu reduzieren (z.B. Zus. bei Flachowsky und Brade 2007, Jouany 2008, Kreuzer und Soliva 2008). Auf Möglichkeiten zur Reduzierung der Methanbildung bei den anaeroben Umsetzungen im Verdauungstrakt und bei der Exkrementlagerung wird im Abschnitt „Forschungsbedarf“ näher eingegangen. Bedingt durch das hohe Treibhauspotenzial (s. Tab. 2) belastet CH4 die CO2Äq-Footprints der von Wiederkäuern stammenden Lebensmittel ganz erheblich (zwischen 50 und 80 %). Seite 18 7. BOKU-Symposium Tierernährung Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Tabelle 3: Methanbildung je kg Futtertrockensubstanz in Abhängigkeit von der Rationsgestaltung der Wiederkäuer (nach verschiedenen Literaturquellen) % der Bruttoenergieaufnahme g/kg Trockensubstanz 0 8 - 10 25 - 40 50 6-8 20 - 25 90 4-6 10 - 20 Kraftfutteranteil (%) Lachgas (N2O) Lebensmittel liefernde Tiere scheiden selbst kein N2O aus. Etwa 90 % des in die Atmosphäre gelangenden N2O wird in den Boden bei mikrobiellen Umsetzungen aus Nitrat und Ammonium gebildet. Der Anteil des Stickstoffes, der als Lachgas emittiert wird, hängt u.a. von N-Quelle, Bodenart, Feuchte, Temperatur und Bodenbewirtschaftung ab. Außerdem kann Stickstoff, der aus dem Boden als Nitrat eingetragen und verfrachtet wird, später an anderen Stellen zu Lachgasemissionen führen. Insgesamt ist einzuschätzen, dass hohe Stickstofffrachten mit hoher Wahrscheinlichkeit zu hohen Lachgasemissionen führen. Für quantitative Abschätzungen wird zumeist der IPCC-Richtwert (IPCC 2006) zugrunde gelegt, nach dem 1,25 % des ausgebrachten N als N2O-N emittiert werden, wohl wissend, dass die N2O-Emissionen bei weidenden Tieren (Oenema et al. 2005, Di et al. 2007) oder Gülledüngung (Poggemann 2001) deutlich höher sein können als nach Mineraldünger-Gaben (Ambus et al. 2007, De Klein und Eckard 2007, Jones et al. 2007, von Groeningen et al. 2005a, b). Crutzen et al. (2007) geben einen Schätzwert von ≈ 4 % N2O-N des gedüngten N an und berücksichtigen dabei ebenfalls die jenseits der gedüngten Flächen anfallenden Lachgasmengen. Die N2O-Emissionen bei Weidehaltung können zwischen 1,4 und 9,8 % der ausgeschiedenen N-Menge variieren (Bockisch et al 2000). Im Ergebnis einer Literaturauswertung zu flächenbezogenen N2O-Emissionen aus Acker- bzw. Grünlandflächen in Deutschland geben Hirschfeld et al. (2008) 266-1717 kg CO2Äq/ha Ackerland bzw. 89 – 720 kg/ha Grünland an. Über weitere Details der Lachgasbildung und zur Reduzierung der NAusscheidungen bei Lebensmittel liefernden Tieren haben wir kürzlich zusammenfassend informiert (Flachowsky und Lebzien 2007). Prinzipiell ist einzuschätzen, dass aus Geflügelexkrementen infolge des Harnsäureanteils im Harn weniger Lachgas entsteht als aus Exkrementen, die im Harn Harnstoff enthalten (Osada et al. 2007). Da bei Geflügel auch kaum Methan anfällt, resultieren deutlich geringere CO2Äq bei Lebensmitteln von Geflügel (s. Abb. 1). CO2-Footprints Die Höhe der CO2Äq-Footprints hängt wesentlich von den berücksichtigten Systemgrenzen ab. Bei dem in Tabelle 4 gezeigten Beispiel zur Kalkulation von CO2Äq-Footprints für Milch fanden nur die direkt der Milchkuh zuordenbaren Emissionen Berücksichtigung. Jungrinderaufzucht oder Emissionen im Vorleistungsbereich (z.B. Maschinenbau, Stallbau) blieben dabei unberücksichtigt. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 19 Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Tabelle 4: Kalkulation der Emissionen je Milchkuh und Jahr (Parameter: Lebendmasse: 650 kg, Milchleistung 8000 kg/Jahr, 1 Kalb/Jahr; nach Dämmgen und Haenel, 2008) Emissionen (kg/Kuh und Jahr) Emissionsquelle CO2 CH4 N2O Düngerproduktion 210 5,5 1,1 Futtererzeugung 83 Transport, Behandlung 43 1,2 Pansenfermentation 119 Fermentation bei Güllelagerung 19 0,9 Emissionen aus Boden, Lagerung, Wasser -1 1,8 143 5 Gesamt 336 CO2-Äquivalente (t/Kuh und Jahr) 5,2 (g/kg Milch)1) 1) 650 ohne Jungrinderaufzucht und Kalb Die erwähnten Einflussfaktoren sind als Ursachen für die große Variationsbreite der CO2Äq-Footprints je kg Milch nach verschiedenen Autoren (zwischen 400 und 1500 g CO2Äq/kg Milch (s. Tab. 5) anzusehen. Tabelle 5: Angaben zu produktbezogenen CO2Äq je kg Milch bei unterschiedlichen Produktionsformen nach verschiedenen Autoren Produktionsform konventionell ökologisch (kg CO2Äq/kg Milch) 0,40 (40 kg Milch/Tag) 0,55 (20 kg “ 1,00 (10 kg “ ) Eigene Daten (2008) ) 0,65 (k.A.) Seite 20 Autor Dämmgen und Hänel (2008) 0,83 0,84 Woitowicz (2007) 0,85 0,78 Hirschfeld et al. (2008) 0,89 1,13 Iepema und Pijnenburg (2001) 0,94 0,88 Fritsche und Eberle (2007) 0,97 1,13 Zijpp (2001) 0,99 0,94 Cederberg und Mattsson (2000) 1,06 1,23 Defra (2006) 1,30 1,30 Haas et al. (2001) 1,40 1,50 Thomassen et al. (2007) 7. BOKU-Symposium Tierernährung Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Noch höhere Schwankungen können bei der Rindfleischerzeugung ermittelt werden, wie Tabelle 6 in Abhängigkeit von der Höhe der Lebendmassezunahme bzw. der Fütterung demonstriert. Tabelle 6: Beispiele zur Kalkulation der CO2-Äquivalente bei der Rindfleischerzeugung (150-550 kg LM) in Abhängigkeit vom Futtereinsatz sowie den Methan- und N-Ausscheidungen Anteil KF (% der TAufnahme)1) Methanausscheidung (g/kg T) N-Ausscheidung (g/Tag) 6,5 0 26 7,0 15 7,5 30 LMZ Futterauf- (g/Tag) nahme (kg T/Tier und Tag)1) 500 (überwiegend Weide, kein KF) 1000 (Stallhaltung, Grassilage, etwas KF) 1500 (Stallhaltung, Maissilage, KF) N2O-Bildung CO2-Äquivalente (kg/kg) (% der NAusscheidung) LMZ SLK ET 110 2 11,5 23,0 28,0 24 130 1 5,5 11,0 13,8 22 150 0,5 3,5 7,0 9,0 LMZ= Lebendmassezunahme, KF=Kraftfutter, SLK=Schlachtleerkörper, ET=essbare Teile 1) CO2-Output: 120 kg/t Grundfutter-Trockensubstanz, 220 kg/t Kraftfutter-Trockensubstanz Der vorliegenden Literatur können Variationsbreiten zwischen 7,0 und 36,4 kg CO2Äq/kg Schlachttierleerkörper entnommen werden (s. Tab. 7), wobei die höchsten Werte bei Mutterkuhhaltung ermittelt wurden. Der extrem hohe Wert von Ogino et al. (2007) resultiert aus ungünstigen Rahmenbedingungen (Mutterkuhhaltung, nur 40 % Fleischertrag). Die hohe Variation der CO2Äquivalente bei der Rindfleischerzeugung kann wesentlich durch die verschiedenen Bezugsgrößen (Schlachttierleerkörper, essbare Teile, Fleisch, essbares Protein, s. Tab. 6 und 7) verursacht werden. Bei Bezug der CO2Äq je kg essbares Eiweiß (Tab. 8) wird ein Vergleich zwischen den verschiedenen Formen der Erzeugung von Lebensmitteln tierischer Herkunft möglich. Dabei wird offensichtlich, dass infolge der kaum vorhandenen Methanausscheidungen bei Nichtwiederkäuern und der geringen Lachgasbildung aus Geflügelexkrementen (hoher Anteil Harnsäure), die CO2Äq-Footprints vor allem bei Lebensmitteln vom Geflügel deutlich niedriger sind als bei Rindfleisch und Kuhmilch (Tab. 8). Bei Wiederkäuern entfallen in Abhängigkeit von verschiedenen Einflussfaktoren 50 bis 80 % der CO2Äq auf die Methanemissionen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 21 Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Tabelle 7: Angaben zu produktbezogenen CO2Äq je kg Schlachttierleerkörper in der Rindermast bei unterschiedlichen Produktionsformen nach verschiedenen Autoren Produktionsform konventionell ökologisch Autor (kg CO2Äq/kg Fleisch) 8,5 29,0 (Mutterkühe) Reitmayr (1995) 8,7/10,1 10,2 Woitowicz (2007) k.A. Eigene Daten (2008, s. Tab. 6) 11,5 k.A. Wechselberger (2000) 13,3 11,4 Fritsche und Eberle (2007) 15,8 18,2 Defra (2006) 23,6 20,2 Casey und Holden (2006) 7,0 (1500 g LMZ) 11,0 (1000 g LMZ) 23,0 (500 g LMZ) 36,4 (Mutterkühe, Rindermast, 40 % Fleischertrag) Ogino et al. (2007) Tabelle 8: CO2-Äquivalente (kg) je kg Produkt bzw. je kg essbares Protein tierischer Herkunft in Abhängigkeit von der Leistungshöhe verschiedener Nutztiere Proteinquelle Leistungshöhe Milch CO2-Äquivalente (kg) (je Tag) je kg Produkt je kg Protein 10 kg 1,0 0,55 0,4 30 20 kg 12 40 kg Rindfeisch1) Schweinefleisch 1) 1000 g 11,0 55 1500 g 7,0 35 700 g 1,8 1,5 12 0,8 0,6 4 0,6 0,5 5 900 g Geflügelfleisch1) 40 g 60 g Eier 70 % LL 90 % LL 1) Seite 22 16 10 3 4 Schlachttierkörper, LL=Legeleistung 7. BOKU-Symposium Tierernährung Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Schlussfolgerungen Im Beitrag sollten CO2-Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft unter Berücksichtigung der Kriterien Notwendigkeit – Wissensstand – Einflussfaktoren abgeleitet und bewertet werden: Notwendigkeit: Die zunehmenden CO2- Emissionen und der weitere Anstieg der CO2-Konzentration in der Atmosphäre führen dazu, alle CO2-Emitenten zu analysieren sowie Reduzierungspotenziale zu erkennen und umzusetzen. Durch CO2Äq-Footprints für Lebensmittel soll eine Sensibilisierung von Erzeugern und Verbrauchern bewirkt werden. Wissensstand: In den zurückliegenden Jahren wurden wesentliche Beiträge zur Quantifizierung klimarelevanter Austräge entlang der Nahrungskette (-netzwerkes) geleistet, so dass erste (grobe) Bewertungen von CO2Äq-Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft möglich sind. Einflussfaktoren und Forschungsbedarf: Eine Palette vielfältiger Einflussfaktoren (z.B. Systemgrenzen, Bezugsbasis, jahreszeitliche Schwankungen der Ein- und Austräge) erschweren gegenwärtig „belastbare“ Aussagen zur Höhe der CO2Äq-Footprints. Aus Sicht der Tierernährung wird u.a. Forschungsbedarf auf folgenden Gebieten gesehen: - Erfassung der Einflussfaktoren auf die Lachgasbildung und bessere Quantifizierung in Abhängigkeit von den Einflussfaktoren, Weitere Quantifizierung der Betriebsmittel-bedingten Emissionen, Berücksichtigung der Emissionen, die bei der Aufbereitung von Nebenprodukten der Verarbeitungsindustrie als Futtermittel entstehen, bessere Quantifizierung der Emissionen aus der Mischfutterherstellung und –behandlung (z.B. Pelletierung, Extrudieren), Berücksichtigung des Jahrganges, der Jahreszeit und anderer exogener Einflussfaktoren auf die Emissionen, Standardisierung der Methode, klare Definition von Systemgrenzen, Vertiefung der Kenntnisse über Emissionsreduzierungspotenziale und Umsetzung der Potenziale in die Praxis, Bewertung der Auswirkungen der „modernen“ Biotechnologie auf die Ökobilanz Literatur Ambus P., Petersen S.O. and Soussana J.-F. (2007): Short-term carbon and nitrogen cycling in urine patches assessed by combined carbon-13 and nitrogen-15 labelling. Agriculture, Ecosystems & Environment 121, 84-92. Bockisch F.-J. Ahlgrimm H.-J., Böhme H., Bramm A., Dämmgen U., Flachowsky G., Heinemeyer O., Höppner F., Murphy D.P.L., Rogasiki J., Röver M. und Sohler S. (2000): Bewertung von Verfahren der ökologischen und konventionellen landwirtschaftlichen Produktion im Hinblick auf Energieeinsatz und bestimmte Schadgasemissionen, Landbauforschung Völkenrode, SH 211, 206 S. Brunsch R.. Kraatz S., Berg W. und Rus C. (2008): Ermittlung der Energieeffizienz in der Tierhaltung auf der Grundlage von Energiebilanzen. KTBL-Schrift 463, 115-125. Capper L.C., Castaneda-Gutierrez E., Cady A. and Bauman D.A. (2008): The environmental impact of recombinant bovine somatotropin (rbST) use in dairy production. PNAS 105, 9668-9673. Casey J.W. and Holden N.M. (2005): Analysis of greenhouse gas emissions from the average Irish milk production system. Agric. Sys. 86, 97-114. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 23 Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Casey J.W. and Holden N.M. (2006): Greenhouse gas emission from conventional, agri-environmental scheme and organic Irish Suckler – Beef Univ. J. Environm. Quality 35, 231-239. Cederberg C. and Mattson B. (2000): Life cycle assessment of milk production – A comparison of conventional and organic farming. J. Cleaner Prod. 8, 250-260. Crutzen P.J., Mosier A.R., Smith K.A. and Winiwarter W. (2007): N2O release from agro-biofuel production negates global warming reduction by replacing fussil fuels. Atmos. Chem. Phys. Discuss. 7, 11191-11205. Dämmgen U. and Haenel H.-D. (2008): Emissions of greenhouse gases and gaseous air pollutants – a challenge for animal nutrition. Proc. Soc. Nutr. Physiol. 17, 163-167. DEFRA (August 2006): Determination the environmental burdens and resource use in the production of agricultural and horticultural commodities. Defra project report ISO 205. Cranfield Univ. Silsoe Inst., http://www.cranfield.ac.uk De Klein C.A.M. and Eckard R.J. (2007): Targeted technologies for nitrous oxide abatement from animal agriculture. Proc. Greenhouse Gases and Animal Agriculture Conf., Christchurch, New Zealand, 26.-29.11.2007, 54 (Abstr.). Di H.J., Cameron K.C. and Sherlock R.R. (2007): Mitigation of nitrous oxide emissions from different grazed pasture soils using a nitrification inhibitor, Eco-u. Proc. Greenhouse Gases and Animal Agriculture Conf., Christchurch, New Zealand, 26.29.11.2007, 48 (Abstr.). DWD (2008): Deutscher Wetterdienst, Geschäftsbereich Klima und Umwelt, 08.09.2008. Engels H. (2008): Gemeinsam auf Spurensuche für den Klimaschutz, Neue Landwirtschaft, H. 9, 46-48. Feil A. (2005): IFF-Kolloquium 2005 – sind Maßnahmen zur Reduzierung der Energiekosten denkbar? Aufbereitungstechnik 46, Nr. 11, 52-56. Flachowsky G. (2002): Efficiency of energy and nutrient use in the production of edible protein of animal origin. J. Appl. Anim. Res. 22, 1-24. Flachowsky G. (2008): Wie kommen wir zu CO2-Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft. Arch. Tierzucht 51, SH, 67-82. Flachowsky G. und Brade W. (2007): Potenziale Zur Reduzierung der Methan-Emissionen bei Wiederkäuern. Züchtungskd. 79, 417-465. Flachowsy G. und Lebzien P. (2007): Lebensmittel liefernde Tiere und Treibhausgase – Möglichkeiten der Tierernährung zur Emissionsminderung. Übersicht. Tierern. 35, 191-231. Fritsche R. und Eberle U. (2007): Treibhausgasemissionen durch Erzeugung und Verarbeitung von Lebensmitteln. Arbeitspapier, Öko-Institut e.V. Darmstadt, 13 S. Haas G., Wetterich F. and Köpke U. (2001): Comparing intensive, extensified and organic grassland farming in Southern Germany by process life cycle assessment. Agriculture, Ecosystems & Environment 83, 43-53. HEA (Hauptverwaltungsstelle für Elektrizitätsanwendung e.V.. (1996): Strom – Tips für Landwirte. HEA (Hrsg.), Energieverlag GmbH, Heidelberg, S. 14 ff. Heissenhuber, A (2007): Ökonomische Aspekte einer energieeffizienten Landwirtschaft. KTBL-Vortragstagung, 08./09.04.2008, Fulda, KTBL-Schrift 463, 42-53. Hirschfeld J., Weiß J., Preicht M., Korbun T. (2008): Klimawirkungen der Landwirtschaft in Deutschland. Schriftenreihe des IÖW 186/08, Berlin, 188 S. Iepema G. and Pijnenburg J. (2001) Conventional versus organic dairy farming. A comparison of three experimental farms on environmental impact, animal health and animal welfare. MSc thesis, Animal Production Systems Group, Wageningen University, The Netherlands. IPCC – Intergovernmental Panel on Climate Change: 2006 IPCC Guidelines for National Greenhouse Gas Inventories. Vol. 4, Agriculture, Forestry and other Land use. http://www.ipce-nggip.iges.or.jp/public/2006/gl/vol4.htm. Isermeyer F., Otte A., Christen O., Frohberg K., Hartung J., Kirschke D., Schmitz M. und Sundrum A. (2008): Nutzung von Biomasse zur Energiegewinnung – Empfehlungen an die Politik, Gutachten. Berichte über Landwirtschaft, SH 116, 198 S. Jouany J.-P. (2008): Enteric methane production by ruminants and its control. In: Gut efficiency; the key ingredient in ruminant. Ed. by A. Andrieu D. Wilde, Wageningen Academic Publ., 35-59. Jones S.K., Rees R.M., Skiba U.M. and Ball B.C. (2007): Influence of organic and mineral N-fertilizer on N2O fluxes from a temperate grassland. Agriculture, Ecosystems & Environment 121, 74-83. Kraatz S., Berg W., Küstermann B. and Hülsbergen K.J. (2006): Energy and carbon balancing in livestock keeping. Proc. World Congress: Agricultural engineering for a better world congress Bonn, 03.-07.09.2006, VDI-Berichte Nr. 1958, VDI-Verlag Düsseldorf, 417-418. Kreuzer M. and Soliva C.R. (2008): Nutrition: Key to methane mitigation in ruminants. Proc. Soc. Nutr. Physiol. 17, 168-171. Oenema O., Wrage N., Velthof G.L., van Groenigen J.W., Dolfing J. and Kuikman P.J. (2005): Trends in global nitrous oxide emissions from animal production systems. Nutrient Cycling in Agroecosystems 72, 51-65. Ogino A., Orito H., Shimada K. and Hirooka H. (2007): Evaluating environmental impacts of the Japanese beef cow-calf system by the life cycle assessment method. Anim. Sci. J. 78, 424-432. Seite 24 7. BOKU-Symposium Tierernährung Flachowsky und Meyer: CO2 Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren Osada T., Takeuchi M., Harada Y., Maeda K. and Morioka R. (2007): Greenhouse gas emissions produced by a poultry manure treatment facility using forced aeration composting. Proc. Greenhouse Gases and Animal Agriculture Conf., Christchurch, New Zealand, 26.-29.11.2007, 224 (Abstr.). Poggemann S. (2001): N-Applikation und N2O-Emissionen von Weideland unter variierenden Bedingungen. Diss. Justus-LiebigUniversität, Gießen, 122 S. Reitmayr T. (1995): Entwicklung eines rechnergeschützten Kennzahlensystems zur ökonomischen und ökologischen Beurteilung von agrarischen Bewirtschaftungsformen – Dargestellt an einem Beispiel. Agrarwirtschaft, Frankfurt/Main, SH 147. Thomassen M.A., van Calker K.J., Smits M.C.J., Iepema G.L. and de Boer I.J.M. (2007): Life cycle assessment of conventional and organic milk production in the Netherlands. Agricult. Systems. Van Groeningen J.W., Kuikman P.J., de Groot W.J.M. and Velthof G.L. (2005b): Nitrous oxide emission from urine-treated soil as influenced by urine composition and soil physical conditions. Soil and Biochemy 37, 463-473. Wechselberger P. (2000): Ökonomische und ökologische Beurteilung unterschiedlicher landwirtschaftlicher Bewirtschaftungsmaßnahmen und –systeme anhand ausgewählter Kriterien. FAM-Bericht, Shaker-Verlag, Aachen, 502 S. Woitowicz A. (2007): Auswirkungen einer Einschränkung des Verzehrs von Lebensmitteln tierischer Herkunft auf ausgewählte Nachhaltigkeitsindikatoren – dargestellt am Beispiel konventioneller und ökologischer Wirtschaftsweise. Diss., TU München, 237 S. Van der Zijpp I.A.J. (2001): Animal production systems: on intigration and diversity. Habil.schrift, Univ. Wageningen, The Netherlands. Autorenanschrift Prof. Dr. Gerhard Flachowsky Institut für Tierernährung Friedrich-Loeffler-Institut (FLI) Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit Bundesallee 50, 38116 Braunschweig, e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 25 Schnieke: Gene technology in raising livestock Gene technology in raising livestock Angelika Schnieke Livestock Biotechnology, Technische Universität München, Wissenschaftszentrum Weihenstephan, Germany Summary The genetic engineering of livestock species allows the precise alteration of existing genetic traits or the introduction of entirely new traits, potentially offering a powerful accompaniment to traditional selective and marker-assisted breeding. To date most transgenic livestock have however been produced for biomedical applications, such as the production of pharmaceutical proteins in milk or eggs (Kind and Schnieke, 2008), generation of donor animals for xenotransplantation (Dai et al., 2002) and to model human diseases (Rogers et al., 2008). Medical need continues to provide the strongest impetus for the development of transgenic technologies. But it is timely to consider whether it is also appropriate to employ transgenics to improve animal health, productivity and fertility, reduce the environmental impact of intensive animal husbandry and to increase the nutritional value of food products. Technology The first transgenic large animals were produced in 1985 by microinjecting DNA into fertilised oocytes (Hammer et al. 1985). This straightforward, but inefficient technique was widely used for almost two decades, but has now been largely superseded. Retroviral transduction is considerably more efficient in terms of the percentage transgenic animals obtained (Hofmann et al., 2003; Whitelaw et al., 2004), but is limited to small transgenes. Sperm mediated transgenesis (SMTG), especially when combined with intracytoplasmic sperm injection (ICSI), has been used successfully in several species and with transgenes greater than 100kb (Moisyadi et al., 2008). Cell-mediated transgenesis, in which primary cells are cultured and transfected in vitro and animals generated by nuclear transfer, is more labourintensive than either of these methods, but allows the presence, location and structure of an integrated transgene to be analysed in individual cell clones before animals are produced. This reduces much of the cost, the number of animals required and uncertainty in a transgenic program (Schnieke et al., 1997) and importantly allows precise modifications to be engineered into genes in situ, by gene targeting (McCreath et al., 2000; see Table 1). Over the past ten years, refinements of existing technologies such as nuclear transfer have provided incremental increases in efficiency (e.g. Oback, 2008). Advances such as the production of oocytes by Seite 26 7. BOKU-Symposium Tierernährung Schnieke: Gene technology in raising livestock in vitro maturation using slaughterhouse-derived ovaries, rather than flushing from live donors have also significantly reduced the number of animals required to generate a transgenic founder. Nevertheless, genetic modification of large animals remains quite a cumbersome and costly procedure. Several new technologies are however emerging that are likely to have a significant impact on animal biotechnology, increasing efficiency and expanding the range of tools available. Embryonic stem (ES) cells have been key to the extensive analysis of gene function, mainly carried out by gene targeting, in mice over the past two decades. But, despite extensive efforts, definitive ES cells have yet to be isolated from any livestock species. However stem cell technology has undergone a revolution in the last two years with the discovery that defined factors can induce pluripotency in normal somatic cells such as fibroblasts or lymphocytes (e.g. Okita et al. 2007; Hanna et al. 2008). Induced pluripotent stem (iPS) cells appear to be equivalent to ES cells and are surprisingly easy to obtain. The derivation of iPS cells from livestock may finally deliver the long-awaited extension of mouse ES cell technology. Table 1. Overview of methods for genetic engineering mice and livestock Method Mouse Livestock Gene Targeting Viral transduction + + - ES/EG cells + -* + iPS cells + ? ** + SMTG + + - RNAi + + (+) Mol. scissors (+) (+) + Microinjection + + - Nuclear transfer + + + * exception chicken ES and EG cells ** currently being developed SMGT sperm mediated transgenesis "Classical" gene targeting has so far relied on spontaneous homologous recombination between the vector and the target locus, which in somatic cells tends to be exceedingly rare, presenting a substantial difficulty in the generation of gene-targeted livestock. This is likely to change with the advent of highly-specific endonuclease enzymes, such as endonucleases fused with zinc-finger DNA binding domains (Urnov et al., 2005) and custom-designed homing endonucleases (Arnould et al., 2007), sometimes collectively termed "molecular scissors" (see Table 1). These stimulate the frequency of gene targeting by several orders of magnitude. While the major motivation behind this work is human gene therapy (Cathomen and Joung 2008), molecular scissors are beginning to be 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 27 Schnieke: Gene technology in raising livestock extended to the production of gene-targeted animals. For example, zebrafish have recently been produced by targeted gene inactivation directly in the oocyte using a zinc-finger nuclease (Meng et al. 2008; Doyon et al., 2008). MicroRNAs (miRNAs) are an abundant class of small (~21 nucleotides) single-stranded, non-coding RNAs that are crucial regulators of gene expression, affecting a wide variety of cellular properties including proliferation, differentiation, and apoptosis. Expression of artificial miRNA constructs, or short hairpin RNAs in transgenic animals allows experimental reduction of target gene expression. RNA inhibition (RNAi) technology is being extended to livestock offering an alternative to gene targeting as a means of modulating gene expression (Xia et al., 2006). Multi-transgenic animals have already been made using current technologies (e.g. Kind and Schnieke, 2008). The development of episomal and artificial chromosome vectors will further facilitate the introduction of very large transgenes and large multi-transgene arrays. Thus in the next few years it is likely that a considerably wider range of genetic modifications will become feasible in livestock species. However any type of genetic modification requires information on gene sequence, function, allelic variants and gene-gene interactions. The bovine genome has already been sequenced and the pig is expected in 2009, with more species and breeds undoubtedly following as sequencing costs continue to fall. Comparative analysis of sequence data from different breeds will be vital in identifying the genetic basis of many desirable traits, such as disease resistance, adaptation to environmental conditions, reproductive performance, and product (e.g. meat, milk, fibre) quality. Genetic engineering: applications in agriculture This is a brief, and in no way comprehensive, overview of agricultural applications for genetic engineering in livestock, with some illustrative examples of existing transgenic animals. Animal health and welfare Improvements in animal health benefit not only the animal, but also the farmer through a reduced need for veterinary care and fewer losses, and the consumer by assuring disease-free products. Genetic modification offers a means of conferring resistance to important pathological agents that would be very difficult to achieve otherwise. Transgenic cattle have already been produced with resistance to Staphylococcus aureus induced mastitis (Wall et al., 2005), or BSE (Richt et al., 2007). Work is also proceeding towards engineering animals resistant to E.coli infection, brucellosis and a wide variety of other pathogens and parasites. Recent advances in molecular biology and biomedical research are being applied to important agricultural applications, for example RNAi is now being assessed as a means of generating poultry resistant to avian influenza virus (Wise et al., 2008). Important prerequisites for any intervention are an understanding of the pathogen-host interaction, the cellular responses and the genes involved. For example, the Toll-like receptor 4 (TLR4) recognises endotoxins associated with gram-negative bacterial infections (e.g. mastitis), making it an interesting candidate for enhancing disease resistance. A short nucleotide polymorphism within the 5' UTR region of the bovine TLR4 gene is associated with health-related traits in the Canadian Holstein population (Sharma et al., 2008) indicating the type of genetic modification that could be useful. Trypanosome Seite 28 7. BOKU-Symposium Tierernährung Schnieke: Gene technology in raising livestock parasitism is an important problem in some African countries, but certain African cattle breeds are known to be less susceptible. Identification of the genes responsible could lead to entirely new strategies to control the disease. Although not strictly transgenic in the usual sense, the transfer of recombinant DNA constructs into somatic cells is already being used in veterinary medicine. DNA therapy offers a means of vaccination against infectious agents such as West Nile virus in horses (Davidson et al., 2005) and gene therapy against cancer and cancer-associated conditions in dogs (Bodles-Brakhop et al., 2008). Regulatory approval has also been granted in food animals. DNA therapy for infectious haematopoietic necrosis virus was approved for salmon in Canada in 2005; and the use of a construct expressing growth hormone releasing hormone was approved to reduce offspring mortality in pigs in Australia in 2007 (Kutzler and Weiner, 2008). Environment Intensive agriculture and the need to feed an ever-increasing world population places an enormous strain on the environment. All feasible options to reduce the environmental impact of modern agriculture should be seriously considered. Perhaps the best known example of transgenic technology to lessen the environmental impact of agriculture is the "Enviro pig", produced as a means of reducing phosphorus pollution from animal manure, an important cause of eutrophication of streams and rivers. These transgenic pigs express a bacterial phytase gene in salivary glands, enhancing their ability to utilise the phosphorus content in feed grains. This removes the requirement for dietary phosphorus supplementation and reduces the amount of phosphorus in their manure (Golovan et al., 2001). The emission of atmospheric greenhouse gas, particularly methane, by ruminant livestock has been recognised as an important contributor to climate change. Reducing this would not only benefit the environment, but also bring economic benefit to the farmer, because gas production represents a loss of feed energy to the animal, a particularly important consideration when grain prices are high. Ruminal methanogenesis can be reduced by the inoculation of genetically modified E. coli with higher nitrite reductase activity (Sar et al., 2005). Transgenic technology also offers the possibility of modifying the digestive properties of the gut. Animal reproduction and animal products Reproductive performance is a critical factor in animal husbandry and it is well known that particular breeds offer high fecundity, for example Booroola Merino sheep or Chinese Meishan pigs. However using conventional breeding to combine this with other desirable traits, such as high growth rate, is a complex and difficult task. Where a single gene is responsible (e.g. BMPR1b in Booroola sheep, Mulsant et al., 2001), the allele could be seamlessly introduced into the same locus in animals with the desired genetic background, leaving all else unchanged. Survival and growth of offspring can also be improved by altering milk composition. Expression of bovine-lactalbumin in the milk of transgenic sows resulted in better survival and development of piglets (Wheeler et al., 2001). Over-expression of other factors such as growth factors, lactoferrin, antimicrobial peptides and lysozyme might also be beneficial. Altering milk composition for human consumption could reduce allergenicity or improve its properties for the dairy industry. Transgenic cattle have been generated that over-express β- and κ-casein to improve cheese and yoghurt production (Brophy et al., 2003). Additional examples of transgenic 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 29 Schnieke: Gene technology in raising livestock animals with modifications of growth and carcass composition, or novel genes to improve the nutritional value of the meat product such as increased omega 3 fatty acid content are listed in Table 2. Table 2. Transgenic livestock with novel traits. Gene Trait Species Reference Bovine α-lactalbumin Improved milk nutrition Pig Wheeler et al., 2001 Human lactoferrin Milk composition Cattle Hyvönen et al., 2006 Human lysozyme Udder health, milk processing Goat Maga et al., 2006 Bovine β- and κ-casein Increased whey Cattle Brophy et al., 2003 Desaturase (C. elegans) Increased omega 3 fatty acids Pig Lai et al., 2006 Desaturase (spinach) Increased omega 3 fatty acids Pig Saeki et al., 2004 Growth hormone Increased growth, less fat Pig Cifone et al., 2002 Insulin-like growth factor Increased growth, less fat Pig Pursel et al., 2004 Insulin-like growth factor Increased wool growth Sheep Damak et al., 1996 Keratin (Intermediate filament) Improved wool quality Sheep Bawden et al., 1998 As already mentioned, if the genetics of a particular trait are well understood, replication in a breed of choice by genetic engineering is a realistic option, especially when a single gene is responsible. To give a further example: spontaneous mutations in the myostatin gene are known to cause the doublemuscling phenotype in Belgian Blue, Asturiana, South Devon and Scottish Aberdeen Angus cattle (Gill et al., 2008). These mutations significantly increase the value of the animals through increased carcass, sirloin and hindquarter weight. This trait could be introduced into any chosen breed in a single generation by genetic engineering. Similarly, Texel sheep are renowned for their exceptional meatiness. They carry a point mutation in the myostatin 3' untranslated region that creates a target site for a specific inhibitory miRNA, resulting in translational inhibition and muscular hypertrophy (Clop et al., 2006). Again this mutation could be replicated in other breeds. Furthermore, control over the time at which the genetic alteration becomes active could avoid unwanted aspects of increased muscle growth such as high birth weight, offering an improvement over the existing breeds. Clearly many traits are specified by multiple genes and the identification of loci specifying so-called quantitative traits has been an important aspect of livestock genetics for many years. miRNAs are involved in the control of many biological processes and in many cases single miRNAs control the expression of multiple genes. As knowledge of miRNAs increases, it is conceivable that they will allow control over whole networks of genes that are beyond the scope of individual gene targeting. Seite 30 7. BOKU-Symposium Tierernährung Schnieke: Gene technology in raising livestock Conclusion Genetic technologies can undoubtedly provide benefits for agriculture and the consumer. Current public opinion in Europe and other parts of the world is however very much opposed to genetically modified animals and food products. These attitudes also extend to technologies such as reproductive cloning where there is no modification of the genomic DNA sequence. This is largely an unfortunate consequence of the rather insensitive way early GM food plants were launched on the market. Members of the public were presented with products carrying a totally unknown risk and no perceived benefit for the consumer. In retrospect it seems unsurprising that natural conservatism resulted in wholesale rejection of genetic technology for agriculture. However, as time passes and a track record of safety and efficacy is established, it seems likely that most members of the public will adopt a more considered approach and accept genetically modified animals that provide clear and evident benefits. How long this process takes is of course a difficult question. But the adoption of GM in agriculture in countries such as China is bound to affect sentiment, as will the demonstrated value of genetically modified animals in the development of lifesaving drugs and medical procedures. The availability of an enabling technology is in itself insufficient reason to produce transgenic animals. Any transgenic project requires an objective risk to benefit analysis in which the well-being of the animal is given a high priority. But where there are real long term benefits to the environment, animal or human health and well-being, then transgenic technology undoubtedly offers powerful and precise tools. The world food demand is forecast to triple by 2025, can society really afford to ignore novel ways of increasing the food supply? References Arnould S, Perez C, Cabaniols JP, Smith J, Gouble A, Grizot S, Epinat JC, Duclert A, Duchateau P and Pâques F. (2007). Engineered I-CreI derivatives cleaving sequences from the human XPC gene can induce highly efficient gene correction in mammalian cells. J Mol Biol. 371: 49-65. Bawden CS, Powell BC, Walker SK and Rogers GE. (1998). Expression of a wool intermediate filament keratin transgene in sheep fibre alters structure. Transgenic Res. 7: 273-87. Bodles-Brakhop AM, Brown PA, Pope MA and Draghia-Akli R. (2008). Double-blinded, Placebo-controlled plasmid GHRH trial for cancer-associated anemia in dogs. Mol Ther. 16: 862-70. Brophy B, Smolenski G, Wheeler T, Wells D, L'Huillier P and Laible G. (2003). Cloned transgenic cattle produce milk with higher levels of beta-casein and kappa-casein. Nat Biotechnol. 21: 157-62. Cathomen T and Joung JK. (2008). Zinc-finger nucleases: the next generation emerges. Mol Ther. 16: 1200-7. Cifone D, Dominici FP, Pursel VG and Turyn D. (2002). Inability of heterologous growth hormone (GH) to regulate GH binding protein in GH-transgenic swine. J Anim Sci. 80: 1962-9. Clop A, Marcq F, Takeda H, Pirottin D, Tordoir X, Bibé B, Bouix J, Caiment F, Elsen JM, Eychenne F, Larzul C, Laville E, Meish F, Milenkovic D, Tobin J, Charlier C and Georges M. (2006). A mutation creating a potential illegitimate microRNA target site in the myostatin gene affects muscularity in sheep. Nat Genet. 38: 813-8. Dai Y, Vaught TD, Boone J, Chen SH, Phelps CJ, Ball S, Monahan JA, Jobst PM, McCreath KJ, Lamborn AE, Cowell-Lucero JL, Wells KD, Colman A, Polejaeva IA and Ayares DL. (2002). Targeted disruption of the alpha1,3-galactosyltransferase gene in cloned pigs. Nat Biotechnol. 20: 251-5. Damak S, Su H, Jay NP and Bullock DW. (1996). Improved wool production in transgenic sheep expressing insulin-like growth factor 1. Biotechnology (N Y). 14: 185-8. Davidson AH, Traub-Dargatz JL, Rodeheaver RM, Ostlund EN, Pedersen DD, Moorhead RG, Stricklin JB, Dewell RD, Roach SD, Long RE, Albers SJ, Callan RJ and Salman MD. (2005). Immunologic responses to West Nile virus in vaccinated and clinically affected horses. J Am Vet Med Assoc. 226: 240-5. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 31 Schnieke: Gene technology in raising livestock Doyon Y, McCammon JM, Miller JC, Faraji F, Ngo C, Katibah GE, Amora R, Hocking TD, Zhang L, Rebar EJ, Gregory PD, Urnov FD and Amacher SL. (2008). Heritable targeted gene disruption in zebrafish using designed zinc-finger nucleases. Nat Biotechnol. 26: 702-8. Gill JL, Bishop SC, McCorquodale C, Williams JL and Wiener P. (2008). Associations between the 11-bp deletion in the myostatin gene and carcass quality in Angus-sired cattle. Anim Genet. Sep 24. [Epub ahead of print] Golovan SP, Meidinger RG, Ajakaiye A, Cottrill M, Wiederkehr MZ, Barney DJ, Plante C, Pollard JW, Fan MZ, Hayes MA, Laursen J, Hjorth JP, Hacker RR, Phillips JP and Forsberg CW. (2001) Pigs expressing salivary phytase produce low-phosphorus manure. Nat Biotechnol. 19: 741-5. Hammer RE, Pursel VG, Rexroad CE Jr, Wall RJ, Bolt DJ, Ebert KM, Palmiter RD and Brinster RL. (1985). Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection. Nature. 315: 680-3. Hanna J, Markoulaki S, Schorderet P, Carey BW, Beard C, Wernig M, Creyghton MP, Steine EJ, Cassady JP, Foreman R, Lengner CJ, Dausman JA, and Jaenisch R. (2008). Direct reprogramming of terminally differentiated mature B lymphocytes to pluripotency. Cell. 133: 250-64. Hofmann A, Kessler B, Ewerling S, Weppert M, Vogg B, Ludwig H, Stojkovic M, Boelhauve M, Brem G, Wolf E and Pfeifer A (2003). Efficient transgenesis in farm animals by lentiviral vectors. EMBO Rep 4:1054-1060 Hyvönen P, Suojala L, Haaranen J, von Wright A and Pyörälä S. (2006). Human and bovine lactoferrins in the milk of recombinant human lactoferrin-transgenic dairy cows during lactation. Biotechnol J. 1: 410-2. Kind A and Schnieke A. (2008). Animal pharming, two decades on. Transgenic Res. Jul 29. [Epub ahead of print] Kutzler MA and Weiner DB. (2008). DNA vaccines: ready for prime time? Nat Rev Genet. 9: 776-88. Lai L, Kang JX, Li R, Wang J, Witt WT, Yong HY, Hao Y, Wax DM, Murphy CN, Rieke A, Samuel M, Linville ML, Korte SW, Evans RW, Starzl TE, Prather RS and Dai Y. (2006). Generation of cloned transgenic pigs rich in omega-3 fatty acids. Nat Biotechnol. 24: 435-6. Maga EA, Walker RL, Anderson GB and Murray JD. (2006). Consumption of milk from transgenic goats expressing human lysozyme in the mammary gland results in the modulation of intestinal microflora. Transgenic Res. 15: 515-9. McCreath KJ, Howcroft J, Campbell KHS, Colman A, Schnieke AE and Kind AJ (2000). Production of gene-targeted sheep by nuclear transfer from cultured somatic cells. Nature 405:1066-1069 Meng X, Noyes MB, Zhu LJ, Lawson ND and Wolfe SA. (2008).Targeted gene inactivation in zebrafish using engineered zincfinger nucleases. Nat Biotechnol. 26: 695-701. Moisyadi S, Kaminski JM and Yanagimachi R. (2008). Use of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) to generate transgenic animals. Comp Immunol Microbiol Infect Dis. Aug 6. [Epub ahead of print] Mulsant P, Lecerf F, Fabre S, Schibler L, Monget P, Lanneluc I, Pisselet C, Riquet J, Monniaux D, Callebaut I, Cribiu E, Thimonier J, Teyssier J, Bodin L, Cognié Y, Chitour N and Elsen JM. (2001). Mutation in bone morphogenetic protein receptor-IB is associated with increased ovulation rate in Booroola Mérino ewes. Proc Natl Acad Sci U S A. 98: 5104-9. Oback B. (2008). Climbing mount efficiency--small steps, not giant leaps towards higher cloning success in farm animals. Reprod Domest Anim. Suppl 2:407-16. Okita K, Ichisaka T and Yamanaka S. (2007) Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells. Nature. 448: 313-7. Pursel VG, Mitchell AD, Bee G, Elsasser TH, McMurtry JP, Wall RJ, Coleman ME and Schwartz RJ. (2004). Growth and tissue accretion rates of swine expressing an insulin-like growth factor I transgene. Anim Biotechnol. 15: 33-45. Richt JA, Kasinathan P, Hamir AN, Castilla J, Sathiyaseelan T, Vargas F, Sathiyaseelan J, Wu H, Matsushita H, Koster J, Kato S, Ishida I, Soto C, Robl JM and Kuroiwa Y. (2007). Production of cattle lacking prion protein. Nat Biotechnol. 25: 132-8. Rogers CS, Stoltz DA, Meyerholz DK, Ostedgaard LS, Rokhlina T, Taft PJ, Rogan MP, Pezzulo AA, Karp PH, Itani OA, Kabel AC, Wohlford-Lenane CL, Davis GJ, Hanfland RA, Smith TL, Samuel M, Wax D, Murphy CN, Rieke A, Whitworth K, Uc A, Starner TD, Brogden KA, Shilyansky J, McCray PB Jr, Zabner J, Prather RS and Welsh MJ. (2008). Disruption of the CFTR gene produces a model of cystic fibrosis in newborn pigs. Science. 321: 1837-41. Saeki K, Matsumoto K, Kinoshita M, Suzuki I, Tasaka Y, Kano K, Taguchi Y, Mikami K, Hirabayashi M, Kashiwazaki N, Hosoi Y, Murata N and Iritani A. (2004). Functional expression of a Delta12 fatty acid desaturase gene from spinach in transgenic pigs. Proc Natl Acad Sci U S A. 101: 6361-6. Sar C, Mwenya B, Santoso B, Takaura K, Morikawa R, Isogai N, Asakura Y, Toride Y and Takahashi J. (2005). Effect of Escherichia coli wild type or its derivative with high nitrite reductase activity on in vitro ruminal methanogenesis and nitrate/nitrite reduction. J Anim Sci. 83: 644-52. Schnieke AE, Kind AJ, RitchieW A, Mycock K, Scott A R, Ritchie M, Wilmut I, Colman A and Campbell KHS (1997). Human factor IX transgenic sheep produced by transfer of nuclei from transfected fetal fibroblasts. Science 278: 2130-2133. Sharma BS, Mount J and Karrow NA. (2008). Functional characterization of a single nucleotide polymorphism in the 5' UTR region of the bovine toll-like receptor 4 gene. Dev Biol (Basel) 132: 331-6. Urnov FD, Miller JC, Lee YL, Beausejour CM, Rock JM, Augustus S, Jamieson AC, Porteus MH, Gregory PD and Holmes MC. (2005) Highly efficient endogenous human gene correction using designed zinc-finger nucleases. Nature 435, 646–651. Seite 32 7. BOKU-Symposium Tierernährung Schnieke: Gene technology in raising livestock Wall RJ, Powell AM, Paape MJ, Kerr DE, Bannerman DD, Pursel VG, Wells KD, Talbot N and Hawk HW. (2005). Genetically enhanced cows resist intramammary Staphylococcus aureus infection. Nat Biotechnol. 23: 445-51. Wheeler MB, Bleck GT and Donovan SM. (2001). Transgenic alteration of sow milk to improve piglet growth and health. Reprod Suppl. 58: 313-24. Whitelaw CB, Radcliffe PA, Ritchie WA, Carlisle A, Ellard FM, Pena RN, Rowe J, Clark AJ, King TJ and Mitrophanous KA (2004) Efficient generation of transgenic pigs using equine infectious anaemia virus (EIAV) derived vector. FEBS Lett 571: 233-236 Wise TG, Schafer DS, Lowenthal JW and Doran TJ. (2008). The use of RNAi and transgenics to develop viral disease resistant livestock. Dev Biol (Basel). 132: 377-82. Xia XG, Zhou H and Xu Z. (2006) Transgenic RNAi: Accelerating and expanding reverse genetics in mammals. Transgenic Res. 15: 271-5. Author's address Prof. Dr. Angelika Schnieke Biotechnologie der Nutztiere Technische Universität München Hochfeldweg, 1m 85350 Freising, Germany e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 33 Bürstmayr und Lemmens: Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel Hermann Bürstmayr und Marc Lemmens Interuniversitäres Department für Agrarbiotechnologie Tulln, Universität für Bodenkultur Wien Einleitung In der integrierten pflanzlichen Erzeugung jeder Kulturart spielt die Wahl der Sorte, neben Maßnahmen im Pflanzenbau und dem Pflanzenschutz, eine wichtige Rolle. Die Sorte ist das Ergebnis der Arbeit des Pflanzenzüchters. Meine Lieblingsdefinition ist folgende: „Pflanzenzüchtung ist die Wissenschaft, Kunst und wirtschaftliche Unternehmung, die genetische Konstitution der Pflanzen so zu verändern, dass diese an die Anforderungen des Menschen besser angepasst sind.“ (Diepenbrock et al. 2005). Pflanzliche Erzeugnisse nutzen wir entweder unmittelbar als Nahrungsmittel oder indirekt über den Umweg des Tieresmagens sowie auch für andere Zwecke wie z.B. als Baustoff, Industrierohstoff und die Energiegewinnung. Die für die Landwirtschaft benutzte Anbaufläche der Erde ist in 45 Jahren um nur ca. 20 % (von ca. 1 Mrd. ha 1961 auf ca. 1.2 Mrd. ha 2006) angestiegen (FAO Statistik: www.fao.org). Die Erschließung zusätzlicher Ackerflächen wäre wahrscheinlich nur mit hohen ökologischen Kosten möglich (Rodung von Regenwäldern). Der zunehmende Bedarf an landwirtschaftlichen Rohstoffen kann somit nur durch eine Steigerung der Flächenproduktivität erreicht werden. Eine der wichtigsten Weltwirtschaftspflanzen, nämlich der Weizen, erreichte im Zeitraum zwischen 1961 und 2007 weltweit Anbauflächen zwischen 205 bis 220 Mill. ha und ist somit flächenmäßig die größte Kulturart der Erde. Die Weizenerträge dagegen verdreifachten sich von ca. 1 t/ha in den 1960 er Jahren auf 2.7-2.9 t/ha in der letzten Dekade (FAO Statistik: www.fao.org). Selbstredend ist nur ein Teil der realisierten Ertragszunahmen der genetischen Verbesserung der Kulturarten zuzuschreiben, verbesserte Anbaumethoden und Pflanzenschutzmaßnahmen trugen auch ihren Teil bei. Insbesondere in entwickelten Ländern ist mit einer Verlangsamung der jährlichen Ertragsfortschritte zu rechnen, wobei allerdings der relative Anteil des Zuchtfortschrittes an den Ertragszuwächsen zunehmen dürfte. Pflanzenzüchtung ist eine alte und zugleich eine junge Tätigkeit des Menschen. Der Beginn der Züchtung ist zweifellos die Jungsteinzeit vor ca. 10000 Jahren, als die Menschen in einigen Regionen der Erde begannen, Ackerbau zu betreiben. Über 9900 Jahre erfolgte die Verbesserung und Anpassung von Sorten (der so genannten Landsorten) mehr oder weniger unbewusst von den Ackerbauern selber. Erst seit einem Jahrhundert kann man die Pflanzenzüchtung als geplante, wissenschaftlich fundierte Tätigkeit ansehen. Experimente, in denen die Leistungsfähigkeit von historischen und modernen Sorten verglichen wird, erlauben die Abschätzung des genetischen Seite 34 7. BOKU-Symposium Tierernährung Bürstmayr und Lemmens: Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel Fortschrittes. Zahlreiche derartige Experimente wurden durchgeführt, als Beispiel sei auf die Literatur verwiesen (z.B. Calderini und Slafer, 1999). Es ist zu betonen, dass die durch den Zuchtfortschritt erreichten Ertragszunahmen nicht auf einer Steigerung der Biomasseproduktion basieren, offenbar ist der Vorgang der Photosynthese weitgehend fixiert. Der Zuchtfortschritt beruht auf einer Verlagerung der Biomasse weg vom Stroh hin zum Korn. Als die drei klassischen Zuchtziele werden in der Regel: 1) Leistungsfähigkeit (=Ertrag), 2) Resistenz gegen biotischen und abiotische Schadfaktoren und 3) Qualität der Ernteprodukte angesehen. Während die Zuchtziele Leistung und Resistenz in erster Linie für den Pflanzenproduzenten relevant sind, ist die Qualität für den Konsumenten der pflanzlichen Produkte entscheidend. Bewusste züchterische Veränderung von Qualitätsmerkmalen, wie z.B. der Gehalt an wertbestimmenden Inhaltsstoffen, ist immer dann erfolgreich wenn 1) genetische Variabilität für das Zielmerkmal vorhanden ist und 2) geeignete Selektionsverfahren zur Verfügung stehen. Wenn auch die Zusammensetzung der Massen-Inhaltsstoffe der Ernteprodukte (z.B. Gehalt an Stärke, Protein, Faserstoffe, Fett) durch Züchtung in der Regel wenig verändert wurden, manche wertbestimmende Stoffe in der Konzentration sogar abnahmen, so erzeugen wir heute doch deutlich mehr Protein oder Stärke pro Hektar als mit den alten Sorten. Erfolgreiche Beispiele der Qualitätsverbesserung für die Verwendung als Futtermittel gibt es zahlreiche, insbesondere was die Wegzüchtung unerwünschter Inhaltstoffe betrifft, wie z.B. Bitterstoffe und Gifte. Als typische Beispiele seien der 00-Raps (erucasäurefrei und glucosinulatarm) und die Süßlupine (bitterstoffarm) genannt. Gerade in jüngerer Zeit wird das Thema der Konkurrenz der Verwendung von pflanzlichen Produkten für Nahrungsmittel, Futtermittel und Industrierohstoffe intensiv diskutiert. Sicher scheint, dass derzeit die globale Energieversorgung keinesfalls durch die Pflanzenproduktion lösbar ist. Als Beispiel sei auf eine Studie in den USA verwiesen: selbst wenn die gesamte USA-Ernte an Mais und Sojabohnen (das sind immerhin 35 Mill. ha Mais und 30 Mill. ha Soja) für Biosprit bzw. Biodiesel benutzt würde, ergäben sich nur mäßige Einsparungen im CO2 Ausstoß, und man würde maximal 12% des Benzinbedarfs und 6% des Dieselbedarfs damit abdecken können (Hill et al. 2006). Im Folgenden werden exemplarisch aus der Fülle möglicher Themen zwei Beispiele etwas näher ausgeführt. Beispiel 1: Mykotoxine im Getreide Mykotoxine Weizen Der Befall mit Pilzen der Gattung Fusarium kann neben direkten Ertragsverlusten vor allem eine Qualitätsverschlechterung durch die Kontamination der Ernteprodukte mit Mykotoxinen verursachen. Die häufigsten Fusariumarten auf Weizen in Österreich sind Fusarium graminearum, F. avenaceum und F. poae die häufigsten Mykotoxine Desoxynivalenol (=Vomitoxin, DON) und seine Derivate sowie das östrogen wirkende Zearalenon (Öhlinger 2004). Fusarium-Befall ist dann zu befürchten, wenn feuchte Witterung und das Vorhandensein von Pilzsporen während der Getreideblüte zusammenkommen. In Befallsjahren ist mit beträchtlichen Pilzgift-Kontaminationen in Getreide zu rechnen. Beispielsweise berichtet Öhlinger (2004) dass von 186 analysierten Proben aus Oberösterreich der Median im DON Gehalt im Jahr 2002 bei 0.14 ppm im Jahr 2003 bei 1.25 ppm lag. Zum Schutz der Verbraucher wurden für einige relevante Toxine Obergrenzen festgelegt, beispielsweise gelten seit 2006 in der Europäischen Union für Weizen für die menschliche Ernährung 1.25 ppm Desoxynivalenol und für Kleinkindernahrung 0.2 ppm als erlaubte Höchstmengen (Anonym 2005). Wären diese Grenzwerte schon 2003 gültig gewesen, wäre die Hälfte der Weizenpartien aus diesem Jahr in Oberösterreich nicht für den menschlichen Verzehr zulässig gewesen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 35 Bürstmayr und Lemmens: Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel Neben pflanzenbaulichen Maßnahmen (z.B. Bodenbearbeitung, Fruchtfolge) und dem chemischen Pflanzenschutz spielt die Sortenwahl eine wichtige Rolle in der integrierten Bekämpfung der Ährenfusariose und der damit einhergehenden Toxinbelastung (Buerstmayr et al. 2008). Fusariumresistenz war während der letzten Dekade weltweit ein wichtiges Thema der Züchtungsforschung. Inzwischen sind zahlreiche Resistenzquellen beschrieben und die Genetik der Resistenz wurde intensiv bearbeitet (Buerstmayr et al. 2008). Die Resistenz gegen Ährenfusariose ist eine quantitative Eigenschaft, das heißt bisher sind keine Sorten mit absolut wirksamer Resistenz bekannt. Für die praktische Züchtung sind heute sowohl Verfahren der Selektion im Zuchtgarten (phänotypische Selektion), meist mit künstlicher Inokulation in wiederholten Feldversuchen, als auch die Selektion unter Zuhilfenahme von molekularen Markern (genotypische Selektion) möglich. Die neuen Sorten sind daher in der Regel mit mindestens mittlerer bis guter quantitativer Fusariumresistenz ausgestattet. Mykotoxine Mais Mais ist eine der weltweit bedeutendsten Nutzpflanzen. Auch in Österreich wird Mais auf einer Fläche von ca. 280.000 ha angebaut. Das entspricht rund 20% der gesamten Ackerfläche. Eine wirtschaftlich bedeutende Erkrankung ist die Kolbenfusariose. Obwohl das Ausmaß des Befalls von Maisfeldern mit Fusarium von Jahr zu Jahr schwankt und stark witterungsabhängig ist, führt Kolbenfusariose jährlich zu Qualitätsminderung und Mykotoxinverseuchung von Futter- und Nahrungsmitteln. Die typischen Fusariumarten auf Mais sind F. subglutinans, F. graminearum sowie F. proliferatum, und F. poae. Auf Mais werden häufig folgende Toxine gefunden: Moniliformin, Zearalenon, Desoxynivalenol, sowie Fumonisine, Nivalenol und Beauvericin (Lew 1993, Öhlinger 2004). Bislang wurde kein wirksames Pflanzenschutzmittel gegen Fusarium in Mais entwickelt, und auch deren Applikation auf Maisfeldern stellt noch immer eine Hürde dar. Deshalb ist die Züchtung neuer resistenter Sorten zur Ertrags- und Qualitätssicherung ein wichtiger Schritt in der Bekämpfung der Kolbenfusariose. Kolbenfusarioseresistenz hat zurzeit eine hohe Priorität im den Zuchtprogramm der Maiszüchter. An unserem Institut werden für die amtliche Sortenzulassung, aber auch im Rahmen von Auftragsforschung für Privatfirmen, jährlich Resistenz-Untersuchungen durchgeführt. Zur Erstellung eines wirksamen Resistenzzüchtungsprogrammes und für die Entwicklung von molekularen Markern für Kolbenfusarioseresistenz muss das vorhandene genetische Material im Detail auf seine Resistenzeigenschaften untersucht werden. Fusarienpilze überwintern meist auf Pflanzenrückständen (Stängel, Kolben, sonstige Bruchstücke) auf der Bodenoberfläche. Von dort breitet sich das infektiöse Myzel aus und die gebildeten Askosporen (= sexuelle Sporen) oder Makrokonidien (= asexuelle Sporen) können durch Wind, Regentropfen oder andere Überträger ( z.B. Insekten) auf die Maiskolben gelangen (Sutton 1981). Für das Eindringen des Pilzes in die Maiskolben gibt es zwei Möglichkeiten: 1) das Auskeimen der Sporen direkt auf den Seidenfäden gefolgt von Wachstum des Myzels durch den Seidenkanal bis zur Spindel, oder 2) das direkte Eindringen in den Kolben durch Wunden (z.B. durch Maiszünsler oder nach Hagel- oder Vogelschäden). F. graminearum dringt meist über den Seidenkanal in den Kolben ein, F. subglutinans hingegen benutzt dazu Wunden. Die Resistenz von Mais gegenüber Fusarium kann in zwei Hauptkomponenten unterteilt werden (Snijders, 1994). Typ I Resistenz (Seidenresistenz) und Typ II Resistenz (Körnerresistenz). Seidenresistenz ist die Resistenz gegen das Eindringen des Pathogens über die Seiden und den Seidenkanal. Seidenresistenz kann in zwei weitere Komponenten aufgeteilt werden: 1) die Eindringungsresistenz, die im Seidenkanal lokalisiert ist, und 2) die Ausbreitungsresistenz, die aktiv ist im Bereich der Spindel und der Körner. Körnerresistenz ist die Resistenz gegen das Ausbreiten des Erregers im Wirtsgewebe nach Verletzung der Körner. Seite 36 7. BOKU-Symposium Tierernährung Bürstmayr und Lemmens: Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel Da die Kolbenfusariose unter natürlichen Bedingungen unregelmäßig auftritt, ist für Versuchszwecke eine künstliche Inokulation der Pflanzen von Vorteil. Durch den Einsatz spezifischer Inokulationstechniken können die unterschiedlichen Resistenzkomponenten untersucht werden und so die einzelnen Maishybriden auf die verschiedenen Resistenzfaktoren überprüft werden (Reid and Hamilton 1996). In Resistenzprüfungen mit kommerziellen Maishybriden und -Linien wiesen die untersuchten Genotypen eine hohe Variationsbreite an Resistenz für alle drei genannten Komponenten auf. Dabei wurden keine Maissorten gefunden, die absolute Resistenz zeigten. Der kontinuierliche Verlauf der Resistenzdaten lässt auf ein quantitatives Merkmal schließen. Sehr empfindliche Genotypen können identifiziert und für den praktischen Anbau eliminiert werden. Das Risiko für eine Mykotoxinkontamination wird geringer, wenn die Kolbenfusarioseresistenz der Maissorte steigt. Die oben erwähnten drei Resistenzkomponenten sind nicht gekoppelt. Da im Normalfall jedoch eine natürliche Infektion am Feld entweder vorzugsweise über den Seidenkanal oder überwiegend durch bereits vorhandene Verletzungen stattfindet, müssen beide Infektionswege berücksichtigt werden, um aussagekräftige Daten zur Kolbenfusarioseresistenz einer Maissorte zu erhalten. Wie erwähnt bieten Wunden am Maiskolben offene Eintrittspforten für Korninfektion mit F. subglutinans, aber auch F. moniliforme, und F. proliferatum. Solche Wunden können durch Hagelschlag oder auch Maiszünslerfraß entstehen. Eine wirksame Bekämpfung des Zünslers ist daher auch eine zielführende Maßnahme dem Fusariumbefall und der Toxinbelastung vorzubeugen. Es konnte beispielsweise gezeigt werden, dass zünslerresistenter Bt-Mais deutlich weniger Fusariumbefall aufwies als Vergleichssorten ohne das Bt-Gen (Munkvold et al. 1997). Beispiel 2: Wertbestimmende Eigenschaften: Proteingehalt und Aminosäurenzusammensetzung Proteingehalt Weizen Der Proteingehalt von Weizen kann üblicherweise Werte zwischen 10 % bis 15 % annehmen. Dieses Qualitätsmerkmal folgt einer quantitativen Ausprägung und wird neben dem Genotyp stark von den Umweltbedingungen moduliert. Die Vererbung des Proteingehaltes ist ebenfalls quantitativ und leider häufig negativ mit der Ertragsleistung korreliert. Eine Herkunft des wilden Emmerweizens (Triticum dicoccoides) zeigte einen um ca. 2% erhöhten Proteingehalt, welcher monogen vererbt wird. Das zugrundeliegende Gen konnte in einer aufwändigen Arbeit kloniert werden: das NAC Gen verfrüht die Abreife und der erhöhte Proteingehalt könnte in erster Linie pleiotrop bedingt sein (Uauy et al. 2006). Die Selektion von Sorten mit höchstem Ertrag und hohem Eiweißgehalt ist daher aufwändig. Proteingehalt Sojabohne In Mitteleuropa, sicherlich einer Grenzlage für die Sojabohne, kommen ausschließlich frühreife Sojasorten in Frage. Soja ist weltweit in erster Linie eine Ölpflanze und erst in zweiter Linie eine Eiweißpflanze. In einer Versuchsserie von 1993 bis 1998 fanden Vollmann et al. (2000) Schwankungen im Proteingehalt von 300 mg/kg bis 450 mg/kg. Während umweltbedingte Schwankungen im Proteingehalt sehr groß waren war die Genotyp x Umwelt Interaktion relativ gering, sodass eine züchterische Verbesserung des Eiweißgehaltes aussichtsreich ist. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 37 Bürstmayr und Lemmens: Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel Aminosäurezusammensetzung Mais Die Optimierung der Zusammensetzung an essentiellen Aminosäuren, insbes. Lysin und Tryptophan in Getreide ist ein lohnendes Zuchtziel. In den meisten Arten ist allerdings wenig genetische Variation für dieses Merkmal vorhanden. Eine Ausnahme bildet der Mais. Mertz et al. (1964, 1997) entdeckten eine Mutante mit geringer Menge an Endospermprotein (Zein) welches arm an Lysin ist und erhöhtem Anteil an anderen Proteinen, die sogenannte opaque-2 Mutation. Die opaque-2 Linien hatten dadurch einen deutlich höheren Lysinanteil. Trotz deutlich verbesserter ernährungsphysiologischer Eigenschaften hatten die frühen QPM (quality protein maize) Sorten ungünstige agronomische Eigenschaften und waren daher in der Praxis nicht erfolgreich. Erst nach jahrelangen züchterischen Bemühungen wurden neue Zuchtlinien mit deutlich verbesserten Korneigenschaften und Ertragsleistung selektiert, welche inzwischen in zahlreichen Ländern Eingang in die Praxis gefunden haben, zum Beispiel in Afrika; das internationale Mais und Weizenforschungszentrum CIMMYT erhielt dafür 2001 den World Food Price (www.cimmyt.org). Die Veränderung des Lysingehaltens in QPM ist mit einer geringeren Menge an α- und β-Zein und einer Erhöhung an γ-Zein assoziiert. Man kann durch Veränderung der Genexpression diesen Zustand auch gentechnisch herstellen, interessanterweise zeigten die so gentechnisch hergestellten Pflanzen analoge Eigenschaften wie die opaque-2 Mutanten (Review von Ufaz and Galili, 2008). Da in anderen Getreidearten kaum genetische Variation für erhöhten Lysingehalt vorhanden ist, scheint die Nutzung der Gentechnik als möglicher Ansatz. Molekulargenetische Forschungsarbeiten wurden unternommen um 1) den Lysinmetabolismus in der Pflanze zu verstehen bzw. zu verändern und 2) die Expression von Proteinen mit hohem Lysinanteil zu steigern (Ufaz and Galili, 2008). Eingriffe in die Regulation der Lysinsynthese bewirkten erhöhten Lysingehalt in Modellpflanzen und Kulturpflanzen. Ein wichtiges Enzym in der Lysinsynthese ist die Dihydrodipicolinat –Synthase (DHDPS). Dieses Enzym wird üblicherweise in Pflanzen durch steigende Lysinkonzentration in einer Feedback Reaktion gehemmt (Galili, 2002). In Mikroorganismen fand man Lysin-feedback insensitive Varianten von DHDPS. Der Einbau eines derartigen gegen Lysin-Feedback insensitiven DHDPS kombiniert mit einem embryo-spezifischen Promotor führte zur Hoch-Lysin Maislinie LY038 (Dizigan et al. 2007), diese wurde schon in mehreren Ländern zugelassen, unter anderem den USA, Mexiko und Kanada, die Zulassung in der EU ist beantragt. In ähnlicher Weise wird an gentechnischen Ansätzen zur Steigerung des Gehaltes an Tryptophan bzw. Methionin gearbeitet (Ufaz and Galili, 2008). Zusammenfassung Die Entwicklung von Sorten mit verbesserten Eigenschaften in der Fütterung ist eines der wichtigen Zuchtziele, kann aber nicht losgelöst von den anderen Zuchtzielen betrachtet werden. Je nach Kulturart und Verwendungszweck sind unterschiedliche Ansätze möglich. Neben der sehr erfolgreichen klassischen Züchtung ist zu erwarten, dass in Zukunft durch ein besseres Verstehen der Molekularbiologie der Pflanzen neue Qualitätsverbesserungen realistisch erscheinen. Seite 38 7. BOKU-Symposium Tierernährung Bürstmayr und Lemmens: Beitrag der Pflanzenzüchtung zur Erzeugung hochwertiger Futtermittel Literatur Anonym (2005) Commission Regulation (EC) No 856/2005 of 6 June 2005 amending regulation (EC) no 466/2001 as regards Fusarium toxins. Buerstmayr H., Ban T. and Anderson J.A. (2008) QTL mapping and marker assisted selection for Fusarium head blight resistance in wheat – a review. Plant Breeding, in press. Calderini, D.F. and Slafer G.A. (1999) Has yield stability changed with genetic improvement of wheat yield? Euphytica 107, 5159. Diepenbrock W., Ellmer F. und Léon J. (2005) Ackerbau, Pflanzenbau und Pflanzenzüchtung, 1. Aufl., UTB 2629, Verlag E. Ulmer, Stuttgart. Dizigan M.A., Kelly R.A., Voyles D.A., Luethy M.H., Malvar T.M., and Malloy K.P. (2007) High lysine maize compositions and event LY038 maize plants. United States Patent No. 7157281; World patent WO/2005/061720 (www.wipo.int/pctdb/en/wo.jsp?wo=2005061720). Galili G. (2002) New insights into the regulation and functional significance of lysine metabolism in plants. Ann. Rev. Plant Biol. 7, 153–156. Hill J., Nelson E., Tilman D., Polasky S., and Tiffany D. (2006) Environmental, economic, and energetic costs and benefits of biodiesel and ethanol biofuels. Proc. Natl. Acad. Sci. 103, 11206-11210. Lemmens M. (1999) Anwendung künstlicher Inokulationsmethoden zur Kolbenfusariose- Resistenzbestimmung bei Mais. Bericht über die 50. Arbeitstagung der Vereinigung österreichischer Pflanzenzüchter, BAL Gumpenstein, 23.-25. November 1999, pp 5561. Lew H. (1993) Die aktuelle Mykotoxinsituation in der heimischen Landwirtschaft. Veröff. Bundesanstalt für Agrarbiologie, Linz. 21, 5-26. Mertz E.T. (1997) Thirty years of opaque2 maize. In: B.A. Larkins, E.T. Mertz (eds.), Quality Protein Maize: 1964-1994. Purdue University Press, West Lafayette, IN, pp 25–37. Mertz E.T., Bates L.S., Nelson O.E. (1964) Mutant gene that changes protein composition and increases lysine content of maize endosperm. Science 145: 279–280. Munkvold, G.P., Hellmich R.L. and Showers W.B. (1997) Reduced Fusarium ear rot and symptomless infection in kernels of maize genetically engineered for european corn borer resistance. Phytopathology 87, 1071-1077. Öhlinger R. (2004) Zur Mykotoxinsituation bei Getreide und Futtermitteln in Österreich. 26. Mykotoxin-Workshop, 17. - 19. Mai 2004, Herrsching am Ammersee, Bayerische Landesanstalt für Landwirtschaft (LfL), p. 25. Reid L.M. and Hamilton R.I. (1996) Screening maize for resistance to Gibberella ear rot. Technical Bulletin 1996-5E. Research Branch Agriculture and Agrifood Canada. Eastern Cereal and Oilseed Research Centre Ottawa, Ontario. Snijders C.H.A. (1994) Breeding for resistance to Fusarium in wheat and maize. In “Mycotoxins in grain. Compounds other than Aflatoxin”. Edited by Miller J. and Trendholm H. Eagan Press St. Paul, Minnesota, USA. Pp 37-58. Sutton J.C. (1983) Epidemiology of wheat head blight and maize ear rot caused by Fusarium graminearum. Can. J. Plant Pathol. 4, 195-209. Uauy C., Distelfeld A., Fahima T., Blechl A., and Dubcovsky J. (2006) A NAC gene regulating senescence improves grain protein, zinc, and iron content in wheat. Science 314, 1298-1301. Ufaz S. and Galili G. (2008) Improving the content of essential amino acids in crop plants: goals and opportunities. Plant Physiology 147, 954–961. Vollmann J., N Fritz C.N., Wagentristl H., and Ruckenbauer P. (2000) Environmental and genetic variation of soybean seed protein content under Central European growing conditions. J. Sci. Food Agric. 80, 1300-1306. Autorenanschrift Universität für Bodenkultur Wien Department Interuniversitäres Forschungsinstitut für Agrarbiotechnologie Tulln (IFA-Tulln) Institut für Biotechnologie in der Pflanzenproduktion Konrad Lorenz Str. 20, A-3430 Tulln e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 39 Schwarz: Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung Frieder Jörg Schwarz Department für Tierwissenschaften, Bereich Tierernährung, Wissenschaftszentrum Weihenstephan, TUM Bedeutung der Aquakultur Fisch als Nahrungsmittel des Menschen ist seit Urzeiten fester Bestandteil des Speisezettels. Grundlage ist die Fangfischerei im Meer und im Süßwasser. Allerdings hat bereits im Mittelalter mit der klösterlichen Karpfenteichwirtschaft – was Europa betrifft – die gezielte Fischproduktion begonnen. Aquakultur (Bereich Fisch) definiert sich unter Einbindung aller Erzeugungsstufen wie Laichfischhaltung, Erzeugung der Fischeier und Fischbrut, Setzlings- und Abwachsphase bis hin zum verzehrsfähigen Fisch. In Tab. 1 sind einige neuere Mengenangaben zur weltweiten Aquakultur und Fangfischerei (FAO, 2006, nach Hilge, 2008) zusammengestellt. Zunächst ist festzuhalten, dass zur Aquakultur neben dem Fisch auch Weichtiere (Austern, Muscheln), Krebse und Algen gehören. Algen finden überwiegend Verwendung in Kosmetik, Pharmazie und Nahrungsmittelindustrie (Hilge, 2008). An der gesamten Produktionsmenge für den menschlichen Verzehr nehmen Fische etwa knapp zwei Drittel, Mollusken und Krebse immerhin etwas über ein Drittel ein. Die Produktion findet überwiegend im Süßwasser (knapp 60 %) und zu etwa einem Drittel im marinen Bereich statt. Mit der Aquakultur wird weltweit bereits heute eine nahezu ähnliche große Menge an Nahrungsmitteln bereitgestellt, wie sie derzeit mit der Fangfischerei erreicht wird (siehe Tab. 1, Hilge, 2008). Die Fangfischerei, die hinsichtlich ihres Gesamtertrages seit Jahren stagniert (FAO, 2006), beinhaltet nämlich auch einen beachtlichen Anteil, der nicht dem menschlichen Verzehr sondern u.a. unmittelbar dem Futtermittelbereich zugeführt wird. Voraussetzung für die Bereitstellung der hohen Produktionsmengen aus dem Bereich Aquakultur waren hohe Wachstumsraten – weltweit gesehen – von über 10 % (1985-1995), etwa 7 % (1995-2005) und derzeit etwa noch 4-6 % (Hilge, 2008). Allerdings fanden dieses Wachstum und die Produktionsausweitung vor allem in den asiatischen Ländern statt, allen voran in China, das allein etwa zwei Drittel der Gesamtproduktion für sich reklamiert (siehe Tab. 2, FAO 2006, nach Hilge, 2008). So finden sich unter den zehn von der Produktionsmenge bedeutendsten Ländern außerasiatisch nur Chile (Platz 7) und Norwegen (Platz 9). Allerdings ist der Produktionswert etwas differenziert zu sehen, da in Ländern wie Chile, Norwegen aber auch Japan Fische des „Hochpreissegments“ erzeugt werden. Insgesamt ist aber festzustellen, dass die Ausweitung der Aquakultur in Europa und auch in den USA eher sehr begrenzt zu sehen ist. Seite 40 7. BOKU-Symposium Tierernährung Schwarz: Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung Tab. 1: Aquakultur und Fangfischerei weltweit (FAO, 2006, nach Hilge, 2008) (Mio. t) Aquakultur Fisch Weichtiere (Austern, Muscheln) Krebse (Algen Für menschlichen Verzehr Fangfischerei Süßwasser Marin Abzügl. nicht für menschlichen Verzehr vorgesehen (geschätzt) für menschlichen Verzehr Mengenangaben (2006) 32,7 13,2 4,6 15,1) ca. 51,5 Aquakultur Süßwasser Brackwasser Marin (Mio. t) 29,8 4,1 17,6 10,1 81,9 ca. 33,0 ca. 59,0 Tab. 2: Rangfolge der Länder mit Aquakultur, deren Produktionsmengen und ihr Produktionswert (FAO, 2006, nach Hilge, 2008) Menge (Mio. t) (1) (2) (3) (4) (5) (6) China Indien Vietnam Thailand Indonesien Bangladesch (7) Chile (8) Japan (9) Norwegen (10) Philippinen (11) Ägypten (15) USA (17) Spanien 34,43 3,12 1,66 1,39 1,29 0,89 0,80 0,73 0,71 0,62 0,60 0,47 0,29 Wert (Mrd US $) 38,42 3,43 3,32 2,22 2,25 1,36 4,43 3,10 2,72 0,98 0,95 0,90 0,36 Tab. 3 enthält in Anlehnung an den FAO-Bericht (2006) eine Zusammenstellung der an Produktionsmengen wichtigsten Fischarten. Überraschend ist, dass die Gruppe der Cypriniden einen Anteil von nahezu zwei Drittel der gesamten erzeugten Fischmenge einnimmt. Von Bedeutung sind weiterhin die Buntbarsche (Tilapien, vor allem Oreochromis niloticus), die gerade in den letzten Jahren einen rasanten Aufschwung erreichten. Hervorzuheben sind auch der Atlantische Lachs (Salmo salar), die Forelle (Oncorhynchus mykiss) oder der überwiegend in den USA erzeugte Katzenwels (Ictalurus punctatus). Allerdings nimmt die Diversität der in der Aquakultur genutzten Fischarten beständig nahezu sprunghaft zu. Überdies sind gerade Fische häufig auch regional in ihrer Bedeutung zu sehen, so z.B. für den Mittelmeerraum die Goldbrasse (Sparus aurata) und der Wolfsbarsch (Dicentrachus 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 41 Schwarz: Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung labrax), in Japan der Gelbschwanzfisch (Seriola quinqueradiata) oder auf den Philippinen und in Indonesien der Milchfisch (Chanos chanos). Dies wird durch Produktionsbedingungen, aber vor allem auch durch Verzehrsgewohnheiten beeinflusst. Gerade Fisch ist in der Vermarktung und Zubereitung bis zum Teller außerordentlich unterschiedlich zu sehen. Als Ausnahmen sind dabei der Atlantische Lachs oder die Forelle anzusprechen, für die quasi weltweit eine „Produkt- bzw. Verarbeitungsidentität“ besteht. Insgesamt errechnet sich ein globaler pro Kopf Verbrauch an Aqua(Fisch)produkten von 16,7 kg (Hilge, 2008). Dabei ist auch in Ländern, die traditionell nicht zu einem hohen Fischverzehr neigen, wie z.B. Deutschland, der pro Kopf Verzehr auf 16,4 kg im Jahr 2007 angestiegen. Tab. 3: Fischarten in der Aquakultur und ihre Produktionsmengen (1998 versus 2006) (FAO, 2006) 1998 (Mio. t) Cypriniden, z.B. Silberkarpfen Graskarpfen Karpfen Marmorkarpfen Karausche Ind. Karpfen Chichliden, z.B. Tilapia Salmoniden, z.B. Atlant. Lachs Forelle Milchfisch Katzenwels 2006 (Mio. t) 3,33 2,99 2,38 1,59 1,04 1,72 4,36 4,01 3,17 2,39 2,10 3,02 0,77 1,99 0,69 0,44 0,38 0,26 1,41 0,55 0,59 0,43 Ressource Wasser und Rationsgestaltung Wasser ist die natürliche Voraussetzung für Aquakultur, wobei die Nutzung überwiegend – wie schon besprochen (siehe Tab. 1) – im Süßwasserbereich erfolgt. Allerdings hat die küstennahe marine Aquakultur – wie das Beispiel des Atlantischen Lachses zeigt – gerade in den beiden vergangenen Jahrzehnten erheblich zum Ausbau beigetragen. Trotzdem ist Wasser das erstlimitierende Produktionsmittel. Überdies ist der Erfolg der Aquakultur bzw. eines Produktionsverfahrens außerordentlich abhängig von den Wasserbedingungen wie z.B. Wassertemperatur, Sauerstoffgehalt, „Belastungsfaktoren“ etc. Damit hat die „Umwelt“ im Unterschied zur Landtierproduktion einen erheblich höheren Einfluß auf die tierspezifische Leistung (Schwarz, 1998). Weiterhin ist zu berücksichtigen, dass Wasser ein extrem sensibles Milieu hinsichtlich der Verschmutzung und des Nährstoffeintrages über Futter bzw. Kotausscheidungen ist. Dies stellt höchste Anforderungen an die Futterqualität (Verdaulichkeit, bedarfsorientierte Nährstoffversorgung ...). Somit ist das vorrangige Ziel eines möglichst geringen Futteraufwandes pro kg Zuwachs gerade in der Aquakultur verständlich. Die intensive Salmonidenproduktion (Forelle, Lachs) erreicht z.B. einen Futterquotienten von deutlich < 1 kg Futteraufwand pro kg Zuwachs. Dies ist jedoch nur zum geringeren Teil auf fischspezifische Seite 42 7. BOKU-Symposium Tierernährung Schwarz: Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung Besonderheiten zurückzuführen. Unter optimalen Wachstumsbedingungen ist zwar der relative Anteil des energetischen Erhaltungsbedarfs am Gesamtbedarf bei Fischen niedriger als bei Landtieren. Doch zeigen einige Daten, dass die partielle Verwertung der umsetzbaren Energie für das Wachstum bzw. den Fett- und Proteinansatz vergleichbar mit den Messwerten von Landtieren ist (siehe Tab. 4). Tab. 4: Energieverwertung beim Karpfen (Wassertemperatur: 20-23° C) (Kirchgeßner et al. 1984, Meyer-Burgdorff et al. 1989, Schwarz und Kirchgeßner, 1995) Erhaltungsbedarf: ~ 42 kJ DE/kg0,75/~ 49-53 kg ME/kg0,8 Energieretention: ~ 7,5-8,5 MJ/kg Ansatz bis ~ 11,0-13,5 MJ/kg Ansatz (Anteil Erhaltungsbedarf am Gesamtbedarf: ~ 25-30 %) Partielle Verwertung der umsetzbaren Energie (Teilwirkungsgrad) kg = 0,6-0,7 (0,8) (kp = 0,46/0,56) (kf = 0,72/0,89) Der wesentliche Ansatz hinsichtlich eines geringen Futteraufwandes für den Zuwachs liegt in der Futterqualität bzw. dessen Nährstoffzusammensetzung. Fischrationen (Alleinfutter) sind – unter Berücksichtigung von „Orientierungswerten“ – rohproteinreich, können außerordentlich hoch im Fettgehalt sein und werden sich je nach Fischspezies und dessen Ausstattung mit Verdauungsenzymen im Kohlenhydrat(Stärke)gehalt differenzieren (siehe Tab. 5 und Schwarz, 1998). Tab. 5: Nährstoffzusammensetzung von Fischrationen Anteile in % Protein Fett Kohlenhydrate Asche z.B. Salmoniden („Kaltwasserfische“ .../“Raubfische ...“) Marin/Süßwasser z.B. Cypriniden („Warmwasserfische“ ...) Marin/Süßwasser 35-45 bis 30 bis 15 bis 10 35-45 bis 15 bis 30 bis 10 Mit diesen hier nur in den Eckpunkten dargestellten Anforderungen können z.B. durchaus die Nährstoffgehalte im Ganzkörper eines Fisches, wie sie einem Raubfisch beim Verzehr seiner Beute zur Verfügung stehen, verglichen werden. Auch die Nährstoffgehalte bestimmter Naturnahrung (z.B. Zooplankton des Karpfenteiches zur Karpfenernährung) sind durch hohe Anteile vor allem an Rohprotein und auch an Rohfett gekennzeichnet (siehe Tab. 6). Aufgabe der Tierernährung ist – und 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 43 Schwarz: Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung Tab. 6: Nährstoffgehalte von Zooplankton (Karpfenernährung) (Schwarz et al. 2003) % d. T Rohprotein Rohfett SFA MUFA PUFA Rohasche 65 (53-72) 8 (5-12) 16 (11-24) % der Gesamtfettsäuren 38,7 19,1 42,2 hier hat die wissenschaftliche Arbeit in den beiden vergangenen Jahrzehnten außerordentliche Fortschritte gezeigt – fischspezifisch und auch umweltabhängig die bedarfsoptimierten Grenzen in der Energie- und Nährstoffzufuhr aufzuzeigen (siehe u.a. NRC, 1993, Lovell, 1998, Schwarz, 1998, Halver und Hardy, 2002, Webster und Lim, 2002). Futterbereitstellung Die Futterbereitstellung bzw. deren Einzelkomponenten für die Aquakultur differenzieren sich zunächst sehr deutlich in Abhängigkeit der jeweiligen Intensitätsstufe der Fischproduktion. Eine semi-intensive Teichwirtschaft, wie sie überwiegend für Cypriniden, evtl. im Einzelfall noch für Tilapien oder auch für den Milchfisch vorzufinden ist, berücksichtigt zunächst einen Versorgungsanteil an rohproteinreicher Naturnahrung. Damit stehen teichwirtschaftliche Maßnahmen zur Verbesserung des Nahrungsangebots und dessen Ausnutzung, z.B. über Polykultur, im Vordergrund des Interesses (Van der Zijpp et al. 2007). Eine Ergänzungsfütterung wird in der Regel über kohlenhydratreiche Futtermittel – häufig auch Nebenprodukte der Nahrungsmittelverarbeitung – kostengünstigst vorgenommen. Umweltrelevante Gründe, die Verbesserung der Produktqualität (Schwarz et al. 2006), vor allem aber Maßnahmen der Ertragssteigerung pro ha Teich(Wasser)fläche erfordern jedoch den gezielten Einsatz rohprotein- und energiereicherer Futtermittel bzw. pelletierter Mischfuttermittel. Damit erhöhen sich deutlich die Anforderungen an die Qualität der Einzelkomponenten bei gleichzeitiger Einbindung tierischer Futtermittel sowie auch an eine verbesserte Verarbeitungstechnologie. Eine intensive Aquakultur, als deren Beispiele die Salmonidenproduktion (Forelle, Atlantischer Lachs), aber auch weitere verschiedene marine Fischarten angeführt werden können, basiert im wesentlichen auf rohproteinreichen, energie(fett)reichen Alleinfuttermitteln. Die wichtigste, teilweise sogar ausschließliche Eiweißkomponente ist das Fischmehl. Damit wird die weltweite Fischmehlproduktion überwiegend in der Aquakultur eingesetzt. Fischmehl hat ebenso wie andere Futtermittel eine dramatische Kostensteigerung erfahren. Eine Erhöhung des weltweiten Angebots ist wegen der stagnierenden Fangfischerei (siehe Abschnitt 1) nicht denkbar. Mit Ausweitung bzw. Intensivierung der Aquakultur tritt eine verstärkte Wettbewerbssituation zu den noch verbleibenden Fischmehlinteressenten ein. Zahlreiche Forschungsarbeiten konzentrierten sich daher in den vergangenen Jahren auf den Austausch von Fischmehl gegen pflanzliche Eiweißfuttermittel (z.B. Sojaprotein, Raps-, Sonnenblumen-, Erdnussschrote, Lupinen, Erbsen, Mais-, Weizenkleber). Die Einbindung ist jedoch derzeit nur begrenzt erfolgreich, da sich vor allem antinutritive Inhaltsstoffe – als deren Folge z.B. eine Hypersensitivität des Darmepithels erkennbar ist -, Kohlenhydratanteil, Seite 44 7. BOKU-Symposium Tierernährung Schwarz: Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung Mineralstoffverfügbarkeit, Aminosäurenmuster und Verdaulichkeit nachteilig auf Gesundheit, Leistungsmerkmale und Wasserparameter auswirken können. Eine intensive technologische und damit kostenintensive Aufbereitung der pflanzlichen Eiweißträger (z.B. Sojaproteinisolat), eine Rationsergänzung mit synthetischen Aminosäuren, evtl. eine Verwendung verschiedener Eiweißkomponenten bieten Verbesserungsmöglichkeiten, an denen gearbeitet wird. Weiterhin spielt Fischöl eine herausragende Rolle in der Energiebereitstellung, vor allem jedoch als Lieferant der fischspezifischen, langkettigen, mehrfach ungesättigten Fettsäuren (≥ C20 n-3 Fettsäuren). Die weltweite Fischölproduktion wird schon derzeit fast ausschließlich in der Aquakultur eingesetzt. Eine weitere Intensivierung und zunehmendes Wachstum überfordern daher eindeutig das derzeitige Angebot. Gleichzeitig weisen bestimmte Fischölchargen (z.B. die der Nordsee) überhöhte Dioxingehalte und auch hohe Gehalte an PCB und PBDE auf, die eine kostenintensive Dekontamination bzw. nur einen begrenzten Einsatz bedingen. Ein Austausch von Fischöl gegen pflanzliche Öle ist notwendig, wobei vor allem Raps-, Palm-, Lein- und Olivenöl bzw. Gemische davon neben Soja- und Sonnenblumenöl erfolgreich eingesetzt werden. Neuere Versuche zeigen vor allem bei Forellen einen völligen Ersatz von Fischöl ohne Leistungseinbußen, ohne nachteiligen Effekte auf die Gesundheit der Fische oder der organoleptischen Eigenschaften bei der Verkostung, jedoch mit einer deutlichen Minderung der langkettigen, mehrfach ungesättigten Fettsäuren (Corraze et al. 2008). Ähnliche Arbeiten liegen für den Atlantischen Lachs vor, wobei jedoch der Fettstoffwechsel durchaus beeinflusst wird (Jordal et al. 2007, Karalazos et al. 2007). Entscheidend in dieser Diskussion ist aber, welche Bedeutung dem Image von Fisch als Lieferant der langkettigen, mehrfach ungesättigten Fettsäuren für die menschliche Ernährung zukommt. Letztlich hat auch die Futtermitteltechnologie einen herausragenden Stellenwert in der Herstellung von Fischfutter. Vor allem für den Kohlenhydrat(Stärke)einsatz und das Einfügen von Fett ist ein Extrudieren unumgänglich. Hilfsstoffe und Pelletierverfahren beeinflussen die Pelletstabilität sowohl hinsichtlich des Abriebs als auch hinsichtlich des Zerfalls im Wasser, der Schwimmfähigkeit bis hin zur Konsistenz des Kotfadens. Ausblick Ein weiteres Wachstum der Aquakultur wird im wesentlichen durch eine Intensivierung bestehender Produktionsverfahren erreicht werden. Allerdings wird auch die Diversität der Fischspezies, die für die Aquakultur genutzt werden, weiter zunehmen, so dass auch zusätzliche Ressourcen eingebracht werden können. Fischmehl und Fischöl müssen notwendigerweise verstärkt gegen pflanzliche Komponenten (evtl. auch gegen Landtierprodukte) ausgetauscht werden. Allerdings setzt dies hinsichtlich der Eiweißkomponenten eine intensive technologische Bearbeitung voraus. Die Rationsoptimierung erfordert genaue Kenntnisse über den Energie- und Nährstoffbedarf. Die Anwendung neuester Futtermitteltechnologie hat Priorität. Alle Maßnahmen haben sich jedoch den Richtlinien einer umweltfreundlichen, wasserentlastenden Produktion mit Ziel eines gesunden, für die Humanernährung wertvollen, wohlschmeckenden Nahrungsmittels unterzuordnen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 45 Schwarz: Möglichkeiten und Grenzen der Aquakultur bei der Erzeugung hochwertiger Nahrung aus Sicht der Tierernährung Literatur Corraze G., Cardinal M., Larroquet L., Roy V., Choubert G., Fontagne S. and Kaushik S. (2008): Flesh quality of rainbow trout fed diets with graded replacement of fish meal and fish oil by plant ingredients. XIII ISFNF, Book of Abstracts, Florianopolis, Brazil, p. 67. FAO (2006): The state of world fisheries and aquaculture 2006. Halver J.E. and Hardy R.E. (2002): Fish nutrition. 3rd ed., Academic Press, Elsevier Science, San Diego, USA. Hilge V. (2008): Fakten, Produktion und Bedeutung der Aquakultur für den Weltfischertrag. Agrarspektrum (im Druck). Jordal, A.-E.O., Lie, Ø. and Torstensen, B.E. (2007): Complete replacement of dietary fish oil with a vegetable oil blend affect liver lipid and plasma lipoprotein levels in Atlantic salmon (Salmo salar L.). Aquacult. Nutr. 13, 114-130. Karalazos, V., Bendiksen, E.A., Dick, J.R and Bell, J.G. (2007): Effects of dietary protein, and fat level and rapeseed oil on growth and tissue fatty acid composition and metabolism in Atlantic salmon (Salmo salar L.) reared at low water temperatures. Aquacult. Nutr. 13, 256-265. Kirchgeßner M., Schwarz F.J. und Zeitler H. (1984): Ansatz und Verwertung von Energie bei Karpfen (Cyprinus carpio L.) mit unterschiedlicher Protein- und Energieversorgung. Z. Tierphysiol. Tierernährg. Futtermittelkde. 52, 235-244. Lovell T. (1998): Nutrition and feeding of fish. 2nd ed., Klüwer Acad. Publ., Boston. Meyer-Burgdorff K.-H., Müller C., Becker K. and Günther K.D. (1989): Determination of energy metabolism in mirror carp (Cyprinus carpio L.) at maintencance and different production levels. J. Anim. Physiol. a. Anim. Nutr. 62, 75-84. NRC (1993): Nutrient Requirements of Fish. Nat. Acad. Press, Washington, DC. Schwarz F.J. (1998): Fischernährung. In: Schäperclaus, W. und M.v. Lukowicz (Hrsg.), Parey im Blackwell Wissenschafts-Verlag, Berlin, S. 105-156. Schwarz F.J. and Kirchgeßner M. (1995): Effects of different diets and levels of feeding on retention and efficiency of utilization of energy and protein by carp (Cyprinus carpio L.). J. Appl. Ichthyol. 11, 363-366. Schwarz F.J., Schlott G. und Bräutigam M. (2003): Vorlesungsmanuskript. Schwarz F.J., Bräutigam M., Schabbel W., Oberle M. and Steinhart H. (2006): Effect of stocking density and feeding of carp (Cyprinus carpio L.) on fat content and fatty acid composition. Proc. Soc. Nutr. Physiol. 15, 132. Van der Zijpp A.J., Verreth J.A.J., Le Quang Tri, Van Mensvoort M.E.F., Bosma R.M. and Beveridge M.C.M. (2007): Fishponds in farming systems. Wageningen Academic Publishers. Webster C.D. and Lim C.E. (2002): Nutrient requirements and feeding of finfish for aquaculture. CABI Publishing, Wallingford. Autorenanschrift Prof. Dr. F.J. Schwarz Technische Universität München Department für Tierwissenschaften Bereich Tierernährung Hochfeldweg 6, D-85350 Freising-Weihenstephan e-mail: [email protected] Seite 46 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung für Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen J. Kamphues Institut für Tierernährung, Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover Einleitung Aus futtermittelkundlicher/tierernährerischer Sicht ist die Qualität von Futtermitteln ein sehr weit gefasster Begriff. Neben den schon immer geforderten Qualitätskriterien steht heute – forciert durch entsprechende Erfahrungen in der Vergangenheit – die Sicherheit von Futtermitteln im Zentrum des allgemeinen Interesses. Öffentliche Diskussionen zu Fragen der Fütterung lebensmittelliefernder Tiere sind oft noch geprägt von erheblichen Zweifeln an der Futtermittelqualität. Berichte in den Medien über Hintergründe der BSE, die Belastung von Futtermitteln mit Dioxinen, Nitrofen, MPA, über den Einsatz von „Antibiotika“ über das Futter, den Nachweis von „Schadstoffen“ im Futter oder auch die Kontamination von Futtermitteln mit „pathogenen Mikroorganismen“ wie Salmonellen erklären diese Vorbehalte. Hieraus ergab sich ein politischer Handlungsbedarf, der auf europäischer und nationaler Ebene zu verschiedenen Aktivitäten und Maßnahmen führte, wodurch indirekt – nolens/volens – die Vorbehalte und Kritik als begründet und die Zweifel als berechtigt erschienen. In diesem Zusammenhang fehlte es auch nicht an wechselseitigen Schuldzuweisungen bzw. an Bemühungen, die entsprechenden Verantwortlichkeiten im jeweils anderen Bereich zu platzieren bzw. zu sehen. So verwies die Landwirtschaft auf die Mischfutterindustrie, diese wiederum auf Mängel im vor- oder nachgelagerten Bereich (z.B. Zulieferer) und die Administration auf fehlende Kontroll- und Bewertungsmöglichkeiten („widersprüchliche wissenschaftliche Ergebnisse“). Nicht selten geriet hierbei in Vergessenheit, dass für die Wirkung in der Öffentlichkeit, die Lokalisation der Verantwortlichkeit für einen „Skandal“ eher nachrangig ist; der Vertrauensverlust betrifft – leider – allgemein die ganze Produktionskette. Vor diesem Hintergrund sollen im vorliegenden Beitrag die Anforderungen an die Qualität der auf dem landwirtschaftlichen Betrieb erzeugten Einzelfuttermittel wie auch der hier hergestellten Mischfutter näher erläutert werden. Von besonderem Interesse ist hierbei die Frage nach den Ursachen für gegebenenfalls auftretende Qualitätsmängel am Futter, nach den Möglichkeiten, solche Abweichungen früh zu erkennen bzw. zu vermeiden (Stichwort: Qualitätssicherungskonzepte). Schließlich verdient der Aspekt der Dokumentation bzw. der Transparenz der Futtermittelgewinnung auf dem landwirtschaftlichen Betrieb besondere Erwähnung. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 47 Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Die QUALITÄT von Futtermitteln Wie aus der Übersicht 1 hervorgeht, ist die Futtermittelqualität ein sehr facettenreiches Kriterium. Unter den verschiedenen Faktoren, die insgesamt die Qualität näher charakterisieren, betreffen die meisten Parameter das Tier, einige mehr den Tierhalter und/oder Mischfutterhersteller. Die Öffentlichkeit und die Verbraucher interessieren Fragen der Futterqualität eigentlich nur insoweit, wie die Lebensmittelqualität tangiert sein könnte. Hier bestehen nachweislich vielfältigste Einflussmöglichkeiten, die von einer Veränderung der Fettkonsistenz (z.B. Gehalt an ungesättigten Fettsäuren im Futter) über die Anreicherung von Nährstoffen in Organen des Schlachtkörpers (z.B. Vit. A, Vit. E, Kupfer in der Leber) bis zu Rückständen von Arzneimitteln (z.B. Tetracycline im Knochen) oder auch Kontaminationen mit Keimen (und assoziierten Resistenzen) reichen. Unter den Parametern der Futtermittelqualität fehlt aber der Terminus, der in der aktuellen Diskussion dieser Thematik den höchsten Stellenwert hat, nämlich die Futtermittel-Sicherheit. Die Bedeutung von Futtermitteln für die Sicherheit der Lebensmittel tierischer Herkunft ist für die Tierernährungswissenschaft kein neuer Aspekt, auch nicht für die mit der Futtermittelüberwachung betrauten Institutionen; so geht beispielsweise das erste Deutsche Futtermittelgesetz (1. Fassung 1926) auf Schadensfälle (Gesundheitsstörungen bei Tieren) bzw. Erkrankungen von Kindern zurück, die Milch von Kühen konsumierten, in deren Ration verdorbene Kleien zum Einsatz gekommen waren. Neu ist nur die Betonung dieses Zusammenhangs im politischen Bereich, insbesondere im Weißbuch zur Lebensmittelsicherheit der EU, wo es heißt: „Die Sicherheit von Lebensmitteln tierischen Ursprungs beginnt mit sicheren Futtermitteln“. Aus wissenschaftlicher Sicht spricht nichts gegen diese Formulierung. Unbestreitbar sind sichere Futtermittel eine wesentliche Voraussetzung für die Sicherheit von Lebensmitteln, aber eben neben verschiedenen anderen Voraussetzungen. Unter sicheren Futtermitteln sollen im vorliegenden Beitrag solche Rohwaren, Komponenten und Produkte verstanden werden, von denen bei sachgemäßem Einsatz keine nachteilige Beeinflussung der Tiere, des Anwenders, der von Tieren gewonnenen Lebensmittel und der Umwelt ausgeht. Unsicher wären demnach Futtermittel, die aufgrund originärer Inhalts- oder Begleitstoffe bzw. wegen unterschiedlichster Kontaminationen eine Gefahr für das Tier, den Menschen (als Anwender bzw. als Konsument der vom Tier stammenden Lebensmittel) oder die Umwelt darstellen. Dabei ist auch daran zu erinnern, dass ein an sich verträgliches, sicheres Futtermittel allein schon durch eine nichtsachgemäße Verwendung zu einem Sicherheitsrisiko führen kann (z.B. Mineralfutter mit höherem CuGehalt für Schweine bei Einsatz in der Schaffütterung). ANFORDERUNGEN an die FM-Qualität Auch wenn mit der Forderung nach sichereren Futtermitteln ein insgesamt umfassendes Profil von Ansprüchen abgedeckt ist, so darf dennoch nicht der Eindruck entstehen, als wären allein die Konsumentenwünsche die Erklärung für die gestiegenen Ansprüche an die Futtermittelqualität. Seite 48 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Übersicht 1: Faktoren zur Charakterisierung des Terminus Futtermittelqualität aus wissenschaftlicher Sicht Futterwert im engeren Sinne Verträglichkeit - Gehalte an Energie und Nährstoffen - tolerable Nährstoffgehalte und deren Verdaulichkeit - Art und Anteil von Einzelkomponenten - Art/Qualität der Nährstoffe (Rp, Rfe, Rfa, NfE) (Aminosäuren-/Fettsäurenmuster Verfügbarkeit von Nährstoffen) - Bearbeitung (z.B. Vermahlungsgrad) sowie die - Kontaminationen (z.B. Schwermetalle) - Hygienestatus (Vorratsschädlinge/Mikroorganismen und Toxine der Mikroorganismen) Handlingseigenschaften Schmackhaftigkeit - Art und Anteil von Komponenten - Bearbeitung/Zubereitung - hygienische Beschaffenheit - Lagerfähigkeit Facetten der FuttermittelQUALITÄT - Mischbarkeit/ Fließeigenschaften (Korngrößenverteilung) - Konstanz der Zusammensetzung (s. Verträglichkeit) Einflüsse auf die Lebensmittel-Qualität Sonstige Wirkungen des Futtermittels - originäre Inhaltsstoffe (z.B. Fettsäurenmuster) - diätetische Sonderwirkungen - Rückstände (z.B. von Schwermetallen, (z.B. auf die Passage/Magen-Darm-Flora etc.) Zusatzstoffen, Medikamenten) - Ergänzungseignung (mit einzelnen Nährstoffen) - Eintrag von/Belastung mit Erregern - Nebeneffekte (z.B. in der Fruchtfolge, Verwertung statt kostenträchtiger Entsorgung etc.) (z.B. Salm., Campyl.) u. deren Resistenzfaktoren Übersicht 2: Erklärungen für steigende Ansprüche an die Qualität von Futtermitteln Landwirt/Tierhalter Tiere Mischfutterhersteller - betriebsspezif. Ergänzungen - höhere Leistung - Rohwarenqualität - Kosten↓, Leistung↑ - Empfindlichkeit↑ - zertifizierte Produktion↑ FM- Rechtliche Vorgaben1) Steigende Ansprüche LM-Rechtliche Vorgaben2) an die - Unerwünschte Stoffe Futterqualität - Hygienestatus - s. auch Weißbuch zur Lebensmittelsicherheit Lebensmittelindustrie Verbraucher LM-Marketing - Ausschluss bestimmter FM - „Natürlichkeit“ der - „Markenfleischprogramme - Verzicht auf sinnvolle Produktion Ergänzungen des Futters 1) FM = Futtermittel 2) - „Bio-Produkte“ - „Genusswert“ LM = Lebensmittel 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 49 Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Die durch den züchterischen Fortschritt ermöglichte Leistungssteigerung der verschiedenen Nutztierarten führte zu erheblich höheren Ansprüchen, was die Energie- und Nährstoffdichte im Futter betrifft. Der Tierhalter selbst wünscht auf seine betrieblichen Bedingungen abgestimmte Ergänzungsfutter in einer Vielfalt und Spezialität, wie sie früher unbekannt waren. Die Mischfutterhersteller (Industrie) fordern verständlicherweise vom Landwirt als Getreidelieferanten entsprechende Qualitäten der eingehenden Rohwaren, um so Risiken für die Mischfutterproduktion zu minimieren. In Markenfleischprogrammen zusammengeschlossene Betriebe haben bzgl. der Fütterung teils weitere spezifische Anforderungen, um so spezielle Wünsche der Lebensmittelindustrie bzw. der Verbraucher aus Marketinggründen zu befriedigen. So ist z.B. die Forderung nach ballaststoffreicher Fütterung tragender Sauen zu einer Voraussetzung für die Abnahme von Mastschweinen durch einen international tätigen Lebensmittelkonzern geworden. Der Verzicht auf ganze Futtermittelgruppen bei der Herstellung von Mischfutter (z.B. Extraktionsschrote) oder der Ausschluss bestimmter Zusatzstoffe (z.B. Aminosäure) sind weitere Beispiele für die Berücksichtigung „besonderer“ Verbrauchererwartungen an die Qualität der Futtermittel bzw. Fütterung. Art und Anteil betriebseigener Futtermittel in der Fütterung Die auf tierhaltenden Betrieben praktizierte Fütterung unterscheidet sich sehr, insbesondere in Abhängigkeit von der Tierart, dem auf dem Betrieb möglichen Futteranbau, von der technischen Ausstattung sowie der hierfür verfügbaren Arbeitskapazität (Übersicht 3). In Abhängigkeit vom Anteil betriebseigener bzw. zugekaufter Futtermittel ergeben sich für die jeweiligen betrieblichen Bedingungen ganz unterschiedliche Möglichkeiten für die Entstehung von Mängeln in der Futtermittelqualität. Entsprechend unterschiedlich ist dann auch die Verantwortlichkeit für die Sicherheit von Futtermitteln verteilt, d.h. liegt diese primär beim Landwirt (nahezu ausschließliche Verwendung betriebseigener Komponenten) oder primär bei dem Lieferanten des industriell hergestellten Alleinfutters (z.B. in der Geflügelmast). Einflüsse auf die Qualität und Sicherheit der Futtermittel bzw. der Fütterung auf dem landwirtschaftlichen Betrieb Mit der nachfolgenden Übersicht 4 wird zunächst einmal eine Einschätzung zu generell wirksamen Einflüssen geboten. Der für die Futtermittel und die Fütterung verantwortliche Mensch rangiert hierbei an erster Stelle. Aufgrund eigener Erfahrungen waren/sind es gerade mangelnde Eignung, fehlende Sorgfalt („betriebsblind“) oder auch unzureichende Kenntnisse, die zu erheblichen Mängeln in der Futterqualität führen können. Von grundsätzlicher Bedeutung ist des Weiteren die Fütterungsintensität. Werden diesbezügliche Risiken nicht beachtet (z.B. Kraftfuttermast bei Rindern) sind klinische Störungen oder sogar Organveränderungen (Leberabszesse) am Schlachtkörper möglich. Weiterhin erhöht die Vielzahl von Tierarten und Nutzungsgruppen in einem einzigen Betrieb das Risiko für einen nicht ziel/sachgerechten Einsatz eines Futters (Umwidmung) bzw. auch für Kreuzkontaminationen, die sich auf Futtermittel, Zusatzstoffe (z.B. Ionophore) oder auch auf Arzneimittel (z.B. Antiinfektiva) erstrecken können. Was die „stufentypischen Einflüsse“ betrifft, folgt man hierbei sinnvollerweise dem Weg des Futters von seiner Gewinnung (Anbau) bis zur Aufnahme durch das Tier. Auf jeder dieser Stufen gibt es eine Vielzahl von Faktoren, Ereignissen und Umständen, die zu erheblichen Qualitäts- und Sicherheitsmängeln am Futter führen können. Seite 50 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Übersicht 3: Die Futtermittel-VIELFALT auf landwirtschaftlichen Betrieben ● Anteil betriebseigener Futtermittel in der Ration bzw. im Mischfutter - nahezu Null (Zukauf von Alleinfuttern) (z. B. Hähnchenmast) - mittlerer Anteil (Zukauf von Ergänzungsfutter) (z. B. Schweinemast) - hoher Anteil (nur Zukauf von Proteinträgern + Mineralfutter) (z. B. Rindermast mit Maissilage) ● Vielfalt der Futtermittel auf landwirtschaftlichen Betrieben - betriebseigenes Grundfutter, frisch/konserviert; (Grünfutterarten, Heu, Silagen, Rüben etc.) - betriebseigene Kraftfutter (allgemein konserviert) (Getreide, Leguminosen) - industrielle Nebenprodukte aus dem LM-Bereich (Trockenschnitzel, Getreidenachprodukte, Ölmühlennachprodukte, Milchverarbeitung, Brauerei/Brennerei etc.) - Mischfutter aus dem Landhandel/der FM-Industrie (Alleinfutter, Ergänzungsfutter, Mineralfutter) - besondere Nebenprodukte (Schweine: Molkemast; Rind: Schlempeverwertung; Verwertung von Altbrot, Datumware, u.ä.) Die unter besonderen klimatischen Bedingungen mögliche Förderung bestimmter Pilze (mit dem Risiko einer Mykotoxinkontamination der Futtermittel) verdeutlicht diese Abhängigkeit von „natürlichen“ Einflussfaktoren geradezu exemplarisch. Bezüglich der in der Öffentlichkeit oft geforderten “natürlichen“ Produktionsweise für Futtermittel (zur Vermeidung von Kontaminationen) ist darauf zu verweisen, dass gerade durch moderne Techniken (z.B. Trocknung) oder chemische Konservierungsstoffe (z.B. Propionsäure für Getreidekonservierung) die Sicherheit von Futtermitteln (reduzierter Besatz mit Vorratsschädlingen, Mikroorganismen und Toxinen) im Sinne des Verbraucherschutzes zu verbessern ist. Auch genetische Maßnahmen bei Futterpflanzen bieten erhebliche Chancen zur Reduktion möglicher Belastungen des Futters (z.B. mit Mykotoxinen). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 51 Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Übersicht 4: Generell wirksame EINFLÜSSE auf QUALITÄT und Sicherheit der Futtermittel, der Fütterung im Betrieb A : Faktor Mensch (Eignung, Sorgfalt, Kenntnisse) B : Fütterungsintensität (s. Pansenacidosen → Leberabszesse) C : Vielfalt an Tierarten und Nutzungsgruppen auf 1 Betrieb D : Stufentypische Einflüsse, s. nachfolgende Gruppierung Stufe 1. Futteranbau/-ernte typische Einflüsse und Risiken : 2. Konservierung der FM : Boden, Düngung, Pflanzenschutzmaßnahmen, Klima, Erntetechnik Verfahrenstechnik an sich, klimatische Einflüsse, Konservierungsmittel, biotischer und abiotischer Verderb 3. Lagerung der FM : Abschirmung (Wild, Schadnager, Vögel), Lagerhygiene/ -sauberkeit, Entwesung, Feuchte, Temperatur, Zeit, Umschlag, Kontaminationen (Siloanstriche) 4. Bearbeitung/ Mischen : Technische Ausstattung und Funktionssicherheit, Rezeptur-/ Dosierungsfehler, Einträge unerwünschter Stoffe über betriebsfremde Futtermittel 5. Futterzuteilung: zielgruppenspezifische Zuteilung, Vermeidung von Verschleppung Futterverwechslung; Fütterungsarzneimittel, Einhaltung von Absetzfristen 6. Verdauung und Stoff- : Carry over Rate unerwünschter Stoffe (Retention/Akkumulation – wechsel der Tiere s. z. B. Dioxine), Abbau/ Metabolisierung von Toxinen, Förderung bestimmter Mikroorganismen/Infektionen Seite 52 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Für die mikrobiologische Qualität von Lebensmitteln und die Gesundheit von Tierbeständen spielt evtl. auch der mögliche Eintrag von Salmonellen mit dem Futter eine Rolle. Dabei sind es eben nicht nur die Futtermittel, die hier als Eintragsquelle in Betracht kommen, sondern noch häufiger die Tiere. Neben den generell vorhandenen Einflüssen auf die Qualität der Futtermittel kommen im Einzelfall betriebsspezifische Bedingungen hinzu. Nur um die Bandbreite der möglichen Beeinträchtigungen der Futterqualität mit sekundär möglichen Risiken für die Lebensmittelqualität aufzuzeigen, sei auf die Übersicht 5 hingewiesen, insbesondere auf den dort genannten Gebrauch von Arzneimitteln. Übersicht 5: Besondere RISIKEN für die FM-Sicherheit auf landwirtschaftlichen Betrieben mit Bedeutung für die LM-Sicherheit Kontaminationen - Futteranbau : Herbstzeitlose im Grünfutter (Colchizin in der Milch) - Silagebereitung : Diesel/Hydrauliköleintrag (Mineralölkohlenwasserstoffe im Tier) - FM-Trocknung : Kontakt zu Rauchgasen (Dioxineintrag → s. Trockenschnitzel/Grünmehl) - FM-Lagerung : Salmonellen-Eintrag (Schadnager, Vögel → Schlachttier) - FM-Zuteilung : FM für andere Tiergruppen (z.B. Cu-haltige Ergänzungsfuttermittel → Leber) Verderb - auf dem Feld : Fusarienbefall (Mykotoxine auf pflanzl. LM) - im Lager : Lagerpilze und deren Toxine (Ochratoxin → Schweine → Nieren) - im Stall/ Trog : mikrobiologische Veränderungen (evtl. Aflatoxin → Leber) Einsatz von Mischfutter mit arzneimittelwirksamen Substanzen - tierartspezifischer Einsatz (s. Anticoccidia) - buchtenweiser Einsatz (z. B. Therapie) - Dauer des Einsatzes/Beachtung von Absetzfristen - Kennzeichnung/separate Lagerung - Kontamination der „Umgebung“ (Lager, Stall, Einstreu, Abluft aus Futterlager/Ställen) 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 53 Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Besondere Beachtung verdienen regional auftretende (ältere/neuere) Belastungen von Böden, auf denen Futtermittel angebaut und gewonnen werden. Auf entsprechend exponierten Flächen können Futtermittel mit Schwermetallen, Dioxinen oder auch anderen Kontaminanten (belebt/unbelebt) belastet sein, so dass diese in die Nahrungskette des Menschen eingetragen werden (vgl. Übersicht 6). Übersicht 6: Sonderbedingungen in der FM-Gewinnung, die einer besonderen Kontrolle bedürfen ● FM-Gewinnung auf Arealen, die besonderen Einträgen ausgesetzt waren/sind → Klärschlammdüngung (Cd-Belastung) → Überschwemmungsflächen (Schwermetalle, Dioxine) → Nähe zu Industrieemissionen (Thallium, Selen, Fluor) → Nähe zu Deponien (Vielfalt an Einträgen, Salmonellen) ● Fütterung auf der Basis besonderer Nebenprodukte → „Reinheit“ der Nebenprodukte (Entsorgungsweg?) → Art/Qualität von Hygienemaßnahmen (Sterilisation) → Einsatz besonderer Produktionshilfsmittel Ein altbekanntes Problem ist in diesem Zusammenhang die Schwermetall-, insbesondere Bleibelastung von Grünfutter (bzw. von Silagen/Heu) auf Überschwemmungsflächen, wenn die entsprechenden Flüsse oder Bäche aus Regionen gespeist werden, in denen zu früheren Zeiten eine Erzgewinnung eine größere Rolle spielte (z.B. Harz, Eifel usw.), bzw. in die über längere Zeit entsprechende Einleitungen von industriellen Abwässern erfolgten. Auch die Abluft bestimmter Industrien führte in der Vergangenheit zu entsprechenden Einträgen auf Flächen und Futterpflanzen. Thallium (Zementindustrie), Fluor (Aluminiumgewinnung) erreichten vor Jahrzehnten hierbei teils hohe Konzentrationen im Futter, die bis zu schweren klinischen Störungen bei Tieren führten. Auf Flächen in unmittelbarer Nähe zu großen Deponien – die eine hohe Attraktivität für Vögel (Krähen, Möwen), Schadnager (Ratten) und bestimmte Wildarten haben – wurde wiederholt eine entsprechende Kontamination mit Exkrementen dieser Tiere beobachtet, so dass beispielsweise auch Salmonellen auf dem Grünfutter häufiger nachgewiesen wurden. Ein Tränken von Weidetieren aus Gräben, Vorflutern oder Bächen in der Nähe von Deponien birgt evtl. besondere Risiken, wenn Oberflächenwasser aus dem Deponiebereich mit in diese Tränkequellen einfließt. Beispielhaft für die Bedeutung der Bodenbelastung für die Qualität des dort erzeugten Futters seien hier Dioxingehalte in Grundfutterproben aus Elbüberschwemmungen genannt. Seite 54 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Tabelle 1: Dioxin-Gehalte in Böden- und Aufwuchsproben (Elbüberschwemmungsflächen; 1993) Art der Proben Gehalte an PCDD/F1) Boden Gras Heu 47 0,08 0,14 (ng/kg TS) („) („) - 1124 3,43* 2,63 *eine Probe mit hoher Erdkontamination: 7,17 ng/kg TS 1) vgl. auch SCAN-Bericht 2000 zu Dioxingehalten in Böden und Futtermitteln Im Vergleich zu unbelasteten Böden (< 0,5 ng/kg TS) waren hier um den Faktor 100 – 2000 x höhere Werte gegeben, nicht wenige Futterproben überstiegen bei diesen Bodenbelastungen den heute futtermittelrechtlich zugelassenen Höchstwert (0,75 ng/kg TS) um ein Vielfaches. Neben den Futtermitteln im engeren Sinn sind evtl. weitere Eintragspfade von Bedeutung, die bislang kaum näher/differenzierter beurteilt werden können (Übers. 7). Übersicht 7: Mögliche Eintragspfade von Stoffen/Organismen, die neben dem Futter im Einzelfall Bedeutung für die LM-Qualität haben könnten „Einstreumaterialien“ - Stroh (Mykotoxine, Abreifemittel) - Hobelspäne, Sägemehl (Mykobakterien, Holzschutzmittel) - Torf (mit „Zusätzen“ von Spurenelementen) - „Stallsuperphosphat“ (höchste Fluorgehalte) Tränkwasser („Futtermittel“) - aus offenem Oberflächenwasser/Vorflutern u.ä. (Keime, Toxine, diverse Chemikalien) - originäre Fluorgehalte - Medium zur Applikation von Arzneimitteln, Wirkstoffen unabhängig vom Futter Produktionshilfsmittel („Bedarfsgegenstände“) - Entwesungs-/Schädlingsbekämpfungsmittel (Rote Vogelmilbe/Schadnagerbekämpfung) - Desinfektionsmittel? - Schutzanstriche von Einrichtungen 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 55 Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Hierbei verdienen beispielsweise auch Materialien, die als Einstreu verwendet werden bzw. der Beschäftigung von Tieren dienen, eine Erwähnung. Die in großem Umfang verwendeten Hobelspäne oder auch das Sägemehl sind potentielle Eintragspfade von unerwünschten Stoffen, wenngleich von diesen Produkten keine größeren Mengen oral aufgenommen werden. Entsprechende systematische Untersuchungen zur Qualität derartiger Produkte stehen aus, wären im Sinne einer umfassenden Risikoeinschätzung jedoch wünschenswert. Im Einzelfall können die primär zu Einstreuzwecken verwendeten Materialien auch bewusst als Applikationswege für Substanzen missbraucht werden, die im Futtermittel entsprechend mit Höchstgehalten bedacht sind (z.B. Zink-, Kupferverbindungen) bzw. deren Einsatz als Therapeutika nicht erlaubt ist. In diesem Zusammenhang sind weitere Stoffgruppen zu nennen, die weder futtermittelrechtlich noch arzneimittelrechtlich geregelt sind, die aber in der modernen Tierhaltung unverzichtbar sind, wie z.B. Desinfektionsmittel oder auch Mittel zur Schädlingsbekämpfung. Nur bei sachgemäßer Anwendung werden mögliche nachteilige Effekte auf die Lebensmittel (Rückstandsrisiken) bzw. auf die Umwelt (z.B. über die Abwässer oder auch über die Gülle) vermieden. Nach Schilderung der Vielfalt von Möglichkeiten für eine nachteilige Beeinflussung der Futtermittelqualität auf den landwirtschaftlichen Betrieb stellt sich die Frage, welche Informationen zu Futtermitteln und zur Fütterung auf dem landwirtschaftlichen Betrieb – im Sinne der angestrebten Transparenz – eigentlich immer verfügbar sein sollten (s. Übers. 8). Hierbei geht es zunächst einmal um einige essentielle Grundinformationen und nicht sofort um regelmäßige aufwendige Laboranalysen (toxikologischer Status, Hygienequalität), die aus Kostengründen auch in absehbarer Zeit wohl auf besondere Verdachtsfälle beschränkt bleiben. Liegen besondere Verdachtsmomente für Mängel in der Futterqualität vor, die auch für die Lebensmittelsicherheit von Bedeutung sein könnten, so erstrecken sich die zur Klärung notwendigen Maßnahmen (Anamnese bis Analyse) auf das Futter selbst, die Tiere und deren Produkte sowie auf das fertige Lebensmittel (s. Übers. 9). Je intensiver vorberichtliche Informationen erhoben werden, umso gezielter und kostengünstiger sind die aufwendigeren Analysen durchzuführen. Es ist – das muss ehrlicherweise eingeräumt werden – langfristig kaum möglich und finanzierbar, jede an Nutztiere verfütterte Partie von Einzelfuttermitteln auf die gesamte Palette von unerwünschten Stoffen (s. Anlage 5 der FMVO) auch nur halbwegs vollständig zu untersuchen. Der Kontrollaufwand für den Produktionsfaktor Futter würde den Wert der hiermit erzeugten Lebensmittel weit übertreffen. Vor diesem Hintergrund müssen die Maßnahmen auf solche Prozesse (Gewinnen, Lagern, Mischen und Zuteilen) und Parameter fokussiert werden, die aufgrund ihrer Frequenz bzw. wegen ihrer möglichen Auswirkungen auf die Gesundheit des Menschen eine besondere Bedeutung haben (z.B. Eintrag von Mikroorganismen, bestimmten Mykotoxinen, Schwermetallen, besonderen organischen Schadstoffen wie z.B. Dioxine). Schlussfolgerungen Die Ausführungen bieten einen Überblick zu der Vielfalt an Möglichkeiten für die Entstehung von Qualitätsmängeln am Futter auf dem landwirtschaftlichen Betrieb, die zumindest theoretisch auch Bedeutung für die Lebensmittelsicherheit haben könnten. Es erscheint notwendig, bei der Verwendung von Nebenprodukten als Futtermittel (sowohl auf dem landwirtschaftlichen Betrieb wie auch in der Mischfutterindustrie) die Kontrolle darauf auszurichten, dass dieser Weg nicht illegal/kriminell zur Entsorgung dubioser, toxikologisch relevanter Stoffe missbraucht wird (Dioxinbelastetes Transformatorenöl in der Fettschmelze; Hormone – MPA - in Melasse) bzw. bei ihrer Gewinnung Sicherheitsaspekte verstärkt berücksichtigt werden (Trocknung von Keksbruch, Altbrot in Kontakt mit dioxinhaltigen Rauchgasen) bzw. die Lagerungsbedingungen für Futtermittel mit Sorgfalt und Verantwortungsbewusstsein gewählt werden. Seite 56 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Übersicht 8: Zur DOKUMENTATION sicherheitsrelevanter Maßnahmen und Informationen → TRANSPARENZ 1. Gewinnung der betriebseigenen Futtermittel - Wo und Wann? - Unter welchen Bedingungen (Düngung, Pflanzenschutz)? - Von welcher Qualität? 2. Konservierung und Lagerung der Futtermittel - welche Techniken, mit welchem Erfolg (TS, pH)? - Kennzeichnung und separate Lagerung - Warenbestandsregister - Hygienemaßnahmen 3. Mischfutterherstellung/ Rationsgestaltung - nach welcher Rezeptur/Vorgabe? - Herkunft und Qualität der Zukaufsfuttermittel - Funktionskontrollen bzgl. der Technik - Mischfutter-/Rationsanalysen 4. Mischfutterlagerung und –zuteilung - Abschirmung/Separierung/Hygienemaßnahmen - Vorkehrungen gegen Futterverwechslungen - Einsatz von Fütterungsarzneimitteln (wann, wie lange, Absetzfristen?) 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 57 Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Übersicht 9: AUFDECKUNG/ ERKENNEN sicherheitsrelevanter Mängel in der FM-Qualität 1. Vorberichtliche Informationen zum Futter - Wo wurde welches Futter unter welchen Bedingungen gewonnen, gelagert, bearbeitet und eingesetzt? → Bodenanalysen, Düngung, Pflanzenschutzmaßnahmen 2. Befunderhebung am Futter/-lager - vor Ort: Inspektion der Lagerbedingungen - Befunde am Futter selbst (z. B. Nagerkot) - FM-Analysen (Vielfalt je nach Verdacht) 3. Befunderhebung am Tier - klinischer Gesamteindruck/Leistungsdaten - Kot-/Harnuntersuchungen (z.B. Arzneimittel) - Blut-/Serumuntersuchungen (div. Parameter) - Organ-/Gewebeanalysen (Schlachtkörper) 4. Befunderhebung am Lebensmittel - des noch lebenden Tieres (Milch/Eier) - nach Schlachtung - z.B. Knochen : Schwermetalle Leber : Aflatoxin Niere : Cadmium 5. Tierversuche mit „belasteten“ FM - Bestimmung der Carry over Rate - Festsetzung tolerabler Belastungen Seite 58 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kamphues: Futtermittelsicherheit als eine Voraussetzung der Lebensmittelsicherheit – vermeintliche und tatsächliche Schwachstellen Andererseits bestehen auch längerfristig noch gewisse Risiken für die Qualität von Futtermitteln durch Umweltkontaminationen wie Dioxine (Gehalte in exponierten Böden) infolge der betrieblich gegebenen Bedingungen für den Futtermittelanbau. Schließlich sollten längerfristig auch mögliche Eintragspfade berücksichtigt werden, die bislang in diesem Zusammenhang häufig übersehen wurden (z.B. Tränkwasser, Einstreumaterialien, Produktionshilfsmittel). Nach den Untersuchungsergebnissen zur Lebensmittelqualität ist jedoch davon auszugehen, dass die Produktion insgesamt mit hohem Verantwortungsbewusstsein betrieben wird. Diese generell richtige Einschätzung ist einer zunehmend kritischen Verbraucherschaft solange nicht zu vermitteln, wie einzelne Vorkommnisse mit teils kriminellen bzw. technische Pannen immer wieder in den Medien für entsprechende Schlagzeilen („Futtermittelskandale“) sorgen. Eine hohe Futtermittelsicherheit ist das Ergebnis guter fachlicher Praxis, d.h. von Sorgfaltspflicht auf allen Stufen, notwendiger Vorsorge/Vorkehrungen und Kontrollen (von privater und amtlicher Seite). Gefahren für die Futtermittelsicherheit resultieren aus einem fehlenden Problembewusstsein, falsch verstandener Routine (Betriebsblindheit), Fehlleistungen/Funktionsmängeln der Technik, aus natürlichen Ereignissen wie auch aus „Unfällen“ und menschlichen Schwächen (bzw. sogar krimineller Energie). Literatur Wird auf Anfrage vom Autor zur Verfügung gestellt. Autorenanschrift Prof. Dr. Josef Kamphues Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover Bischofsholer Damm 15, D-30173 Hannover 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 59 Novalin und Zweckmair: Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Senad Novalin und Thomas Zweckmair Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und – technologie Kurzfassung Zahlreiche Studien belegen, dass der Peak-Oil, das Maximum an Erdölförderleistung, in der ersten Hälfte dieses Jahrhunderts liegen wird. Die damit verbundene Verknappung der Rohstoffe zur Herstellung der meisten Produkte ist eine große zukünftige Herausforderung. Ein beträchtlicher Teil der Biomasse muss für die Herstellung der Güter herangezogen werden, wobei auch landwirtschaftliche Nebenprodukte und Abfälle als Rohstoffquellen fungieren können. Aus technologischer Sicht kann die sogenannte „Grüne Bioraffinerie“ zur Lösung dieses zukünftigen Problems dienlich sein. Die Grundidee besteht darin, dass in Analogie zu einer Erdölraffinerie der Rohstoff „Grünlandbiomasse“ in einer einzigen Verarbeitungsanlage möglichst vollständig und möglichst ohne Abfälle in eine Vielzahl von Wertstoffen weiterverarbeitet werden soll. Im Speziellen bietet Grassilage ein breites Spektrum an Wertstoffen wie z.B. Milchsäure zur Herstellung biologisch abbaubarer Kunststoffe, zahlreiche Aminosäuren zur Verwendung beispielsweise in der Futtermittel, Lebensmittel- und Pharmaindustrie oder Pflanzenfasern für verschiedenste Anwendungsgebiete. Einleitung Eine langfristige Vorbereitung auf eine stärker auf nachwachsende Rohstoffe basierende Technologie erscheint aufgrund des langsam ausgehenden Erdöls (Peak-Maximum wird in der ersten Hälfte dieses Jahrhunderts erreicht) als unerlässlich. Dabei muss ein beträchtlicher Teil der Biomasse für die Herstellung der Güter herangezogen werden. Laut einer Studie von McKinsey kann auch ein signifikanter Teil der Güter auf Basis landwirtschaftlicher Nebenprodukte und Abfälle produziert werden. Seite 60 7. BOKU-Symposium Tierernährung Novalin und Zweckmair: Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Um zukünftig Ausgangsstoffe für industrielle Produktionsverfahren auf Basis von Biomasse zur Verfügung stellen zu können, müssen neue technologische Verfahren entwickelt werden. Einen möglichen technologischen Weg zur teilweisen Bewältigung der absehbaren Verknappung von Erdöl stellt beispielsweise die Grüne Bioraffinerie dar, welche Grassilage aus Ausgangsstoff nutzt. Das verfahrenstechnische Konzept der Grünen Bioraffinerie Erster Verfahrensschritt ist die mechanische Fraktionierung der Grassilage in eine flüssige Fraktion (Presssaft) und in eine feste Fraktion (Presskuchen). Im Anschluss wird die flüssige Fraktion weiter fraktioniert um idealer weise einzelne Substanzklassen isolieren zu können: Abbildung 1: Schematische Darstellung des Technologiekonzeptes der Grünen Bioraffinerie Die feste Faser Pflanzenfasern können beispielsweise in der Futtermittelindustrie oder als Dämmmaterial eingesetzt werden. Im Folgenden wird allerdings das Hauptaugenmerk auf die flüssige Fraktion gelegt. Die flüssige Fraktion Folgende Tabelle verdeutlicht die Ausbeute an Grassilagepresssaft und Wertsubstanzen bezogen auf Flächeneinheit. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 61 Novalin und Zweckmair: Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Tabelle 1: Darstellung der Ausbeuten bei der Presssaftgewinnung bezogen auf Flächeneinheit (gerundete Richtwerte) Biomasseertrag an Grassilage 7,5 t . ha-1 . a-1 2,5 t . ha-1 . a-1 Presssaft davon TS 10 – 15 % davon Milchsäure 100 kg . ha-1 . a-1 davon Aminosäuren 100 kg . ha-1 . a-1 davon Zucker 100 kg . ha-1 . a-1 davon Salze 100 kg . ha-1 . a-1 Nach Bestimmung der chemischen Zusammensetzung des Grassilagepresssaftes, die starken saisonalen Schwankungen unterliegt, gilt es, die Wertsubstanzen und die Anwendungs-möglichkeiten zu identifizieren: Milchsäure: wird als Substitut für einen Teil der konventionell hergestellten Kunststoffe betrachtet weitere einzelne organische Säuren mit potentiellen Anwendungsmöglichkeiten z.B. in der chemischen Industrie Zucker zur Verwendung Fermentationssubstrat in Lebensmitteln bzw. in Futtermitteln und allgemein als Aminosäuren und speziell deren wertmäßig besonders interessanten Derivate zur Verwendung in der Pharmaindustrie bzw. als Ausgangsprodukt für chemische Synthese Salze zur Verwendung als Düngemittel 5-10 % der Trockenmasse wurde aus messtechnischen Gründen nicht analysiert; sie enthaltet aller Wahrscheinlichkeit nach Fruktane, Polyphenole, Peptide, teilweise abgebautes Chlorophyll, welche ebenfalls einer Nutzung zugeführt werden können Die Wertsubstanzen Aminosäuren, Milchsäure und andere organische Säuren werden heutzutage durch Fermentation hergestellt. Die direkte Abtrennung und Gewinnung von Wertsubstanzen aus Grassilagepresssaft im Rahmen des Technologiekonzeptes der Grünen Bioraffinerie stellt hier einen neuen technologischen Ansatz dar, der sich besonders durch seine Nachhaltigkeit auszeichnet. Zu Vergleichszwecken wurde in Tabelle 2 neben dem Grassilagepresssaft auch die Zusammensetzung von verschiedenen anderen „Rohsäften“ biogenen Ursprungs dargestellt. Unter anderem ist der hohe Gehalt an Milchsäure und freier Aminosäuren in Grassilage-Presssäften im Vergleich zu anderen „Rohsäften“ augenscheinlich. Seite 62 7. BOKU-Symposium Tierernährung Novalin und Zweckmair: Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Tabelle 2 Physikalisch-chemische Charakterisierung und Zusammensetzung von Biomasse-Flüssigfraktionen. Silage Presssaft Saft nach WasserExtraktion von Zuckerrübe Zuckerrohrsaft Saft aus der Stärkeverzuckerung 35,8 - - - pH bei 20.5°C 4,0 - - - Trockenmasse, % 13,6 15,5 14,0 - dunkel - - - 19,3 - - - Essigsäure 2,1 - - - Milchsäure 37,5 - - - - - 2,8 - 15,5 - - - 34,8 - 4,2 - 38,3 154,8 120,4 400,0 Fruktan, g * L-1 - - - - Wasserlösliche Zucker (WSC), g * L-1 - - 0,3 - 26,1 - 2,1 - - - 0,7 - Leitfähigkeit mS/cm bei 20.5°C, Farbe Summe Kationen, g * L-1 (K+; Na+; NH4+; Ca2+; Mg2+) Organische g * L-1 Säuren, Summe organische Säuren Summe Anionen, g * L-1 (C1-; NO3-; PO43-; SO42-) Summe anorganische Anionen and Kationen, -1 g*L Summe Zucker, g * L-1 (Glukose, Fruktose, Saccharose, Arabinose, Xylose, Galaktose) Aminosäuren, g * L-1 Protein (N x 6,25) - keine Ergebnisse erhältlich. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 63 Novalin und Zweckmair: Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Mögliches Verfahrensschema zur Gewinnung von Wertsubstanzen aus der flüssigen Fraktion Bevor die Trennung und Gewinnung der Wertsubstanzen ins Auge gefasst werden kann, muss die flüssige Fraktion einer Vorbehandlung unterzogen werden. Unter anderem müssen z.B. verschiedenste Feststoffe mit Hilfe einer Zentrifugation abgetrennt werden. Ist im Anschluss die flüssige Fraktion auf die folgenden Trennschritte entsprechend vorbereitet worden, wird sie einem Elektrodialyseschritt bei einem entsprechenden pH-Wert unterzogen, wie folgende Abbildung zeigt: Abbildung 2: Schematische Darstellung der ersten Verfahrensschritte des Technologiekonzeptes der Grünen Bioraffinerie Um allerdings entsprechend reine Rohstoffe gewinnen zu können, ist die Chromatographie als Trenntechnologie unerlässlich. Verschiedenste Chromatographie-Harzmaterialien wurden im Hinblick auf diese Trennaufgabe (siehe Ausgangsprodukt in Abbildung 2 rechts unten) getestet, wobei folgendes Ergebnis zeigt, dass teilweise eine Trennung des vorliegenden Substanzgemisches erreicht werden kann: Seite 64 7. BOKU-Symposium Tierernährung Novalin und Zweckmair: Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Abbildung 3: Versuchsergebnis MDS 1368 Lewatit; Ca2+-konditioniert; pH=3,8; 2 m-Säule; Flussrate 5 ml * min-1; Temperierung auf 60 °C; Vfeed=20 mL; nicht quantifiziert: Pro, Cys Nach erfolgter Trennung und Gewinnung der Wertsubstanzen muss berücksichtigt werden, dass die gewonnenen einzelnen Fraktionen entsprechend aufkonzentriert werden müssen, um sie in handelsüblicher Formulierung zur Verfügung stellen zu können. Neben den Trenntechnologien Elektrodialyse/Chromatographie/Membranverfahren spielen auch völlig neuartige Membrantechnologien wie z.B. Elektrodialyse mit bipolaren Membranen eine entscheidende technologische Rolle. Diese neuartige Technologie erlaubt es, Salze organischer Säuren in deren Säureform zu überführen und ermöglicht die Gewinnung von Säuren und Laugen aus ihren entsprechenden Salzen. Zusammenfassung und Ausblick Die Grünen Bioraffinerie stellt ein mögliches technologisches Konzept zur stofflichen Nutzung von Grassilage dar. In Anbetracht dessen, dass der Peak-Oil, das Maximum an Erdölförderleistung, in der ersten Hälfte dieses Jahrhunderts liegen wird und damit die Basisrohstoffe zunehmend knapp werden, stellt dieses technologische Konzept eine Möglichkeit zur alternativen Gewinnung von einigen Basisrohstoffen aus Biomasse dar. Zurzeit werden die ersten Schritte gesetzt, um aufbauend auf den gewonnen Erkenntnissen eine erste Pilotanlage für die Österreichische Grüne Bioraffinierie zu errichten. Unter Einbeziehung großer Unternehmen der Energiewirtschaft (Energie AG, OÖ Ferngas, RAG) soll in Oberösterreich durch die Errichtung einer Bioraffinerie-Demonstrationsanlage mit angeschlossener Biogas-Erzeugung dieses Konzept in technischem Maßstab getestet werden. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 65 Novalin und Zweckmair: Neue Wege der stofflichen Nutzung agrarischer Biomasse außerhalb der Lebensmittelproduktion am Beispiel der Grünen Bioraffinerie Anerkennung Das Forschungsprogramm „Fabrik der Zukunft“ (Grüne Bioraffinerie) wird vom Bundesministerium für Verkehr, Innovation und Technologie und von der FFG gefördert. Literatur Novalin S, Zweckmair T, Renewable Resources – Green Biorefinery: Separation of Valuable Substances from Fluid-Fractions by means of Membranetechnology, in Biofuels, Bioporducts and Biorefining – in press. Thang VH, Koschuh W, Kulbe KD, Kromus S, Krotscheck C and Novalin S, Desalination of high salt content mixture by two-stage electrodialysis as the first step of separating valuable substances from grass silage, in Desalination 162, pp. 343–353 (2004). Koschuh W, Thang VH, Krasteva S, Novalin S and Kulbe KD, Flux and retention behaviour of nanofiltration and fine ultrafiltration membranses in filtrating juice from a green biorefinery: A membrane screening, in J Membr Sci 261, pp. 121-128 (2005). Thang VH, Koschuh W, Kulbe KD and Novalin S, Detailed investigation of an electrodialytic process during the separation of lactic acid from a complex mixture, in J Membr Sci 249, pp. 173-182 (2005). Thang VH and Novalin S, Green Biorefinery: Separation of lactic acid from grass silage juice by chromatography using neutral polymeric resin, in Bioresour Technol 99, pp. 4368-4379 (2008). Kromus S, Wachter B, Koschuh W, Mandl M, Krotscheck C and Narodoslawsky M, The Green Biorefinery Austria - development of an integrated system for green biomass utilization, in Chem Biochem Eng Q 18, pp. 7-12 (2004). Kromus S, Wachter B, Koschuh W, Mandl M, Krotscheck C and Narodoslawsky M, The Green Biorefinery Austria - development of an integrated system for green biomass utilization, in Chem Biochem Eng Q 18, pp. 7-12 (2004). Bott M et. al., Positionspapier der Dechema e.V, Weiße Biotechnologie – Chancen für Deutschland, Dechema, Frankfurt am Main (2004). http://www.fabrikderzukunft.at/results.html/id3017; Stand: [23.09.2008] http://www.bmbf.de/pub/weisse_biotechnologie.pdf; Stand: [25.02.2008] http://www.fabrikderzukunft.at/nw_pdf/0533_milchsaeure_aus%20silage2.pdf; Stand [24.10.2008] Korrespondierender Autor Ao. Univ. Prof. Dr. Senad Nivalin Tel.: +43 1 36006 6288; Fax: +43 1 36006 6251. Mail: [email protected] (S. Novalin) Seite 66 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kolar: Das europäische Schnellwarnsystem im Rahmen der amtlichen Futtermittelkontrolle Das europäische Schnellwarnsystem im Rahmen der amtlichen Futtermittelkontrolle Veronika Kolar Österreichische Agentur für Gesundheit und Ernährungssicherheit, Wien Das Europäische Schnellwarnsystem für Lebensmittel und Futtermittel (engl. Rapid Alert System for Food and Feed, RASFF) wurde errichtet, um die nationalen Kontrollbehörden der Mitgliedstaaten mit einem wirksamen Informationsnetzwerk über sämtliche getroffene Maßnahmen zur Gewährleistung der Lebensmittelsicherheit auszustatten. Weiter Beteiligte sind die Europäische Lebensmittelbehörde (EFSA) und die Europäische Kommission. Die Österreichische Agentur für Gesundheit und Ernährungssicherheit (AGES) ist bereits seit dem Februar 2002 als Kontaktstelle für Futtermittel (FEED) ernannt, seit 1.3.2007 auch für den Lebensmittelbereich. Die beiden nationalen Kontaktpunkte sind via Internet mit der Zentrale in Brüssel verbunden und sind im Fall von Krisensituationen direkt mit den Entscheidungsträgern der beiden Ministerien BMGFJ und BMLFUW kurzgeschlossen. Gesetzlicher Hintergrund Der gesetzliche Hintergrund ist in der Verordnung (EG)178/2002 („General food law“) verankert, worin allgemeine Grundsätze und Anforderungen des Lebensmittelrechts, die Errichtung einer europäischen Behörde für Lebensmittelsicherheit (EFSA), sowie Verfahren zur Lebensmittelsicherheit festgelegt werden. Die Errichtung eines europäischen Schnellwarnsystems wurde im Artikel 50 festgelegt. Beim Vorliegen eines ernsthaften unmittelbaren oder mittelbaren Risikos für die menschliche Gesundheit, das von Lebensmitteln oder Futtermitteln ausgeht, werden diese Informationen von der Kontaktstelle eines Mitgliedstaats unverzüglich an das Schnellwarnsystem gemeldet. Die EFSA hat die Möglichkeit die Meldung durch wissenschaftliche oder technische Informationen zu ergänzen, die den Mitgliedstaaten ein rasches und angemessenes Risikomanagement erleichtern. Die Kommission leitet diese Informationen inkl. aller folgenden gesetzten Maßnahmen an die Mitglieder des Netzes weiter: - Verbot oder Beschränkung der Inverkehrbringung Rückruf oder Rücknahme vom Markt Empfehlungen oder Vereinbarungen mit der gewerblichen Wirtschaft Zurückweisungen durch eine Behörde an einer Grenzkontrollstelle Betroffene Mitgliedstaaten informieren die Kommission nach Erhalt einer Meldung, welche Maßnahmen/Schritte eingeleitet wurden. Die Kommission leitet diese Informationen wieder an die Mitglieder des Netzes weiter. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 67 Kolar: Das europäische Schnellwarnsystem im Rahmen der amtlichen Futtermittelkontrolle Vertraulichkeitsregelungen Die Mitglieder des Netzwerkes aller Mitgliedsstaaten sind zu absoluter Vertraulichkeit verpflichtet. Der Öffentlichkeit werden durch die Wochenmeldungen der Kommission nur bestimmte Teile der Meldungen zugänglich gemacht, wie z.B. die Art und Herkunft Produktes (z.B. Sojaschrot aus Italien), Art des Risikos (z.B. Salmonellen) und die ergriffenen Maßnahmen. Bestimmte Abschnitte, die der Geheimhaltung unterliegen, dürfen nicht weitergegeben werden (z.B. Name und Adresse des Herstellers, etc.). Ausnahme sind Informationen, die aus Gründen des öffentlichen Gesundheitsschutzes weitergegeben werden müssen. Alle Behörden, die solche Informationen erhalten, garantieren deren Vertraulichkeit, die auch nach dem Ausscheiden eines Mitarbeiters vom Dienst gilt. Die Mitgliedstaaten kommunizieren nur über die RASFF-Zentrale in Brüssel (Kommission) bzw. untereinander nur über die festgesetzten Kontaktpunkte. Informationen an Dritte werden nicht weiter gegeben. Folgende Arten von Meldungen werden elektronisch übermittelt: - Warnmeldungen (Alert notifications) - Informationsmeldungen (Information notifications) - News- Meldungen (Neuigkeiten) - sowie der Originalmeldung nachfolgende Meldungen (Follow Ups) Alert notifications (Warnmeldungen) Alert-Meldungen werden versendet, wenn ein Risiko für ein bereits am Markt befindliches Lebensmittel oder Futtermittel besteht und umgehender Handlungsbedarf erforderlich ist. Warnmeldungen werden vom jeweiligen Mitgliedstaat ausgeschickt, der das Risiko entdeckt und entsprechende Maßnahmen wie z. B. eine Sperre oder Rückholung der Ware veranlasst hat. Ziel ist es, alle Mitgliedstaaten rasch und gleichzeitig über das Internet zu informieren. Die Mitgliedstaaten können danach selbst prüfen, ob sich das betroffene Produkt auch am heimischen Markt befindet und ob notwendige Schritte zur Futtermittelsicherheit zu veranlassen sind. Der Konsument kann darauf vertrauen, dass Produkte aus einer veröffentlichten „Alert“-Meldung schon vom Markt entfernt worden sind bzw. gerade zurückgeholt werden. Die Mitgliedstaaten entscheiden selbst, wie solche Maßnahmen auf nationaler Ebene ausgeführt werden, auch ob detaillierte Information an die Medien weitergegeben werden. Information notifications Informationsmitteilungen werden zumeist veröffentlicht, wenn für Lebensmittel oder Futtermittel zwar ein Risiko bestehen würde, aber das Produkt nicht auf den Markt gekommen ist. Diese Meldungen betreffen zum Großteil Lieferungen, die aufgrund einer Grenzkontrolle an einer Außengrenze der EG abgewiesen wurden. Sofortmaßnahmen sind hier nicht erforderlich. News Diese Meldungen, die weder als Warnung noch zur Information dienen, aber für die Kontrollbehörden relevant sein könnten, werden von der Kommission für die Mitglieder des RASFF zur Verfügung gestellt (z.B. bestimmte Analysenmethoden, diverse Informationen von Gesundheitsbehörden oder Problemberichte aus/mit Drittstaaten, etc.) Seite 68 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kolar: Das europäische Schnellwarnsystem im Rahmen der amtlichen Futtermittelkontrolle Weekly Overviews - Wochenmeldungen Die Kommission veröffentlicht einmal wöchentlich eine Übersicht über alle Food und Feed – Meldungen im Internet. Futtermittelmeldungen sind in Blau gedruckt. Handelsnamen und Identität der betroffenen Firmen werden hier nicht bekannt gegeben. Detaillierte Informationen werden nur an die Kontaktpunkte der nationalen Behörden und die Zentrale in Brüssel weitergegeben. Information von Drittstaaten Die Kommission informiert Drittstaaten dann, wenn diese durch Export oder Import von einem beanstandeten Futtermittel betroffen sind. Dadurch sollen im Ursprungsland durch geeignete Gegenmaßnahmen Wiederholungsfälle verhindert werden. EU-Antragsländer wie z.B. Türkei, Kroatien, Mazedonien, aber auch andere Drittstaaten oder internationale Organisationen können sich einvernehmlich und unter Einhaltung bestimmter Übereinkommen (z.B. Vertraulichkeitsregeln) am Schnellwarnsystem teilnehmen. RASFF FEED Meldungen Mehr als 95% aller Meldungen betreffen den Lebensmittelsektor. Weniger als 5% der Meldungen betreffen den Futtermittelsektor. Die häufigsten Futtermittelmeldungen betreffen mikrobiologische Kontaminationen von Futtermitteln, hier vor allem Salmonellen (71) und Enterobacteriaceae (11). Weiters wurden Kontaminationen durch Mycotoxine (12), nicht zugelassene GVO (12), Tiermehl (12), Dioxine (10), Schwermetalle (7), Rückstände von Tierarzneimitteln (3) und verschiedene andere Risiken gemeldet. Ingesamt gab es im Jahr 2007 bei Futtermitteln 163 Original-Meldungen, wobei die zahlreichen Follow Up Meldungen noch nicht mitgerechnet wurden. Jahr RASFF Feed Feed Meldungen aus Österreich Gesamtmeldungen Meldungen (Food and Feed) excl. Follow Up 2002 3024 100 2 2003 4286 71 7 2004 5367 65 4 2005 6897 85 10 2006 6594 129 10 2007 7354 163 10 2008 xxxx xxx 12 (Stand 31.10.2008) inkl. Follow Up RASFF-Meldungen aus Österreich (inkl. Follow Up Meldungen) 2002: Dioxin in Ferkeltorf, Salmonellen in Fischmehl 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 69 Kolar: Das europäische Schnellwarnsystem im Rahmen der amtlichen Futtermittelkontrolle 2003: Kokzidiostatika in Legehennenfutter, Dioxin in Grünmehlpellets und Zinkoxid, Salmonellen in Fischmehl und Sonnenblumenschrot, erhöhter Fluorgehalt in einem Ergänzungsfuttermittel, Tiermehl in Sauenfutter 2004: Tiermehl in Säurepremix und Rübenschnitzel, Salinomycin in Mineralfutter, Polycyclische aromatische Kohlenwasserstoffe (PAH) in Graspellets 2005: Salmonellen in Hundekauknochen (6x), Leinsamenschrot (2x) und Fischmehl (2x) 2006: Selen- und Chromhefe in Hunde- und Katzenfutter, Superoxiddismutase in Pferdefutter, dioxinähnliche PCB in Kupfersulfat, Blei in Manganoxid, Arsen in Pferdefutter, Salmonellen in Proteinkonzentrat für Masthühner (2x), in Hundefutter, Rapsschrot und Fischmehl 2007: Selen-Überschreitung in Ferkelfutter, Botulinumtoxin in Katzenfutter (2x), Cumarin in Hundekeksen, Fremdkörper in Welpenfutter, Alflatoxine in Erdnüssen, dioxinähnliche PCBs in Kupfersulfat, Salmonellen in Hundekauknochen, Cadmium in Zinksulfat, Enterobakterien in Hundefutter 2008: DDT in einem Ergänzungsfutter (2x), Salmonellen in Sojaschrot (4x), Salmonellen in Weizenproteinkonzentrat (1x), Blei in Reisproteinkonzentraten (1x), Cyanide in Leinsamenschrot (1x), Tierische Proteine in einem pflanzlichen Zusatzstoff (1x), Dioxinähnliche PCB in Kupferchelat (1x), Cyanursäure in Süßmolkepulver (1x). Stand 31.10.2008 Im Jahr 2007 sorgten zwei Themenkreise für größere Aufregung: Melamin in verschiedenen Eiweißkonzentraten und Heimtiernahrung aus China sowie Pentachlorphenol und Dioxin in Guarkernmehl (Zusatzstoff) aus Indien. Die Meldungen über Melamin haben seit Ende Juli 2008 besonders am Lebensmittelsektor dramatisch zugenommen. Hier sind vor allem milch- und eipulverhältige Lebensmitteln aus China (Milch- und Molkepulver, verschiedene Milchprodukte, Bonbons, Kekse und Süßigkeiten) betroffen, aber auch Body Paint Sets (Sexshopprodukte) und Zusatzstoffe wie Ammoniumcarbonat (Backhilfsmittel) oder Zinkkapseln. Die Medien berichteten bereits von über 50.000 Erkrankungen und mehreren Todesfällen durch Nierenversagen bei Säuglingen und Kleinkindern sowie von 1500 verstorbenen Marderhunden in China durch kontaminiertes Milchpulver bzw. Futtermittel. Da in China derzeit riesige Mengen von beanstandeter Ware anfallen und möglicherweise nicht alles sachgemäß entsorgt wird, muss damit gerechnet werden, dass dieselben Produkte - in einiger Zeit - am Futtermittelsektor in Europa oder als Nahrungsmittel in Entwicklungsländern wieder auftauchen. Aufgrund der Dringlichkeit und des großen Ausmaßes dieser Thematik wurde von der Europäischen Kommission am 14. Oktober 2008 eine Empfehlung zur Untersuchung aller milch- bzw. milcherzeugnishältigen und aller hochproteinhältigen Lebens- und Futtermittel aus China auf Melamin erlassen (Empfehlung der Kommission 798/2008/EG). Seite 70 7. BOKU-Symposium Tierernährung Kolar: Das europäische Schnellwarnsystem im Rahmen der amtlichen Futtermittelkontrolle Literatur: VO(EG) Nr. 178/2002 Empfehlung der Kommission Nr. 798/2008/EG http://ec.europa.eu/food/food/rapidalert/index_en.htm Anschrift der korrespondierenden Autorin Dipl.-Ing. Mag. Veronika KOLAR, Institut für Futtermittel, Abteilung Futtermittelüberwachung Bereich Landwirtschaft Österreichische Agentur für Gesundheit und Ernährungssicherheit, Bundesamt für Ernährungssicherheit Spargelfeldstrasse 191 , A-1226 Wien e-mail: [email protected], 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 71 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Performance improvement in weaned piglets by the phytogenic feed additive FRESTA F Conc. K.R. Wendler, J. Perner and A. Asamer Delacon Biotechnik GmbH, Weissenwolffstr. 14, A-4221 Steyregg, Austria Introduction The enormous development in pig farming in the second part of the 20th century has been made possible by the improvement of facilities, management, genetics, and animal nutrition. One of the main nutritional factors was the use of antibiotics as growth promoters. A ban of antibiotic growth promoters (AGP's) was put into force within the European Union (EU) on 01.01.2006. With this ban, the EU met growing concerns of researchers and consumers on possible cross-resistance of bacteria to antibiotics used in human medicine and the risk of antibiotic residues in animal derived human food (e.g. meat). Economic losses resulting from this ban were calculated to be 5-9% in weaned piglets (PFIRTER, 2003). As a consequence, great efforts have been made to find alternative solutions that can replace AGP's in animal production. Possible alternative feed additives include organic acids, probiotics, but also plant based (phytogenic) products. Phytogenic feed additives are combinations of plant extracts and herbs and spices. They exhibit a variety of different effects such as stimulation of digestive processes leading to improved nutrient digestibility, anti-inflammatory and immunomodulatory effects. The phytogenic product FRESTA F Conc. is a standardised combination of selected essential oils with herbs and spices rich in pungent substances, flavonoids and mucilages. FRESTA F Conc. was developed for application in ready mixed feed for sows and piglets. The objective of the present study was to investigate the effects of FRESTA F Conc. in weaned piglets under commercial conditions in Spain. Materials and Methods The experiment was carried out between February and April 2007 at a commercial farm in Spain. A total of 360 piglets were selected at weaning and sorted according to bodyweight, sex, and litter origin and then allocated to 36 pens in 3 weaner rooms (12 pens per room). The two dietary treatments negative control (NC) and FRESTA F Conc. (FFC) were allocated to the pens of male and female piglets by block, so that each treatment was applied to 18 pens of 10 piglets. The stocking density was approximately 0.63 m2 / piglet. The house was lit by a combination of day and artificial Seite 72 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives light. Heating was provided from electrical tube-heaters and ventilation was achieved by single, variable-speed fans linked to temperature sensors. Diets consisted mainly of barley, maize, wheat, extruded soybeans and soybean meal and vitamin and mineral additives and were formulated without AGP’s or alternatives (e.g. organic acids/salts, high Cu/Zn etc.). For each feeding period (prestarter and starter), both diets were calculated to be isonutritive and to meet or exceed EU maximum permitted concentrations for trace minerals or vitamins. Weighed samples of FRESTA F Conc. were mixed with soybean meal before being added to the diets at final concentrations of 250 ppm. Nutrient composition in prestarter and starter feeds were similar for both treatments (Table 1). Feed and water were ad libitum available. Feed consumption (per pen) and body weight (individually and per pen) were recorded at the beginning of the experiment, at feed change (from pre-starter to starter), and at the end of the experiment and feed conversion was calculated. Table 1: Analysed nutrients in experimental diets Prestarter (28-42 d) Starter (42-70 d) NC FFC NC FFC Dry matter (%) 90.6 90.2 88.4 88.3 Crude protein (%) 17.7 18.7 17.6 17.7 Starch (%) 36.1 37.7 42.2 42.5 Ether extract (%) 6.2 6.1 4.5 5.0 Crude fibre (%) 2.7 2.7 3.8 3.8 Ash (%) 8.5 6.2 5.0 5.1 Statistical analyses were performed using SAS for Windows, applying a General Linear Model (GLM) procedure with treatment, sex and room as fixed factors and initial bodyweight as covariable. The data is presented as least square means; statistical significance is declared at P ≤ 0.05, and a nearsignificant trend at 0.05 < P ≤ 0.10. Results and Discussion The health and performance of the animals were considered normal throughout the study. There were 4 death/culls (1.11 %) during the prestarter period and 19 further death/culls during the starter period. Total mortality/cull rate to 70 days was 23/360 (6.4%) and this was not related to treatment (Table 2). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 73 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 2: Mortality during the experiment NC FFC SEM1 P Prestarter phase (28-42 d) 0.56 1.67 0.662 0.2442 Starter phase (42-70 d) 7.34 3.33 1.722 0.1096 Whole experiment (28-70 d) 7.78 5.00 1.908 0.3111 Body weight development of animals is shown in Table 3. Piglets fed on the FRESTA F Conc. supplemented diets grew 7.3% more than the control piglets to 42 days of age and weighed 5.5% more than control piglets at 70 days of age. Table 3: Bodyweight development in weaned piglets Days of age NC FFC SEM1 P 28 d 8.37 8.35 -- -- 42 d 9.6 10.3 0.06 <0.0001 70 d 21.9 23.1 0.36 0.0196 The effect of treatment on average daily gain, daily feed intake and feed conversion ratio is shown in Table 4. During the prestarter period FRESTA F Conc. piglets grew more, ate more feed, and had better feed conversion rate than control piglets. During the starter period no significant differences were observed for any of the parameters studied. For the whole experimental period (from 28 to 70 days of age), FRESTA F Conc. supplemented piglets grew 9.4 % more than controls. No significant differences were found on feed intake or feed conversion rate. No significant differences were found on total number of piglets requiring treatment with injectable antibiotics. However, control piglets were re-injected more times than FRESTA F Conc. piglets (Table 5). Less number of re-injections in FRESTA F Conc. supplemented animals could indicate a quicker recovery from diarrhoea compared to control piglets. As a result, FRESTA F Conc. supplemented animals exhibited better growth and feed intake than control piglets in the prestarter period. Seite 74 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 4: Growth performance in weaned piglets NC FFC SEM1 P ADG, g/d 86.6 135.4 4.12 <0.0001 ADFI, g/d 169.3 182.7 2.40 0.0005 FCR, g feed/g gain 2.08 1.38 0.104 <0.0001 ADG, g/d 439.5 460.6 12.16 0.2327 ADFI, g/d 570.4 600.7 16.12 0.1950 FCR, g feed/g gain 1.31 1.32 0.037 0.8692 ADG, g/d 321.9 352.2 8.64 0.0196 ADFI, g/d 436.7 461.4 10.84 0.1190 FCR, g feed/g gain 1.37 1.32 0.035 0.3661 Prestarter phase (28-42 d) Starter phase (42-70 d) Whole experiment (28-70 d) Table 5: Number of piglets injected and repetition of injections (number of injections per piglet) NC FFC SEM1 P Piglets injected, nº pigs/rep 3.78 3.39 0.489 0.5776 Repetitions, nº re-injections 1.66 1.33 0.126 0.0685 Days of age Conclusions It can be concluded from the present experiment that the supplementation of the phytogenic feed additive FRESTA F Conc. at a dosage of 250 ppm in prestarter and starter feed significantly improved growth performance in weaned piglets. References Pfirter, H.P. 2003. AML-Verbot: Alternative Futterzusatzstoffe zur Leistungsverbesserung. Tagungsbericht „Gesunde Nutztiere – Heutiger Stellenwert der Futterzusatzstoffe in der Tierernährung“. Schriftenreihe aus dem Institut für Nutztierwissenschaften Ernährung-Produkte-Umwelt, ETH-Zürich, Band 24, 63-71. Autorenanschrift Dr. Karola Wendler Delacon Biotechnik GmbH Weissenwolffstr. 14 A-4221 Steyregg, Austria 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 75 Firmensponsoring – DELACON BIOTECHNIK GmbH , Weissenwolffstr. 14, A-4221 Steyregg Seite 76 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Interaction between phytogenic feed additives and growth intensity of pigs Ladislav Zeman, Petr Mares, Michal Vecerek and Ludvik Novak Mendel University of Agriculture and Forestry Brno Introduction The plant additives and their functional components can selectively influence the intestinal microorganism growth in positive or negative direction. If the growth promotion relates with positive microorganisms and growth elimination is connected with pathogens the result is nutrients utilization improvement, stimulation of immunologic system or positive influence of intermedial metabolism. Anethole is one of these important plant metabolites. There are described following positive effects of anethole in human medicine: vasorelaxant, antithrombotic, releasing of heart function, fytoestrogenic (it mean improving of milk secretion, menstruation, promotion of menses, birth improvement, men’s hormonal changes improving, sexual libido improving), antioxidative, antifungal, improvement of derma permeability, antihelmintic, insecticidal, yeast elimination, antibacterial, antipyretic. In our work the effect of anise and fennel essential oils on nutrients utilization in pig experiment was evaluated. And the influence on growth intensity was monitored. The trials were realized in accredited experimental stable Žabcice of Mendel University of Agriculture and Forestry Brno. The high level efficiency of experimental animals is mentioned through general parameters (average daily gain, feed intake and feed conversion). The results of nutrients utilization rate show slightly higher digestibility of nutrients in treatment with anise oil, this improvement is not higher then 1.0 %. We can see also improvement of nitrogen retention in body mass on level of 5.6 % (anise treatment compared with control group). There is low variability between experimental animals (except nitrogen retention coefficient) but we can not see any statistical significance. On base of these results we can say the used phytogenic additives do not affect negatively the nutrient utilization in used concentration (0.1 % of essential oil in feed mixture) and are fully eligible for animal nutrition. These results are also supported by few research papers connected with similar topic. In feeding experiment we can see no effect of Anise oil addition on growth intensity parameters. The main active compound of essential oil that is evaluated in our experiments is anethole. The chemical name is (E)-1-methoxy-4-prop-1-enyl benzene. 1: Chemical structure of anethole 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 77 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Anethole is known since first half of 20th century. It is aromatic unsaturated ether from phenylpropanoids family. Anethole as secondary metabolite is compound in anise oils obtained from few plant species: Pimpinella anisum (anise), Illicium verum (star anise) or Foeniculum vulgare (fennel); in firs two kinds of essential oils is anethole content higher (on level of 80–90 %) and in fennel oil is lower (50–60 %). The most effective way to obtain anethole essential oil is from star anise that is not common in Central Europe. The safe anethole intake for organisms is 125 mg per kg of live body weight (WHO Report, Nacagawa and Suzuki, 2003 or Poon and Freeman, 2006). Anethole is in nature products in trans-isomer and all positive effects are connected with this form. On second hand the cis-anethole is toxic and its content in plant metabolic pathways is very low – under the toxicity level. The related chemical stuffs (anisaldehyde, anise acid) cause the typical anise aroma. Anetholedithiolethion (anethole-trithione) is derivate that is widely used in human medicine as sialagogue, anticongestive, sedative, cholereticum or antioxidancium (Khana et al., 1998; Pazaud a Rat, 2001; Li et al., 2008; Li et al., 2007, Kwak et al., 2007). The effect of trans-anethole is mentioned in several papers and is connected with vasorelaxants, antitrombotic, heart relaxant influence (Tognolini et al. (2007), Soares et al., (2007) or Siqueira et al. (2006) and Siqueira et al. (2006a). Phytoestrogenic effect is described in work of Nacagawa and Suzuki, 2003 and Tabanca et al., 2004. Synthetic fytoestrogens used in this time belong to dianetholes or photoanetholes (Albert-Puleo, 1980). Antioxidative effect of anethole is mentioned in work of Wang et al. (2008), Veronikami and Gavalas (2006) or Misharina a Polshkova (2005). Antifungal properties are desribed in experiment made by Fontenelle et al. (2008), Fujita et al. (2007) Lee et al. (2007), Soylu et al. (2006), Kordali et al. (2005) or Fujita and Kuhn (2004). Antihelmintic properties are part of work of Camurca-Vasconcelos et al. (2007) and insecticide effect is desribed in work of Knio et al. (2008), Park et al. (2006) or Morais et al. (2006). The anethole products are used also in tooth hygiene because of effective elimination of Candida yeasts (Marotta et al., 2006). Antibacterial effects are published by Kordali et al. (2005), Karapinar (1990) or Shimoni et al. (2003). Material and Methods A two experiment were realized in frame of this work. First experiment was related with nutrient digestibility determination and second experiment with evaluation of growth intensity of young pigs’ category. In experiments were used negative control and treatments with essential oil content in feed mixture as is mentioned bellow. The experiments run in experimental stable of Mendel University of Agriculture and Forestry Brno. In experiment were used pigs of hybrid combination PIC. In our work were used essential oils from anise (Pimpinella anisum) and fennel (Foenicullum vulgare) that belong to order Cornales and family Apiaceae. The feed mixtures were based on wheat, barley, soya extract meal, fish meal (only second experiment) and vitamins – mineral components. The statistical evaluation used single-factor analysis. First experiment Eight male pigs with initial body weight 40.95 ± 1.05 kg enter the experiment in balance cages. The efficiency and nutrient digestibility of negative control feed mixture were compared with mixtures supplemented by anise and fennel essential oils. Analyses of nutrient content and feed mixture quality were based on Czech legislation Act No. 124/2001 Sb. that determines system of samples taken and analyses. The analyses were realized at university laboratories. Before experiment the pigs were treated by antibiotics and antihelmintic to standardize its intestinal microflora. The feed mixtures were Seite 78 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives feed to pigs in seven weeks and the amount of feed intake and exretas were recorded. Mixture was offered semi-adlibitum to be eaten in 30 minutes by all pigs. The excreta were lyophilized (except urea that was conserved by HCl). Water intake was not limited. There was recorded the temperature and humidity in stable. Essential oils were mixed with maize starch and added into experimental feed mixture in rate of 0.5 %. The digestibility of dry matter, crude protein, crude fibre, fat and ash and energy was analyzed. The retention of nitrogen in organism was also evaluated. Second experiment The amount of 114 pigs with initial body weight 11.65 ± 2.39 kg entered the experiment in two repetitions. Piglets were housed in three different pens with plastic perfored floor with heated mattress, two feeding pump, and feeder with 6 places. The pen’s area was 6.3 m2 per 19 animals. Piglets were weight every two weeks and the experiment duration was 28 days. Individual body weight was measured with accuracy ± 25 grams. Piglets were identified by individual ear-marks. In the stable were measured and recorded automatically the air temperature and humidity every 30 minutes all day. The feed mixture was based on following compounds: wheat, barley, soybean extract meal (45 % of crude protein - CP), fish meal, rape oil, milk products, mineral and vitamin additives. The experimental treatment was realized by supplementation of anise oil comparing with untreated control (group A). First experimental mixture contained 0.05 % of essential oil (group B) and second experimental mixture contained 0.15 % of concentrated essential oil (group C). The procedure included the pre-supplementation of anise oil into rape oil that was added into feed mixture in rate of 2 %. The mixture was granulated (4 mm pellets). Feed intake of feed mixture was not limited and was measured on pen level. Results and discussion In the first experiment was the initial pig weight 41.0 ± 1.0 kg. During experimental period was the average daily gain on level 1.06 ± 0.06 kg and the average daily feed intake 2.63 kg/day/animal. The results show slightly higher digestibility of nutrients in mixture with anise essential oil, but these differences were not higher then 1 %. The retention of crude protein was higher of 5,6 comparing with control in this treatment. No of these differences was statistical significant. The differences between control and treatment with fennel oil was even lower and also without statistical significances. This experiment makes us sure that these feeding additives do not affect the digestibility negatively and in selected rate are available for other testing. In second experiment was used only anise oil as supplement with higher content of anethole. As we can see in Table 1 the growth rate of treated groups was slightly under the growth rate of control group but the differences was not significant. No significant differences were found out also in feed intake evaluation. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 79 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 1: Main results OF second experiment Group Initial weight (kg) Final weight (kg) Average daily gain (kg/animal/day) A 11,63 ± 2,48 27,71 ± 5,44 0,578 ± 0,120 B 11,68 ± 2,39 27,61 ± 5,73 0,567 ± 0,127 C 11,63 ± 2,28 27,34 ± 5,00 0,561 ± 0,111 The influence of digestibility by anethole essentials oils is missing in research papers but we can find relatively enough information about effect of these supplements on growth parameters. These papers usually describe positive effect of these additives that was not confirmed in our work. The decreasing of digestibility coefficients were found out after supplementation of feed by mixture of fennel, coriander plants substrates in rates of 1.5 %. The decreasing of crude proteins digestibility is described in experiments with laboratory rats (Pradeep a Geervani, 1994). The team of authors (Cross et al, 2007) evaluated the effect of different plant extract on nutrient digestibility and growth intensity in broilers production. Few methodological matters was used in our work. While this team could see some significant influence of growth parameters no effect on digestibility was found out. The improvement of chick broilers mention for example Ghalib (2008); this improvement is found out in this paper on level 24 % in treatments with 1 % of anise essentials oil in feedstuff and on level 17 % in treatments with 0.5 % of the same additive. Kroismayr et al. (2008) mention that in their work the commercial additive included also the anise oil improved sows efficiency. The feed intake was higher of 2 %, the piglets gain was higher of 5 % and birth live weight of piglets of 6 % higher. We can see high improvement of growth parameters in work of Ertas et al. (2005), Simsek et al. (2005) and Ciftci et al. (2005). They used anise essentials oil in experiments with broilers and all paper comes from same research team, the essentials oils concentration was on level of 0.02 – 0.04 % in feed mixture. Improvement up to 19 % of broilers daily weight gain is described in work of El-Deeka et al. (2003), digestibility rate was not monitored. Eiben et al. combined the anise substrates with substrates from plant Trigonellae foenum-graecum in experiments with rabbits and their results describe more likely negative effect of these additives. Summary The antibiotics usage was criticized in all Europe because of high risks of pathogen resistance on these medicaments that are used consequently in animal and human medicine. New alternative ways to protect and improve an animal health are to be founded in relation with this antibiotics ban and other regulations. Rosen (1996) classified this potential matters as pronutrients and the groups called like this are for example probiotics, prebiotics, organic acids, diet fiber and also herbs, spices and plant extracts. The effect of these pronutrients on livestock efficiency has huge range. Generally, the positive effect is higher in low efficiency conditions (bad health status, low quality of quality hygienic conditions, temperature-humidity status, nutrition or management. The plant additives and their functional components can selectively influence the intestinal microorganism growth in positive or negative direction. If the growth improving relates with positive microorganisms and growth elimination is connected pathogens the results is nutrients utilization improving, stimulation of Seite 80 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives immunologic system or positive influence of intermedial metabolism. These properties are evaluated in vitro in huge amount of research papers. The transfer of these results into life intestinal conditions is not easy. The phytogenic additives are here in different conditions and are affected by synergistic or antagonistic connections with other feedstuffs components and others (Wenk, 2000). The main positive properties are antiviral, coccidiostatic, antifungal (Tassou et all., 2004, Shylaja et all., 2004). One of these important plant metabolites is anethole. Anethole additives are obtained mainly from plant species Pimpinella anisum (aniseed), Illicium verum (star anise) or Foeniculum vulgare (fennel); from firs two mentioned plants we can obtain essential oil with 80 – 90 % amount of anethole, in fennel essential oil there is 50 – 60 % of anethole. The most economic effect is connected with star anise essential oil but it is plat that is not common in Middle Europe. In human medicine there are described following positive effects of anethole: vasorelaxant, antithrombotic, releasing of heart function, fytoestrogenic (it mean improving of milk secretion, menstruation, promotion of menses, birth improving, men’s hormonal changes improving, sexual libido improving), antioxidative, antifungal, improving of derma permeability, antihelmintic, insecticidal, yeast elimination, antibacterial, antipyretic. In our work was evaluated effect of anise and fennel essential oils on nutrients utilization and grow intensity in pig experiment. The trial was organized in accredited experimental stable Žabcice of Mendel University of Agriculture and Forestry Brno. The high level efficiency of experimental animals is mentioned through general parameters (average daily gain, feed intake and feed conversion). The results of nutrients utilization rate show slightly higher digestibility of nutrients in treatment with anise oil, these improving is not higher then 1.0 %. We can see also improving on nitrogen retention in body mass on level of 5.6 % (anise treatment compared with control group). There is low variability between experimental animals (except nitrogen retention coefficient) but we can see any statistical significance. On base of these results we can say the used phytogenic additives do not affect negatively the nutrient utilization in used concentration (0.1 % of essential oil in feed mixture) and are fully eligible for animal nutrition. We did not see and positive or negative influence of growth intensity by experimental treatments. These results are also supported by few research papers connected with similar topic. On opposite site we did not see and positive or negative influence of growth intensity by experimental treatments and it is different from some mentioned research papers of other authors. Acknowledgement The work and presentation of its results is supported in frame of financed project No. NAZV QG 60118. Literature Albert-Puleo, M., 1980: Fennel and anise as estrogenic agents. In J Ethnopharmacol: Dec. 2 (4): 337 – 44 Ciftci, M., Talat, G., Dalkilic, B., Ertas, O.N. 2005 The Effect of Anise Oil (Pimpinela anisum) on Broiler Performance In International Journal of Poultry Science, 4 (11): 851-855. ISSN: 1682, 8356 Cross. D.E., MC.Dewitt, R., M., Hillman, K., Acamovic, T., 2007: The Effect of herbs and their associated Essentials oils on performance, dietetary digestibiliy and gut microflora in chicken from 7 to 28 days of age. In British Poultry Science, Aug. 48 (4): 496 – 506. ISSN 0007 - 1668 Eiben C.S., Rashwan, A.A., Kustok, K., Godor-Surmann, K., Szendro: 2008, Effect of anise and Fenugreek supplementation on performance of Rabbit does El-Deek, A. A., Attia, Y. A., Maysa, M Hannfy: 2003. Effect of anise (pimpinella anisum), ginger /zingiber officinale roscoe) and fennel (foeniculum vulgare) and thein mixtures on performance of broilers. Arch. Geflugelk, 67 (2), 92-96, ISSN 0003-9098 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 81 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Ertas, O. N., Guller, T., Ciftci., M., Dalkilic, B., Simek, G., 2005: The Effect of an Essentials Oil Mix Derived from Oregano, Clove and Anise on Broiler Performance. In International Jopurnal of Poultry Science 4 (11): 879 – 884. Fontenelle, R.O., Morais, S.M., Brito. E.H., Briliante R.S., Cordeiro, R.A. Nascimento, N.R., Kerntopf, M.R., Sidrim J.J., Rocha, M.F., 2008, Antigfungal activity oils of Croton species from Brazilian Caatinga biome. In J Appl Micrbiol, May, 104(5): 1383-90 Fujita, K, Kuhn, I (2004) Potentiation of fungicidal activities of trans-anethole against Saccharomyces cerevisce under hypoxic conditions. in J Biosci Bioeng: 98 (6): 490-2. Fujita, K., Fujita, T., Kuhn, I 2007 Anethole, a potential antimicrobial synergist, converts a fungistatic dodecanol to fungicidal agent. In Phytoter Res, Jan, 21(1): 47-51 Ghalib A. M. A. 2008. The Effect of Anise and Rosemary on Broiler Performance. International Journal of Poultry Science 7 (3): 243 – 245. ISSN 1682-8356 Khana, S., Sen, Ch. K., Roy, S., Christen, M.-O., Packer, L., 1998: Protective Effects of Anethole Dithioletthione against Oxidative Stress-induced Cytotoxicity in Human Jukat T Cells. In Biochemical Pharmacology, Vol. 56,: 61 – 69, ISSN 0006-2952 Knio, K.M., Usta, J., Dagher S, Zournajian H., Kreydiyyeh S, 2008, Larvicidal activity of Essentials oils extracted from commonly used hernb in Libanon against the seaside mosquito, Ochierotatus caspius. In Bioresour Technik Mar. 99(4): 763-8 Kordali S., Kotan R, Mavi, A., Cakir, A., Ala, A., Yildrim, A.: 2005, Determinationof the chemical composition and antioxidant activity of the Essentials oil of Artemisia draculonous and of the antifungal and antimicrobial activities of Turkish Artemisia absintum A draculuncus, Artemisia santonicum, and Artemisia spicingera essencial oils. In J Agric Food Chem Nov. 30; 532 (24): 9452-8 Kroismayr, A., Hsun, C., Racousier, M. Steiner, T. (2007). Effect of a phytogenic additive on reproduction performance of sows. In J. Anim. Sci., Vol. 85, Suppl. 1. ISSN 1525-3163 Kwak, M. K., Juany, B., Chány, H., Kim., J.A., Kensler, T, W. 2007: Tissue specific increase of the catalytic subunits of hte 26S proteasome by indirect antioxidant dithiolethione in mice: enhanced activity for degradation of abnormal protein. In Life Sci, Jun, 6, 80 (26): 2411-20 Lee, S.O., Park I.K., Choi, G.J., Lim, H.K., Jang, K.S., Cho, K.Y., Shin, S.C., Kim, J.C. 2007 Fumigant activity of Essentials oils and components of Illicium verum and Schizonapete tenuifolia agains Botrytis cinera nad Colletotichum goespoiodes. In J Microbiol Biotechnik Sep, 17(9), 1568-72 Li, T., Zhang, Z, Jiao, H., Zhang, L., Tian, Y., Chen. Y., Pang, X., Zhuang, J. 2007: Determination of anethole trione in human plasma usány high performance liguid chromatrography coupled with tandem mass spectrometric detection. In Anal Chim Acta: Jul 2, 594(2):274-8 Li, W., Deng, J., Qiao, J., Li Q., Zhang Y., 2008. HPLC determination of 4-hydroxi-anethole trithione in plasma via enzymatic hydrolysis and its application to bioquivalence study. In J Pharma Biomed Anal, Jul 15 47 (3): 612-7 Marotta, F., Barreto, R., Kawakita, S., Minelli, E., Pavasuthipaisí, K., Lorenzetti, A., Nasbiwaki, M., Glosa, F., Fesce, E., Okura, R., 2006, Preventive strategy for Candida gut translocation during ischemia-repefusion injury supervening on protein malnutrition. In Chin J Dig Dis 7 (1): 33 – 8 Morais S. M., Cavalcanti E.S. Bertini, L.M., Oliviera, C.L. Rodriques, J.R., Cardovo, J.H. 2006. Lavicidal activiti of Essentials oil from Brazilian CCroton species against Adres aegypti L. In J am Mosg Kontrol Assoc. March, 22 (1): 161-4 Nacagawa, Y., Sužuji, T., 2003. Cytotoxic and xenoestrogenic effects via biotransformation of trans-anethole. In Biochemical Pharmacology, 66 (1) 63-73 ISSN 0006-2952 Park, I. K., Choi, K.S. Kim, D.H, Choi, IH, Kim, L.S., Bak, W.C., Choi, J,W, Shin, S.C. 2006, Fumigant activity of plant Essentials oils and components from horseradish (armoracia rusticana) anise (Pimpinella anisum) and garlic (allium sativum) oils against Lycoriella inenua (Diptera, Sciaridae). In Pest Manag Sci, Aug, 62(8): 723-8 Poon, T. S., Freeman S., 2006 Cheilitis cause by contact allergy to anethol in spearmint flavoured toothpaste. In Australan J Dermatos. Nov 47 (4): 300-1 Pouzaud, F., Rat, P. 2001, Role of Anethole Dithioletthione (ADT) to Protect against Tenotoxicity Induced by Fluoroguinolones. In Abstr Intersci Conf Antimirob Agents Chemother Intersci Antimicrob Agents Chemother. Dec 16 – 19; 41. Abstrakt No. A – 638 Pradeep K.U., Geervani. P., 1994: Influence of spices on protein utilization of Winter bean (Psophocarpus tetragonolobus) and horsefram (Dolichus biflorus) In Plant Foods Hum Nutr. Oct, 46 (3): 187 – 93 Shimoni, E., Baasov, T., Ravid, U., Sholam Y.: 2003. Biotransformation of propenylbenzenes by an Arthrobacter s pand its tanethole blocked mutans. In J Biotechnik, Oct 9, 105 (1-2): 61 – 70. Simsek, U., G., Guller, T., Ciftci, M., Ertas, O, N., Dalkilic, 2005: The Effect of an essence Oil Mix (Derived from Oregano, Clove and Anise) on Body Weight and Carcass characteristic in Broiler. In Vet. Fak. Derg, 16 (2): 1 – 5. Siqueira de R., J., Magalhaes, P., J., Leal-Cardoso J., H., Duarte G., P., Lahlou, S.: 2006: Cardivascular effects of Essentials oil of Croton zehntneri leaves and its main constituents anethole and estragone, in normotensive concious rats. In Life Sci. Apr, 11, 78 (20): 2365-72 Seite 82 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Siqueira R, Leal-Cardoso, J, Couture, R., Lahlou, S., 2006a, Role of capsaicin-sensitive sensory nerves in mediation of the cardiovasular effets of the Essentials oil of Croton zehntneri leaves in anaestezed rats. In C,lin Exp Pharmacol Physiol, Mar, 33 ( 3): 328-47 Soares P.M., Lima, R. F., de Freitas Pires, A., Souza E.P., Assreuy A. M. Criddle D.N., 2007, Effects of anethole and structural analogues on the contractility of rat isolatér aorta : Inolment of voltage dependent CA 2+channels. In Life Sci, Sep 8, 81(13): 1085-83 Soylu, E. M. Soylu, S., Kurt. S., 2006, Antimicrobial activites of Essentials oils of various plants against tomato late blight disease agent Phytophora infestans in Mycopatologia, Feb, 161 (2): 119 – 28 Tabanca N., Khan SI, Beder, E, Annavarapu, S, Willett, K., Khan, I. A., Kirimer N., Baser, K. H.: 2004 Estrogenic activity of isolated compound and Essentials oils of Pimpinela species from Turkey, evaluated usány a recombinant trast screen. In Planta Med. Aug: 70 (8): 728 – 35. Toqnolini, M., Ballabeni, V., Bertolni, S., Bruni, R., Impicciatore M., Barocceli, E: 2007. Protective effect of Foeniculum vulgare Essentials oil and anethole in an experimental model of thrombosis. In Pharmacol Res. Sep. 56 (3): 254-60 Veronikami, A.A., Gavalas, A.M., 2006, Antioxidants and inflammatory disease: synthetic and natural antioxidants with antiinflammatory activity. In Bomb Chem High Throughput Screen Jul, 9 (6): 425-42 96 Wang C.Y., Wang S.Y., Chen:C. 2008. Increasing antioxidant activitiy and reducing decay by blueberries Essentials oils. In JH Agric Food Chem. May 28, 56(10): 3587-92 Contact address Ing. Petr Mares, Department of Animal Nutrition and Forage Production, Mendel University of Agriculture and Forestry Brno 61300 Brno, Czech Republic, e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 83 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Transfer von Carvacrol beim Schwein Wofgang Wetscherek1, Wilhelm Windisch1, Johann Oswald1, Arthur Kroismayr1 und Karin Zitterl-Egelseer2 1 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebnensmittelwissenschaften und -technologie 2 Veterinärmedizinische Universität Wien, Department für Nutztiere und öffentliches Gesundheitswesen in der Veterinärmedizin Einleitung Im ätherischen Öl von Oregano ist Carvacrol in relativ großen Mengen enthalten. Viele Untersuchungen mit den zur Zeit sehr modernen phytogenen Futterzusatzstoffen beobachteten nur Leistungseffekte und spekulierten über deren Ursache (Windisch et al. 2008). In den hier dargestellten Untersuchungen mit Aufzuchtferkel und Zuchtsauen wird der Versuch unternommen, Transfervorgänge beim Schwein für Carvacrol aus dem Futter in den Blutkreislauf sowie die Ausscheidung über den Harn oder eventuelle Einlagerungen in Fleisch, Fett, Leber, Niere und Milz zu bestimmen. Zusätzlich wurde der Transfer von Carvacrol in die Sauenmilch geprüft. Material und Methoden Ferk elaufzuchtversuch Die für die Untersuchung verwendeten Ferkel stammten aus der eigenen Nachzucht des Betriebes. Es handelte sich dabei um F1-Kreuzungstiere der Rassen Edelschwein x Pietrain. Die mit einem Alter von 28 Tagen abgesetzte Aufzuchtferkel wurden mit einer mehligen Absetzfuttermischung über Futterautomaten ad libitum gefüttert. Dem Futter wurde ein ätherisches Öl, welches von Oregano gewonnen wurde, zugesetzt. In der dritten Versuchswoche wurden individuelle Kotproben von jedem Ferkel über mehrere Tage gesammelt, vermischt und für spätere Analysen tiefgefroren. Die scheinbare Verdaulichkeit wurde mittels Indikatormethode bestimmt. Als Indikator wurde der Gehalt an salzsäureunlöslicher Asche verwendet. Weiters wurden nach der dritten Versuchswoche 12 Ferkel geschlachtet und Gewebeproben von Bauchhöhlenfett, Lungenbraten, Leber, Niere und Milz gezogen und bei -20° C tiefgefroren. Ebenfalls Seite 84 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives wurde von diesen Tieren bei der Schlachtung frisches Blut aufgefangen, mit Heparin versetzt und zentrifugiert. Dem Blutplasma wurde zur Stabilisierung jeweils 40 µl Essigsäure 0,58 M pro ml Plasma zugesetzt und das Plasma bei -20°C gelagert. Zuchtsauenversuch 22 tragende Zuchtsauen der Rasse Edelschwein wurden mit 2 g / kg gemahlenem Oregano im Alleinfutter für tragende Zuchtsauen gefüttert. Am Ende der zweiten Versuchswoche wurden Kot, Harn und Blutproben gesammelt und daraus analog dem Ferkelaufzuchtversuch Blutplasma gewonnen. Die Lagerung aller gewonnen Proben erfolgte bei -20° C. Die scheinbare Verdaulichkeit wurde mittels Indikatormethode bestimmt. Als Indikator wurde der Gehalt an salzsäureunlöslicher Asche verwendet. In einer darauf folgenden Untersuchung wurden 12 Zuchtsauen mit 2 g / kg gemahlenen Oregano im Alleinfutter für säugende Zuchtsauen gefüttert und am Ende der Säugeperiode Milchproben gezogen und tief gefroren gelagert. Aufbereitung der Futterproben zur Bestim m ung der ätherischen Ölkom ponenten Die Quantifizierung der ätherischen Ölkomponenten in den Futtermitteln erfolgte mittels GC/MS nach einer Festphasenmikroextraktion (SPME). Dafür wurde 1,00 g Futter mit 2,0 ml Dichlormethan versetzt und 15 min. im Ultraschallwasserbad extrahiert. Das Extrakt wurde mit einem internen Standard (o-Cresol) versehen und gaschromatographisch bestimmt. Aufbereitung der M ilch- bzw . Blutplasm aproben zur Bestim m ung der ätherischen Ölkom ponenten Das Plasma wurde nach dem Auftauen nochmals zentrifugiert (5 min., 10.000 rpm). Nach Überführung von 1,00 ml Plasma bzw. Milch in ein Reagenzglas mit Lamellenstopfen wurden 40 µl Essigsäure 0,58 M und 100 µl β-Glucuronidaselösung (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) zugesetzt. Anschließend erfolgte eine Inkubation bei 37°C im Wasserbad für 30 min. Danach wurden 50 µl interne Standardlösung (40,0 mg o-Cresol gelöst in 2 ml Methanol, aufgefüllt mit Aqua dest. ad 100 ml, verdünnt mit Aqua dest. 1:10) zugesetzt. In ein 10 ml-Headspace Vial wurden 1,0 g NaCl (Suprapur®, Merck, Deutschland) eingewogen, 100 µl H3PO4 hinzupipettiert und ein Magnetrührkern sowie das behandelte Plasma zugegeben. Aufbereitung der Fleisch- (Leber, Niere, M ilz, Lungenbraten, Bauchhöhlenfett) und K otproben 3,00 g der vorzerkleinerten Gewebe- bzw. Kotprobe wurden in ein 20 ml-Probenfläschchen eingewogen, mit 5 ml Aqua dest. versetzt und anschließend mit dem Ultraturrax homogenisiert. Danach wurden 200 µl Essigsäure 0,58 M und 200 µl ß-Glucuronidaselösung (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) hinzugegeben und die Probe bei 37°C für 30 min., verschlossen mit einem Septum, inkubiert. Anschließend erfolgte die Zugabe von 1,0 g NaCl (Suprapur®, Merck, Deutschland), 50 µl interner Standardlösung (40,0 mg o-Cresol gelöst in 2 ml Methanol, aufgefüllt mit Aqua dest. ad 100 ml, verdünnt mit Aqua dest. 1:5), 100 µl H3PO4 und einem Magnetrührkern. W eitere Aufbereitung und B estim m ung der ätherischen Ölkom ponenten Das Probenfläschchen mit der vorbereiteten Probe (Plasma, Fleisch, Kot) wurde luftdicht mit Alukappe und Septum verschlossen und der Inhalt am Magnetrührer kurz durchgerührt. Dann wurde mit einer Nadel das Septum durchstochen und durch dieses Loch der Faserhalter mit der Polydimethylsiloxandivinylbenzen- (PDMS-DVB) Faser (65µm, Supelco, Bellefonte, PA, USA) geschoben. Die Inkubation der Faser in der Gasphase über der Probe erfolgte für 35 min. bei 80°C mit 750 rpm im Wasserbad am Magnetrührer. Anschließend wurde die Faser in den Injektorblock des GC/MS-Gerätes überführt 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 85 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives und dort 5 min. bei 250°C desorbiert. Zur Reinigung wurde die Faser vor Beginn jeder weiteren Exposition 10 min. bei 250°C im Injektorblock ausgeglüht. Die Analyse erfolgte mit einem Gaschromatographiegerät (HP 6890) mit massenselektivem Detektor (HP 5972) (Agilent Technologies GmbH, Willmington, DE, USA) an einer 30 m x 0,25 mm Kapillarsäule (Restek Corporation, Bellefonte, PA, USA) bei einem Splitverhältnis von 1:1. Die Starttemperatur von 60°C wurde für 5 min. gehalten, dann wurde mit einer Aufheizrate von 4°C pro min. auf 120°C und weiter mit 20°C pro min. auf 240°C aufgeheizt. Die Nachheizphase bei 300°C dauerte 5 min. Unter diesen Bedingungen eluierte Carvacrol nach ca. 20 min. Ergebnisse Futter Carvacrol als Hauptkomponente von Oregano erreichte im Ferkelfutter mit 15,1 mg/kg den höchsten Wert der ätherischen Ölkomponenten. Im Alleinfutter für tragende Sauen wurden 33,3 mg/kg Carvacrol bestimmt. Das Alleinfutter für säugende Sauen enthielt 27,8 mg/ kg Carvacrol. Scheinbare Verdaulichk eit Die scheinbare Verdaulichkeit von Carvacrol lag bei den tragenden Zuchtsauen bei 96,5 % und Aufzuchtferkeln bei 99,6 %. Dies bedeutet, dass diese Substanz fast zur Gänze resorbiert wurde. Blutplasm a Im Blutplasma der Ferkel konnten mit der SPME-GC/MS-Analytik Carvacrol-Werte von 106-171 ng/ml gefunden werden. Im Blutplasma der tragenden Sauen konnten Durchschnittswerte von 216 ng/ml für Carvacrol festgestellt werden. Die Ergebnisse lagen somit in ähnlicher Höhe wie bei den Ferkeln. Harn Die Untersuchung der Harnproben der tragende Zuchtsauen zeigte erwartungsgemäß große Schwankungen in Abhängigkeit der aufgenommenen Wassermengen. Im Durchschnitt lagen die Werte für Carvacrol bei 1982 ng/ml. Gew ebeuntersuchungen In den Leber-, Milz-, Bauchhöhlenfett- und Lungenbratenproben konnten keine ätherischen Ölkomponenten mit dieser Methode gefunden werden. Im Nierengewebe konnten bei den Ferkeln Werte von 122 ng/g für Carvacrol bestimmt werden. Sauenm ilch In den Milchproben konnten mit 13,5 ng/ml Carvacrol im Durchschnitt nur extrem geringe Konzentrationen analysiert werden. Unter der Berücksichtigung der Tagesmilchleistung der Sauen lässt sich für Carvacrol von etwa 0,1 % berechnen. Seite 86 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Zusammenfassung Carvacrol wird im Darm sehr gut resorbiert. Eine Einlagerung dieser Substanz in Fett, Fleisch, Leber und Milz konnte nicht nachgewiesen werden. Der Nachweis in der Niere ist durch die Ausscheidung der Substanz über den Harn erklärbar. Die Wiederfindung in der Sauenmilch ist nur in einem sehr geringen Umfang gegeben und ermöglicht dadurch keine indirekte Zufuhr an die Saugferkel mit damit verbundenen positiven Effekten. Literatur Windisch, W., K.Schedle, C. Plitzner und A. Kroismayr: Use of phytogenic products as feed aditives for swine and poultry. Journal of Animal Science 2008, 86, E140 – E148. Autorenanschrift Ao. Univ.- Prof. Dr. Wolfgang Wetscherek Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel Straße 33, 1180 Wien e-Mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 87 Firmensponsoring - BASF ChemTrade GmbH, Kornfeldgasse 21 g, A-2512 Tribuswinkel Seite 88 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additves Effect of five plant extracts on broiler performance during coccidiosis C. Ionescu1, L. Mazuranok1, M. Naciri2, A. Vikari3, and D. Bravo1 1 Pancosma Research, Geneva, Switzerland 2 INRA, Nouzilly, France 3 Pancosma S.A., Geneva, Switzerland Introduction Coccidiosis in chicken is known to impact digestive tract integrity, to induce an immune response and to reduce growth. Some plant extracts are known to be antimicrobial and immune stimulants and they could positively impact the response of a chicken in challenged conditions. The objective of this experiment was to test 5 plant extracts: Reishi (R), Shiitake (S), Berberin (B), Turmeric (T) and Chilli pepper (C) on performance and parasitical parameters in broiler chickens challenged with Eimeria acervulina. Material and methods The trial was set in 2 rooms of 36 cages with 4 chickens per cage. The animals were 288 male broiler chickens. The trial checked the differences between 12 treatments (see table 1) each consisting of 6 replicates or cages. The plant extracts were introduced in the diets from day (d) 7 to 21 and were compared to a non infected not treated (NINT) and an infected not treated (INT) group. The allocation of broilers to the treatments was made on d 7 and all animals, except those from NINT group, were challenged on d 14 with 220 000 E. acervulina sporulated oocysts. During the trial, both performance and parasitical parameters were observed. Performance was measured by body weight (BW), feed intake (FI) or calculated as feed conversion ratio (FCR) on d 7, 14, 18 and 21. Lesion scores were measured on d 18 and 21 and ranked between 0 and 4 (Johnson and Reid, 1970). Oocyst excretion was also measured between d 18 and 21 on collected faeces on d 21 (Hodgson, 1970). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 89 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 1: Treatments Treatments Treatments abbreviation Infection Dose of inclusion in mg/kg feed Not infected not treated NINT No 0 Infected not treated INT Yes 0 R1 Yes 35 R2 Yes 70 S1 Yes 80 S2 Yes 160 B1 Yes 40 B2 Yes 80 T1 Yes 40 T2 Yes 80 C1 Yes 30 C2 Yes 60 Reishi (R) Shiitake (S) Berberin (B) Turmeric (T) Chilli pepper (C) Statistics The GLM Procedure of SAS (SAS Institute, 2003) was used with the following model: Y= μ + Tr + ε where Y was the outcome (BW, FI…), μ the outcome of the mean, Tr the treatment with level 1 = NINT, level 2 = INT, level 3 = R, level 4 = S, level 5 = B, level 6 = T and level 7 = C where the products were tested independently of their dose and ε the residual error. Differences among treatments were analysed using Bonferroni test for performance data and Newman-Keuls test for parasitological data. Results and discussion The BW of the broilers were not different on d 7 and 14. On d 21 (see Table 2), the infection reduced BW significantly (P<0.02). Shiitake and Turmeric had intermediary BW between INT and NINT animals. The FCR during the overall trial period was increased (P>0.1) by the infection (1.58 vs. 1.43). No statistical differences could be observed on FCR between the INT group and the different IT groups. Seite 90 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additves Table 2: BW of broilers on d 7, 14 and 21 in g and FCR for the d 7-21 period Parameters Treatments NINT INT R S B T C SE 132 132 132 132 132 132 132 0.70 BW – d 14 370 367 372 366 363 363 368 2.63 BW – d 21 809a 704b 711b 729ab 706b 719ab 712b 7.06 FCR d 7-21 1.43A 1.58AB 1.58AB 1.58AB 1.61B 1.57AB 1.64B 0.01 <0.007 BW – d 7 P NS NS <0.02 Means with different letters within a line differ significantly No lesion scores (Figure 1) were observed in NINT chickens showing that there was no infection bias in this experiment. P<0.001 Figure 1: Lesions scores of broilers fed the 5 plant extracts on d 18 and d 21. On d 18, the lesion scores of broilers fed either Reishi, Shiitake or Turmeric were significantly reduced when compared to INT (P<0.001). On d 21, the lesion scores of broilers were only significantly reduced for the Reishi group when compared to INT. The differences observed in time between the 3 products could be explained by various mode of action. Both Reishi and Turmeric are known to have a ulcer-healing effect in rats. For Reishi it was due to a TNF-alpha reduction and an increased production of mucus (Gao et al., 2002). For Turmeric it was due to a decrease in some antioxidant enzymes: catalase and glutathione peroxidase generally increased by the disease (Sivalingam et al, 2007). In piglets, Shiitake induced a lower turnover of epithelial cells possibly linked to a reduction in 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 91 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives total microflora (van Nevel et al, 2003). The fact that only Reishi fed broilers still had a significant reduction in lesion score on d 21 could indicate that the TNF-alpha reduction and the increased production of mucus could be more beneficial in coccidiosis challenges than antioxidant, cell proliferation or microflora modifications. No differences in oocyst excretion (see Table 3) were measured between all the infected groups. These results indicate that the tested plant extracts did not directly act on the pathogen in situ. Table 3: Oocyst excretion (log106) between d 18 and 21 expressed as oocysts/chicken/day Treatment Oocyst excretion NINT INT R S B T C 0b 8.21a 8.28a 8.36a 8.30a 8.34a 8.50a Means with different letters are significantly different P<0.001. Conclusion On day 21, Shiitake or Turmeric groups had an increased BW compared to the INT and they could be valuable feed additives to lessen growth impact reduction due to coccidiosis. On day 18, or 4 days post-infection to E. acervulina, Shiitake, Reishi and Turmeric groups had lower lesion scores than the broilers from the INT group. On day 21, only Reishi had a consistent reduction in lesion scores reduction when compared to INT. This indicates that Shiitake and Turmeric products were mostly active in the first phase of the infection and the effect of Reishi on mucosa protection was much more consistent over time as the values were closed for the two lesion scoring dates. The absence of modification in oocyst excretion between INT and infected and treated animals indicate that these plant extracts do not directly act on the pathogen. However, Reishi, the most effective product to decrease lesion scores was known to act on some specific innate immunology parameters such as the cytokine TNF-alpha, indicating that modifying immune parameters can reduce the impact of E. acervulina coccidiosis in broiler chickens intestine lesion scores. Summary In Europe, coccidiostats and anticoccidial should be prohibited in 2012 as feed additives. In such a context, different solutions should be examined to maintain performance and reduce coccidiosis losses. That is why this trial was conducted on broiler chickens to evaluate the effects of five plant extracts at two different dosages each: reishi, shiitake, berberin, turmeric and chilli pepper, in comparison to a non infected non treated group (NINT) and an infected non treated control (INT) at day 7, 14, 21 - 1) on broiler performance and 2) on parasitological status - during an infection with Eimeria acervulina. 1) All types of plant extracts improved body weight at 21 days numerically (from +0.3% for berberin group to +3.6% for shiitake group vs. INT). Moreover, they all improved lesion score at 18 days either numerically as for berberin, chilli pepper groups (-5.2%, –19.2% respectively) or statistically as for reishi, shiitake and turmeric groups (-34.4%, -44.4%, -34.4% respectively). At 21 Seite 92 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additves days, the lesion score decreased numerically, whatever the plant extract dose, for all plant extracts except for Reishi groups where it decreased significantly (P<0.01). References Gao Y., Zhou S., Wen J., Huang M. And Xu A. (2002): Mechanisms of the antiulcerogenic effect of Ganoderma lucidum polysaccharides on indomethacin-induced lesions in the rat. Life Sci. 72, 731-745. Hodgson J. N. (1970): Coccidiosis: oocyst counting technique for coccidiostat evaluation. Exp. Parasitol. 28, 99-102. Johnson J. and Reid W. M. (1970): Anticoccidial Drugs: Lesion Scoring Techniques in Battery and Floor-Pen Experiments With Chickens. Exp. Parasitol. 28, 30-36.Sivalingam N., Hanumantharaya R., Faith M., Basivireddy J. Balasubramanian K.A. and Jacob M. (2007). Curcumin reduces indomethacin-induced damage in the rat small intestine. J Appl Toxicol. 27, 551-560. Van Nevel C.J., Decuypere J.A., Dierick N. And Molly K, (2003): The influence of Lentinus edodes (Shiitake mushroom) preparations on bacteriological and morphological aspects of the small intestine of piglets. Arch Tierernahr. 57, 399-412. Corresponding Author Dr. Armin Vikari PANCOSMA S.A. Voie-des-Traz 6 CH-1218 Le Grand-Saconnex, Geneva-Switzerland 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 93 Firmensponsoring - Pancosma S.A. , Voie-des-Traz 6, CH-1218 Le Grand-Saconnex Seite 94 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Efficacy of a phytogenic feed additive in a performance trial with broilers T. Steiner1, L. Perić, N. Milošević, M. Dukić-Stojčić and S. Bjedov 1 BIOMIN GmbH, Herzogenburg, Austria 2 University of Novi Sad, Faculty of Agriculture, Novi Sad, Serbia Abstract Phytogenic feed additives are based on plant extracts derived from herbs or spices, which have beneficial effects on animal production and health. A large variety of plants have properties which could potentially improve feed intake, digestion, feed conversion and body weight gain. The objective of this trial was to evaluate the effect of a phytogenic additive based on essential oils and fructooligosaccharides on performance of broilers. The trial was conducted on the Experimental Farm of the Faculty of Agriculture in Novi Sad. It was designed as 2 x 6 experiment (2 treatments with 6 replicates). Treatments were: C (Control) and PH (Phytogenics). Birds in the C treatment were fed a corn-soy-based basal diet, whereas birds in the PH treatment were fed the basal diet supplemented with a phytogenic feed additive (Biomin® P.E.P. 125 poultry) at an inclusion rate of 125 g/ton over the whole trial period. Each replicate (pen) consisted of a floor pen with 38 Cobb 500 broilers. The floor was covered with straw. Stocking density was 15 birds/m2. The trial lasted for 6 weeks. Feed and drinking water were provided ad libitum. Diets were formulated to meet the breed standards. Results showed a positive effect of the phytogenic additive on production parameters. The difference in body weight between birds in the C and PH treatment was statistically significant (P < 0.01) after three weeks of age (PH: 681 g vs. C: 646 g) and this relation remained until the end of the trial (PH: 2210 g vs. C: 2135 g). Feed conversion ratio was 1.91 and 1.87 (P > 0.05) in the C and PH treatment, respectively. Mortality rate did not differ (P > 0.05) between treatments. Improved overall performance by using the phytogenic additive resulted in an improved European Production Efficiency Factor (269 vs. 258). This data indicate that inclusion of phytogenics in broiler diets can positively influence performance, thus potentially contributing to overall productivity. Introduction As a consequence of dramatically increasing cost of production, poultry producers worldwide are looking for solutions to increase the productivity of their operations. Besides optimization of 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 95 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives management and hygiene status, a main point of interest is to imply profitable strategies, thus helping to improve efficiency of production. Among potential options, phytogenics represent a promising group of growth promoters. Originating from plant materials, phytogenics have flavoring properties as well as biological activities. Antimicrobial, antiviral, antioxidant and many other biological activities have been determined in various phytogenic feed compounds. The mode of action of phytogenics in vivo is versatile and needs further scientific evaluation. A beneficial impact on intestinal microflora, level of microbial toxins in the gut and nutrient digestibility was reported earlier in pigs (Kroismayr et al., 2008). Moreover, it has been speculated that phytogenics may stimulate the secretion of saliva and digestive enzymes (Platel and Srinivasan, 2004). Recent data indicates that phytogenics may have a pronounced impact on performance and health status of broilers (Cross et al., 2007; Ertas et al., 2005). The objective of this trial was to evaluate the effect of a phytogenic additive based on essential oils and fructooligosaccharides on performance of broilers. Materials and Methods The trial was conducted on the Experimental Farm of the Faculty of Agriculture in Novi Sad using 456 one-day-old mixed-sex Cobb 500 broiler chicks in two treatments. There were six replicates per treatment with 38 birds per replicate (pen), resulting in 228 birds per treatment. Each pen had a stocking density of 15 birds/m2. A control diet based on corn and soybean meal was supplemented or not supplemented with a phytogenic feed additive. The treatments were C (Control): Basal diet without growth-promoting additives, and PH (Phytogenics): Basal diet + Biomin® P.E.P. 125 poultry (125 g/t). Feed and drinking water were provided ad libitum. Diets were formulated to meet the breed standards. All birds were subjected to three feeding phases: Starter (day 1-21), grower (day 22-35), finisher (d 36-42). The formulation of the basal diets is shown in Table 1. The phytogenic feed additive under evaluation is specifically designed to stabilize the gut microflora and improve digestion in poultry. It is based on a defined blend of essential oils derived from oregano, anise and citrus and prebiotic carbohydrates (fructo-oligosaccharides). As main active ingredients the product contains the phenolic monoterpenes carvacrol, thymol, anethol and the cyclic monoterpene – hydrocarbon limonen. Data were analyzed by ANOVA/MANOVA followed by LSD post hoc test using StatSoft software (STATISTICA 8). Seite 96 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 1. Formulation of the basal diets Feeding phase Starter Grower Finisher (d 1-21) (d 22-35) (d 36-42) Corn 47.50 55.24 61.70 Soyameal (44% crude protein) 34.24 24.85 22.48 Full fat soya (extruded) 10.20 11.85 7.79 Oil 4.00 4.00 4.00 Limestone 1.30 1.18 1.09 Mono calcium phosphate 1.30 1.39 1.40 Salt 0.30 0.30 0.38 Methionine 0.16 0.19 0.16 Premix 1.00 1.00 1.00 Crude protein (%) 22.8 20.0 18.0 Crude fiber (%) 4.19 3.77 3.49 Crude fat 8.40 8.85 8.35 ME MJ/kg 13.0 13.4 13.4 Lysine (%) 1.31 1.10 0.96 Methionine (%) 0.51 0.50 0.45 Calcium (%) 0.90 0.85 0.80 Total P (%) 0.70 0.70 0.67 Ingredients (%) Calculated nutrient composition: Results and Discussion Performance parameters were improved when the diets were supplemented with the phytogenic additive. Body weights measured in the course of the experiment are shown in Table 1. The difference in body weight between birds in the C and PH treatment was statistically significant (P < 0.01) after three weeks of age (PH: 681 g vs. C: 646 g) and this relation remained until the end of the trial. Final body weight at 42 days of age was significantly (P < 0.05) higher by 3.5% as compared to the Control group (PH: 2210 g vs. C: 2135 g). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 97 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 2. Effect of phytogenics on average body weight Age Control Phytogenics Day old 37 38 1 week 133 134 2 week 317 321 3 week 645b 680a 4 week 1119b 1157a 5 week 1593b 1650a 6 week 2135b 2210a a,b Significant difference between treatment means (P < 0.001) Feed conversion ratios (FCR) are shown in Figure 1. After three or six weeks of age, FCR was 3.9 and 2.1% lower as compared to the Control group. Mortality rate did not differ (P > 0.05) between treatments (C: 3.07%, PH: 4.4%). The overall productivity was increased by 11 points or 4.3%, as indicated by the European Production Efficiency Factor (Figure 2). Figure 1. Effect of a phytogenic feed additive on feed conversion ratio at three and six weeks of age Seite 98 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Figure 2. Effect of a phytogenic feed additive on European Production Efficiency Factor (EPEF). EPEF=[Body weight (g) × survival rate (%)] / [FCR × duration of trial (days)] × 10 Positive effects of phytogenics on broiler performance were also obtained by Cross et al. (2007) and Bölükbaşi et al. (2006). In these reports, essential oils originating from thyme and yarrow improved body weight gain and FCR. Phytogenic feed additives are considered as alternative to antibiotic growth promoters. The impact of a blend of essential oils originating from oregano, clove and anise in comparison to a conventional antibiotic growth promoter (Avilamycin) was investigated in a trial with broilers (Ertas et al., 2005). The phytogenic feed additive, fed at graded doses (0, 100, 200, 400 ppm), significantly improved average daily weight gain and FCR ratio and these improvements were even higher in magnitude in comparison to the antibiotic. The effects of phytogenic supplementation were highest at a dosage of 200 ppm, indicating a close dose-dependency between performance parameters and the level of supplemental phytogenics. Additionally, there was an increase in feed intake following administration of the phytogenic after three experimental weeks. Several feeding strategies may be implemented to assist in promoting health and performance status in poultry production. In this sense, there is growing evidence that phytogenics represent one of the most promising groups of feed additives (Raper, 2007). In addition to a flavoring effect, incorporation of phytogenics may result in a stimulated secretion of digestive juices and a stabilization of the gut microflora, thus affecting nutrient digestibility, immune status and overall animal performance. Most of the effects of phytogenics seem to be dose-dependent. Further factors affecting their efficacy include type of diet, feeding regimen, hygienic conditions, management practices and genetics of the birds. Conclusion This data indicates that inclusion of the phytogenic feed additive under evaluation (Biomin® P.E.P. 125 poultry) in broiler diets can positively influence performance, thus potentially contributing to overall productivity. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 99 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Literature Bölükbaşi, Ş.C., Erhan, M.K. and Özkan, A. (2006). Effect of dietary thyme oil and vitamin E on growth, lipid oxidation, meat fatty acid composition and serum lipoproteins of broilers. South African Journal of Animal Science 36, 189–196. Cross, D.E., McDevitt, R.M., Hillman, K., Acamovic, T. (2007). The effect of herbs and their associated essential oils on performance, dietary digestibility and gut microflora in chickens from 7 to 28 days of age. British Poultry Science 48, 496–506. Ertas, O.N., Güler, T., Çiftçi, M., DalkIlIç, B. and Simsek, Ü.G. (2005). The effect of an essential oil mix derived from oregano, clove and anise on broiler performance. International Journal of Poultry Science 4, 879–884. Platel, K., and Srinivasan, K. (2004) Digestive stimulant action of spices: A myth or reality? Indian Journal of Medical Research 119, 167-179. Raper, G. (2007) Increased interest for plant extracts. Feed Mix 15(6), 12-14. Autorenanschrift Dr. Tobias Steiner BIOMIN GmbH Industriestrasse 21 3130 Herzogenburg, Austria E-Mail: [email protected] Seite 100 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Effects of the dose of capsicum extract on intake, water consumption and rumen fermentation of beef heifers fed a highconcentrate diet D. Bravo1, M. Rodriguez-Prado2, S. Calsamiglia2, A. Ferret2, J. Zwieten2, A. Vikari3 and L. Gonzalez2 1 Pancosma Research, Geneva, Switzerland 2 Universitat Autonoma de Barcelona, Spain 3 Pancosma S.A., Geneva, Switzerland Introduction The intensive feed-lot beef production systems rely on feeding large quantities of cereal grains and concentrate meals that bring into the rumen large flows of highly fermentable nutrients. These systems are often associated with rumen acidosis, bloat, digestive and metabolic disorders. The feeding of ionophores antibiotic helps either to manage these disorders and to improve the feed efficiency of this production by increasing protein efficiency and reduce methane losses (Tedeschi et al., 2003). However, the production of antibiotic free meat or milk is increasing worldwide. This market tendency started few years ago in some European countries and has been validated by the ban of antibiotic in European Community in 2006. To satisfy consumer expectations, more and more countries are now producing significant amounts of meat or milk without antibiotic growth promoters even if national legislation still authorizes their use. For ruminant feeding systems, new potential feeding strategies were reviewed by Wallace (2004) and Calsamiglia et al. (2007). For the rumen modification effect, some plant extracts exhibit interesting effects as decrease deamination and C2 / C3 ratio. This is the case for cinnamaldehyde, eugenol and capsicum oleoresin (Calsamiglia et al., 2007). For example, increasing doses (0. 0.3, 3 mg.L-1) of capsicum oleoresin (CAP) have been shown to decrease gradually the ratio C2 / C3 (-7.7%, -30.8% and -38.4% respectively, Cardozo et al., 2005). Beyond rumen modification effect, another important parameter of growing ruminant fed with high fermentable diets is the feed intake amount and pattern. The intake level per se is important for production (NRC, 2001) as it alters the site of digestion and total tract digestion of starch and total organic matter in high concentrate diets (Galyean et al., 1979). Moreover the intake pattern determines the pH pattern of the rumen, which is important for control of acidosis (Kaufman, 1976). Little research has been done on the effects of CAP on dry matter intake (DMI) and intake pattern in ruminants. Daily doses of 0.5 g and 1 g CAP increased DMI by +12.1% (P < 0.10) and +9.2% (P < 0.05) on heifers fed high concentrate diet (respectively, Fandino et al., 2007 and Cardozo et al., 2006). Moreover, recently, 0.5 g of CAP was shown to increase water and feed 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 101 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives consumption and to alter feed intake pattern and behavior (Rodriguez-Prado et al., 2008).The objective of the present work was to determine the effect of increasing doses of capsicum oleoresin on feed intake pattern and rumen metabolites , in growing heifers fed high concentrate diet. Material and methods Anim als Four Holstein heifers with initial body weight of 360kg (+60kg) were fitted with a 1-cm i.d. plastic ruminal trocar. They were used in a 4 x 4 Latin square design. Each of the four periods lasted 3 weeks, one week of adaptation, one week of intake recording and one week of ruminal fluid sampling. Heifers were individually housed in tie-stalls. Diets The heifers were fed once per day at 8:00 hour. They were offered a hand mixed TMR containing 90% concentrate and 10% barley straw on ad libitum basis, at 110% of the intake at the previous day. If the intake changed, the offered amount was adapted. The concentrate composition is detailed in Table 1. Table 1. Concentrate composition (expressed in % of DM). Feedstuffs Content Ground barley grain 32.2 Ground corn grain 27.9 Soybean meal 13.3 Soy hulls 8.1 Wheat 7.5 Corn gluten feed 7.2 Sunflower 2.8 Megalac 1.1 Calcium carbonate 0.5 Dicalcium phosphate 0.5 Vitamin supplement 0.4 The diet (16.1% CP, 22.0% NDF, 54.3% NSC (Non Structural Carbohydrates); DM basis) was designed to meet or exceed nutrient recommendations of a 360 kg of BW Holstein heifer with an average daily gain of 1.15 kg / d (NRC, 2001). Ex perim ental treatm ents The treatments were organized in a 4 * 4 Latin Square with the 4 levels treatment CAP: 0 vs. 125 (L1) vs. 250 (L2) vs. 500 (L3) mg.head-1.day–1 of a product containing 20% of capsicum oleoresin with 6% of capsaicin and dihydrocapsaicin (Xtract 6933®). The extract supplements were manually mixed with the daily offered amount of feed. Seite 102 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Ex perim ental m easurem ents During the fifth day of the week 3, animals were moved from an individual tie stall with hade caps, in the open air, to the barn were intake recording took place after 3 days of adaptation. To record feed intake from day 9 to day 14 of each experimental period, an automated system was used. Feed bunks (120 L capacity) were mounted on waterproof digital platform scales for each stall. Iron bars were set between the heifers and the scale to avoid entrance, foot step or head resting on the scales. Each scale was programmed to transmit the feed weight at 1-min intervals. This interval was chosen because it was considered to be a reliable indicator of short-term feeding behavior. The information was downloaded into a personal computer with a software application. Feeding events were registered as 7 minute-by-minute feeder disturbance. Each feed weight observation was classified as an “eating” observation when the as-fed feed intake (actual feed weight minus the prior one) was greater than 10 grams or when the measurement was recorded as “unstable” due to the animal’s head pushing on the scale while eating. Otherwise, the observation was considered “no eating”. The data was corrected for moments when the heifers were pushing on the scales. Intake was calculated by multiplying the disappearance from the scales with the average dry matter content of the feed. The DM content of the fresh offered concentrate and straw was determined. The residuals separated in straw and concentrate, were weighed and dry matter content was determined. Separation of the residuals was performed by a Penn State Forage Separator (PennState University, Pennsylvania, USA) and all particles smaller than 8 mm were considered as concentrate. Determination of DM occurred by oven drying of the feed at 105°C for 24 h. The feeding pattern was determined by calculating the intake per 2 hours. Water intake was monitored by using individual drinking cups equipped with individual flow meters. Measurement of pH was performed by sampling ruminal fluid via the trocars. The ruminal pH was measured immediately with a portable pH measuring device. pH was measured just before feeding in the morning, and at 3, 6 and 12 h after feeding, this was measured during the first 3 days of the third week. Statistics Data were examined using the GLM Procedure of SAS (SAS Institute, 2003). To determine statistical differences in water intake, daily DMI and daily concentrate DMI, the following model was used: Y = m + a + b + c + d + ε where Y is the outcome (DM intake, concentrate intake, water intake,…) which mean is m. The parameters a, b, c and d are respectively the period effect (4 levels), the animal effect (4 levels), the day effect (3 levels) and the CAP effect (4 levels). To determine statistical differences between the time intervals during the day in DMI, and pH, the following model was used: Y = m + Cov + a’ + b’ + c’ + d’ + ε where Y is the outcome (DMI, rumen pH…) which mean is m. Cov is the covariable (eg. pH of the previous 2h interval or DMI of the previous 2h interval). The parameters a’, b’ and d’ are respectively the period effect (4 levels), the animal effect (4 levels), and the CAP effect (4 levels). In all models, ε is the residual error. Differences among treatments were determined using a Tukey test. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 103 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Results und discussion Effect on DM I and w ater intake The effect of increasing dose of CAP on water intake, concentrate DMI and total DMI are presented in the Table 2. Table 2. Effect of increasing dose of CAP on water, straw, concentrate and total intake P-value Outcome CAP (mg.head-1.d-1) L1 = L2 = L3 = 0 125 250 500 Water intake, L/d 27.41 27.21 30.26 29.41 0.022 0.001 0.021 0.998 0.031 0.072 0.048 0.231 0.883 Straw DMI, kg/d Concentrate DMI, kg/d 0.908 0.919 1.03 1.001 0.001 0.021 0.001 0.969 0.003 0.001 0.001 0.011 0.606 7.651 7.757 8.802 8.399 0.001 0.983 0.001 0.962 0.006 0.001 0.001 0.021 0.253 0.001 0.999 0.001 0.959 0.004 0.001 0.001 0.015 0.256 8.559 8.677 9.834 9.4 Total DMI, kg/d 1 Treatment CAP effect 2 Animal effect 3 Period effect T1 A2 P3 Linear contrast 0 0 0 L1 L1 L2 vs. L1 vs. L2 vs. L3 vs. L2 vs. L3 vs. L3 The addition of 0.5 g of CAP increased water intake (29.4 vs. 27.4 L/d, +7.3% with P = 0.072) and total DMI (9.4 vs. 8.5 kg/d, +9.8% with P = 0.001). These findings are consistent with Rodriguez – Prado et al. (2008) who reported +17.6% and 8.8% increase of water intake and DMI, respectively with the same dose of CAP. For the same dose of CAP (0.5 g), the size of the effect of CAP was similar for DMI between the present result vs. Rodriguez – Prado et al. (2008) and Fandino et al. (2007) with +9.8% vs. 8.8% and +12.1%. With a higher dose of CAP (1g), Cardozo et al. (2006) observed an increase of +9.2% of DMI. The size of the effect of CAP was somehow lower for water intake with +7.3% vs. +17.6% respectively for the present trial vs. Rodriguez – Prado et al. (2008). Intermediary dose of 0.25 g of CAP also exhibited this effect on water (30.26 vs. 27.4 L/D, +10.0% with P = 0.031) and DMI (9.8 vs. 8.5 kg/d, +14.9%, P = 0.001). Finally, the lower dose of CAP (0.125g) did not modify either water intake (P = 0.998) or DMI (P = 0.959). Effect on feed intake pattern The feeding pattern is presented in the Table 3. When the heifers fed with the control diet, most of the intake took place during the 2 first hours after feeding with 2.41 kg consumed on a total of 7.04 kg total consumed. Then, the heifers decreased their feed intake until 13-14 hours after feeding when they made a second pick of intake with 0.75 kg (on 7.04 kg on total). During the first 2 hours interval after feeding, 0.5 g of CAP decreased numerically DMI (2.2 kg vs. 2.4 kg, P > 0.15). These results are consistent with Rodriguez – Prado et al (2008) who reported a significant decrease of DMI for the same dose of CAP (2.2 kg vs. 3.2 kg, P < 0.001) during the 2 first hours after feeding. Moreover, the present results indicated that the lower doses of capsicum (0.125 g) increased the feed ingested during the 2 first hours (2.0 vs. 2.4 kg, P = 0.079). Then increasing Seite 104 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives dose of CAP gradually decreased DMI with 2.6 kg and 2.3 kg for respectively 0.25 g and 0.5 g of CAP. The differences with the control were only numerical (respectively P = 0.749 and P = 0.479). The heifers fed with 0.5 g of CAP consumed less feed (P = 0.014) during the 2 first hours compared to the heifers fed with 0.125 g of CAP. During the interval from 3 to 4 hours after feeding, there was no differences between the treatment regarding DMI (P > 0.10). Then, during the interval from 9 to 10 hours after feeding, the lower dose of CAP increased DMI (1.05 kg vs. 6.6 kg, P = 0.020) whereas the higher dose exhibited higher DMI, from 11 to 12 hours after feeding (P = 0.067). These results confirmed that CAP modified feed intake pattern as shown by Rodriguez – Prado et al (2008). They also demonstrate that the fragmentation of feed intake pattern did not exist for 0.125 g of CAP but appeared with 0.250 g and remained at 0.5 g of CAP. Table 3. Effect of increasing dose of CAP on water, straw, concentrate and total intake Time CAP (mg.head-1.d-1) Linear contrast P-value Postfeeding (h) 0 L1 = L2 = L3 = 125 250 500 T1 1-2 2411 2900 2612 2278 0.017 3-4 636.1 643.2 602.7 665.9 0.945 5-6 666.6 810.1 776.4 814.5 0.726 7-8 535.4 810.8 586.8 759.4 0.298 9-10 661.7 1051.7 719.9 910.4 0.017 673.6 883.2 748.9 1106.9 0.008 11-12 13-14 750.3 690.4 682.5 783.3 0.873 15-16 267.1 161.9 268.3 229.3 0.59 17-18 332.0 136.1 133.2 63.6 0.044 19-20 36.3 30.7 29.4 46.3 0.753 21-22 8.3 27.3 5.1 25.5 0.293 23-24 61.0 98.8 47.6 48.4 0.128 1 Treatment CAP effect 2 Animal effect 3 Period effect 4 Covariable effect (DMI previous 2 hrs interval) A2 0.001 0.011 0.4 0.277 0.934 0.489 0.001 0.044 0.085 0.26 0.148 0.019 P3 0.001 0.022 0.4 0.047 0.001 0.004 0.001 0.039 0.131 0.158 0.602 0.079 0 Cov4 vs. L1 0.079 0.095 0.999 0.217 0.765 0.005 0.363 0.031 0.020 0.531 0.396 0.017 0.974 0.859 0.634 0.003 0.195 0.316 0.988 0.754 0.551 0.145 0.288 0 vs. L2 0.749 0.988 0.879 0.989 0.969 0.933 0.962 1.00 0.177 0.977 0.996 0.934 0 vs. L3 0.911 0.992 0.748 0.544 0.263 0.067 0.996 0.973 0.035 0.937 0.629 0.99 L1 vs. L2 0.479 0.980 0.996 0.534 0.063 0.734 0.999 0.622 1.000 0.998 0.42 0.091 L1 vs. L3 0.014 0.996 1.000 0.989 0.653 0.304 0.914 0.869 0.877 0.803 0.999 0.166 L2 vs. L3 0.351 0.932 0.994 0.729 0.507 0.032 0.901 0.971 0.889 0.758 0.499 0.991 Effect on rum en pH and m etabolites The effects of the treatments on rumen pH and metabolites are presented in the Table 4. The two highest dose of CAP decreased rumen pH (5.84 and 5.86 vs. 6.02, P = 0.056). This was also observed by Rodriguez – Prado et al. (2008) with a numerical decrease of rumen pH with 0.5 g of CAP (6.95 vs.7.0, P > 0.1). Increasing dose of CAP increased the total VFA production, the effect becoming significant with 0.25 g of CAP and remaining significant for 0.5 g (respectively 144.7 and 142.9 vs. 134.2 mM, P = 0.056). The higher dose of CAP was associated with an increase of +6.5% of total VFA which is lower than the increase of total VFA reported by Rodriguez – Prado et al. (2008) with +9.3% (154.3 vs. 141.2 mM, P = 0.001). Within VFA, the two highest doses of CAP numerically increased the molar proportion of propionate (24.3 and 27.2 vs. 22.2%, P > 0.10) and reduced significantly the ratio C2 / C3 (2.74 and 2.38 vs. 3.19, with P = 0.113). Particularly, the size of the effect of the higher dose of CAP was – 25.4% which was higher than the –16.7% decrease of C2 / C3 ratio reported by Rodriguez – Prado et al (2008) for the same dose of CAP. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 105 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 4. Effect of increasing dose of CAP on water, straw, concentrate and total intake Outcomes CAP (mg.head-1.d-1) pH – Global Total VFA, m M 0 L1 = L2 = L3 = vs. 500 T1 A2 P3 Cov4 L1 0 125 250 6.02 5.96 5.84 5.86 0.003 0.001 0.055 0.001 0.598 134.2 140.1 144.7 142.9 0.085 0.322 0.021 0.001 0.533 0 vs. L2 0.056 0.074 0 vs. L3 0.056 0.074 L1 vs. L2 0.158 0.694 L1 vs. L3 0.320 0.916 L2 v s. L3 0.980 0.973 Individual, mol/100mol Acetate Propionate Butyrate Isobutyrate Valerate Isovalerate C2:C3 Lactate 59.64 22.17 14.87 0.99 1.82 0.74 3.19 0.26 0.001 0.001 0.068 0.132 0.020 0.189 0.001 0.541 0.998 0.460 0.181 0.951 0.965 0.669 0.113 0.674 0.998 0.460 0.181 0.951 0.965 0.669 0.113 0.674 0.970 0.298 0.389 0.200 0.781 0.129 0.053 0.999 0.001 0.001 0.313 0.146 0.012 0.636 0.001 1.000 0.001 0.202 0.999 0.997 0.138 0.761 0.258 0.999 1 2 3 4 59.9 21.7 14.6 1.05 1.74 0.77 3.25 0.18 59.46 24.33 13.59 0.97 1.79 0.70 2.74 0.19 Treatment CAP effect Animal effect Period effect Covariable effect (Sampling hour) Linear contrast P-value 55.42 27.24 13.49 0.96 1.92 0.73 2.38 0.18 0.001 0.001 0.001 0.077 0.016 0.033 0.001 0.598 0.113 0.071 0.049 0.034 0.001 0.001 0.001 0.001 0.885 0.411 0.723 0.001 0.070 0.001 0.430 0.691 0.993 0.993 0.969 0.479 0.494 0.723 0.991 0.587 Conclusion Feed intake, feed intake pattern and feed intake behavior can be a target for plant extract feed additives. The present results indicated that daily doses of 0.25 and 0.5 g of CAP increased water, feed consumption and altered feed intake pattern. The animals spent more time eating and the pattern of intake was more stable during the day. References Calsamiglia, S., M. Busquet, , P. W. Cardozo, L. Castillejos, and A. Ferret. 2007. Invited Review: Essential oils as modifiers of rumen microbial fermentation. J. Dairy Sci. 90:2580–2595. Cardozo P.W., S. Calsamiglia, A. Ferret, and C. Kamel. 2005. Screening for the effects of natural plant extracts at different pH on in vitro rumen microbial fermentation of a high concentrate diet for beef cattle. J. Anim. Sci. 83:2572–2579 Cardozo P.W., S. Calsamiglia, A. Ferret, and C. Kamel. 2006. Effects of alfalfa extract, anise, capsicum, and a mixture of cinnamaldehyde and eugenol on ruminal fermentation and protein degradation in beef heifers fed a high-concentrate diet. J. Anim. Sci. 84:2801– 2808. Fandino, I., S. Calsamiglia, A. Ferret, M. Blanch. 2007. Anise and capsicum as alternatives to monensin to modify rumen fermentation in beef heifers fed a high concentrate diet. Anim. Feed Sci. Techn. 145: 409-417. Galyean, M.L., D.G. Wagner and F.N. Owens. 1979. Level of feed intake and site and extent of starch digestion of high concentrate diets by steers. J. Anim. Sci. 49: 199-203 Kaufman, W. 1976. Influence of the composition of the ration and the feeding frequency on pH- regulation in the rumen and on feed intake in ruminants. Livest. Prod. Sci. 3: 103-114. NRC, 2001. Nutrient Requirements of Dairy Cattle, seventh revision ed. National Academy Press, Washington, Seite 106 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives DC, USA. Rodriguez-Prado, M, S. Calsamiglia, A. Ferret, J. Zwieten, L. Gonzalez and D. Bravo. 2008. Effects of cinnamaldehyde – eugenol and capsicum on rumen fermentation and feeding behavior in beef heifers fed a high-concentrate diet. J. Anim. Sci. 86 (Suppl.2): 588. Tedeschi, L.O., D.G. Fox and T.P. Tylutki. 2003. Potential Environmental Benefits of Ionophores in Ruminant Diets. J. Environ. Qual. 32: 1591-1602. Wallace, R.J. 2004. Antimicrobial properties of plant secondary metabolites. Pr. Nutr. Soc. 63: 621-629. Corresponding Author Dr. Armin Vikari PANCOSMA S.A. Voie-des-Traz 6 CH-1218 Le Grand-Saconnex, Geneva-Switzerland 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 107 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Dietary effect of plant extracts on performance, meat quality and health status of rabbits Ľubica Chrastinová1, Mária Chrenková1, Andrea Lauková2, Ján Rafay1, Monika Simonová2, Renáta Szabóová2, Viola Strompfová2, Ľubomír Ondruška1, Ivan Chlebec1, Zuzana Vasilková3, Štefan Faix2 and Iveta Plachá2 1 Slovak Agricultural Research Centre - RIAP, Nitra, Slovak Republic, 2 Institute of Animal Physiology of Slovak Academy of Sciences 3 Parasitological Institute of Slovak Academy of Sciences, Košice, Slovak Republic Abstract A total number of 96 unsexed, weaned NZW (New Zealand White) hybrid rabbits of age 5 weeks were randomly allocated to 4 similar groups, kept in cages. The animals of experimental group (EG1) got sage (Salvia officinalis) extract (10 µl/animal/day) in drinking water. Rabbits of EG2 were fed enriched diet with supplement Eleutherococcus senticosus (ginseng dry extract 15 g/ 100 kg feed), rabbits of EG3 had diet enriched with Eleutherococcus senticosus (ginseng dry extract 30 g/ 100 kg feed) for 21 days. The control group (CG) was fed untreated pellet diet. The experiment lasted for 42 days, until the animals attained the slaughter weight 2.5 kg. Body weight and feed consumption were registered weekly. The samples of caecal content of three slaughtered animals from each group were collected on day 42 to determine caecal bacterial content. The digesta was analyzed for pH, VFA, ammonia-N and lactic acid. The data were analysed using the two-way ANOVA procedure. Significantly different means of dietary groups were determined by t test. The samples of Musculus longissimus dorsi (MLD) were homogenized and analysed for individual parameters. We obtained the favourable values of water holding capacity, the high content of total proteins and very favourable content of intramuscular fat. The energetic value did not exceed the values 426–432 kJ in 100 g MLD. The pH value of rabbit meat was 5.75 –5.89 48 h post mortem. The ginseng dry extract in rabbit diets stimulates animal growth and performance. It is very good stimulant to prevent infections of intestinal diseases, but it is not a healing agent. Antibacterial effect of sage was discussed in experiments with rabbits. Phytoadditives did not influence negatively biochemical parameters in blood and caecum of rabbits. They influenced positively the health status as well as increasing body weight gain. Seite 108 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Introduction Infection diseases of the digestive system represent the main cause of mortality during the fattening period in rabbits (Rosell, 2003). Mortality of rabbits can be reduced by adequate nutrition, but recent studies also indicate favourable effects of different feed additives, such as probiotic bacteria, different organic acids and phytogenic feed additive. Natural herbs are being explored as alternatives to antimicrobials. Eleutherococcus senticosus, Acanthopanax senticosus (Siberian ginseng) contain different bio active substances (Haviarová et al., 2006; Szabóová, 2007). The root contains variety of glucosides (0.6~0.9%): daucosterol, acanthosides A, B1, C, D, E, isofraxidinglucoside, ethyl-α-Dgalactoside, syringaresinol glucoside, syringin, hyperin. In animal nutrition and medicine it is clear that sage has a historical reputation for promotion of health and treatment of ailments. Sage is a widely cultivated medicinal plant with a large scale of bioactive compounds. The ethanol tinctures and decoctions from sage have long been known for their curing effect in various inflammations of oral cavity, digestive and intestinal tract. The aromatic oil isolated from sage (Salvia officinalis L., Labiateae) contained of Cineole 15%, Thujone 24%, Borneole 18% (Calendula Company, Nová Ľubovňa, Slovakia). The use of supplements containing herbal extract is widespread and increased both in human and veterinary medicine in the Slovak Republic. The aim of this experiment was to study the combined effect of ginseng dry extract and Salvia plant extract on selected parameters in rabbits (antimicrobial, immunological, biochemical, zootechnical and occurrence of Eimeria spp. oocysts). Material and methods A total number of 96 unsexed, weaned NZW (New Zealand White) hybrid rabbits of age 5 weeks were randomly allocated to 4 similar groups, kept in standard cages. • • • • The animals of experimental group (EG1) got sage (Salvia officinalis) plant extract (10 µl /animal /day) in drinking water for the period of 21 days and were fed untreated pellet diet B (Table 1) for growing rabbits. The rabbits of experimental group (EG2) were fed enriched diet A with supplement Eleutherococcus senticosus (ginseng dry extract 15 g/ 100 kg feed). The rabbits of experimental group (EG3) had diet A enriched with supplement Eleutherococcus senticosus (ginseng dry extract 30 g/ 100 kg feed). The control group (CG) had ad libitum access to untreated pellet diet B and the drinking water did not contain any coccidiostats drugs during experiment. The experiment lasted for 42 days, until the animals attained the slaughtered weight 2.5 kg. The samples of individual feeds and complete granulated mixture were analyzed for the content of nutrients according to STN 46 7092. The content of digestible energy (DE) was calculated by the equation of Wiseman et al. (1992). The samples of Musculus longissimus dorsi (MLD) were collected immediately after death and stored at 5˚C for 24h and then physical-chemical analyses (according to STN 57 0185) were made. The samples of MLD were homogenized and analyzed for individual nutrients. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 109 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 1: Ingredients and chemical composition of the experimental diets Feed ingredients in % A B Dehydrated lucerne meal 15.2 15.2 Dried beet pulp 10.0 Oats A B Dry matter 885.4 905 10.0 Crude protein 164,2 171.4 8.0 8.0 Crude fibre 171.7 173.6 Barley 3.5 4.3 Fat 33 41.4 Apple pomace 10.0 10.0 Nitrogen free extract 446.9 448.1 Wheat bran 15.0 15.0 Organic matter 815.8 834.4 Dry malting sprouts 6.0 6.0 Starch 139.4 157.4 Sunflower meal 18.0 18.0 Ash 69.6 70.5 Olive-seed meal 3.0 3.0 Calcium 9.3 6.7 DDGS 5.0 5.0 Phosphorus 6.9 4.1 Minerals &Vitamins 2.6 2.6 Lysine 7.5 9.1 Rape oil 1.7 1.7 Met+Cys 6.5 5.8 DL-methionine 0.1% 0.1 0.1 Acid detergent fibre (ADF) 196.2 210.3 Soybean meal 0.9 0.9 Neutral detergent fibre (ADF) 219.9 365.1 0 0.2 Digestible energy 11.6 11.4 1.0 0 11 10.8 Carob meal Wheat meal +(15g vs. 30 g) Eleutherococcus senticosus Chemical analysis in g/kg feed ME (MJ.kg-1) *Provided per kg diet: vit. A 12000IU; vit.D2 2500 IU; vit. E 20 mg; vit.B1 1.5 mg; vit. B2 7.5 mg; vit. B6 4.5 mg; vit.B 12 30 µg; vit.K 3 mg; nicotic acid 45 mg; folic acid 0.8 mg; biotin 0.08 mg ; Choline chloride 450 mg; Premix minerals (per kg diet) ca 9.25 g; P 6.2 g; Na 1.6 g; Mg 1.0 g; K 10.8 g; Fe 327.5 mg; Mn 80 mg; Zn 0.7 mg The pH at 24 hours post mortem was measured by portable pH-meter mod. Radelkis OP-109 with a combined electrode penetrating 3 mm into the MLD. Protein and fat content were estimated using an INTRATEC 1265 spectroscope and expressed in g/100g: from these values, the gross energy value of samples of meat was calculated: Energy value (kJ/100g) = (16.75 * total protein content + 37.68 * total fat content). Caecum digesta were collected on day 42 of the trial. The collected samples were analyzed for pH and VFA (molar production of acetate, propionate, butyrate, valerate, capronate), ammonia-N concentrations and content of lactic acid). Body weight and feed consumption were registered weekly. Eimeria sp. oocysts were enumerated in the faeces samples microscopically and expressed as counts of oocysts per 1 g of faeces (OPG). Data were subjected to two-way ANOVA. The significance of differences was evaluated by the t-test. Seite 110 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Results and discussion The study was carried in the Slovak Agricultural Research Centre Nitra, Slovak Republic. There were used 96 rabbits in experiment. They were weaned at 35 days and divided into 4 groups (2 rabbits per cage). We did not find large differences among experimental groups in feed intake, body weight and carcass value in fattening experiment (Table 2). Feed consumption per kg gain was the lowest in group with the supplement of Eleutherococcus senticosus (ginseng dry extract 15 g/ 100 kg feed). The rabbits were slaughtered before morning feeding for observation of fermentation processes in the caecum. Concentration of observed VFA shows, that most intensive process was in the caecum of rabbits in experimental groups (Table 4). The results of the antimicrobial activity of the essential oils, described by Delamare et al. (2007) reveal that the oils of Salvia officinalis inhibited the growth of Bacillus cereus, B. megatherium and B. subtilis; partial inhibitory effect was observed against Escherichia coli and Staphylococcus aureus (Szabóová et al., 2008). Table 2: Effect of treatment on performance of rabbits Parameter EG1 EG2 EG3 Control Number of animals in groups 24 24 24 24 Initial live weight (35 d), g 970 950 753 940 Intermediate live weight (56 d), g 1824 1764 1670 1810 Final weight (77 d), g 2530 2535 2538 2580 2.92 2.89 2.41**ABD 2.81 4.06*B 4.27 4.06*B 4.01*B 3.50 3.55 3.43 3.63 2 3 1 5 Daily weight gain, (g/d) 37.14 39.51 42.5**A,*BD 40.5 Carcass value (%) 52.25 52.44 52.31 52.26 Feed conversion ratio between 35th and 56th day (g/g) Feed conversion ratio between 56th and 77th day (g/g) Feed conversion ratio per kg gain Mortality (n) *P<0.05 **P<0.01 Significant difference Slaughter parameters and quality of meat were practically similar in each experimental group (Table 3).The application of natural herb additives increased concentration of total protein and fat in rabbit meat and energetic value of meat also increased significantly (P<0.05) in both experimental groups. All animals were found in good health conditions during the trial. The application of Eleutherococcus senticosus reduced the mortality and increased feed conversion ratio between 35th and 56th day of age in rabbits (P<0.05) and average daily weight gain (P<0.01). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 111 Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives Table 3: Physical-chemical characteristics of rabbit meat (MLD) 24 h post mortem Parameter (g.100g-1) EG1 EG2 EG3 Control Content of water 75.23±0.15 75.47±0.38 75.23±0.15 76.5±0.4 Total proteins 22.27±0.15 22.3±0.35 22.27±0.15 21.7±0.13 Content of fat 1.5±0.1 1.23±0.1 1.5±0.2 1.42±0.3 429.49±3.8* BD 420.0±7.17 429.49±3.8*BD 417.6±10.3 5.72±0.04 5.73±0.02 5.72±0.05 5.67±0.15 35.35±1.4*D 36.09±3.5*D 35.35±1.4*D 29.3±2.1 Energetic value (kJ.100g-1) pH24 Water capacity holding *P<0.05 Significant difference Table 4: Qualitative parameters in caecum Parameter (n=3) pH -1 N-NH3 (mmol.1 ) Lactic acid (g.100g-1) EG1 EG2 EG3 Control 6.12±0.01 5.87 ±0.15 6.12 ±0.32 5.87±0.01 10.3±6.6 8.66±1.65 10.91±1.47 8.66±0.15 0.057±0.01 0.041±0.02 0.052±0.01 0.064±0.01 VFA in caecum (mmol.100g) Acetic acid 5.00±0.09 5.16±0.33 4.40±0.75 4.49±0.15 Propionic acid 0.33±0.09 0.28±0.03 0.29±0.03 0.25±0.07 Butyric acid 1.57±0.24 1.27±0.17 1.14±0.11 1.41±0.02 Other VFA 0.16±0.02 0.14±0.01 0.16±0.02 0.16±0.02 **P<0.01 Significant difference Conclusion Feeding of natural substances to rabbits did not influence biochemical and zootechnical parameters, as well as it had no negative effect on growth performance in rabbits. It had positive effect on health status and it reduced number of eimeria of oocysts in rabbit intestinal ecosystem. Seite 112 7. BOKU-Symposium Tierernährung Phytogene Zusatzstoffe / Phytogenic Additives References Delamare, A.P.L., Moschen-Pistorello I.T., Atii-Serafini L.A.L., Echeverrigaray, S. 2007. Antibacterial activity of the essential oils of Salvia officinalis L. and Salvia triloba L. cultivared in Sounth Brazil. Food Chem., 100, p.603-608 Haviarová, M., Chrastinová, Ľ., Szabóová, R., Simonová, M., Strompfová, V., Faix, Š.,Vasilková, Z., Plachá, I., Lauková, A., Rafay, J., Poráčová, J. 2006. Eleutherococcus senticosus and rabbits breeding. In: Proc.VII Days of Nutrition and Veterinary Dietetics, Sept.2006, Košice, Slovakia, p.101. Simonová, M., Szabóová, R., Chrastinová, Ľ., Lauková, A., Haviarová, M., Strompfová, V., Plachá, I., Faix, Š., Vasilková, Z., Mojto, J., Rafay, J. 2008. The use of a Ginseng extract in rabbit. In: 9th World Rabbit Congress, June 2008, Verona, Italy, p. 809-813. Szabóová, R. 2007. Natural substances in rabbit breeding. In: Proc. 2th Seminar of PhD. Students SAS and UVM, Sept. 2007, Košice, Slovakia, 104-107. Rosell, J.M. 2003. Technical note. Health status of commercial rabbitries in the Iberian peninsula. A practitioners study. World Rabbit Sci., 11, p. 157-169 Simonová, M., Szabóová, R., Chrastinová, Ľ., Lauková, A., Haviarová, M., Strompfová, V., Plachá, I., Faix, Š., Vasilková, Z., Mojto, J., Rafay, J. 2008. The use of a Ginseng extract in rabbit. In: 9th World Rabbit Congress, June 2008, Verona, Italy, p.809-813. STN 46 7092 Metódy skúšania krmív (Methods of feeds analyses), Bratislava, 1985 Wiseman,J., Villamide,M.J., De Blas,C., Carabaňo, M.J., Carabaňo, R.M. 1992: Prediction of the digestible energy and digestibiblity of gross energy of feed for rabbits. 1. Individual classes of feeds. In: Anim. Feeds. Sci. Technol., 39, p. 27-38. Address of corresponding authors Ing. Mária Chrenková, PhD. Slovak Agricultural Research Centre - RIAP, Institute of Nutrition, Hlohovská 2, 949 92 Nitra, Slovakia e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 113 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Ex vivo effect of yeast beta-glucan on lymphocyte viability of weaning piglets A. Ganner1, S. Nitsch2, K. Erlacher1, A. Acosta Aragon1, A. Klimitsch1 and G. Schatzmayr1 1 BIOMIN Research Center, Technopark 1, 3430 Tulln, Austria 2 BIOMIN GmbH, Industriestr. 21, 3130 Herzogenburg, Austria Introduction Yeast derived beta-glucans have been considered as a potential growth promoter by beneficially modifying the immune system. Immunomodulatory feed additives might offer alternatives to antimicrobial growth promoters in livestock production. Beta-1,3/1,6-glucans are naturally occurring large linear polysaccharides of glucose units found in the cell walls of fungi. The immune response consists of two separate, but interrelated systems: the innate immune response, which is rapid but non-specific and the acquired immune response, which is slower, but highly specific. The innate immune response forms the first line of defense against infection, giving cells of the acquired immune system time to generate a specific response to an invading microorganism. There is considerable interaction between cells of the innate and the acquired immune system, and most responses are caused by a mixture of components from the two systems. Important cells of the innate immunity are e.g. macrophages, phagocytes and natural killer cells. Those cells have surface beta-glucan receptors, which specifically recognize and bind the beta-1,3glucan linkage of the beta-glucan molecule. Lymphocytes belong to the acquired immunity and play a key role in defending the body against disease. Numerous studies have shown that yeast beta-glucan modulates the innate immunity and enhances the functional status of macrophages, stimulates the release of cytokines and exerts anti-tumor as well as antioxidant activity. Few studies have been devoted however, to the influence of beta-glucan on the immune responses of lymphocytes. Therefore, our trial objective was to study the efficacy of yeast beta-glucans on ex vivo lymphocyte viability of weaning piglets. Material and Methods Twenty-four, 4 week-old mixed-sex weaning piglets were divided into 4 experimental groups with 3 replicates and were fed 0, 100, 250 and 500 mg beta-glucan/kg feed. Blood samples of 6 piglets per group were taken on days 7 and 21 after adding beta-glucan to the diet. Lymphocytes were separated from whole blood with histopaque, which is a solution of polysaccharide with a density of 1.077 in Seite 114 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre order to facilitate isolation of viable lymphocytes. A density of 106 cells per mL was pipetted into a 96 well plate and the WST-1 (water soluble tetrazolium salt) assay was used to determine the cell viability. The principle of this assay is that tetrazolium salts are cleaved to formazan by cellular enzymes. An expansion in the number of viable cells results in an increase in the overall activity of mitochondrial dehydrogenases in the sample. This augmentation in enzyme activity leads to an increase in the amount of formazan dye formed, which directly correlates to the number of metabolically active cells. Quantification of the formazan dye produced by metabolically active cells is done by a scanning multi-well spectrophotometer. The absorbance of the dye solution is measured at a wavelength of 450 nm. Statistical analyses were performed with SPSS 15.0; analysis of variance (ANOVA) and Turkey test were used to evaluate the data. Results On day 7, lymphocyte viability from pigs fed 100, 250 or 500 mg/kg beta-glucan were not different from those of control pigs (P = 0.28). On day 21, pigs fed 250 or 500 mg/kg beta-glucan had higher (OD 0.6; P = 0.003) lymphocyte viability than the controls (OD 0.4). The slight difference in lymphocyte viability between the control group and the trial groups might be due to lack of bacterial challenge in this trial. Furthermore, individual or gender-specific differences are quite substantial in weaning piglets. In the course of the trial, beta-glucan feeding did not affect pig performance. Fig. 1: Lymphocyte viability on day 7 after addition of beta-glucan to the diet (P = 0.283) 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 115 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre * * *P < 0.05 compared to control Fig. 2: Lymphocyte viability on day 21 after addition of beta-glucan to the diet Discussion and conclusion The ban of antibiotic growth promoters in the European Union 2006 stimulated research in the field of functional feed additives to find natural alternatives. Yeast derivates are potential alternatives for antibiotics to improve animal health and animal performance. Research in the area of immune stimulants and alternatives to antimicrobial growth promoters in livestock production has increasing importance for industry and science. Very promising results have been shown by different authors; future research in this field has to reproduce the statements made. In summary, in the present study the beta-glucan preparation had a beneficial effect on lymphocyte viability at dosage levels 250 mg/kg and 500 mg/kg on day 21. However, no difference of animal performance was noticed between the groups. Yeast beta-glucan can be an effective immunomodulating agent which may fortify animal health in critical transition periods. As there are not many studies devoted to enhance the lymphocyte viability by beta-glucan preparations, we consider the present study as an initial step in this research area. However, the observed trend towards increased lymphocyte viability needs further elucidation. Corresponding author Mag. Anja Ganner Biomin Research Center Technopark 1, 3430 Tulln Email: [email protected] Seite 116 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - BIOMIN GmbH, Industriestraße 21, A-3130 Herzogenburg 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 117 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Einfluss einer neuartigen Lignocellulose auf Leistungsparameter in der Ferkelaufzucht A. Kroismayr1, K. Neufeld2 und P. Affentranger3 1 Agromed Austria GmbH, Kremsmünster, Österreich 2 Animal Nutrition Research Center, Österreich 3 UFA AG, Bühl, Schweiz Einleitung Der diätetische Einfluss verschiedener Rohfaserträger wird in der Ferkelaufzucht vorrangig mit einem negativen Effekt auf Futteraufnahme und Leistungsdaten in Verbindung gebracht und der diätetische Nutzen, vor allem jener von fermentierbarer Nahrungsfaser, vernachlässigt. Eine Unterscheidung zwischen fermentierbarer und nicht - fermentierbarer Nahrungsfaser ist notwendig, weil der ernährungsphysiologische Effekt dieser Futtermittelkomponenten auf völlig verschiedenen Wirkmechanismen basiert. Spricht man in traditioneller Weise von Rohfaser oder Ballaststoffen, so meint man in der Regel die Effekte nicht - fermentierbarer Nahrungsfaser. Diese sind nicht löslich weisen aber teils ein beträchtliches Wasserbindungsvermögen auf. Im Dickdarm bewirken nicht fermentierbare Nahrungsfasern durch den Volumenreiz eine Verkürzung der Verweildauer des Futterbreis, folglich wird die regelmäßige Darmentleerung gefördert und somit Verstopfung vorgebeugt (Wilfart et al, 2007). Eine zügige Darmpassage erschwert das „Aufsteigen“ pathogener Keime aus dem Dickdarm in die vorderen Darmabschnitte und trägt auf diese Weise zur Aufrechterhaltung von Darmgesundheit und Durchfallprophylaxe bei. Eine ausgewogene Kombination fermentierbarer und nicht - fermentierbarer Nahrungsfaser ist auch insbesondere deshalb notwendig, weil nach neuen wissenschaftlichen Erkenntnissen nicht fermentierbare Nahrungsfaser dazu beiträgt, dass die fermentierbaren Komponenten in jene hinteren Abschnitte des Dickdarms verlagert werden, wo die Fermentation besonders positive Effekte nach sich zieht (Govers et al., 1999). Die nicht fermentierbare Nahrungsfaser schiebt die fermentierbaren Anteile faktisch vor sich her bis in das hintere Colon, wo sie die Darmflora stabilisieren und die Zellen der Darmwand unterstützen, welche die Wasserrückresorption aus dem Darminhalt gewährleisten. Im Bereich Ferkelaufzucht und Schweinemast wird der Rohfaserkomponente einerseits ein positiver Einfluss auf die Darmgesundheit zugesprochen, jedoch wird sie andererseits oftmals mit einer reduzierten Futteraufnahme, Verschlechterung der Futterverwertung und folglich unbefriedigender Leistung assoziiert (Sissons, 1993). Fütterungsversuche unter Feldbedingungen haben allerdings gezeigt, dass eine wohl durchdachte Supplementierung von Nahrungsfaser sich günstig auf Gesundheit sowie auf Leistungsdaten auswirkt und die Futteraufnahme und –verwertung nicht oder positiv beeinflusst werden können. Seite 118 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary Fibre Produkte basierend auf Lignocellulose enthalten sehr hohe Rohfasergehalte und werden seit geraumer Zeit zur Nahrungsfaserergänzung eingesetzt. Im Vergleich zu traditionellen Lignocellulose Produkten, welche mehr oder weniger aus nicht - fermentierbarer Faser bestehen, gibt es auch neuartige Lignocellulose Anwendungen die auch fermentierbare Faserbestandteile enthalten und sich somit positiv auf Verdauungsprozesse und Darmgesundheit von Nutztieren auswirken sollten. In der vorliegenden Studie wurde der Einfluss einer neuartigen Lignocellulose (OptiCell®, Agromed Austria GmbH), welche fermentierbare und nicht fermentierbare Nahrungsfaserkomponenten enthält, auf Leistungsparameter von Aufzuchtferkeln untersucht. Material und Methoden Bei diesem 35 Tage dauernden Fütterungsversuch wurden 228 abgesetzte Ferkel mit einem durchschnittlichen Alter von 27 Lebenstagen auf 2 Futtergruppen aufgeteilt. Die negative Kontrollgruppe erhielt ein Standard Aufzuchtfutter ohne spezielle Rohfaserergänzung. Die Zusammensetzung des Futters der Versuchsgruppe war grundsätzlich dieselbe wie jene der negativen Kontrollgruppe, allerdings wurden zusätzlich 1,5 % funktionelle Lignocellulose beigemischt. Dadurch kam es zu einer leichten Verdünnung der Nährstoffe in der Versuchsgruppe. Die genaue Zusammensetzung der verfütterten Rationen ist Tabelle 1 zu entnehmen. Tabelle 1: Zusammensetzung und Gehaltswerte der Rationen Bezeichnung Getreide Getreideprodukte Proteinträger Fischmehl Milchprodukte Säuren Aminosäuren Mineralstoffe Fett und Melasse Vormischungen Enzyme Opticell Gehaltswerte RA RP RL RF VES Lys Ca P Na % % % % % % % % % % % % g/kg g/kg g/kg g/kg MJ/kg g/kg g/kg g/kg g/kg 7. BOKU-Symposium Tierernährung Funkt. Lignocellulose 57.68 18.69 7.30 4.78 1.74 0.86 0.79 1.80 4.15 0.71 0.02 1.5 Negative Kontrolle 58.67 18.84 7.42 4.86 1.77 0.86 0.80 1.83 4.21 0.72 0.02 48 180 55 41 13.8 12.4 6.8 5.3 2.3 49 183 55 31 14.0 12.6 7.0 5.4 2.3 Seite 119 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Geprüft wurden 4 Serien à 4 Ferkelgruppen mit je 13 oder 15 Ferkeln. Total wurden 228 Ferkel mit einem mittleren Alter von 27 Tagen eingestallt. Alle Absetzferkel stammten aus Würfen des Muttersauenbestandes von UFA-Bühl. Als Kriterien für die Gruppeneinteilung wurden, neben der Abstammung das Absetzgewicht und das Geschlecht berücksichtigt. Die Versuchdauer pro Serie betrug je 5 Wochen. Die Einzelgewichte der Tiere wurden zu Versuchsbeginn, am 15. Versuchstag und zu Versuchsende ermittelt. Ebenso wurde der Futterverbrauch bis zu den jeweiligen Wiegetagen gruppenweise dokumentiert. Die Futterverwertung wurde für die jeweiligen Zeiträume (Tage 1-14, 15-35, 1-35) errechnet. Die statistischen Berechnungen erfolgten mit dem Statistikpaket Statgraphics 5 Plus. Es wurde eine einfache Varianzanalyse durchgeführt. Ergebnisse Die Tiere der Versuchsgruppe welche 1,5% funktionelle Lignocellulose in der Ration hatten, zeigten mit 558 Gramm pro Tag eine um 20 gram höhere Futteraufnahme als die Tiere der Kontrollgruppe (538 g/d). Dieser statistisch nicht signifikante Effekt wurde durch 42 gram höhere Tageszunahmen (p<0.1) und 700 gram höhere Endgewichte (p<0.1) in der Versuchsgruppe tendenziell statistisch abgesichert. Signifikant verbesserte Tageszunahmen (p<0.05) wurden in der Versuchsgruppe von Versuchstag 15 -35 beobachtet. Für die Tiere der Lignocellulose Gruppe zeigte sich von Tag 1-35 eine numerisch leicht verbesserte Futterverwertung. Im Zeitraum von Versuchstag 15-35 war dieser Effekt tendenziell statistisch abgesichert (p<0.10).Die genauen Versuchsergebnisse sind Tabelle 2 zu entnehmen. Für die Auswertung konnten 11 Ferkel (6 aus der Versuchsgruppe, 5 aus der negativen Kontrolle) nicht berücksichtigt werden. Der geschätzte Futterverzehr dieser Tiere wurde für die betreffenden Buchten in Abzug gebracht. Seite 120 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary Fibre Tabelle 2: Zootechnische Leistungen in den beiden Futtergruppen Funkt. Lignocellulose 108 8 Negative Kontrolle 109 8 230 777 558 227 745 538 Gewicht (kg pro Tier) Beginn 14. Tag 35. Tag 7.8 10.2 20.5(b) 7.8 10.2 19.5(a) Tageszuwachs (g/Tag) 1.-14. Tag 15.-35. Tag 1.-35. Tag 172 491b 364(b) 168 458a 342(a) 1.34 1.58(a) 1.54 1.37 1.63(b) 1.57 Tierzahl Buchtenzahl Futterverzehr (in g pro Tag) 1.-14. Tag 15.-35. Tag 1.-35. Tag Futterverwertungsindex (kg/kg) 1.-14. Tag 15.-35. Tag 1.-35. Tag a,b …...p<0.05 (a),(b) …p<0.10 Diskussion Im Bereich Ferkelaufzucht und Schweinemast wird der Rohfaserkomponente einerseits ein positiver Einfluss auf die Darmgesundheit zugesprochen, andererseits wird sie jedoch oftmals mit einer reduzierten Futteraufnahme, Verschlechterung der Futterverwertung und folglich unbefriedigender Leistung assoziiert (Sissons, 1993). Der vorliegende Versuch kann diese Bewertung nicht bestätigen. Vielmehr hat die Einmischung von 1.5% funktioneller Lignocellulose die Leistungsdaten z.T. signifikant verbessert. Obwohl die Ration der Versuchsgruppe aufgrund der Verdünnung mit dem Lignocellulose Produkt geringfügig niedrigere Nährstoffwerte aufwies, waren die zootechnsichen Leistungsdaten in der Versuchsgruppe verbessert. Auch die Erhöhung des Gesamtrohfasergehaltes von 3.1% in der negativen Kontrollgruppe auf 4.1% in der Versuchsgruppe wirkte sich in dieser Studie keinesfalls negativ aus. Da die Tiere beider Versuchsgruppen unter keinen ernährungsbedingten Durchfällen litten, und die Leistungsdaten in der negativen Kontrollgruppe ebenso auf relativ hohem Niveau waren, stellt sich die Frage welche Effekte zu den beobachteten Leistungsverbesserungen geführt haben. Am wahrscheinlichsten scheint hier ein kombinatorisch wirksamer Effekt von nicht 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 121 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre fermentierbaren und fermentierbaren Nahrungsfaserkomponenten, wie sie in dem untersuchten Produkt laut Hersteller beinhaltet sein sollen, zu sein. Die von Govers et al. (1999) beschriebene synergistische Wirkung von fermentierbaren und nicht - fermentierbaren Faserkomponenten und deren positive Effekte auf die Passagerate sowie die Fermentationsprozesse im Dickdarm, liefert eine plausible Erklärung für die beobachteten Leistungsverbesserungen bei gesunden Ferkeln. Auch andere Fütterungsversuche unter Feldbedingungen mit demselben funktionellen Lignocellulose Produkt haben sehr ähnliche Ergebnisse wie diese Studie gebracht (Leibetseder & Neufeld, 2006). In zwei Feldstudien konnten die Tageszunahmen verbessert werden während die Futterverwertung nicht beeinflusst wurde. Anhand eines Punkteschemas konnte eine bessere Konsistenz der Fäzes dokumentiert werden. Laboruntersuchungen haben diese Wahrnehmung bestätigt, da der Trockensubstanzgehalt der Fäzes in der Versuchsgruppe mit Lignocellulose um 13% höher lag als in der Kontrollgruppe. Schlussfolgerung Die vorliegende Studie bestätigt die positive Wirkung von funktioneller Lignocellulose auf Leistungsparameter beim Ferkel. Genauere wissenschaftliche Untersuchungen zur Erforschung des Zusammenspiels von fermentierbaren und nicht-fermentierbaren Lignocellulose Komponenten scheinen notwendig und sinnvoll. Literatur Govers MJ, Gannon NJ, Dunshea FR, Gibson PR & Muir JG(1999): Wheat bran affects the site of fermentation of resistant starch and luminal indexes related to colon cancer risk: A study in pigs. Gut 1999, 45(6): 840-847 Kroismayr A (2008): Lignocellulose – fresh wood as dietary fibre. Feed Mix, Vol 2, 2008: 13-17 Leibetseder J, Neufeld K (2006): A new lignocellulose supplement (OptiCell®) improves performance parameters and faecal quality in weaner piglets. Unveröffentlichte Feldstudie Leibetseder J, Neufeld K (2006): Supplementation of 1% OptiCell® improves daily weight gain and faecal quality in piglets Unveröffentlichte Feldstudie Sissons JW (1993): Aetiology of diarrhoea In:Cole DJA, Haresign W, Garnsworthy PC (Hrsg.): Recent developments in pig nutrition 2, Nottingham University Press, S. 267-284 Wilfart A, Montagne L, Simmins H, Noblet J, Milgen J (2007): Digesta transit in different segments of the gastrointestinal tract of pigs as affected by insoluble fibre supplied by wheat bran. Br J Nutr 98(1): 54-62 Autorenanschrift Dr. Arthur Kroismayr Bad Haller Straße 23 A-4550 Kremsmünster (Österreich) e-mail: [email protected] Seite 122 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - AGROMED Austria GmbH, Bad Hallerstr. 23, A-4550 Kremsmünster 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 123 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Einsatz einer neuen Lignocellulose Formulierung bei der Zuchtsau: Einfluss auf MMA-Symptomatik, Reproduktionsleistung und Kotqualität Horea Sarandan1, Nina Neufeld2, Arthur Kroismayr3, Klaus Neufeld2 und Josef Leibetseder4 1) Department of Rumänien 2) Animal Nutrition Research Center, Österreich 3) Agromed Austria GmbH, Österreich 4) Institut für Ernährung, Veterinärmedizinische Universität Wien, Österreich Physiology, Faculty of Veterinary Medicine Timisoara, Abstract A feeding trial was performed to test the influence of a lignocellulose product for fibre supplementation (OptiCell ® , Agromed Austria GmbH) on MMA symptoms, reproductive performance and faecal quality. The test substance with a crude fibre content of 59% and total dietary fibre (TDF) of 85% is a combination of fermentable and non-fermentable dietary fibre. The investigation took place in a pig farm with evident MMA problems in Romania. Data of 65 sows over one reproductive cycle from insemination till weaning were evaluated. 31 sows of the control group were fed a standard gestation feed and standard lactation feed whereas the 34 sows in the trial group were fed a diet supplemented with the test substance at a concentration of 3% during gestation and 0.5% during lactation. Sows of the trial group showed less MMA symptoms. Most notable was the significant difference in mastitis (51,6% in control group vs. 20,6% in trial group). The trial group revealed more live born piglets per sow (11 vs. 10,2) and more weaned piglets (8,2 vs. 7,7). Average daily weight gain was significantly higher for trial piglets (163,8g vs. 155g). The trial group showed good faecal quality (dry matter content shortly above 30%) over the whole test period whereas the control group had remarkable variations in faecal quality around time of farrowing. Soft faeces were followed by hard faeces and dry matter content increased from 27% to 42% within three days in control group. Seite 124 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Einleitung Die optimale Versorgung mit Nahrungsfaser spielt in der Ernährung der Zuchtsau eine bedeutende Rolle. Die Vermeidung von übermäßiger Gewichtszunahme bei guter Sättigung ist ebenso wichtig wie die Vermeidung von Obstipation oder Diarrhöe. Sowohl Obstipation als auch Diarrhöe werden als prädisponierende Faktoren für die Entstehung von Symptomen des MMA (Metritis-Mastitis-Agalaktie) Komplexes angesehen. Bei der Auswahl geeigneter Rohfaserträger ist darauf zu achten, dass in der Futterration sowohl fermentierbare als auch nicht fermentierbare Nahrungsfasern in ausreichender Quantität und einwandfreier Qualität zur Verfügung stehen. Herkömmliche Rohfaserträger weisen teilweise beträchtliche mikrobielle Kontamination oder Kontamination mit Mykotoxinen auf. Manche Rohfaserträger beeinflussen den Mineralstoffhaushalt der Tiere und sind daher nur beschränkt einsetzbar. Auf dem Markt haben sich daher alternative Rohfaserträger auf Basis von Lignocellulose etabliert. Der Einfluss einer neuen Lignocellulose Formulierung (OptiCell® , Firma Agromed Austria GmbH) auf MMA Symptomatik, Reproduktion und Kotqualität wurde im Rahmen eines Fütterungsversuchs an 80 Zuchtsauen getestet. Material und Methoden Versuchsdauer und Tierzahl: Für den Versuch ausgewählt wurde ein Zuchtsauenbetrieb in Rumänien mit bestehender MMA Problematik. Versuchsdauer war ein Reproduktionszyklus von Besamung bis Absetzen. Der Versuch wurde mit zwei Gruppen (Versuchsgruppe und Kontrollgruppe zu jeweils 40 Zuchtsauen) geführt. Die Tiere wurden einzeln gewogen und in Gruppen von je 10 Tieren eingestallt. Die Daten von 65 Zuchtsauen konnten ausgewertet werden (34 Tiere in der Versuchsgruppe, 31 Tiere in der Kontrollgruppe). Jene Tiere, die erneut besamt werden mussten, wurden von der Auswertung ausgeschlossen. Testsubstanz: Bei der Testsubstanz handelt es sich um ein Nahrungsfasersupplement, das aus unbehandeltem Frischholz hergestellt wird (OptiCell ® , Firma Agromed Austria GmbH). Laut Hersteller enthält das Produkt sowohl fermentierbare als auch nicht fermentierbare Nahrungsfasern (Rohfasergehalt 59%, Gesamtnahrungsfasergehalt 85%). Die vom Hersteller empfohlene Einsatzdosierung für die tragende Zuchtsau liegt bei 2-3% bei rationierter Fütterung und 2,5-4% bei Sattfütterung. Futter: In der Kontrollgruppe wurde marktübliches Tragefutter verabreicht. Das Tragefutter für die Versuchsgruppe enthielt 3% der Testsubstanz. Bis zum 3. Trächtigkeitsmonat wurden 2,2kg Tragefutter pro Tier und Tag gefüttert. Ab diesem Zeitpunkt wurde die Futtermenge auf 3,5kg erhöht. Am Tag 107 der Trächtigkeit wurden die Tiere in die Abferkelboxen verbracht, die Futtermenge wurde auf 1,8kg pro Tier und Tag reduziert. Die Menge des Laktationsfutters wurde dem individuellen Bedarf angepasst, es wurden 5-6kg pro Sau und Tag verfüttert. Die Kontrollgruppe erhielt marktübliches Laktationsfutter, dem Laktationsfutter der Versuchsgruppe wurde die Testsubstanz in einer Dosierung von 0,5% beigemischt. Die Rezepturen der verschiedenen Futter sind Tabelle 1 zu entnehmen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 125 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Tabelle 1: Futterrezepturen OptiCell ® Gruppe Kontrollgruppe Tragefutter Laktationsfutter 65,5 - 68,9 Weizen - 63,8 - 66,18 Sojaschrot - 10,0 6,0 10,0 14,5 6,4 10,0 6,4 Fischmehl - 3,0 - 3,0 Fett - 2,5 - 2,5 CaCO 3 1,3 1,5 1,2 1,5 Dicalciumphosphat 0,4 0,7 0,7 0,7 Vit-Min-Prämix 0,5 0,5 0,5 0,5 Futtersäure - 0,4 - 0,4 Bioplus - 0,04 - 0,04 Vitamin E - 0,025 - 0,025 Mais Sonnenblumenextraktionsschrot Lysin Tragefutter Laktationsfutter - 0,25 0,5 0,2 0,5 Methionin - 0,12 - 0,12 Threonin - 0,08 - 0,08 0,5 0,5 0,5 0,5 10,0 10,0 5,0 7,0 7,0 - 4,0 - - - 3,0 0,5 NaCl Weizenkleie Luzernepellets OptiCell ® Untersuchungsparameter: Kotproben der Zuchtsauen wurden zu Beginn der Trächtigkeit und dann in monatlichen Abständen während der Tragezeit gesammelt, außerdem bei Einstallung in der Abferkelbucht, drei Tage nach dem Abferkeln sowie beim Absetzen. Die Kotproben wurden auf ihren Trockensubstanzgehalt untersucht. Mit dem Umstallen in die Abferkelbucht bis drei Tage nach dem Abferkeln wurde bei den Sauen morgens und abends die innere Körpertemperatur (Rektaltemperatur) gemessen. Am Tag 1 und 3 nach dem Abferkeln wurde das Gesäuge adspektorisch und palpatorisch beurteilt und Mastitissymptome sowie Milchmangel protokolliert. Die Ferkel wurden markiert und einzeln gewogen. Die Wiegungen der Ferkel erfolgten an den ersten drei Lebenstagen sowie zum Zeitpunkt des Absetzens. Ferkelverluste wurden bis zum Absetzen protokolliert. Seite 126 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Statistik: Die Ergebnisse wurden mittels Vierfelder- Χ 2 -Test oder t-Test überprüft. Test, Signifikanz und Signifikanzniveau sind in der Tabellenbeschreibung angegeben. Ergebnisse Die Sauen der Versuchsgruppe zeigten weniger MMA Symptome (Tabelle 2). Besonders deutlich war der Unterschied beim Auftreten von Mastitis (20,6% in der Versuchsgruppe vs. 51,6% in der Kontrollgruppe). Tabelle 2: MMA Symptome; a,b) statistisch signifikant (p≤0,01; Vierfelder-Χ 2 -Test) Kontrollgruppe Gesamt % Gesamt % Tierzahl 31 Tiere mit MMA Symptomen 29 93,55 30 88,23 Innere Körpertemp. >39,4°C 24 77,42 27 79,41 Mastitis Agalaktie 16 100 Versuchsgruppe a 9 34 100 b 51,61 7 29,03 7 20,59 20,59 In der Versuchsgruppe wurden mehr lebend geborene Ferkel (11,0 vs. 10,2) sowie mehr abgesetzte Ferkel (8,2 vs. 7,7) verzeichnet. Die durchschnittliche Tageszunahme war für Ferkel der Versuchsgruppe höher (163,8g vs. 155g). Tabelle 3: Reproduktionsleistung; a,b) statistisch signifikant (p≤0,05; t-Test) Kontrollgruppe Versuchsgruppe Lebend geboren 10,2 11,0 Abgesetzt 7,7 8,2 Geburtsgewicht 1,58 1,49 Absetzgewicht 5,91 Ferkel pro Zuchtsau ø Ferkelgewicht (kg) ø Tageszunahme der Ferkel (g) 154,95 6,08 a 163,82 b Zu Versuchsbeginn wiesen beide Gruppen einen Kottrockensubstanzgehalt von 40% auf. Die weiteren Untersuchungen ergaben für die Versuchsgruppe gleichmäßige Werte von etwas über 30% bei allen Probenahmen, während die Kottrockensubstanz in der Kontrollgruppe starke Schwankungen – insbesondere bei den Probenahmen um die Geburt - aufwies. So wurde für die 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 127 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Kontrollgruppe ein durchschnittlicher Kottrockensubstanzgehalt von 27% beim Umstallen in die Abferkelbox ermittelt. Drei Tage nach dem Abferkeln lag der Durchschnittswert für diese Gruppe bei 42,5%. Kontrollgruppe Versuchsgruppe 45 Kottrockensubstanzgehalt (%)..... 40,25 42,53 b,e 40 40,01 33,74 35 34,47 31,46 32,9 30 d 33,27 33,02 27,09 25 33,97 Trächtigkeit f 31,39 a,c Laktation 20 Kotprobe 1 Kotprobe 2 Kotprobe 3 Kotprobe 4 Kotprobe 5 Kotprobe 6 Abbildung 1: Durchschnittswerte der Kottrockensubstanz aus Kontroll- und Versuchsgruppe a,b) Unterschiede der Kottrockensubstanz in Kontrollgruppe vor dem Abferkeln und 3 Tage nach dem Abferkeln sind statistisch signifikant (p≤0,05; t-Test) Unterschiede der Kottrockensubstanz zwischen Kontrollgruppe und Versuchsgruppe vor dem Abferkeln (c,d) und 3 Tage nach dem Abferkeln (e,f) sind statistisch signifikant (p≤0,05; t-Test) Diskussion Die Häufigkeit, mit der MMA Symptome innerhalb eines Betriebes auftreten, unterliegt starken Schwankungen. Durchschnittlich zeigen 5-30% der Zuchtsauen ein oder mehrere Symptome, die dem MMA Komplex zuzuordnen sind. Für den beschriebenen Versuch wurde ein Zuchtbetrieb mit offensichtlich bestehendem MMA Problem ausgewählt, daher wiesen fast alle Sauen MMA Symptome auf. MMA verursacht Ausfälle bei Ferkeln und Zuchtsauen, die Ferkel zeigen geringere Gewichtszunahmen bis zum Absetzen, die Sauen entwickeln Fruchtbarkeitsstörungen, rauschen häufiger um, und die Wurfzahl ist geringer. MMA resultiert daher in eine herabgesetzte Reproduktionsleistung. MMA Symptome werden durch ein multifaktorielle Ursachen ausgelöst. Prophylaktisch sind Hygienemaßnahmen für Stall und Futter von besonderer Bedeutung. Diätetische Maßnahmen zur Vermeidung von Verstopfung, Diarrhöe oder Übergewicht werden ebenso empfohlen wie eine diätetische Ansäuerung des Harns. Seite 128 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Für das Tragefutter wird ein hoher Rohfasergehalt angestrebt, womit einerseits Übergewicht vermieden werden soll, andererseits soll auch Verstopfung insbesondere in den letzten Tagen vor dem Abferkeln vermieden werden. Göransson (1989) hat gezeigt, dass das Auftreten von Milchmangel bei Verfütterung einer rohfaserreichen und energiereduzierten Ration abnimmt, während die Leistungsparameter der Ferkel davon unbeeinflusst bleiben. Eine Ration mit hohem Rohfasergehalt soll eine gute Sättigung der Zuchtsauen während der Tragezeit bewirken und somit Aggressionsverhalten und Stereotypien vorbeugen. In Deutschland wurde daher ein minimaler Rohfasergehalt für das Tragefutter gesetzlich festgelegt (Bundesgesetzblatt der Bundesrepublik Deutschland 2006). Bergeron et al (2000) demonstrierten, dass eine Futterration mit hohem Rohfasergehalt bei zweimal täglicher Fütterung stereotypes Verhalten reduziert. Noch bessere Effekte konnten bei ad libitum Fütterung erreicht werden. Andere Untersuchungen widersprechen diesen Ergebnissen. So sahen Holt et al. (2006) bei Verfütterung einer Ration mit hohem Anteil an Sojaschalen keinen positiven Einfluss auf das Wohlbefinden oder die Reproduktionsleistung. Die widersprüchlichen Ergebnisse können ihre Ursache in der Verwendung unterschiedlicher Rohfaserquellen haben. Bei der Auswahl der Rohfaserquellen ist darauf zu achten, dass sich fermentierbare und nicht fermentierbare Nahrungsfasern ergänzen sollten, da sie verschiedene Wirkmechanismen und Effekte haben (Govers et al 1999). Um die Eubiose des Darmtraktes zu unterstützen ist eine ausgewogene Kombination von fermentierbarer und nicht fermentierbarer Nahrungsfaser von Bedeutung. Neue wissenschaftliche Untersuchungen (Begum et al 2004) haben belegt, dass Lignin als Precursor von Säugerlignanen wie Enterolacton und Enterodiol fungiert, die phytoöstrogene Wirkung haben. Um die Wirkung von Nahrungsfasern und einzelnen Nahrungsfaserkomponenten besser zu verstehen, sind weitere wissenschaftliche Untersuchungen nötig. Im beschriebenen Versuch wurde ein Nahrungsfasersupplement aus unbehandeltem Frischholz eingesetzt. Die Testsubstanz zählt somit zu den sogenannten Lignocelluloseprodukten, die sich in den letzten Jahren auf dem Markt etabliert haben. Die Vorteile dieser Produkte sind der standardisierte Gehalt an Rohfaser, Lignocellulose hat keinen Einfluss auf den Mineralstoffhaushalt der Tiere, die Produkte sind frei von Mykotoxinen und durchlaufen im Zuge des Produktionsprozesses verschiedene thermische Hygienisierungsschritte. Die eingesetzte Testsubstanz weist als Besonderheit auf, dass das Produkt sowohl fermentierbare als auch nicht fermentierbare Nahrungsfaser enthält, während herkömmliche Lignocelluloseprodukte ausschließlich nicht fermentierbare Nahrungsfaser aufweisen. Die Testsubstanz wurde bereits in einer großen Anzahl an Feldversuchen in unterschiedlichen Dosierungen und Einsatzbereichen untersucht. Unter Praxisbedingungen zeigte die Testsubstanz positiven Einfluss auf Darmgesundheit und Leistungsdaten beim Absetzferkel, Mastschwein, Broiler und Mastkaninchen (Neufeld und Leibetseder, 2008). Um wissenschaftliche Studien in Hinblick auf die Bedeutung der Nahrungsfaserkomponente miteinander vergleichen zu können, sollte nicht nur der Rohfasergehalt Beachtung finden, sondern auch ADL (acid detergent lignin), ADF (acid detergent fibre), NDF (neutral detergent fibre) und TDF (total dietary fibre) sowie die Nahrungsfaserquellen sollten in die Überlegungen miteinbezogen werden. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 129 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Schlussfolgerung Das getestete Nahrungsfaserprodukt (OptiCell ® , Firma Agromed Austria GmbH) hatte im beschriebenen Versuch einen positiven Einfluss auf MMA Symptome, Reproduktionsparameter und Kotqualität. Literatur Begum AN, Nicolle C, Mila I, Lapierre C, Nagano K, Fukushima K, Heinonen SM, Adlercreutz H, Rémésy C, Scalbert A (2004): Dietary lignins are precursors of mammalian lignans in rats. J. Nutr. 134: 120-127 Bergeron R, Bolduc J, Ramonet Y, Meunier-Salaun MC, Robert S (2000): Feeding motivation and stereotypes in pregnant sows fed increasing levels of fibre and/or food. Appl. Anim. Behav. Sci 70(1): 27-40 Bundesgesetzblatt Bundesrepublik Deutschland 2006, Teil I Nr. 37 §25(6) Göransson L (1989): The effect of dietary crude fibre content on the frequency of post partum agalactia in the sow. Zentralbl. Veterinärmed. A. 36(6): 474-479 Govers MJ, Gannon NJ, Dunshea FR, Gibson PR, Muir JG (1999): Wheat bran affects the site of fermentation of resistant starch and luminal indexes related to colon cancer risk: A study in pigs. Gut 45(6): 840-847 Holt JP, Johnston LJ, Baidoo SK, Shurson GC (2006): Effects of high-fiber diet and frequent feeding on behavior, reproductive performance and nutrient digestibility in gestating sows. J. Anim. Sci. 84: 946-955 Neufeld K, Leibetseder J (2008): Nahrungsfaser in der Nutztierernährung. Feed Magazine 5-6: 21-27 Autorenanschrift Dr. Nina Neufeld Animal Nutrition Research Center Sattelbach 13 A-2532 Heiligenkreuz, Österreich E-mail: [email protected] Seite 130 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Einfluss einer neuen Lignocellulose Formulierung auf die Leistungsdaten beim Broiler A. Kroismayr1, N. Neufeld2 und K. Neufeld2 1) Agromed Austria GmbH, Österreich 2) Animal Nutrition Research Center, Österreich Abstract The broilers’ considerable fermentation flora in the Nevertheless evaluated. pairs of caeca contain high quantitiy of gut bacteria which are able to produce amounts of volatile fatty acids by microbial fermentation. Gut flora as well as products influence health and performance of animals. To support eubiotic gut lower intestine fermentable and non-fermentable fibre should be provided. the adequate supply of dietary fibre for broilers has not been scientifically In the presented field trial with 515.400 broilers it was shown that dietary fibre reveals positive effects on performance in broilers. Control group and trial group received the same feed with the only difference of an additional supplementation of 1% of the test substance in the grower feed for the trial group (d 10 – d 23) without balancing metabolizable energy. The test substance was a lignocellulose product for fibre supplementation (OptiCell ® , Agromed Austria GmbH) which is a combination of fermentable and non-fermentable dietary fibre (fibre content 59%, total dietary fibre 85%). Animals of trial group had significantly higher daily weight gain (51.0g vs. 46,8g in control group) resulting into higher animal weight at slaughtering (1.52kg vs. 1.41kg in control group) and consequently leading into a remarkable better European Efficiency Factor (EEF was 306 for trial group vs. 280 for control group). Einleitung Obwohl es bekannt ist, dass die paarig angelegten Blinddärme des Geflügels dicht bakteriell besiedelt und somit Ort mikrobieller Fermentation sind und ebendort große Mengen kurzkettiger Fettsäuren entstehen, ist Qualität und Quantität einer adäquaten Rohfaserversorgung beim Broiler noch nicht wissenschaftlich erforscht. In Lehrbüchern und wissenschaftlichen Beiträgen 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 131 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre wird die Rohfaserkomponente, wenn sie überhaupt erwähnt wird, in Zusammenhang mit ihrer energieverdünnenden Wirkung gesehen. Im Rahmen eines Feldversuchs in einem Broilermastbetrieb mit insgesamt 515.400 Tieren in 12 Ställen wurde der Einfluss eines neuen Nahrungsfaserproduktes (OptiCell ® , Firma Agromed Austria) auf die Leistungsdaten beim Broiler unter Praxisbedingungen ermittelt. Material und Methoden Versuchsdauer und Tierzahl: Der Versuch wurde in einem Broilermastbetrieb in MecklenburgVorpommern, Deutschland, durchgeführt. Für den Versuch herangezogen wurden insgesamt 515.400 Tiere in 12 Ställen, wobei zwei Gruppen (Kontrollgruppe und Versuchsgruppe) untersucht wurden. Die Kontrollgruppe umfasste 351.700 Tiere, untergebracht in 8 Ställen. Die Versuchsgruppe umfasste 163.700 Tiere, die in 4 Ställen untergebracht waren. Ausgewertet wurden die Daten über die gesamte Mastperiode. Testsubstanz: Bei der Testsubstanz handelt es sich um ein Nahrungsfasersupplement, das aus unbehandeltem Frischholz hergestellt wird (OptiCell ® , Firma Agromed Austria GmbH). Laut Hersteller enthält das Produkt sowohl fermentierbare als auch nicht fermentierbare Nahrungsfasern (Rohfasergehalt 59%, Gesamtnahrungsfasergehalt 85%). Die vom Hersteller empfohlene Einsatzdosierung für Broiler liegt bei 0,5-1,5%. Futter: Die Kontrollgruppe erhielt ein marktübliches Broilerfutter (Starter-, Mittelmast- und Endmastfutter). Der Versuchsgruppe wurde das gleiche Futter zugeteilt, Starter- und Endmastfutter waren identisch mit der Kontrollgruppe. Für die Versuchsgruppe wurde dem Mittelmastfutter (d 10 bis d 23) die Testsubstanz in einer Dosierung von 1% zugesetzt, ohne weitere Veränderungen an der Rezeptur oder einen Energieausgleich vorzunehmen. Somit hatte die Zulage des Nahrungsfasersupplements energieverdünnende Wirkung im Vergleich zur Ration der Kontrollgruppe. Untersuchungsparameter: Zur Auswertung herangezogen wurden die Daten der einzelnen Ställe, die vom stalleigenen Computerprogramm (Fancom ® ) ermittelt wurden. Ausgewertet wurden die Mastleistungsdaten, Ausfälle, Wasserverbrauch pro Tier und die errechnete Mastkennzahl (MKZ = [Tageszuwachs (g/d) x Überlebensrate (%)] / [10 x Futterverwertung]). Statistik: Zur statistischen Auswertung wurde der t-Test herangezogen. Signifikante Unterschiede und Signifikanzniveau sind in der Beschreibung der Ergebnistabelle angeführt. Ergebnisse Die Versuchsgruppe erzielte eine bessere Mastleistung als die Kontrollgruppe (Tabelle 1). Die Tiere der Kontrollgruppe erreichten ein durchschnittliches Schlachtgewicht von 1,41kg, die Tiere der Versuchsgruppe im Vergleich dazu 1,52kg. Die durchschnittliche Mastdauer der verschiedenen Ställe betrug 30,25 Tage für die Kontrollgruppe und 29,75 Tage für die Versuchsgruppe. Die Tageszunahmen lagen in der Kontrollgruppe bei 46,8g, in der Seite 132 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Versuchsgruppe bei 51g. Die Mastkennzahl für die Versuchsgruppe konnte eine MKZ von 306 verzeichnen. Kontrollgruppe betrug 280, die Tabelle 1: Ergebnisse des Broilermastversuchs mit insgesamt 515.400 Tieren a,b) Unterschiede statistisch signifikant (p<0,05; t-Test) Kontrollgruppe Eingestallte Tiere Versuchsgruppe 351.700 163.700 Stallverluste (%) 2,61 3,10 Ø Schlachtgewicht des Einzeltieres (kg) 1,41 a 1,52 b Ø Futterverbrauch/Tier (kg) 2,27 a 2,43 b Futterverwertung 1,63 1,61 Ø Wasserverbrauch/Tier (l) 4,36 4,58 a 51,0 b Ø Tageszunahme (g) 46,8 Ø Masttage 30,25 29,75 280 a 306 b Mastkennzahl 54 52,1 52 50,7 50,4 50,6 Tageszunahmen in g 50 48 48,1 47 46,4 47,9 47,9 46,9 45,5 46 durchschnittlich + 9% 44,7 bei Tageszunahmen 44 42 40 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Ställe Abbildung 1: Durchschnittliche Tageszunahmen in den 12 Ställen Kontrollgruppe: Stall 1-8, Versuchsgruppe: Stall 9-12 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 133 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Diskussion Wildvögel nehmen beim Schlüpfen Darmbakterien des Muttervogels auf, die sich in großer Zahl auf der Eischale befinden. Da in den kommerziellen Brütereien auf eine möglichst keimarme Umgebung geachtet wird, werden Eintagskücken erstmals beim Einstallen mit der stallspezifischen Bakterienflora konfrontiert. Sobald Bakterien den Darmtrakt besiedeln, vermehren sie sich rasch und erreichen nach weniger als einer Woche die maximale Dichte, in den Blinddärmen >10 11 Bakterien/g Ingesta (Apajalahti et al 2004). Ist die maximale Bakteriendichte erreicht, halten sich bakterielle Vermehrung und Abgang mit der Passagerate der Ingesta die Waage. Durch mikrobielle Fermentation werden in den Caeca große Mengen an flüchtigen Fettsäuren gebildet (Annison et al 1968, Bergman 1990), welche die Darmgesundheit sowie die Wasserrückresorptionsrate positiv beeinflussen. Um die Eubiose im Bereich des Dickdarms aufrecht zu erhalten, muss der Darmflora ihre natürliche Nahrungsgrundlage zur Verfügung stehen. Somit ist fermentierbare Nahrungsfaser auch für den Broiler von Bedeutung, obwohl diese Futterkomponente in der Praxis der kommerziellen Broilerfütterung bisher so gut wie keine Beachtung gefunden hat. Im beschriebenen Versuch wurde ein Nahrungsfasersupplement aus unbehandeltem Frischholz eingesetzt. Die Testsubstanz zählt somit zu den sogenannten Lignocelluloseprodukten, die sich in den letzten Jahren auf dem Markt etabliert haben. Die Hersteller beschreiben folgende Vorteile von Lignocelluloseprodukten: Standardisierter Gehalt an Rohfaser, Lignocellulose hat keinen Einfluss auf den Mineralstoffhaushalt der Tiere, die Produkte sind frei von Mykotoxinen und durchlaufen im Zuge des Produktionsprozesses verschiedene thermische Hygienisierungsschritte. Die eingesetzte Testsubstanz weist als Besonderheit auf, dass das Produkt sowohl fermentierbare als auch nicht fermentierbare Nahrungsfaser enthält, während herkömmliche Lignocelluloseprodukte ausschließlich nicht fermentierbare Nahrungsfaser enthalten. Die Testsubstanz wurde bereits in einer großen Anzahl an Feldversuchen in unterschiedlichen Dosierungen und Einsatzbereichen untersucht. Unter Praxisbedingungen zeigte die Testsubstanz positiven Einfluss auf Darmgesundheit und Leistungsdaten bei Zuchtsau, Absetzferkel, Mastschwein und Mastkaninchen (Krieg et al 2007, Neufeld und Leibetseder 2008). Der Versuch hat gezeigt, dass der Einsatz von Nahrungsfaser auch beim Broiler positive Auswirkungen auf die Leistungsdaten hat. Dies ist insbesondere deshalb bemerkenswert, weil bei der Gestaltung des Versuchsfutters kein Energieausgleich vorgenommen wurde, und daher die Tiere mit einem energiereduzierten Futter in der Mittelmast bessere Leistungen erzielten, als mit dem herkömmlichen kommerziellen Futter. Schlussfolgerung Das getestete Nahrungsfaserprodukt (OptiCell ®, Firma Agromed Austria GmbH) wirkte sich im beschriebenen Versuch positiv auf die Mastleistungsdaten beim Broiler aus. Seite 134 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Literatur Annison EF, Hill KJ, Kenworthy R (1968): Volatile fatty acids in the digestive tract of the fowl. Br. J. Nutr. 22: 207-216 Apajalahti J, Kettunen A, Graha H (2004): Characteristics of the gastrointestinal microbial communities, with special reference to the chicken. World’s Poultry Science Journal 60: 223-232 Bergman EN (1990): Energy contributions of volatile fatty acids from the gastrointestinal tract in various species. Physiol. Rev. 70 (2): 567-590 Krieg I, Krieg R, Kroismayr A, Leibetseder J, Neufeld K, Neufeld N, Zentek J (2007): Einfluss einer neuartigen Lignocellulose auf Gesundheitsstatus und Ausfallsquote in der Kaninchenmast. Proceedings 6. BOKU Symposium Tierernährung, 15.11.2007, Wien, Österreich, S. 134-142 Neufeld K, Leibetseder J: Nahrungsfaser in der Nutztierernährung. Feed Magazine, 2008, 5-6: 21-27 Autorenanschrift Dr. Nina Neufeld Animal Nutrition Research Center Sattelbach 13 A-2532 Heiligenkreuz, Österreich E-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 135 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Lignocellulose als sichere Rohfaserquelle zur Leistungsstabilisierung bei Häsinnen und Jungtieren in der Kaninchenzucht Ronald Krieg1) ,Steffen Schüle2) und Juliane Dohms3) 1) Kleintierzucht Krieg, Deutschland 2) J.Rettenmaier &Söhne GmbH, Deutschland 3) Rosenberg/Ellwangen, Deutschland Einleitung In der Kaninchenzucht wurde international an Themen der Gesunderhaltung von leistungsfähigen Rassen und Hybridlinien geforscht. Dabei lag der Focus in der Vergangenheit auf dem Erkenntniszuwachs zum Bedarf des Kaninchens für Futterstoffe, speziell physiologisch relevanter Inhaltstoffe. Zunehmend verbesserte Analysetechnologien und international koordinierte Verbundprojekte haben besonders nach dem Jahr 2000 zu einem rasanten Erkenntniszuwachs geführt. Eine veränderte Situation zur landwirtschaftlichen Erzeugung von Futterausgangsstoffen und auch eine veränderte Sichtweise der Verbraucher zur Lebensmittelsicherheit haben zu einer Vielzahl von neuen Fragestellungen der Kaninchenfütterung geführt. Ausschlaggebend war zudem das generelle Verbot der Fütterungsantibiotika ab 2006, welche in der Vergangenheit neben der Leistungsförderung auch gesundheitsstabilisierenden bzw. prophylaktischen Einfluss hatten. Diese Effekte sollten bei aktuellen Fragestellungen durch Optimierung der Fütterung und Strukturierung der Kaninchenration besonders hinsichtlich der Rohnährstoffe Beachtung finden. Das Kaninchen ist ein monogastrischer Pflanzenfresser, dessen Verdauungssystem sehr gut an den Verzehr großer Mengen pflanzlicher Gerüstsubstanzen angepasst ist. Insbesondere in der Phase nach dem Absetzen, in welcher die Größendifferenzierung des Verdauungssystems noch nicht abgeschlossen ist, hat das Kaninchen einen hohen Bedarf an ausreichend strukturierter Nahrungsfaser. Zu geringe Gehalte unverdaulicher Faser (Lignin) im Futter können zu vermindertem Wachstum führen, welches oftmals durch Verdauungsstörungen verursacht wird. Probleme wie Aufblähung oder Durchfall in der ersten Zeit nach dem Absetzen bereiten Kaninchenzüchtern wie – Mästern Schwierigkeiten. Tierverluste bis zu 30% sind keine Seltenheit (Tetens, 2007). Insbesondere unverdauliche Nahrungsfaser spielt eine wichtige Rolle für die Gesundheit der Kaninchen und die Aufrechterhaltung physiologischer Verdauungsvorgänge. Dem adäquaten Verhältnis von Lignin zu Cellulose kommt hier besondere Bedeutung zu, es sollte im Aufzuchtbereich über 0,40 liegen (Gidenne & Garcia, 2006). Ein neuer Ansatz zur Einstellung eines optimalen Rohfasergehaltes im Kaninchenfutter ist die Verwendung von Lignocellulose. Arbocel® Lignocellulose ist ein aus Frischholz gewonnenes Seite 136 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre mykotoxinfreies Rohfaserkonzentrat. Hinsichtlich einem bereits in der Kaninchenfütterung untersuchten Rohfaserkonzentrat (Krieg et al. 2007), welches auf Lignocellulose und Rindenbestandteilen basierte (Patentschrift 2008), unterscheidet sich Arbocel® einerseits in der ausschließlichen Zusammensetzung aus reiner Lignocellulose ohne Beimengung, andererseits durch die gleichmäßige Fibrillierung der Primärfaser. Die Analysenwerte belegten die Zusammensetzung von Arbocel® mit einem Rohfasergehalt von über 65 % und einem Lignin (ADL-) Anteil von ca. 23 % in der Trockensubstanz. Material und Methode In einem handelsüblichen Kaninchen- Alleinfutter sollte ein Teil der Rohfaserquelle durch Arbocel ® ersetzt werden. Dazu wurde im Zuchtfutter durch Zugabe von 3% Arbocel® und im Mastfutter durch 2 % Arbocel® ein Teil der Rohfaser substituiert. Es sollte geprüft werden, ob die Änderung der Rohfaserquelle, besonders beim Lignin (ADL), einen Effekt auf zootechnische Parameter bei Häsinnen und abgesetzten Jungtieren bis zur Schlachtreife hat. Bisherige Untersuchungen (Krieg et al. 2007) haben gezeigt, dass Lignocellulose einen deutlich stabilisierenden Effekt auf die Tiergesundheit abgesetzter Kaninchen hatte. Vorliegende Untersuchungen umfassten eine vollständige Reproduktionsperiode bis zum Absetzen mit 35 Tagen und eine Aufzuchtperiode der Jungtiere bis zum 80. Lebenstag. Dem Zuchtfutter sollte mehr Arbocel® zugegeben werden als dem Mastfutter, um die physiologische Konditionierung der Jungtiere vor dem Absetzen zu unterstützen. Diesem Versuchsziel sollte außerdem eine längere Säugedauer von 35 Tagen dienen. Die Untersuchungen wurden in einer Kaninchenhaltung mit Boxensystemen der Fa. Meneghin sro. Flatdeck durchgeführt. Im Untersuchungs-Betrieb wurden 30 Häsinnen der Linie ZIKA®-Hybrid in Standardboxen mit Plastik-Rostenboden unter praxisüblichen Bedingungen gehalten. Die Boxenmaße entsprachen den Leitlinien der WRSA (2007). Somit hatten alle Mütter mit ihren Würfen ein Platzangebot von 4500 cm2 und jedes Jungtier nach dem Absetzen 1125 cm2. Jede Mutter hatte freien Zugang zu ihrem Wurf. Alle Tiere wurden in einem Stallabteil gehalten, das Stallklima wurde temperaturabhängig mit einem Unterdruck- Entlüftungsverfahren automatisch geregelt. Gruppeneinteilung 30 Häsinnen wurden künstlich besamt. 20 tragende Häsinnen wurden am 28. Trächtigkeitstag in zwei Fütterungs-Gruppen eingeteilt (Kontrolle und Arbocel®- Gruppe 3%). Zum Wurf wurde praxisüblich ein Wurfausgleich vorgenommen. Die Jungtiere wurden mit 35 Tagen abgesetzt (4 Tiere je Box; je Gruppe 40 Tiere zufällig ausgewählt). Die Jungtiere erhielten ein Aufzuchtfutter mit 2% Arbocel® bzw. ein Kontrollfutter ohne Zusätze. Die Nachkommen der Mütter der Versuchsgruppe mit Arbocel erhielten ebenfalls diesen Rohfaserzusatz. Die Aufteilung der Jungtiere erfolgte innerhalb der Gruppen zufällig, die Geschlechter wurden getrennt gruppiert. Die Aufstallung der Tiere erfolgte nach einer randomisierten Blockanlage. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 137 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Fütterung Futter und Tränkwasser wurde ad libitum zur Verfügung gestellt. Es wurde handelsübliches Kaninchenzucht bzw. –Aufzuchtfutter ohne Zusätze (wie Medikamente, Kokzidiostatika) verwendet. Produzent war die REIKA Reinsdorfer Kraftfutterwerk (Sachsen). Die Rezepturen wurden durch mengenmäßige Anpassung der Rohkomponenten auf einen einheitlichen Rohfasergehalt abgestimmt. Für das Zuchtfutter und das Aufzuchtfutter wurde folgende Rohfaser-Zusammensetzung analysiert: Tab. 1: Rohfaseranalytik des Zucht- und Aufzuchtfutters Zuchtfutter (Häsinnen + Wurf) Aufzuchtfutter (Jungtiere Mast) Kontrolle Arbocel 3% Kontrolle Arbocel 2% TS (g/kg) 898 896 907 905 Rohfaser (%) 16,2 16,1 16,1 15,8 Lignin (ADL) % 4,4 4,3 3,0 3,0 Parametererfassung An allen Tieren wurden die Lebendmasse, Futterverzehr und physiologische Störungen (Durchfall und Aufblähungen) erfasst. Die Gewichtserfassung der Häsinnen erfolgte einzeln, der Würfe jeweils als gesamter Wurf. Die Wurfgröße wurde anhand der lebend geborenen bzw. abgesetzten Jungtiere ermittelt. Dabei wurden ausgetauschte Jungtiere der Empfänger-Häsin zugeordnet. Nach dem Absetzen wurde die Lebendmasse für jedes Einzeltier ermittelt. Das Durchfallgeschehen wurde täglich an allen Tieren erfasst. Als Durchfall wurde das Auftreten einer verschmierten oder verklebten Analregion mit wässrigem oder zähflüssigem Kot definiert. Abgänge wurden taggenau erfasst. Der Futterverzehr wurde in Perioden ermittelt. Der Futterverbrauch wurde vor dem Absetzen jeweils einer Häsin und deren Wurf zugeordnet, nach dem Absetzen jeweils einer Box mit 4 Jungtieren. Tierabgänge wurden bei der Berechnung der Futterverwertung termingenau berücksichtigt. Ergebnisse und Diskussion Reproduktionsperiode (28. Trächtigkeitstag der Mütter bis Absetzen der Jungtiere mit 35 Tagen) Morbidität und Mortalität Während der Hochträchtigkeit, der Wurfperiode und in der gesamten Säugezeit gab es bei den Häsinnen keine Erkrankungen oder Abgänge. Seite 138 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Die Abgänge bei den Jungtieren im Nest wurden in zwei Perioden ermittelt: von Geburt bis 21. Säugetag ( reine Milchphase) vom 22.- 35 Lebenstag der Nest- Jungtiere (beginnende Festfutteraufnahme). Tabelle 2: Jungtieranzahl während der Säugezeit (n=10 Häsinnen/ Gruppe) Arbocel®-Gruppe 3% Kontrollgruppe Anzahl Jungtiere zur Geburt 81 80 Anzahl am 21. Säugetag 75 77 Anzahl am 35. Säugetag 74 76 Tierabgänge 1.-21.Tag % 7,4 5,0 Tierabgänge 21.-35.Tag % 1,2 1,2 (nach Austausch) Die Jungtierabgänge im Nest waren im praxisüblichen Bereich und unterschieden sich nicht signifikant voneinander. Lebendmasse- Entwicklung Die Lebendmasseentwicklung der Mütter beider Gruppen verlief tendenziell auf gleichem Niveau. Die Lebendmasse der Jungtiere wurde mit Beginn der Festfutteraufnahme deutlich durch Arbocel®Zusatz beeinflusst. Lebendmasse Jungtiere im Nest g LM 900 840 757 800 Kontrolle 700 664 Arbocel 560 600 500 358 400 374 a b 300 200 100 68 68 0 Geburt 21.LT 28.LT 35.LT Tag pp. Abb. 1: Lebendmasse der Jungtiere in der Nestphase Unterschiedliche Buchstaben kennzeichnen signifikante Differenzen: p< 0,0052 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 139 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Die Lebendmassedifferenz der Jungtiere zum 28. Lebenstag war hoch signifikant (p<0,01), zu den übrigen Beobachtungsterminen zufällig. Trotz der höheren Anzahl aufgezogener Jungtiere im Nest (Tab. 2) konnte in der Versuchsgruppe ein deutlich besseres Wachstum der Jungtiere beobachtet werden. Während der gesamten Nestperiode nahmen die Jungtiere der Versuchsgruppe 772 g, der Kontrollgruppe 689 g zu. Das entspricht bei einem ausgeglichenen Startgewicht einem Vorteil von 83 g bzw. 11% des Absetzgewichtes der Kontrolle. Futterverzehr g/d Täglicher Futterverzehr je Häsin incl. Wurf 671 700 600 546 Kontrolle 500 Arbocel 383 400 408 a b 300 200 178 167 132 88 100 0 4.TW (alle Kontrollfutter) 5.TW (Beginn Arbocel) 1.-3.Wo.pp (Milchphase) 4.-5.Wo.pp (Festfutter JT) Reprod.-zeitpunkt Abb. 2: Futterverzehr der Häsinnen während der Säugezeit Unterschiedliche Buchstaben kennzeichnen signifikante Differenzen: p< 0,0008 TW= Trächtigkeitswoche Mit Beginn der Futterumstellung in der Hochträchtigkeit verringerte sich die Futteraufnahme der Häsinnen in der Arbocel- Gruppe um 33 %. Ein Zusammenhang mit der Wurfgröße ist zu diesem Zeitpunkt jedoch nicht herzuleiten, ebenso nicht zum Wurfgewicht. Nach homogenem Austausch der Würfe auf einheitliche Wurfgrößen konnte in der „Milchphase“ eine leicht erhöhte Futteraufnahme in der Arbocel®- Gruppe festgestellt werden. Im Ergebnis wurden leicht erhöhte Jungtiergewichte am 21. Lebenstag beobachtet. Mit Beginn der Festfutteraufnahme der Jungtiere konnte ein signifikant erhöhter Futterverzehr beobachtet werden (p<0,001). Der Futterwechsel bei Häsinnen in der Hochträchtigkeit hatte keinen negativen Einfluss auf Wurfgröße oder –gewicht, ebenso auf die Milchleistung. Seite 140 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Die erste Festfutteraufnahme der Jungtiere war signifikant höher als in der Kontrollgruppe. Aufzuchtperiode (Absetzen mit 35 Tagen bis Versuchsende am 80. Lebenstag) Durchfall und Mortalität bei Jungtieren nach Absetzen Für die Klassifizierung der physiologischen Störungen wurden drei Fälle unterschieden: • • • Durchfall hell: heller, gelb-brauner, sekretartiger Schleim mit gallertartiger Konsistenz, diffuse Verteilung auf Körperunterseite und Läufe Durchfall dunkel: dunkler, grau-schwarzer, pastöser und klebriger Kot, fest bis teigige Konsistenz, lokale Verteilung um den After, langanhaftend Aufblähung: physiologische Störung, die ohne sichtbare Durchfallerscheinungen einhergeht. Darminhalt kann flüssig sein („gluckern beim Schütteln“), auf jeden Fall Aufgasung des Caecum. Kein Weitertransport des Chymus. Tabelle 3: Tierabgänge und Morbidität in der Aufzuchtperiode Kontrollgruppe Arbocel®-Gruppe 2% Tiere zum Absetzen Anzahl 40 40 Tierabgänge Anzahl 7 3 Gastrointestinale Störung Anzahl 24 19 Anteil* Tiere mit Durchfall hell % 42,5 27,5 Anteil Tiere mit Durchf. dunkel % 7,5 10,0 Anteil Tiere mit Aufblähungen % 50,0 40,0 Durchfall hell (Dauer Tage) 3,35 1,82 Durchfall dunkel (Dauer Tage) 3,33 3,50 Aufblähung (Dauer Tage) 3,40 3,75 Summe aller Erkrankungen 5,63 4,95 (Dauer Tage) * Anteil Tiere= Anzahl der Tiere, bei denen die Erkrankungen beobachtet wurde im Bezug auf alle Tiere einer Gruppe 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 141 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Die Summe der Dauer aller Erkrankungen ist nicht identisch der Summe der Einzelwerte: Tiere konnten aufgebläht sein und hatten danach Durchfall. Wenn die Tiere allerdings Durchfall bekamen, gab es nur einen geringen Unterschied hinsichtlich der Dauer: die Tiere der Arbocel®-Gruppe hatte durchschnittlich 0,7 Tage weniger andauernde physiologische Störungen. Die Durchfallhäufigkeit konnte nur bei der hellen Form um 15 % gesenkt werden, es gab zudem 10 % weniger Aufblähungen. Die Dauer der Störungen konnte nur bei hellem Durchfall deutlich gesenkt werden (- 1,5 Tage). In der Arbocel- Gruppe konnten die Tierabgänge um mehr als die Hälfte reduziert werden. Der zeitliche Verlauf der Störungen nach dem Absetzen wurde wenig beeinflusst (Abb. 3). Prozentualer Anteil erkrankter Tiere nach dem Absetzen 60 Kontrollgruppe Versuchsgruppe 50 morbide Tiere (%) 40 30 20 10 80 78 76 74 72 70 68 66 64 62 60 58 56 54 52 50 48 46 44 42 40 38 36 0 Lebenstag Abb. 3: Verlauf der Erkrankungshäufigkeit in der Aufzuchtperiode bis zum 80. Lebenstag Die typischen physiologischen Imbalancen zu Ende der ersten und in der zweiten Woche nach dem Absetzen waren in der Arbocel- Gruppe geringer (- 12,5%). Auffallend war, dass innerhalb kurzer Zeit (7 Tage) mehr als die Hälfte der Kontrolltiere erkrankten und sich damit auch ein potentielles Ansteckungsrisiko aufbaute. Im gleichen Zeitraum, etwa um den 42. Lebenstag, waren in der Arbocel®- Gruppe etwa 25 % der Tiere erkrankt. Dies deutete auf eine physiologisch stabilere Situation in der Versuchsgruppe hin. Lebendmasse und Futterverzehr Je Gruppe wurden zufällig 40 Tiere beiderlei Geschlechts ausgewählt. Der Gewichtsvorteil der Arbocel®- Gruppe zum Absetzen (+ 84g) konnte bis zum Versuchsende am 80. Lebenstag aufrechterhalten werden (+ 60g). Es gab während des Wachstumsverlaufs keine signifikanten Unterschiede für die Lebendmasse zwischen den Gruppen. Tab. 4 gibt einen Überblick zu den Zunahmen und dem Futterverzehr nach dem Absetzen. Seite 142 7. BOKU-Symposium Tierernährung Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Tab 4: Lebendmasse und Futterverzehr der Jungtiere vom 36.- 80 Lebenstag (Mittelwert ± Stand.abw.), bereinigt um Tierverluste Kontrollgruppe Anzahl Tiere 35. Lebenstag Arbocel®-Gruppe 2% 40 40 759 ± 84 842 ± 80 Mastendgewicht 80. LT 2405 ± 287 2466 ± 199 Lebendmassezunahme 36.-80. LT 1646 ± 256 1624 ± 174 79.365 91.242 Futterverzehr je Tier 36.-80. LT 6061 ± 520 6236± 258 Futteraufwand (kg Futter/kg LMZ) 3,68 ± 0,19 3,84± 0,13 Absetzgewicht 35. Lebenstag (LT) Erzeugtes Lebendgewicht je Gruppe zum Mastende 80. LT (g) Die Differenzen zwischen den Mittelwerten der einzelnen Merkmale sind nicht signifikant. Die Tiergewichte in der Mast wurden durch Arbocel® (2% Zusatz) kaum beeinflusst. Die ökonomische Gesamtleistung der Arbocel®- Gruppe ist bedingt durch geringere Tierabgänge um 14,9 % höher gegenüber der Kontrolle (+ 11,88 kg). Je Durchschnitts-Tier der Arbocel®- Gruppe wurde in der Mastperiode 175 g mehr Futter aufgenommen (+ 2,9%) . Dadurch erhöht sich auch der Futteraufwand um 0,16 kg/kg in der Arbocel®- Gruppe. Obwohl die Tiere der Arbocel®- Gruppe insgesamt mehr Futter verzehrten, konnte ein geringfügig verbessertes ökonomisches Ergebnis realisiert werden. Zusammenfassung Der Ersatz von 3 % Rohfaser einer herkömmlichen Ration durch „Arbocel®“ in der Reproduktionsphase führte zu einem deutlich höheren Absetzgewicht der Jungtiere. Der Futterwechsel bei Häsinnen in der Hochträchtigkeit hat keinen negativen Einfluss auf Wurfgröße oder –gewicht, ebenso auf die Säugeleistung. Die Morbidität und Mortalität in der Säugezeit blieb unbeeinflusst. In der Mastperiode konnte der Einsatz von 2 % Arbocel® die Herdengesundheit geringfügig verbessern. Die klassische Durchfallhäufung nach dem Absetzen konnte nur bei der Form „heller Durchfall“ deutlich verringert werden. Ebenso wurde die Dauer dieser Durchfallform durch Arbocel® verkürzt. Dunkle Durchfälle und Verstopfungen traten in beiden Gruppen gleichermaßen auf. Die Mortalität war in der Arbocel®- Gruppe um 10 % geringer als in der Kontrolle. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 143 Prebiotika, Ballaststoffe / Prebiotics, Dietary fibre Die Lebendmassezunahme während der Mast blieb unbeeinflusst. Der Futteraufwand unterschied sich nur geringfügig. Eine ökonomische Bewertung der Lebendmasseproduktion und des Futterverbrauchs unter Einbeziehung aller Tierabgänge erbrachte einen Vorteil der Arbocel®- Gruppe von 14,9 % bezogen auf die erzeugte Lebendmasse je Gruppe zum Mastende. Der physiologische Effekt auf zootechnische Parameter von Arbocel® ist besonders in der Phase der ersten Festfutteraufnahme der Jungtiere zu sehen. Zu prüfen ist, ob ein früheres Absetzen und /oder ein höherer Anteil des Lignocellulosezusatzes zu positiven Effekten in der Mastperiode führen kann. Mit Arbocel® wurde ein weiteres Rohfaserkonzentrat in der Kaninchenzucht geprüft. Die Eignung für den Einsatz in der Reproduktion konnte als fördernd für die Nest- Jungtiere beschrieben werden. In der Aufzucht sind die positiven Effekte auf einen kurzen Zeitraum nach dem Absetzen beschränkt. Mit Arbocel® steht somit eine weitere Alternative zur Gesunderhaltung von Kaninchenbeständen ohne Antibiotika zur Verfügung. Literatur Tetens, M. (2007). „ Intensive Kaninchenhaltung in Deutschland.“Diss. Tierärztl. Hochschule Hannover Gidenne,T.; Garcia, J. (2006).” Nutritional strategies improving the digestive health of the weaned rabbit.” In: Recent Advances in Rabbit Sciences (Maertens, L. Coudert,P.; eds.): 229- 238 Krieg,I., Krieg,R., Kroismayr,A., Leibetseder,J., Neufekld,K., Neufeld,N., Zentek,J. (2007). „Einfluss einer neuartigen Lignocellulose auf Gesundheitsstatus und Ausfallquote in der Kaninchenmast.“ 6. BOKU-Symposium Tierernährung, Wien, 15. November 2007: 134- 142 Patentschrift (WO/2008/058698) ROUGHAGE (2008). http://www.wipo.int/pctdb/en/wo.jsp?IA=EP2007009791&WO=2008058698&DISP WRSA (2007). „Leitlinien der Deutschen Gruppe der World Rabbit Science Association (WRSA) und des DLG- Ausschusses für Kaninchenzucht und –haltung zu Mindeststandards bei der Haltung von Hauskaninchen.“ 10.05.2007, http://www. unigiessen.de/fbr09/tierzucht/ag_hoy/wrsa/Leitlinien.pdf Autorenadresse Dipl.Ing.agr. Ronald Krieg Kleintierzucht Merseburger Str. 3, D- 06255 Mücheln /Wünsch Seite 144 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring – JRS J.Rettenmaier & Söhne GmbH+Co.KG, Geschäftsbereich Tierernährung, Holzmühle 1, D-73494 Rosenberg 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 145 Probiotika / Probiotics Wirkung eines probiotischen Mehrstammproduktes und eines prebiotischen Trägerstoffes auf die intestinale Morphologie von Absetzferkeln Christiane Mair1, Wilhelm Windisch1, Michael Pfaffl2 und Christian Plitzner1 1 Department für Lebensmittelwissenschaften und -technologie, Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie, Universität für Bodenkultur Wien 2 Lehrstuhl für Physiologie, Zentralinstitut für Ernährungs- und Lebensmittelforschung (ZIEL), Technische Universität München Einleitung Im Verdauungstrakt findet man eine beachtliche Anzahl und Artenvielfalt an Mikroorganismen. Diese sogenannte Darmflora und deren Stoffwechselvorgänge können unter anderem auch durch die Nahrung beeinflusst werden (Rastall et al., 2005). Als Ziel derartiger Fütterungsinterventionen steht dabei meist die Verbesserung der Gesundheit und Leistungsbereitschaft der Nutztiere. So werden beispielsweise Probiotika, Prebiotika, organische Säuren oder phytogene Zusatzstoffe in der Tierernährung seit dem EU-weiten Verbot von antibiotischen Leistungsförderern im Jänner 2006 vermehrt eingesetzt. Nach Fuller (1992) sind Probiotika lebende Mikroorganismen, die dem Futter zugesetzt werden, um die Gesundheit des Wirtstieres durch Verbesserung des mikrobiellen Gleichgewichts im Darm positiv zu beeinflussen. Als Probiotika werden dabei vorwiegend Milchsäurebakterien, Bifidobakterien, Sporen von Bacillus spp. oder Saccharomyces cerevisiae verwendet. Neben der Applikation von Einzelstämmen werden in der Praxis häufig mehrere definierte Stämme gemeinsam in einem Produkt eingesetzt (Abe et al., 1995, Huang et al., 2004, Mountzouris et al., 2006, Shim et al., 2005), mit dem Ziel, die Eigenschaften unterschiedlicher Stämme, wie zum Beispiel die Wachstumshemmung von pathogenen Keimen, die Produktion von Säuren zur pH-Wert Senkung, etc. zu kombinieren. Im Unterschied dazu sind Prebiotika für das Wirtstier unverdaubare Nahrungsbestandteile (vorwiegend Kohlenhydrate), die selektiv das Wachstum und/oder die Aktivität von bestimmten Bakterienspezies im Intestinaltrakt stimulieren und so eine positive Wirkung auf das Wirtstier haben sollen (Gibson und Roberfroid, 1995). Diese Selektivität für bestimmte Mikroorganismen wurde beispielsweise für Bifidobakterien bei Fruktooligosacchariden (β-D-Fructane, 2-20 Monomere) bzw. Inulin (β-D-Fructane, 2-60 Monomere) nachgewiesen (Gibson et al., 1995). Da es sich bei Prebiotika um „nicht-lebende“ Substanzen handelt, sind diese nicht, wie Probiotika, anfällig die Magen-DarmPassage auf Grund des stark sauren Milieus im Magen nicht zu überleben. Häufig werden Prebiotika Seite 146 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics gemeinsam mit Probiotika (i.e. Symbiotikum) verabreicht, da Prebiotika neben den kommensalen Bakterien im Darm auch das Wachstum geeigneter probiotischer Stämme stimulieren können (Schrezenmeir und de Vrese, 2001). In der vorliegenden Studie sollte die Wirkung eines probiotischen Mehrstammproduktes auf histometrische Parameter (Zottenlänge, Kryptentiefe, Fläche der Peyer’schen Platten und Anzahl der Lymphfollikel in den mesenterialen Lymphknoten) in ausgewählten Darmabschnitten in einem Fütterungsversuch mit Absetzferkeln untersucht werden. Um die erwarteten Effekte von möglichen Koeffekten des verwendeten prebiotischen Trägerstoffes Inulin zu differenzieren wurde der Versuch 2faktoriell angelegt und daraus resultierend folgende vier Gruppen eingesetzt: negative Kontrolle, Prebiotikumgruppe (Inulin), Probiotikumgruppe und Symbiotikumgruppe. Material und Methoden Der Fütterungsversuch wurde mit 48 Absetzferkeln der 2-Rassenkreuzung Edelschwein x Piétrain durchgeführt. Die im Schnitt 26 Tage alten Ferkel wurden nach Wurf, Geschlecht und Lebendmasse in zwölf Blöcke zu je vier möglichst ähnlichen Tieren eingeteilt. Innerhalb des Blocks wurden die Tiere zufällig einer der vier Versuchsgruppen zugeordnet, wobei die Ferkel ein durchschnittliches Lebendgewicht von 9,2 kg ±0,2 (±pSEM) aufwiesen. Die Haltung der Ferkel erfolgte in insgesamt acht Boxen eines Ferkelaufzuchtstalles mit Vollspaltenboden und beheizter Liegefläche. Die Tiere der Kontrollgruppe erhielten ein handelsübliches Ferkelaufzuchtfutter (183 g XP und 15,6 MJ ME per kg T (GfE, 2008)), welches in den Versuchsgruppen mit einem Prebiotikum (0,4 % Inulin, „Prebiotikum“), einem probiotischen Mehrstammprodukt (Enterococcen, Lactobacillen und Bifidobakterien, 1x109 KBE/kg FM, BIOMIN GmbH, Herzogenburg, „Probiotikum“), bzw. einer Mischung der beiden experimentellen Faktoren in gleichen Konzentrationen („Symbiotikum“) versetzt wurde. Die Futtermischungen wurden isokalorisch und isonitrogen eingestellt und standen den Tieren gemeinsam mit Wasser ad libitum zur Verfügung. Nach einer vierwöchigen Fütterungsintervention wurden die Tiere mit einem durchschnittlichen Lebendgewicht von 17,8 kg ±0,4 fachgerecht geschlachtet und Gewebeproben aus dem Jejunum, Ileum, Colon sowie den mesenterialen Lymphknoten gezogen. Die Proben wurden in einer Kochsalzlösung gewaschen (3,8 % NaCl), in Einbettkassetten überführt und für 24h bei Raumtemperatur in Formalin fixiert. Anschließend erfolgte eine Dehydrierung der Proben in aufsteigenden Alkoholkonzentrationen und eine Imprägnierung in Rotihistol, wonach die Proben in Paraffin eingebettet wurden. Am Mikrotom wurden 6 µm Gewebeschnitte hergestellt, auf Objektträger aufgebracht und mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt. Die histologischen Messungen beinhalteten die Bestimmung der Zottenlänge (von der Zottenspitze bis zur Lamina propria muscularis, µm) und Kryptentiefe (vom der Öffnung der Krypte bis zur Lamina propria muscularis, µm) in Jejunum und Ileum sowie die Kryptentiefe und Kryptenbreite im Colon (µm). Zusätzlich wurde die Fläche der Peyer’schen Platten im Ileum (mm2) und die Anzahl der Lymphfollikel pro Knotenfläche in den mesenterialen Lymphknoten (n/mm2) erhoben. Die statistische Auswertung der Ergebnisse erfolgte mit Hilfe der Statistical Analysis Software (SAS 9.1.3, SAS Institute Inc., NC, USA, 2002-2003) unter Verwendung der procedure GLM und einem statistischen Modell einschließlich Versuchsgruppe und Block. Um die Effekte der experimentellen Faktoren herauszuarbeiten, kam ein zusätzliches Modell zur Anwendung, welches Prebiotikum, Probiotikum und die Interaktion der Faktoren (Prebiotikum x Probiotikum) beinhaltete. Multiple Vergleiche der LS-means (least square means) wurden mit dem Tukey-Kramer-Test durchgeführt. Die 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 147 Probiotika / Probiotics Gruppenunterschiede wurden bei einem p-Wert von <0,05 als statistisch signifikant und bei 0,05<p<0,10 als Tendenz bewertet. Zusätzlich zu den histologischen Messungen wurde das V/CVerhältnis (Verhältnis: (Zottenlänge - Kryptentiefe) / Kryptentiefe) in Jejunum und Ileum errechnet. Ergebnisse Die Ergebnisse der histologischen Messungen im Darmtrakt von Absetzferkeln zeigten allgemein eine Abnahme der Zottenlänge im Dünndarmverlauf, sowie das Auftreten der tiefsten Krypten im Colon verglichen mit den Krypten im Dünndarm. Im Jejunum konnte eine tendenzielle Erhöhung der Zottenlänge in der Probiotikumgruppe im Vergleich zur Kontrolle detektiert werden (p<0,10, Abbildung 1). Zusätzlich war eine signifikante Interaktion der beiden experimentellen Faktoren Inulin und Probiotikum zu beobachten, da sich die Zottenlänge in der Symbiotikumgruppe nicht additiv aus den Ergebnissen der Einzelkomponenten ergab. Die Kryptentiefe im Jejunum zeigte keine statistisch signifikanten Unterschiede zwischen den Gruppen. Das V/C-Verhältnis im Jejunum war in der Prebiotikumgruppe mit einem Quotienten von 1,32 am höchsten und lag damit 24,5 % über der Kontrollgruppe (Tabelle 1). Abbildung 1: Zottenlänge und Kryptentiefe im Jejunum der Absetzferkel Abbildung 2: Darstellung der histologischen Messungen (Zottenlänge, Kryptentiefe, Fläche der Peyer’schen Platten) im Ileum der Absetzferkel Seite 148 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics Abbildung 3: Kryptentiefe und Kryptenbreite im Colon und Anzahl der Lymphfollikeln in den mesenterialen Lymphknoten von Absetzferkeln Tabelle 1: Verhältnis der Zottenlänge zur Kryptentiefe (V/C) in Jejunum und Ileum Versuchsgruppe Kontrolle Prebiotikum Probiotikum Symbiotikum pSEM p-Wert Jejunum 1,06 1,32 1,20 1,12 0,05 0,263 Ileum 1,42 1,32 1,31 1,25 0,04 0,655 Statistisch signifikante Unterschiede konnten im Ileum für keine der untersuchten Parameter bestimmt werden (Abbildung 2). Allerdings wies die Symbiotikumgruppe die numerisch längsten Zotten (+10,9 % im Vergleich zur Kontrolle), die tiefsten Krypten (+13,3 %) sowie die größte Fläche der Peyer’schen Platten (+10,4 %) auf. Auch bei dem V/C-Verhältnis waren keine signifikanten Unterschiede zwischen den Versuchsgruppen festzustellen, jedoch hatte hier die Kontrollgruppe, die im Jejunum den geringsten Wert aufwies, mit 1,42 den höchsten Quotienten und lag damit 12,0 % über dem Symbiotikum, der Gruppe mit dem niedrigsten Quotienten (Tabelle 1). Tiere, welche Probiotika in ihren Futtermischungen erhielten, wiesen zusätzlich im Vergleich zu den anderen beiden Gruppen breitere Krypten im Colon auf (p<0,10, Abbildung 3). Die Kryptentiefen im Colon unterschieden sich statistisch jedoch nicht signifikant. Auch bei der Anzahl der Lymphfollikel pro Knotenfläche (Abbildung 3) waren keine statistisch signifikanten Unterschiede zu verzeichnen, wobei die Werte im Mittel bei 165,9 Follikeln pro Knotenfläche (mm2) lagen. Diskussion Ziel des vorliegenden Experiments war es die Wirkung des Prebiotikums Inulin sowie eines Mehrstammprobiotikums auf die Darmstruktur von Absetzferkeln zu untersuchen. In der Ferkelaufzucht ist vor allem das Absetzen eine kritische Phase, in welchem häufig stressbedingte Wachstumseinbußen und Morbidität zu verzeichnen sind (Pluske et al., 1997). So kommt es in dieser Zeit zu histologischen und biochemischen Veränderungen im Dünndarm, wie zum Beispiel Zottenatrophie oder Hyperplasie der Krypten (Pluske et al., 1997). Verdauungs- und 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 149 Probiotika / Probiotics Absorptionsstörungen können die Folge sein, welche häufig mit ein Grund für Diarrhoe nach dem Absetzen sind (Pluske et al., 1997). Daher sind Zottenlänge und Kryptentiefe indirekte Indikatoren für die Reife und funktionelle Kapazität der Enterozyten (Hampson, 1986), welche bei längeren Zotten und tieferen Krypten in größerer Anzahl im Darm vorkommen (Hampson, 1986). Aus diesem Grunde kann eine Vergrößerung der Distanz von Zottenspitze zum Kryptenanfang im Absetzferkel die Funktion von Verdauung und Absorption der Nährstoffe verbessern (Pluske et al., 1996), was sich positiv auf die Wachstumsleistungen auswirken könnte (Marinho et al., 2007). Denn durch Zottenatrophie kann ein Engpass in der Aufnahme von Schlüsselnährstoffen resultieren, welche beispielsweise für das Wachstum peripherer Gewebe wie den Skelettmuskeln notwendig sind (Domeneghini et al., 2006). Zusätzlich zur Veränderung der Morphologie nach dem Absetzten treten auch häufig Entzündungen im Intestinaltrakt auf. Entzündungen per se werden mit einer Verringerung der Zottenlänge im Dünndarm in Verbindung gebracht (Touchette et al., 2002). Die histometrischen Analysen in der vorliegenden Studie zeigten demgegenüber eine tendenzielle Erhöhung der Zottenlänge im Jejunum der Probiotikumgruppe gemeinsam mit einer vergleichsweise geringen Kryptentiefe. In Anbetracht dieser Ergebnisse kann man daher schlussfolgern, dass vor allem die Probiotikumgruppe keinen negativen, entzündungsfördernden Reizen im Jejunum ausgesetzt war. Auch in anderen Studien, beispielsweise mit Bacillus sp., konnte eine Erhöhung der Zottenlänge im Jejunum von Schweinen beobachtet werden (Gorke und Liebler-Tenorio, 2001). Die Hauptaktivität der Verdauungsvorgänge findet im Jejunum statt, wohingegen das Ileum vorwiegend für Absorption der im Jejunum nicht aufgenommenen Nährstoffe verantwortlich ist (Montagne et al., 2003). In der vorliegenden Studie wurden im Ileum keine statistisch signifikanten Unterschiede in der Zottenlänge, Zottenbreite und Kryptentiefe erfasst. Diese Ergebnisse stehen in Kontrast zu Resultaten von Di Giancamillo (2008), welcher nach Einsatz von Pediococcen bei Absetzferkeln signifikant längere Zotten und tiefere Krypten im Ileum nachwies. Shim et al. (2005) jedoch konnten ebenfalls keine unterschiedlichen Einflüsse von Pro-, Pre- bzw. Symbiotika auf die Zottenlänge im Ileum von Saugferkeln detektieren. Da auch durch einen Kontakt mit pathogenen Keimen die Zottenlänge im Dünndarm verringert wird (Dreau et al., 1994), kann man schlussfolgern, dass die hygienischen Bedingungen zwischen den Gruppen vergleichbar waren. Das V/C-Verhältnis ist ein gutes Kriterium die Verdauungskapazität im Dünndarm einzuschätzen. So wird eine Verminderung des Quotienten als negativ für Verdauung und Absorption gesehen (Montagne et al., 2003). Andererseits wird ein höheres V/C-Verhältnis mit einem erhöhten ZellTurnover in der intestinalen Mucosa assoziiert, was den Grundumsatz und so den Energiebedarf der Ferkel folglich erhöhen kann (Van Nevel et al., 2005). Die Ergebnisse aus den Berechnungen für die Prebiotikumgruppe zeigen ein sehr einheitliches Verhältnis in Jejunum und Ileum, wohingegen sich das Verhältnis in der Kontrollgruppe von Jejunum Richtung Ileum erhöht. Schlussfolgerung In der vorliegenden Studie konnte an 48 Absetzferkeln gezeigt werden, dass der Einsatz eines Mehrstammprobiotikums einen positiven Effekt auf die Zottenlänge im vorderen Dünndarm (Jejunum) aufwies. Das zusätzlich getestete Prebiotikum Inulin hatte demgegenüber jedoch keine signifikanten Einflüsse auf die intestinale Morphologie zu verzeichnen. Man kann daher schlussfolgern, dass das Probiotikum, mit welchem die potentiell negativen Einflüsse des Absetzens auf die Zottenlänge am besten kompensiert werden konnte, möglicherweise einen Vorteil bei der Nährstoffabsorption und -verdaulichkeit bringen könnte. Seite 150 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics Literatur Abe, F., Ishibashi, N. und Shimamura, S.: Effect of administration of bifidobacteria and lactic acid bacteria to newborn calves and piglets, J Dairy Sci 78(12): 2838-2846, 1995 Di Giancamillo, A., Vitari, F., Savoini, G., Bontempo, V., Bersani, C., Dell'orto, V. und Domeneghini, C.: Effects of orally administered probiotic Pediococcus acidilactici on the small and large intestine of weaning piglets. A qualitative and quantitative micro-anatomical study, Histol Histopathol 23(6): 651-664, 2008 Domeneghini, C., Di Giancamillo, A., Arrighi, S. und Bosi, G.: Gut-trophic feed additives and their effects upon the gut structure and intestinal metabolism. State of the art in the pig, and perspectives towards humans, Histol Histopathol 21(3): 273-283, 2006 Dreau, D., Lalles, J.P., Philouze-Rome, V., Toullec, R. und Salmon, H.: Local and systemic immune responses to soybean protein ingestion in early-weaned pigs, J Anim Sci 72(8): 2090-2098, 1994 Fuller, R., ed. (1992) Probiotics: The Scientific Basis. Chapman & Hall, London, UK. GfE: Communications of the Committee for Requirement Standards of the Society of Nutrition Physiology - Prediction of Metabolisable Energy of compound feeds for pigs, Proc. Soc. Nutr. Physiol. 17: 199-204, 2008 Gibson, G.R., Beatty, E.R., Wang, X. und Cummings, J.H.: Selective stimulation of bifidobacteria in the human colon by oligofructose and inulin, Gastroenterology 108(4): 975-982, 1995 Gibson, G.R. und Roberfroid, M.B.: Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics, J Nutr 125(6): 1401-1412, 1995 Gorke, B. und Liebler-Tenorio, E.: [Probiotics: Is there a scientific basis for their effects?], Dtsch Tierarztl Wochenschr 108(6): 249-251, 2001 Hampson, D.J.: Alterations in piglet small intestinal structure at weaning, Res Vet Sci 40(1): 32-40, 1986 Huang, C.H., Qiao, S.Y., Li, D.F., Piao, X.S. und Ren, J.P.: Effects of Lactobacilli on the performance, diarrhea incidence, VFA concentration and gastrointestinal microbial flora of weaning pigs, Asian Austral J Anim 17(3): 401-409, 2004 Marinho, M.C., Pinho, M.A., Mascarenhas, R.D., Silva, F.C., Lordelo, M.M., Cunha, L.F. und Freire, J.P.B.: Effect of prebiotic or probiotic supplementation and ileo rectal anastomosis on intestinal morphology of weaned piglets, Livestock Science 108(1-3): 240-243, 2007 Montagne, L., Pluske, J.R. und Hampson, D.J.: A review of interactions between dietary fibre and the intestinal mucosa, and their consequences on digestive health in young non-ruminant animals, Anim Feed Sci Tech 108(1-4): 95-117, 2003 Mountzouris, K.C., Balaskas, C., Fava, F., Tuohy, K.M., Gibson, G.R. und Fegeros, K.: Profiling of composition and metabolic activities of the colonic microflora of growing pigs fed diets supplemented with prebiotic oligosaccharides, Anaerobe 12(4): 178-185, 2006 Pluske, J.R., Hampson, D.J. und Williams, I.H.: Factors influencing the structure and function of the small intestine in the weaned pig: a review, Livest Prod Sci 51(1-3): 215-236, 1997 Pluske, J.R., Thompson, M.J., Atwood, C.S., Bird, P.H., Williams, I.H. und Hartmann, P.E.: Maintenance of villus height and crypt depth, and enhancement of disaccharide digestion and monosaccharide absorption, in piglets fed on cows' whole milk after weaning, Br J Nutr 76(3): 409-422, 1996 Rastall, R.A., Gibson, G.R., Gill, H.S., Guarner, F., Klaenhammer, T.R., Pot, B., Reid, G., Rowland, I.R. und Sanders, M.E.: Modulation of the microbial ecology of the human colon by probiotics, prebiotics and synbiotics to enhance human health: an overview of enabling science and potential applications, FEMS Microbiol Ecol 52(2): 145-152, 2005 Schrezenmeir, J. und De Vrese, M.: Probiotics, prebiotics, and synbiotics--approaching a definition, Am J Clin Nutr 73(2 Suppl): 361S364S, 2001 Shim, S.B., Verstegen, M.W., Kim, I.H., Kwon, O.S. und Verdonk, J.M.: Effects of feeding antibiotic-free creep feed supplemented with oligofructose, probiotics or synbiotics to suckling piglets increases the preweaning weight gain and composition of intestinal microbiota, Arch Anim Nutr 59(6): 419-427, 2005 Touchette, K.J., Carroll, J.A., Allee, G.L., Matteri, R.L., Dyer, C.J., Beausang, L.A. und Zannelli, M.E.: Effect of spray-dried plasma and lipopolysaccharide exposure on weaned pigs: I. Effects on the immune axis of weaned pigs, J Anim Sci 80(2): 494-501, 2002 Van Nevel, C.J., Decuypere, J.A., Dierick, N.A. und Molly, K.: Incorporation of galactomannans in the diet of newly weaned piglets: effect on bacteriological and some morphological characteristics of the small intestine, Arch Anim Nutr 59(2): 123-138, 2005 Autorenanschrift Mag. Christiane Mair Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Department für Lebensmittelwissenschaften und -technologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel Straße 33 , A-1180 Wien E-Mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 151 Probiotika / Probiotics DGGE Fingerprinting of the Total Bacterial and Bifidobacterial Gut Microflora in Piglets in Response to Feeding with Probiotics and Prebiotics G. Wegl1, V.A. Sattler1, C. Plitzner2, S. Nitsch2, A.P. Loibner1, G. Schatzmayer3 and V. Klose1 1 University of Natural Resources and Applied Life Sciences, Vienna, Dep. IFA-Tulln, Division Environmental Biotechnology, Konrad Lorenz Str. 20, 3430 Tulln, Austria 2 University of Natural Resources and Applied Life Sciences, Vienna, Dep. of Food Science & Technology, Division of Animal Food and Nutrition, Gregor Mendel Str. 33, 1180 Vienna, Austria 3 BIOMIN Research Center, Technopark 1, 3430 Tulln, Austria Introduction Natural feed additives like pro- and prebiotics represent a promising alternative to antimicrobial growth promoters, since they were shown to maintain health and positively influence performance standards in livestock production (Collier et al., 2003; Taras et al., 2007). However, administration to farm animals also changes their gastrointestinal (GI) microbiota. Due to limitations in classical culturebased techniques, the use of molecular methods allows to gain new insights into intestinal microbial ecology and the effects of different dietary strategies and host factors on the bacterial-community composition. The aim of this study was to develop and evaluate denaturing gradient gelelectrophoresis (DGGE), a qualitative method to display the genetic diversity of complex microbial community structures, to detect possible changes in the microbiota of piglets in response to different feeding practices on the basis of a feeding trail. Material and methods In the feeding trial the experimental groups, each comprised of 12 individual weaner piglets were: (i) control group, fed untreated feed; (ii) test group fed with probiotics; (iii) test group fed with pro- and prebiotics (synbiotics); (iv) test group fed with prebiotics. Test animals were sacrificed at day 28 and contents of ileum, caecum and colon were taken under anaerobic conditions. Samples were stored at Seite 152 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics -80°C for further analysis. DNA extraction was performed with the QIAamp DNA Stool Mini Kit (Quiagen, Hilden, Germany) and the 16S rDNA V3 region was amplified by PCR using universal eubacterial primers 341f-GC and 518r (Muyzer et al., 1993) to monitor the total bacterial microbiota. Amplification of bifidiobacterial primers was done in a nested PCR approach. First, all samples were screened for specific amplicons using the bifidobacterial primers Bif164-f and Bif662-r (Kok et al., 1996). In the second PCR round, obtained fragments were reamplified with 341f-GC and 518r. PCR amplicons obtained were separated by DGGE based on the GC content of the sequences. Polyacrylamid gels (8%) with gradients from 30–60% were employed for separation of products amplified with universal primers and from 35–65% for bifidobacterial amplicons. Gels were electrophoresed for 16h at 120V in a 0.5x Tris-acetic-acid-EDTA Buffer (TAE) at a constant temperature of 60°C and subsequently stained with SYBR Green. Similarity, microbial diversity and species richness of banding patterns of the intestinal samples were analyzed using cluster analysis, Shannon diversity indices and number of bands supported by the gel software program GelComparII (Applied Maths, Belgium). Results and discussion Comparisons between DGGE fingerprints of universal bacterial PCR fragments of ileum, caecum and colon samples within and between dietary groups showed first important insights. Results revealed significant differences in colonic and caecal microbial richness and diversity in treated compared with untreated animals, indicating an important effect of the microbial and prebiotic feed additives on the gut microbiota (Tab. 1A). However, low bacterial diversity of ileal samples is also known from literature (Marteau et al., 2001) and may be related to the passage through the stomach, where bacteria meet extreme conditions. Cluster analysis displayed very clear clustering of bacterial fingerprints from colon samples according to the different dietary groups indicating an effect of the feed on the microbial population in that particular gut compartment. However, it is still not clear to what extent pro- and prebiotics contribute to these changes and why the effects are detected more distinct in the distal part of the gastrointestinal tract (Fig. 1A). Another interesting finding was that in all gut compartments prebiotic profiles tended to group with samples from the control group. Concerning the bifidobacterial community, it could be shown that microbial richness and diversity within a feeding group were similar (Tab. 1B). However, comparison with the control group showed that combination of pro- and prebiotic feed significantly enhanced the bifidobacterial population in caecum samples. Undigestible carbohydrates are known to stimulate the growth and activity of the resident gut microbiota, especially bifidobacteria are target organisms for prebiotics. In the case of synbiotic administration, prebiotic substances could not only stimulate resident gut strains but could also improve the survival of the probiotic organism, because its specific substrate is readily (Collins and Gibson, 1999). Although ileal samples from the synbiotics feeding group tend to group together and similar clustering of synbiotic and prebiotic samples was found in the caecum, cluster analysis of the DGGE fingerprint profiles revealed no clear clustering pattern (Fig 1B). One possible reason might be that too few samples were analysed for some groups. Maybe in the case of higher and equally distributed sample numbers clustering patterns would be more obvious. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 153 Probiotika / Probiotics Tab. 1: Mean values (standard deviations are written in parentheses) for microbial richness (S, No. of bands) and diversity (H’, Shannon-Wiener Index) were calculated from DGGE fingerprints of ileum, caecum and colon samples from different dietary groups (n= No. of analyzed samples) of the total bacterial A) and the bifidobacterial B) community. Statistically significant differences within groups are marked with letters a and b. Differences of the pro-, syn- and prebiotic group compared to the control are marked in bold letters. Seite 154 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics B) Bifidobacterial Community Fingerprints A) Universal Community Fingerprints Hatzendorf Ileum (32 entries) Dice (Tol 0.4%-0.4%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%] 100 B1 No. 46 probiotics C1 No. 3 synbiotics C2 No. 43 synbiotics B2 No. 22 probiotics B3 No. 38 probiotics B4 No. 2 probiotics B5 No. 42 probiotics B6 No. 18 probiotics C3 No. 39 synbiotics C4 No. 47 synbiotics C5 No. 15 synbiotics C6 No. 23 synbiotics B7 No. 26 probiotics B8 No. 14 probiotics A1 No. 29 control A2 No. 37 control C7 No. 19 synbiotics C8 No. 35 synbiotics D1 No. 4 prebiotics C1 No. 19 synbiotics A3 No. 1 control C2 No. 39 synbiotics A4 No. 21 control C3 No. 15 synbiotics A5 No. 17 control D2 No. 48 prebiotics C4 No. 35 synbiotics D3 No. 28 prebiotics D1 No. 16 prebiotics D4 No. 16 prebiotics B1 No. 26 probiotics D5 No. 44 prebiotics B2 No. 46 probiotics A6 No. 13 control B3 No. 14 probiotics A7 No. 25 control B4 No. 38 probiotics No. 1 control Hatzendorf Ileum Bif (13 entries) Dice (Tol 1.1%-1.1%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%] Bifido 100 90 80 70 60 50 40 Bifido 30 80 90 60 70 40 50 V3_new 30 20 V3_new D6 No. 36 prebiotics A1 A8 No. 5 control D2 No. 4 prebiotics D7 No. 24 prebiotics D3 No. 48 prebiotics D8 No. 40 prebiotics B5 No. 6 probiotics Hatzendorf Caecum (32 entries) Dice (Tol 0.2%-0.2%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%] V3_new 100 Hatzendorf Caecum Bif (24 entries) B1 No. 22 probiotics B2 No. 42 probiotics B3 No. 26 probiotics B4 No. 38 probiotics C1 No. 35 synbiotics C2 No. 39 synbiotics C3 No. 43 synbiotics B5 No. 18 probiotics C1 No. 23 synbiotics B6 No. 46 probiotics C2 No. 43 synbiotics C4 No. 47 synbiotics C3 No. 35 synbiotics B7 No. 6 probiotics C4 No. 3 synbiotics B8 No. 14 probiotics B1 No. 46 probiotics C5 No. 3 synbiotics D1 No. 16 prebiotics C6 No. 19 synbiotics B2 No. 42 probiotics C7 No. 23 synbiotics C5 No. 19 synbiotics D1 No. 44 prebiotics C6 No. 47 synbiotics D2 No. 40 prebiotics C7 No. 39 synbiotics D3 No. 48 prebiotics B3 No. 14 probiotics D4 No. 36 prebiotics B4 No. 26 probiotics C8 No. 15 synbiotics D5 No. 4 prebiotics D2 No. 24 prebiotics A1 No. 5 control D3 No. 44 prebiotics D6 No. 28 prebiotics D4 No. 28 prebiotics A2 No. 13 control D5 No. 4 prebiotics D6 No. 48 prebiotics No. 40 prebiotics D7 No. 24 Dice (Tol 1.3%-1.3%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%] 100 90 80 70 60 Bifido 50 30 Bifido 40 90 80 70 60 50 40 30 20 10 V3_new prebiotics D8 No. 16 prebiotics D7 A3 No. 37 control A1 No. 1 control A4 No. 25 control A2 No. 25 control A5 No. 21 control A3 No. 5 control A6 No. 29 control D8 No. 36 prebiotics A7 No. 17 control B5 No. 6 probiotics A8 No. 1 control A4 No. 29 control Hatzendorf Colon (32 entries) Dice (Tol 0.3%-0.3%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%] 100 A1 29 control A2 37 control A3 5 control A4 17 control A5 25 control A6 13 control A7 21 control D1 No. 16 prebiotics D2 No. 24 prebiotics D3 No. 28 prebiotics Hatzendorf Colon Bif (14 entries) D4 No. 44 prebiotics Dice (Tol 0.7%-0.7%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%] D5 No. 48 prebiotics D6 No. 36 prebiotics D7 No. 40 prebiotics D8 No. 4 prebiotics C1 No. 19 synbiotics C2 No. 43 synbiotics C3 No. 23 synbiotics B1 No. 42 probiotics C4 No. 39 synbiotics B2 No. 46 probiotics C5 No. 3 synbiotics A1 No. 29 control C6 No. 47 synbiotics A2 No. 25 control C7 No. 15 synbiotics C1 No. 39 synbiotics B1 No. 6 probiotics C2 No. 47 synbiotics C8 No. 35 synbiotics B3 No. 38 B2 No. 42 probiotics C3 No. 43 B3 No. 46 probiotics C4 No. 15 synbiotics B4 No. 22 probiotics D1 No. 4 prebiotics B5 No. 26 probiotics B6 No. 38 probiotics D2 No. 24 prebiotics B7 No. 14 probiotics D3 No. 28 prebiotics B8 No. 18 probiotics D4 No. 16 prebiotics A8 1 control A3 No. 1 control Bifido 100 90 80 70 Bifido 60 50 90 80 70 60 50 40 V3_new 30 20 V3_new probiotics synbiotics Figure 1 is described on the next page 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 155 Probiotika / Probiotics Fig.1: Dendogram showing clusters based on universal A) and bifidobacterial B) DGGE profiles reflecting the similarity of the intestinal bacterial communities of the ileum, the caecum and the colon taken from pigs assigned to different dietary groups: (A1-8) belonging to the control group with untreated feed; (B1-B8) belonging to the group treated with probiotics; (C1-C8) belonging to the group treated with synbiotics; (D1-D8) belonging to the group treated with prebiotics. Numbers in the middle column are identification numbers assigned to every pig in the feeding trial. The similarity of banding patterns was calculated on the basis of the dice coefficient, 100 indicating identical band patterns and 0 indicating no common bands between two fingerprint entries. Conclusion This study clearly demonstrated that DGGE is a powerful tool to study targeted microbial populations in the GI tract. Eubacterial DGGE analysis revealed an overall increase in bacterial diversity in the colon of pro- and prebiotic fed. Concerning bifidobacterial communities, positive effects of prebiotic fed in combination with probiotic strains stood out. However, although this study allows following qualitative changes, complex interrelations of the microbiota, like influence of the environment, variations in genetics and health status within the animals herd, have to be considered. Therefore, application of quantitative techniques (e.g. FISH and qPCR) in future feeding trials will allow us to gain further insights into complex interactions, with the aim to better characterize the effects on microbiota of piglets. Reference List Collier,C.T., Smiricky-Tjardes,M.R., Albin,D.M., Wubben,J.E., Gabert,V.M., Deplancke,B. et al. (2003) Molecular ecological analysis of porcine ileal microbiota responses to antimicrobial growth promoters. J Anim Sci 81: 3035-3045. Collins,M.D. and Gibson,G.R. (1999) Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut. Am J Clin Nutr 69: 1052S-11057. Kok,R.G., de,W.A., Schut,F., Welling,G.W., Weenk,G., and Hellingwerf,K.J. (1996) Specific detection and analysis of a probiotic Bifidobacterium strain in infant feces. Appl Environ Microbiol 62: 3668-3672. Marteau,P., Pochart,P., Dore,J., Bera-Maillet,C., Bernalier,A., and Corthier,G. (2001) Comparative Study of Bacterial Groups within the Human Cecal and Fecal Microbiota. Appl Environ Microbiol 67: 4939-4942. Muyzer,G., de Waal,E.C., and Uitterlinden,A.G. (1993) Profiling of complex microbial populations by denaturing gradient gel electrophoresis analysis of polymerase chain reaction-amplified genes coding for 16S rRNA. Appl Environ Microbiol 59: 695-700. Taras,D., Vahjen,W., and Simon,O. (2007) Probiotics in pigs - modulation of their intestinal distribution and of theri impact on health and performance. Livestock Science 108: 229-231. Authors address Gertrude Wegl University of Natural Resources and Applied Life Sciences, Vienna Dep. IFA-Tulln, Division Environmetal Biotechnology Konrad Lorenz Straße 20, 3430 Tulln Email: [email protected] Seite 156 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics Nachweis von Bifidobacterium anim alis subsp. lactis Ra 18 im Rahmen eines probiotischen Fütterungsversuchs mit BioMastschweinen Agnes Petersson1, Konrad J. Domig1, Philipp Nagel2, Werner Zollitsch2, Werner Hagmüller3 und Wolfgang Kneifel1 1 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und technologie, Abteilung für Lebensmittelmikrobiologie und –hygiene 2 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Nachhaltige Agrarsysteme, Institut für Nutztierwissenschaften 3 LFZ- Raumberg Gumpenstein, Außenstelle Wels, Institut für Biologische Landwirtschaft und Biodiversität der Nutztiere Einleitung Bifidobakterien sind Gram-positive, anerob wachsende, polymorphe Bakterien, die häufig als Probiotika eingesetzt werden. Bifidobacterium animalis stellt eine der bisher bekannten 29 Bifidobakterienarten dar, wobei zwei Unterarten beobachtet werden (B. animalis subsp. animalis und B. animalis subsp. lactis). Während B. animalis subsp. animalis (früher bekannt als B. animalis) vor allem im Fäzes verschiedener Tierarten und im Abwasser vorkommt, ist das natürliche Habitat von B. animalis subsp. lactis (früher B. lactis) fermentierte Milch (Felis, 2007; Biavati und Mattarelli, 2006; Masco et al., 2004). Der Gastrointestinaltrakt des Schweins repräsentiert ein komplexes dynamisches Ökosystem, das von anaeroben grampositiven Bakterien dominiert wird (Konstantinov et al., 2004). Bifidobakterien sind in der gastrointestinalen Mikrobiota des Schweins mit ca. 105 KBE/g Darminhalt zahlenmäßig nicht dominierend (Janczyk et al. 2007), spielen aber im Einsatz als Probiotikum auch beim Schwein eine bedeutende Rolle. Ziel der durchgeführten Analysen war festzustellen, ob der als Probiotikum eingesetzte Bifidobakterienstamm in Proben aus dem Intestinaltrakt bzw. im Kot nachgewiesen werden kann. Es wurden Methoden basierend auf der Real-Time PCR Technik, sowie die Denaturierende Gradienten Gelelektrophorese (DGGE) adaptiert und optimiert für die Analysen eingesetzt. Die Real-Time PCR ist gut geeignet um komplexe Gemeinschaften wie jene des Gastrointestinaltrakts qualitativ und quantitativ zu untersuchen (Gueimonde et al., 2004). DGGE ist eine geeignete Methode, um die Komplexität einer Bakteriengemeinschaft zu untersuchen und Veränderungen innerhalb einer 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 157 Probiotika / Probiotics Bakterienpopulation (z.B. bei unterschiedlichen Fütterungsmaßnahmen) festzustellen. Sie ist auch in der Lage bislang unbekannte und nicht kultivierbare Bakterien zu erfassen (Muyzer und Smalla, 1998). Material und Methoden Im zugrunde liegenden Projekt (EU-Projekt „Quality Low Input Food“) wurden 76 Schweine in zwei Fütterungsrunden mit vier verschiedenen Futterbehandlungen (Kontrollgruppe (KG), KG + Grassilage, KG + Maissilage und KG + Probiotikum [Bifidobacterium animalis subsp. lactis Ra 18; Universität Bologna]) gefüttert (Nagel et al., 2007). Pro Tier wurden 3 Fäzes- und 5 Darminhaltsproben (Magen, Duodenum, Ileum, Caecum und Colon) gewonnen, welche in sterilen Plastiksäcken in anaerober Atmosphäre (GENbag® anaer, Biomerieux, Marcy l'Etoile, Frankreich) bei -80°C gelagert wurden. Eine Fäzes- und die Colonprobe aller 76 Tiere wurden für die folgende Untersuchung herangezogen. Die DNA-Isolierung erfolgte mit Hilfe des QIAamp® DNA Stool Mini Kits (Qiagen, Hilden, Deutschland). Als Positivkontrolle wurde Bifidobacterium animalis subsp. lactis Ra 18 (Bf95, interner Code) in BHIMedium (Oxoid, Hampshire, England) bei 37°C unter anaeroben Bedingungen angezüchtet und durch Gramfärbung auf Reinheit geprüft. Die gewonnene Biomasse wurde durch zweimaliges Waschen mit 0,85%-iger NaCl-Lösung und 50 mM EDTA-Lösung gereinigt und diente als Ausgangsprodukt für die DNA-Isolierung mit dem Qiagen DNeasy® Blood and Tissue Kit (Qiagen, Hilden, Deutschland). Die Real-Time PCR Untersuchungen erfolgten mit dem Rotorgene 3000 Thermocycler (Corbett Research, Sydney, Australien), wobei SybrGreen als Fluoreszenzmarker verwendet und ein kommerziell erhältlicher Mastermix (QuantiMix EASY KIT) der Firma Biotools (Madrid, Spanien) eingesetzt wurden. Um Bifidobacterium animalis subsp. lactis in den Fäzes- bzw. Colonproben nachweisen zu können, kamen ein für diese Art spezifisches Primerpaar (Bflact2/Bflact5) und folgendes Programm zum Einsatz: Initiale Denaturierung bei 95°C für 3 Minuten, 35 Zyklen mit Denaturierung bei 95°C für 20 Sekunden, 64°C Annealingtemperatur für 20 Sekunden und Extension bei 72°C für 20 Sekunden. Das Primerpaar Bflact2/Bflact5 setzt in der ITS Region der 16S rDNA von Bifidobacterium animalis subsp. lactis an (siehe Tab. 1; Mayer et al., 2007). Anschließend wurde die Länge der PCR-Produkte mittels Agarosegelelektrophorese bestätigt. Die für die DGGE benötigte PCR-Amplifikation wurde in einem Mastercycler (Eppendorf, Hamburg, Deutschland) mit dem Primerpaar Bflact5/Bflact2-GC durchgeführt, wobei nachfolgendes PCR Programm verwendet wurde: Initiale Denaturierung bei 95°C für 5 Minuten, 35 Zyklen mit Denaturierung bei 95°C für 1 Minute, 64°C Annealingtemperatur für 1 Minute und Extension bei 72°C für 1 Minute und anschließender finalen Extension bei 72°C für 8 Minuten. Das amplifizierte PCRFragment mit einer Länge von ca. 680 bp (Mayer et al., 2007) wurde in einer Agarosegelelektrophorese bestätigt. Anschließend wurde die DGGE im Bio-Rad DCode™ Universal Mutation Detection System (Bio-Rad, München, Deutschland) durchgeführt. Um die PCR Produkte aufzutrennen, wurden 8%ige Polyacrylamidgele mit einem linearen denaturierenden Gradient von 30 50% eingesetzt und die Elektrophorese bei 60°C und 70 V für 16 h durchgeführt. Die Visualisierung der DNA-Banden erfolgte durch Färbung mit Ethidiumbromid. Ausgewählte Banden wurden aus dem Gel ausgeschnitten, mit 1x PCR-Puffer gewaschen und bei 4°C über Nacht in 1x PCR-Puffer eluiert. Daraufhin wurde mit dem erhaltenen Template eine PCR mit dem Primerpaar Bflact2/Bflact5 (ohne GC-Klammer) durchgeführt, die PCR-Produkte mit dem QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, Hilden, Deutschland) gereinigt und letztlich zur Sequenzierung gesandt (Eurofins MWG Operon, Ebersberg, Deutschland). Auf der NCBI Webseite wurden die erhaltenen Sequenzen mit öffentlich zugänglichen Seite 158 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics Sequenzdaten unter Zuhilfenahme des (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cgi). BlastN Tools verglichen und identifiziert Tabelle 2: eingesetzte Primer 1 Primer Sequenz (5´- 3´) Spezifität Annealing Temp (°C) DGGE Gradient (%) Literatur Bflact2 GTG GAG ACA CGG TTT CCC B. animalis subsp. lactis 64 - Mayer et al., 2007 Bflact5 CAC ACC ACA CAA TCC AAT AC B. animalis subsp. lactis 64 - Mayer et al., 2007 Bflact2GC1 GTG GAG ACA CGG TTT CCC B. animalis subsp. lactis 64 30 - 50 - GC clamp (5´-CCC GCC GCG CCC CGC GCC CGT CCC GCC GCC CCC GCC CG-3´) angehängt an das 5´-Ende des Primers Ergebnisse und Diskussion Die letzte vor der Schlachtung gezogene Fäzes- sowie die Colonproben aller 76 Bio-Mastschweine wurden auf das Vorhandensein des eingesetzten Probiotikums analysiert. Als artspezifisches Primerpaar wurde Bflact2/Bflact5 gewählt. Die PCR-Bedingungen wurden anhand der Positivkontrolle im Voraus optimiert und als geeignet beurteilt. Durch den Einsatz der Real-Time PCR konnten 44 Proben positiv auf das Vorhandensein von B. animalis subsp. lactis getestet werden, wobei 3 der positiven Proben ein sehr schwaches Signal zeigten. Ein positives Ergebnis war durch die charakteristische Schmelzpunkttemperatur, die für B. animalis subsp. lactis bei einem Mittelwert von 91,82°C mit einem Minimum von 91,75°C und einem Maximum von 92°C lag, gekennzeichnet (siehe Abb. 1). Anschließend an die Real-Time PCR wurden die PCR-Produkte mit einer Gelelektrophorese bestätigt. Die Ergebnisse der Schmelzpunktanalyse der Real-Time PCR korrelierten gut mit den Ergebnissen der Agarosegelelektrophorese (siehe Abb. 2). B. animalis subsp. lactis konnte mittels Real-Time PCR mit wenigen Ausnahmen nur in Proben von Tieren der Probiotikum-Fütterungsgruppe nachgewiesen werden. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 159 Probiotika / Probiotics x-Achse: Temperatur in °C y-Achse: dF/dT: Erste Ableitung – Änderungsrate (d) der Fluoreszenz (F) bezogen auf die Zeit (T) Abbildung 4: Schmelzkurvenbestimmung in der Real-Time PCR - B. animalis subsp. lactis (ausgewählte Ergebnisse) [bp] M Bf95 112 113 116 117 118 121 122 123 127 128 1500 1000 500 Abbildung 2: Gelelektrophorese der Real-Time PCR-Produkte: B. animalis subsp. lactis (ausgewählte Ergebnisse) bp: Basenpaare M: Marker Bf95: B. anim alis subsp. lactis Ra 18 (Positivkontrolle) 112, 113: Fäzesproben der Maissilagegruppe (erste Runde des Fütterungsversuchs) 116, 117, 118: Fäzesproben der Kontrollgruppe (erste Runde des Fütterungsversuchs) 121, 122, 123: Fäzesproben der Grassilagegruppe (erste Runde des Fütterungsversuchs) 127, 128: Fäzesproben der Probiotikumgruppe (erste Runde des Fütterungsversuchs) Seite 160 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics B. animalis subsp. lactis zeigte nach Amplifikation mit dem Primerpaar (Bflact2-GC/Bflact5) in der DGGE eine starke Bande (1) im unteren Abschnitt des Gels, sowie eine schwache Bande (2) im oberen Teil des Gels, wobei diese Bande vor allem bei der Positivkontrolle (Bf95) gut sichtbar war (siehe Abb. 3). Die untersuchten Proben zeigten dasselbe Bild, obwohl die Bande 2 oft sehr schwach bzw. manchmal auch nicht detektiert wurde (siehe Abb. 3). Die Identität der Banden wurde durch anschließende Sequenzierung geprüft und bestätigt. Mittels DGGE wurden 43 der untersuchten Proben positiv auf B. animalis subsp. lactis getestet, wobei 2 der positiven Proben allerdings sehr schwache Banden zeigten. Sowohl Real-Time PCR als auch DGGE eigneten sich zum Nachweis des eingesetzten Probiotikums B. animalis subsp. lactis. Beide Methoden führten zu identen Endergebnissen. In denselben 41 Proben wurde B. animalis subsp. lactis nachgewiesen. Obwohl die Charakteristik und die Besonderheit der DGGE in der Analyse komplexer mikrobieller Gemeinschaften bzw. in der Darstellung der Biodiversität liegt (Ercolini, 2004), kann die Methode ebenso zum Nachweis einzelner Bakterienarten oder -gattungen herangezogen werden. Hierzu wurde an den Primer Bflact2 eine GC-reiche Sequenz (GC-Klammer, siehe Tab. 1) angehängt, um den Einsatz in der DGGE zu ermöglichen. Allerdings ist der Einsatz der DGGE im Gegensatz zur Real-Time PCR mit höherem Zeit- und Arbeitsaufwand verbunden. Somit stellt die Real-Time PCR für die hier beschriebene Aufgabenstellung die schnellere und effizientere Methode dar. Mit beiden Methoden konnten übereinstimmende Ergebnisse erzielt werden. Um genaue Aussagen über die Quantität des eingesetzten Probiotikums treffen zu können, sind im weiteren zusätzliche Real-Time PCR Analysen bei B. animalis subsp. lactis positiven Proben geplant. Abbildung 3: PCR-DGGE: B. animalis subsp. lactis (ausgewählte Ergebnisse) Bf95: B. anim alis subsp. lactis Ra 18 (Positivkontrolle) 481, 483, 484: Fäzesproben der Probiotikumgruppe (zweite Runde des Fütterungsversuchs) 159, 171, 156: Colonproben der Maissilagegruppe (erste Runde des Fütterungsversuchs) 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 161 Probiotika / Probiotics Danksagung Mein Dank gilt der H. Wilhelm Schaumann Stiftung (Hamburg, Deutschland) für die Finanzierung meines Forschungsstipendiums sowie des Laborverbrauchsmaterials. Literatur Biavati B, Mattarelli P. 2006. The family Bifidobacteriaceae. Prokaryotes 3:322-382. Ercolini D. 2004. PCR-DGGE fingerprinting: novel strategies for detection of microbes in food. Journal of Microbiological Methods 56:297– 314. Felis GE, Dellaglio F. 2007. Taxonomy of lactobacilli and bifidobacteria. Current Issues in Intestinal Microbiology 8:44-61. Gueimonde M, Tölkkö S, Korpimäki T, Salminen S. 2004. New real-time quantitative PCR procedure for quantification of bifidobacteria in human fecal samples. Applied and Environmental Microbiology 70:4165-4169. Janczyk P, Pieper R, Smidt H, Souffrant WB. 2007. Changes in the diversity of pig ileal lactobacilli around weaning determined by means of 16S rRNA gene amplification and denaturing gradient gel electrophoresis. FEMS Microbiology Ecology 61:132–140. Konstantinov SR, Favier CF, Zhu WY, Williams BA, Klüß J, Souffrant W-B, De Vos WM, Akkermans ADL, Smidt H. 2004. Microbial diversity studies of the porcine gastrointestinal ecosystem during weaning transition. Animal Research 53:317-324. Masco L, Ventura M, Zink R, Huys G, Swings J. 2004. Polyphasic taxonomic analysis of Bifidobacterium animalis and Bifidobacterium lactis reveals relatedness at the subspecies level: reclassification of Bifidobacterium animalis as Bifidobacterium animalis subsp. animalis subsp. nov. and Bifidobacterium lactis as Bifidobacterium animalis subsp. lactis subsp. nov. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology 54:1137-1143. Mayer HK, Amtmann E, Philippi E, Steinegger G, Mayrhofer S, Kneifel W. 2007. Molecular discrimination of new isolates of Bifidobacterium animalis subsp. lactis from reference strains and commercial probiotic strains. International Dairy Journal 17:565–573. Muyzer und Smalla, 1998. Application of denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and temperature gradient gel electrophoresis (TGGE) in microbial ecology. Antonie van Leeuwenhoek 73:127–141. Nagel P, Domig KJ, Hagmüller W, Pfalz S, Kronsteiner S, Ortner B, Sundrum A, Zollitsch W. 2007. Effects of silage or probiotics on performance and gut microbial composition of organic growing-finishing pigs. Paper presented at: 6. BOKU-Symposium Tierernährung, Sekundärwirkungen von Futterinhaltsstoffen – vom Nährstoff zum Wirkstoff; 15 November 2007; Vienna, Austria. Autorenanschrift DI Petersson Abteilung für Lebensmittelmikrobiologie und –hygiene Department für Lebensmittelwissenschaften und -technologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel-Strasse 33, A-1180 Wien E-mail: [email protected] Seite 162 7. BOKU-Symposium Tierernährung Probiotika / Probiotics Quantification by real-time PCR of cellulolytic bacteria in the rumen of sheep after supplementation of a forage diet with readily fermentable carbohydrates – Effect of a yeast additive Mosonia P., Chaucheray-Duranda F., Béra-Mailleta C. and Foranoa E. No abstract available before printing 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 163 Probiotika / Probiotics Development of hydrogenotrophic microorganisms and H2 utilisation in the rumen of gnotobiotically-reared lambs. Influence of the composition of the cellulolytic microbial community and effect of the feed additive Saccharom yces cerevisiae I-1077 Chaucheyras-Durand F., Masseglia S., Fonty G. and Forano E. No abstract available before printing Seite 164 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - METALL UND FARBEN GESELLSCHAFT M B H, Leibnizgasse 1/4/4, A-1100 Wien 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 165 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Effect of glycerides of butyric, caprylic and capric acids on growth performance in weaned pigs Renata Urbaityte, Nataliya Roth and Martin Wieser BIOMIN GmbH, Industriestrasse 21, 3131 Herzogenburg, Austria Introduction The first weeks after weaning are critical stage for the piglets in terms of nutritional, environmental and physiological stresses leading to malabsorption coupled with reduced weight gain and increased morbidity and mortality rates. In the past the dietary supplementation with antibiotics has been proven the efficient tool to compensate the post-weaning stress. However, the public concerns about the potential development of resistant pathogen strains and general food safety resulted in antibiotics ban and consequently forced nutritionists to search for alternative growth promoters. Particular attention has been paid to the short (SCFA) and medium (MCFA) chain fatty acids, which are widely distributed in nature as a constituent of plants, animal tissues or common metabolites of microbial fermentation (Partanen and Mroz, 1999). Butyric acid is produced along with other SCFA by microbial fermentation of dietary and endogenous residues in the lower gut of all animal species, however in the small intestine of pigs the formation of butyrate is low or absent (Knudsen et al., 2003; Claus et al., 2007). The free butyric acid is rapidly taken up from the gut lumen and it is the crucial oxidative fuel for the colonocytes (Roediger, 1980). Additionally, butyric acid has also been shown to have several cellular effects, i.e. influencing cell maturation and differentiation (Knudsen et al., 2003). Pig mucosa cells are renewed every 2-7 days. Mucosal integrity is ensured by an appropriate balance between the mitotic activity of stem cells in crypt area and apoptosis in the villi tips (Claus et al., 2007). According to some studies butyric acid stimulates mitosis and inhibits apoptosis of mucosal cells in the pigs’ colon, consequentially increases the vill length and crypt depth (Galfi and Bokori, 1990; Mentschel and Claus, 2003; Kotunia et al., 2004). Various studies confirmed bactericidal and stimulant effect of butyric acid on beneficial microflora in pigs (Leeson et al., 2005; Boyen et al., 2008) thus leading to improved animal performance (Galfi and Bokori, 1990; Kotunia et al., 2004). Different reviews showed that approximately fifty percent of newborn piglets’ deaths were reported to occur within the first 3 days, because of energy insufficiency (Wieland et al., 1993a, b). To remedy the energy insufficiency medium chain triglycerides (MCT) can serve as a unique supplemental fuel source for piglets (Odle et al., 1991; Odle, 1997). Medium chain fatty acids (MCFA) which are the constituents of MCT having 6 to 12 carbon atoms are more soluble than long chain fatty acids and can diffuse through the enterocytes wall without the assistance of the carriers (Wieland et al., 1993a, b). MCT can be easily absorbed and oxidized by neonatal pigs improving blood glucose homeostasis (Lepine et al., 1989) and energy status of the animal (Benevenga et al., 1989). Moreover, MCFA have Seite 166 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives been shown to be bactericidal to numerous gram-negative and gram-positive bacteria (Nakai et al., 2002; Skrivanova et al., 2006). SCFA and MCFA are rapidly metabolized by the microbiota of the gut and absorbed by the epithelial cells along the gastro-intestinal tract (Van Immerseel et al. 2006, Louis et al., 2007). The supplementation of protected fatty acids enables them to reach the further gastrointestinal tract compartments in pigs, where the colonization by pathogenic bacteria mainly takes places, and consequentially reduce the bacterial counts. Reduced colonization of the distal parts of the intestinal tract may in turn correlate with the reduced fecal shedding of bacteria and moreover, improved animal growth performance. The aim of the study was to evaluate the effect of glycerides of butyric, caprylic and capric acids on the growth performance in weaned pigs. Materials and methods A trial was carried out with weaned pigs on a commercial farm in Austria. The trial was conducted in a period of 14 d post-weaning. Eighty-four crossbred piglets (German Landrace x Pietrain; mixed males and females) were weaned at 28 d and transported to the barn where they were housed into crates on slatted plastic floor. The piglets were divided into 4 groups (21 animals per group) that were homogenous for weight and sex. During the trial piglets received the commercial weaned pigs’ diet in a mash form. The diet was formulated according to the GfE (2006) requirements. Two groups received the diet containing no feed additive, whereas the other two received the dietary supplementation with glycerides of butyric, caprylic and capric acids (BIOMIN GmbH, Austria) at inclusion rate of 2.0 kg/ton feed. Feed and water were provided ad libitum. The composition and nutrients of the commercial weaned pigs’ diet is shown in Table 1 and 2. Each pen had its own feeder and nipple drinker. The room was equipped with automatic heating and forced ventilation. The temperature was gradually reduced from 29 to 25°C during the experiment. The pigs were weighed in groups at the beginning and at the end of the trial. Feed consumption was recorded for each group daily and then individual feed intake was calculated. Clinical observations for diarrhea, depression, immobility and inappetence were carried out daily. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 167 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Table 1. Composition of the commercial weaned pigs’ diet (as fed). Ingredients Unit Corn % 30.00 Barley % 35.00 Potato protein % 5.75 Fishmeal % 5.50 Soy protein concentrate % 3.00 Corn pressure cooked % 4.00 Whey powder % 3.00 Palm kern-coconut fat % 3.50 Dextrose % 4.00 Lactose % 3.00 Mono calcium phosphate % 0.50 Calcium formate % 0.80 Magnesium phosphate % 0.25 Sodium chloride % 0.35 Vitamin premix % 0.10 Trace mineral premix % 0.15 L-Lysine % 0.60 DL-Methionine % 0.20 L-Threonine % 0.20 L-Tryptophan % 0.08 Sweetener&Flavour additive % 0.02 Seite 168 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Table 2. Nutrient composition of the commercial weaned pigs’ diet (per kg as fed). Item Unit ME MJ 14.3 Crude protein % 17.0 Crude fibre % 2.7 Ether extract % 6.4 Crude ash % 5.0 Calcium g 6.4 Phosphorus g 5.6 Sodium g 2.6 Magnesium g 1.6 Lysin g 14.0 Methionin g 5.3 Threonin g 8.8 Tryptophan g 2.7 Vit. A I.U. 18000 Vit. D3 I.U. 2000 Vit. E mg 230 Vit. C mg 40 Vit. K3 mg 20.0 Vit. B1 mg 3.0 Vit. B2 mg 8.6 Vit. B6 mg 5.1 Vit. B12 mcg 50 Nicotinic Acid mg 60 Panth acid mg 20 Cholinchloride mg 250 Folic Acid mcg 1000 Biotin mcg 150 Copper mg 160 Zinc mg 120 Iron mg 115 Manganese mg 80 Cobalt mg 2.0 Iodine mg 3.2 Selenium mg 0.4 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 169 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Results and discussion All animals remained in good health throughout the duration of the trial. The dietary supplementation with glycerides of butyric, caprylic and capric acids improved animal growth performance. The final body weight (BW) and average daily weight gain (ADWG) were increased by 4 and 14%, respectively, whereas feed conversion rate (FCR) decreased by 18% in the trial group compared to these in the control group (Table 3). The feed intake (FI) was slightly decreased in the trial group compared to the control. The improved growth performance in the present study is in a good agreement with the studies conducted with butyrates in weaned pigs (Manzanilla et al., 2008, Kotunia et al., 2008). According to the various literature sources SCFA and MCFA are absorbed and transported directly to portal vein to provide animals with additional energy. Especially butyric acid is considered as a nutrient for the epithelium integrity along the intestinal tract (Scheppach et al., 1996). It is indicated that free butyric acid is absorbed very quickly in upper digestive tract and likely is limited of its use. Therefore in the present study the protected butyric acid form coupled with glycerides was used. Unlike free butyric acid, glycerides of butyric acid result in slow release of butyric acid in gastro-intestinal tract delivering it to the further compartments of intestine. Therefore it might be assumed that the higher ADWG in piglets fed glycerides of butyric, caprylic and capric acids improved absorption of nutrients from lumen gut due to increased length of the intestinal villi and therefore enlarged absorption surface of the gut. Table 3. Effect of glycerides of butyric, caprylic and capric acids on the growth performance in weaned pigs. Group Control Trial No of animals n = 42 n = 42 Initial BW d 28, kg 7.55 7.54 Final BW d 42, kg 10.73 11.16 ADWG, g 227 258 FI/animal/day, g 419 389 FCR 1.85 1.51 Trial 1 BW = body weight; ADWG = average daily weight gain; FI = feed intake; FCR = feed conversion rate In the present study FCR was improved in piglets fed with dietary supplementation of glycerides of butyric, caprylic and capric acids. The results reported herein might suggest that MCT provided piglets with fuel energy, therefore less feed was needed per unit weight gain. These results are in a good agreement with those of De Rodas and Maxwell (1990) who obtained a significantly increased feed efficiency during the first week post weaning (weaning at 21 to 28 d) by adding 6 % MCT oils. Finally, Dove (1993), feeding 5 % soyabean oil, MCT or animal fat, obtained the highest growth rate with the MCT source. There are discrepancies between the effects of MCT on pig performance. These discrepancies may be related to the absence or very low levels of endogenous gastric or plant lipases (Decuypere and Dierick, 2003). Seite 170 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Regarding to the various literature sources the SCFA and MCFA act against pathogenic bacteria (Boyen et al., 2008; Van Imerseel et al., 2004, 2006). In the present study the counts of the bacteria in gastrointestinal tract were not measured, however it might be assumed that the number of the pathogenic bacteria was decreased reducing the bacterial challenge. Conclusions In the present study the dietary supplementation with glycerides of butyric, caprylic and capric acids resulted in overall improved animal performance in weaned pigs. The enhancement of growth performance in pigs might be attributed to the slow release of the butyric acid in gastrointestinal tract. Due to nourishing butyric acid function the intestine villi are enlarged, enhancing absorption area for nutrients. Moreover, triglycerides of caprylic and capric acids provided weaned pigs with the high quality energy, thus improved feed efficacy. References Benevenga N.J., Steinman-Godsworthy J.K., Crenshaw T.D., Odle J. 1989. Utilization of medium-chain triglycerides by neonatal piglets: I. Effects on milk consumption and body fuel utilization. Journal of Animal Science 67: 3331-3339. Boyen F., Haesebrouck F., Vanparys A., Volf J., Mahu M., Van Immerseel F., Rychlik I., Dewulf J., Ducatelle R., Pasmans F. 2008. Coated fatty acids alter virulence properties of Salmonella Typhimurium and decrease intestinal colonization of pigs. Veterinary Microbiology 132: 319-327. Claus R., Günther D., Letzguß H. 2007. Effects of feeding fat-coated butyrate on mucosal morphology and function in the small intestine of the pig. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition 91: 312-318. De Rodas B., Maxwell C. 1990. The effect of fat source and medium chain triglyceride level on performance of the earlyweaning pig. In Animal Science Research Report. Oklahoma Agricultural Experimental Station. Stillwater, OK, pp.278-287. Decuypere J., Dierick N.A. 2003. The combined of triacylglycerols containing medium-chain fatty acids and exogenous lipolytic enzymes as an alternative to in-feed antibiotics in piglets: concept, possibilities and limitations. An overview. Nutrition Research Reviews 16: 193-209. Dove C. 1993. The effect of adding copper and various fat sources to the diets of weanling swine on growth performance and serum fatty acid profiles. Journal of Animal Science 71: 2187-2192. Galfi P., Bokor J. 1990. Feeding trial in pigs with a diet containing sodium n-butyrate. Acta Veterinaria Hungarica 38: 3-17. GfE. 2006. Empfehlungen zur Energie- und Nährstoffversorgung von Schweinen. DLG Verlag, Frankfurt/Main. Knudsen K.E.B., Serena A., Canibe N., Juntunen K.S. 2003. New insight of butyrate metabolism. Proceeding of Nutrition Society 62: 81-86. Kotunia A., Wolinski J., Laubitz D., Jurkowska M., Rome V., Guilloteu P., Zabielski R. 2004. Effect of sodium butyrate on the small intestine development in neonatal piglets feed by artificial sow. Journal of Physiology and Pharmacology 55: 59-68. Leeson S., Namkung H., Antongiovanni M., Lee E.H. 2005. Effect of butyric acid on the performance and carcass yield of broiler chickens. Poultry Science 84: 1418-1422. Lepine A.J., Boyd R.D., Welch J.A., Roneker K.R. 1989. Effect of colostrum or medium-chain triglyceride supplementation on the pattern f plasma glucose, non-esterified fatty acids and survival of neonatal pigs. Journal of Animal Science 67: 983-990. Louis P., Scott K.P., Duncan S.H., Flint H.J. 2007. Understanding the effects of diet on bacterial metabolism in the large interstine. Journal of Applied Microbiology 102: 1197-1208. Manzanilla E. G., Norfrarías M., Anguita M., Castillo M., Perez J.F., Martín-Orúe S.M., Kamel C., Gasa J. 2006. Effects of butyrate, avilamycin, and a plant extract combination on the intestinal equilibrium of early-weaned pigs. Journal of Animal Science 84: 2743-2751. Mentschel J., Leiser R., Mülling C., Pfarrer C, Claus R. 2001. Butyric acid stimulates rumen mucose development in the calfs mainly by a reduction of apoptosis. Archive of Animal Nutrition 55: 85-102. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 171 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Nakai S.A., Siebert K.J. 2002. Validation of bacterial growth inhibition models based on molecular properties of organic acids. International Journal of Food Microbiology 2678: 1-7. Odle J. 1997. New insights into the utilization of the medium-chain triglycerides by the neonate: observations from a piglet model. Critical review 127: 1061-1067. Odle J., Benevenga N.J., Crenshaw T.D. 1991. Utilization of medium chain triglyceride by neonatal piglets: chain length of evenand odd-carbon fatty acids and apparent digestion/absorption and hepatic metabolism. Journal of Nutrition 121: 605-614. Partanen K.H., Mroz Z. 1999. Organic acids for performance enhancement in pig diets. Nutrition Research Reviews 12: 117-145. Roediger W.A. 1980. Role of anaerobic bacteria in the metabolic welfare of the colonic mucosa in man. Gut 21: 793-798. Scheppach W., Bartram P., Richter A. 1992. Effect of short-chain fatty acids on the human colonic mucosa in vitro. Journal of Parenteral Nutrition 16: 43-48. Skrivanova E., Marounek M., Benda V. Brezina P. 2006. Susceptibility of Escherichia coli, Salmonella sp. and Clostridium perfringens to organic acids and monolaurin. Veterinarni Medicina 51: 81-88. Van Immerseel F., Russell J.B., Flythe M.D., Gantois I., Timbermont L., Pasmans F., Haesebrouck F., Ducatelle R. 2006. The use of organic acids to combat Salmonella in poultry: a mechanistic explanation of the efficacy. Avian Pathology 35: 182-188. Wieland T., Lin Xi, Odle J. 1993a. Utilization fo medium-chain triglycerides by neonatal pigs: effects of emulsification and dose delivered. Journal of Animal Science 71: 1863-1868. Wieland T., Lin Xi, Odle J. 1993b. Emulsification and fatty-acid chain lenght affect the utilization of medium chain triglycerides by neonatal pigs. Journal of Animal Science 71: 1869-1874. Corresponding author Dr. Renata Urbaityte BIOMIN GmbH Industriestrasse 21, A-3130 Herzogenburg e-Mail: [email protected] Seite 172 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Effect of an organic acid blend on a slow realese medium on cathfish performance Nataliya Roth1, Renata Urbaityte1 and Pedro Encarnacao2 BIOMIN Holding GmbH, Industriestrasse 21, 3130 Herzogenburg, Austria BIOMIN Singapore Pte Ltd, 3791 Jalan Bukit Merah 08-08, 159471 Singapore Introduction Catfish (Pangasius hypothalamus) have become increasingly attractive for the food industry. Farmers are looking for the possibilities to increase the catfish performance. Public opinion and regulation authorities in most export countries focus now on the misuse of antibiotics in aquaculture, and public attention has focused on alternative production methods (Verbeeke, 2001). Furthermore, the EU has banned all antibiotic growth promoters (AGPs) from livestock production since January 2006, as the use of low level AGPs in animal feeds carries the possibility of resistance transfer from the bacterial community to species that are pathogenic in humans (Liem, 2004). The use of organic acid and their salts or blends provides an interesting opinion for promoting the performance of a wide variety of aquaculture species worldwide. Organic acids are abundant in extracts of tissues of fish and other aquatic organisms (Hidaka et al., 1992). The use of acidifier in aquaculture can be an efficient tool to achieve more sustainable and economic fish production (Lückstädt, 2007). Some studies have shown their stimulatory effects on fish (Adams et al., 1988; Hidaka et al., 1992) As such acids may leach from food pellets and influence the feeding behavior of fish (Xie et al., 2003). The present study focused on the application of organic acid bland on a sequential release medium in catfish feed to improve the growth performance. Different inclusion levels were tested to determine best dosage for the application of the product. Material and methods The trial was conducted in a period of 63 days in Aquaculture Centre for Applied Nutrition (ACAN), Thailand. A total of 630 juvenile striped catfish (Pangassius hypothalamus) with on average initial weight of 10±1g were divided into three treatments. Fish were stocked in nine tanks (500 l) randomly, at density 70 fish per tank. The trial design consisted of three treatments with three replicates per treatment. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 173 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Treatments: • Control group –Diet, no feed additives • Trial group I – Diet + 2 g acidifier/kg feed • Trial group II – Diet + 4 g acidifier/kg feed The experimental diets were produced by blending a commercial diet with vegetable oil and the test product according to Table 1. The chemical analysis of the experimental diets is shown in Table 2. Table 1. Diet formulation Feed Ingredient CP 1190 diet Biotronic SE Vegetable oil Total Control g/kg 990 10 1000 Trial group I g/kg 988 2 10 1000 Trial group II g/kg 986 4 10 1000 Table 2. Diet analysis Diet 1 2 3 Energy (Cal/100g) 353 356 360 %CF %DM %Ash %CP 6.55 6.85 6.51 91.60 91.63 93.54 11.5 11.2 11.6 30.2 30.1 31.1 The experimental diet was grinded to produce a basal mash diet. The test substances were added to this basal diet at the determined concentration and mixed together using a 10 liter Hobart type mixer. These diets were produced using a lab scale extruder machine, followed by drying in an air flow oven was at 600C until the moisture content is lower than 10%. The dry pellets were kept in the feed container with two layer plastic bags and stored in the air-conditioned storage room. The fish were fed to near satiety 3 times daily for a period of 63 days (9 weeks). Water quality parameters (temperatures, dissolved O2, nitrites, nitrates and ammonia) in the tanks and mortality occurrence were recorded daily. Feed intake was recorded weekly as difference in weight of feed container. Periodical sampling of weight gain (bulk weight of each tank) was determined after 28 days from the beginning of experiment. At day 28 and day 63 live weight gain and feed efficiency of the fish were calculated. (FCR). Seite 174 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Results The fish under trial conditions achieved a very high performance during the entire period increasing their initial body weight by more than 500% in 9 weeks. The trial results showed the improvement in growth performance in the trial groups fed diets supplemented with acidifier compared to the control group (Table 3). Fish fed diets supplemented with acidifier at 2 and 4 g/kg feed inclusion rate showed an increase in weight gains of 2.53 and 3.28%, respectively (Table 3). During the experimental period 100% survival rates in all three trial groups indicate high hygienic and production conditions. Table 3. Effect of acidifier on growth performance in catfish Control group No. fish Initial body weight (IBW), g Final body weight (FBW), g Weight gain (WG) (d1-d63),g Feed conversion rate(FCR) 210 9.7 Acidifier 2 g/kg feed 210 9.8 Acidifier 4 g/kg feed 210 9.8 59.9 61.2 61.6 50.1 51.4 51.8 0.89 0.85 0.86 There was no significant difference found if compared with the negative control (P>0.05). Nevertheless, compared to the control group, the feed conversion rate (FCR) was slightly lower (0.85 and 0.86) in the groups fed diets supplemented with 2 and 4 g acidifier /kg feed, respectively. However, all three groups showed much better FCR than that observed in commercial production farms for this species (FCR 1.5). In the present study the FCR might be attributed firstly to the high quality of feed, and optimization of feeding rate under trial conditions. Nevertheless, even under these optimized conditions it was possible to see an improvement of performance with the application of acidifier. Analysis of the trial in the Table 4 shows that after the first period of 28 days fish fed with acidifier supplementation of 2 g/kg of feed had the best growth performance overall with an increase in weight gain of 6% when compared to the negative control. However, after 9 weeks this beneficial effect reduced to 2.6 % and 3.7% for the diet supplemented with Biotronic® SE at 2 kg/t and 4 kg/t respectively, compared to the negative control. Table 4. Fish performance after the first 28 days period Diet IBW, g FBW, g WG, g Control 9.7 24.7 15.0 Acidifier 2 g/kg feed 9.9 25.8 15.9 Acidifier 4 g/kg feed 9.8 25.4 15.5 There was no significant difference found if compared 7. BOKU-Symposium Tierernährung Feed, g FCR 16.4 1.10 16.5 1.04 16.8 1.08 with the negative control (P>0.05). Seite 175 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Water parameters measured in the tanks daily were constant during the entire trial period. Therefore it was concluded that dietary supplementation with acidifiers has no negative effects on water quality. Table 5 shows the parameter of the water quality. Table 5 Results of water quality analysis during the trial period week 1 2 3 4 5 6 7 8 Oxygen mg/l 5.6 5.4 5.8 5.3 5.3 5.1 4.8 4.7 pH 7.5 7.4 7.4 7.3 7.3 7.4 7.3 7.3 Ammonia mg/l 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 Nitrites mg/l 0.2 0.2 0.3 0.4 0.3 0.2 0.2 0.4 Discussions The influence of acidifiers on the fish performance was tested in several studies. The use of acids was tested in tropical warm water species, like tilapia (Rami et al., 2005) and catfish (Owen et al. 2006). Ramli et al. (2005) tested the use of potassium-diformate as a non-antibiotic growth promoter in tilapia grow-out. Over the whole feeding period, from day 1 to day 85, potassium-diformate supplementation significantly increased the weight gain and feed efficiency in tilapia. The effects of several organic acids (citric, metacetonic, lactic, acetic, and oxalic) on the stimulatory feeding behavior of Tilapia nilotica were tested (Xie et al 2003). Some of these acids are added to food stocks to retard spoilage. The results showed that citric acid at a concentration of 102 to 106 M, metacetonic acid at 104 to 106 M, and lactic acid at 102 to 105 M stimulated feeding. There is a published study about the use of acidifiers for catfish. Owen et al. (2006) tested the sodium salt of butyric acid as a feed additive in the omnivorous tropical catfish Clarias gariepinus at 2 kg/t using a fishmeal and a defatted soya concentrate diet. In the catfish fed on fishmeal diet, the SGR was slightly higher in the supplemented fish (% body weight gain 131% for control and 141% for the Na-butyrate group), with a concomitant reduction in the FCR for the supplemented fish. Subjectively, sodium butyrate supplementation appeared to increase the proportion of gram-positive bacteria in the hindgut of C. gariepinus, even though this increase was not statistically significant. (Lückstadt 2007) The use of Biotronic® SE in catfish diet shows the slight improvement in the weight gain and improved FCR were observed. It should be considered that the performance level of the catfish was very good and therefore the improvement of performance parameters is limited, nevertheless acids were able to enhance productivity. Seite 176 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Conclusions In spite of excellent production conditions, diets supplemented with acidifier Biotronic® SE (organic acid bland on a sequential release medium) resulted in slight improved growth performance in catfish. No significant differences were found while supplying acidifier if compared with the negative control. However, dietary supplementation at inclusion rates 2 and 4 g/kg feed showed increase in weight gains of 2.53 and 3.28%, respectively. Decreased FCR compared to the control group was also achieved in the groups containing acidifiers. References Adams, M. A.; Johnsen, P. B.; Zhou, H. Q., 1988: Chemical enhancement of feeding for the herbivorous fish Tilapia zillii.Aquaculture 72, 95–107. Hidaka, I.; Zeng, C.; Kohbara, J., 1992: Gustatory responses to organic acids in the yellowtail Seriola quinqueradiata. Nippon Suisan Gakkaishi (Bull. Jap. Soc. Sci. Fish.) 58, 1179–1187. Liem, D.T. (2004) E. coli resistant to most antibiotics in Vietnam. Asian Pork Magazine August / September: 22-24. Lückstadt, 2007: Acidifiers in animal Nutrition. Effect of organic acid containing additives in worldwide Aquaculture - sustainable production the non-antibiotoc way75, 71-77. Ramli, N., Heindl, U. and Sunanto, S. (2005) Effect of potassium-diformate on growth performance of tilapia challenged with Vibrio anguillarum. Abstract CD-Rom, WAS Conference, May 9-13, 2005, Bali, Indonesia. Xie, S; Zhang, L.; D. Wang 2003: Effects of several organic acids on the feeding behavior of Tilapia nilotica Verbeeke, W. (2001) The influence of consumerism on livestock production and eventually the feed industry. In: Recent Developments in animal feeds and feeding. Proceedings of the Animal Feed Manufactures Association (AFMA) Forum2001, 21st -23rd of February 2001, Sun City, Northwest Province, South Africa, 6: 1-18. Autorenanschrift BIOMIN Holding GmbH Industriestrasse 21 3130 Herzogenburg, Austria Tel: +43 2782 803 0 Fax: +43 2782 803 40 Mobile: +43 664 8254318 e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 177 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Einfluss des SGW-Faktors auf die Leistungsparameter Futteraufnahme, tägliche Zunahmen und Tiergesundheit von Aufzuchtkälbern Holger Kurtz, Leonhard Raab und Edmund Mathies IS Forschungsgesellschaft mbH, An der Mühlenau 4, D-25421 Pinneberg Einleitung und Problemstellung Optimale Kälbergesundheit ist die Basis für den Erfolg in der Milcherzeugung bzw. in der Rindermast. Nur gesunde und kräftige Kälber können später als adultes Tier den an sie gestellten Leistungsanforderungen gerecht werden. Der Grundstein für eine gute Konstitution der zukünftigen Milchkühe oder Mastrinder wird in den ersten Lebenswochen während der Aufzuchtphase gelegt. Selbst Kälber, die während dieser Zeit nur einmal erkranken, werden in ihrer Entwicklung nachweislich negativ beeinflusst. Mehrfacherkrankungen steigern das Risiko einer reduzierten Lebensleistung entsprechend. Der SGW-Faktor ist ein innovativer Wirkstoffkomplex, der primär für den Bereich der Kälberfütterung bzw. Kälberaufzucht entwickelt wurde. Der Hauptwirkungsort des SGW-Faktors beim Kalb ist der Darm. Durch eine Kombination von ausgewählten mittelkettigen Fettsäuren mit einer Faserkomponente aus Lignocellulosen soll die Funktionalität des Darms auch unter ungünstigen Aufzuchtbedingungen sichergestellt, die Darm-Mikroorganismenzusammensetzung optimiert und dadurch die Nährstoffversorgung des Tieres verbessert werden (Decuypere und Dierick, 2003; Jin, L. et al., 1994; Jorgensen et al., 1994; Lenis et al., 1996; Skrivanova et al., 2006; Stratford und Anslow, 1996). In der vorliegenden Arbeit wird der SGW-Faktor in zwei Versuchen auf seine Wirksamkeit bezüglich einer Verbesserung der Leistungsparameter Gewichtszuwachs, Futteraufnahme und Tiergesundheit nach Zulage zum Milchaustauscher bei Aufzuchtkälbern überprüft. Material und Methodik In der vorliegenden Arbeit wurde der Einfluss des dem Milchaustauscher beigemischten SGW-Faktors, einer Wirkstoffkombination aus verschiedenen mittelkettigen Fettsäuren und Lignocellulosefasern, hinsichtlich Gewichtsentwicklung, Futteraufnahme und Gesundheitsstatus von Kälbern überprüft. Dazu wurde im August (Versuch 1, V1) und November (Versuch 2, V2) 2007 auf Gut Hülsenberg, Wahlstedt, zwei siebenwöchige Fütterungsversuche mit männlichen Aufzuchtkälbern durchgeführt. Die Zukaufskälber wurden in beiden Versuchen nach Tieralter und Lebendgewicht gleichmäßig einer Seite 178 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Behandlungsgruppe (Zulage SGW-Faktor) bzw. einer Kontrollgruppe (Kontrolle, keine Zulage) zugeordnet. Um einen möglichen gerichteten Einfluss der Zusammensetzung bzw. des Nährstoffgehaltes der verfütterten Milchaustauscher (MAT) auf die Interpretation der Wirksamkeit der Zulage des SGWFaktors ausschließen zu können, wurden in beiden Versuchen MAT mit unterschiedlicher Formulierung eingesetzt Für die Versuche (V1, V2) standen jeweils insgesamt 30 männliche Aufzuchtkälber der Rasse HolsteinFriesian zur Verfügung. Bei beiden Versuchen wurden die Kälber nach Alter und Lebendgewicht auf zwei möglichst homogene Gruppen aufgeteilt, die Behandlungsgruppe erhielt jeweils den mit dem SGW-Faktor aufgemischten Milchaustauscher (Behandlung, SGW-Faktor), die zweite Gruppe diente als Kontrollgruppe (Kontrolle, keine Zulage). Der Versuchsbeginn (V1 16.08.07; V2 15.11.07) erfolgte direkt nach Verteilung der Tiere auf die Versuchsgruppen praxisüblich ohne vorherige Adaptionsperiode. Haltung und Fütterung der Tiere beider Versuche (V1, V2) erfolgte unter standardisierten Bedingungen. In beiden Fütterungsversuchen wurden die Kälber gruppenweise zu je 15 Tieren in Tiefstreu-Gruppenbuchten auf Stroh gehalten. Eine individuelle Fütterung erfolgte bezüglich Milchaustauscher (restriktiv nach Tränkeplan) und Kraftfutter (ad libitum) einzeltierbezogen mittels Tränkeautomat bzw. Kraftfutterabrufstation. Der Tränkeplan, der während der Versuchsperiode beider Versuche (V1, V2) zur Anwendung kam, ist in Tabelle 1 dargestellt. Tabelle 1: Tränkeplan während der Versuchsperiode Versuchstag Elektrolyt-Tränke (l/Tier) MAT-Tränke (l/Tier) Konzentration MAT (g/l Tränke) 0* 2 - - 1 1 4 125 2-7 - 5-7 125 8 - 28 - 7 125 29 - 36 - 7-4 125 37 - 41 - 4-2 125 42 - 49 - 2-0 125 *Tag 0 = Tag des Zukaufes In Versuch 1 wurden die Kälber beider Gruppen mit einem MAT mit 18,0 % Rohprotein, 16,5 % Rohfett und etwa 60 % Molkenanteil in der Trockenmasse gefüttert, während die Tiere beider Gruppen in Versuch 2 einen MAT mit 20,0 % Rohprotein, 18,0 % Rohfett, 15 % Magermilchpulver und etwa 50 % Molkenanteil in der Trockenmasse erhielten. Neben dem jeweiligen MAT-Typ wurde als Kraftfutterkomponente ein Kälber-Müsli angeboten. Die Grundfuttermittel TMR und Heu standen den Tieren über Fressgitter ad libitum zur Verfügung. Als TMR wurde die Standard-TMR der MilchviehHerde in Hülsenberg gefüttert. Die Kälber hatten während der gesamten Versuchsdauer freien Zugang zu einer zusätzlichen Wassertränke. Vor und während der Versuche (V1, V2) wurden keine medizinischen Maßnahmen zur Darmgesundheits-Prophylaxe durchgeführt. Während der Versuche (V1, V2) erfolgte eine tägliche Gesundheitskontrolle aller Tiere. Das Wiegen der Kälber zur Ermittlung des Lebendgewichtes erfolgte mittels einer mobilen elektronischen Kälberwaage an festgesetzten Tag zu jeweils identischen Zeitpunkten. Alle Tiere wurden im Abstand von 7 Tagen gewogen, wobei die erste Wiegung am Zukaufstag (V1 16.08.07; V2 15.11.07) und die letzte Wiegung am 49. Versuchstag (V1 04.10.07; V2 03.01.08) stattfand. Insgesamt wurden alle Tiere achtmal gewogen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 179 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Die täglichen Futteraufnahmen an MAT und Kraftfutter konnte tierindividuell, elektronisch erfasst werden. Bezüglich der täglichen Aufnahmen an TMR und Heu musste die Futteraufnahme über die Differenz von Einwaage und Rückwaage buchtenweise ermittelt werden, da eine tierindividuelle Datenerfassung technisch nicht mögliche war. Die einzeltierbezogene Futteraufnahme an TMR und Heu wurde unter Annahme anteilig gleicher Futteraufnahmen der Tiere je Bucht geschätzt. Während der Versuche (V1, V2) erfolgte eine tägliche Gesundheitskontrolle aller Tiere. Vor und während der Versuche wurden keine medizinischen Maßnahmen zur Darmgesundheits-Prophylaxe durchgeführt. Die Futtermittel-Probennahme erfolgte bei beiden Versuchen identisch. MAT und Kraftfutter wurden chargenweise beprobt, Heu einmalig während der Versuchs, die TMR wurden täglich beprobt. Die täglich gezogenen TMR-Proben wurden 14-tägig gepoolt und bis zur Analytik tiefgefroren gelagert. Alle Futtermittel wurden im Labor der ISF in Wahlstedt auf Rohnährstoffgehalte nach WEENDERFuttermittelanalytik, Stärkegehalte sowie Calcium und Phosphorgehalte untersucht. Beim Milchaustauscher kam eine erweiterte Analytik bezüglich Laktosegehalt, pH-Wert, Benetzbarkeit, Löslichkeit und Fließverhalten zur Anwendung. Die Auswertung der Daten zu Tiergewicht und Futteraufnahme erfolgte mittels SASStatistikprogramm. Als Auswertungsmodell wurde die PROC GLM Prozedur von SAS (SAS Inst., Inc., Cary, NC) verwendet, wobei die Faktoren Tieralter und Tiergewicht bei der Auswertung im Modell berücksichtigt wurden. Die Überprüfung nach signifikanten Unterschieden (P<0,05) zwischen den Behandlungen erfolgte auf Basis des DUNCAN-Tests. In der statistischen Auswertung konnten im Versuch 1 nur jeweils 14 Tiere je Versuchsgruppe berücksichtigt werden, da je ein Tier pro Gruppe aus gesundheitlichen Gründen von der Auswertung ausgeschlossen wurde. Im Versuch 2 konnten aus selben Gründen in der Kontroll-Gruppe nur 13 und in der Behandlungs-Gruppe lediglich 14 Tiere berücksichtigt werden. Ergebnisse Versuch 1 (V1) Für den Versuch 1 (16.08.07 - 04.10.07) wurden 30 männliche Aufzuchtkälber der Rasse HolsteinFriesian mit einem durchschnittlichen Alter von 20 Tagen und einem mittleren Lebendgewicht von 50 kg zugekauft. Die Tiergewichte und das mittlere Alter der Kälber nach Versuchsgruppen ist der Tabelle 2 zu entnehmen. Tabelle 2: Charakterisierung des Tiermaterials nach Versuchsgruppen (V1) Tiere zu Versuchs- Alter zu Versuchsbeginn (n) beginn (d) Seite 180 Anfangsgewicht (kg) Kontrolle 15 20 ±7 50,4 ±3,55 SGW-Faktor 15 20 ±7 50,0 ±5,83 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Im Laufe des Versuches (V1) wies jeweils ein Tier pro Gruppe krankheitsbedingt so starke Schwankungen in Futteraufnahme und Zuwachs auf, dass die erfassten Daten dieser Tiere bei der Versuchsauswertung nicht berücksichtigt werden konnten. Die Gewichtsentwicklung und die mittlere Futteraufnahme der Kälber (V1) je Versuchswoche sowie im Mittel des Versuchszeitraumes sind für die Tiere der Kontroll-Gruppe und für die Tiere der SGW-Gruppe in der Tabelle 3 dargestellt. Tabelle 3: Gewichtsentwicklung und mittlere Futteraufnahme der Tiere der Kontroll-Gruppe (K, n=14) und der SGW-Gruppe (SGW, n=14) im Wochenverlauf (V1) Versuchsbeginn Mittleres Tiergewicht (kg) Tägliche Zunahmen (g) K SGW K SGW Mittlere Futteraufnahme je Tier/Woche Kraftfutter TMR (kg) (kg TM) MAT (kg) K SGW K SGW K SGW Heu (kg) K SGW (16.08.) 50,4 50,0 - - - - - - - - - - Woche 1 (17.08.-23.08.) 53,1 52,9 390,8 412,2 4,38 3,80 0,49 0,49 - - 0,21 0,23 Woche 2 (24.08.-30.08.) 54,8 54,5 245,9 223,5 5,37 4,53 0,56 0,64 - - 0,21 0,23 Woche 3 (31.08.-06.09.) 57,5 58,0 377,6 499,0 5,59 5,51 0,64 0,58 0,47 0,39 0,29 0,29 Woche 4 (07.09.-13.09.) 61,8 62,3 616,3 612,2 5,00 5,63 1,16 1,14 1,14 1,09 0,25 0,31 Woche 5 (14.09.-20.09.) 64,8 66,8 433,7 651,0 5,76 5,78 1,00 1,50 1,67 1,88 0,00 0,00 Woche 6 (21.09.-27.09.) 68,1 70,8 466,3 572,5 4,92 4,92 1,86 2,60 2,64 2,79 0,00 0,00 Woche 7 (28.09.-04.10.) 71,5 75,2 489,8 627,6 2,47 2,57 4,11 4,00 4,63 6,31 0,00 0,00 Ø (16.08.-04.10.) 60,2 ±7,53 61,3 ±9,03 431,4 ±113,9 514,0 ±152,6 4,80 ±1,08 4,68 ±1,16 1,40 ±1,20 1,56 ±1,21 2,11 ±1,46 2,49 ±2,09 0,14 ±0,12 0,15 ±0,14 Die Tiere beider Versuchs-Gruppen im Versuch 1 wiesen zu Versuchsbeginn eine einheitliche mittlere Lebendmasse von 50 kg auf. Zu Versuchsende wogen die Kontrolltiere 71,5 kg und die Tiere der Behandlung mit dem SGW-Faktor 75,2 kg. Damit lag der Gesamtzuwachs im Versuchsverlauf des Versuchs 1 bei durchschnittlich 21,1b kg (Kontrolle) bzw. 25,2a kg (SGW-Faktor) je Tier (P<0,05). Daraus ergab sich mit 514 g täglichen Zunahmen ein signifikant höherer Zuwachs in der BehandlungsGruppe mit dem SGW-Faktor im Vergleich mit 431 g in der Kontroll-Gruppe. Die mittleren Gewichtszunahmen sowie die Gesamtfutteraufnahme der Kälber im Versuchszeitraum (V1) sind im Vergleich der Versuchs-Gruppen der Tabelle 4 zu entnehmen. Tabelle 4: Zuwachs und Gesamtfutteraufnahme der Kälber im Versuchszeitraum (V1, 16.08.07 - 04.10.07) Gesamtfutteraufnahme je Tier Gewichtszunahme (kg) MAT (kg) Kraftfutter (kg) TMR (kg TM) Heu (kg) Kontrolle 21,1b 33,6 9,82 10,6b 0,96 SGW-Faktor a 11,0 a 1,06 25,2 32,7 12,5 a,b - unterschiedliche Hochbuchstaben kennzeichnen signifikante Unterschiede (P < 0,05) Während bezüglich der Futteraufnahme an MAT und Heu keine Unterschiede zwischen den Gruppen im Versuchszeitraum des Versuchs 1 feststellbar waren, ließen sich für das Kraftfutter in der Tendenz (SGW 11,0 kg vs. 9,82 kg Kontrolle) und bezüglich der TMR signifikant bessere Futteraufnahmen (SGW 12,5 kg vs. 10,6 kg Kontrolle) bei den Tieren der Behandlungsgruppe (SGW-Faktor) feststellen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 181 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Neben den signifikant besseren Zunahmen in Verbindung mit tendenziell (KF) bzw. signifikant (TMR) verbesserten Trockenfutteraufnahmen konnte in der Behandlungs-Gruppe mit SGW-Faktor auch ein tendenziell besserer Gesundheitsstatus der Tiere im Versuch 1 festgestellt werden. Wie aus Tabelle 5 hervorgeht, war die Anzahl an Durchfalltagen in der Behandlungsgruppe mit lediglich zwei gegenüber sieben Durchfalltagen in der Kontroll-Gruppe deutlich geringer, auch die Anzahl an tierärztlichen Behandlungen konnte durch den Einsatz des SGW-Faktors auf ein Minimum reduziert werden (Anzahl Behandlungen: SGW 2 vs. 14 Kontrolle). Tabelle 5: Anzahl an Durchfalltagen und tierärztlichen Behandlungen je Versuchsgruppe als Parameter der Tiergesundheit (V1) Durchfalltage Tierärztliche Behandlungen1 Kontrolle 7 14 SGW-Faktor 2 2 1 Erkrankungen Gastro-Intestinaltrakt u. Respirationsapparat; Fieber Versuch 2 (V2) Für Versuch 2 (15.11.07 - 03.01.08) standen insgesamt 30 männliche Aufzuchtkälber der Rasse Holstein-Friesian zur Verfügung. Die Tiere wurden mit einem durchschnittlichen Alter von 21 Tagen und einem mittleren Lebendgewicht von 53 kg zugekauft. Die Tiergewichte und das mittlere Alter der Kälber nach Versuchsgruppen ist der Tabelle 6 zu entnehmen. Tabelle 6: Charakterisierung des Tiermaterials nach Versuchsgruppen (V2) Tiere zu Versuchs- Alter zu Versuchsbeginn (d) beginn (n) Anfangsgewicht (kg) Kontrolle 15 21 ±4 53,6 ±7,20 SGW-Faktor 15 22 ±5 53,5 ±9,15 Im Laufe des Versuches (V2) wiesen in der Kontroll-Gruppe zwei und in der Behandlungs-Gruppe ein Tier krankheitsbedingt so starke Schwankungen in Futteraufnahme und Zuwachs auf, dass die erfassten Daten dieser Tiere bei der Versuchsauswertung nicht berücksichtigt werden konnten. Die Gewichtsentwicklung und die mittlere Futteraufnahme der Kälber (V2) je Versuchswoche sowie im Mittel des Versuchszeitraumes sind für die Tiere der Kontroll-Gruppe und für die Tiere der SGWGruppe in der Tabelle 7 dargestellt. Seite 182 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Tabelle 7: Gewichtsentwicklung und mittlere Futteraufnahme der Tiere der Kontroll-Gruppe (K, n=13) und der SGW-Gruppe (SGW, n=14) im Wochenverlauf (V2) Mittleres Tiergewicht (kg) Tägliche Zunahmen (g) K SGW K SGW K SGW K SGW K SGW K SGW (15.11.) 53,6 53,5 - - - - - - - - - - Woche 1 (16.11.-22.11.) 56,3 58,4 385,7 696,4 5,19 5,06 0,09 0,55 - - 0,11 0,28 Woche 2 (23.11.-29.11.) 59,4 61,4 435,1 439,3 6,60 6,48 0,18 0,84 0,15 0,53 0,62 0,78 Woche 3 (30.11.-06.12.) 62,0 65,5 372,7 575,0 6,56 6,71 0,33 0,97 0,69 0,85 0,43 0,33 Woche 4 (07.12.-13.12.) 67,5 71,1 783,1 806,0 6,83 6,80 0,57 1,50 1,19 1,87 0,53 0,53 Woche 5 (14.12.-20.12.) 69,9 74,6 349,4 500,0 5,07 5,29 1,11 1,99 5,84 8,37 0,00 0,00 Woche 6 (21.12.-27.12.) 73,8 78,2 558,4 519,1 2,32 2,13 3,19 4,56 5,84 8,37 0,00 0,00 Woche 7 (28.12.-03.01.) 81,7 86,1 1127,3 1131,0 - - 6,81 6,75 9,79 14,3 0,00 0,00 Ø (15.11.-03.01.) 65,5 ±9,49 68,6 ±10,9 573,1 ±287,5 666,7 ±240,0 5,43 ±1,69 5,41 ±2,53 1,76 ±2,31 2,45 ±2,17 3,92 ±3,54 5,71 ±5,07 0,24 ±0,28 0,27 ±0,30 Versuchsbeginn Mittlere Futteraufnahme je Tier/Woche Kraftfutter TMR (kg) (kg TM) MAT (kg) Heu (kg) Die Tiere beider Versuchs-Gruppen im Versuch 2 wiesen zu Versuchsbeginn eine relativ einheitliche mittlere Lebendmasse von etwa 53 kg auf. Zu Versuchsende wogen die Kontrolltiere 81,7 kg und die Tiere der Behandlung mit dem SGW-Faktor 86,1 kg. Damit lag der Gesamtzuwachs im Versuchsverlauf des Versuchs 2 bei durchschnittlich 28,1b kg (Kontrolle) bzw. 32,7a kg (SGW-Faktor) je Tier (P<0,05). Daraus ergab sich mit 667 g täglichen Zunahmen in der Behandlungs-Gruppe mit dem SGW-Faktor ein signifikant höherer Zuwachs als in der Kontroll-Gruppe mit lediglich 573 g. Die mittleren Gewichtszunahmen sowie die Gesamtfutteraufnahme der Kälber im Versuchszeitraum des Versuchs 2 sind im Vergleich der Versuchs-Gruppen der Tabelle 8 zu entnehmen. Tabelle 8: Zuwachs und Gesamtfutteraufnahme der Kälber im Versuchszeitraum (V2, 15.11.07 - 03.01.08) Gesamtfutteraufnahme je Tier Gewichtszunahme (kg) MAT (kg) Kraftfutter (kg) TMR (kg TM) Heu (kg) Kontrolle 28,1b 32,6 12,3b 23,5b 1,69b SGW-Faktor 32,7a 32,5 17,2a 34,2a 1,92a a,b - unterschiedliche Hochbuchstaben kennzeichnen signifikante Unterschiede (P < 0,05) Während bezüglich der Futteraufnahme an MAT kein Unterschied zwischen den Gruppen im Versuchszeitraum des Versuchs 2 feststellbar war, ließen sich für Kraftfutter (SGW 17,2 kg vs. 12,3 kg Kontrolle), TMR (SGW 34,2 kg vs. 23,5 kg Kontrolle) und Heu (SGW 1,92 kg vs. 1,69 kg Kontrolle) signifikant bessere Futteraufnahmen bei den Tieren der Behandlungsgruppe (SGW-Faktor) feststellen. Neben den signifikant besseren Zunahmen in Verbindung mit signifikant verbesserten Trockenfutteraufnahmen (KF, TMR und Heu) konnte im Versuch 2 in der Behandlungs-Gruppe mit SGW-Faktor auch ein tendenziell besserer Gesundheitsstatus der Tiere festgestellt werden. Wie aus Tabelle 9 hervorgeht, war im Versuch 2 in der Behandlungsgruppe kein Durchfallgeschehen zu beobachten, während in der Kontroll-Gruppe sieben Durchfalltage zu verzeichnen waren. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 183 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Tabelle 9: Anzahl an Durchfalltagen und tierärztlichen Behandlungen je Versuchsgruppe als Parameter der Tiergesundheit (V2) Durchfalltage Tierärztliche Behandlungen1 Kontrolle 7 6 SGW-Faktor 0 6 1 Erkrankungen Gastro-Intestinaltrakt u. Respirationsapparat; Fieber Zusammenfassung und Schlussfolgerung In der vorliegenden Arbeit wurde anhand zweier Fütterungsversuche (V1 (16.08.07 - 04.10.07), V2 (15.11.07 - 03.01.08)) bei Aufzuchtkälbern der Einfluss des dem Milchaustauscher beigemischten SGW-Faktors, einer Wirkstoffkombination aus ausgewählten mittelkettigen Fettsäuren und Lignocellulosefasern unterschiedlicher Holzherkünfte, auf Futteraufnahme, Wachstumsleistung und Tiergesundheit überprüft. Bezüglich des Leistungsparameters Zuwachs konnten im Versuch 1 in der Behandlungs-Gruppe mit dem SGW-Faktor signifikant höhere tägliche Zunahmen von 514 g gegenüber 431 g in der KontrollGruppe festgestellt werden. Beim Parameter Futteraufnahme wurden im Versuch 1 für die Aufnahmemengen an MAT und Heu im Versuchszeitraum keine Unterschiede zwischen den Gruppen festgestellt, während sich für das Kraftfutter in der Tendenz (SGW 11,0 kg vs. 9,82 kg Kontrolle) und bezüglich der TMR signifikant bessere Futteraufnahmen (SGW 12,5 kg vs. 10,6 kg Kontrolle) bei den Tieren der Behandlungsgruppe (SGW-Faktor) feststellen ließen. Im Versuch 2 konnten bezüglich des Zuwachses in der Behandlungs-Gruppe mit dem SGW-Faktor ebenfalls signifikant höhere tägliche Zunahmen von 667 g gegenüber 573 g in der Kontroll-Gruppe festgestellt werden. Beim Parameter Futteraufnahme wurden im Versuchszeitraum des Versuchs 2 keine Unterschiede bei den Aufnahmemengen an MAT zwischen den Gruppen festgestellt, während sich für Kraftfutter (SGW 17,2 kg vs. 12,3 kg Kontrolle), TMR (SGW 34,2 kg vs. 23,5 kg Kontrolle) und Heu (SGW 1,92 kg vs. 1,69 kg Kontrolle) signifikant bessere Futteraufnahmen bei den Tieren der Behandlungsgruppe (SGW-Faktor) feststellen ließen. Alle Erkrankungen der Tiere, die eine unmittelbare tierärztliche Behandlung notwendig machten, aber auch Temperaturerhöhungen und Durchfälle wurden bei beiden Versuchen (V1, V2) erfasst. Im Versuch 1 war bei den Kälbern der Behandlungs-Gruppe (SGW-Faktor) über den gesamten Versuchszeitraum eine um 71 % reduzierte Durchfallhäufigkeit und eine um 86 % geringere Anzahl an tierärztlichen Behandlungen zu verzeichnen. Die Kälber der Kontroll-Gruppe im Versuch 2 wiesen im Verlauf des Versuches sieben Durchfalltage auf, während bei der Behandlungs-Gruppe (SGW-Faktor) kein Durchfallgeschehen beobachtet werden konnte. Die durch die geringere gesundheitliche Belastung bedingte höhere Vitalität der Kälber mit SGW-Faktor-Fütterung ließ sich im Vergleich mit den Kontrollkälbern entsprechend in den deutlich verbesserten Leistungsmerkmalen wie Futteraufnahme und Zuwachs der Tiere in beiden Versuchen (V2, V2) nachweisen. Seite 184 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Literatur Decuypere, J.A. and N.A. Dierick. The combined use of triacylglycerols containing medium-chain fatty acids and exogenous lipolyticenzymes as an alternative to in-feed antibiotics in piglets: concept, possibilities and limitations: An overview. Nutrition Research Reviews. 2003. 16(2):193-209. Jin, L.; Reynolds, L.P.; Redmer, D.A.; Caton, J.S. and J. D. Crenshaw. Effects of dietary fiber on intestinal growth, cell proliferation, and morphology in growing pigs. J. Anim. Sci. 1994. 72:.2270-2278. Jorgensen, H.; Zhao, X.-Q. and B.0. Eggum. The influence of dietary fibre and environmental temperature on the development of the gastrointestinal tract, digestibility, degree of fermentation in the hind-gut and energy metabolism in pigs. Br. J. Nutr. 1994. 75: 365-378. Lenis, N.P.; Bikker, P.; van der Meulen, J.; van Diepen, J.T.; Bakker, J.G. and A.W. Jongbloed. Effect of dietary neutral detergent fiber on ileal digestibility and portal flux of nitrogen and amino acids and on nitrogen utilization in growing pigs. J. Anim. Sci. 1996. 74: 2687-2699. Skrivanova, E.; Marounek, M.; Benda V. and P. Brezina. Susceptibility of Escherichia coli, Salmonella sp. and Clostridium perfringens to organic acids and monolaurin. Veterinarni Medicina, 51, 2006 (3): 81–88. Stratford, M. and P.A. Anslow. Comparison of the inhibitory action on Saccharomyces cerevisiae of weak-acid preservatives, uncouplers, and medium-chain fatty acids. FEMS Microbiology Letters, 1996. 142 (1): 53-58. Autorenanschrift Dr. Holger Kurtz IS Forschungsgesellschaft mbH An der Mühlenau 4, D-25421 Pinneberg [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 185 Firmensponsoring - H. Willhelm SCHAUMANN GmbH & Co. KG, Jakob-Fuchs-Gasse 25-27, A-2345 Brunn am Gebirge Seite 186 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Lecithin Emulsifier in Nutrition of Piglets P. Danek and M. Rozkot Institute of Animal Science Praha Uhříněves Introduction The need for natural alternatives to antibiotic growth promoters is an important issue in animal production in this time. The high production level with still increasing demands as well as production sites that have to fulfil high quality standards at low cost result in high stress levels for the animals and will increase the demand for additives with effect on production. Milk fat contains a large amount of short chain fatty acids that are easily consumable and absorbable (Palmquist et al., 1993). The digestibility of milk fat of sows is set to be up to 95% (Heugten and Odle, 2000). In addition, the fat is emulsified and it can be more easily digested in this form. Piglets lose this nutrition source at the moment of weaning and it is a question how to substitute it adequately (Jensen et al., 1997). Heugten and Odle (2000) considered insufficient digestibility to be the major problem of adding fats into feed mixtures for piglets. It may be caused by the size of fat droplets. It was reported that a lecithin emulsifier could help piglets of the weight up to 22 kg to increase weight gains and improve feed conversion (Schwarzer and Adams, 1996). The effect of lecithin emulsifier is higher in days immediately after weaning (Soares et al., 2002). With respect to these experiments the use of lecithin emulsifier in feed mixtures for piglets after weaning can be promising (Desouza et al., 1995; Gu and Li, 2003). The aim of the experiment was to test the effects of lecithin on the efficiency of piglets in the post-weaning period. Material and methods Piglets were weaned in age of 28 days and sorted into experimental (E) and control (C) group according to starting weight, sex and origin. In each group were 28 piglets. Piglets were kept in the cages with non-stop access to food and water. The experiment lasted 28 days. The control group was fed with commercial feeding mixture for piglets without growth stimulator. For experimental group was lecithin emulsifier added in amount 1kg/t. The weight of piglets and feed consumption were monitored in weekly intervals. For digestibility determination the faeces were collected last two days of every week. The digestibility was determined by calculating the content of nutrients in feed and faeces concerning the content of 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 187 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives the marker (insoluble portion of ash). In the laboratories of our institute the contents of dry matter, crude protein, crude fat, crude fibre, ash and insoluble portion of ash in HCl were measured. Dry matter was determined by weighing after drying at the temperature of 105°C for 4 hours. The content of crude protein in the sample was calculated after determining the nitrogen content by Coulometric titration according to the formula: crude protein = N × 6.25. Nitrogen in the sample was transformed after mineralization by sulphuric acid while boiling with catalyst to ammonium sulphide and by titration with hydrobromide generated coulometrically from potassium bromide using biamperometric indication its amount was calculated. Fat was determined by weighing as the residue after extraction by means of diethyl ether. Fibre was determined as the solid residue after acid and alkaline hydrolysis by sulphuric acid and the solution of sodium hydroxide after having estimated the ash by weighing. Ash was determined as the residue after complete combustion of organic substances at 550°C by weighing. The insoluble portion of ash in HCl was determined as the residue of ash after dissolving ash in diluted hydrochloric acid by weighing. Laboratory analysis of the used feed mixture was performed at the same time The statistical program Qcexpert (TriloByte) was used for statistical evaluation. Results and discussion Average weight at the beginning of the experiment was almost the same in both groups (C = E = 8.700), but the final weight is about 0.5 kg higher in experimental group (C = 19.446, E = 19.886 kg). Average daily gain was statistically insignificantly about 4% higher in piglets from the experiment group (C = 383.8, E = 399.5 g). Feed consumption was 1.959 kg per 1 kg of weight gain in the control group, while in the experiment one 1.806 kg, which means a statistically significant decrease by 7.8 % – table 1. Table 1: Results of feeding experiment - values marked by different capital letters are statistically highly demonstratively different (P>0.01). C E Index (%) C = 100% Number of piglets Initial weight kg AWG g/day FCR kg/kg Final weight kg Seite 188 28 28 x 8.700 8.700 SD 1.256 1.586 x 383.8 399.5 SD 98.4 95.0 x 1.959A 1.806 B SD 0.063 0.045 19.446 19.886 3.364 3.586 100 104.1 92.2 102.6 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives The digestibility of nutrients was higher in piglets with the feeding mixture with emulsifier. The lowest increase of digestibility was determined in organic matters – by 1.4% in comparison to the control; the highest increase was in crude fibre – an increase of 6.3% in comparison to the control. The some effect was registered at crude fat, crude protein and ash digestibility – an increase of 4.3, 4.7 i.e. 4.2 % in comparison to the control group, but only differences in crude protein was statistically significant (C = 78.50, E = 82.20% P<0.01) – table 2. Table 2 Digestibility coefficients (%) - values marked by different capital letters are statistically highly demonstratively different (P>0.01). C E Index (%) C = 100% Crude fat Crude protein Crude fibre Organic matter Ash x 68.42 71.38 SD 9.21 9.25 x 78.50 A 82.20 B SD 4.36 2.36 x 56.01 59.52 SD 13,09 10,54 x 83.76 84.99 SD 2,96 2,77 x 64.88 67.59 SD 9,32 10,20 104.3 104.7 106.3 101.4 104.2 The presupposition of a better feed exploitation was confirmed. In piglets from the experiment group there was a lower feed consumption per kg of weight increase in comparison to the control. This conclusion is supported by the fact a higher digestibility of nutrients from feeding mixture. Also Heugten and Odle (2000) arrived at the same conclusion. They found out a better digestibility of fat, energy and N-substances after adding lysolecithin (0.02%) into the feeding mixture for piglets. Our results support the results of the experimental utilisation of phospholipids obtained so far and published by Schwarzer and Adams (1996) and our previous results (Daněk et al. 2005), and supplemented information about influence of lecithin emulsifier on nutrients digestibility. During the whole experiment no changes of the health condition were found out, no diarrhoea in any piglet. Conclusion According to the results presented in this study we can draw a conclusion that the supplementation of lecithin emulsifier to the commercial mixture for piglets in the period from weaning has a positive impact on the utilisation of dietary nutrients in piglets in the post-weaning period. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 189 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives The study was developed within the project of NAZV (National Agency for Agricultural Research) 1G46085 References Daněk P., Paseka A., Smola J., Ondráček J., Bečková R., Rozkot M. (2005): Influence of lecithin emulsifier on the utilisation of nutrients and growth of piglets after weaning. Czech J. Anim. Sci., 50, (10): 459–465 Desouza T.R., Peiniau J., Mounier A., Aumaitre A. (1995): Effect of addition tallow and lecithin in the diet of weaning piglets on the apparent total tract and ileal digestibility of fat and fatty – acids. Anim. Feed Sci. Technol., 52, 77–91. Gu X., Li D. (2003): Fat nutrition and metabolism in piglets: A review. Anim. Feed Sci. Technol., 109, 151– 170. Heugten van E., Odle J. (2000): Evaluation of lysolecithin as an emulsifier for weanling piglets. 1998–2000 Department Report, Department Anim. Sci., ANS Report No. 248. Jensen J.S., Jensen S.K., Jakobsen K. (1997): Development of digestive enzymes in pigs with emphasis on lipolytic activity in the stomach and pancreas. J. Anim. Sci., 75, 437–445. Palmquist D.L., Beaulieu A.D., Barbano D.M. (1993): Feed and animal factors influencing milk fat composition. J. Dairy Sci., 76, 1753–1771. Schwarzer K., Adams C.A. (1996): The influence of specific phospholipids as absorption enhancer in animal nutrition. Fett-Lipid, 98, 304–308. Soares M., Lopez-Bote C.J. (2002): Effect of dietary lecithin and fat unsaturation on nutrient utilization in weaned piglets. Anim. Feed Sci. Technol., 95, 169–177. Corresponding author Petr Danek Institute of Animal Science Praha Uhrineves Div. of pig Breeding Komenskeho 1238, 517 41 Kostelec nad Orlici, Czech Republik Seite 190 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Effekte einer L-Carnitinzulage bei variierenden Energiegehalten des Futters auf Mast- und Schlachtleistungen sowie Fettsäuremuster in verschiedenen Geweben beim Mastschwein F. Hutterer¹, W. Windisch¹ und T. Ettle2 ¹ Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittewissenschaften und –technologie, Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie 2 Bayerische Landesanstalt für Landwirtschaft, Institut für Tierernährung und Futterwirtschaft Einleitung L-Carnitin – ein lebenswichtiges Aminosäurederivat – übt im Intermediärstoffwechsel von Tier und Mensch wichtige Funktionen aus. Eine zentrale stoffwechselphysiologische Aufgabe besteht darin, als Carrier den Transport von langkettigen Fettsäuren vom Zytosol ins Innere der Mitochondrien zu ermöglichen, wo diese in die ß-Oxidation eingeschleust werden. Untersuchungen an Zuchtsauen zeigen, dass durch Zulage von L-Carnitin eine Verbesserung der Reproduktionsleistung erreicht wird (Ramanau et al., 2002). Studien beim Mastschwein (Owen et al., 2001) deuten an, dass durch L-Carnitinzulagen ein geringerer Fettansatz erreicht werden kann. Speziell bei carnitinarmen, rein pflanzlichen Diäten könnten sich durch Zusätze von L-Carnitin Auswirkungen auf die Mastleitung ergeben. Darüber hinaus lassen sich aufgrund der Funktion als Fettsäuren-Carrier Auswirkungen einer L-Carnitinzulage auf die Schlachtkörperzusammensetzung insbesondere dann ableiten, wenn unterschiedliche Energiekonzentrationen in der Ration durch unterschiedliche Gehalte an Fett in der Ration eingestellt werden. Vor diesem Hintergrund sollte die vorliegende Studie mögliche Effekte von L-Carnitinzulagen bei unterschiedlichen Energiekonzentrationen bzw. Fettgehalten in der Ration auf Mast- und Schlachtleistungen von Mastschweinen aufzeigen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 191 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Material und Methoden Die Studie wurde mit 60 Mastschweinen (männliche Kastraten) der österreichischen Dreirassenkreuzung (OEHYB) durchgeführt. Die Tiere wurden in der österreichischen Schweineprüfanstalt in Streitdorf (NÖ) mit einem mittleren Gewicht von 30 kg eingestallt und unter Berücksichtigung von Wurf (Herkunft) und Gewicht gleichmäßig über 12 Boxen auf 4 Versuchsgruppen aufgeteilt (5 Tiere pro Box, 3 Boxen bzw. 15 Tiere je Behandlung). Gemäß dem zweifaktoriellen Versuchsansatz wurden die Rationen der Versuchsgruppen 1 und 2 auf einen Energiegehalt von 13 MJ ME/kg eingestellt, die Rationen der Versuchsgruppen 3 und 4 auf einen Energiegehalt von 14 MJ ME/kg; während den Rationen der Versuchsgruppen 1 und 3 kein L-Carnitin zugesetzt wurde, wurden die Rationen der Versuchsgruppen 2 und 4 jeweils mit 50 mg L-Carnitin supplementiert (Carniking® 50% L-Carnitin, Lonza Group Ltd., Schweiz). Die Tiere erhielten bis 65 kg Lebendmasse ein Anfangsmastfutter und anschließend bis zur Schlachtung mit ca. 112 kg Lebendmasse ein Endmastfutter. Die Hauptkomponenten der Futtermischungen waren Mais, Sojaextraktionsschrot, Weizen und Weizenkleie und Gerste. Die Abstufung im Energiegehalt wurde durch Austausch von inerter Diatomeenerde gegen Rapsöl im Umfang von 2,7 % (Anfangsmast) bzw. 2,8 % (Endmastfutter) eingestellt. Die Futtermischungen der Anfangsmast enthielten dadurch 13,5 bzw. 14,5 MJ ME/kg bei 16% Rohprotein und die der Endmast 13,7 bzw. 14,6 MJ ME/kg bei 14 % Rohprotein. Sowohl das pelletierte Futter als auch Wasser standen den Tieren zur freien Aufnahme zur Verfügung. Die Futteraufnahme wurde über eine individuelle Tiererkennung am Fütterungsautomaten täglich erfasst. Die Lebendgewichte der Einzeltiere wurden wöchentlich ermittelt. Die Tiere wurden nach Erreichen eines Lebendgewichtes von ca. 112 kg im betriebseigenen Schlachthof unter standardisierten Bedingungen geschlachtet. Die Schlachtleistungsparameter wurden nach den Methoden der österreichischen Schweineprüfanstalt erhoben. Im Zuge der Schlachtung wurden Blutproben gezogen, zentrifugiert und das Blutplasma bis zu weiteren Analyse tiefgefroren gelagert. Darüber hinaus wurden Gewebeproben von Rückenmuskel, Rückenspeck, Leber und Herz entnommen, homogenisiert, gefriergetrocknet und tiefgefroren gelagert. In den Futter- und Gewebeproben wurde der Carnitingehalt mittels radiometrischem Nachweis ermittelt und in den Proben von Leber und Rückenspeck das Fettsäuremuster gaschromatographisch bestimmt. Die ermittelten Daten wurden einer Varianzanalyse (GLM Procedure of SAS, SAS Inst., Inc., Cary, NC) unterzogen. Signifikante Unterschiede zwischen den Mittelwerten (P≤0,05, Student-Newman-KeulsTest) sind mit Hochbuchstaben gekennzeichnet. Aufgrund von Erkrankungen und krankheitsbedingten Minderleistungen wurden 7 Tiere (je 2 Tiere aus den Gruppen 1, 2 und 3 sowie ein Tier aus Gruppe 4) von der statistischen Auswertung ausgeschlossen. Ergebnisse und Diskussion Die Carnitinzulage hatte keinen gerichteten Einfluss auf die Mastleistungen, weder im Mittel über den gesamten Versuch (Tabelle 1), noch in der Anfangsmast oder Endmast (Daten nicht aufgeführt). Die Carnitinzulage zeigte darüber hinaus keine Effekte auf die Schlachtleistungen. Im Mittel der mit LCarnitin supplementierten Gruppen zeigten sich jedoch deutlich (p<0,05) höhere Carnitinkonzentrationen in Leber, Herz, Rückenmuskel sowie im Blutplasma (Tabelle 1). Dabei Seite 192 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives entsprachen die Werte der Carnitingehalte in den untersuchten Gewebeproben vergleichbaren Untersuchungen (Gustavsen, 2000). Literaturdaten belegen verbesserte Reproduktionsleistungen bei Zuchtsauen durch Zulagen von LCarnitin (Ramanau et al., 2002). Musser et al. (1999) stellten neben verbesserten Geburtsgewichten bei Ferkeln auch erhöhte Gewichtszunahmen bei Zuchtsauen nach Carnitinzulagen während der Trächtigkeit fest. Bei Mastschweinen wird in der Literatur auf verbesserte Schlachtleistungsdaten im Sinne von verringerten Fettansätzen nach Zulage von L-Carnitin zu Rationen von Mastschweinen hingewiesen (Owen et al., 2001). Ein weiterer Versuch von Owen et al. (2001) ergab ebenfalls einen reduzierten Fettansatz, einen höheren Magerfleischanteil sowie einen höheren täglichen Proteinansatz. Für diese Merkmale wurden 49 – 64 mg Carnitin je kg Futter als optimaler Carnitingehalte ermittelt. Die Funktion von L-Carnitin als Carrier für langkettige Fettsäuren bzw. ein Zusatz von L-Carnitin könnte speziell bei Rationen deren unterschiedliche Energiekonzentrationen durch unterschiedliche Fettgehalte eingestellt wurden einen Einfluss auf die Mast- und Schlachtleistungen zeigen. Untersuchungen von Rincker et al. (2003) deuten an, dass die Effektivität von Carnitinzulagen in Rationen mit Fettzulagen erhöht sein könnte. In der vorliegenden Studie konnten keine gerichteten Effekte einer Zulage von L-Carnitin auf die Mastund Schlachtleistung aufgezeigt werden, obwohl signifikant höhere Carnitingehalte im Blutplasma der Gruppen mit Carnitinzulagen gemessen wurden. Dieses Ergebnis deutet an, dass im vorliegenden Versuch entweder die Carnitingehalte in der verfütterten Getreide - Soja Ration ausreichend hoch waren und/oder die endogene Canitinsynthese den Bedarf vollständig abdecken konnte. Die Untersuchungen zum Fettsäuremuster in Leber- und Rückenspeckproben ergaben Auswirkungen einer L-Carnitinzulage. Wie in Tabelle 2 ersichtlich, führte der Zusatz von L-Carnitin in der Leber zu einer Änderung der Zusammensetzung der ungesättigten Fettsäuren dahingehend, dass der Anteil der einfach ungesättigten Fettsäuren sowohl in absoluter (p<0,01) als auch in relativer Hinsicht (p<0,05) reduziert wurde. Der Anteil der mehrfach ungesättigten Fettsäuren blieb hingegen unbeeinflusst. Die Analysen der Fettsäurenzusammensetzung im Rückenspeck (Tabelle 2) ergaben durch die Zulagen von L-Carnitin eine absolute Erhöhung (p<0,05) des Anteils der einfach ungesättigten Fettsäuren sowie eine absolute und relative Reduktion (p<0,05) der mehrfach ungesättigten Fettsäuren. Hinsichtlich der unterschiedlichen Energiekonzentrationen war sowohl in der Anfangmastperiode (p<0,05; Daten nicht aufgeführt) als auch über die gesamte Mastperiode (p<0,1) in der Gruppe mit 14 MJ ME/kg ein deutlich bzw. tendenziell geringerer Futteraufwand zu erkennen, was sich mit Literaturdaten (Ettle et al., 2003) deckt. Im Gegensatz zu anderen Untersuchungen (Roth et al., 2000), die zeigen, dass Mastschweine eine erniedrigte Energiekonzentration der Ration durch eine erhöhte Futteraufnahme zumindest teilweise kompensieren können, war die Futteraufnahme in vorliegender Untersuchung bei niedrigerem Energiegehalt des Futters allerdings nur geringfügig erhöht. Die höhere Energiekonzentration von 14 MJ ME/kg führte im Mittel der Behandlungen zu einem geringeren Magerfleischanteil (p<0,05) und zu einer erhöhten Rückenspeckdicke (p<0,05). Frühere Untersuchungen mit Steigerung der Energiekonzentration von 13 auf 14 MJ ME/kg konnten dagegen keine derartigen Wirkungen auf den Magerfleischanteil und andere Schlachtleistungsmerkmale zeigen (Ettle et al., 2003). Im Gegensatz zu diesen Studien blieb jedoch der Futterverzehr in der vorliegenden Untersuchung unverändert, so dass die Steigerung der Energiedichte des Futters unmittelbar die Gesamtaufnahme an Energie erhöhte, was die stärkere Verfettung der betroffenen Tiere erklärt. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 193 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Tabelle 1: Effekte von L-Carnitinzulagen und unterschiedlicher Energiekonzentrationen des Futters auf Mast- und Schlachtleistungen sowie auf Carnitingehalte in verschiedenen Gewebeproben p-Wert Behandlungskombination 1) Energie (MJ ME/kg) 13 13 14 14 Suppl. Carnitin (mg/kg) 0 50 0 50 Anfangsgewicht (kg) 29 29 30 31 n.s. n.s. n.s. Endgewicht (kg) 112 113 113 111 n.s. n.s. n.s. Mastdauer (Tage) 102 104 100 99 n.s. n.s. n.s. Zuwachs (g/Tag) 821 832 852 825 n.s. n.s. n.s. Futter/Zuwachs (kg/kg) 2,55 2,55 2,44 2,48 n.s. n.s. n.s. Magerfleisch (%) 58,0a 58,5a 56,5b 56,2b ** n.s. ** Rückenspeck (mm) 23,1 23,2 25,4 24,9 n.s. n.s. * Leber 18,9b 21,9ab 19,0b 25,3a ** ** n.s. Herz 415b 497a 375b 539a ** ** n.s. Rückenmuskel 426b 497ab 428b 560a * ** n.s. b b b a ** * n.s. BehandCarnitin lung Energie Mastleistung Schlachtleistung Carnitingehalte (mg/kg TM) Blutplasma 1,52 1,52 1,40 1,79 1) Behandlung: Vergleich der 4 Behandlungskombinationen; Carnitin: Vergleich der beiden Carnitinstufen; Energie: Vergleich der beiden Energiestufen; n.s. = nicht signifikant (p>0,05), * = p<0,05, ** = p<0,01 Die Ergebnisse der Fettsäureanalysen (Tabelle 2) ergaben in den Leberproben hinsichtlich der Energiezulage eine rel. Reduktion (p<0,05) der einfach ungesättigten Fettsäuren. Im Rückenspeck führte die Energiezulage durch 2,8% Rapsöl im Futter zu einer deutlichen Reduktion (p<0,01) der gesättigten Fettsäuren. Hinsichtlich der ungesättigten Fettsäuren ergab die Energiezulage eine signifikante Abnahme (p<0,01) der einfach ungesättigten sowie eine signifikante Zunahme (p<0,01) der mehrfach ungesättigten Fettsäuren. Die Ergebnisse zeigen Übereinstimmung mit Arbeiten von Frickh et al. (1998). Diese Versuche ergaben durch Zulagen von Rapssaat zu Schweinemastfutter, bei allerdings gleichbleibendem Energiegehalt, eine Abnahme der gesättigten sowie eine Zunahme der ungesättigten Fettsäuren im Auflagenfett der Schlachtkörper. Seite 194 7. BOKU-Symposium Tierernährung Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives Tabelle 2: Effekte von L-Carnitinzulagen und unterschiedlicher Energiekonzentrationen des Futters auf das Fettsäuremuster der Leber und des Rückenspecks p-Wert Behandlungskombination 1) Energie (MJ ME/kg) 13 13 14 14 Suppl. Carnitin (mg/kg) 0 50 0 50 (mg/g) 41,6 41,4 43,5 39,9 n.s. n.s. n.s. (%) 48,6 48,2 48,2 49,5 n.s. n.s. n.s. 44,1ab 44,6ab 46,8a 41,1b * n.s. n.s. (%) 51,4 51,8 51,8 50,5 n.s. n.s. n.s. (mg/g) 11,8a 11,4a 12,1a 10,0b ** ** n.s. a ab ab b 12,3 * * * BehandCarnitin lung Energie Leber gesättigte FS ungesättigte FS (mg/g) Monoensäuren Polyensäuren (%) 13,8 13,2 13,3 (mg/g) 32,3 33,3 34,7 31,1 n.s. n.s. n.s. (%) 37,7 38,6 38,5 38,2 n.s. n.s. n.s. (mg/g) 363ab 370a 342b 357ab * n.s. ** ab a b ab * n.s. ** Rückenspeck gesättigte FS (%) 40,0 40,9 38,6 39,4 544 536 543 549 n.s. n.s. n.s. 60,0ab 59,1b 61,4a 60,6ab * n.s. ** 367 370 341 360 ** * ** (%) 40,5a 40,9a 38,5b 39,7ab ** n.s. ** (mg/g) 177bc 165c 203a 189ab ** * ** bc c a b ** * ** ungesättigte FS (mg/g) (%) Monoensäuren Polyensäuren (mg/g) (%) 1) 19,5 18,3 22,9 20,9 Behandlung: Vergleich der 4 Behandlungskombinationen; Carnitin: Vergleich der beiden Carnitinstufen; Energie: Vergleich der beiden Energiestufen; n.s. = nicht signifikant (p>0,05), * = p<0,05, ** = p<0,01 Schlussfolgerungen Die Zulagen von L-Carnitin zu Mastfutter mit unterschiedlichen Energiekonzentrationen kamen im Stoffwechsel der Tiere an, wie die entsprechenden Steigerung der Carnitingehalte im Gewebe der Tieren belegen. Diese Zulagen hatten jedoch keinen zusätzlichen Effekt auf die Mast- und Schlachtleistung der behandelten Tiere. Offensichtlich enthielten die verwendeten Getreide-SojaRationen auch dann noch ausreichende Mengen an nativem Carnitin, als höhere Energiegehalte durch 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 195 Organische Säuren und weitere Zusatzstoffe / Organic Acids and other Additives höhere Fettanteile eingestellt werden. Demgegenüber führte die Steigerung der Energiekonzentration des Futters zu erniedrigten Magerfleischanteilen bzw. einer höheren Rückenspeckdicke. Das Fettsäuremuster in Leber- und Rückenspeckproben wurden durch Carnitinzulagen uneinheitlich beeinflusst. Während die Gehalte der einfach ungesättigten Fettsäuren in der Leber durch Carnitinzulagen reduziert wurden, stiegen diese Gehalte im Rückenspeck an. Der Anteil der mehrfach ungesättigten Fettsäuren blieb durch L-Carnitinzulagen in der Leber unverändert, während er im Rückenspeck reduziert wurde. Die Energiezulage durch Rapsöl führte zu einer Veränderung des Fettsäuremusters im Rückenspeck. Der Anteil der gesättigten sowie der einfach ungesättigten Fettsäuren ging deutlich zurück, jener der mehrfach ungesättigten stieg deutlich an. Literatur Ettle, T., Roth-Maier, D. A., Roth, F. X., 2003. Effect of apparent ileal digestible lysine to energy ratio on performance of finishing pigs at different dietary metabolizable energy levels. J. Anim. Physiol. a. Anim. Nutr. 87, 269–279 Frickh, J.J.; Wetscherek, W.; Pichler, W.A., 1998. Untersuchungen über den Einsatz von Rapssaat und deren Auswirkungen auf die Mast- und Schlachtleistung sowie auf die Fleischqualität in der Schweinemast, Die Bodenkultur, 49(1), 39-49 Gustavsen, H., 2000. Bestimmung des L-Carnitingehaltes in rohen und zubereiteten pflanzlichen und tierischen Lebensmitteln. Dissertation Univ. Hannover Musser, R. E.; Goodband, R. D.; Tokach, M. D.; Owen, K. Q.; Nelssen, J. L.; Blum, S. A.; Dritz, S. S.; Civis, C. A., 1999. Effects of L-carnitine fed during gestation and lactation on sow and litter performance. J. Animal Sci. 77, 3289-3295 Owen, K.Q.; Ji, H.; Maxwell C.V.; Nelssen, J.L.; Goodband, R.D.; Tokach, M. D.; Tremblay, G. C. ; Koo, S.I., 2001. Dietary Lcarnitine suppresses mitochondrial branched-chain keto acid dehydrogenase activity and enhances protein accretion and carcass characteristics of swine. J. Anim.Sci 79, 3104-3112 Owen, K. Q.; Nelssen, J.L.; Goodband, R.D.; Tokach, M. D.; Friesen, K. G., 2001. Effect of dietary L-carnitine on growth performance and body composition in nursery and growing-finishing pigs. J. Anim.Sci 79, 150 -1515 Ramanau, A.; Kluge, H.; Spilke, J.; Eder, K., 2002. Reproductive performance of sows supplemented with dietary L-carnitine over three reproductive cycles, Arch. Anim. Nutr. 56, 287-296 Rincker, M.J.; Carter, S.D.; Real, D.E.; Nelssen, J.L.; Tokach, M.D.; Goodband, R.D.; Dritz, S.S.; Senne, B.W.; Fent, R.W.; Pettey, L.A.; Owen, K.Q., 2003. Effects of increasing dietary L-carnitine on growth performance of weanling pigs. J. Anim. Sci 81, 2259-2269 Roth, F. X.; Eder, K.; Rademacher, M.; Kirchgessner, M., 2000. Effect of apparent ileal digestible lysine to energy ratio on performance of growing pigs at different dietary metabolizable energy levels J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 83, 181–192. Autorenanschrift DI Franz Hutterer Lohmann Animal Health GmbH & Co KG Aggsbach 7, 4655 Vorchdorf e-Mail: [email protected] Seite 196 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - LOHMANN ANIMAL HEALTH GmbH & Co.KG, Heinz-Lohmann-Strasse 4, D-27472 Cuxhaven 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 197 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Experimentelle Untersuchungen zur Einsatzmöglichkeit von Weizentrockenschlempe (DDGS) in der Schweinemast Karl Schedle1, Christian Plitzner1, Tatjana Figl-Wolfsberger2 und Wilhelm Windisch1 1 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und – technologie 2 AGRANA Bioethanol GmbH, Pischelsdorf, Österreich Einleitung Die anfallenden Weizenschlempen bei der Erzeugung von Bioethanol sind weitgehend frei von Stärke bzw. deren Abbauprodukten (Dextrine, Zucker). Sie enthalten aber alle anderen Inhaltsstoffe der verarbeiteten Rohstoffe, v.a. Eiweiß, Fett, Mineralstoffe, Hemicellulosen, Cellulose und Lignin. Darüber hinaus befinden sich in ihnen die gesamten eingesetzten und im Verlauf der Gärung vermehrten Hefemengen, wodurch ihre biologische Wertigkeit beträchtlich gesteigert wird (Eiweiß, Vitamine). Durch die Trocknung der Schlempe (DDGS) wird sie haltbar gemacht und muss nicht direkt nach der Vergärung verfüttert werden. Die Weizenschlempe weist einen Rohproteingehalt von ca. 33,3 % in der Frischmasse auf und könnte daher einen gewissen Anteil an Soja in den Rationen von Mastschweinen ersetzen. Ziel der Studie war es, Weizen-DDGS schrittweise gegen Soja im Futter von Mastschweinen zuzusetzen (6 Konzentrationen, 0 bis 30 %), um den höchstmöglichen Einsatz von Weizenschlempe zu ermitteln und mögliche Auswirkungen auf die Mast- und Schlachtleistung festzustellen. Ausgetauscht wurde die Weizenschlempe in der Ration mit Sojaextraktionsschrot, wobei darauf geachtet wurde, dass alle Versuchsgruppen eine optimale Protein, Aminosäuren- und Mineralstoffversorgung hatten. Material und Methoden Das Experiment fand in einem Mastabteil der österreichischen Mastprüfanstalt in Streitdorf statt. Es standen 12 konventionelle Boxen mit Vollspaltenboden zur Verfügung. Jede Box war mit einem Futterautomaten ausgestattet, über den der tägliche Futterverzehr individuell erfasst wurde. Seite 198 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products 60 Mastschweine (ÖHYP) wurden bei einem Gewicht von ca. 30 kg in Gruppen zu je 5 Tieren auf die 12 verfügbaren Boxen aufgeteilt. Die Zuteilung erfolgte unter möglichst gleichmäßiger Verteilung der Lebendmasse und der Herkunft (Wurf). Die Tiere erhielten die ersten Tage im Maststall ein Medizinalfutter zur Prophylaxe gegen mögliche umstellungsbedingte Erkrankungen. Anschließend wurde bis 70 kg Lebendmasse ein Futter für die Anfangsmast (MF I; 12,9 MJ ME/kg, 13,7 % Pcv Protein) mit bedarfsdeckenden Nährstoffgehalten ad libitum eingesetzt und ab einer Lebendmasse von 70 kg wurde auf ein Endmastfutter (MF II; 13,2 MJ ME/kg, 12,2 % Pcv Protein) gewechselt und ebenfalls ad libitum angeboten. Die Soll-Nährstoffgehalte waren an die Bedarfsnormen der Gesellschaft für Ernährungsphysiologie (GfE) angepasst. Die Basisration bestand hauptsächlich aus Mais, Weizen und Sojaextraktionsschrot bzw. Weizenschlempe (Tabelle 1). Die eingesetzte Weizenschlempe wurde in Form von Actiprot®, von der AGRANA Bioethanol GmbH (Pischelsdorf, Österreich) bezogen. Um die 6 Futtermischungen isokalorisch zu halten, und trotz unterschiedlicher Proteinträger die Gehalte und das Muster der essentiellen Pcv Aminosäuren bedarfsdeckend zu gestalten, wurden die zu vergleichenden Futtermittel (Weizenschlempe und Soja HP) in einer separaten Vormischung auf gleichen Energie- bzw. Pcv Proteingehalt eingestellt. Diese Vormischungen wurden dann wie in Tabelle 1 angegeben auf die Basaldiät im jeweiligen Verhältnis aufgemischt. Zu Versuchsende wurden die Mastleistungsparameter tägliche Zunahmen, tägliche Futteraufnahme und Futterverwertung erhoben: Im Rahmen der Schlachtung wurden die zerlegten Schlachtkörper auf die Schlachtleistungsparameter Fleischfülle (Anteil wertvoller Teilstücke), Fleischbeschaffenheit (pH-Wert, Fleischhelligkeit (GÖFO), Safthaltevermögen (=Drip Verlust), Magerfleischanteil (MFA, %), Rückenspeckdicke (RSP, mm), Marmorierung (IMF, %) untersucht. Zusätzlich wurden die Konzentrationen von NH3 und Harnstoff im Blutplasma mittels eines kommerziellen Kits (Böhringer Mannheim, Darmstadt, Deutschland) erhoben. Ergebnisse und Diskussion Der Austausch von Sojaextraktionsschrot durch Schlempe hatte wie erwartet einen kontinuierlichen Anstieg des Gehaltes an Rohprotein und NDF bzw. ein Absinken des Stärkegehalts der jeweiligen Futterrationen zur Folge. Insgesamt entsprechen die analysierten Nährstoffgehalte der angestrebten Mischung. Alle analysierten Nährstoffe befanden sich im Bereich der GfE Normen. Die Ergebnisse der Mastleistung sind in Abbildung dargestellt. Aufgrund respiratorischer Erkrankungen wurden zwei Tiere (ein Tier VG1 und ein Tier VG2) aus dem Versuch entnommen. Über die gesamte Mastperiode (Ø 35,6 – 113kg Lebendgewicht) hinweg zeigten sich keine Unterschiede zwischen den einzelnen Versuchsgruppen in Bezug auf die Mastleistungsdaten (Abildung 1). In der vorliegenden Studie hatte der Austausch von Soja durch Weizenschlempe bei ausgeglichenen Protein, Aminosäurenund Energiewerten keine Auswirkung auf die Mast- und Schlachtleistungsparameter über die gesamte Mastperiode. Ähnliche Ergebnisse zeigten Studien von Whitney und Shurson 2004, Thacker PA. 2006 und Martínez et al. 2008. Gegenteiliges wird von berichtet in welchen die Futterrationen auf ein ausbalanciertes totales Aminosäuremuster kalkuliert wurden (Whitney et al. 2006). Diese Ergebnisse scheinen daher auch nicht überraschend, da DDGS eine um einiges schlechtere Aminosäureverdaulichkeit aufweisen als vergleichbare Eiweißquellen (Spiehs et al. 2002, Widyaratne and Zijlstra 2007). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 199 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Tabelle 1: Rezepturen der Alleinfuttermittel Versuchsgruppe Futtermittel VG1 VG2 VG3 VG4 VG5 VG6 Vormastfutter Vormischung Soja (VM-S), % 30 24 18 12 6 0 Vormischung Actiprot (VM-A), % 0 6 12 18 24 30 Mais, % 40 40 40 40 40 40 Weizen, % 20,5 20,5 20,5 20,5 20,5 20,5 Rapsschrot 5 5 5 5 5 5 Monocalciumphosphat 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Futterkalk, % 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 3 3 3 3 3 3 L-Lysin, % 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 L-Threonin, % 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Vitamin und Spurenelementprämix G, % Endmastfutter Vormischung Soja (VM-S), % 30 24 18 12 6 0 Vormischung Actiprot (VM-A), % 0 6 12 18 24 30 65,8 65,8 65,8 65,8 65,8 65,8 Weizen, % 0 0 0 0 0 0 Rapsschrot 0 0 0 0 0 0 Monocalciumphosphat 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Futterkalk, % 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 3 3 3 3 3 3 L-Lysin, % 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 L-Threonin, % 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Mais, % Vitamin und Spurenelementprämix G, % Seite 200 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Abbildung 1: Mastleistungsdaten über die gesamte Mastperiode Bei den Schlachtleistungsmerkmalen pH-Wert Schinken und Fleischhelligkeit ergaben sich signifikante Unterschiede zwischen der VG1 und VG4 (pH Schinken VG1 6,4±0,06 bzw. VG4 5,9±0,12; Fleischhelligkeit VG1 68,2±1,3 bzw. VG4 58,3±3,0), aus denen jedoch keine systematischen Rückschlüsse auf einen Einfluss des Austauschs von Sojaextraktionsschrot gegen Weizenschlempe gezogen werden können. Bei allen anderen untersuchten Schlachtleistungsparametern zeigten sich keine Unterschiede zwischen den Versuchsgruppen. Obwohl der Rohproteingehalt kontinuierlich von VG 1 bis VG 6 anstieg, zeigten die Ergebnisse der Blutplasma-Analysen auf Harnstoff und NH3 keine Unterschiede zwischen den Behandlungsgruppen. Aufgrund des hohen NDF bzw. NSP Gehaltes von DDGS (Widyaratne und Zijlstra 2007) kann ein Anstieg der potentiell bakteriell fermentierbaren Substanz vermuted werden. Diese ermöglicht eine verstärkte Transformation von NH3 in Mikrobenprotein (Van Nevel et al. 2006), wodurch weniger NH3 über die Leber entgiftet werden muss. Letzteres würde erklären, warum trotz des höheren Rohproteingehaltes der VG mit hohem DDGS Anteil keine unterschiedlichen Gehalte an NH3 und Harnstoff im Plasma zu finden waren. Diese Ergebnisse lassen darauf schließen, dass der für einen ausbalancierten prececal verdaulichen Proteingehalt benötigte höhere Rohproteingehalt, keine zusätzlichen Stoffwechselbelastungen für das Tier verursacht. Schlussfolgerung Aus den vorliegenden Ergebnissen lässt sich ableiten, dass ein kontinuierlicher Austausch von Soja gegen Weizenschlempe im Mastschweinefutter bei iso-kalorischen Bedingungen und entsprechender Berücksichtigung des jeweiligen Gehalts an potentiell limitierenden essentiellen Aminosäuren (v.A. Lys, Met+Cys, Thr) zu keinen Veränderungen bei den Mast- und Schlachtleistungen führt. Die bei der 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 201 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Schlachtleistungsprüfung auftretenden Unterschiede beim Merkmal pH-Wert Schinken und GÖFO zwischen VG 1 und 4 scheinen dabei nicht im Zusammenhang zum kontinuierlichen Austausch von Sojaextraktionsschrot gegen DDGS zustehen. Darüber hinaus zeigen die unveränderten NH3- und Harnstoffgehalte im Blutplasma, dass der höhere Futterproteingehalt der Versuchsgruppen mit hohem Weizenschlempe Anteil keine zusätzliche Stoffwechselbelastung verursachte. Insgesamt legen die Ergebnisse nahe, dass ein kompletter Austausch von Sojaextraktionsschrot durch Weizenschlempe in der Schweinemast ohne eine systematische Beeinträchtigung der Mast- und Schlachtleistung grundsätzlich möglich ist. Literatur ., Hernández L, Achan J. (2008): Evaluation of distillers dried grains with soluble (DDGS) on the productive performance and health indicators in growing pigs. In: Iben C., Wagner E., Handl. (Hrsg.), Congress Proceedings 12th Congress of the ESVCN, 25-27 September 2008, Wien, 67, ISBN 978-3-200-01193-9. Spiehs, MJ., Whitney MH., Shurson GC. (2002): Nutrient database for distiller’s dried grains with soluble produced from new ethanol plants in Minnesota and South Dakota. J Anim Sci 80:2639-2645. Thacker PA. (2006): Nutrient digestibility, performance and carcass traits of growing-finishing pigs fed diets containing dried wheat distiller’s grains with solubles. Can J Anim Sci 86: 527-527. Van Nevel CJ., Dierick NA., Decuypere JA., De Smet SM. (2006): In vitro fermentability and physicochemical properties of fibre substrates and their effect on bacteriological and morphological characteristics of the gastrointestinal tract of newly weaned piglets. Arch Anim Nutr 60: 477-500 Whitney MH., Shurson GC. (2004): Growth performance of nursery pigs fed diets containing increasing levels of corn distiller’s dried grains with solubles originating from a modern Midwestern ethanol plant. J Anim Sci 82: 122-128. Whitney MH., Shurson GC., Johnston LJ., Wulf DM., Shanks BC. (2006): Growth performance and carcass characteristics of grower-finisher pigs fed high-quality corn distillers dried grain with soluble originating from a modern Midwestern ethanol plant. J Anim Sci 84: 3356-3363. Widyaratne GP., Zijlstra RT. (2007): Nutritional value of wheat and corn distiller’s dried grain with soluble: Digestibility and digestible contents of energy, amino acids and phosphorus, nutrient excretion and growth performance of grower-finisher pigs. Can J Anim Sci 87: 103-114. Autorenanschrift Dr. Karl Schedle Abteilung: Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel-Strasse 33, A-1180 Wien e-Mail: [email protected] Seite 202 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - AGRANA Bioethanol GmbH, Industriegelände Pischelsdorf, A-3435 Pischelsdorf 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 203 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Chemical and nutritional characteristics of byproducts from ethanol fuel industry for pigs S. Nitrayová1, P. Patráš1, M. Brestenský1. J. Zelenka2 and J. Heger1 1 Slovak Agricultural Research Centre, Research Institute of Animal Production, Nitra, Slovakia 2 Mendel University of Agriculture and Forestry, Brno, Czech Republic Introduction In the past decade, a considerable interest has arisen in ethanol production, which in turn has led to the exploration of the nutritional value of ethanol industry byproducts, i.e. wet distillers grains (WDG) and dried distillers grains with solubles (DDGS) for farm animals. Owing to the high concentration of structural carbohydrates, WDG and DDGS have been traditionally used in rations for ruminants where the efficiency of fibre utilization is high. In pigs, the high fibre content may reduce nutrient digestibility, thus reducing the digestibility and availability of energy (Laplace et al. 1989). However, a recent study by Pedersen et al. (2007) showed that the values of digestible (DE) and metabolizable (ME) energy of maize-derived DDGS for growing pigs were approximately the same as those of the maize itself. It has also been demonstrated that the availability of P in DDGS is considerably higher than that in maize (Stein et al. 2005), even though the reason for this disparity is not fully elucidated. On the other hand, owing to the low concentration of lysine, protein utilization of WDG and DDGS is generally low and may be further reduced as a result of processing or drying procedures (Cromwell et al. 1993). Experiments conducted on pigs so far suggest that the nutritional value of DDGS is highly variable, presumably due to different raw materials used, methods of fermentation, drying temperatures or the proportion of solubles in the final product (Cromwell et al. 1993, Spiehs et al. 2002). Therefore, the aim of the present study was to evaluate the nutritional value of five byproducts coming from four ethanol fuel plants using proximate analysis and balance experiment on growing pigs. Material and methods Six LW gilts of the Institute herd with an average initial body weight of 40.2 kg were used throughout the experiment. The pigs were housed in metabolism cages in a thermoneutral environment. After a 14-d adaptation period, during which a standard grower diet was offered, the pigs were randomly Seite 204 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products assigned to five dietary treatments according to a 5 x 6 factorial arrangement. Within the experiment, there were six consecutive periods, each consisting of a 5-d preliminary period followed by a 2-d collection period. During the collection period, urine was collected quantitatively using bladder catheters and the urine aliquots were immediately analyzed for total N. Faeces were collected by grab sampling, freeze-dried, finely ground and stored for subsequent analysis. Four samples of distillers dried grains with solubles (DDGS) and one sample of wet distillers grains (WDG) were obtained from four ethanol fuel manufacturers. The sample characteristics and their analyzed nutrient contents are given in Table 1. Five semipurified diets were formulated containing distillers grains (56.6 %), maize starch (20 %), sucrose (20 %) and minerals and vitamins (2.4 %). Cellite (1 %) was added to the diets as a source of acid insoluble ash. The diet containing WDG was formulated on dry matter basis. All diets were fed twice daily at 7.00 and 16.00 h in two equal meals at a daily rate of 90 g DM/kg0.75. Table 1. Characteristic and chemical composition of distillers grains (g or MJ/kg DM) Sample Product source No. Dry Crude Lysine Fat matter protein Ash Starch NDF ADF P GE 1 DDGS Wheat, barley 928,5 364,3 7,05 43,7 56,6 23,3 366,0 148,1 9,43 20,83 2 DDGS Wheat, barley 902,1 346,2 7,89 53,5 68,5 26,4 354,0 135,6 8,51 20,91 3 DDGS Maize 894,6 305,3 7,17 122,8 50,8 38,7 375,6 166,7 9,55 22,61 4 WDG Maize 195,7 338,9 9,73 71,6 24,0 56,6 262,1 127,2 5,02 21,52 5 DDGS Wheat 890,1 335,1 3,71 45,7 77,8 36,7 332,3 228,7 9,40 20,28 The diets and faeces were analyzed for dry matter (DM), total N, fat, ash, NDF, ADF, P and acid insoluble ash (AIA) in accordance with standard methods of AOAC (1990). Gross energy of diets and faeces was determined using Parr 1281 Oxygen Bomb Calorimeter (Parr Instrument Co., Moline, IL, USA). Colour intensity of distillers grains was measured as reflectance at 520 nm using Spekol 11 spectrophotometer. DWG was lyophilized before the reflectance measurements. Coefficients of apparent digestibility of nutrients and energy were calculated using acid insoluble ash as a digestibility marker. The digestibility of energy was calculated by difference as described by GfE (2005) assuming that the energy digestibility of starch and sucrose was 100 % (van Milgen et al. 2001). For the calculation of metabolizable energy (ME), the energy content of urine was assumed to be 47.6 kJ/g N (Hoffmann and Klein 1980). The experimental data were subjected to ANOVA using Statgraphic Plus package (version 3.1., Statistical Graphics Corp., Rockville, MD, USA). When a significant F-value for treatment means (P<0.05) was observed, the differences between means were assessed using Fisher's LSD procedure. Regression analysis was used to evaluate the relationship between colour intensity of distillers grains and N utilization as well as between lysine content, N digestibility and N retention. Results and discussion The concentration of CP in the five samples differed from 305 to 364 g/kg DM (Table 1) and even greater difference was found for the concentration of lysine (3.7 to 9.7 g/kg DM). It is interesting to 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 205 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products note that the lowest value was found in DDGS produced from wheat while the highest one was found in WDG from maize, even though lysine content in wheat is generally higher than that in maize. It seems that an unsuitable processing of wheat-based DDGS may be responsible for this seeming discrepancy. Considerable differences were also observed in the concentration of other nutrients. Thus fat content ranged from 43.7 to 122.8 g/kg DM and starch content from 23.3 to 56.6 g/kg DM. The concentration of ash and of total P in WDG (sample #4) was about one half of the values found in other sources. This suggests that a considerable proportion of minerals is present in the liquid part of the fermentation media which is not the constituent of WDG. Table 2. Coefficients of apparent digestibility of nutrients and energy of distillers grains Sample No. Apparent digestibility (%) DM OM N Ash P NDF ADF GE 1 77,5 b 80,1 b 74,2 b 39,8 b 42,6 b 43,7 b 45,8 b 64,8 b 2 80,7 c 83,0 c 76,8 c 46,7 c 34,8 c 57,8 c 52,2 c 68,9 c 3 82,4 d 84,9 d 80,7 d 41,0 d 49,1 d 63,5 d 71,6 d 73,9 d 4 78,6 b 81,0 b 83,7 b 27,9 b 1,4 b 61,2 b 71,6 b 62,3 b 5 76,0 a 78,2 a 55,7 a 45,5 a 21,5 a 37,9 a 35,2 a 58,8 a SEM 0,4 0,4 0,8 0,9 6,3 1,6 1,4 0,8 The coefficients of apparent digestibility of nutrients and energy are presented in Table 2. In all nutrients studied, the digestibility values differed significantly among the sources of distillers grains. In most cases, the highest digestibility was found in DDGS from maize (sample #3) and the lowest one in DDGS produced from wheat (sample #5). Except for the latter sample, the mean apparent N digestibility was 79 % and was comparable with data on CP digestibility of various sources of DDGS as published by Pedersen et al. al (2007). A very low digestibility of total P was found in WDG (sample #4) and the digestibility of ash was also significantly lower when compared with other samples. As shown in Table 1, the concentration of ash and P in sample #4 was low, resulting in low intake of both nutrients. Since the apparent digestibility is not corrected for endogenous losses, the low apparent digestibility at low nutrient intakes might have been explained by a relative high proportion of endogenous losses in faeces. However, as shown by Fernández (1995) and Rodehutscord et al. (1988), faecal endogenous P losses in pigs are rather low, amounting to about 6 - 10 mg/kg BW. True P digestibility, calculated using these data, increased only to about 10 %. It seems therefore that phosphorus present in sample #4 was largely unavailable for the animals but we did not find any reasonable explanation for this finding. In contrast, apparent P digestibility of samples #1-3 was only slightly lower than those reported by Widmer et al. (2007) and Pedersen et al. (2007). The present results are thus in accordance with previous reports showing superior P digestibility in DDGS as compared with common cereals and suggesting that part of phytate P is hydrolyzed during the fermentation process (Bohlke et al. 2005, Stein et al. 2005). The apparent digestibility of energy ranged from 58.8 to 73.9 %, the differences between all samples being significant. The present values are comparable with the range of 62.7 - 70.5 % as given by Stein et al. (2006), but are lower than the mean value of 76.8 % reported for 10 samples of DDGS by Pedersen et al. (2007). Seite 206 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Table 3. Parameters of N metabolism and energy values of distillers grains Sample N intake Faecal N Urinary N g/d g/d N retention g/d DE % ME No. g/d MJ/kg DM MJ/kg DM 1 47,1a 12,1b 25,5a 9,5b 20,2b 13,5b 12,0b 2 46,8a 10,8b 25,2a 10,7b 22,7b 14,4c 12,8c 3 44,5a 8,6c 21,2ab 14,7c 32,8c 16,7d 15,3d 4 38,0b 6,2d 19,3b 12,5bc 32,8c 13,4b 11,9b 5 42,7ab 18,8a 19,0b 4,8a 11,4a 11,9a 10,6a SEM 2,2 1,5 0,7 1,2 2,2 0,2 0,2 The results of N balance (Table 3) have shown that, despite relatively high CP content, the protein quality of all samples of distillers grains is low. Maximum N utilization, expressed as percentage of N retention of N intake, was 32.8 % which was considerably less than the N utilization of common pig diets based on cereals and soyabean meal. This is undoubtedly due to the low content and availability of lysine in distillers grains protein. Using multiple regression analysis, the relationship between percentage N retention (NR) and lysine concentration (Lys) and N digestibility (ND) as independent variables was described by the equation NR = -43.92 - 3.67Lys + 1.11ND (P<0.0001, R2 = 0.64). The P-values for Lys and ND were 0.236 and 0.018, respectively, thus indicating that N retention was more influenced by N digestibility than by total lysine content, the effect of which was not significant. Since there was no significant relationship between N digestibility and fibre components concentration, it seems that the changes in N digestibility reflect the negative impact of processing and may serve as an indirect measure of amino acid availability. Indeed, the relationship between colour intensity, indicating thermal deterioration, and N utilization (Fig. 1) clearly shows that the darker colour is associated with lower N retention per unit of N intake as well as with lower N digestibility. Evaluation of the colour intensity may thus serve as a simple tool for assessing the nutritional value of DDGS. However, it should be borne in mind that the colour of DDGS depends also on raw material used and therefore the comparison of products made from different cereals may be questionable. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 207 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Fig. 1. Relationship between colour intensity of distillers grains and N utilization ( —— ) or N digestibility ( – – ). Plotted from the equations Y = 8.47 + 0.578 X, R2 = 0.76 (N utilization) and Y = 56.41 + 0.680 X, R2 = 0.71 (N digestibility). Based on energy digestibility and metabolizability, the contents of digestible and metabolizable energy were calculated and the resulting data per kg DM are presented in Table 3. The DE and ME values ranged from 11.9 to 16.7 and from 10.6 to 15.3 MJ/kg DM, respectively. Excluding sample #5, which was obviously damaged by high temperature, the mean DE and ME values were 14.5 and 13.0 MJ/kg DM, respectively. These values are about 15 % lower than those reported for maize or wheat. Pedersen et al. (2007) found only small differences between SE or ME contents in DDGS and maize and Stein et al. (2006) reported SE contents in DDGS ranging from 14.1 to 15.9 MJ/kg DM. All the recent values including the present ones are higher than those given by NRC (1998), i.e. 14.3 and 12.7 MJ/kg DM for SE and ME, respectively. Higher energy concentrations of DDGS should be included into least-cost formulation matrix to improve the precision of calculations. Conclusion Nutrient contents and their digestibility in various batches of DWG and DDGS were variable, being primarily dependent both on the cereal source and processing procedure. Very large variation was found in N digestibility and concentration of lysine and, as a result, in N retention and N utilization. N utilization was more dependent on N digestibility than on total lysine content which was not a good predictor of protein quality. There was a close relationship between colour intensity and the utilization Seite 208 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products and digestibility of N which suggests that the drying temperature strongly affects protein quality of distillers grains. DE and ME contents in distillers grains were lower than those in maize or wheat but higher than the values given by NRC (1998). It is concluded that distillers grains are good sources of energy and, except for one sample, of P, but their nutritional value may vary among sources. References AOAC 1984: Official methods of analysis. 14th. ed. Washington, D.C., Association of Official Analytical Chemists. Bohlke RA, Thaler RC, Stein HH (2005) Calcium, phosphorus, and amino acid digestibility in low-phytate corn, normal corn, and soybean meal by growing pigs. . J. Anim. Sci. 83, 2396-2403. Cromwell GL, Herkelman KL, Stahly TS (1993): Physical, chemical, and nutritional characteristics of distillers dried grains with solubles for chicks and pigs. J. Anim. Sci. 71, 679-686. Fernández JA (1995) Calcium and phosphorus metabolism in growing pigs. II. Simultaneous radiophosphorus kinetics. Livest. Prod. Sci. 41, 233-241. GfE (2005) Communications of the committee for requirement standards of the Society of Nutrition Physiology. Determination of digestibility as the basis for energy evaluation of feedstuffs for pigs. Proc. Soc. Nutr. Physiol. 14, 207-213. Hoffmann L, Klein M (1980) Die Abhängigkeit der Harnenergie vom Kohlenstoff- und Stickstoffgehalt im Harn bei Rindern, Schafen, Schweinen und Ratten. Arch. Tierernähr. 30, 743-750. Laplace J.P., Darcy-Vrillon B.,. Perez J.M., Henry Y., Giger S. and Sauvant D. (1989): Associative effects between two fibre sources on ileal and overall digestibilities of amino acids, energy, and cell wall components in growing pigs. Brit. J. Nutr. 61, 75-83. NRC (1998). Nutrient Requirements of Swine, 10th ed. National Academy Press, Washington, D.C. Pedersen C, Boersma MG, Stein HH (2007): Digestibility of energy and phosphorus in ten samples of distillers dried grains with solubles fed to growing pigs. J. Anim. Sci. 85, 1168-1176. Rodehutscord M, Haverkamp R, Pfeffer E (1998) Inevitable losses of phosphorus in pigs, estimated from balance data using diets deficient in phosphorus. Arch. Anim. Nutr. 51, 27-38. Spiehs MJ, Whitney MH, Shurson GC (2002): Nutrient data for distillers dried grains with solubles produced from new ethanol plants in Minnesota and South Dakota. J. Anim. Sci. 80, 2639-2645. Stein HH, Pedersen C, Boersma MG (2005): Energy and nutrient digestibility in dried distillers grain with solubles. J. Anim. Sci. 83 (Suppl. 2), 49. Stein HH, Gibson ML, Pedersen C, Boersma MG (2006) Amino acid and energy digestibility in ten samples of distillers dried grain with solubles fed to growing pigs. J. Anim. Sci. 84, 853-860. van Milgen J, Noblet J, Dubois S (2001) Energetic efficiency of starch, protein and lipid utilization in growing pigs. J. Nutr. 131, 1309-1318. Widmer MR, McGinnis LM, Stein HH (2007) Energy, phosphorus, and amino acid digestibility of high-protein distillers dried grains and corn germ to growing pigs. J. Anim. Sci. 85, 2294-3003. Corresponding author MVDr. Soňa Nitrayová, PhD. Research Institute of Animal Production Hlohovská 2, 949 92 Nitra, Slovakia Tel : +421 37 6546 248 Fax : +421 37 6546 418 E-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 209 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Nutritive assessment of co-products from biofuel production in ruminants M. Chrenková, Z. Čerešňáková, Z. Mlyneková, P. Fľak M. Poláčiková and A. Tomíková, Slovak Agricultural Research Centre – Research Institute for Animal Production Nitra, Slovak Republic Introduction The growth of the fuel industry continues to increase supplies of dried distillers grains with solubles available for use in livestock, pigs and poultry feeds. The feed industry plays an integral role in the ethanol production industry. The primary product of the dry milling production process is ethanol; but approximately one-third of the total dry matter is recovered in the form of co-products. Through the fermentation process much of the starch in grains is removed and the remaining grain nutrients are concentrated in the end-product. The main attention regarding the use of distillers grains as animal feedstuffs is focused on stability in nutritional characteristics and quality of the product. Depending on the plant, and whether it is producing a wet or dry feed, the proportion of distillers grains (DG) and distillers solubles that are mixed together may vary (Knott et al. 2002). The results of research indicated that DG wet or dried may have been ideal source of ruminal undegraded protein with a good amino acids profile, but Lysine is the first-limiting AA for dairy cows (Kleinschmit et al., 2007). Material and methods Our work was focused on the quality of dry distillers grains with solubles (DDGS) and distillers grains with solubles (DGS) from corn and wheat. In this study were used DDGS from corn (n=7), DDGS from wheat (n=4) and DGS from corn (n=6). Samples were analysed for DM, CP, total proteins, AA, NDF, ADF, N-ADF, starch and fat according to the Decree of the Ministry of Agriculture of the Slovak Republic No. 1497/4/1997-100. For crude protein (CP) degradability was used in sacco technique, and for intestinal digestibility mobile bag technique on three cows provided with a large rumen cannula and T-cannula in the duodenum behind the pancreas. Crude protein effective degradability was calculated with passage rate 0.06/h. The intestinal digestibility of CP, total amino acids and essential amino acids were determined in undegraded residues after 16 h incubation of the DDGS and DGS in the rumen. Only one sample of DGS was used for in sacco experiment. Seite 210 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products The results were evaluated by One-way analysis of variance and significant differences were declared at P<0.01 and P<0.05. Results and discussion The nutrient composition of distillers grains depends on the type, variety and quality of the used grains and the processing technique (Berk et al. 2008). The composition of corn DDGS is essentially the same with or without solubles added (Schingoethe, 2006). Knott et al. (2002) are of other opinion. The chemical composition of the feeds used in this experiment is shown in Table 1 and in the Fig.1. The CP found in wheat DDGS was significantly (P<0.01) greater than in DDGS and DGS from corn. The same tendency was in the starch content also. In DDGS were found about three-fold higher contents of crude fibre than in the original grains, the content is about 27.9 g/kg DM in wheat and 21 g/kg DM in corn. The variability in nutrients content was low within the tested DG samples. The quality of DDGS samples was more stable in content of all parameters than DGS, except starch (c.v. is 27.6% for DDGScorn resp. 48 % for DDGSwheat). Table 1: Chemical composition of DDGS and DGS from corn, and DDGS from wheat Nutrients content g/kg DM Crude protein x Crude fibre Starch sugar ±SE x ±SE x ±SE x NfE ±SE x ±SE DDGScorn 286.0a 9.80 97.0a 7.20 50.0a 5.23 32.5a 1.58 465.8 14.90 DGScorn 299.4b 16.86 146.2a,b 4.76 77.7b 11.68 5.8a 1.21 462.2 12.64 DDGSwheat 346.8a,b 6.26 91.8b 5.76 37.4a,b 45.6a 10.68 452.0 9.21 9.01 The NDF and ADF content varied among distillery grains products. The content of NDF is relatively high in all products. The highest content of ADF was found in over-heated DDGS from wheat (Fig. 1). This product had a much greater proportion of nitrogen bound to ADF (16.59 g/kg DM or 31.5 % of total N). Similar results found Kleinschmit et al. (2007). Wheat DDGS* with dark colour confirmed that there was not used correct temperature in drying process. Harty et al. (1998) declared that colour score appears to have little linear relation to the concentration of ADF-N and decreasing of CP digestibility. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 211 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Content in g/kg DM 500 400 300 200 100 0 NDF ADF DDGScorn DGScorn N-ADF DDGSwheat* %N-ADFfrom total N DDGSwheat Fig. 1: Content of fibre components and N-ADF of distillers grains. (DDGSwheat* were excessively heated) The effect of excessive heating on reducing protein degradability and intestinal digestibility has been well documented by our results (Table 2). The lowest parameter a (22.8 %), b (48.2 %), and c (0,028 %.h-1) were calculated from in sacco experiment by incubation of DDGS* in rumen. The highest undegraded CP (100-Edg) was in wheat DDGS* (62.7 %) but the intestinal digestibility of amino acids was the lowest (Fig. 3). We did not find differences for immediately soluble fraction (a) Table 2: Crude protein degradation parameters and effective degradability (Edg) of DDGS and DDGS from corn and DDGS from wheat Crude protein degradability a b c Edg x DDGScorn DGScorn DDGSwheat ±SE 19.5-26.4 52.6-70.0 0.0310-0.054 50.6a 1.491 18.8 69.4 0.037 46.8b 0.260 22.8-51.9 48.2-71.0 0.028-0.065 58.38b 5.184 P<0.01 Seite 212 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products among all samples of DG from corn. The ruminally degradable CP fraction (b) and the degradability rate (c) were in the same range for them. Like a higher CP content in all DG, content of amino acids is higher than in corn or wheat also. Content of TEAA was the highest in non dried DG from corn, mainly Lysine. Heating has the highest effect on Lysine concentration, because this AA is the first one susceptible to heat damage via a Maillard reaction. Concentration of Methionine that is also essential for dairy cows was the highest in corn DGS (Fig. 2). 900 800 700 g AA/160g N 600 500 400 300 200 100 0 TAA TEAA DDGScorn Lysine DGScorn Methionine DDGSwheat Fig. 2: Amino acids content in distillers grains in kg crude protein Intestinal digestibility of total and essential amino acids of ruminally undegraded residues was very high (except DDGSwheat* the intestinal digestibility of total AA 81% and of lysine 77.3 %). The intestinal digestibility among the same type of DG (DDGScorn= 7 samples, DDGSwhet= 2, DDGSwheat*= 2) was similar (Fig. 3). The differences are apparent between DG from corn and wheat, but they are significant only between DDGSwheat* and the others. The intestinal digestibility of Lysine is the lowest among other AA. This fact indicates lower utilization of Lysine by animal. In general, distillers grains are relatively good source of energy in spite of lack of starch. Nutritional value of all DG in our experiment is documented in Table 3. In comparison with corn and wheat the values for ME, NEL and NEV are significantly lower (Chrenková et al., 2008), on the contrary, PDIN and PDIE are much higher (71.3 and 115.0 for corn, and 78.7 and 103.2 for wheat, respectively) and there are not significant differences among them. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 213 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products 100 Intestinal digestibility (%) 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 TotalAA TotalEAA DDGScorn DGScorn TotalNEAA Lysine DDGSw heat Methionine DDGSw heat* Fig. 3: Intestinal digestibility of amino acids in undegraded residues after 16 h incubation in the rumen Table 3: Nutritional value of DDGS and DGS for ruminants MJ/kg DM ME g/kg DM NEV NEL PDIN PDIE x ±SE x ±SE x ±SE x ±SE x ±SE DDGScorn 12.61a 0.103 7.78a 0.089 7.65a 0.073 200.0a 6.86 169.6a 4.33 DGScorn 11.78a 0.112 7.12a 0.054 7.11a 0.057 212.5a 11.84 188.9a 7.06 DDGSwheat 12.10b 0.550 7.55a 0.017 7.38a 0.016 235.7a 2.91 174.7b 11.52 P<0.05 Conclusion DDGS from corn and wheat are a good source of protein and energy for ruminants. For ruminants is quality of CP much better than in raw material because degradability of CP degreased and intestinal digestibility of by-pass amino acids is higher by 95% for DDGS from corn and 79-88 % for DDGS from wheat. Nonadequate drying may degreased of protein and essential amino acids intestinal digestibility (DDGSwheat*) and their utilization. The quality of DDGS samples was stable in content of majority parameters. Seite 214 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products References Berk, A., Lebzien, P., Flachowsky, G., 2008: Influence of use of by-products from bio-fuel production in feeds for growingfinishing pigs, Book of Abstracts No.14 of the 59th Annual Meeting of the EAAP:, Vilnius, Lithuania, 24-27 August 2008, -ISBN 978-90-8686-074-6, -ISSN 1382-6077.- p. 265, poster 9. Harty, S.R., Akayezu, J.M., Linn, J.G., Cassady, J.M., 1998: Nutrient composition of distillers grains with added solubles. J.Dairy Sci., 81 (Suppl. 1), 1201 (Abstr.) Chrenková, M., Sudzinová, J., Čerešňáková, Z., Mlyneková, Z., Poláčiková, M., Fľak, P., Mihina, Š., 2008: Nutritional essessment of distillers dried grains with solubles produced by Slovak distillery. Book of Abstracts No. 14 of the 59th Annual Meeting of the EAAP: Vilnius, Lithuania (Litva), 24-27 August 2008. - ISBN 978-90-8686-074-6, - ISSN 1382-6077.- p. 148, poster 11. Kleinschmit, D.H., Anderson, J.L., Schingoethe, D.J., Kalscheur, K.F., Hippen, A.R., 2007: Ruminal and intestinal degradability of distillers grains plus solubles varies by source. J. Dairy Sci., 90, pp.2909-2918. Knott, J., G.C. Shurson, and J. Goihl., 2004: Effects of the nutrient variability of distiller’s solubles and grains within ethanol plants and the amount of distiller’s solubles blended with distiller’s grains on fat, protein and phosphorus content of DDGS. Available: http://www.ddgs.umn.edu/articles-proc-storage-quality/2004-Knott-%20Nutrient%20variability.pdf. Accessed: June, 2006. Schingoethe, D. J., 2006: Can we feed more distillers grains? Tri-State Dairy Conference, April 2006, pp. 71-78. Address of corresponding authors Ing. Mária Chrenková, PhD. Slovak Agricultural Research Centre - RIAP, Institute of Nutrition, Hlohovská 2, 949 92 Nitra, Slovakia e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 215 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Einfluss der getrockneten Bierhefe (Saccharom yces cerevisiae ) auf Milchleistung, Milchzusammensetzung und -qualität 1) Kulpys J., 2)Paulauskas E., 3)Mikulionienė S. and 1)Stankevičius R. 1) Litauische Veterinärmedizinische Akademie 2) Litauischer Landwirtschaftlicher Beratungsdienst 3) Litauische Landwirtschaftliche Universität Einleitung Ernährung hat großen Einfluss auf Gesundheitszustand, Nutzungsdauer und Milchleistung von Kühen. Deshalb spielt eine ausgeglichene Rationsgestaltung eine wichtige Rolle. Auf Futtermittel entfällt der größte Kostenanteil (ca. 65 %), so dass bedarfsgerechte Tierernährung und Wirtschaftlichkeit eines Milchbetriebes im engen Zusammenhang stehen. Zahlreiche Versuche zeigen, dass energie- und eiweißreiche Ergänzungsfuttermittel sowie Futterzusätze mit verschiedenen biologisch aktiven Substanzen sich positiv auf Gesundheit, Reproduktions- und Milchleistung von Hochleistungskühen sowie auf die Parameter der Milchqualität auswirken. Umfang des Einsatzes von Ergänzungsfuttermitteln richtet sich nach dem Ernährungszustand von Kühen sowie nach dem Nährstoffmangel in der Ration. Ration der Kühe sollte aus preisgünstigen einheimischen Futtermitteln bestehen und eine ausgeglichene Nährstoffzusammensetzung aufweisen, indem man preiswerte inländische Ergänzungsfuttermittel wie Bierhefe einsetzt (Jeroch et al., 2008). Im vorliegenden Versuch wurde getrocknete Bierhefe zum Ausgleichen der Milchkuhration eingesetzt. Es handelt sich dabei um ein von der litauischen Firma „Ekoproduktas“ hergestelltes natürliches ökologisches Futtermittel, das Eiweiß, Vitamine und Mineralstoffe enthält. Getrocknete Bierhefe lässt sich nicht nur in der intensiven Tierproduktion, sondern auch in landwirtschaftlichen Ökobetrieben einsetzen (Maierhofer et al., 2003). Material und Methoden Der 90-tägige Versuch erfolgte von April bis Juni 2008 in einem litauischen Milchbetrieb, der über ertragsreiche Grünlandflächen verfügt und in der Lage ist, den Tieren Grünfutter hoher Qualität zur Verfügung zu stellen. Der mittlere Milchertrag pro Kuh und Jahr liegt bei 7500 kg, Milchfett – bei 4,20 %, Milcheiweiß – bei 3,35 %. Versuchsdesign ist der Tabelle 1 zu entnehmen. Seite 216 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Tabelle 1. Versuchsdesign Gruppe (n=10) Zusammensetzung der Ration Kontrollgruppe Ration: Heu, Maissilage, Anwelksilage, Mischfutter (gequetschte Weizen, Sojaextraktionsschrot, Vormischung) (verschiedene Laktationsperioden) Versuchsgruppe I Ration + getrocknete Bierhefe 250 g/Tag (bis zum 70. Tag nach Abkalbung) Im Laufe des Versuches kontinuierlich bis auf 400 g/Tag erhöht. Versuchsgruppe II Ration + getrocknete Bierhefe 200 g/Tag (70–140 Tage nach Abkalbung) Versuchsgruppe III Ration + getrocknete Bierhefe 100 g/Tag (über 140 Tage nach Abkalbung) Kontrollgruppe enthielt Tiere in unterschiedlichen Laktationsstadien, um Vergleich mit Ergebnissen der Versuchsgruppen gewährleisten zu können. Die Versuchsgruppe I bildeten Kühe in der frühen Laktation mit negativer Energiebilanz und dem Höhepunkt der Milchproduktion (bis zum 70. Tag nach Abkalbung). Zu der Versuchsgruppe II wurden Kühe in der frühen bis mittleren Laktation sowie im Höhepunkt des Futterverbrauchs (70-140 Tage nach Abkalbung) zugeordnet. Die Versuchsgruppe III enthielt Tiere in der mittleren und späten Laktation. Über die gesamte Versuchsperiode wurden gleiche Bedingungen für alle Gruppen gewährleistet: Stallhaltung, gleiche Ration aus je 15 kg Maissilage und Anwelksilage, 2 kg Heu, 5 kg Mischfutter (eigene Herstellung aus gequetschten Weizenkörnern, Sojaextraktionsschrot und einer Vormischung) in der Laktationsperiode und 2 kg Mischfutter in der Trockenzeit. Energetischer Futterwert der Ration: 6,5 MJ NEL je kg TS, Rohprotein 16 %, Rohfaser 22,6 %. Zu Versuchsbeginn erfolgte eine kurze Gewöhnungsphase, wobei getrocknete Bierhefe in das Mischfutter integriert und in der Melkzeit verabreicht wurde. Um optimale Bierhefemenge zu bestimmen, wurde die Tagesmenge in der Versuchsgruppe I alle zwei Wochen erhöht, solange erhöhte Milcherträge dokumentiert werden konnten. Nach dem Erreichen des Höhepunktes wurde die Bierhefemenge wiederum kontinuierlich auf 250g pro Tier und Tag reduziert. Getrocknete Bierhefe wird nach Angaben des Herstellers „Ekoproduktas“ aus flüssiger Bierhefe – einem Nebenprodukt der Brauerei – hergestellt und in Pulverform ausgeliefert. Das Produkt ist als eine Eiweißquelle einzustufen, angereichert mit Spurenelementen und Vitaminen der B-Gruppe. Ausgangstoff wird keiner chemischen Behandlung unterzogen und enthält praktisch keine Beimengungen. Im Produktionsvorgang werden keine synthetischen Komponenten bzw. Konservierungsstoffe verwendet, so dass getrocknete Bierhefe als sauberes Produkt einzustufen ist. Chemische Zusammensetzung getrockneter Bierhefe ist in der Tabelle 2 ausgewiesen. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 217 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Tabelle 2. Zusammensetzung getrockneter Bierhefe (Švirmickas, 2007) Inhaltsstoff Gehalt Inhaltsstoff Feuchte, % max 8 Tyrosin, g/kg 10,02 – 10,78 Phenylalanin, g/kg 12,10 – 14,45 Histidin, g/kg 11,79 – 12,42 Lysin, g/kg 26,21 – 27,55 Eiweiß, % Fett, % 44 – 50 max 6 Asche, % 2 Gehalt Threonin, g/kg 15,80 – 16,59 Arginin, g/kg 14,63 – 16,73 Glutamin, g/kg 56,11 – 63,13 Nikotinsäure, mg/100 g 28,00 – 45,80 Prolin, g/kg 17,00 – 26,94 Nikotinamid, mg/100 g 10,00 – 24,41 Glycin, g/kg 13,84 – 14,47 Pyridoxin, mg/100 g 2,00 – 6,63 Alanin, g/kg 20,92 – 23,68 Thiamin, mg/100 g 6,50 – 10,50 Valin, g/kg 13,28 – 15,53 Folsäure, mg/100 g 1,84 – 3,03 Methionin, g/kg 2,92 – 4,35 Riboflavin, mg/100 g 2,80 – 5,50 Isoleuzin, g/kg 10,00 – 10,70 Pantothensäure, mg/100 g Leuzin, g/kg 19,25 – 19,96 Biotin, mg/100 g 17,60 0,013 – 0,040 Zu Versuchsbeginn wurde Körpermasse aller Tiere erfasst sowie ihr Ernährungs-, Klauen- und Gesundheitszustand beurteilt. Andere Parameter wie Fresslust, Brunstintensität und Befruchtungsrate wurden ebenfalls dokumentiert. In der Prüfperiode erfolgten sieben Kontrollmelkungen: dreimal planmäßig zur Ermittlung der Milchleistung sowie zur Bestimmung der Milchzusammensetzung und Qualitätsparameter und viermal zur Ermittlung der Milchleistung. Die erste Kontrollmelkung wurde zu Versuchsbeginn durchgeführt, die zweite – nach 10 Tagen, die weiteren – alle zwei Wochen, nach der Erhöhung der Hefenmenge (Versuchsgruppe I). Planmäßige Kontrollmelkungen erfolgten nach einem festgelegten Plan, wobei täglicher Milchertrag (kg) ermittelt sowie Proben zur Milchqualitätskontrolle (Fett-, Eiweiß und Milchzuckergehalt (%), SCC (taus./ml) und Harnstoffgehalt (mg %)) entnommen wurden. Ermittlung der Milcherträge erfolgte im Betrieb. Milchproben wurden im Labor der öffentlich-rechtlichen Einrichtung "Pieno tyrimai“ (Milchuntersuchungen) mit den Analysegeräten „Lacto Scope FTIR“ (FTI. 2001) und „Soma Scope“ (CA- 3A4, 2004) nach Standardmethoden untersucht. Ergebnisse und Beobachtungsdaten wurden statistisch mit dem Softwarepaket „R“ ausgewertet (Juozaitienė et al., 2001), um sie innerhalb der Gruppen und zwischen den Gruppen zu vergleichen. Ergebnisse und Diskussion Im Laufe des Versuches konnten Tiere aller Gruppen als gesund beurteilt werden. Zu Beginn zeichnete sich bei einigen Tieren Verzicht auf Mischfutter mit getrockneter Bierhefe ab. Nach einer vorgeschalteten Gewöhnungsphase (3 Tage) nahmen jedoch alle Tiere die geplanten Hefemengen Seite 218 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products auf. Innerhalb von 10 Tagen war Stimulierung der Fresslust durch Hefeeinsatz beobachtbar. Es wurde mehr Futter und insbesondere Kraftfutter mit Bierhefe aufgenommen. In den Versuchsgruppen beobachtete man vitalere Tiere im besseren Ernährungszustand, intensive Brunst und stärkeren Haarglanz, es traten auch keine Verdauungs- und Klauenprobleme auf. In der Kontrollgruppe wurden dagegen zwei Lahmheitsfälle (Klauenerkrankungen) dokumentiert. Versuchskühe hatten im Vergleich mit der Kontrolle leichtere Abkalbung und damit weniger postnatale Probleme, brachten vitalere Kälber. In der Kontrollgruppe wurden dagegen eine Schwergeburt mit einem lebensschwachen Kalb in der Folge sowie bei zwei weiteren Kühen Gebärmutterentzündungen verzeichnet, was höhere Behandlungskosten in dieser Gruppe verursachte. Versuchsgruppen hatten höhere Milcherträge und brachten damit mehr Einkommen im Vergleich mit der Kontrolle (Tabelle 6). Zu Versuchsbeginn und am Versuchsende wurde Körpermasse aller Tiere erfasst (Tabelle 3). Tabelle 3. Entwicklung der Lebendmasse Versuchsbeginn, kg Versuchsende, kg ±, Differenz, kg Differenz, % Kontrolle 609 ± 26 613 ± 31 4 100,7 Versuchsgruppe I 640 ± 17 661 ± 14 21 103 Versuchsgruppe II 563 ± 27 584 ± 38 21 103,7 Versuchsgruppe III 610 ± 25 618 ± 23 8 101 Gruppe Wie aus der Tabelle 3 ersichtlich ist, lässt sich eine ungleichmäßige Lebendmasseentwicklung in allen Gruppen beobachten. In den Versuchsgruppen I und II war die mittlere Gewichtzunahme mit 21 kg am größten (p>0,001). Bei der negativen Energiebilanz in der Früh- und Hochlaktation (Versuchsgruppe I) sind die Tiere nicht in der Lage, für intensive Milchproduktions- und Lebensvorgänge genug Futternährstoffe aufzunehmen, deshalb werden Körperreserven mobilisiert. Nährstoffmangel lässt sich durch die richtige Rationsgestaltung teilweise ausgleichen (Aniulis et al., 2003). Gewichtszunahme in der Versuchsgruppe I ist höchstwahrscheinlich mit Hefeeinsatz in Verbindung zu bringen: Hefezusatz hatte positive Wirkung auf Pansenflora, was Verbesserung von Fermentationsvorgängen, Steigerung der Fresslust und Futteraufnahme zur Folge hatte. Diese Effekte konnten von vielen Autoren (Gombos et al., 1995; Maierhofer et al., 2003) bestätigt werden. Kühe der Versuchsgruppe II konnten für Milchproduktions- und Lebensvorgänge benötigte Nährstoffmenge aufnehmen. Gewichtszunahme in dieser Gruppe ist u. E. ebenfalls auf positive Beeinflussung der Pansenflora und verbesserte Gärungsvorgänge durch Hefeeinsatz zurückzuführen. Positive Energiebilanz in der Spätlaktation (Versuchsgruppe III) führt zum Aufbau von Körpermasse, die Tiere sollen in dieser Phase ihre Fettdepots auffüllen und genug Körperreserven für die kommende Laktation bilden (nicht in der Trockenstehzeit, wie oft fälschlicherweise in der Praxis geglaubt wird). Geringere Bierhefemenge in dieser Gruppe hatte eine schwächer ausgeprägte Wirkung auf Körpermassezunahme im Vergleich mit den zwei ersten Versuchsgruppen. Die höchsten Milcherträge mit 27 bis 36 kg pro Kuh und Tag wurden in der Versuchsgruppe I erfasst. Zu betonen ist, dass Kühe in der Früh- und Hochlaktation nicht die für die Milchproduktion und Lebensvorgänge benötigte Energiemenge aufnehmen können, so dass der Rationsgestaltung eine besondere Rolle zukommt. Optimale Fütterung in der Hochlaktation ist Voraussetzung für guten Gesundheitszustand sowie für hohe Milch- und Reproduktionsleistung von Kühen (Jeroch et al., 2008). Im Rahmen des Versuches wurde in der Versuchsgruppe I auch Effektivität des Hefezusatzes bei unterschiedlicher Einsatzhöhe geprüft (Tabelle 4). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 219 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Tabelle 4. Abhängigkeit der Milchleistung von der täglichen Bierhefemenge Tägliche Bierhefemenge, g Täglicher Milchertrag pro Tier, kg ±, im Vergleich mit der vorangehenden Periode, kg %, im Vergleich mit der vorangehenden Periode I. 04 10 – 04 28 (18 Tage) 250 28 ± 0,92 - - II. 04 29 – 05 11 (13 Tage) 300 32 ± 0,86 4,0 114 III. 05 12 – 05 25 (13 Tage) 350 30 ± 1,02 - 2,0 97 IV. 05 26 – 06 09 (14 Tage) 400 29 ± 0,97 - 1,0 96 V. 06 10 - 06 20 (10 Tage) 250 30 ± 0,71 - - Periode Zur Ermittlung einer optimalen Dosierung wurde die Tagemenge an getrockneter Bierhefe in der Versuchsgruppe I im Zeitraum 29.04–10.06 variiert. Zu diesem Zweck teilte man den Versuchszeitraum in 5 annähernd gleiche Abschnitte ein. Zu Beginn und am Ende jedes Abschnitts erfolgten jeweils Kontrollmelkungen und die Tagesmenge wurde alle 10 bis 14 Tage jeweils um 50 g pro Kuh erhöht, soweit erhöhte Milcherträge dokumentiert werden konnten. Vom 29. April bis zum 9. Juni wurde tägliche Bierhefemenge schrittweise von 250 g auf 400 g pro Kuh erhöht. Bei Stabilisierung der Milcherträge wurde die Bierhefemenge vom 10. bis 20. Juni wiederum kontinuierlich auf 250 g reduziert. Die von 250 g auf 300 g erhöhte tägliche Bierhefemenge brachte im Mittel 1 Liter mehr Milch pro Kuh und Tag, die weitere Erhöhung von 300 g auf 400 g hatte dagegen innerhalb von zwei Wochen keine erhöhte Milchleistung zur Folge. Übersicht über die Daten der durchgeführten Kontrollmelkungen vermittelt die Abbildung 1. Abb. 1. Entwicklung der Milchleistung Seite 220 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Die mittlere Milchleistung in der Versuchsgruppe I lag bei 29 kg pro Kuh und Tag und war damit um 5 kg höher als bei den Kontrollkühen der gleichen Laktationsperiode (p>0,05). Der Versuch ergab, dass man an Hochleistungskühe in der Frühlaktation 250 bis 300 g getrocknete Bierhefe zusätzlich verfüttern kann. Milchleistung in den Bierhefe-Gruppen I und II war höher (7,0-1,0 kg) im Vergleich mit der Kontrolle (P>0,01). In der Spätlaktation (Versuchsgruppe III) hatte getrocknete Bierhefe jedoch keinen Effekt, tägliche Milchleistung lag bei 16 kg pro Kuh (8 kg weniger als in der Kontrolle). Zwischen den Gruppen bestanden Unterschiede auch in der Milchzusammensetzung und -qualität. Versuchsgruppe III (Spätlaktation) wies mit 4,33 ± 0,51 % den höchsten Milchfettgehalt auf, wobei die Versuchsgruppe I (Frühlaktation) als die Gruppe mit dem niedrigsten Milchfettgehalt (3,50 ± 0,38 %) einzustufen war. Schätzt man die Futteraufnahmedaten ein, so nahmen die Kühe dieser Gruppe nicht genug Trockensubstanz auf, was Mangel an leicht verdaulicher Faser (NDF) und Zucker (Glukose und Fruktose) zur Folge hatte. Defizit dieser Nährstoffe hatte seine stärkste Ausprägung bei den Tieren in der Frühlaktation (Versuchsgruppe I und früh laktierende Kontrollkühe). Mangel an strukturwirksamer Faser führte höchstwahrscheinlich zur Störung der Pansenflora und der Gärvorgänge, wodurch sich zu wenig Essigsäure im Pansen bildete, die für Milchsynthese essentiell ist (Sheidemann und Steingass, 2005). Mangelerscheinungen kamen am Versuchsende besonders stark zum Ausdruck. Relativ niedrige Fettgehalte (3,89 ± 0,25 %) wurden auch in der Kontrolle ermittelt, weil in dieser Gruppe einige früh laktierende Kühe enthalten waren. Fettgehalte in der Versuchsgruppe II waren über die gesamte Prüfperiode stabil (4,05 ± 0,01 %). Gehalte an Energie und Nährstoffen waren somit in den Versuchsgruppen II und III ausreichend. Veränderungen der Fett- und Eiweißgehalte der Milch sind in der Abbildung 2 ausgewiesen. Abb. 2. Entwicklung der Milchfett-, Eiweiß- und Milchzuckergehalte in % Aus der zweiten Grafik geht hervor, dass Milcheiweißgehalt in der Versuchsgruppe I am niedrigsten war. Dafür ist u. E. Ernährung verantwortlich. Anteil des unabbaubaren Proteins lag bei 30 % (40 % erforderlich), Anteil der unabbaubaren Stärke betrug 25 % (30 % erforderlich). Infolge gestörter Pansenflora wurde weniger für Milchsynthese erforderliche mikrobielle Proteine (Walace, 1996), gebildet. Genannte Gründe hatten Einfluss auf Milcheiweißgehalte in der Versuchsgruppe I und bei den früh laktierenden Kontrollkühen, wobei Tiere der Versuchsgruppen II und III genug Nährstoffe 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 221 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products zur Verfügung hatten. Kontinuierliche Zunahme von Milcheiweiß in allen Versuchsgruppen ist u. E. auf Wirkung von getrockneter Bierhefe zurückzuführen. Milchzuckergehalte waren in allen Gruppen vergleichbar und lagen im Normalbereich. Milchzuckerkonzentration hängt von genetischen und Ernährungsfaktoren ab (Kulpys et al., 2006). Der geringste Milchzuckergehalt wurde in der Kontrollgruppe ermittelt (um 0,10–0,15 Prozentpunkte geringer im Vergleich mit den Versuchsgruppen, P>0,01). Höhere Milchzuckergehalte stehen u. E. im Zusammenhang mit Hefeeinsatz. Anzahl somatischer Zellen und Harnstoffgehalte unterlagen über den gesamten Prüfzeitraum ebenfalls Veränderungen (Tabelle 5). Tabelle 5. SCC und Harnstoffgehalt der Milch Anzahl somatischer Zellen, taus./ml. 10. April 12. Mai 10. Juni Mittel ±, im Vergleich mit der Kontrolle Kontrolle 628±292 449±605 652±385 576±79 - Versuchsgruppe I 366±225 243±105 142±30 250±80 - 326 Versuchsgruppe II 228±96 330±178 226±63 261±42 - 315 Versuchsgruppe III 223±182 281±213 910±744 471±270 105 Gruppe Harnstoffgehalt, mg % Kontrolle 31±3 26±1 17±1 25±5 - Versuchsgruppe I 24±5 31±3 18±3 24±5 -1 Versuchsgruppe II 29±3 33±2 15±2 26±7 1 Versuchsgruppe III 31±5 28±6 17±4 25±5 - Wie aus der Tabelle 5 ersichtlich ist, wurde die höchste Anzahl somatischer Zellen in der Milch der Kontrollkühe und der Kühe der Versuchsgruppe III ermittelt. Milch dieser Kühe entspricht nicht dem Qualitätsstandard für Milch. SCC der Versuchsgruppen I und II lag in Normalbereich. Über den gesamten Prüfzeitraum wurden in den Versuchsgruppe I und II keine Mastitisproblemen dokumentiert, in der Kontrolle dagegen einige Fälle festgestellt. Höhere SCC wurden lediglich in der Versuchsgruppe III festgestellt, welche jedoch im Bereich des Normalen lagen (Juozaitienė et al., 2004). Die Versuchsergebnisse bestätigen somit positive Wirkung getrockneter Bierhefe auf Resistenz gegen Eutererkrankungen durch Reduzierung von SCC. Im Versuchszeitraum lagen Harnstoffgehalte im Normalbereich und unterlagen lediglich geringen Schwankungen. Harnstoffkonzentration variiert im Normalfall zwischen 15 (20) und 30 mg % und ist eine Indiz für Rationsqualität und Pansenaktivität (Schwarz et al., 2001). Ihren Tiefpunkt erreichte Harnstoffkonzentration im Juni. Vergleich der Wirtschaftlichkeitskennziffer zwischen den Gruppen ist der Tabelle 6 zu entnehmen. Seite 222 7. BOKU-Symposium Tierernährung Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Wie aus der Tabelle 6 ersichtlich ist, brachte die Versuchsgruppe I (Frühlaktation) am meisten Einkommen, die Versuchsgruppe III (mittlere bzw. Spätlaktation) dagegen am wenigsten. Ökonomischer Nutzen getrockneter Bierhefe ist in allen Gruppen nicht zu leugnen (Kosten des Bierhefeeinsatzes betrugen in der Versuchsgruppe I 0,58 Lt pro Kuh und Tag, in der Gruppe II – 0,46 Lt, in der Gruppe III – 0,23 Lt). Tabelle 6. Tägliches Einkommen für Milch Täglicher Milchertrag pro Kuh, kg Einkommen, Lt (0,85 Lt/kg) Versuchsgruppe I 29 Versuchsgruppe II Versuchsgruppe III Gruppe ±, im Vergleich mit der Kontrolle %, im Vergleich mit der Kontrolle 24,65 5,95 132 23 19,55 0,85 105 15 12,75 0,85 107 (0,85 Lt/kg) Schlussfolgerungen 1. Getrocknete Bierhefe von „Ekoproduktas“ hat positiven Einfluss auf Gesundheit und Milchleistung von Kühen sowie auf Fett-, Eiweiß- und Milchzuckergehalte der Milch über die gesamte Laktation. 2. Getrocknete Bierhefe reduziert Anzahl somatischer Zellen und trägt damit zur Vorbeuge der Eutererkrankungen bei. 3. Getrocknete Bierhefe ist ein in zootechnischer und ökonomischer Hinsicht effektiver Futterzusatz. Literatur Aniulis A., Japertas S., Klimaitė J., Aniulienė A. Prevalence and treatment of latent mastitis in cows. Medycyna Veterynaryjna PL ISSN 0025-8682003, 2003, vol. 59 (10), P. 872-875. Gombos S., Tossenberger J. and Szabo C. Effect of probiotics and yeast culture on the performance of pigs and dairy cows. Krmiva 37, 1995. P. 13-17. Jeroch H.; Drochner W.; Simon O. Ernährung landwirtschaftlichen Nutztiere. Verlag Ulmer. Stuttgart. 2008. S. 61-64. Juozaitienė V., Kerzienė S. Biometrija ir kompiuterinė duomenų analizė. Kaunas, LVA leidybos centras. 2001. 115 p. Juozaitienė V., Juozaitis A., Žakas A. Relationship of somatic cell count with milk yield and composition in the herds of Blackand-White cattle. Medycyna Veterynaryjna PL ISSN 0025-8682003, 2004, vol. 60 (7). P. 701-704. Kulpys J., Stankevičius R., Jerešiūnas A., Pikelis V. Zum Einfluss des Pansen-Modifikators S.cerevisiae1026 auf biochemische und hygienische Milchparameter. BOKU-Symposium TIERERNÄHRUNG. Qualitätsmindernde Futterinhaltsstoffe: Bedeutung Vermeidung - Kontrolle. 02. November 2006, Wien. S.135-143. Maierhofer R. und Obermaier A. Einsatz von Hefen in der Fütterung von Milchkūhen. Gruberlnfo 02-2003. S. 32-41. Pikelis V., Kulpys J., Paulauskas E., Stankevičius R. Mielių „Saccharomyces cerevisiae1026“ priedo poveikio melžiamoms karvėms tyrimas. Veterinarija ir zootechnika. ISSN 1392-2130. Kaunas. 2006. T. 35(57). P. 77-84. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 223 Industrielle Nebenprodukte / Industrial By-Products Scheidemann Ch., Steingass H. Einsatz von lebenden Hefen in der Milchviehfutterung. Proceedings of the 14th Conference on Nutrition of Domestic Animal „Zdravec - Erjavec Days“, Radenci, Slovėnija. 2005. P. 72-84. Schwarz F. J. and Ettle T. Effect of S. cerevisiae (Levucell®) on feed intake and milk yield of high yielding dairy cows. Experimental Report Technische Universitat München, 2001. P. 68-71. Švirmickas G. Pašarų cheminė sudėtis ir maistingumas // Gyvulininkystės žinynas. Kaunas: „Aušra“. 2007. P. 588-589. Wallace R. J. The mode of action of yeast culture in modifying rumen fermentation. In: Biotechnology in Feed Industry. Alltech Inc., Univ. Press. Nottingham. United Kingdom. 1996. P. 217-232. Autorenanschrift Dr. Jurgis Kulpys Abteilung für Tierernährung Litauische Veterinärmedizinische Akademie Tilzes g. 18, LT-47181 Kaunas, Litauen Tel +370 37 363408 E-Mail: [email protected] Seite 224 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Effects of supplemental trace mineral (Fe, Cu, Mn, Zn) source and dose on growth performance in weaned piglets. P. Schlegel1, L. der Kinderen2, A. Mul2, M. Ubbink-Blanksma2, S. Durosoy1 and E. Bruininx2,3 1 Pancosma S.A., Voie des Traz 6, 1218 Le Grand-Saconnex, Switzerland 2 CCL Research, N.C.B.-Laan 52, 5462 GE Veghel, The Netherlands 3 Animal Nutrition Group, Wageningen University, Marijkeweg 40, 6709 PG Wageningen, The Netherlands Introduction Trace minerals, such as copper, iron, manganese and zinc are essential for the piglet growth development as those are highly involved in metabolic functions. These minerals are generally supplemented to the diet since native concentration of available mineral in commonly used feedstuffs is usually insufficient to fulfill animal requirements. Mateos et al. (2005) investigated the commonly practiced trace mineral supplementation on the Iberian Peninsula and concluded that dietary concentrations are generally beyond official recommendations. To encourage reasonable trace mineral safety margins (difference between applied and official recommended dietary concentrations) without harming piglet performance, the partial or total replacement of inorganic by organic trace mineral sources expected to be superior in their availability (eg. Close, 2003; Mullan et al. 2005) were suggested. Organic trace minerals, based on hydrolyzed protein have demonstrated a potential in reducing dietary trace mineral supplementation in piglets, when compared with traditional levels of inorganic sources without harming animal performance. (Schiavon et al. 2000; Close, 2003; Creech et al., 2004). Glycinates, depending on the mineral, have demonstrated an increased apparent mineral absorbability in weaned piglets when directly compared with hydrolyzed soy based chelates (Ettle et al. 2008; Männer et al. 2008) indicating an additional potential for limiting trace mineral safety margins and/or limiting risk of trace mineral deficiencies on individuals within a herd. The efficiency in using dietary trace minerals is regulated by homeostatic control which is highly dependent from the animal’s trace mineral status (eg. Windisch and Ettle, 2008). Considering this, the present study was set up to limit initial trace mineral status of the weaning piglets to represent the critical individuals within a herd. The aim of the present study was to investigate the effects of two trace mineral sources (Cu, Fe, Mn and Zn as soy based chelates or glycinates, respectively) supplemented at two levels (75% and 50% of common practice when using inorganic sources) on weaning piglet performance, when piglets where limited in their initial trace mineral status. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 225 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Material and method 342 twenty-six day old piglets (8.6±0.4 kg BW) were allocated to 36 pens in 6 rooms on BW, gender and litter. As experimental predisposition, piglets had no access to creep feed and were injected with only half (0.5 ml) of the normal Fe-dextran dose on day 3 of age. These predispositions were defined to artificially simulate non-optimal starting conditions in regards to trace status. Four dietary treatments were arranged with a 2*2 factorial design. It was arbitrarily assumed that soy based chelates would be 25% more available than inorganic sources, inducing a corresponding reduced supplementation when referring to commonly practiced supplementations to piglet diets Mateos et al. (2005). Therefore, Cu, Fe, Mn and Zn were either supplemented at 20, 80, 40 and 80 mg/kg respectively (~75% of common practice) or at 15, 60, 30 and 60 mg/kg, respectively (~50% of common practice). Mineral sources were either hydrolyzed soy based chelates of amino acids (Soy, B-TRAXIM® TEC, Pancosma S.A., Switzerland) or crystalline glycinates (Gly, B-TRAXIM® 2C, Pancosma S.A., Switzerland). Piglets were fed ad-libitum the barley-based prestarter (day 0-9) and starter (day 10-35) experimental diets and had free access to water via nipples in the wet-and-dry feeders. Piglets were weighed individually on days 0, 9 and 35. Feed intake (FI) was recorded per pen from day 0-9 and 10-35. Faecal scoring (firm, soft, watery/diarrhea) was evaluated per pen. Blood was taken on weaning day of two piglets per pen for 4 pens per treatment. Data were submitted to an analysis of variance followed by a comparison of means using Genstat v 8.2. The pen was the experimental unit. Results and discussion Average initial blood Hb was 7.28 g/dl (-30%) and plasma Cu, Fe and Zn were 2.01 (+5%), 0.75 (30%) and 1.40 (+25%) mg/dl, respectively. Values in brackets represent the relative difference with reference values from the Dutch veterinary service. This study design, similar to the one used by Gentry et al. (1997) or Schlegel et al. (2007) regarding pre-weaning dispositions, permitted therefore to limit piglet’s Fe status, Cu status to a certain extent, but not Zn status. Gérard (2000) reported that average piglet Hb on French farms is 10.6 g/dl but vary greatly between 3.0 and 14.6 g/dl. The initial trace mineral status of the values from the present study can therefore be considered as non-optimal, but representative. The piglet growth performance (Table 1) was relatively poor compared to the average values from the research farm. Apparently the pre-dispositions taken to limit initial mineral status also influenced postweaning performance. There was no source*level interaction (P>0.05), except for tendencies (P<0.10) in BW on d9 and 35 where Soy-50 BW was lower by 2.3% on d9 and lower by 9.6% and 10.1% on d35 when compared to Gly-50 and Gly-75, respectively, The lower supplementation level increased overall FCR and final BW heterogeneity (P<0.05). Overall BWG, FI and FCR were improved (P<0.05) by 12.9%, 8.7% and 4.1% respectively with Gly compared to Soy. Faecal consistency scores were not affected by dietary treatments (data not shown). Seite 226 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Table 1: Growth performance Source Soy Gly BW d0 (kg) 8,6 8,6 St dev. BW d0 0,42 BW d9 (kg) 8,7 Lsd Level Lsd 75 50 0,03 8,6 8,6 0,03 0,41 0,035 0,42 0,41 0,035 8,8 0,18 8,8 8,7 0,18 x y St dev. BW d9 0,70 0,73 0,092 0,66 0,78 0,092 BW d35 (kg) 16,8b 17,8a 0,78 17,6 17,0 0,78 St dev. BW d35 2,99 2,77 0,435 2,51x 3,25y 0,435 FI d0-35 (g/d) 390b 424a 28,5 412 402 28,5 BWG d0-35 (g/d) 233b 263a 22,2 257 FCR d0-35 b 1,69 a 1,62 0,068 240 x 1,62 22,2 y 1,70 0,068 Conclusion The present data suggest that piglets presenting limited iron and copper storage at weaning are subject for low growth performance. Piglet’s weight heterogeneity was higher and growth performance lower when the diet was supplemented with half of commonly added inorganic levels as organic form compared to 75%. Feeding trace minerals as crystalline glycinates instead of soy based chelates were beneficial for growth performance under the given conditions. Acknowledgments We wish to thank the staff at Laverdonk Research farm and Hans Zwolschen DVM for their assistance during this study. Literature Close W.H. (2003). Trace mineral nutrition in pigs: working within the new recommendations. Feed Compounder, 14-18. Creech B.L., Spears J.W., Flowers W.L., Hill G.M., Lloyd K.E., Armstrong T.A., and Engle T.E. (2004). Effect of dietary trace mineral concentration and source (inorganic vs. chelated) on performance, mineral status, and fecal mineral excretion in pigs from weaning through finishing. J. Anim. Sci. 82, 2140-2147. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 227 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Ettle T., Schlegel P. and Roth F.X. (2008). Investigations on iron bioavailability of different sources and supply levels in piglets. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 92, 35-43. Gentry J.L., Swinkels J.W.G.M., Lindemann M.D. and Schrama J.W. (1997). Effect of hemoglobin and immunization status on energy metabolism of weanling pigs. Journal of Animal Science 75, 1032 – 1040. Gérard C. (2000). Les besoin de fer revus à la hausse. Réussir Porc, n°58, 26-27. Mahan D. (2005). Feeding sow and piglet to achieve maximum antioxidant and immunity protection. In: Re-defining Mineral Nutrition, J.A. Taylor-Pickard and L.A. Tucker (Eds). Nottingham University Press, Nottingham, United Kingdom. 63-73. Männer K., Simon O. and Schlegel P. (2008). Bioavailability of trace minerals sources in swine. In: Trace elements in animal production systems, P. Schlegel, S. Durosoy and A.W. Jongbloed (Eds), Wageningen Academic Publishers, Wageningen, The Netherlands. 177-186. Mateos G.G., Lazaro R., Astillero J.R. and Perrez Serano M. (2005). Trace Minerals: What text books don’t tell you. In: J.A. Redefining Mineral Nutrition. J. A. Taylor-Pickard and L.A. Tucker (Eds), Nottingham University Press, Nottingham, United Kingdom. 21-61. Mullan B.P., Hernandez A., D’Souza D.N. and Pluske J.R. (2005). Modern pig nutrition for performance: minerals, metabolism and the environment. In: Nutritional Biotechnology in the Feed and Food Industries, Proceedings of Alltech’s 21st Annual Symposium, T.P. Lyons and K.A. Jacques, (Eds) Nottingham University Press, United Kingdom. 185 - 200. Schiavon S., Bailoni L., Ramanzin M., Vincenzi R., Simonetto A., and Bittante G. (2000). Effect of proteinate or sulphate mineral sources on trace elements in blood and liver of piglets. Anim. Sci. 71, 131-139. Schlegel P., Durosoy S. and Dupas M. (2007). Iron status evolution of weaned piglets either fed iron sulfate or iron glycinate. In 6. BOKU Symposium Tierernährung, C. Plitzner, M. Kraft and W. Windisch (Eds), University of Natural Resources and Applied Life Sciences, Vienna, Austria. 273 - 278. Windisch W. and Ettle T. (2008). Limitations and possibilities for progress in defining trace mineral requirements of livestock. In Trace elements in animal production systems, P. Schlegel, S. Durosoy and A.W. Jongbloed (Eds), Wageningen Academic Publishers, Wageningen, The Netherlands. 177 – 186. Autorenanschrift (neue Adresse) Patrick Schlegel Agroscope Liebefeld-Posieux Research Station ALP Tioleyre 4 1725 Posieux, Switzerland e-Mail: [email protected] Seite 228 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - AGRANA Bioethanol GmbH, Industriegelände Pischelsdorf, A-3435 Pischelsdorf 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 229 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Effects of supplemental trace mineral (Zn, Cu, Mn, Fe) source and dose on the status and performances of sows Stéphane DUROSOY1 and Boguslaw FUCHS2 1 Pancosma S.A., Voie des Traz 6, 1218 Le Grand-Saconnex, Suisse 2 Wroclaw University of Environmental and Life Science, Wroclaw, Pologne Introduction Some trace minerals are both essential for the nutrition of pigs, but also potentially polluants for the environment when they are in excessive amounts in animal feces. The concentrations of trace minerals in animal excreta can be reduced with the decrease of dietary levels and with the utilisation of supplemental sources with high retention. Organic forms of trace elements have been mostly tested in piglets and in growing pigs. Glycine chelates in crystalline form have higher bioavailability than chelates of amino acids (Ettle et al. 2008; Männer et al. 2008). In sows, methodological constraints challenge the measurement of digestibilities of trace minerals (Jongbloed et al., 2004). The objective of this trial was to measure the effect of the sources and of the doses of trace elements (Zn, Cu, Fe, Mn) in gestation and lactation diets of sows on their mineral status and on their performances. Material and methods 210 sows of polish breeds Large White X Landrace were splitted in three experimental groups after insemination, according to their initial weight (211 ± 2 kg) and the number of piglets of previous litters (10,8 ± 0,2). After 30 days, non gestating sows of each treatment (15 ± 1) were removed from the study. At 90 days of gestation. 10 sows were selected in each experimental group, based on their weight and their parity. Until 84 days of gestation, each sow was daily fed 2,5 kg of the gestation diet. Between 85 and 90 days of gestation, the daily feed intake was increased to 3,5 kg, then switched to the lactation diet until parturition. After farrowing, the feed intake was increased by 0,5 kg per day during one week. From day 8 to day 19 post-partum, sows were fed ad libitum, with restriction of feeds two days before weaning at 21 days of lactation. Seite 230 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements All diets were based on wheat, barley, triticale and soybean meal. Nutritional values were: 11,5 MJ ME; 13,5 % CP; 0,66 % Lys and 13 MJ ME; 17,2 % CP; 0,78 % Lys for gestation and lactation diets, respectively. The three formulas of gestation and lactation diets differed in sources and doses of trace minerals. Inorganic forms were either sulphate (Cu, Fe), or oxide (Zn), or a combination of both (Mn). Organic forms were either chelates of amino acids, based from hydrolysed soya protein, or glycine chelates in crystalline forms (B-TRAXIM®2C, Pancosma). The three experimental diets were : «Control », formulated with inorganic sources; « Chelate », containing chelates of amino acids ; « Glycinate » containing glycine chelates. Details of formulation with trace minerals are presented in table 1. 1) Table 1 –Supplementation with trace minerals Gestation diet [mg/kg] Inorganic Chelates Lactation diet 2) Inorganic Chelates 2) Cu 11 8 (50%) 15 8 (50%) Fe 53 75 (0%) 73 51 (0%) Mn 60 50 (50%) 80 50 (50%) 83 83 (50%) 110 80 (50%) Zn 1) 2) Chelates either of amino acids or of glycine Values between brackets : percentage in organic form Analysed values in trace elements were conform to calculated levels. Feed consumption during lactation has been measured. Sows were weighted before farrowing and after weaning. Sow blood and milk were sampled for analysis at 110 days of gestation and at 19 days of lactation. Piglet blood was sampled at 21 days of age. Pregnancy rate has been evaluated after the first insemination following the study. Litter size and individual weights of piglets were measured at birth and at weaning. All collected data were run through an analysis of variance and differences between treatment means were tested using Duncan test. Results and discussion Sow performance and piglet weights are presented in table 2. Feed consumptions during lactation were significantly superior in groups « chelate » and « glycinate », resulting with numerically inferior body weight loss compared to the control. During gestation, there were no treatment differences in sow weight gains (data not shown). Scarce research exists on trace mineral formulation in sow diets. No published study reported any effect of trace minerals sources and doses on feed consumption of lactating sows. Quiniou et al (1998) reviewed that a high number of factors may influence feed intake of sows. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 231 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Table 2 – Results of performances Control Chelate Glycinate 6,05 a 6,95 b 7,05 b 42 37 33 Pregnancy rate after 1st insemination (%) 70 a 80 b 90 b Live born piglets/litter 11,0 11,3 11,5 Dead born piglets/litter 0,4 0,4 0,0 Piglet weight at 2 days of age (kg) 1,47 a 1,55 b 1,62 b Piglet weight <1,2 kg at 2 days (%) 11,82 a 9,73 b 8,69 b 235 260 267 Feed consumption during lactation (kg/day) Body weight loss in lactation (kg/sow) Piglet weight gain 2-21 days (g/d) a,b : p<0,05 Pregnancy rate after the first insemination was significantly improved in sows fed two forms of chelates, with a higher result in the “glycinate” group. When inorganic trace minerals were substituted by organic sources, Spears et al (1995) had measured an improvement of reproductive performances of sows with a decrease of rebreeding interval at the second breeding. There was a trend for a higher number of live born piglets and significantly less light piglets (<1,2 kg BW) when sows received both chelates. Increased number of live born piglets has been also observed by Payne et al (2006) when 100 ppm of zinc sulphate was replaced by an organic source. The supply of trace elements in chelated forms based on hydrolysed soya protein increased the number of (total and live) born piglets from multiparous sows vs the inorganic sources, averaged from two supplementation levels (Peters and Mahan, 2008). Piglet weights at 2 days of age were more elevated in groups “chelate” and “glycinate”, the latter showing the highest result. Blood analysis of sows and piglets are presented in graph 1 and graph 2, respectively, and milk analysis are presented in table 3. Trace mineral concentrations and alkaline phosphatase activity in blood of sows and piglets were not affected by dietary treatments (data not shown). Sows fed two forms of chelates had higher protein and albumin contents in serum, these differences being numerically or statistically different. In piglet blood, only the group “glycinate” had superior protein and albumin contents. Urea levels of sow serum were higher in groups of chelates vs control, but these differences disappeared in piglets blood. There is no evidence from literature on the effects of trace minerals supplied at low levels on protein metabolism in the sow and on consequences for born piglets. Protein and albumin composition of sow milk were affected, with a significant increase in the group “Glycinate”. The highest result of milk protein is superior to standard values (Etienne et al, 2000; Daza et al, 2004). Milk richer in protein may partly explain the higher weights of piglets in the “Glycinate” group. Seite 232 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements b a a a b b a b b a,b : p<0,05 Graph 1 – Protein and albumin (g/l) and urea (mmol/l) contents in serum of gestating (G) and lactating (L) sows b a a b a a a,b : p<0,05 Graph 2 – Protein and albumin (g/l) and urea (mmol/l) contents in serum of piglets 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 233 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Table 3 –Sow milk analysis g/l Control Chelate Glycinate Protein 22.6 a 24.3 a 33.2 b Albumin 3.3 a 4.7 a 6.8 b a,b : p<0,05 Conclusions Aging sows gradually deplete their mineral reserves (Mahan and Newton, 1995). This study showed that reduced supplementation levels of zinc and copper, partly replaced by organic sources, did not degrade sow performances. Pregnancy rate and piglet weights at 2 days were even improved with chelated forms, specially with crystalline chelates of glycine. Protein and albumin contents of sow blood and milk were significantly affected by treatments. There results suggest further research on the effects of trace mineral formulation (doses and sources) on protein metabolism and on reproductive performances of older and highly prolific sows on a minimum number of parities. References Daza A., Riopérez J. and C. Centeno C. 2004. Changes in the composition of sows’ milk between days 5 to 26 of lactation. Span. J. Agric. Res. 2 (3) 333-336 Etienne M., Legault C., Dourmad J-Y., Noblet J. 2000. Production laitière de la truie : Estimation, composition, facteurs de variation et évolution. Journées Rech. Porcine en France, 32, 253-264. Ettle T., Schlegel P. and Roth F.X., 2008. Investigations on iron bioavailability of different sources and supply levels in piglets. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 92, 35-43. Jongbloed A.W., van Diepen J.Th.M., Kemme P.A. and Broz J. 2004. Efficacy of microbial phytase on mineral digestibility in diets for gestating and lactating sows. Liv. Prod. Sci. 91, 143-155 Mahan D.C. and Newton E.A. 1995. Effect of initial breeding weight on macro and micro mineral composition over a three-parity period using a high-producing sow genotype. J. Anim. Sci. 73:151-158 Männer K., Simon O. and Schlegel P., 2008. Bioavailability of trace minerals sources in swine. In: P. Schlegel, S. Durosoy and A. W. Jongbloed (Eds), Trace elements in animal production systems, 177-186. Wageningen Academic Publishers, Wageningen, The Netherlands. Payne RL, Bidner D, Fakler TM and Southern LL. 2006. Growth and intestinal morphology of pigs from sows fed two zinc sources during gestation and lactation. Journ. Anim Sci. 84:2141- 2149. Peters J.C and Mahan D.C. 2008. Effects of dietary organic and inorganic trace mineral levels on sow reproductive performances and daily mineral intakes over six parities. Journ. Anim Sci. 86:2247-2260 Quiniou N, Dourmad J-Y. and Noblet J. 1998. Facteurs de variation de l’appétit des truies en lactation INRA Prod. Anim. 11 (3) 247-250 Spears J.W., Flowers W.L., van Heugten E. and Kegley E.B. 1995. Effect of metal proteinates on baby pig growth and survival and sow reproductive performance. North Carolina State University Annual Report. Autorenanschrift Stéphane Durosoy Pancosma Voie des Traz 6 CH-1218 Le Grand Saconnex-Geneva [email protected] Seite 234 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsosring - Pancosma S.A. , Voie-des-Traz 6, CH-1218 Le Grand-Saconnex 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 235 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Selenhefe (Sel-Plex®) in der Sauenfütterung - Auswirkungen auf Wurfgröße und Produktivität in der Praxis (Selenium yeast Sel-Plex in sow feeding – impact on litter size and productivity under practical conditions) Josef Bunge1), Dr. Wolfgang Sommer1) and Dr. Wilke Griep2) 1) Landwirtschaftskammer Nordrhein-Westfalen, Nevinghoff 40, 48147 Münster; 2) Alltech (Deutschland) GmbH, Mühlenweg 143, 22844 Norderstedt Abstract A field study with 948 sows (Genetic: DanZucht (DZ), local crossbred sow Westhybrid (Hyb), Hermitage (He)) was investigated to measure the impact of feeding selenium yeast on productivity. The sows were located on 4 farms in a high pig density area in Westfalia (near Münster/Germany). 1165 litters of a six month production period (Feb-08 till Jul-08) could be allocated to a complete treatment (sows fed with selenium from selenium yeast - Sel-Plex®, Saccharomyces cerevisiae CNCM I-3060/Alltech: 0,2 mg Se/kg pregnancy feed and 0,3 mg Se/kg lactation feed). These litters of the treatment period were compared with 1150 litters of the same season/period of the previous year (Feb-07 till Jul-07). All farms showed an increased litter size of alive born piglets of + 0,58 in the treatment period compared with previous year period (13,08 alive born piglets/litter vs 12,5 alive born piglets/litter). During treatment phase in average + 0,39 piglets/litter could be weaned more compared to previous year. The results indicate that using organic selenium (selenium yeast) instead of inorganic selenium (sodium selenite) was able to improve the productivity. Also sow unit on a high level of productivity are able to improve the performance. The measure is economically profitable also if it is taken in to account a genetic progress of + 0,25 piglets/sow and year. Einleitung Die Zufuhr des Spurenelementes Selen in Form der Selenhefe kann die Versorgung der Sauen und der Ferkel gegenüber der üblichen anorganischen Selen-Supplementierung spürbar verbessern. Das Antioxidans- und Immunsystem profitieren davon. Seite 236 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements In einem Praxistest sollte geprüft werden, ob eine erwartete positive Leistungsentwicklung eintritt und diese plausibel zu den vorliegenden Erkenntnissen passt. Eine anschließende betriebswirtschaftliche Kalkulation diente der praxisorientierten Gesamtbewertung. Literatur Das Antioxidans- und Immunsystem sind die wesentlichen Möglichkeiten des Tieres, oxidativen Stress und die Wirkungen pathogener Keime abzuwehren. Abwehrsysteme sind u. a. auch sehr stark von einer optimalen Versorgung mit Spurenelementen abhängig (Surai, 2006, Ulbrich et al., 2004). Neuere Studien von Mahan und Peters (2004) konnten den Einfluss der organischen Spurenelemente auf die Produktivität bei einer relativ langfristigen Betrachtung nachweisen (vgl. Mahan und Peters, 2006). Bis zu ein Ferkel mehr wurde geboren, wenn eine „Optimal“-Variante mit einer „praxis-üblichen“ Variante verglichen wurde. Selen in selenhaltigen Aminosäuren, wie es in einer natürlichen Form als Selenhefe in der Fütterung zur Verfügung steht (erste EU-Zulassung ab Dezember 2006), ermöglicht den Selenversorgungsstatus der Sauen und Ferkel deutlich zu verbessern (Mahan und Kim, 1996, Mahan, 2000, Mahan und Peters, 2004, Close und Cole, 2003, Close et al., 2008). Das Ferkel wird mit einem höheren Gehalt an Selenoproteinen geboren (Mahan und Kim, 1996). Durch den stärkeren Transfer von Selenoaminosäuren in das Milchprotein kann der Selengehalt im Kolostrum und in der Sauenmilch erhöht werden (Mahan, 2000, Mahan und Peters, 2004, Bertin und Taylor-Pickard, 2007). Quesnel et al., 2008, messen in ihren Untersuchungen in der INRA, dass das Kolostrum einen um 33 % und die Milch einen um 89 % höheren Selengehalt aufweist. Surai, 2006, beschreibt die selenhaltigen Enzymsysteme und Regelsysteme. In Phasen mit erhöhtem oxidativen Stress können die Selen-Körperreserven mobilisiert werden und die Selenoproteine fließen in die verstärkte Bildung der enzymatischen Antioxidantien ein. Die mittlerweile 25 bekannten Enzymsysteme, die Selen als essentiellen Bestandteil enthalten, können optimal genutzt werden. Intensive Beanspruchung des Immunsystems und hoher oxidativer Stress können von den Tieren leichter bewältigt werden. Erkrankungen und Verluste sind weniger häufig die Folge der Belastungen. Verminderte Verluste sind für eine wirtschaftliche Produktion von größter Bedeutung. Lampe et al 2005a und b zeigen, dass in der Ferkel-Erzeugung und der Ferkelaufzucht die Verluste um etwa 2 %Pkte bzw. um 50 % gesenkt werden konnten. Material und Methoden Die Landwirtschaftskammer NRW hat in Zusammenarbeit mit der Futtereinkaufsgemeinschaft Warendorf unter den in der Praxis zur Verfügung stehenden Möglichkeiten ein SelenFütterungskonzept für Sauen durchgeführt. Vier Betriebe mit zusammen 948 Sauen von drei genetischen Herkünften (2 x DanZucht = DZ, West-Hybrid =HYB, Hermitage = HE) haben immer das gleiche Futter der einen Futtereinkaufsgemeinschaft bezogen (vgl. Tabelle 1). Für über acht Monate wurde Selen (0,2 mg / kg im Trächtigkeitsfutter und 0,3 mg / kg im Laktationsfutter) aus Selenhefe (= organische Form; Produkt: Sel-Plex®, hergestellt aus Saccharomyces cerevisiae - Stamm CNCM I- 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 237 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements 3060 von Alltech) anstatt der Selensupplementierung aus anorganischen Quellen für das Futter verwendet. Es wurden die Produktionsdaten aus Sauenplanerdaten verwendet, um Vergleiche zur saisonal gleichen 6-Monats-Phase ein Jahr vorher, der Vorjahresphase und zur Vorphase (Auswertung eines vollständigen Jahres vor der Testfütterung) durchzuführen. Die Behandlungsphase umfasste 6 Monate (Februar 2008 bis Juli 2008). Würfe, die der Behandlungsphase (6 Monate) zugeordnet wurden, sind Leistungen von Sauen, die während der gesamten Tragezeit und Laktation Selen aus Selenhefe erhalten haben. Tabelle 1: Produktionskennzahlen der Versuchsbetriebe Betrieb: DZ-1 DZ-2 Hyb HE Gesamt Genetik Dan Zucht Dan Zucht WestHybrid Hermitage gew. Mittel Anzahl Sauen Produktivität 343 165 179 261 948 abges. Ferkel / S + J 27,5 30,6 23,2 23,8 26,20 412 187 243 308 1150 434 214 219 298 1165 Würfe Vorjahresphase (Feb.-Juli 2007) Würfe Versuchsphase (Feb.-Juli 2008) Seite 238 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Ergebnisse und Diskussion Es wurden in vier Betrieben 1165 Würfe der Behandlungsphase zugeordnet. In Tabelle 2 sind die Mittelwerte der Produktionskennzahlen für die beiden zu vergleichenden Phasen aufgeführt. Im Mittel wurden 13,08 Ferkel je Wurf lebend geboren. Die Verluste bis zum Absetzen waren durchschnittlich 1,59 tot geborene Ferkel und 1,88 Saugferkelverluste je Wurf. Bei 11,2 abgesetzten Ferkel je Wurf hat sich die Sauenproduktivität gegenüber der zeitgleichen 6-Monatsphase des Vorjahres um + 0,39 Ferkel bis zum Absetzen der Würfe verbessert. Die positiven Veränderungen ergaben sich vor allem durch mehr geborene Ferkel (+ 0,46 Ferkel) und weniger tot geborene Ferkel (- 0,13 Ferkel). Die Verluste in der Säugezeit nahmen in der Beobachtungsphase gegenüber der zeitgleichen 6Monatsphase des Vorjahres zu (+ 0,19 Ferkel). Die Leistungen entwickeln sich betrieblich individuell, weil Stressfaktoren und Beanspruchung der Immunität und des Antioxidanssystems individuell sind. In einem Vergleich mit einer ein Jahr umfassenden Phase vor dem Test sind die gleichen Effekte erkennbar, die im Gesamtsaldo für die 948 Sauen im Test eine Produktivitätsverbesserung um + 0,54 abgesetzte Ferkel ausmachte. Alle vier Betriebe zeigten positive Entwicklungen in der Beobachtungsphase hinsichtlich der Wurfgröße bei der Geburt (+ 0,56 Ferkel / Wurf) und in den Totgeburten (- 0,13 Ferkel / Wurf). Die wiederholt beobachteten Verbesserungen passen in der Richtung plausibel mit den Literaturquellen (Mahan und Peters, 2004: Reduktion der Rate tot geborener Ferkel um – 70 %; Pineda et al., 2004: + 1,07 gesamt geb. Ferkel; Lampe et al., 2005a: + 0,22 abg. Ferkel; TaylorPickard und Zawadzky, 2004: + 4 % mehr leb. geb. Ferkel; Shipp et al., 2008: 0,36 weniger Saugferkelverluste / Wurf = - 2,7 %-Pkte) überein. Nach Fortier und Matte, 2006, kann der Selen-Status der Sau mit Selenhefe verbessert werden, was zu einem verbesserten Selen-Transfer zum Embryo führt. Insbesondere die mit „hyperprolific“ charakterisierten modernen Sauen benötigen ausreichend Selen aus organischer Quelle, um dann eine exzellente Embryonalentwicklung (Gewicht, Länge, DNA je Embryo) in der Tragezeit auszubilden. Dies Zusammenhänge könnten eine Erklärung für die beobachteten Effekte in der Wurfgröße sein. Die betriebswirtschaftliche Erfolgsrechnung ergibt, dass diese Fütterungsstrategie profitabel ist, da dem Mehraufwand für den Zusatzstoff Selenhefe mit grob 3 € je Sau und Jahr der deutlich größere Nutzen durch die höhere Produktivität (2,4 Würfe x + 0,39 Ferkel = über 0,9 Ferkel) gegenüberzustellen ist. Die Maßnahme ist auch unter kalkulatorischer Einbeziehung eines Zuchtfortschritts (z. B. ≈ + 0,25 Ferkel / Sau und Jahr) wirtschaftlich profitabel. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 239 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Tabelle 2: Betrieb: Biologische Leistungen in den vier Versuchsbetrieben bei Einsatz von organischem Selen im Futter für tragende und laktierende Sauen DZ-1 DZ-2 Hyb HE Gesamt Vorjahresphase: [Ferkel / Wurf] oder [%] (Feb - Juli / 2007) gesamt geb. 14,45 16,66 12,30 13,52 14,21 tot geb. (%) 12,4 13,3 10,8 11,4 12,0 lebend geb. 12,66 14,45 10,97 11,98 12,50 Saugferkelverluste (%) 10,5 14,3 8,5 21,0 13,5 abgesetzt 11,33 12,39 10,04 9,47 10,81 Versuchsphase: [Ferkel / Wurf] oder [%] (Feb - Juli / 2008) gesamt geb. 14,82 16,95 12,75 14,23 14,67 tot geb. (%) 11,5 11,6 9,3 10,3 10,8 lebend geb. 13,12 14,98 11,57 12,77 13,08 Saugferkelverluste (%) 12,6 14,7 14,5 16,8 14,4 abgesetzt 11,47 12,78 9,89 10,62 11,20 Seite 240 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Schlussfolgerung In vier Betrieben mit unterschiedlichen Bedingungen und drei verschiedenen Herkünften konnten positive Effekte in der Wurfgröße und der Anzahl tot geborener Ferkel beobachtet werden. Ökonomisch ist der Vorteil der mehr abgesetzten Ferkel profitabel. Noch zu prüfen ist auch, ob die verbesserte Selenversorgung der Ferkel in der weiteren Ferkelaufzucht Vorteile bringt. Zusammenfassung In einer Feldstudie mit 948 Sauen in vier Betrieben (Genetik: 2 x DanZucht, Westhybrid, Hermitage) wurde der Einfluss einer natürlichen Selenhefe-Fütterung auf die Produktivität der Sauenherden beobachtet. In 1165 Würfen (6 Monate Produktion) konnte in allen beteiligten Betrieben positive Effekte in der Wurfgröße und der Anzahl tot geborener Ferkel beobachtet werden (+0,58 lebend geborene Ferkel / Wurf). Ökonomisch war in dieser Studie der Vorteil profitabel. Literaturverzeichnis Bertin, G. und Taylor-Pickard, J., 2007, in: Proceedings of Alltech’s 23nd Annual Symposium, edited by T. P. Lyons, K. A. Jacques and J. M. Hower, Nottingham University Press Close, SURAI und TAYLOR-PICKARD, 2008; in: Current advances in selenium research and application, Volume 1, Wageningen Academic Publishers, Kap. Selenium in pig nutrition (S. 263 ff) Close, W. H. und Cole, D. J. A., 2003, Nutrition of Sows and Boars, Nottingham University Press, Fortier, M.-E., Matte, J., 2006, Organic or inorganic selenium for hyperovulatory first-parity sows? Antioxidant status, hormonal response, embryo development and reproductive performance; in: Nutritional approaches to arresting the decline in fertility of pigs and poultry; edited by Taylor-Pickard J. and Nollet, L., Wageningen Academic Publisher Lampe, J., Gourley, G., Sparks, J. und Stumpf, T., 2005a, Prewean piglet survivability: Sel-Plex vs sodium selenite as selenium source in sow diets, J. Anim. Sci. 83(2):47 Lampe, J., Gourley, G., Sparks, J. und Stumpf, T, 2005b, Postwean piglet survivability: Sel-Plex vs sodium selenite as selenium source in sow and nursery phase diets, J. Anim. Sci. 83(2):47 Mahan, D.C. 2000. Effect of organic and inorganic selenium sources and levels on sow colostrum and milk selenium content. J. Anim. Sci. 78:100-105. Mahan, D.C. and Y.Y. Kim. 1996. Effect of inorganic or organic selenium at two dietary levels on reproductive performance and tissue selenium concentrations in first parity gilts and their progeny. J. Anim. Sci. 74:2711-2718. Mahan, D.C. and E.A. Newton. 1995. Effect of initial breeding weight on macro- and micro-mineral composition over a three parity period using a highproducing sow genotype. J. Anim. Sci. 73:151-158. Mahan, D.C. and J.C. Peters. 2004. Long-term effects of dietary organic and inorganic selenium sources and levels on reproducing sows and their progeny. J. Anim. Sci. 82:1343-1358. Mahan, D.C. and J.C. Peters. 2006; Enhancing sow reproductive performance by organic trace mineral (Bioplex® and Sel-Plex®) dietary inclusion; in: Proceedings of Alltech’s 22nd Annual Symposium, Nottingham University Press, 103 - 108 Pineda, P., AG Borbolla, G González and DC Mahan, 2004, Intake of organic selenium (Sel-Plex) by primiparous sows for a long period of time: Evaluation on reproductive performance; Proceedings of Alltech’s 20th Annual Symposium, Nottingham University Press Quesnel, H., Renaudin, A., LeFloch, N., Jondreville, C., Pere, M. C., Taylor-Pickard, J. A., LeDividich, J., 2008, The animal consortium, animal (2008) 2:6 pp 859-866 Shipp, T. E., Funderburke D. W. und Funderburke C. L., 2008, Poster in: Alltech’s 24th Annual Symposium Surai, 2006, Selenium in Nutrition and health, Nottingham University Press 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 241 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Taylor-Pickard, J. und Zawadzky, J., 2005, Influence of supplementing organic selenium in gestation and lactation diets of sows on litter production parameters, in: Proceedings of Alltech’s 21st Annual Symposium, edited by T. P. Lyons, K. A. Jacques and J. M. Hower, Nottingham University Press Ulbrich, Hoffmann und Drochner, 2004; in Fütterung und Tiergesundheit, Ulmer-Verlag, Kap. 5 Autorenanschrift Josef Bunge Landwirtschaftskammer Nordrhein-Westfalen Nevinghoff 40, D-48147 Münster e-mail: [email protected] Seite 242 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - ALLTECH Deutschland GMBH, Mühlenweg 143, D- 22844 Norderstedt 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 243 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Supplementation of chelate form of microelements into broiler feed mixture S. Krizova, P. Kratochvilova, M. Vecerek, A. Vasatkova and L. Zeman Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno Introduction Mineral chelates have been the subject of a growing number of investigations in the past few years. Results demonstrate a clear trend for a better utilization and higher bioavailability for this type of mineral supplements (VIEIRA, 2008). There are indications that, at least in some situations, chelated minerals can achieve biological objectives better than inorganic sources (PATTON, 1997). Turkey diets supplemented with zinc and manganese-methionine improved feed conversion, and also reduced mortality and leg abnormalities. Dietary supplementation with zinc and manganese chelates, when inorganic inclusions of these minerals where considered adequate, led to immune improvements in turkeys (FERKET et al., 1992). Reduced early broiler mortality was found when zinc and manganeseamino acid were supplemented to broiler breeders throughout the laying period (VIRDEN et al., 2003). The aim of our experimental supervision was detected influence of supplementation of chelate form of microelements Zn and Mn into broiler feed mixture on growth, feed conversion and health condition of chickens. Materials and Methods Growth experiment was realized on fattening poultry station Prasklice. There were used 1 day old broilers of Cobb 500 hybrid combination. There were used 200 chickens which were divided into 2 stalls by 100 pieces. Average weight of chicks was 40 g. The birds were housed on deep litter in stalls 3 x 4 m. There were installed corresponding numbers of drinker and bunk feeders. Feed and water were available ad libitum. Temperature and humidity were measured by Comet L3120 on two points of animal house. Broilers were fed by a starter until 12 day of experiment; it was a standard commercial diet BR1. Experiment feed mixtures BR2 were fed from 13 day to 40 day. The first group was Control group and it had mineral premix with microelements in inorganic form. The second group was Chelates group and it had mineral premix with Zn and Mn in organic form. Composition of the feed mixtures is presented in the Table 1. Seite 244 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Weighing of chickens was realized at the 1, 12, 26 and 40 day of experiment through the use of digital scales with weighing accuracy 0.1 g. Weight of chickens, feed consumption and mortality in stalls were noted. Table 1. Ingredients and composition of feed mixtures Ingredients BR1 BR2 - Control group BR2 - Chelates Corn 8.5% NL g/kg 150 150 150 Wheat g/kg 426,7 446,7 446,7 Peas g/kg 10 10 10 Faba bean g/kg 10 10 10 Soya bean meal g/kg 320 285 285 Rapeseed oil g/kg 25 4 4 Mineral premix (inorganic form) g/kg 58,3 58,3 - Mineral premix (organic form) g/kg - - 58,3 Dry matter g/kg 884,3 886,05 886,05 Crude protein g/kg 224,3 210,3 210,3 Fat g/kg 45,64 60,48 60,48 Lysine g/kg 14,5 13,6 13,6 Ash g/kg 72,39 70,43 70,43 Zn mg/kg 102,96 101,67 101,67 Mn mg/kg 137,38 136,62 136,62 Composition Results and Discussion Performance, consumption of BR2, feed conversion and mortality are presented in the Table 2. The average final live weight in Chelates group was higher (2332.5 g) than in Control group (2325.2 g). Average daily gain was also higher in Chelates group (72.33 g/d) than in Control group (71.47g/d). But feed conversion was better in Control group (2.015) than in Chelates (2.112). No differences were significant. Mortality was similar in the both groups (2 %). According to PAIK (2001) beneficial effects on the manganese in inorganic supplemented with levels combination of methionine mineral chelates Zn + Cu for broilers showed no performance. BERTA et al. (2004) evaluated effects of dietary levels of (MnO) and organic (Mn fumarate) forms on cockerel chicks, Mn was of 0, 30, 60 and 240 ppm from both sources; the treatments did not exert 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 245 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements significant effects on the body weight, the feed/gain ratio or the mortality rate. LEE et al. (2001) suggested metal-amino acid chelates and complexes of Cu and Zn at low levels (Zn 40 ppm, Cu 60 ppm) are not different from that of high levels of inorganic sources in maintaining growth performance and serum concentration; the fecal excretions for Cu and Zn were greatly reduced when organic sources were used. Table 2. Performance, consumption of BR2, feed conversion and mortality Treatment Control group Chelates Average weight 12 day (g) 324,1 307,2 Average weight 26 day (g) 1128,2 1073,0 Average weight 40 day (g) 2325,2 2332,5 Average gain (g) 2001,1 2025,3 Average daily gain (g/d) 71,47 72,33 Consumption of BR2/ broiler (kg) 4,031 4,224 Feed conversion 2,015 2,112 2 2 Mortality (%) Conclusion The final average live weight was higher in Chelate group than in Control group, but the feed conversion was better in Control group than in Chelates. In our experiment the treatments did not exert significant effects on the performance of chickens or the mortality rate. References BERTA, E. et. al. (2004): Effect of inorganic and organic manganese supplementation on the performance and tissue manganese content of broiler chicks. Acta Veterinaria Hungarica 52, p. 199-209. FERKET, P.R., NICHOLSON, L., ROBERTSON, K.D., YOONG, C.K. (1992): Effect of level of inorganic and organic zinc and magnesium on the performance and leg abnormalities of turkey toms. Poultry Science 71, p. 60. PAIK, I. (2001): Application of chelated minerals in animal production. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences 14, p. 191198. LEE, S.H. et al. (2001): Evaluation of metal-amino acid chelates and complexes at various levels of copper and zinc in weanling pigs and broiler chicks. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences 14, p. 1734-1740. Seite 246 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements PATTON, R. (1997): Efficacy of chelated minerals. Proceedings of the 2nd Conference of the Nutrition Advisory Group of the American Zoo and Aquarium Association on Zoo and Wildlife Nutrition, p.14-31. VIEIRA, S. L. (2008): Chelated minerals for poultry. Revista Brasileria Cienc. Avic. 10. VIRDEN, W.S., YEATMAN, J.B., BARBER, S.J., ZUMWALT, C.D., WARD, T.L., JOHNSON, A.B., KIDD, M.T. (2003): Hen mineral nutrition impacts progeny livability. Journal of Applied Poultry Research 12, p. 411-416. ZEMAN, L. et al. (1995): Katalog krmiv. VÚVZ Pohorelice, p. 465. Autorenanschrift Ing. Sarka Krizova Department of Animal Nutrition and Forage Production Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno Zemedelska 1, 613 00, Brno, Czech Republic e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 247 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Auswirkungen von unterschiedlichen Jodquellen und Joddosierungen auf die Jodakkumulation im Gewebe und den Status der Schilddrüsenhormone am Modell der wachsenden Ratte V. Wagner1, W. Windisch1, S. Swoboda2 und T. Ettle3 1 Universität für Bodenkultur Wien, Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie 2 Universität für Bodenkultur Wien, Institut für Bodenforschung 3 Bayerische Landesanstalt für Landwirtschaft, Institut für Tierernährung Einleitung Das natürlich vorkommende Element Jod [I] ist für Menschen und Tiere essentiell. Bei unzureichender Jodaufnahme kann es zu zahlreichen Mangelerscheinungen wie Kropfbildung, geistiger Behinderung, oder verminderter Fruchtbarkeit kommen. Aufgrund ihrer geographischen Lage (v.A. die Entfernung zum Meer) sind weltweit viele Regionen arm an Jod. Dies führt dazu, dass das ganze Umfeld der Nahrungskette unter dem Einfluss geringer Jodkonzentrationen steht, beginnend von den Pflanzen bis hin zu den Tieren, und dass Jodmangelerscheinungen (IDD – Iodine deficiency disorders) weltweit noch immer ein großes Problem für die Bevölkerung darstellen. Die gebräuchlichste Methode im Kampf gegen IDDs ist der Einsatz von jodiertem Speisesalz, dem entweder Kaliumjodid [KI] oder Kaliumjodat [KIO3] zugesetzt wird (WHO, 2004). Auf Grund seiner unmittelbaren Umwandlung in Jodid und anschließenden Absorption im Gastroinstestinaltrakt sollte Jodat genauso verfügbar sein wie Jodid. In einer früheren Studie mit Ratten wurde diese Vermutung auch bestätigt (Kuhajek & G.F., 1970). Demgegenüber erwies sich Jodid beim Menschen als besser verfügbar als Jodat (Murray, 1953; Murray & Pochin, 1951). Insgesamt ist die Datenlage zur Bioverfügbarkeit verschiedener Jodquellen unbefriedigend gering und teilweise widersprüchlich (Jongbloed, Kemme, De Groote, Lippens & Meschy, 2002). Aus diesem Grunde wurde die folgende Studie durchgeführt. Sie sollte den Effekt verschiedener Jodquellen (Kaliumjodid und Kaliumjodat) in verschiedenen Zulagehöhen auf die Schilddrüsenhormone im Blut sowie die Jodkonzentration in den Geweben am Tiermodell der wachsenden Ratte näher untersuchen. Seite 248 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Material und Methoden Die Studie wurde mit 40 weiblichen Sprague Dawley Ratten mit einem Anfangsgewicht von 68 g durchgeführt. Die Tiere wurden paarweise in einem Käfig (2 Tiere pro Plexiglaskäfig) und unter standardisierten Laborbedingungen (25°C Raumtemperatur, relative Luftfeuchtigkeit von 65 %, Tag-Nacht Zyklus von 12 Stunden) gehalten. In den ersten sieben Tagen wurden eine semi-synthetische Diät, basierend auf Casein, Stärke und Sucrose, sowie deionisiertem Wasser, das mit NaCl (0,014 %) supplementiert war ad libitium verabreicht. Nach einer Woche folgte eine Trennung in 5 Futtergruppen (8 Tiere pro Versuchsgruppe), wobei Jodquelle und Zulagehöhe variierten (Tabelle 1). Die Jodgehalte der einzelnen Futtergruppen wurden analytisch bestätigt. Die Zufuhrempfehlung von Jod entspricht bei Ratten 100-200 µg I/kg (NRC, 1978). Daher lag bei den Tieren der Kontrollgruppe eine knappe Jodversorgung vor (83 µg I/kg). Im Gegensatz dazu erhielten die beiden anderen Jodzulagen weit über dem Bedarf (400 und 4000 µg I/kg). Die angewendeten Dosierungen liegen weit über dem physiologischen Bedarf der Tiere, sind jedoch noch nicht toxisch. Tabelle 1: Behandlungen entsprechend der Jodquelle und Höhe der Jodzulage Behandlung Jodquelle Jodzulage (µg/kg) 1 Kontrollgruppe Nativer Jodgehalt: 83 2 Kaliumjodid 400 3 Kaliumjodat 400 4 Kaliumjodid 4000 5 Kaliumjodat 4000 Zu Beginn der Studie, sowie einmal wöchentlich und am Ende der Studie wurde das Körpergewicht tierindividuell bestimmt. Die Futteraufnahme wurde pro Käfig täglich detektiert. Die jodreiche Fütterung wurde 3 Wochen lang durchgeführt. Daraufhin erfolgte nach einer zwölfstündigen Nüchterungsphase die Dekapitation der Tiere unter vorheriger Betäubung mit Diethylether. Dabei wurde Blut entnommen und das Plasma durch Zentrifugation (Labofuge 15000, Heraeus Sepatech, Germany 4000 UpM, 4 min) abgetrennt und bei -20°C gelagert. In der Folge wurden Proben von der Schilddrüse, Leber, Herz, Muskel, Femur, abdominales Fettgewebe sowie subkutanes Fettgewebe im Bereich des Rückens, Gehirn und Haare entnommen, gewogen und bei 20°C eingefroren. Alle Proben, bis auf die Blutproben, wurden nach der Entnahme gefriergetrocknet und homogenisiert. Danach wurden ein alkalischer Aufschluss mit TMAH (Tetramethylammoniumhydroxid) vorgenommen und die Jodkonzentration in den Geweben mittels ICP-MS detektiert. Die Reproduzierbarkeit der Methode wurde mit Hilfe des Referenzmaterials BCR-63-R (skim-milk-powder – Community Bureau of Reference, Brussels, Belgium) sowie jeweils frisch vorbereiteten KI Standards (Kalium Jodid, FIXANAL, 0.1 mol, Riedel.de Haen) bestimmt. Die Reproduzierbarkeit betrug zwischen 97-107 %, bei einem Detektionslimit von 0.09 µg I/kg bezogen auf gefriergetrocknete Probe. Die Konzentration der Schilddrüsenhormone im Blutplasma wurde mit ELISA-Technik mit Hilfe eines Testkits (miniVIDAS, Biomerieux, USA) analysiert. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 249 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Die Daten wurden einer Varianzanalyse (GLM-procedure von SAS 9.1.3, SAS Inst., Inc., Cary, NC) unterzogen. Signifikante Unterschiede zwischen den Mittelwerten (P ≤ 0,05; Student-Newman-KeulsTest) sind mit Hochbuchstaben gekennzeichnet. Ergebnisse Die Tageszunahmen wurden von den Jodzulagehöhen signifikant beeinflusst (Tabelle 2). Höhere Jodzulagen führten zu höheren Tageszunahmen (P>0,05), wobei die Jodquelle keinen Einfluss zeigte. Der Tagesfutterverzehr betrug im Schnitt 13 g pro Tier, wobei die Versuchgruppe, die mit 400 µg KIO3/kg gefüttert wurde, signifikant weniger verzehrte, als die anderen Futtergruppen. Dies führte auch zu signifikant geringeren Tageszunahmen in dieser Gruppe. Da zwischen den beiden Parametern Tageszunahmen und Tagesverzehr kein statistischer Zusammenhang besteht, dürfte es sich bei den beobachten Effekten um unsystematische Einflüsse handeln. Tabelle 2: Einfluss einer jodreichen Fütterung auf Wachstumsparameter Behandlungen 1 2 3 4 5 Quelle Kontrolle * KI KIO3 KI KIO3 Dosis (µg I/kg) - ** 400 400 4000 4000 Tieranzahl 8 8 8 8 8 Versuchdauer (d) 28 28 28 28 28 P-Werte SEM Beh. Dosis Quelle Wachstumsparameter Anfangsgewicht (g) 134 133 133 134 133 1,3 1,00 1,00 1,00 Endgewicht (g) 212 208 203 210 212 1,9 0,51 0,17 0,77 Tageszunahmen (g) 3,7a 3,5ab 3,3b 3,6ab 3,8a 0,1 0,05 0,02 0,31 *ohne Jodsupplementierung **nativer Jodgehalt Die höchste Jodkonzentration wurde in der Schilddrüse (Tabelle 3) detektiert, wobei eine höhere Jodsupplementierung zu einer höheren Jodkonzentration in der Schilddrüse führte. Zudem wurden in der Kontrollgruppe signifikant geringere Jodkonzentrationen gemessen. Die Jodquelle hingegen zeigte in der Schilddrüse keinen signifikanten Einfluss. In den anderen Geweben wurden deutlich geringe Konzentrationen gemessen. Allerdings konnten dennoch Werte zwischen 1480 und 5137 ng I/g in den Haaren detektiert werden. Wiederum führten hohe Jodsupplementierung zu deutlich höheren Jodkonzentrationen in den Haaren ohne Quelleneinfluss. Seite 250 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Je nach Höhe der Supplementierung lagen die Konzentrationen in Leber, Herz und Blut zwischen 23,6 ng I/g (Kontrollgruppe) und 202 ng I/g. Wiederum führte eine Zulage von 4000 µg I/kg zu einer deutlichen höheren Jodkonzentration in den Geweben als 400 µg I/kg. Zudem konnten in der Leber und im Herzen der Tiere, die mit 4000 µg KIO3/kg supplementiert wurden, signifikant höhere Jodkonzentrationen als bei den mit Jodid gefütterten Vergleichstieren detektiert werden. Im Blut hingegen zeigte die Jodquelle keinen signifikanten Einfluss. Im Femur und Muskel wurden geringere Jodmengen gemessen, die sich jedoch wiederum signifikant in Abhängigkeit von der Zulagehöhe unterschieden, wobei die Jodquelle auch hier keinen Einfluss zeigte. In Geweben vom Gehirn konnte nur ein signifikanter Anstieg der Jodkonzentration zwischen Kontrollgruppe und den Behandlungsgruppen detektiert werden. Bei den beiden Zulagehöhen und die beiden Quellen ergab sich kein signifikanter Unterschied in den Jodkonzentration im Gehirn. Trotz einer höheren Jodidaufnahme wurden in Tieren, die mit Jodid supplementiert wurden, numerisch geringere Jodkonzentrationen in extra-thyroidalen Geweben, mit Ausnahme der Haare und dem subkutanem Fettgewebe, als in Jodat-versorgten Ratten gemessen. Beim Vergleich der beiden untersuchten Fettgewebe konnte festgestellt werden, dass mehr Jod im subkutanen Fettgewebe als im abdominalen Fett eingelagert wurde. So lagen die Konzentrationen im subkutanen Fettgewebe des Rückens zwischen 17 und 67 ng I/g und abdominalen Fett zwischen 5 und 55 ng I/g. Allerdings führte in beiden Geweben eine höhere Joddosierung zu einer höheren Jodkonzentration im jeweiligen Fettgewebe unabhängig von der Jodquelle. Bei den Schilddrüsenhormonen T3 und T4 führte eine Zulage von 4000 µg I/kg zu höheren Konzentrationen im Plasma (Tabelle 4), wobei die höchsten Konzentrationen bei einer Zulage von 4000 µg KI /kg gemessen werden konnten. Das T3/T4 Verhältnis war in der Kontrollgruppe signifikant höher als in den supplementierten Behandlungsgruppen. Diskussion In der vorliegenden Studie sollte der Effekt von Kaliumjodid und Kaliumjodat in zwei verschiedenen Dosierungen auf die Jodkonzentrationen in Geweben und Schilddrüsenhormone getestet werden. Um IDDs entgegenzuwirken, wird in vielen Ländern Speisesalz, entweder mit Jodat oder Jodid, versetzt (WHO, UNICEF & ICCIDD, 1996). Da Jodat sehr schnell in Jodid umgewandelt wird (Taurog, Howells & Nachimson, 1966), scheint es bei sachgemäßer Lagerung (trocken und sauber) ohne Bedeutung zu sein, mit welcher Jodquelle, jodiert wird. Dennoch ergaben sich in verschiedenen Literaturstudien Unterschiede bei der Bioverfügbarkeit in Abhängigkeit der Jodquelle (Hixson & Rosner, 1957; Murray, 1953; Murray & Pochin, 1951). Die Bioverfügbarkeit der beiden Jodquellen scheint nicht gleichwertig zu sein, dennoch sind sie im Kampf gegen IDDs beide effektiv (WHO et al., 1996). Die höchsten Jodkonzentrationen wurden in der Schilddrüse analysiert, welche als Hauptspeicher für Jod im Körper gilt (Braverman, 1994; Hetzel & Maberly, 1986). In allen Geweben, mit Ausnahmen des Gehirns, konnte eine dosis-abhängig Jodeinlagerung bei Vergleich der beiden Zulagehöhen 400 µg I/kg und 4000 µg I/kg festgestellt werden. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 251 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Zudem wurden höhere Werte als in Studien mit Mastschweinen (Franke, Schoene, Berk, Leiterer & Flachowsky, 2008; Wagner, Windisch, Swoboda & Ettle, 2008) analysiert. Daraus lässt sich schließen, dass die Jodanreicherung in Geweben nicht nur dosis- sondern vor allem auch spezies-abhängig ist. Beide Tierspezies reagieren unterschiedlich sensitiv auf eine hohe Jodversorgung. In diesem Zusammenhang stellt sich die Frage, welche der beiden Spezies dem Menschen näher steht? Auch bei den Schilddrüsenhormonen konnte eine dosis-abhängige Steigerung sowohl bei T3 als auch bei T4 festgestellt werden, was zu einer Beeinflussung des Stoffwechsels führt. Zudem deutet das signifikant unterschiedliche T3/T4-Verhältnis auf eine knappe Jodversorgung in der Kontrollgruppe hin. Tabelle 3: Jodkonzentration in den Geweben in Abhängigkeit der Jodquelle und Jodzulage Behandlung 1 2 3 4 5 Quelle Kontrolle* KI KIO3 KI KIO3 Dosis (µg I/kg) -** 400 400 4000 4000 P-Werte SEM Beh. Dosis Quelle Jodgehalt in Geweben Schilddrüse*** (µg/g) 83c 192b 178b 276a 299a 14 0,01 0,01 0,82 Blutplasma (ng/g) 23,6b 37,7b 39,0b 122,8a 163,8a 11,6 0,01 0,01 0,25 Leber (ng/g) 45,9d 73,6c 63,6cd 165,6b 203,2a 10,5 0,01 0,01 0,12 Gehirn (ng/g) 23,2b 41,0ab 37,0ab 39,5ab 48,2a 2,6 0,03 0,35 0,67 Herz (ng/g) 33,8c 56,5c 46,4c 171,3b 202,2a 11,6 0,01 0,01 0,17 Muskel (ng/g) 14,1b 20,0b 20,1b 66,9a 76,8a 4,7 0,01 0,01 0,34 Subkutanes Fettgewebe (Rücken) (ng/g) 17,6b 32,0b 17,4b 55,9a 66,9a 4,5 0,01 0,01 0,82 Abdominal Fett (ng/g) 10,9b 8,0b 5,0b 20,9ab 32,8a 2,7 0,03 0,01 0,34 Femur (ng/g) 19,2b 30,5b 48,0b 89,1a 110,0a 7,7 0,01 0,01 0,18 Haare (ng/g) 1480b 2109b 1745b 5863a 5137a 323 0,01 0,01 0,12 *ohne Jodsupplementierung **nativer Jodgehalt *** inklusive Schilddrüse-umgebendes Gewebe (hauptsächlich Oesophagus) Seite 252 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Tabelle 4: Konzentration der Schilddrüsenhormone im Blutplasma in Abhängigkeit der Jodquelle und Jodzulage Behandlungen 1 2 3 4 5 Quelle Kontrolle* KI KIO3 KI KIO3 Dosis (µg I/kg) - ** 400 400 4000 4000 P-Werte SEM Beh. Dosis Quelle Schilddrüsenhormone im Blutplasma T3 (nmol/L) 0,92 0,76 0,79 0,93 0,84 0,02 0,08 0,05 0,50 T4 (nmol/L) 51,0b 56,6b 55,2b 74,4a 66,5ab 2,44 0,05 0,01 0,35 T3/T4 Verhältnis 0,02a 0,01b 0,01b 0,01b 0,01b 0,02 0,02 0,28 1,00 *ohne Jodsupplementierung **nativer Jodgehalt Schlussfolgerung In der Studie am Modelltier Ratte konnte ein kleiner Quelleneffekt mit geringer Überlegenheit des Jodats bei hoher Joddosierung in der Fähigkeit der Jodakkumulation im Gewebe ohne größere Bedeutung fürs normale Leben beobachtet werden. In der Praxis jedoch wirken beide Jodquellen in etwa gleichwertig. Abschließend ist anzunehmen, dass Jod in tierischen und womöglich auch in menschlichen Geweben – nicht nur in der Schilddrüse, sondern auch im Muskel und Fettgewebe – angereichert wird. Es ist jedoch noch unzureichend erforscht, ob es eine biologische Bedeutung hat. Neueste Untersuchungen deuten zumindest auf einen gewissen Zusammenhang zwischen der Jodeinlagerung im Fettgewebe und einer Änderung der mRNA Expression des Fettstoffwechsels und von oxidativen Stress hin (Schedle, Wagner, Li & Ettle, 2009). Wir danken dem VIRIS Laboratory - Center for Geosciences UZA II für die Unterstützung dieser Studie, Wien, Österreich. Literatur Braverman, L. E. (1994). Iodine and the Thyroid: 33 Years of Study. Thyroid, 4(3), 351. Franke, K., Schoene, F., Berk, A., Leiterer, M. & Flachowsky, G. (2008). Influence of dietary Iodine on the Iodine Content of Pork and the Distribution of the Trace Element in the Body. European Journal of Nutrition, 47(1), 40. Hetzel, B. S. & Maberly, G. F. (1986). Iodine. In W. Mertz, E. J. Underwood, Trace Elements in Human and Animal Nutrition (pp. 139). Orlando: Academic Press. Hixson, O. F. & Rosner, L. (1957). Calcium Iodate as a Source of Iodine in Poultry Nutrition. Poultry Science, 36(4), 712. Jongbloed, A. W., Kemme, P. A., De Groote, G., Lippens, M. & Meschy, F. (2002). Bioavailability of Major and Trace Minerals. International Association of the European (EU). Manufacturers of Major, Trace and specific Feed Mineral Materials (EMFEFA), 79. Brussels. Kuhajek, E. J. & G.F., A. (1970). A new Source of Iodine for Salt Blocks. Journal of Animal Science, 31(1), 51. Murray, M. M. (1953). The Effects of Administration of Sodium Iodate to Man and Animals. Bulletin of the World Health Organization, 9(2), 211. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 253 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Murray, M. M. & Pochin, E. E. (1951). Thyroid Uptake of Iodine from ingested Iodate in Man. Journal of Physiology, 114(1-2), 6. NRC (1978). Nutrient Requirement for Laboratory Animals, No 10. (3rd edition). National Research Council. Washington, D.C.: Nat. Acad. Press. Schedle, K., Wagner, V., Li, Q. & Ettle, T. (2009). Effects of high dietary iodine supply as iodide or iodate on mRNA expression of marker genes associated to fat metabolism and oxidative stress in abdominal fat tissue of fattening pigs. Proc. Soc. Nutr. Physiol., unpublished data. Taurog, A., Howells, E. M. & Nachimson, H. I. (1966). Conversion of Iodate to Iodide in vivo and in vitro. Journal of Biological Chemistry, 241(20), 4686. Wagner, V., Windisch, W., Swoboda, S. & Ettle, T. (2008). Effects of varying dietary iodine supplementation as iodide or iodate on zootechnical performance, carcass quality and iodine concentration in tissues of fattening pigs. Proc.Soc. Nutr. Physiol., 17, 59. WHO (2004). Iodine Status Worldwide. WHO Global Database on Iodine Deficiency. In B. de Benoist, M. Andersson, I. Egli, B. Takkouche, H. Allen, Department of Nutrition for Health and Development (pp. 1). Geneva: World Health Organization Geneva. WHO, UNICEF & ICCIDD (1996). Recommended Iodine Levels in Salt and Guidelines for Monitoring their Adequacy and Effectiveness. Geneva: World Health Organization. Autorenanschrift Mag. Dr. Viktoria Wagner Abteilung: Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel-Strasse 33, A-1180 Wien E-Mail: [email protected] Seite 254 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - ZINPRO Performance Minerals™, Gerard Doustraat 4a, NL-5831 CC Boxmeer 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 255 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Mineral supplementation in horse nutrition M. Večerek, A. Vašátková, P. Mareš and L. Zeman Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno Introduction One of important principle of horses’ nutrition is ensuring optimal contents of minerals in horses diets. Minerals in mixtures must be in sufficient amount and also in optimal ratio. (Dušek et al., 2007) Minerals make up 3% to 5% of animal body dry weight. Basic functions of minerals include: skeletal formation and maintenance, function of protein synthesis, oxygen transport, fluid balance, regulating acid-base balance of the entire system, activators and/or components of enzyme systems and mineral-vitamin relationship. It is helpful to know how to read an ingredient list on any feed or supplement in order to determine bioavailability. Trace mineral (TM) requirements of horses are a function of the size, age, and growth rate of the horse (NRC, 1989). Schryver et al. (1974) demonstrated tissue deposition of minerals in growing horses and suggested that requirements for each mineral were dictated by tissue accumulation, obligatory losses, and availability or efficiency of absorption of each mineral. Comparison of the TM content of typical, unsupplemented bermudagrass-based yearling diets with the requirements suggest by NRC (1989) reveal that several TM may be marginal or deficient. Trace mineral supplementation of yearlings using multimineral premixes has been shown to increase bone mineral deposition (Ott and Asquith, 1989). Minerals (Mn, Zn) chelated were used and it was concluded that the chelated minerals were effective in improving the performance of animals when the chelated minerals at the lowest supplementary level was compared to inorganic minerals, especially at the pharmacological levels (Paik, 2001). Material and methods Six clinically healthy horses of University farm Zabcice were in the experiment. Influence of feeding of chelated form of zinc was observed to change of content of zinc and iron in feaces and horses blood. Before experimental period the horses were fed by standard mineral premix and during experimental period of 28 day they were fed by premix with chelates of Zn. There were done three taking of feaces and blood taking at the beginning experiment, 15th day and 28th day. Addition of linseed (cooked processed by high temperature) to diets was the reason why they were done taking at 15th day. Feeding of horses were twice a day by meadow hay and grain feed. The average hay intake was Seite 256 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements 10.37 kg of dry matter per horse and day. The average intake of grain feed was 2.87 kg (2.19 kg of barley and 0.68 kg of mayze) of dry matter per horse and day. Minerals feed were given to horses in ration 0.1 kg/animal/day as inorganic form MIKROS VDK and than in ration 0.03 kg/animal/day in organic form. There were increased of content of zinc in diets. Average of nutrients of feed ration of two days before taking feaces and blood are shown in tab. 1. Particular specimens (feed, feaces, blood) were dehydrated, mineralized and determinated content of zinc and iron (figure 1 and 2) by atomic absorbing spectrophotometry metod (MILESTONE ETHOS 1). Results and discussion There were fod three variants of feed ration with different contents of nutrients (tab. 1). Aim of our experiment was observed effect of feeding organic form zinc to content of zinc and iron in feaces and blood of horses. From tab. 1, there are contents of particular nutrients of feed rations and there are shown increase to content of zinc in diets. Addition of linseed (cooked -processed by high temperature) to diets was for wishes of owner. It was not observed its effect to content of zinc in diets. Amount of nutrients and minerals in feaces are shown in tab. 2. The content of observed minerals in feaces are represented in figures 1 and 2. The content of zinc and iron in blood are represented in figures 3 and 4. Tab 1: The content of nutrients in particular diets. Day 0 15423,838 Dry matter g ± 2899,580 1371,428 Crude protein g ± 227,124 331,171 Fat g ± 59,383 4162,756 Fibre g ± 936,158 8293,176 Nitrogen free extract g ± 1413,023 1265,307 Ash g ± 263,891 268,316 Gross - energy MJ/kg ± 50,221 674,357 Zinc mg ± 75,128 1004,985 Iron mg ± 196,224 7. BOKU-Symposium Tierernährung 15 10134,505 ± 1255,407 965,262 ± 98,336 223,529 ± 25,711 4600,460 ± 2608,991 5747,877 ± 611,785 743,295 ± 114,255 177,400 ± 21,744 2054,218 ± 32,528 336,431 ± 7,438 28 13670,117 ± 1501,244 1256,605 ± 117,592 328,667 ± 30,745 3581,584 ± 484,692 7442,698 ± 731,586 1060,563 ± 136,628 239,475 ± 26,002 2149,691 ± 38,897 394,776 ± 12,357 Seite 257 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Tab 2: The content of nutrients in feaces. Day Crude protein g/kg Fat g/kg Fibre g/kg Nitrogen free extract g/kg Ash g/kg Gross - energy MJ/kg Zinc mg/kg Iron mg/kg Figure 1: The content of zinc in feaces. Seite 258 0 107,316 ± 13,022 46,899 ± 39,000 296,123 ± 16,828 446,935 ± 13,791 102,727 ± 15,170 18,526 ± 0,189 88,781 ± 25,756 127,344 ± 59,347 15 80,329 ± 12,264 37,537 ± 3,743 331,158 ± 13,807 477,486 ± 6,727 73,490 ± 5,591 18,726 ± 0,030 87,097 ± 33,998 60,842 ± 19,423 28 97,276 ± 12,427 45,924 ± 4,635 304,130 ± 22,390 461,251 ± 15,724 91,419 ± 7,582 18,790 ± 0,071 105,272 ± 34,046 84,095 ± 10,884 Figure 2: The content of iron in feaces 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Figure 3: The content of zinc in horses blood Figure 4: The content of iron in horses blood Conclusion The content of zinc in feaces and blood had increasing tendency with increasing amount of zinc in feed ration. The content of iron in blood had slightly increase and decrease content of iron in feed ration and feaces. Differences were not significantly. Acknowledgments: The work was supported by IGA of MZLU as project no. IG280081. References Dušek (2007): Chov koní (2 th Ed.). Nakladatelství Brázda, Praha, 404 p., ISBN 80-209-0352-6 NRC. (1989): Nutrient Requirement of Horses (5th Rev. Ed.). National Academy Press, Washington, DC. Schryver, H. F., H. F. Hintz, J. E. Lowe, R. L. Hintz, R. B. Harper, Reid J. T. (1974): Mineral composition of the whole body, liver and bone of young horses. J. Nutr. 104:126. Ott, E. A., Asquith R. L. (1986): Influence of level of feeding and nutrient content of the concentrate on growth and development of yearling horses. J. Anim. Sci. 62:290. Paik I. K. (2001): Application of chelated minerals in animal production, Asian . Australasian J. Animals Sci., 14, 191-198. Contact to authors Ing. Michal Večerek Department of animal nutrition and forage production Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno Zemedelská 1, 613 00 Brno e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 259 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements The effect of dietary phosphorous level and phytase activity on the performance, phosphorous retention and eggshell quality in layers during the post peak production stage Tossenberger, J1., Babinszky1 and L., Kühn2 I. 1 Kaposvár University, Department of Animal Nutrition, Kaposvár/Hungary 2 AB Enzymes GmbH, Darmstadt/Germany Introduction Beside their energy and amino acid supply, the production of intensive hybrid layers is essentially determined by their calcium and phosphorous supply. Calcium and/or phosphorous deficiencies can lead to a higher incidence of cracked or hairline-cracked eggs, while excessive phosphorous levels beside an adequate calcium supply - can also be associated with eggshell formation problems. Problems in eggshell formation can also occur during the third phase of the production cycle even when calcium and phosphorous are supplied according to the recommendations, which may be attributed to the slow demineralisation and “depletion” of the layer’s body. Poor shell strength will damage the marketability of the eggs produced leading to reduced economic performance. For this reason it is of utmost importance to provide an optimum calcium and phosphorous supply in layer diets. In addition to all this, the more accurate definition of the layer hen phosphorous requirement is also justified by the aspects of environmental protection, since at present the average phosphorous retention of the entire production cycle is hardly up to 20 % (Oloffs et al., 1997). In addition to the more accurate definition of phosphorous requirements, the rate of phosphorous excretion can also be reduced by improving the availability of native phosphorous. The availability of dietary P can be improved not only by a careful selection of feed ingredients but also by incorporating an industrial phytase enzyme in the diet (Rodehutscord et al., 2002). Although several national and international recommendations concerning the calcium and phosphorous requirements of hybrid layers are available in the literature, these requirements were determined using hybrid layers marketed a longer time ago. In the last 10 years however, the performance of hybrid layers has improved considerably. While according to the data from a performance test concluded in 1994 the production performance of medium-weight hybrids used to be 270 eggs/year and 17.2 kg eggmass/year, the data from a similar test conducted in 2001 show, that the average performance of medium-weight hybrids had already reached 310 eggs and 20.2 kg per year (Heil and Hartmann, 2001), whereas today a production of 320 eggs per year is a practical reality. This justifies the setting up of trials the results of which can contribute to a more accurate definition of the P-requirement of these hybrids and to the reduction of the environmental load from this sector. Seite 260 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Aim of the study Our trials conducted with medium weight hybrid layers during the post peak production period were aimed at determining how different dietary phosphorous levels and phytase activities (beside a constant calcium level and varying phosphorous levels) influenced the layers’ production, feed intake and feed conversion rate, the eggshell quality and the rate of phosphorous retention. Materials and Methods The trials were set up with Hy-Line brown layer hens at the age of 47 weeks (24 birds per treatment, 3 birds per cage, 650 cm2 per bird). The performance studies were conducted for 24 weeks, from week 28 to week 52 of the production cycle, while retention studies took place at the end of the 9th month of production, at week 39 of the production cycle. Trial diets were formulated on a corn-soy basis. Both studies (performance and retention) tested the effect of the same 4 treatments. The calcium content of the diets was the same in all treatments, while their phosphorous contents and phytase activities differed. In Treatment ‘A’ the P-level of the diet was 2.0 g/kg non-phytate P (NPP), which corresponded to 4.2 g/kg total phosphorous (Pt) (positive control). This diet contained no added phytase enzyme. In Treatment ‘B’ the NPP level of the diet was reduced by 50 % compared to the positive control diet (1.0 g/kg NPP). This diet was also fed without any added phytase enzyme. In Treatments ‘C’ and ‘D’ the P level of the diets was the same as that of Treatment ‘B’ (1.0 g/kg NPP), but these diets were supplemented with a microbial phytase enzyme (Trichoderma reesei) at the rate of 250 PPU/kg (Treatment ‘C’) and 500 PPU/kg (Treatment ‘D’). The AMEn, crude protein, lysine, methionine+cystine, threonine and tryptophane content of the basal diets were in accordance with the NRC (1994) requirements. Birds were fed their diets ad libitum, in mash form. The composition and nutrient content of the basal diets are shown in Table 1. The individual live weight of the birds was measured in the performance studies at the start and the end of the trial. Egg production (number of eggs and egg mass) was recorded daily for each cage. Feed intake was registered weekly for each cage. Eggshell thickness was also measured weekly (24 eggs per treatment) using a Mitutoyo 395-741-10 digital display micrometer. At the same points of time the strength required to crack the eggs (eggshell) was measured as well using a Precisa 10200G instrument equipped with a special egg-holding adapter, a cracking arm and a data recorder. Retention studies consisted of a 4-days collection period beside the continuous feeding of the trial diets. During the collection period daily feed intakes and the quantity of collected excreta were measured to gram accuracy. Excreta collected were stored at a temperature of -18ºC until further processing. The live weight of the birds was measured at the start and end of the collection period. The nutrient content of the trial diets and the Ca and P content of the excreta samples were determined according to the AOAC procedure (1989). Trial data were submitted to variance analysis. In case of a significant treatment effect the statistical reliance of differences among the treatments was verified by Tukey’s test (SAS, 2004). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 261 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Table 1: Composition and nutrient content of the basal diets (g/kg) B A S A L–D I E T S Ingredients PC (Positive control) NC (Negative control) Corn 673.05 669.70 Soybean meal 181.00 178.00 Alfalfa meal 30.00 40.00 Lysine-HCl 1.10 1.10 DL-Methionine 2.10 2.10 98.00 99.50 MCP 5.70 0.60 NaCl 4.00 4.00 5.00 5.00 1000.00 1000.00 Dry matter 907.3 906.6 Crude protein 157.5 154.5 Crude fat 31.5 30.2 Crude fiber 28.5 28.6 Crude ash 127.0 123.2 565.5 570.1 11.5 11.5 Lysine 8.0 8.0 Methionine + Cystine 7.1 7.1 39.3 39.5 P (total) 4.1 3.0 P (non-phytate)b 2.0 1.0 Limestone Premix a Total Nutrient content N-free extract AMEn (MJ/kg) b Ca a: 1 kg premix contains: Zn:21600 mg, Cu:3600 mg, Fe:11654 mg, Mn:17280 mg, I:288 mg, Se:43 mg, Co: 86 mg, Vit.A:1640000 IU, Vit.D3: 388000 IU, Vit.E:3880 mg, Vit.K3:312 mg, Vit.B1:312 mg, Vit.B2:1160 mg, Vit.B3:8001 mg, Vit.B5:2400 mg, Vit.B6:520 mg, Vit.B12:2.56 mg, Cholin:34355 mg, Folic acid:128 mg, Biotin 25.8 mg. b: calculated value Seite 262 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Results and Discussion The most important results of the performance studies are summarized in Table 2. According to our data, when the NPP content of the diet fed to positive control birds (2 g/kg) was reduced by 50 % (Treatment ‘B’ vs Treatment ‘A’) it had a negative influence on the number of eggs produced in the post peak production period (P≥0.05). More specifically, during the studies (28 - 52 weeks of production) the negative control birds (Treatment ‘B’) produced 22 % less eggs and 23.5 % less egg mass compared to the positive control (Treatment ‘A’) (P≤0.05). The egg production of birds fed the diet also containing phytase supplementation (Treatments ‘C’ and ‘D’) however, was the same as that of birds fed the diet containing P according to the positive control birds. The difference between the two phytase dosages was not significant (P≥0.05). In our studies the feed intake of negative control birds (Treatment ‘B’) was lower than that of their positive control peers (Treatment ‘A’). The 11 % lower feed intake was also statistically verifiable (P≤0.05). The reduced feed intake is probably attributable to a loss of appetite caused by the phosphorous deficiency. The feed intake of birds fed phytase supplemented diets however, was similar to that of positive control birds. Table 2: The effect of different phosphorous supplies on layer hen production and eggshell quality TREATMENTS * A B C D RMSE** Live weight (g) 2015a 1689b 1996a 2002a 194 Eggs produced (egg/layer) 142.6a 111.7b 133.7a 141.5a 10.4 Parameters EGG PRODUCTION a b a a Production % 84.9 66.5 79.6 84.2 6.2 Egg mass (g/layer/day) 54.9 a 42.0 b 52.1 a 53.4 a 3.9 112.0a 99.7b 109.6a 110.1a 7.3 FEED INTAKE + FEED CONVERSION RATE Feed intake (g/day) Feed conversion rate (kg/kg) a b a a 2.04 2.40 2.12 2.06 0.19 0.335a 0.337a 0.336a 0.336a 0.035 EGGSHELL QUALITY Thickness (mm) Strength (Kp/crack) * ** c 2.78 b 2.96 b 2.93 a 3.12 0.96 A: with recommended P-content, without added phytase B: with reduced P-content, without added phytase C: with reduced P-content + 250 PPU/kg phytase D: with reduced P-content + 500 PPU/kg phytase : RMSE : Root Mean Square Error a,b,c, : different superscripts within the same line indicate a significant difference (P≤0.05) The reduced phosphorous content of the diets had a significant effect on the amount of feed used to produce 1 kg of egg mass (P≥0.05), as reflected by a 15 % deterioration of the feed conversion rate of negative control birds compared to that of their positive control peers. Birds fed the phytasesupplemented diet used the same amount of feed as their positive control peers (P≥0.05). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 263 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Our trial data correspond well with the findings of Keshavarz (2000), who studied the influence of dietary NPP and phytase activity on layer hen performance in the different phases of the production cycle. Both our data and the findings of the author(s) in reference point out in addition, that the P content of layer hen diets can be reduced without any deterioration of the performance. The results of the eggshell studies lead to the conclusion that the different P content and phytase activity of the diets did not influence the eggshell thickness, as that was the same across all treatments (P≥0.05). There were significant differences however, in the shell strength of eggs laid by birds in the different treatments (P≤0.05). It is remarkable, that in the case of P supplied according to the recommendation (Treatment ‘A’), 6.1 % less strength was needed to crack the eggshell compared to the eggs of birds fed the diets with reduced P-content and not supplemented with phytase. In addition to the dietary phosphorous content, the difference is probably attributable to the different absorption of phosphorous from different origin. Compared to the positive control birds, the eggshell of birds fed the phytase supplemented diet was 5.4 % stronger (Treatment ‘C’) and 12.2 % stronger (Treatment ‘D’), respectively (P≤0.05). The results of balance trials at the 39th week of production are summarized in Table 3. According to our data the feed intake of birds with the exception of the negative control group was equal in all treatments (P≤0.05). Average feed intake of birds fed diets with reduced phosphorous level without phytase supplementation was 14.7 % less (P≤0.05) compared to the positive control birds. The 31.9 % lower P intake measured in the negative control group was due in part to the lower dietary P content and to the on average 14.7 % lower feed intake of these birds. The on average 22.5 % lower P-intake of birds fed the phytase supplemented diet compared to their positive control peers is explained by the similarly lower P-level of their diets. Birds fed the reduced P diets excreted 31 % less phosphorous on average compared to their peers fed the 2.0 g/kg NPP diet (positive control). Table 3: Phosphorous intake, excretion and retention of the birds (mg/day) T R E A T M E N T S* Parameters A Intake Feed intake (g/day) P-intake (mg/day) P-excretion via excreta Excretion (mg/day) Excretion (in % of intake) P-retention Retention (mg/day) Retention (in % of intake) * ** B C D RMSE** 110.7a 432 a 94.4 b 294 c 109.2 a 340 b 110.0 a 330 b 8.4 26 312 a 72.2 216 b 73.5 221 b 65.0 209 b 63.3 21 119 a 27.7 c 78 b 26.5 c 119 a 35.0 b 121 a 36.8 ba 13 2.5 A: with recommended P-content, without added phytase B: with reduced P-content, without added phytase C: with reduced P-content + 250 PPU/kg phytase D: with reduced P-content + 500 PPU/kg phytase : RMSE : Root Mean Square Error a,b,c, : different superscripts within the same line indicate a significant difference (P≤0.05) It should be noted however, that while the positive control and negative control birds excreted 72.2 % and 73.5 % of their phosphorous intakes respectively, the excretion rate of layer hens fed the phytase supplemented diets was 65.0 % (Treatment ‘C’) and 6.3 % (Treatment ‘D’) only. Consequently, the Seite 264 7. BOKU-Symposium Tierernährung Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements phosphorous retention of positive control birds was 119 mg/day. Negative control birds retained not more than 78 mg phosphorous daily and this remained 34.4 % below that of the positive control birds. Phosphorous retention of birds fed diets with phytase supplementation (Treatment ‘C’ and Treatment ‘D’) was the same as the value recorded for positive control birds (P≥0.05) and it was 53.8 % higher (P≤0.05) compared to the negative control birds. No statistically verifiable difference (P≥0.05) was found between the dosages (250 PPU/kg and 500 PPU/kg). Conclusion and Suggestions The following main conclusions can be deducted from the results of our trial series conducted during the second half of the laying cycle. Reduction of the phosphorous content of the diets by 50 % as compared to the positive control (2.0 g/kg NPP) (positive control versus negative control) decreased the number of eggs produced and the feed intake of the birds and improved the amount of feed needed to produce 1 kg of egg mass (P≤0.05). The performance of birds (in all examined parameters) fed diets with reduced phosphorous content with phytase supplementation was the same as in positive control birds. The phytase different dosages did not influence the performance of layers. Reduced phosphorous content of the diets had no negative effect on eggshell thickness. Phytase added to the diets with reduced phosphorous content resulted in better eggshell strength than in the birds fed diets with recommended levels of phosphorous. The phosphorous retention of birds fed diets with reduced phosphorous content increased with phytase supplementation in all cases. Phytase supplementation (250 PPU/kg and 500 PPU/kg) improved the phosphorous retention (%) at the same rate. When the layer diets containing reduced phosphorous levels were supplemented with a phytase enzyme, there was no reduction of layer hen production, eggshell strength improved, and the rate of phosphorous excretion decreased by about 31 %, consequently the non-phytate phosphorous content of the diets of Hy-Line hybrid layers can be reduced down to as little as 1.0 g/kg during the second half of the production cycle, provided the diet is supplemented with at least 250 PPU/kg phytase enzyme. To be on the safe side, when the NPP level of diets is reduced to such an extent, a phytase supplementation of 500 PPU/kg is recommended. References Association of Official Analytical Chemists. 1989. Official methods of analysis. 3rd ed. AOAC, Washington, DC. Heil G. and Hartmann W., 2001. Working Group Report. World’s Poultry Science Journal, 50: 187-189 Keshavarz, K., 2000. Nonphytate phosphorus requirement of laying hens with and without phytase on a phase feeding program. Poultry Science, 79. 748-763. National Research Council, 1994. Nutrient Requiremenets of Poultry. National Academy Press, Washington, D. C. Oloffs K., Danicke S., Zachmann R. and Jeroch H., 1997. Einfluss einer Phytaseergänzung zu einer phosphorarmen Ration auf verschiedene Leistungsparameter und die Phosphorbilanz bei der Legehenne. Agribiol. Res. 50: 257-264. Rodehutscord M., Sanver F. and Timmler R., 2002. Comparative study on the effect of variabla phosphorus intake at two different calcium levels on P excretion and P flow at the terminal ileum of leying hens. Arch. Anim. Nutr. 56: 189-198 SAS, 2004. SAS User’s Guide, Statistics Inst., Inc. Cary NC. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 265 Mengen- und Spurenelemente / Macro and Trace Elements Corresponding Author Dr. J. Tossenberger Kaposvár University, Faculty of Animal Science, Department of Animal Nutrition, H-7400 Kaposvár, POB 16. Hungary e.mail: [email protected] Seite 266 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring - Evonik Degussa GmbH, Rodenbacher Chaussee 4, D-63457 Hanau 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 267 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Occurrence of mycotoxins in DDGS Ursula Hofstetter and Inês Rodrigues BIOMIN Holding GmbH, Herzogenburg, Austria Introduction Bioethanol is mainly produced from sugars derived from fuel or energy crops, especially maize. The cereal grains suffer a variety of complex physical and chemical processes and DDGS is obtained as a by-product. Within a cereal grain, the main parts used for the production of bioethanol are the bran and the endosperm, as these are the structures that gather most part of the starch, cellulose, hemicellulose and lignin. The use of DDGS – dried distillers grains with solubles, a by-product from bioethanol production – in animal feed has experienced an increased trend for the last few years. According to a FDA survey in 2006, the quantity of distillers grains marketed for finished feed production had a 340% increase since 1995, as a consequence of the rising amounts of bioethanol produced. In 2007, 33% of the USA maize crop was used for food and industrial uses, 21% of which was used for ethanol production (Corn Refiners Association, 2008). Geographical availability of maize and the high cost of maize coupled with high cost of dietary protein have increased livestock utilization of maize-derived DDGS in the United States over the past year. The concentrations of protein, fiber, fat and minerals are higher in distiller grains than in corn. Unfortunately this implies also for the level of mycotoxins that might be present in corn as the fermentation process does not destroy them. Mycotoxins are secondary metabolites produced by different fungi on almost all agricultural commodities before or after harvest. These toxic substances are known to be either carcinogenic (e.g. aflatoxins, ochratoxins, fumonisins), estrogenic (zearalenone), neurotoxic (fumonisins), dermatotoxic (deoxynivalenol and T-2 toxin) or immunosuppressive (aflatoxins, ochratoxins and trichothecenes). Mycotoxin contamination of crops may cause economic losses at all levels of food and feed production. Raw materials’ contamination in terms of mycotoxins is carried-over and even augmented during bioethanol production as research has shown that fusariotoxins for example, tend to concentrate more in the bran and germ of the cereal, leading therefore to a DDGS mycotoxin contamination generally 3 times higher than the original maize. Therefore the inclusion of DDGS in animal diets must be carefully calculated. Material and methods To understand to what extend the DDGS inclusion in animal diets is safe and to provide customers insights in the occurrence of mycotoxins in DDGS samples worldwide, BIOMIN initiated and backed a Seite 268 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects worldwide survey. Since 2006, 293 DDGS samples were collected from throughout the world mainly received from the United States and Canada (177 samples or 60%) and Asia (103 samples or 35%), especially China (43 samples or 15%). They were tested for the major mycotoxins of interest in animal husbandry, namely aflatoxins (AfB1, AfB2, AfG1 and AfG2), zearalenone (ZON) and some of them were also analysed for its natural – and even more estrogenic - metabolites alpha and beta zearalenol (α-ZOL, β-ZOL), deoxynivalenol (DON), T-2 toxin and fumonisins (FB1 and FB2). All tests have been conducted by Quantas Analytics, Austria and Romer Labs Singapore. The analyses were performed using standard procedures. Aflatoxins, T-2 toxin, zearalenone as well as α- and βzearalenol and total FUM were analyzed by HPLC (High Pressure Liquid Chromatography) whereas DON values were obtained by TLC (Thin Layer Chromatography). Non-detect levels were based on the quantification limits of the test method for each toxin: AfB1 <0.5 µg/kg, AfB2 <0.1 µg/kg, AfG1 <0.5 µg/kg, AfG2 <0.1 µg/kg, ZON <25 µg/kg, α-ZOL <15 µg/kg, β-ZOL <37 µg/kg, DON <50 µg/kg; T-2 toxin <30 µg/kg and FB1 and FB2 <25 µg/kg. Results and Discussion Table 1 – Occurrence of mycotoxins in DDGS – worldwide. AfB1 AfB2 AfG1 AfG2 ZON αZOL βZOL DON FUM B1 FUM B2 T-2 No. samples from US and Canada 293 293 293 293 293 43 43 293 293 293 293 No. positive samples 57 22 3 0 244 4 18 205 263 234 28 19,5 7,5 1 0 83,3 9,3 41,9 70,0 89,8 79,9 9,6 1,3 0,1 0,02 0 163 5 49 1239 811 242 8 89 7 4 0 8107 76 312 13920 9042 2407 226 % positive Avg. level [µg/kg] = ppb Max. level [µg/kg] = ppb Almost 100% of the investigated DDGS samples were contaminated with at least one mycotoxin. More than 90% of the analyzed samples have shown a simultaneous contamination of two or more mycotoxins. From all samples analyzed, ZON accounted for 83% contamination rate whereas α-ZOL and β-ZOL accounted only 9% and 42%. Unfortunately only 43 samples were analyzed for α- and βZOL so far. 70% of tested DDGS were positive for DON, 90% or 80% respectively for fumonisins and only 10% for T-2 toxin. However the presence of “field mycotoxins” (ZON, DON, T-2 and FUM) produced by Fusarium sp. which - despite Good Agricultural Practice – cannot be avoided totally, was very frequent and the contamination levels have to be considered as medium to high (average ZON level: 163 µg/kg, average DON level: 1239 µg/kg and average FB1 level: 811 µg/kg). Aflatoxins, produced by Aspergillus sp., were not found frequently in the DDGS samples collected. Only 20% of the samples were positive for aflatoxin B1 with a low average contamination level of 1.3 µg/kg. The highest concentration found for this mycotoxin was 89 µg/kg. Almost all samples were tested positive for at least one mycotoxin (284 samples or 97%). All maize DDGS samples were contaminated by at least one mycotoxin, except two samples sourced from Australia. There were six cassava DDGS samples for which the mycotoxin level was below detection limits and one wheat DDGS received from 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 269 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Italy was also tested negative for mycotoxin contamination. However 98% of the positive samples have shown a simultaneous contamination of two or more mycotoxins. Nine samples were free of mycotoxins and five samples contained only one mycotoxin. Table 2 – Occurrence of mycotoxins in DDGS samples from the United States and Canada. AfB1 AfB2 AfG1 AfG2 ZON αZOL βZOL DON FUM B1 FUM B2 T-2 No. of samples from US and Canada 177 177 177 177 177 40 40 177 177 177 177 No. positive samples 39 14 2 0 146 4 18 123 174 156 26 22,0 7,9 1,1 0 82,5 10,0 45,0 69,5 98,3 88,1 14,7 0,3 0,03 0,01 0 79 5 53 1357 735 208 12 6,3 0,8 1 0 1226 76 312 12000 3390 1142 226 % positive Avg. level [µg/kg] = ppb Max. level [µg/kg] = ppb 83, 70, 15 and 98 and 88% respectively of the samples coming from the United States and Canada were contaminated with the Fusarium mycotoxins ZON, DON, T-2 and FUM. The average contamination levels found in the US- and Canada samples for these mycotoxins were 79, 1357, 12 and 735 and 208 µg/kg. Nevertheless, contaminations as high as 1226, 12000, 226 and 3390 and 1142 µg/kg of these mycotoxins could be detected. Aflatoxin B1, produced by Aspergillus sp., was present in 22% of the samples, with an average contamination of 0.3 µg/kg and the highest level found for this aflatoxins in the samples analyzed was 6.3 µg/kg. Therefore aflatoxins are not of major concern in DDGS. Table 3 – Occurrence of mycotoxins in DDGS samples received from China. No. of samples from China No. positive samples % positive Avg. level [µg/kg] = ppb Max. level [µg/kg] = ppb AfB1 AfB2 AfG1 AfG2 ZON DON FUM B1 FUM B2 43 43 43 43 43 43 43 43 10 7 1 0 42 34 32 27 23,3 16,3 2,3 0 97,7 79,1 74,4 62,8 6,6 0,7 0,1 0 628 1909 982 230 89 7 4 0 8107 13920 9042 971 Compared to the US-Canadian samples the samples received from China didn’t show differences regarding the frequency of occurrene of mycotoxins but the average levels were higher and also the maximum concentrations were above the ones received from the US and Canada. ZON accounted for almost 98% contamination rate, 80% of tested DDGS were positive for DON, 74% and 63% for fumonisins and in about 7% of the samples aflatoxin B1 was found. Especially the contamination levels Seite 270 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects of ZON and DON have to be considered as high (average ZON level: 628 µg/kg and average DON level: 1909 µg/kg). Only 20% of the samples were positive for aflatoxin B1 with a low average contamination level of 1.3µg/kg. Conclusion The quality of DDGS, in terms of mycotoxin contamination depends in a great extend on the quality of the corn purchased by the ethanol plant. If damaged corn is the most prevalent raw material, higher mycotoxin contamination levels will be found in the by-product. As seen from the results above, the fermentation process for the production of DDGS does not destroy mycotoxins. Although DDGS may be seen as the best solution for animal producers, enabling them to counteract the rising prices of feedstuffs and feed they might be a source of mycotoxins, toxic compounds with hazardous effects to animal health and productivity. This study confirmed previous literature stating the concentration of mycotoxins in distiller’s grains. The fermentation process used in production of DDGS does not destroy mycotoxins. In fact it concentrates the mycotoxins three-fold (Creswell, 2008). In the United States, 90% of the co-products of maize-based ethanol are fed to livestock. An unintended consequence is that animals are likely to be fed higher levels of mycotoxins, which are concentrated up to three times in DDGS compared to grain (Wu and Munkvold, 2008) Monitoring mycotoxins in DDGS is crucial and counteracting strategies are advisable to be accomplished. It’s important to prevent the formation of Fusarium mycotoxins on the field (by applying GAP) and protect animals from mycotoxicosis by adding mycotoxin deactivating products. References Corn Refiner Association (2008): http://www.corn.org. Accessed July. 2008. Creswell, D. (2008): Asian Poultry Magazine. Jan/Feb 2008. FDA - Center for Veterinary Medicine (2006): http://www.fda.gov/cvm. Accessed May, 2006. Wu, F. and Munkvold, M.P. (2008): Mycotoxins in ethanol co-products: modeling economic impacts on the livestock industry and management strategies. J. Agric. Food Chem. 56, 3900–3911. Autorenanschrift DI Ursula Hofstetter BIOMIN Holding GmbH Industriestrasse 21, A-3130 Herzogenburg e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 271 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Ingestion of deoxynivalenol (DON) contaminated feed alters the chicken immune responses Wageha Awad, Josef Böhm and Jürgen Zentek Institut für Ernährung, Veterinärmedizinische Universität Wien, Veterinärplatz 1, A1210 Wien / Institut für Tierernährung, Fachbereich Veterinärmedizin, Freie Universität Berlin, Brümmerstr. 34, D-14195 Berlin Introduction The immune system is primarily responsible for defense against invading organisms. The effects of several mycotoxins on the immune responses have been investigated; however, most data concern laboratory animals. In some instances, farm animals and cells derived from livestock species have been employed to evaluate the immunotoxicity of mycotoxins. Trichothecenes are potent immunosuppressive agents that directly affect immune cells and also modify immune responses as a consequence of tissue damage elsewhere. One of the most important trichothecene mycotoxins in feedstuffs for poultry in Austria and other European countries is deoxynivalenol (DON). It has adverse effects on health and performance of chicks due to the known effects on feed intake and the inhibition of protein synthesis. Haematological and immunological parameters are altered and suppression of humoral and cellular immune function occurs after acute and chronic DON intoxication. High-dose of trichothecene injures the spleen, thymus, bone marrow and intestinal mucosa, which can result in immunosuppression and potentially increased susceptibility to several pathogens. There is extensive evidence that DON can be immunosuppressive or even immunostimulatory, depending upon the dose and duration of exposure (Bondy and Pestka, 2000). Dänicke et al. (2003) found that an increase in dietary Fusarium mycotoxins concentration (major toxin was DON) resulted in a linear decrease in serum antibody titres to Newcastle disease virus in broilers. Peripheral blood monocytes were decreased linearly in broilers fed grains contaminated with Fusarium mycotoxins. The feeding of contaminated diets linearly reduced the B-cell count at the end of the experiment (56 d), whereas the T-cell count on d 28 responded quadratically to the contaminated diets (Swamy et al., 2004). Other effects include superinduction of cytokine production by T helper cells (in vitro) and activation of T cells to produce a proinflammatory cytokine. To what extent the elevation of cytokines contributes to metabolic effects such as decreased feed intake remains to be established. Further toxicological studies on the impact of DON in the immune system and gastrointestinal tract of poultry are warranted. Therefore we focused on the ability of DON to induce immunotoxic effects in chickens. Seite 272 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Modulation of immune parameters in blood Studies of DON immunotoxicity have focused primarily on the mouse model, with few investigations on possible effect in humans or domestic animals. These studies have shown that DON and other trichothecenes can suppress or stimulate immunity, sometimes even when present at identical dosages (Rotter et al., 1996). In chickens, humoral immunity can be either stimulated or impaired by DON and other trichothecenes. Chicken fed 50 ppm DON had reduced antibody responses to Newcastle disease vaccine (Harvey et al., 1991). The feeding of contaminated diets with Fusarium mycotoxins to chickens did not cause significant changes in serum or bile immunoglobulin concentrations (Swamy et al., 2004). However, Swamy et al. (2002) and Chowdhury et al. (2005) controversially observed that the feeding of contaminated grains with Fusarium mycotoxins caused significant linear and quadratic declines in the biliary IgA but not in serum IgA, IgG and IgM. Oral exposure to Fusarium mycotoxins may alter gut mucosal immunity because of local effect of mycotoxins in the gut. Serum IgA mediates the transport of antigens from the circulation into the bile (Russell et al., 1981). It has also been suggested that the hepatobiliary transport of IgA from blood serves to reinforce the intestinal supply of secretory IgA, which protects the mucosal surface against infection and prevents penetration of antigens from the gut lumen. Secretory IgA provides an important line of defense against bacteria, such as Salmonella, Vibrio cholerae, and Neisseria gonorrhoeae, and viruses such as polio, influenza, and reovirus (Goldsby et al., 2000). Altered immune cells in tissues DON can slightly stimulate in vitro B-cell proliferation in a cloned B-cell line (Minervini et al., 1993), but it does not enhance Ig secretion in purified B-cell cultures (Warner et al., 1994). In vitro experiments showed that there is increased help for IgA secretion by B-cells when they are cocultured with CD4+ cells pulsed in vitro with DON (Warner et al., 1994). Pestka and Dung (1994) suggested that deoxynivalenol enhances differentiation to IgA-secreting cells at the Peyer´s patch level and subsequently affects the systemic compartment. Feeding diets with a high level of grains contaminated with Fusarium toxins to broiler chickens reduced the percentage of lymphocytes, but did not alter serum immunoglobulin concentrations (Swamy et al., 2004). Chowdhury et al. (2005) found that in laying hens the consumption of grains naturally contaminated with Fusarium mycotoxins decreased the number of blood leukocytes as well as the numbers of blood B lymphocytes, CD4+ lymphocytes, and CD8+ T lymphocytes after 12 wk of feeding. Holsapple (1995) indicated that the reduction in peripheral lymphocyte numbers could be considered as a significant finding only if it correlates with functional assays. Hence, it was important to determine cell function in terms of cell-mediated or antibody-mediated immune competence. Additionally, Frankic et al. (2006) found that DON impair the performance of broiler chickens, induce DNA damage in chicken leukocytes and cause oxidative stress in the organism. The early increase in response in birds fed mycotoxin-contaminated grains may be due to increased numbers of T lymphocytes trafficking to the site of application. Similarly, short-term exposure to T-2 toxin, a Fusarium trichothecene, enhanced resistance to Listeria (Corrier et al., 1987). The enhanced 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 273 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects response was attributed to increased migration of macrophages with consequent elevation in phagocytic capacity or to altered T-cell regulatory activity (Corrier, 1991). Cytokine gene expression The capacity of DON and other trichothecenes to influence cytokine gene expression under in vitro conditions involves transscriptional and /or posttransscriptional mechanisms (Ouyang et al., 1996, Li et al., 1997), and protein synthesis appears to be mechanistically involved in these effects. Mitogenic stimulation is necessary for in vitro studies where DON or other protein synthesis inhibitors have been shown to superinduce cytokine secretion or mRNA abundance (Miller and Atkinson, 1987). In contrast to the studies in vitro, mouse exposure to DON directly enhanced mRNA expression for a wide range of cytokines including tumor necrosis factor-α (TNF- α), IL-1ß, IL-6, IL-12p40, interferon-γ (IFN-γ), IL2, IL-4, and IL-10 in spleen and Peyer´s patches, with complete recovery occurring 24 h after a single exposure (Azcona-Olivera et al., 1995, Zhou et al., 1997). However, information is lacking regarding the effect of chronic feeding of grains naturally contaminated with Fusarium mycotoxins on cytokine expression in chicken. The ability of deoxynivalenol to alter the expression of cytokines transiently is important because such effects can disrupt normal regulation of a wide variety of immune functions. Deoxynivalenol can upregulate cytokine production in murine models in vitro and in vivo (Wong et al., 1998). The effect of DON on cytokine mRNA expression in groups of mice were investigated after a single oral dose of deoxynivalenol at 0, 0.1, 0.5, 1, 5, or 25 mg/kg bw. The abundance of cytokine mRNA in spleen and Peyer´s patches was assessed 2 h after exposure by reverse transcriptase-polymerase chain reaction in combination with hybridization analysis. At 5 and 25 mg/kg bw, DON significantly induced the mRNAs for the proinflammatory cytokines IL-1 ß, IL-6, and TNF-alpha, the T helper-1 cytokines IFN--γ and the T helper-2 cytokines IL-4 and IL-10, whereas lower doses had no effect (Zhou et al.,1997). Girgis et al. (2008) found that the Interferon- (IFN- ) gene expression in caecal tonsils was upregulated in challenged birds with coccidia fed the contaminated diet at the end of the challenge period. Interestingly, IL-1, IL-6, and TNF-α have all been experimentally shown to cause anorexia and weight loss (Schobitz et al., 1994). Thus, it might be speculated that cytokine elevation contributes to the lethal toxic effects observed with DON, as well as the aforementioned chronic effects, feed refusal and reduced weight gain. In conclusion, DON was shown to decrease the total numbers of white blood cells, CD4+ and CD8+ Tlymphocytes and B-lymphocytes, and biliary IgA concentration. It was concluded that Fusarium mycotoxins modulate the avian immune system. This modulation involves alteration of gene expression. Therefore, the capacity of DON to alter normal immune function has been of particular interest. Because subtle changes in haematologic or immunologic parameters could affect productivity or disease susceptibility, particularly in young chickens, caution should be exercised when utilizing DON-contaminated feedstuffs to formulate poultry diets. Seite 274 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects References BONDY, G.S., PESTKA, J.J., 2000. Immunomodulation by fungal toxins. J. Toxicol. Environ. Health B. Crit. Rev. 3, 109–143. Chowdhury, S.R., Smith, T.K., Boermans, H.J., Sefton, A.E., Downey, R., Woodward, B., 2005. Effects of feeding blends of grains naturally contaminated with Fusarium mycotoxins on performance, metabolism, hematology, and immunocompetence of ducklings. Poult. Sci. 84, 1179–1185. Corrier, D.E., 1991. Mycotoxicosis: Mechanisms of immunosuppression. Vet. Immunol. Immunopathol. 30, 73-87. Corrier, D.E., Ziprin, R. L., Mollenhauer, H H., 1987. Modulation of cell-mediated resistance to listeriosis in mice given T-2 toxin. Toxicol. Appl. Pharmacol. 89, 323–331. Dänicke, S., Matthes, S., Halle, I., Ueberschär, K.H., Doll, S., Valenta, H., 2003. Effects of graded levels of Fusarium toxincontaminated wheat and of a detoxifying agent in broiler diets on performance, nutrient digestibility and blood chemical parameters. Br. Poult. Sci. 44, 113-126. Franki T., Rezar, V., Salobir. J., 2006. Nucleotide Supplementation Eliminates Leukocyte DNA Damage Induced By T-2 Toxin and Deoxynivalenol In Broiler Chickens. Krmiva 48, Zagreb, 6, 323-326. Girgis, G. N., Sharif, S., Barta, J.R., Boermans, H. J., Smith, T., 2008. Immunomodulatory Effects of Feed-Borne Fusarium Mycotoxins in Chickens Infected with Coccidia. Experimental Biology and Medicine, 10.3181/0805-RM-173. Goldsby, R.A., Kindt, T.H., Osborne, B.A., 2000. Kuby Immunology. W.H. Freeman and Company, New York. Harvey, R.B., Kubena, L.F., Huff, W.E. Elissalde, M.H., Phillips, T.D., 1991. Heamatological and immunological toxicity of deoxynivalenol contaminated diets to growing chickens. Bull. Eniviron.Contam.Toxicol. 40, 410-416. Holsapple, M. P. 1995. The plaque forming cell response in immunotoxicity: An approach to monitoring the primary effector functions of B lymphocytes. Page 71 in Methods in Immunotoxicology. G. R. Burleson, J. H. Dean, and A. E. Munson, ed. WileyLiss, New York. Li, S., Ouyang, Y.L., Dong, W., Pestka, J.J., 1997. Superinduction of IL-2 gene expression by vomitoxin (Deoxynivalenol) involves increase mRNA stability. Toxicol. Appl. Pharmacol. 147, 331-342. Miller K, Atkinson, H.A., 1987. The in vitro effects of trichothecenes on the immune system. Arch Toxicol Suppl 11, 321-324. Minervini, F., Dong, W., Pestka, J., 1993. In vitro vomitoxin exposure alters Ig A and Ig M secretion by CH12LXB cells . Mycophathologia 121, 33-40. Ouyang, Y.L., Azcona Olivera, J.I., Murtha, J.M., Pestka, J.J., 1996. Vomitoxin mediated IL2,IL4 and IL5 superinduction in murine CD4+ T cells stimulated with phorbol ester calcium ionophore: relation to kinetics of poliferation. Toxicol. Appl. Pharmacol.138, 324-334. Pestka, J.J., Dong, W., 1994. Progressive Serum IgE Elevation in the B6C3F1 Mouse Following Withdrawal of Dietary Vomitoxin (Deoxynivalenol). Fundament. Appl. Toxicol. 22, 314-316. Rotter, B., Prelusky D.B., Pestka, J.J., 1996. Toxicology of Deoxynivalenol (Vomitoxin). J. Toxicol. Environ. Health 48, 1– 34. Russell, M.W., Brown, T.A., Mestecky, J., 1981. Role of serum IgA: Hepatobiliary transport of circulating antigen. J. Exp. Med. 153, 968–976. Schobitz, B., De Kloet, E.R., Holsboer, F., 1994. Gene expression and function of interleukin1, interleukin 6 and tumour necrosis factor in the brain. Progr. Neurobiol. 44, 397-432. Swamy, H.V.L.N., Smith, T.K., Cotter, P.F., Boermans, H.J., Seftons, A.E., 2002. Effects of feeding blends of grains naturally contaminated with Fusarium mycotoxins on production and metabolism in broilers. Poult. Sci. 81, 966–975. Swamy, H.V.L.N., Smith, T.K., Karrow, N.A., Boermans, H.J., 2004. Effects of feeding blends of grains naturally contaminated with Fusarium mycotoxins on growth and immunological parameters of broiler chickens. Poult. Sci. 83, 533–543. Warner, R.L., Brooks, K., Pestka, J.J., 1994. In vitro effects of vomitoxin (Deoxynivalenol) on lymphocyte function: enhanced interleukin production and help for IgA secretion. Food Chem. Toxicol. 32, 617–625. Wong, S.S., Zhou, H.R., Marin-Martinez, M.L., Brooks, K., Pestka, J.J. 1998. Modulation of IL-1, IL-6 and TNF- Secretion and mRNA Expression by the Trichothecene Vomitoxin in the RAW 264.7 Murine Macrophage Cell Line. Food Chem. Toxicol. 36, 409-419. Zhou, H.R., Yan, D., Pestka, J.J., 1997. Differential cytokine mRNA expression in mice after oral exposure to the trichothecene vomitoxin (Deoxynivalenol): Dose response and time course. Toxicol. Appl. Pharmacol. 144, 294-305. Autorenanschrift Ph.Dr. Wageha Awad Freie Universität Berlin, Fachbereich Veterinärmedizin, Institut für Tierernährung, Brümmerstr. 34, D-14195 Berlin 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 275 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects In-vitro-Versuche zur Reduktion von Salmonellen im Schweinefutter U. Müller1*, H. Brüssel1, H. Sauerwein1 und A. Steinbeck2 1 Universität Bonn, Institut für Tierwissenschaften 2 Dr. Eckel GmbH, Niederzissen Einleitung Bei den Erkrankungen, die auf pathogene Bakterien in Lebensmitteln zurückzuführen sind, werden häufig Salmonellen identifiziert. Aufgrund der Meldepflicht von Salmonellen nach dem Infektionsschutzgesetz wurden im Jahr 2007 insgesamt 55.400 Erkrankungsfälle in Deutschland registriert (RKI 2007). Sehr häufig sind Lebensmittel tierischer Herkunft betroffen, wobei wiederum Geflügelprodukte und Schweinefleisch als besonders gefährdet gelten (Foley et al., 2008). Die häufigste beim Schwein isolierte Salmonellen-Art war in amerikanischen Untersuchungen Salmonella typhimurium, wobei von den zehn Serovaren, die gewöhnlich bei Infektionen des Menschen isoliert werden, sechs auch die am häufigsten bei Schweinen und bei Geflügel nachgewiesenen Salmonellenarten sind. Hiervon sind wiederum Salmonella typhimurium und Salmonella enteritidis am häufigsten (EFSA, 2008 a,b; Foley et al., 2008). Nach Angaben des Robert Koch Institut (RKI) wurden im Jahr 2007 71% der gesamten Salmonellosefälle durch eben diese Serovare hervorgerufen. Von allen Bemühungen derartige Kontaminationen einzudämmen, haben diejenigen, die direkt beim Erzeuger ansetzen, die größte Bedeutung (Vugia et al., 2002). Eine effektive Salmonellenkontrolle ist daher nicht erst seit Inkrafttreten der Schweine-Salmonellen-Verordnung im Jahr 2007 ein sehr wichtiges Ziel in den landwirtschaftlichen Betrieben. Die Verordnung fordert eine Kategorisierung aller Schweinemastbetriebe hinsichtlich des Salmonellen-Antikörper-Status der Schlachttiere. Auch die Vorschriften für Legehennenbetriebe werden sich in Zukunft weiter verschärfen: Die EU-Kommission sieht beispielsweise vor, schon ab 2009 Eier aus infizierten Beständen komplett vom Verkauf als Frischeier auszuschließen. Eier aus solchen Beständen dürfen dann nur noch sterilisiert als Verarbeitungsware verwendet werden. Ein Eintrag von Salmonellen in den Erzeugerbetrieb kann über Futtermittel geschehen, wobei wiederum das Fütterungsmanagement die mögliche Belastung verringern, aber auch erhöhen kann. In einem systematischen Vergleich (O’Connor et al., 2008) der Studien, die verschiedene Interventionsmöglichkeiten (Futterentzug vor der Schlachtung, Ansäuern oder Hitzebehandlung des Futters, Futterstruktur, Nass- und Trockenfütterung) in Beziehung mit der Salmonellenprävalenz in den Schlachtschweinen setzten, konnten keine eindeutigen Ergebnisse ermittelt werden, was aber durch die verwendete Methodik erklärt wird: der Salmonellenstatus der Schweine wird über den Nachweis von Antikörpern bei der Schlachtung geführt; die der Antikörperbildung zugrunde liegende Seite 276 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Infektion kann aber Wochen und Monate vorher erfolgt sein. Die Arbeiten von Visscher (2006) und Offenberg (2007) zeigen hingegen, dass mit nutritiven Maßnahmen die Salmonellenprävalenz von Schweinen vermindert werden kann. Als Maßnahmen werden eine gröbere Futterstruktur sowie der Einsatz von Säuren und deren Salzen empfohlen. Futter sollte selbst primär keine Salmonellen enthalten, aber auch gegenüber primären oder sekundären Kontaminationen so gesichert sein, dass sich Salmonellen dort nicht entwickeln und vermehren können sollten. Die Futtermittelhygiene ist daher maßgeblicher Bestandteil für die Sicherung der Hygiene im Tierbestand und leistet damit auch einen wesentlichen Beitrag zur Lebensmittelsicherheit. Hinsichtlich einer möglichen Belastung mit Salmonellen kann durch Zugabe von organischen Säuren (wie Ameisen-, Propionsäure u.a.) und Säuremischungen nicht nur eine sichere Dekontamination der Futtermittel erreicht, sondern gleichzeitig eine Rekontamination bei anschließender Lagerung, Transport und Einsatz im Tierbestand verhindert werden (Strauss and Hayler, 2001). Im vorliegenden Versuch wurde die wachstumshemmende Wirkung eines kommerziellen Gemisches aus Ameisen- und Milchsäure in verschiedenen Dosierungen und mit verschiedenen Trägerstoffen in Schweinefutter untersucht. Dabei wurde eine Rekontamination des Futters mit Salmonellen simuliert, indem definierte Mengen zugesetzt und nach Inkubation mit und ohne die Zusätze anhand klassischer mikrobiologischer Anzuchtverfahren quantifiziert wurden. Material und Methoden Mehlförmiges Schweinemastalleinfutter (KM 130, Deutsche Tiernahrung Cremer GmbH und Co. KG, Düsseldorf) wurde mit einem Milch-/Ameisensäuregemisch (AntaCid, Dr. Eckel GmbH, Niederzissen, Deutschland) direkt oder über zwei mineralische Trägerstoffe S (SiO2) und V (Vermikulit) in zwei verschiedenen Dosierungen versetzt. Da die beiden Trägerstoffe ein unterschiedliches Absorptionsvermögen haben, enthielten die einzelnen Ansätze unterschiedliche Mengen an wirksamer Substanz (s.u., in Klammern) Die resultierenden Varianten waren: - 0,75 0,75 0,75 1,00 1,00 1,00 % % % % % % AntaCid AntaCid AntaCid AntaCid AntaCid AntaCid ohne Trägerstoff auf Trägerstoff S auf Trägerstoff V ohne Trägerstoff auf Trägerstoff S auf Trägerstoff V (entspricht (entspricht (entspricht (entspricht (entspricht (entspricht 0,75 % AntaCid) 0,45 % AntaCid) 0,41 % AntaCid) 1,00 % AntaCid) 0,60 % AntaCid) 0,55 % AntaCid). Als unbehandelte Kontrolle wurde eine Probe des Schweinefuttermittels ohne Zusätze mitgeführt. Ein Massenaliquot (10 g) aller 7 Varianten wurde mit Salmonella enteritidis subsp enteritica (DSM-Nr: 14221) in Form einer Suspension mit 104 KbE/g Futter infiziert und anschließend bei 20° C ± 1°C über 24 h inkubiert. Danach wurden die Proben in die jeweils 10-fache Menge gepufferten Peptonwassers überführt, nach einer Stunde wiederholten Mischens werden 1 ml in Verdünnungen zwischen 10-1 und 10-3 auf Rambachagar aufgetragen. Nach 24-stündiger Inkubation wurden die gebildeten Kolonien ausgezählt und als Prozentsatz der zugesetzten Menge an Salmonellen berechnet. Die Gesamtkeimzahl wurde ebenfalls in den verschiedenen Proben ermittelt. Es wurden insgesamt 18 Wiederholungen durchgeführt und die Daten über eine univariate zweifaktorielle Varianzanlyse (SPSS 15.0) statistisch ausgewertet. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 277 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Ergebnisse In den Kontrollproben wurden im Mittel 13,4 ± 5,2 % (Mittelwert ± Standardabweichung) der zugesetzten Salmonellenmenge wieder gefunden. Mit den verschiedenen Zusätzen lagen die Wiederfindungsraten durchweg niedriger (Abb. 1). % der zugesetzten Salmonellen 15,00 10,00 5,00 0,00 Kontrolle 0,75 % + Träger V 0,75 % + Träger S 1,00 % + Träger V 1,00 % + Träger S 0,75 % ohne Träger 1,00 % ohne Träger AntaCid % mit oder ohne Trägerstoff Abbildung 1: Wiederfindung der Salmonellen-Infektionsmenge (n = 18, Mittelwerte + SEM) in Schweinefutter mit und ohne Zusätzen In der Varianzanalyse traten keine Wechselwirkungen zwischen den Faktoren „Säurezusatz“ und „Trägerstoffzusatz“ auf; der Säurenzusatz war mit p = 0,016 von der Kontrolle verschieden, wobei es zwischen den beiden getesteten Dosierungen keine Unterschiede gab. Der Zusatz von AntaCid mit den beiden Trägerstoffen erbrachte ebenfalls geringere (p = 0,001) Wiederfindungsraten als in der unbehandelten Kontrollprobe. Mit Zusatz von Trägerstoff S oder V lagen die Wiederfindungsraten entsprechend der reduzierten Säuremenge jedoch etwas höher (p < 0,05) als bei Zugabe von AntaCid alleine. Generell waren auch die Gesamtkeimzahlen mit den Zusätzen gegenüber dem unbehandelten Kontrollfutter reduziert. Diskussion und Schlussfolgerungen Unsere Untersuchungen zeigen, dass erwartungsgemäß der Zusatz eines Ameisen- und Milchsäuregemisches in mit Salmonellen kontaminiertem Schweinefutter deren Vermehrung deutlich Seite 278 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects hemmt. In Abhängigkeit von der Dosierung des Säuregemisches und der Wahl des Trägerstoffs wurden 11 bis 47% der in unbehandeltem Futter wiedergefundenen Salmonellen nachgewiesen. Auffallend war, dass von der Menge der zugesetzten Salmonellen selbst in Futter ohne Zusatz durchschnittlich nur 13,4% nach der Inkubation noch nachweisbar waren. Dies ist wahrscheinlich auf die geringe Feuchte des verwendeten, mehlförmigen Futters zurückzuführen: Für die Entwicklung von Salmonellen gelten deutlich höhere Wasseraktivitäts- (Aw) und Feuchtigkeitswerte als beispielsweise in Getreide zu erwarten, als günstig (Opara et al., 1992; Carr et al., 1995). Inwieweit analoge Ergebnisse mit Säurezusatz und Trägerstoffen bei Verwendung von Flüssigfütterungstechnik erwartet werden können, bleibt zu prüfen. Die gewählte Inkubationstemperatur im Versuch lag tiefer als üblicherweise zur Anzucht von Salmonellen verwendet (z.B. 37°C bei Hayes et al., 2000), sollte aber praxisüblichen Bedingungen der Lagerung entsprechen. Die Ansäuerung des Futters erbrachte in allen Dosierungen und Trägerstoffkombinationen signifikant reduzierte Entwicklungsraten der Salmonellen, aber auch der Gesamtkeimzahl. Die überwiegende Zahl von Mikroorganismen gedeiht am besten in neutralen pH-Bereichen; eine Ansäuerung des Mediums hat somit in der Regel eine deutliche Verschlechterung bzw. ein völliges Sistieren ihres Wachstums zur Folge. Unsere Untersuchungen bestätigen diesen Zusammenhang und lassen somit auch für die Praxis eine deutliche Verringerung der Keimbelastung von Schweinen über das Futter erwarten. Für Salmonella konnte die positive Wirkung von Säurezusätzen in Schweinefutter bis hin zu einer verringerten Seroprävalenz und einem reduzierten Auftreten der Erreger im Tierkörper (Lymphknoten) gezeigt werden (Creus et al., 2007). Die gegenüber der direkten Applikation des Säuregemischs auf die Futterproben etwas schlechteren Werte der Kombinationen mit den Trägerstoffen resultieren aus deren unterschiedlicher Absorptionsfähigkeit und der damit geringeren applizierten Säuremenge. Ein „Spareffekt“ aufgrund trägerspezifischer Freisetzungskinetik konnte mit dem Versuch nicht gezeigt werden. Es ist bekannt, dass zumindest flüchtige organische Komponenten durch derartige Trägerstoffe gebunden und damit aus Gemischen entfernt werden können (Turan et al., 2008). Jedoch ist über die Kinetik der Bindung nichts bekannt, so dass eine Freisetzung und damit Aktivierung der Säure unter sich verändernden Bedingungen zu prüfen bleibt. Literatur Carr L.E., Mallinson E.T., Tate C.R., Miller R.G., Russek-Cohen E., Stewart L.E., Opara O.O. and Joseph S.W. (1995): Prevalence of Salmonella in broiler flocks: effect of litter water activity, house construction, and watering devices. Avian Dis. 39, 39-44. Creus E., Pérez J.F., Peralta B., Baucells F. and Mateu E. (2007): Effect of acidified feed on the prevalence of Salmonella in market-age pigs. Zoonoses Public Health. 54, 314-9. EFSA, 2008 a: Report of the Task Force on Zoonoses Data Collection on the Analysis of the baseline survey on the prevalence of Salmonella in turkey flocks, in the EU, 2006-2007 - Part A: Salmonella prevalence estimates; http://www.efsa.europa.eu/EFSA/efsa_locale-1178620753812_1178706574172.htm EFSA, 2008 b: Report of the Task Force on Zoonoses Data Collection on the Analysis of the baseline survey on the prevalence of Salmonella in slaughter pigs, in the EU, 2006-2007[1] - Part A: Salmonella prevalence estimates, http://www.efsa.europa.eu/EFSA/efsa_locale-1178620753812_1178713190037.htm Foley S.L., Lynne A.M. and Nayak R. (2008): Salmonella challenges: prevalence in swine and poultry and potential pathogenicity of such isolates. J Anim Sci. 86, E149-62. Hayes J.R., Carr L.E., Mallinson E.T., Douglass L.W. and Joseph S.W. (2000): Characterization of the contribution of water activity and moisture content to the population distribution of Salmonella spp. in commercial poultry houses. Poult Sci. 79, 1557-61. O'Connor A.M., Denagamage T., Sargeant J.M., Rajić A. and McKean J. (2008): Feeding management practices and feed characteristics associated with Salmonella prevalence in live and slaughtered market-weight finisher swine: A systematic review and summation of evidence from 1950 to 2005. Prev Vet Med. [Epub ahead of print]. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 279 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Offenberg S.V. (2007): Untersuchungen (Feldstudie) zur Salmonellenprävalenz bei Absetzferkeln unter dem Einfluss einer Kombination von gröberer Futtervermahlung und Futteradditiven (organische Säuren bzw. Kaliumdiformiat). Hannover, Tierärztl. Hochschule, Dissertation Opara O.O., Carr L.E., Russek-Cohen E., Tate C.R., Mallinson E.T., Miller R.G., Stewart L.E., Johnston R.W. and Joseph S.W. (1992,1993): Correlation of water activity and other environmental conditions with repeated detection of Salmonella contamination on poultry farms. Avian Dis. 36, 664-71. Erratum in: Avian Dis; 37, 635. RKI (Robert Koch Institut) (2007): Robert-Koch-Institut – Jahresstatistik nach Bundesland Infektionsepidemiologisches Jahrbuch für http://www.rki.de/cln_100/nn_196882/DE/Content/Infekt/Jahrbuch/Jahrbuch2007.html 2006 und 2007, 2007, Strauss, G. and Hayler R. (2001): Effects of organic acids on microorganisms. Feed Magazine 4, 147-151 Turan N.G., Akdemir A. and Ergun O.N. (2008): Removal of volatile organic compounds by natural materials during composting of poultry litter. Bioresour Technol. [Epub ahead of print]. Visscher C.F. (2006): Untersuchungen (Feldstudie) zur Salmonellen-Prävalenz bei Mastschweinen unter dem Einfluß einer gröberen Futtervermahlung sowie von Futteradditiven (organische Säuren bzw. Kaliumdiformiat). Hannover, Tierärztl. Hochschule, Dissertation Vugia D., Hadler J., Chaves S., Blythe D., Smmith K., Morse D., Cieslak P., Jones T., Cronquist A., Goldman D., Guzewich J., Angulo F. and Griffin P.R. Tauxe (2002): Preliminary food-net data on the incidence of foodborne illness – selected sites, United States,. MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep. 52, 340-343. Autorenanschrift AOR Dr. Ute Müller Institut für Tierwissenschaften, Abteilung Physiologie und Hygiene Universität Bonn Katzenburgweg 7-9, D-53115 Bonn e-Mail: [email protected] Seite 280 7. BOKU-Symposium Tierernährung Firmensponsoring – Dr. Eckel GmbH, Im Stiefelfeld 10, D-56651 Niederzissen 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 281 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects DGGE basiertes Monitoring der Darmmikrobiota des Schweins Agnes Petersson1, Konrad J. Domig1, Philipp Nagel2, Werner Zollitsch2, Werner Hagmüller3 und Wolfgang Kneifel1 1 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und technologie, Abteilung für Lebensmittelmikrobiologie und –hygiene 2 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Nachhaltige Agrarsysteme, Institut für Nutztierwissenschaften 3 LFZ- Raumberg Gumpenstein, Außenstelle Landwirtschaft und Biodiversität der Nutztiere Wels, Institut für Biologische Einleitung Die Darmmikrobiota des Schweins wird durch eine komplexe Bakteriengemeinschaft, die von anaeroben Gram-positiven Bakterien dominiert wird charakterisiert. Aufgrund ihres Einflusses auf Ernährungs-, physiologische und immunologische Prozesse, sowie auf die Entwicklung der Tiere, spielt die Darmmikrobiota des Schweins eine große Rolle im Gesundheitsstatus und der Leistungsfähigkeit der Tiere (Richards et al., 2005). Die C. leptum Untergruppe (Cluster IV) beinhaltet zahlreiche butyrat-produzierende und fibrolytische Bakterienarten, einschließlich verschiedener Arten, die zu den Gattungen Clostridium, Eubacterium und Ruminococcus zählen und können die Darmgesundheit beeinflussen. Da die Mehrzahl der Bakterien der Darmmikrobiota schwer kultivierbar sind, wird intensiv nach kulturunabhängigen Methoden gesucht. Es wurden spezifische Sonden und Primer für die C. leptum Untergruppe designt und eingesetzt, um Bakterienpopulationen mit Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH), Dot Blot Hybridisierung und Real-Time PCR zu quantifizieren (Shen et al., 2006; Saunier et al., 2005). Ziel dieser Arbeit war, die Auswirkungen verschiedener Futterzusätze auf die Darmmikrobiota des BioMastschweins, im Besonderen auf die Clostridium leptum Untergruppe festzustellen. Um die Effekte der Futterzusätze auf die intestinale Mikrobiota zu verifizieren und die Mechanismen ihrer Wirkung zu erklären, sind eine gute Methodenstrategie und brauchbare Werkzeuge zur Charakterisierung der Darmmikrobiota essentiell. In dieser Arbeit wurde die Denaturierende Gradienten Gelelektrophorese (DGGE) als Analysenstrategie gewählt, da sie die Detektion von Verschiebungen bakterieller Gemeinschaften, sei es zeitlich bedingt oder durch verschiedene Futterbehandlungen hervorgerufen, erlaubt (Muyzer und Smalla, 1998). Dazu wurden Fäzes- und Colonproben der Schweine mit einem für die Clostridium leptum Untergruppe spezifischen Primerpaar auf ihr DGGE-Bandenmuster untersucht. Die Diversität einer Bakteriengemeinschaft kann durch die Anzahl der erfassten Banden ermittelt werden (Gong et al., 2008). Ziel der Arbeit war festzustellen, ob die Fütterung einen Einfluss auf die Seite 282 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Anzahl der Banden im DGGE-Profil hat und somit auf eine unterschiedliche Diversität der C. leptum Untergruppe geschlossen werden kann. Material und Methoden Im Zuge einer Fütterungsstudie, die Teil des EU-Projekts „Quality Low Input Food“ ist, wurden 76 Schweine mit vier verschiedenen Futterbehandlungen (Kontrollgruppe (KG), KG + Grassilage, KG + Maissilage und KG + Probiotikum gefüttert (Nagel et al., 2007). 3 Fäzes- und 5 Darminhaltsproben (Magen, Duodenum, Ileum, Caecum und Colon) wurden pro Tier gezogen und in sterilen Plastiksäcken in anaerober Atmosphäre (GENbag® anaer, Biomerieux, Marcy l'Etoile, Frankreich) bei - 80°C gelagert. Mit Hilfe des QIAamp® DNA Stool Mini Kits (Qiagen, Hilden, Deutschland) wurde die DNA aus den Proben isoliert. Für die hier beschriebenen Untersuchungen wurden die vor der Schlachtung zuletzt gezogenen Fäzes- und die Colonproben aller 76 Tiere herangezogen. Ausgehend von den isolierten DNA-Proben erfolgte die Amplifizierung mittels PCR in einem Mastercycler (Eppendorf, Hamburg, Deutschland), wobei das für die Clostridium leptum Untergruppe spezifische Primerpaar sg-Clept-F/sg-Clept-R3-GC eingesetzt wurde. Folgendes PCR-Programm kam zum Einsatz: initiale Denaturierung bei 95°C für 5 Minuten, 30 Zyklen mit Denaturierung bei 95°C für 30 Sekunden, 50°C Annealingtemperatur für 40 Sekunden und Extension bei 72°C für 1 Minute und anschließender finalen Extension bei 72°C für 5 Minuten (Scanlan et al., 2006). Die amplifizierten PCRProdukte wurden in einer Agarosegelelektrophorese bestätigt. Weiters wurde die DGGE zur Auftrennung der PCR-Fragmente im Bio-Rad DCode™ Universal Mutation Detection System (Bio-Rad, München, Deutschland) durchgeführt. Dazu kamen 8%ige Polyacrylamidgele mit einem linearen denaturierenden Gradient von 35 - 55% zum Einsatz. Die Elektrophorese wurde bei 60°C und 70 V für 16 h ausgeführt. Anschließend wurden die DNA-Banden durch Färbung mit Ethidiumbromid visualisiert und mit Hilfe der Software BioNumerics (Version 5.0, Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Belgien) ausgewertet. Tabelle 3: eingesetzte Primer 1 Primer Sequenz (5´- 3´) sg-Clept-F GCA CAA GCA GTG GAG T sg-Clept-R3-GC CTT CCT CCG TTT TGT CAA Spezifität Clostridium leptum Untergruppe Clostridium leptum Untergruppe Annealing Temp (°C) DGGE Gradient (%) Literatur 50 35 – 55 Scanlan et al., 2006 50 35 - 55 Scanlan et al., 2006 GC-Klammer (5´-CCC GCC GCG CCC CGC GCC CGT CCC GCC GCC CCC GCC CG-3´) angehängt an das 5´-Ende des Primers Ergebnisse und Diskussion Fäzes- und Colonproben von 76 Bio-Mastschweinen wurden mit dem Primerpaar sg-Clept-F/sg-CleptR3-GC, das spezifisch für die C. leptum Untergruppe ist, auf ihr DGGE-Profil untersucht. Die angegebenen PCR- sowie DGGE-Bedingungen stellten sich als geeignet für die folgende Fragestellung 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 283 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects heraus. Alle PCR-Produkte konnten durch den Einsatz einer Agarosegelelektrophorese bestätigt werden. Abbildung 1 zeigt für die C. leptum Untergruppe typische DGGE-Bandenprofile ausgewählter Fäzes- und Colonproben des Schweins. L 155 461 477 684 457 121 122 117 647 146 Lb23 Lb5 Lb3 Lb13_2 Lb13_3 Abbildung 5: PCR-DGGE Analyse der Clostridium leptum-Untergruppe ausgewählter Fäzes- und Colonproben; L: Ladder bestehend aus unterschiedlichen Lactobacillus Arten (Referenzsystem): Lb23 L. plantarum; Lb5 L. johnsonii; Lb3 L. gasseri; Lb99 L. jensenii; Lb6 L. crispatus; Lb13 L. reuteri; Lb197 L. rhamnosus Die Anzahl der im DGGE-Profil ersichtlichen Banden kann als Indikator für die Diversität der Bakterienpopulationen herangezogen werden (Gong et al., 2008) und wurde für alle untersuchten Proben ermittelt. Der Mittelwert der Anzahl der Proben lag bei 17 Banden, wobei ein Minimalwert von 5 und ein Maximalwert von 27 Banden erreicht wurden. Betrachtet man die einzelnen Fütterungsgruppen konnten folgende Ergebnisse erzielt werden: Maissilagegruppe durchschnittlich 16 Banden mit einem Minimalwert von 5 und einem Maximalwert von 21 Banden; Kontrollgruppe durchschnittlich 18 Banden mit einem Minimalwert von 6 und einem Maximalwert von 25 Banden; Grassilagegruppe durchschnittlich 18 Banden mit einem Minimalwert von 11 und einem Maximalwert von 27 Banden und Probiotikumgruppe durchschnittlich 17 Banden mit einem Minimalwert von 12 und einem Maximalwert von 22 Banden. Betrachtet man die durchschnittliche Anzahl der DGGE-Banden pro Fütterungsgruppe, können nur minimale Unterschiede zwischen den Fütterungsgruppen festgestellt werden (Abbildung 2), während die Unterschiede innerhalb der Gruppen wesentlich größer sind. Die Denaturierende Gradienten Gelelektrophorese ist ein aussichtsreiches Werkzeug, um die Diversität von Bakterienpopulationen in Umweltproben zu ermitteln. Die untersuchten Fäzes- und Colonproben der Bio-Mastschweine zeigten in Bezug auf die C. leptum Untergruppe keine Unterschiede zwischen den Fütterungsgruppen, allerdings große Inhomogenitäten innerhalb der Fütterungsgruppen. Dieser Seite 284 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Sachverhalt lässt auf einen starken individuellen und wirtsspezifischen Einfluss auf die Darmmikrobiota schließen. Abbildung 6: Anzahl der DGGE-Banden (Mittelwert) pro Fütterungsgruppe; M: Maissilagegruppe; K: Kontrollgruppe; G: Grassilagegruppe; P: Probiotikumgruppe Danksagung Kernbereiche dieser Arbeit wurden dankenswerterweise von der H. Wilhelm Schaumann Stiftung (Hamburg, Deutschland) finanziert (Forschungsstipendium für Agnes Petersson und Laborverbrauchsmaterial). Literatur Gong J, Yu H, Liu T, Li M, Si W, De Lange CFM, Dewey C. 2008. Characterization of ileal bacterial microbiota in newly-weaned pigs in response to feeding lincomycin, organic acids or herbal extract. Livestock Science 116:318–322. Muyzer und Smalla, 1998. Application of denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and temperature gradient gel electrophoresis (TGGE) in microbial ecology. Antonie van Leeuwenhoek 73:127–141. Nagel P, Domig KJ, Hagmüller W, Pfalz S, Kronsteiner S, Ortner B, Sundrum A, Zollitsch W. 2007. Effects of silage or probiotics on performance and gut microbial composition of organic growing-finishing pigs. 6. BOKU-Symposium Tierernährung, Sekundärwirkungen von Futterinhaltsstoffen – vom Nährstoff zum Wirkstoff; 15 November 2007; Wien, Österreich. Richards JD, Gong, J, De Lange CFM. 2005. The gastrointestinal microbiota and its role in monogastric nutrition and health with an emphasis on pigs: Current understanding, possible modulations, and new technologies for ecological studies. Canadian Journal of Animal Science 85:421-435. Saunier K, Rougé C, Lay C, Rigottier-Gois L, Doré J. 2005. Enumeration of bacteria from the Clostridium leptum subgroup in human faecal microbiota using Clep1156 16S rRNA probe in combination with helper and competitor oligonucleotides. Systematic and Applied Microbiology 28:454-464. Scanlan PD, Shanahan F, O´Mahony C, Marchesi JR. 2006. Culture-independent analyses of temporal variation of the dominant fecal microbiota and targeted bacterial subgroups in Crohn’s disease. Journal of Clinical Microbiology 44(11):3980–3988. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 285 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Shen J, Zhang B, Wei G, Pang X, Wie H, Li M, Zhang Y, Jia W, Zhao L. 2006. Molecular profiling of the Clostridium leptum subgroup in human fecal microflora by PCR-Denaturing gradient gel electrophoresis and clone library analysis. Applied and Environmental Microbiology 72(8):5232-5238. Autorenanschrift DI Agnes Petersson Abteilung für Lebensmittelmikrobiologie und –hygiene Department für Lebensmittelwissenschaften und -technologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel-Strasse 33, A-1180 Wien E-mail: [email protected] Seite 286 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Vergleich des Antibiotikaresistenzverhaltens von LaktobazillenIsolaten tierischer und menschlicher Herkunft Sigrid Mayrhofer1, Konrad J. Domig1, Christiane Mair1, Ernst Amtmann2 und Wolfgang Kneifel1,3 1 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie, Abteilung Lebensmittelmikrobiologie und –hygiene 2 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie, Abteilung Lebensmittelchemie 3 Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie, Abteilung für Lebensmittelqualitätssicherung Einleitung Der Einsatz von Antibiotika ist seit ihrer Entdeckung Mitte letzten Jahrhunderts drastisch gestiegen. Sowohl in der Humanmedizin, als auch in der Veterinärmedizin werden diese therapeutisch und prophylaktisch genutzt. Seit 1960 wurden Antibiotika in der Landwirtschaft nicht nur zur Behandlung und Vermeidung von Krankheiten beim Nutztier eingesetzt, sondern auch als Leistungsförderer (Anonym, 1999). Dabei haben subtherapeutische Gaben von Antibiotika einen Effekt auf die Mikroflora des Darms. Sie schädigen pathogene Keime letal oder subletal und vermindern damit zusätzlich die Produktion von bakteriellen Toxinen. Zudem wird die Synthese von mikrobiellen, wachstumshemmenden Metaboliten verringert und die Absorption von Nährstoffen verbessert (Dibner und Richards, 2005). Mit der Zunahme von resistenten Mikroorganismen begann jedoch ein Umdenken bei der Verwendung von Antibiotika. Mit Jänner 2006 wurden daher Antibiotika als Leistungsförderer beim Nutztier in der EU verboten (Anonym, 2002). In einigen europäischen Ländern, in denen Antibiotika als Leistungsförderer bereits früher verboten wurden, kam es in den darauffolgenden Jahren zum Anstieg des therapeutischen Antibiotikaeinsatzes, um die resultierenden, gesundheitlichen Probleme bei Nutztieren behandeln zu können. Nach Ungemach (2002) fällt in der Veterinärmedizin ein vergleichsweise hoher Tetracyclinverbrauch auf, obwohl bei diesem Antibiotikum bereits eine ungünstige Resistenzsituation vor allem im Schweineund Geflügelbereich vorherrscht. Hierbei ist bei den meisten veterinärmedizinisch relevanten Erregern schon mit mehr als 80% Resistenzen zu rechnen (Ungemach, 2002). Aufgrund des hohen Verbrauchs an Tetracyclinen zweifelt Ungemach (2002) an einem sorgfältigen Einsatz und vermutet, dass hierfür entweder keine ausreichende Indikationsstellung auf der Basis einer mikrobiologischen Diagnose zugrunde liegt, dass durch Dosissteigerung Resistenzen überwunden werden sollen oder dass eine versteckte Leistungsförderung getarnt als prophylaktischer Einsatz erfolgt. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 287 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Laktobazillen stellen einen wichtigen Teil der tierischen und menschlichen Darmflora dar. Erst seit kurzem werden Laktobazillen hinsichtlich ihres Resistenzverhaltens untersucht. Zuvor hatten sie diesbezüglich weder als Indikatorkeim noch als Krankheitserreger große Bedeutung. Jedoch werden Laktobazillen oft bei der Produktion von Futtermitteln und Lebensmitteln als Probiotika und Starterkulturen eingesetzt, wobei lebende Mikroorganismen in hohen Zahlen zugefügt werden (Kastner et al., 2006). Daher sollten diese Bakterien frei von erworbenen, übertragbaren Antibiotikaresistenzgenen sein (FEEDAP, 2008; FEEDAP, 2005; FAO/WHO, 2002; Henrikssson et al., 2005; von Wright, 2005), um das bereits bestehende Resistenzgenreservoir in der Darmmikrobiota nicht weiter zu erhöhen. Im Rahmen dieser Studie wurde das Resistenzverhalten von Laktobazillen Isolaten tierischer und menschlicher Herkunft gegenüber Tetracyclin verglichen, um die Auswirkung des massiven Antibiotikaeinsatzes beim Nutztier darstellen zu können. Material und Methoden Insgesamt standen 93 Laktobazillen-Isolate für die Untersuchung zur Verfügung. Hierbei waren 53 Stämme tierischer Herkunft (16 L. johnsonii, 25 L. amylovorus, 2 L. acidophilus, 3 L. crispatus, 7 L. gallinarum) und 40 Stämme menschlicher Herkunft (2 L. johnsonii, 2 L. amylovorus, 25 L. gasseri, 7 L. acidophilus, 4 L. crispatus). Das Resistenzverhalten dieser Stämme wurde mittels Etest (AB Biodisk, Solna, Schweden) gegenüber Tetracyclin überprüft. Dabei wurden zur Herstellung der Bakteriensuspension mehrere Kolonien des zu testenden Stammes in physiologische Kochsalzlösung überimpft und auf eine Dichte entsprechend des McFarland Standards 1 eingestellt. Anschließend wurde die Bakteriensuspension über die gesamte Agaroberfläche des Testmediums ausgestrichen. Nachdem das Inokulum absorbiert worden war, wurde ein Etest-Streifen auf die Oberfläche gesetzt. Die MHK (minimalen Hemmstoffkonzentration)Werte wurden nach 48-stündiger, anaerober Bebrütung nach den Vorgaben des Etest-Herstellers abgelesen. Ergebnisse Von den insgesamt 53 getesteten Stämmen tierischen Ursprungs wiesen 39 (73,6%) MHK-Werte im Bereich von 64 - >256 µg/ml auf und wurden somit als resistent beurteilt. Nur 11 Isolate (20,8%) waren mit MHK-Werten von 0,5 - 4 µg/ml sensibel, während drei Stämme (5,7%) intermediär resistent waren und MHK-Werte von 8 und 16 µg/ml aufwiesen. Dagegen war nur je ein Isolat (2,5%) von den 40 Stämmen humaner Herkunft gegenüber Tetracyclin resistent bzw. intermediär resistent. Die restlichen 38 Stämme (97,5%) waren sensibel und hatten MHK-Werte im Bereich von 0,25 - 4 µg/ml. Seite 288 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects 32 Anzahl der Isolate. 28 24 20 16 12 8 4 0 0,016 0,032 0,064 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 64 128 256 >256 MHK (µg/ml) Abb. 1: Verteilung der minimalen Hemmstoffkonzentration (MHK) gegenüber Tetracyclin bei 53 Laktobazillen-Isolaten tierischer Herkunft. 16 Anzahl der Isolate. 14 12 10 8 6 4 2 0 0,016 0,032 0,064 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 64 128 256 >256 MHK (µg/ml) Abb. 2: Verteilung der minimalen Hemmstoffkonzentration (MHK) gegenüber Tetracyclin bei 40 Laktobazillen-Isolaten humaner Herkunft. Diskussion & Schlussfolgerung Die dargelegten Ergebnisse zeigen, dass sich der Einsatz von Tetracyclin beim Resistenzverhalten der Laktobazillen widerspiegelt. Generell kann jedoch deren Einsatz als Indikatorkeim für den herrschenden Antibiotikaselektionsdruck und für zukünftig zu erwartende Probleme mit resistenten Pathogenen nicht empfohlen werden. Gründe dafür sind das anspruchsvolle Isolationsverfahren, unzureichend standardisierte Methoden für die Antibiotikaresistenztestung, fehlende Daten zur Interpretation der Ergebnisse und das Vorkommen natürlicher Resistenzen bei dieser Keimpopulation. Diesbezüglich sind E. coli und Enterokokken als Indikatorkeime besser geeignet (Gnanou und Sanders, 2000). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 289 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects In der Human- und Veterinärmedizin werden zwar dieselben Antibiotikaklassen verwendet (Teuber, 2001), es bestehen aber gewisse Unterschiede. So werden aus ökonomischen Gründen großteils alte Antibiotika wie Tetracycline für die Behandlung und Vermeidung von Krankheiten bei Nutztieren eingesetzt (Schwarz und Chaslus-Dancla, 2001). Dagegen wird dieses Antibiotikum schon seit längerem nicht mehr zu den Antibiotika erster Wahl in der Humanmedizin gezählt. Zusätzlich wurde in den vergangenen Jahren nur eine limitierte Anzahl neuer Antiinfektiva in der Veterinärmedizin zugelassen. Vielversprechende neue Klassen von Antibiotika sind nur für die menschliche Therapie reserviert (Schwarz und Chaslus-Dancla, 2001). Aufgrund der angeführten Fakten und der bereits bestehenden, bedrohlichen Resistenzsituation, die auch zu einem großen Teil durch den unkritischen Antibiotikaeinsatz in der Humanmedizin selbst verursacht worden ist, sind Leitlinien für einen sorgfältigen Umgang mit Antibiotika in der Veterinärmedizin unerlässlich. Nur unter Einbeziehung solcher Leitlinien kann die Resistenzentwicklung unter Kontrolle gehalten und ein wirksames Arsenal von Antibiotika erhalten werden (Ungemach, 2002). Bezüglich des Einsatzes von Antibiotika als Leistungsförderer zeigte eine Studie, dass auf einen solchen erfolgreich verzichtet werden kann, so lange der Gesundheitszustand der Tiere, die landwirtschaftlichen Techniken und das Management in den Betrieben gut ist (Laine et al., 2004). Außerdem wird intensiv nach Alternativen für Antibiotika als Leistungsförderer gesucht. Zu diesen zählen zur Zeit Probiotika, Präbiotika, organische Säuren, Enzyme, spezifische Nahrungsfasern, hoch verfügbare Nährstoffe sowie Kräuter und deren Extrakte (Roth und Ettle, 2005; Simpson, 2005; Wenk, 2005; Wetscherek und Windisch, 2005). Trotz des EU-weiten Verbotes von antibiotischen Leistungsförderern stellt der Einsatz von Antibiotika immer wieder ein aktuelles Thema im Spannungsfeld zwischen Tierhaltung bzw. –ernährung und Lebensmittelproduktion dar. Durch das verstärkte Auftreten resistenter Keime wird nicht nur das Arsenal an verfügbaren Antibiotika für den therapeutischen Einsatz in der Human- und Veterinärmedizin gemindert, sondern auch das Auffinden futter- und lebensmittelrelevanter Probiotika und Starterkulturen erschwert. Literatur Anonym (1999): Antimicrobial resistance, an ecological perspective – report from the American Academy of Microbiology, ASM – Press, Washington, D. C. Anonym (2002): New safety rules for feed additives and to prohibit antibiotics as growth http://www.europa.eu.int/rapid/start/cgi/guesten.ksh?p_action.gettxt=gt&doc=IP/02/466I0IRAPID&lg=EN promoters. Dibner, J.J., Richards, J.D. (2005): Antibiotic growth promoters in agriculture: history and mode of action. Poultry Science 84: 634-643 FAO/WHO (2002): Guidelines for the evaluation of probiotics in food. London, Ontario: Food Agriculture Organisation of the United Nations and World Health Organisation Working Group Report, 1-11 FEEDAP Panel (2005): Opinion of the scientific panel on additives and products or substances used in animal feed on the updating of the criteria used in assessment of bacteria for resistance to antibiotics of human and veterinary importance. The EFSA Journal 233, 1-12 FEEDAP Panel (2008): Update of the criteria used in the assessment ob bacterial resistance to antibiotics of human or veterinary importance. The EFSA Journal 732, 1-15 Gnanou, J.C., Sanders, P. (2000): Antibiotic resistance in bacteria of animal origin: methods in use to monitor resistance in EU countries. International Journal of Antimicrobial Agents 15, 311-322 Henriksson, A., Borody, T., Clancy, R. (2005): Probiotics under the regulatory microscope. Expert Opinion on Drug Safety 4, 1135-1143 Kastner, S., Perreten, V., Bleuler, H., Hugenschmidt, G., Lacroix, C., Meile, L. (2006): Antibiotic susceptibility patterns and resistance genes of starter cultures and probiotic bacteria used in food. Systematic and Applied Microbiolology 29, 145-155 Seite 290 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Laine, T., Yliaho, M., Myllys, V., Pohjanvirta, T., Fossi, M., Anttila, M. (2004): The effect of antimicrobial growth promoter withdrawal on the health of weaned pigs in Finland. Preventive Veterinary Medicine 66, 163-174 Roth, F.X., Ettle, T. (2005): Alternative zu antibiotischen Leistungsförderern. In: Tagungsband 4. BOKU-Symposium Tierernährung: Tierernährung ohne antibiotische Leistungsförderer, 28 - 33 Schwarz, S., Chaslus-Dancla, E. (2001): Use of antimicrobials in veterinary medicine and mechanism of resistance. Veterinary Research 32, 201-225 Simson, O. (2005): Mikroorganismen als Futterzusatzstoffe: Probiotika – Wirksamkeit und Wirkungsweise. In: Tagungsband 4. BOKU-Symposium Tierernährung: Tierernährung ohne antibiotische Leistungsförderer, 10 – 16 Teuber, M. (2001): Antibiotikaresistente Bakterien in Lebensmitteln. Mitteilungen aus Lebensmitteluntersuchung und Hygiene 92, 10-27 Ungemach, F.R. (2002): Einsatz von Antibiotika in der Veterinärmedizin: Konsequenzen und rationaler Umgang. In: Antibiotika und Resistenzen, Symposium, März 2002 – Graz, 45 – 55 von Wright, A. (2005): Regulating the safety of probiotics - The European approach. Current Pharmaceutical Design 11, 17-23 Wenk, C. (2005): Einsatz von Kräutern und deren Extrakten in der Tierernährung: Erwartungen und Möglichkeiten. In: Tagungsband 4. BOKU-Symposium Tierernährung: Tierernährung ohne antibiotische Leistungsförderer, 17 – 27 Wetscherek-Seipelt, G. Windisch, W. (2005): Effekt eines Probiotikums auf die Leistung von Absatzferkel. In: Tagungsband 4. BOKU-Symposium Tierernährung: Tierernährung ohne antibiotische Leistungsförderer, 81 – 88 Autorenanschrift Dr. Sigrid Mayrhofer Universität für Bodenkultur Wien Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie Abteilung für Lebensmittelmikrobiologie und –hygiene [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 291 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Biogasverluste durch Nacherwärmung - Einfluss der aeroben Stabilität auf die Biogasausbeute von Praxissilagen aus Österreich Dirk Banemann1, Gottfried Scheikl2 und Michael Nelles1 1. Universität Rostock, Agrar- und Umweltwissenschaftliche Fakultät, Institut für Umweltingenieurwesen, Fachgebiet Abfall- und Stoffstromwirtschaft, Justus-vonLiebig-Weg 6, D-18059 Rostock/Deutschland 2. Wilhelm Schaumann GmbH & Co KG, Jacob Fuchs-Gasse 25-27, 2345 Brunn am Gebirge/Österreich Einleitung Ziel für den wirtschaftlichen Betrieb einer Biogasanlage muss die maximale Methanausbeute pro eingesetztem Hektar Ackerfäche sein. Dies bedeutet die Reduzierung aller vermeidbaren Verluste von der Ernte über die Silierung bis zum Fermenter. Bei Einhaltung der guten fachlichen Silierpraxis kann Nacherwärmung zu großen Energieverlusten führen. Nacherwärmung kann überall dort auftreten wo Silagen mit Luftsauerstoff in Kontakt kommen und sich Hefen und andere Schadorganismen ungehindert vermehren können. In der Praxis besonders gefährdet ist die Silage an der Anschnittsfläche, bei einem möglichen Transport, während einer Zwischenlagerung und während der Zeit im Vorlagebehälter der Biogasanlage. Neben einer verfahrenstechnischen Optimierung, Anpassen der Silogeometrie an die tägliche Futtermenge zur Einhaltung des geforderten Mindestvorschubs einer Reduzierung der Lagerung von Silage in geschütteter Form (Transportwagen, Zwischenlagerung), kommt der Anpassung des Gärsäuremusters eine wichtige Funktion zu, Nacherwärmung zu verhindern. Im nachfolgenden Beitrag werden anhand von fünf Praxissilagen aus Österreich der Einfluss der Nacherwärmung auf die Biogasausbeute dargestellt. Anhand einer weiteren Silage werden Nacherwärmung und die dabei auftretenden Stoffwechselvorgänge dargestellt. Methodik Die untersuchten Praxissilagen wurden von unterschiedlichen Betrieben aus der jeweilig frischen Anschnittsfläche entnommen. Das aus den Praxissilos entnommene Material wurde geteilt und ein Teil dem standardisierten Verfahren nach Honig zur Bestimmung der aeroben Stabilität unterzogen (Honig, 1990) sowie auf Silageparameter hin untersucht. Der restliche Teil wurde bis zur Methanpotentialbestimmung im Batch eingefroren. Seite 292 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Zwei der fünf Silagen waren unbehandelte Silagen „Kontrollsilagen“, drei Silagen wurden während des Ernteprozesses mit einem heterofermentativen Siliermittel behandelt. Die Wirksamkeit des biologischen Siliermittels wird durch das geringere Milchsäure/Essigsäure-Verhältnis gegenüber der Kontrollsilage bzw. dem höheren 1,2-Propandiolanteil in den behandelten Silagen bestätigt, dargestellt sind Mittelwerte aus zwei bzw. drei Silagen (Tabelle 1). Die Gärsäureanalytik erfolgte mittels HPLCAnalytik (Gerät Knauer, Säule BioRad). Die Trockenmassekorrektur erfolgte nach Weißbach 2008. Tabelle 4 Verschiedene Praxissilagen wurden auf ihr Gärsäuremuster hin untersucht und die aerobe Stabilität ermittelt Kontrollsilagen Behandelte Silagen Milchsäure [% TMK] 6,7 4,3 Essigsäure [% TMK] 2,3 3,3 MS : ES 2,9 1,3 1-2 Propandiol [% TMK] 0,1 0,9 Berechnete Honig-Verluste nach 3 Tagen [% FM] 4,7 1,1 Im Standardisierten Verfahren nach Honig kann mittels Temperaturfühlern die durch Lufteinfluss entstehende Temperaturerwärmung innerhalb der Silage gemessen werden. Die während des Silierprozesses entstehenden Säuren (hauptsächlich Milch- und Essigsäure) schützen die Silage während der anaeroben Lagerung vor Abbau durch unerwünschte Silageschädlinge. Nach Öffnung der Silage und in Gegenwart von Luftsauerstoff können sich Silageschädlinge (Hefen, Schimmelpilze) rasch vermehren. Eingeleitet wird der aerobe Verderb durch den Abbau der in der Silage vorhandenen Säuren, beteiligt sind hieran allen voran Hefen die während des Silierprozesses in ihrem Stoffwechsel gehemmt sind (Pahlow, 2003). Indikator für die aeroben Stoffwechseltätigkeiten ist die Temperaturerwärmung der Silage. Die Bestimmung des Methanpotentials der Silagen direkt aus der Anschnittsfläche und den Silagen nach Lagerung unter Luftstress erfolgte im GRW-Biogas-Batch-System (Fritz, 2007). Je Batch-Ansatz wurden 300 gr. Frischmasse eingewogen. Je Behandlung wurde eine Dreifach-Bestimmung durchgeführt. Ergebnisse Die Bestimmung der aeroben Stabilität einer herkömmlich fermentierten Silage zeigt eine charakteristische Erwärmungskurve während der Lagerung unter Luftsauerstoff im Honig-Test (Abbildung 1). Nach 72 Stunden hat sich die Silage um 3 Kelvin gegenüber ihrer Umgebungstemperatur erwärmt und die aerobe Stabilität ist nach Definition gebrochen (DLG, 2006). Nach einem lokalen Maximum von fast 40°C klingt die Temperatur wieder leicht ab um im Weiteren 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 293 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects wieder auf 45°C anzusteigen und einen charakteristischen Kamelhöcker im Temperaturverlauf zu bilden. 50 Gew.- Verluste: 1,6 % Gew.- Verluste: 7,2 % Temperatur [°C] 45 40 Silagetemperatur Raumtemperatur Umgebungstemperatur + 3°C 35 30 25 20 0 24 48 72 96 Stunden [h] 120 144 168 Abbildung 7 Temperaturverlauf im Honig-Test einer herkömmlich silierten Maissilage Untersuchungen dieser Silage auf den Gehalt an Gärsäuren zeigen, dass nach 84 Stunden weniger als 50% der Milch- und Essigsäure noch in der Silage vorhanden sind und 1,2-Propandiol unterhalb der Nachweisgrenze liegt. Zum Zeitpunkt 158 Stunden sind alle Gärprodukte fast vollständig abgebaut (Tabelle 2). Tabelle 5 Abbau der Gärsäuren in einer herkömmlich fermentierten Silage während einer Lagerung unter Luftsauerstoff % d. FM Beginn ASTA Nach 84 Std. ASTA Nach 158 Std. ASTA Milchsäure 3,57 1,64 0,03 Essigsäure 0,45 0,2 0,05 1,2-Propandiol 0,34 < 0,02 < 0,02 Seite 294 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Die in dieser Arbeit vorgestellten Ergebnisse aus den Untersuchung der Praxissilagen zeigen auch den aus der Literatur bekannten positiven Effekt essigsäurereicher Silagen auf die aerobe Stabilität. Die aus der Temperaturerwärmung nach Honig berechneten Gewichtsverluste zeigen bei den nicht behandelten Silagen nach 3 Tagen deutlich höhere Verluste als Silagen, die mit einem biologischen Siliermittel behandelt wurden (Tabelle 1). Nach Bestimmung der aeroben Stabilität wurde das Material ebenfalls tiefgefroren bis zur Bestimmung des Methanertrages gelagert. Alle Silagen zeigten ohne den Einfluss der Lagerung unter Luftsauerstoff hohe Methanerträge im GRW-Batch-Test und deuten so auf qualitativ hochwertige und energiereiche Silagen hin (332 – 357 Nm³ / t TM). Das Methanbildungspotential der milchsäurereichen Silage nach Lagerung unter Luftsauerstoff lag im Mittel um ca. 14% niedriger als ohne Lagerung unter Luftsauerstoff. Die heterofermentativ silierten Silagen zeigten ein im Mittel um 7,8% geringeren Methanertrag nach Lagerung unter Luftsauerstoff und somit eine bessere Energiekonservierung unter Luftstress (Abbildung 2). 16 % - Methanverluste durch Lagerung unter Luftsauerstoff 14 12 10 8 6 4 2 0 herkömmlich 1 siliert heterofermentativ siliert 2 Abbildung 8 Durch die Behandlung mit einem heterofermentativen Siliermittel konnten die Verluste durch Nacherwärmung verringert werden Diskussion Mit der vorliegenden Arbeit wurde der Einfluss einer Lagerung von Silage unter Luftsauerstoff auf das Methanbildungspotential untersucht. Hierzu wurden 5 Praxissilagen aus Österreich im standardisierten Verfahren nach Honig auf ihre aerobe Stabilität hin untersucht. Zwei Silagen waren unbehandelte Kontrollsilagen, drei Silagen waren mit einem biologischen heterofermentativen Siliermittel behandelt worden. Der positive Einfluss der heterofermentativen Silierung auf die aerobe Stabilität wird von 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 295 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects verschiedenen Institutionen bestätigt (Danner et. al, 2002; Oude Elfering et al. ,2001). Auch in den hier vorgestellten Ergebnissen konnte gezeigt werden, dass durch eine Verhinderung der Nacherwärmung die Methanverluste begrenzt werden können. Mit einer weiteren Silage wurden Untersuchungen zur Nacherwärmung und den stofflichen Umsetzungsprozessen während der Nacherwärmung durchgeführt. Der Abbau der Gärsäuren durch Hefen hebt den pH-Wert in der Silage, weitere Gärschädlinge können nun den aeroben Verderb beschleunigen. Die durch aeroben Verderb abgebauten Säuren stehen im Biogasprozess nicht mehr zur Verfügung. Nacherwärmung von Silagen kann somit zu Verlusten im Methanertrag führen. Durch Nacherwärmung im Honig-Test reduzierte sich der Methanertrag um 14% bei Milchsäurereichen Silagen und 7,8% bei heterofermentierten Silagen. Bei steigenden Substratpreisen muss es für den wirtschaftlichen Betrieb von Biogasanlagen oberstes Ziel sein, den Energiegehalt der Pflanze, über Ernte, Silierung und anschließender Einbringung in den Fermenter, zu konservieren. Aerobe Verluste die im verstärkten Maße durch große Anschnittsflächen, lange Lagerzeit im Vorlagebehälter oder große Transportstrecken begünstigt werden, können durch die Anpassung des Gärsäuremusters minimiert werden. Literatur: Pahlow G., Muck R., Driehus F., 2003, Silage Science and Technology, Kap.2 Microbiology of Ensiling (S.30-93), Number 42 in series Agronomy Danner H., Holzer M., Mayrhuber E., Braun R., 2002, Acetic Acid Increases Stability of Silage under Aerobic Conditions, Applied and Environmental Microbiology Vol 69, No.1 Oude Elfering S., Anaerobic Conversion of Lactic Acid to Acetic Acid and 1,2-Propanediol by Lactobacillus buchneri, Applied and Environmental Microbiology, Jan. 2001, p 125-132 Fritz T., Banemann D., Engler N., Nelles M., Fricke K., Möglichkeiten und Grenzen zur Bestimmung von Biogaserträgen aus Energiepflanzen nach VDI 4630, 1. Rostocker Bioenergieforum Tagungsbeitrag DLG-Richtlinien für die Prüfung von Siliermitteln auf DLG-Gütezeichen-Fähigkeit Stand 12/06 Honig H., Evaluetion of aerobic Stability, 1990, Grovefoder, Grass and Foragereports, Proceedings of the Eurobac Converence 12-16 August 1986, Uppsala Schweden, 3, 76-82 Weißbach F., Die Korrektur des Trockensubstanzgehaltes von Maissilagen als Substrate für Biogasanlagen, Landtechnik 2008 No.2, S. 82-83 Autorenanschrift Dipl. –Ing. Dirk Banemann Universität Rostock Agrar- und Umweltwissenschaftliche Fakultät Institut für Umweltingenieurwesen, Fachgebiet Abfall- und Stoffstromwirtschaft Justus-von-Liebig-Weg 6, D-18059 Rostock E-Mail: [email protected] Seite 296 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Bacterial contamination of milk from the milking environment Jūratė Šiugždaitė, 1 Kristina Dargytė 1, Regimantas Šaulys 1 and Sabina Mikulionienė 2 1 Department of Infectious Diseases, Lithuanian Veterinary Academy, Tilžės 18, LT47181, Kaunas, Lithuania 2 Department of Crop Science and Animal Husbandry, Lithuanian University of Agriculture, Studentų g. 11, LT – 53067, Akademija, Kauno distr., Lithuania Introduction Milk has outstanding nutritional quality but also an excellent medium for bacterial growth and an important source of bacterial infection. To protect public health against milk-borne infections, there are regulations that require proper hygienic handling of milk. Raw milk as it leaves the udder of healthy cows normally contains very low numbers of microorganisms. Microbial contamination of raw milk can occur from a variety of microorganism’s sources. Milk residue left on equipment contact surfaces supports the growth of a variety of microorganisms. Raw milk may be contaminated by a wide range of bacteria, including enterotoxigenic Staphylococcus aureus, which is often involved in staphylococcal food poisoning, Bacillus cereus and Escherichia coli (Riemann, Cliver, 2006). The presence of food borne pathogens in milk is due to direct contact with contaminated sources in the dairy farm environment and to excretion from the udder of an infected animal (Donkor et al. 2007). Enterobacteria are common microorganisms found in an intestine of animal species, including cows. In most cases they are found in the excrements, which are often located on the milking equipment. Therefore, milk can easily be contaminated with Enterobacteriacea microorganisms. Staphylococcus aureus – is one of the most common agents of food intoxication. Milk and dairy products are often infected with Staphylococcus aureus enterotoxins (Morandi et al. 2007; Tirado, Schimdt, 2005). Staphylococcus sp. can be found in milk from cows' udder, teats or teat channels, especially if they contain purulent wounds. Microorganisms can also be transmitted via humans' hands or nostrils (Normanno et al. 2005). Along with the thermal processing raw milk is regulated by staphyloccocus that produce coagulation. Raw milk is not suitable for intaking in case the number of staphyloccocus reach or extend 2x103 ksv/cm3 (HN 26:2006). In general, the direct influence of natural inhabitants as contaminants in the total bulk milk count is considered to be small, and most of these organisms do not grow competitively in milk. Of more importance is the contribution of microorganisms from teats soiled with manure, mud, feeds, or 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 297 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects bedding (Siugzdaite et al. 2005). Potential environmental mastitis pathogens and/or similar organisms can occur in milk as a result of other contributing factors such as dirty cows, poor equipment cleaning and/or poor cooling (Costa et al. 1998). An increase in SCC can sometimes serve as supportive evidence that a mastitis bacterium may have caused an increase in the bulk milk bacteria count. Materials and methods A total of 56 raw milk samples and 10 milk samples with increase somatic cell count were collected from cow herd and 4 different milk collection stations. The samples were collected aseptically and transported on ice to the laboratory analysis. Analysis of the milk samples was carried out in the microbiology laboratory of the Infectious Diseases Department of the Lithuanian Veterinary Academy. All of the milk samples (66) were placed on blood agar (BA) and nutritional agar (NA) (Oxoid, England). Petri plates are cultivated in thermostat in 37ºC degree temperature for 24–48 hours. After cultivation the colour, size, and the manifestation of colony are being tested. After the estimation was processed, catalysis test was performed. Colonies that proved positive reaction were coloured according to Gram (“Diagnostica Merck“, Germany). Afterwards the smear is being inspected with a microscope. Staphylococcus aureus colonies are furtheron replanted into a selective environment – Mannital salt agar (Oxoid, England). Then plates are cultivated in thermostat in 37ºC degree temperature for 24–48 hours. Inherent Staphylococcus aureus colonies are replanted into DNase agar (Liofilchem, Italy). Petri plates were incubated in a thermostat, in 37ºC degree temperature for 24–48 hours. Rehidrated rabbit plasma coagulation reaction (Liofilchem, Italy) was parallelly performed with inherent colonies. In addition, “Staphytect Plus“test (Oxoid, England) was held to identify pathogenic staphylococcus. „Beta Lactamase Test sticks“test (Liofilchem, Italy) was performed to identify Staphylococcus aureus β lactamase. All of the milk samples (66) were placed on Drigalsky agar (carbohydrate lactosis) (Oxoid, England). Petri plates are cultivated in thermostat in 37ºC degree temperature for 24–48 hours. After the cultivation, grown colonies were estimated. Inherent colonies were coloured according to Gram (“Diagnostica Merck“, Germany). Afterwards the smear is being investigated with a microscope. In order to investigate lactose ferment and non-ferment microorganisms, colonies were replanted in MacConkey agar (Oxoid, England). Petri plates were cultivated in thermostat in 37ºC degree temperature for 24–48 hours. Furtheron the morphology of the colonies as well as the reaction on the MacConkey agar are being tested. In order to identify enterobacteria, “EnteroPluri“test (Liofilchem, Italy) was performed. After 24 hours the changing of the colour was estimated, as well as types of microorganisms. The aim of dispersive analysis (ANOVA) was to investigate Staphylococcus aureus, cow species, lactations and the amount of time a milkmaid needs to prepare the cow for milking, which influence the quality and the quantity of milk, its fatness, albumen, somatic cells count (SCC) and lactose. For this reason statistic models were composed. Staphylococcus aureus, species, lactose and the preparation of milkmaid were estimated, aiming to measure the influence made to cow's productivity and qualitative rates of milk. Data of the research is reliable when p < 0.05, p < 0.001 and p < 0.001. Reliability of arithmetic average differences was estimated according to Stjudent (Juozaitienė, Kerzienė, 2001). Chi kvadrat criterion was calculated to estimate the correlation between the analyzed rates. Research data was processed with WinExcel. Seite 298 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Results It was estimated, that the main pathogen in milk with increase somatic cell count was Staphylococcus aureus (50%), which produced majority of damages. Preliminary Staphylococcus aureus diagnosis was made from the primary culture on the basis of characteristic colony morphology and haemolysis of the colonies. Double haemolysis and the yellow colour of the colony are quite clear signs of Staphylococcus aureus. In gram-staining, small grampositive cocci are seen in irregular clusters individually or in pairs. Young cells stain strong purple, but in old cultures also gram-negative cocci are seen. In addition to staining, catalase and coagulase tests are usually need for identification. All isolates of staphylococci strains were positive for the for catalase and coagulase tests. The coagulase test was used to determine the ability of bacteria to produce the coagulase enzyme. Additional commercial test –“Staphytest Plus“on isolates identification was used. With this test the presence of an additional virulence factor- protein A can be shown. According our data the presence of Staphylococcus aureus in milk was associated with the time needed for the milkmaid to prepare cow for milking (p< 0.001) and with the increase of somatic cell counts (p<0.01). Cow species and lactation of Staphylococcus aureus do not effect the abovementioned. The investigations proved that the amount of lactose (25.8%) found in milk is affected by cow species (p < 0.05). Increase of SCC (41.6%) has influence for time needed to the milkmaid prepare cow for milking (p< 0.01). Most of the microorganisms identified in raw milk were enterobacteria – 38% (Figure 1). The isolated coliforms were gram-negative, also for the oxidase negative. Enteropluri test helped to identify species of enterobacteria found in the milk: Pantoea agglomerans, Serratia marcescens, Edwardsiella tarda and Proteus mirabilis. Occurrence of microorganisms in raw and mastitic milk samples 60% 50% 40% Staphylococcus aureus 30% Enterobacter spp. Other 20% 10% 0% Raw milk Mastitic milk Figure 1. The microorganisms isolation from cows raw and mastitic milk 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 299 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Discussion Researches proved that the dominant microorganism found in mastitic cow milk is Staphylococcus aureus (50%). Milk and dairy products are frequently contaminated with enterotoxigenic Staphylococcus aureus, which is often involved in staphylococcal food poisoning. According to Jofee and Baranovičs (2006) 95% per cent of all the cases are caused by Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae. Extracted staphylococcus comprised 100% of BA hemolysis, coagulated rehidrated plasma of a rabbit. None of the staphylococcus extracted produced ferment beta lactamase. Raw milk could be infected with pathogenic microorganism by the milkmaid, who failed to keep up to sanitary and health regulations. Such presumption could be made taking into consideration the correlation between Staphylococcus aureus and chemical-quantative rates of the milk, which were estimated according to Stjudent criterion. Completed calculations proved the intense correlation between Staphylococcus aureus and the time needed to prepare a cow for milking. In addition, the existence of Staphylococcus aureus is closely connected to SCC. Large number of somatic cells proves that cow might be infected with clinical form of mastitis; therefore Staphylococcus aureus microorganisms cross the production of milk (Haveri et al., 2005). Completed calculations according to Chi kvadrat criterion proved that the presence of S. aureus in milk as well as cow's specie and its lactation has nothing to do with each other. Disperse analysis (ANOVA) proved that cow specie influences the amount of lactose found in cow's milk by 25.8%. The increase of SCC (41.6%) is influenced by the time needed to prepare the cow for milking. Donkor et al. (2007) proved that alongside with pathogenic staphylococcus, pathogenic enterobacteria are found (38%). The mount of enterobacteria found in milk is influenced by lack of hygiene and sanitary regulations. Donkor et al. (2007) identified 35.5% of enterobacteria found in milk samples. Costa et al., (1998) state that enterobacteria cross daily food via environment. Poorly washed dishes, milk cans, milking machines, poor cleaning of the udder, as well as poor sanitary regulation condition microorganisms to get into milk (Liaw et al. 2001). Conclusion The results obtained in this study demonstrated that bacteria are spread from cow to cow and to raw milk, through deficiencies in the procedure of milking, equipments, poor sanitation of milking environments. References Costa E. O., Ribeiro A. R., Watanabe E. T., Melville P. A. (1998): Infectious bovine mastitis caused by environmental organisms. Journal of Veterinary Medicine. 45, 65-71. Donkor E. S., Aning K. G., Quaye J. (2007): Bacterial Contaminations of Informally Marketed Raw Milk in Ghana. Ghana Medical Journal. 41, 58-59. Haveri M. S., Suominen L., Rantala T., Honkanen-Buzalski, Pyörälä S. (2005): Comparison of phenotypic and genotypic detection of penicillin G resistance of Staphylococcus aureus isolated from bovine intramammary infection. Veterinary Microbiology. 106 , 97-102. Seite 300 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects HN 26 : 2006. Maisto produktų mikrobiologiniai kriterijai, (2006): Vilnius. Joffe R., Baranovičs E. (2006): Bovine mastitis as the primary contamination source of milk and products with S. aureus enterotoxins. Veterinarija ir zootechnika. 58, 21-22. Juozaitienė V., Kerzienė S. Biometrija ir kompiuterinė analizė, (2001): Kaunas, 115. Liaw S.J., Lai H.C., Ho S.W., Luh K.T., Wang W.B. (2001): Characterization of p – nitrophenylglycerol – resistant Proteus mirabilis super – swarming mutants. Journal of Medical Microbiology. 50, 1039-1048. Morandi M., Brasca R., Lod i P., Cremonesi., B. Castiglioni (2007). Detection of classical enterotoxins and identification of enterotoxin genes in Staphylococcus aureus from milk and dairy products. Veterinary Microbiology. 124, 266-72. Normanno G., Firinu A., Virgilio S., Mula G., Dambrosio A., Poggiu A., Decastelli L., Mioni R., Scuota S., Bolzoni G., Di Giannatale E., Salinetti A. P., La Salandra G., Batoli G., Zuccon F., Pirino T., Sias S., Parisi A., Quaglia N. C., Celano G. V. (2005): Coagulase – positive staphylococci and Staphylococcus aureus in food products marketed in Italy. International Journal of Food Microbiology.98, 73-79. Riemann H. P., Cliver D. O. (2006): Food borne Infections and Intoxications. School of Veterinary Medicine. University of California, Davis, 523 - 552. Siugzdaite J., Miseikiene R., Stankevicius H., Tacas J., Tusas S.(2005). Influence of teats disinfection before milking on the bacterial contamination of the skin of teats and bulk tank milk (Medycyna weterynaryjna (Polish Veterinary Medicine). 2005, 61,154-157. Tirado C., Schimdt K. (2001). WHO surveillance programe for control of food-borne infections and intoxications: preliminary results and trends across greater Europe. Journal of Infectious Diseases.43, 80-84. Corresponding author Jūratė Šiugždaitė Lithuanian Veterianry Academy Department of Infectious Diseases Tilžės 18, LT-47181, Kaunas, Lietuva e-Mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 301 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Concentration of heavy metals (Pb, Cd, Cr, Ni) in soil and grass along the main roads in Lithuania Dalia Matyžiūtė-Jodkonienė1, Stasys Juknevičius2 and Laimis Jodkonis3 1 Lithuanian Veterinary Academy, Kaunas 2 Lithuanian University of Agriculture, Kaunas 3 National Food and Veterinary Risk Assessment Institute, Kaunas Introduction Recently the problem of environment contamination becomes especially important, as it transforms from local level into regional and gradually turns into global issue (Juknys, 1994; Kuiters, 1996; Medvedev, 1999; Lopez Alonso et al., 2000). Rapid urbanization, unregulated industrialization, growing transport intensity and agricultural activities have created a problem of heavy metal (HM) contamination worldwide. According to the Korte index which expresses hazard to environmental quality, HMs are among such major problems as contamination with pesticides, acid rain, oil spills, chemical fertilizers and noise (Stravinskienė, 2005). HMs are long-term contaminants with the ability to accumulate in soil and plants and have no natural way to be removed (White et al., 2002). Most hazardous are toxic HMs: lead (Pb), manganese (Mn), chromium (Cr), copper (Cu), nickel (Ni), zinc (Zn), and their soluble compounds (Mažvila, 2001; Navas et al., 2005). Number of cars in Lithuania increases day-after-day, so concentration of HMs in roadside soil increases as well. Big amounts of HMs are dangerous to plants and animals. Wild animals can be affected by enormous concentration of HMs and carcinogenic, mutagenic, gonadotrophic and embryotoxic effect can be observed (Балтренас et al., 2003). However these effects can be recognized after certain period of time. Acute course can be observed after high concentrations. Central and peripheral nervous system disturbances, destruction of work of blood forming organs and endocrine system can follow. HMs also have negative influence on reproductive function of animals and people. Recently there are enough data proving negative influence of contaminated soil to plants, animals and human beings. Concentration of HMs in soil could be from 100 to 1000 times higher than natural background in some regions of the Earth. As chloride ions, for example, can form complexes with many cations such as Cd, Hg, Pb, Zn and Cu, so salting of roads for deicing purposes is an important source of chloride ions and such complexes in roadside environment (Doner, 1978). Concentrations of Pb and Zn are higher in grass of such soils also. According to Polish scientists concentration of Pb in grass close to the main roads can be up to 250 mg per 1 kg of grass (Maciejewska, 2004). There is an opinion that even low amounts of traffic emission pollutants can negatively affect the fish organism, causing various disturbances in its health and wellbeing (Vosylienė et al., 2006). So, monitoring of HMs in soil along the main roads in Lithuania is essential task to detect hazardous places for plants and animals. Seite 302 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Aim of this research was to measure HM concentrations along main roads in Lithuania: in soil and in grass. Material and methods For investigation eight main roads in Lithuania were chosen: Kaunas–Klaipėda, Kaunas–Vilnius, Kaunas–Druskininkai, Kaunas–Zarasai, Kaunas–Marijampolė, Kėdainiai–Panevėžys, Panevėžys–Biržai and Prienai–Alytus. Some soil samples were taken from the depth of 0–20 cm along roads Kaunas– Zarasai, Kaunas–Druskininkai and Kaunas–Klaipėda with distances of less than 50, 50–200, 200–500 and more than 1000 meters from the road. Other samples were taken from the depth of 5–10 cm with distances of 20 and 100 meters from the road. Soils were sandy loam, sandy clay loam, clay loam or silty clay loam. Taking into account particular road, they were as follows: Kaunas–Klaipėda – Gleyic Luvisols and Gleyic Albeluvisols, Kaunas–Vilnius – Haplic Luvisols, Kaunas–Druskininkai – Calcaric Luvisols, Kaunas–Zarasai – Eutric Planosols, Kaunas–Marijampolė and Prienai–Alytus – Stagnic Luvisols and Gleyic Luvisols, Kėdainiai–Panevėžys and Panevėžys–Biržai – Gleyic Cambisols. Detail investigation of grass was carried out along highway Kaunas–Klaipėda. Mixture of grass was collected in two directions from the road: South–East and North–West at distances 5, 15, 25, 50, 100 and 250 meters. Mineralization of each sample and measurement of element concentrations was performed in 3 replicates. The average resulted values were evaluated by statistical parameters and unreliable results were rejected. Element concentrations were calculated in dry plant matter dried at 105 °C (dry matter). The total concentrations of HMs (Cr – chromium, Cd – cadmium, Pb – lead and Ni – nickel) in soil and grass samples were determined by flame atomic absorption spectrometry. The average values of element concentrations in soils and grass were calculated using statistically evaluated mathematical average values by means of statistical R package, version 2.0.1 (Gentlemen et al., 1997). Results HM concentrations in surface soil (5–10 cm depth) of roadside up to 100 m were different. Intervals for appropriate element were as follows: Cr – 15.4–21.4 mg/kg, Cd – 0.5–0.95 mg/kg, Pb – 10.7–21.3 mg/kg and Ni – 8.0–12.0 mg/kg (Table 1). The soil along the road Kėdainiai – Panevėžys was contaminated most of all. It contains highest amounts of Cr, Cd and Ni. Moreover, concentrations of HMs up to 20 m from road were high for all elements in comparison with concentrations of HMs in soil at distance of 100 m from road. In comparison with other roads, there was no big relationship between distance from road and decrease of HM concentrations. High concentrations of elements was just for the road Kaunas – Vilnius in case of Cr, Cd and Pb and for the road Panevėžys – Biržai in case of Cr, Cd, Pb and Ni (20 m from road). The soil of road Panevėžys – Biržai had the lowest concentration of Cr, Cd and Ni (100 m from road). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 303 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Table 1. Concentration of heavy metals in surface soil (5–10 cm depth) of roadside up to 100 m Road Heavy metals, mg/kg Distance from road, m Cr Cd Pb Ni 20 20.1 0.80 21.3 12.5 100 19.6 0.75 15.0 12.5 20 18.3 0.75 20.4 11.5 100 17.9 0.75 13.4 10.0 20 19.2 0.5 18.3 10.5 100 17.6 0.76 11.2 12.0 20 21.4 0.95 18.4 12.0 100 17.3 0.85 10.7 10.5 20 16.3 0.55 17.5 8.7 100 15.4 0.5 10.8 8.0 20 18.3 0.85 18.0 10.0 100 18.6 0.8 10.8 10.5 100 3 100 75 Kaunas – Vilnius Kaunas – Klaipėda Kaunas – Marijampolė Kėdainiai – Panevėžys Panevėžys – Biržai Prienai – Alytus Permissible concentration* * in accordance with the HN 60:2004. mg/kg 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 Cr1 Kaunas – Marijampolė Cd2 Kaunas – Klaipėda Pb3 Kaunas – Vilnius Kėdainiai – Panevėžys Ni4 Panevėžys – Biržai Prienai – Alytus Figure 1. Average concentrations of HMs in soils along some main roads in Lithuania Figure 1 shows average HM concentrations in soils along the main roads in Lithuania. There are no big differences between all roads, however the soil of road Kaunas – Vilnius is polluted most of all in case Seite 304 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects of Cr (19.85 mg/kg), Pb (18.15 mg/kg) and Ni (12.5 mg/kg). The highest concentration of Cd is in the soil along road Kėdainiai – Panevėžys (0.9 mg/kg). The lowest concentrations of elements in soils (100 m from road) were along the road Panevėžys – Biržai for Cr (15.85 mg/kg), Cd (0.525 mg/kg), Pb (14.15 mg/kg) and Ni (8.35 mg/kg). HM concentrations in soil of 0–20 cm depth (Table 2) show that high contamination is at distance of 50–200 m from main road. The most polluted soil is along the road Kaunas – Zarasai in case of Cr, Cd and Ni. Soil along the road Kaunas – Klaipėda contains highest values of Pb. The lowest concentrations of elements are in soil along the road Kaunas – Druskininkai for Pb and Ni at distance of 200–500 m. For Cd the lowest concentration was along the same road but at distance of more than 1000 m. The lowest concentration of Cr in soil was along the road Kaunas – Zarasai at distance of more than 1000 m. Data received from the measuring of HM concentrations in grass along the highway Kaunas – Klaipėda (Table 3) are very mixed. The highest concentration of Cr was detected in grass of reservation. Quite big concentrations of Cd and Pb were found in grass 5 m from the road to the direction of South–East. Also big concentrations of Cd were observed in grass 5 m from road to the direction of North–West. High concentration of Cr and Ni were at distance of 50 m to the direction South–East and for Cr and Pb – at distance 250 m from the road to the direction North-West. Correlation between the distance from road and HM concentrations in grass was calculated. In most cases it was negative. An exception was for Ni, in South–East direction and for Cr, Pb and Ni, in North–East direction. The best reverse correlation was for Cd (directions South–West and North– West). High positive correlation was observed for Cr in case of direction North–West. Correlation between HM concentrations at different distances depending on directions was calculated also. A very strong correlation was observed for Cd (r=1). However a reverse correlation was calculated for Cr (r=–0.5029). Other correlations were not remarkable. Table 2. Concentration of heavy metals in soil (0–20 cm depth) of territories along the main roads Main road, locality Distance from road, m Average concentration, mg/kg of soil Cr Cd Pb Ni Kaunas – Zarasai Staškūniškis up to 50 13.2 0.5 9.9 11 Daugailiai 50–200 15.2 0.7 10.6 12.7 200–500 7.3 0.5 8.6 7.1 >1000 7.2 0.5 8.6 6.8 Anykščių Utenos distr. and Kaunas – Druskininkai Domantonys up to 50 12.1 0.4 9 7.9 Raižiai 50–200 13.7 0.5 10 10.2 Punia, 200–500 8.4 0.4 7 4 >1000 8.9 0.3 7.1 6.1 Alytaus distr. Kaunas – Klaipėda Žemaičių road up to 50 8.7 0.5 14.8 8.3 Labardžiai 50–200 11.7 0.6 15.3 10.3 Rietavas, 200–500 7.8 0.4 12.4 7 >1000 9.4 0.5 13 7.7 Plungės distr. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 305 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Table 3. Concentration of heavy metals in grass along the highway Kaunas – Klaipėda, mg/kg of dry matter Distance from road Cr Permissible concentration* Reservation 0.80 Cd Pb Ni 1 30 0.025 1.45 0.67 Direction South–East 5m 0.52 0.025 1.97 0.22 15 m 0.52 0.025 1.62 0.75 25 m 0.55 0.005 1.35 0.92 50 m 0.70 0.005 1.07 2.17 100 m 0.60 0.005 1.37 1.22 250 m 0.50 0.005 1.32 1.27 -0.2102 -0.5368 -0.3975 0.3238 Correlation Direction North–West 5m 0.47 0.025 2.10 0.57 15 m 0.62 0.025 2.82 1.05 25 m 0.45 0.005 1.70 1.47 50 m 0.45 0.005 1.80 0.97 100 m 0.60 0.005 2.02 0.85 250 m 0.75 0.005 3.02 1.30 0.8047 -0.5368 0.5683 0.3588 Correlation * According to the “Technical Regulation on Obligatory Safety Requirements for Products Intended for Animal Feeding” (2006) Discussion According to the HM concentrations in roadside soils, roads Kaunas–Zarasai, Kėdainiai–Panevėžys and Kaunas–Vilnius could be described as most polluted (Fig. 1). All HM concentrations in roadside soils and grass were lower than maximum allowed concentrations in soil (in accordance with HN 60:2004) or raw feedingstuff for Pb and Cd (in accordance with the Technical Regulation on Obligatory Safety Requirements for Products Intended for Animal Feeding). So, contaminated grass can not be very dangerous for wild animals those graze close to the main roads in Lithuania. Quality of game animal meat also should not be affected. Similar results were obtained by other authors (Балтренас et al, 2003), however some authors detected levels of HMs in roadside soil above maximum allowed limits (Motuzas et al., 2001). Seite 306 7. BOKU-Symposium Tierernährung Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects HM concentrations in roadside soils were different depending on distance from road and direction where samples were taken (Table 1 and 2). It could be related to the clay amount in the soil as well as other soil properties. As HMs are adsorbed by clay minerals, thus there is a direct relationship between clay amount in soil and HM concentration (Gipiškis et al., 2007). Moreover HMs can concentrate in pits, where they are brought by rain waters. Direction of winds also could have influence on distribution of HMs in the investigated territory. Substances emitted are exposed to various aerodynamic and gravitation forces resulting in their separation and, depending on their physical and chemical properties, they settle selectively on the soil surface at different distances from the road surface. The main concentration of heavy metals is settling on the soil surface in the narrow limited zone of the highway itself, its slopes and ditches (Baltrėnas et al., 2003; Kliaugienė et al., 2003). However high concentrations of Pb in roadside soils were not far from main roads – up to 20 m. Grigalavičienė and Rutkovienė (2006) noticed that concentration of Pb in roadside soil is the highest at distance of 5–10 m from road and then concentration decreases. Similar observations were during investigation of Via-Baltica (Балтренас et al., 2003). According to the received data Cd concentrations in roadside soils and plants are the highest at distance from 5 m to 20 m from road. Grigalavičienė and Rutkovienė (2006) also identified that Cd concentration in plants at distance of 5–10 m from road is the highest. Own investigations and results of other authors show variability of HM concentrations in roadside soils even along the same road. It means that contamination of soils and grass varies every year (Antanaitis, 2006), so it is advisable to monitor HM concentrations every year. Conclusions 1. Concentrations of heavy metals in the investigated roadside soils and grass were lower than maximum allowed concentrations in soil (in accordance with HN 60:2004) and in grass for Pb and Cd (in accordance with “Technical Regulation on Obligatory Safety Requirements for Products Intended for Animal Feeding”, 2006). 2. According to the heavy metal concentrations in roadside soils, roads Kaunas–Zarasai, Kėdainiai– Panevėžys and Kaunas–Vilnius could be described as most polluted. 3. Correlation between the distance from road Kaunas–Klaipėda and Cr, Pb and Ni concentrations in grass is positive (respectively 0.8047, 0.5683 and 0.3588) in case of North–West direction. 4. Concentrations of Cd and Pb in grass along the highway Kaunas–Klaipėda are much lower than permissible concentrations indicated in the “Technical Regulation on Obligatory Safety Requirements for Products Intended for Animal Feeding” (2006) and can not be hazardous to animals. 5. As heavy metal concentrations in soils and grass varies every year, so it is advisable to monitor them annually. Summary High concentrations of heavy metals have negative influence on live organisms. So, concentrations of some heavy metals (lead (Pb), cadmium (Cd), chromium (Cr) and nickel (Ni)) were measured in roadside soils and grass along the main roads in Lithuania: Kaunas–Klaipėda, Kaunas–Vilnius, Kaunas– Druskininkai, Kaunas–Zarasai, Kaunas–Marijampolė, Kėdainiai–Panevėžys, Panevėžys–Biržai and 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 307 Futtermittelhygiene, Sicherheitsaspekte / Feed Hygiene, Safety Aspects Prienai–Alytus. Soil samples were taken from 0 cm to 20 cm of depth at distances of less than 50, 50– 200, 200–500 and more than 1000 meters from the road; grass – at distances 5, 15, 25, 50, 100 and 250 meters from road. All concentrations of heavy metals in roadside soils and grass were lower than maximum allowed concentrations in soil (in accordance with Lithuanian hygiene norm HN 60:2004). They were different depending on distance from road and direction where samples were taken. Decrease of concentrations of heavy metals in roadside soils depending on distance from road was observed for Pb and Cd. The highest concentrations of Cr in grass along the highway Kaunas–Klaipėda was detected in grass of reservation. Quite big concentrations of Cd and Pb were found in grass 5 m from the highway. Contamination of soils and grass varies every year, so it is advisable to monitor concentrations of heavy metals every year. References Antanaitis Š. 2006. Grūdų užterštumo pesticidais ir sunkiaisiais metalais įvertinimas. Žemės ūkio mokslo tiriamieji darbai ir jų praktinis pritaikymas. Lietuvos Respublikos žemės ūkio ministerija. Vilnius. P. 5. Baltrėnas P., Kliaugienė E. 2003. Soil pollution by heavy metals from transport systems in Lithuania. International conference "Integrative approaches towards sustainability" (Baltic Sea Region taking the lead). http://home.lanet.lv/~asi/Abstracts.htm Doner H. E., 1978. Chloride as a Factor in Mobility of Ni (II), Cu(II) and Cd(II) in Soil. Soil Sci. Soc. Am. J. Vol. 42 (6). P. 882–885. Gentlemen R., Ihaka R., Noteson R., 1997. A programming environment for data analysis and graphics. Department of statistics university of Auckland. Gipiškis V., Šlepetienė A., Arlauskienė E., Lenkšaitė E., Mališauskas A. 2007. Nemuno žemupio salpos dirvožemių hidrologinės, fizikinės, cheminės ir biologinės savybės bei sąsajos tarp jų. Žemdirbystė. T. 94. Nr.1. P. 115–149. Grigalavičienė I., Rutkovienė V. 2006. Sunkiųjų metalų koncentracija miško dirvožemiuose bei samanose šalia greitkelio Vilnius–Kaunas. Miškininkystė. Nr. 2 (60). P. 12–19. HN 60:2004 – Lietuvos higienos norma “Pavojingų cheminių medžiagų didžiausios leidžiamos koncentracijos dirvožemyje”. Žin., 2004, No. 41-1357. Juknys R. 1994. Lietuvos gamtinė aplinka. Būklė, procesai, tendencijos. Aplinkos apsaugos ministerija. Vilnius. P. 113. Kliaugienė E., Baltrėnas P. 2003. Research on roadside soil pollution by heavy metals and soil remediation by natural zeolites. 7th International Conference on the Biogeochemistry of Trace Elements (7th ICOBTE). Kuiters A.T. 1996. Accumulation of cadmium and lead in red deer and wild boar at the Veluwe, the Netherlands. The Veterinary Quarterly. Vol. 18. Supp. 3. P. 134−135. Lopez Alonso M., Benedito J.L., Miranda M., Castillo C., Hernandez J., Shore R. F. 2000. Arsenic, cadmium, lead, copper and zinc in cattle from Galicia, NW Spain. Science of the Total Environment. Feb. 10. Vol. 246. P. 237-248. Maciejewska M. 2004. Content of Pb, Cu, Zn and Fe in meadow sward growing in areas affected by local industry and waste dumps in Gryfino district. Folia Univ. Agric. Stetin. Agricultura, Vol. 242 (98). P. 81-86. Mažvila J. 2001. Sunkieji metalai Lietuvos dirvožemiuose ir augaluose. Monografija. Kaunas: LŽI. 343 p. Medvedev N. 1999. Levels of heavy metals in Karelian wildlife, 1989-91. Environmental Monitoring and Assessment. Vol. 56. No. 2. P. 177-193. Motuzas A., Vaisvalavičius R., Prosyčevas I., Stučinskienė N., Motuzienė S., Trimirka V. 2001. Metodologiniai sunkiųjų metalų kiekio tyrimai autotransporto taršos paveiktų zonų dirvožemiuose. Aplinkos tyrimai, inžinerija ir vadyba. Nr.1(15). P. 39–46. Navas A., Lindhotfer H. 2005. Chemical Partitioning of Fe, Mn, Zn and Cr in Mountain Soils of the Iberia and Pyrenean Ranges (NE Spain). Soil and Sediment Contamination. Vol. 14. No. 3. P. 249–260. Stravinskienė V. 2005. Bioindikaciniai aplinkos vertinimo metodai. Kaunas: Vytauto Didžiojo universiteto leidykla. 215 p. Technical Regulation on Obligatory Safety Requirements for Products Intended for Animal Feeding, 2006. An order of the Minister of Agriculture of the Republic of Lithuania No. 3D-507, 27 December 2006. Vosylienė M. Z., Jankaitė A. 2006. Effect of heavy metal model mixture on rainbow trout biological parameters. Ekologija. 2006. Nr. 4. P. 12–17. White R., LeTard L. A. 2002. Investigating environmental pollution through dendrochemical analysis. OSCAR Journal. Vol. 9. www2.selu.edu/ Балтренас П., Янкайте А. 2003. Исследование загрязненности тяжёлыми металлами почвы вдоль магистрали Виа-Балтика. Экология и промышленность России. Август. P. 41–44. Author Dr. Dalia Matyžiūtė-Jodkonienė Lithuanian Veterinary Academy Tilžės g. 18, LT-47181 Kaunas E-mail: [email protected] Seite 308 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Erzeugung von Lebensmitteln tierischer Herkunft und Treibhausgase – Nutztiere als „Mittäter“ und „Opfer“ G. Flachowsky und S. Dänicke Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit Braunschweig Einleitung Ansteigende Erdbevölkerung (auf ≈ 140 %) und höhere Einkommen in vielen Ländern werden bis zum Jahre 2050 etwa zu einer Verdopplung des Verbrauches an Lebensmitteln tierischer Herkunft führen (auf 180 % bei Milch) bzw. 203 % bei Fleisch; Tab. 1) Tabelle 1: Herausforderungen für die Tierproduktion bis 2050 (Steinfeld et al. 2006) gegenwärtig Prognose für 2050 Menschen auf der Erde (Mrd.) Fleischproduktion (Mio t)1) Milchproduktion (Mio t) 1) 6,5 229 580 9,0 465 1043 Anstieg in % (zu gegenwärtig) 138 203 180 Schlachtkörpermasse Die Ursachen für diesen Anstieg sind neben dem Wachstum der Erdbevölkerung vor allem im hohen Genusswert von Milch, Fleisch, Eiern und Fisch und den höheren Einkommen in vielen Ländern (s. Delgado et al. 1999, Keyzer et al. 2005) zu suchen. Diese Entwicklung stellt gewaltige Anforderungen an die Pflanzenzüchtung, den Pflanzenbau sowie die Konvertierung der Futtermittel in Lebensmittel tierischer Herkunft und hat erhebliche Konsequenzen für klimarelevante Emissionen. In Tabelle 2 sind die erforderlichen Nahrungsmengen dargestellt. Nutztiere als „Mittäter“ Zur Bewertung der Einträge (Inputs) in die und der Austräge (Outputs) aus der Nahrungskette ist eine umfassende Quantifizierung notwendig (Abb. 1). Auf der Basis derartiger Daten können Schlussfolgerungen bezüglich Ressourceneffizienz sowie „Mittäterschaft“ und „Opfer“ Lebensmittel liefernder Tiere in Verbindung mit Treibhausgasen abgeleitet werden. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 309 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Tabelle 2: Erforderliche Nahrungsmengen für Menschen und Tiere sowie notwendiger Flächenertrag (eigene Kalkulation) Mensch/Tier Anzahl (Mrd.) Menschen Großtiere Rinder/Büffel/Pferde/Kamele Kleinwiederkäuer Schweine Geflügel Verbrauch (Verzehr) in Trockensubstanz (T) (kg/Tag) (Mrd. t/Jahr) 6,5 0,45 1,1 1,6 1,8 8 1 4,6 0,7 0,95 18,5 1 0,07 0,35 0,45 Verbrauch Futtermittel, gesamt gegenwärtig 2050 Erforderlicher Flächenertrag 6,1 ≈ 12? 1,3 2,6 (bei 1,5 Mrd. ha Ackerfläche und 3,3 Mrd. ha Grasland; in: t T/ha Eintrag (Input) Dünger, Kraftstoff, Pflanzenschutzmittel, Saatgut, Wasser Kraftstoff, Elektroenergie Kraftstoff, Elektroenergie Kraftstoff, Elektroenergie (CO2)1) Kettenglieder Austrag an klimarelevanten Gasen (Output) Futtermittel, Ernte, Lagerung Boden/ Pflanze CO2 N2O 1) CO2 Mischfutter, Nebenprodukte CO2 Kraftstoff, Elektroenergie Lebensmittel tierischer Herkunft Mensch Exkremente Biogas, Dünger Tier CH4 (CO 2)1) CH4 N2O CO2 CH4 CO2 wird durch die Photosynthese gebunden und durch Umsetzungen im Tier freigesetzt, es wird als emissionsneutral betrachtet. Abbildung 1: Wesentliche Elemente des Nahrungskettengliedes bzw. -netzwerkes „Lebensmittel tierischer Herkunft“ sowie ausgewählte Einträge von Ressourcen und Austräge von klimarelevanten Gasen Seite 310 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Dabei fallen nicht nur Methan (CH4) und Stickstoff-Verbindungen als direkte klimarelevante Austräge der Nutztiere an, sondern entlang der Nahrungskette entsteht aus Bestriebsmittel-bedingtem Inputs auch Kohlenstoffdioxid (CO2, Abb. 1). Durch Lebensmittel liefernde Tiere, vor allem durch Wiederkäuer, wird Methan (Treibhausgasgefahr: 23 x CO2), vor allem im Rahmen der Umsetzungen im Vormagensystem gebildet. Die anfallende Methanmenge hängt u.a. von Tierart, Höhe der Futteraufnahme, Rationsgestaltung und weiteren Einflussfaktoren ab. Im Mittel können 20 – 25 g CH4/kg Futtertrockensubstanzaufnahme erwartet werden (s. Flachowsky und Brade 2007). Das von den Tieren ebenfalls ausgeschiedene CO2 wird als emissionsneutral eingeschätzt (s. Abb. 1). Stickstoff (N) wird in unterschiedlicher Form (Harnstoff, Protein-gebunden, Harnsäure u.a.) ausgeschieden; Klimarelevanz erlangt vor allem das in unterschiedlichem Umfang gebildete Lachgas (N2O; 0,5 – 10 % der N-Ausscheidung, Treibhausgasfaktor: ≈ 300 x CO2, IPCC 2006). Neben der Tierart hängt die ausgeschiedene Stickstoffmenge von der Höhe der Proteinversorgung (Überschüsse vermeiden) und dem Leistungsniveau ab. Selbst bei hohen Leistungen der Nutztiere werden über 50 % des aufgenommenen Stickstoffs in den Exkrementen ausgeschieden (Tab. 3). Tabelle 3: Produktion von essbarem Protein tierischer Herkunft mit verschiedenen Tierarten/kategorien und N-Ausscheidung in Abhängigkeit von der Leistungshöhe Kennzahlen der Futteraufnahme Essbare Fraktion (%) Proteingehalt in der essbaren Fraktion (g/kg Frischmasse) 90/10 75/25 50/50 95 2 2,5 80/20 50/50 500 g LMZ1) 1000 g LMZ 1500 g LMZ 6,5 7 7,5 Mastschwein (80 kg) 500 g LMZ 700 g LMZ 900 g LMZ Mastküken (1,5 kg) Legehenne (1,8 kg) Eiweißquelle (Lebendmasse) Leistung je Tag Höhe (kg T/Tag) Grundfutter/ Kraftfutterverhältnis (auf T-Basis, %) Milchkuh (650 kg) 10 kg Milch 20 kg Milch 40 kg Milch 12 16 25 Milchziege (60 kg) 2 kg Milch 5 kg Milch Mastrind (350 kg) 1) Essbares Protein N-Ausscheidung g/Tag g/kg Lebendmasse kg/kg essbares Protein Prozent der NAufnahme 34 323 646 1292 0,5 0,9 2,0 0,65 0,48 0,35 75 70 65 95 36 68 170 1,1 2,8 0,40 0,23 70 60 95/15 85/15 70/30 50 190 48 95 143 0,12 0,24 0,36 2,5 1,6 1,2 90 84 80 1,8 2 2,2 20/80 10/90 0/100 60 150 45 63 81 0,55 0,8 1,0 0,8 0,7 0,6 85 80 75 40 g LMZ 60 g LMZ 0,07 0,08 10/90 0/100 60 200 4,8 7,2 3,2 4,8 0,4 0,3 70 60 50 % LL2) 70 % LL 90 % LL 0,10 0,11 0,12 20/80 10/90 0/100 95 120 3,6 5,1 6,6 2,0 2,8 3,7 0,6 0,35 0,2 80 65 55 Lebendmassezunahme 2) Legeleistung Bewertung der Emission (CO2Äq-Footprints) Durch CO2-Footprints (CO2-Fußabdrücke unter Berücksichtigung der klimarelevanten Emissionen, CO2, CH4 und N2O) wird eine vergleichende Bewertung verschiedener Produkte (s. Tab. 3) und Erzeugungsformen sowie eine Sensibilisierung von Erzeugern und Verbrauchern zur weiteren Minimierung der Ausscheidungen von Treibhausgasen angestrebt (s. Flachowsky und Meyer 2008). Die CO2-Footprints hängen von verschiedenen Einflussfaktoren ab (z.B. Futterbau, Methan- und Lachgasbildung sowie Leistungshöhe der Tiere). Dabei ist einzuschätzen, dass infolge der Vielzahl der 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 311 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Einflussfaktoren derartige Angaben gegenwärtig wenig belastungsfähig sind (s. auch Flachowsky und Meyer 2008). Tabelle 4: N- und CH4-Ausscheidungen sowie CO2-Äquivalente je kg essbares Protein tierischer Herkunft bei verschiedenen Proteinquellen und Leistungshöhen (s. Flachowsky und Meyer 2008) Ausscheidung (kg/kg essbares Protein) Leistungshöhe (je Tag) N P CH4 CO2Äquivalente 10 kg 20 kg 40 kg 0,65 0,44 0,24 0,10 0,06 0,04 1,0 0,6 0,4 30 16 12 Rindfleisch 1000 g 1500 g 1,3 1,0 0,18 0,14 1,5 1,2 55 35 Schweinefleisch 700 g 900 g 0,7 0,55 0,10 0,08 0,08 0,05 12 10 Geflügelfleisch 40 g 60 g 0,35 0,25 0,04 0,03 0,01 0,01 4 3 Eier 70 % 90 % 0,4 0,3 0,07 0,05 0,02 0,02 5 4 Proteinquelle Milch Eine vergleichende Gegenüberstellung der CO2Äq-Footprints für die verschiedenen Proteinquellen tierischer Herkunft auf der Basis von essbarem Protein verdeutlicht, dass Milch und Rindfleisch infolge der Methanemission beim Wiederkäuer höhere Werte aufweisen als Proteinquellen von Nichtwiederkäuern (Tab. 4). Aus globaler Sicht wird eingeschätzt, dass nahezu ein Drittel der Treibhausgasemissionen (13,4 Mrd. t CO2Äq) auf die Landwirtschaft entfallen (Tab. 5). Der Anteil der Nutztiere an den Treibhausgases aus der Landwirtschaft dürfte etwa die Hälfte betragen. Gegenwärtig wird die jährliche Zuwachsrate an CO2-Äquivalenten weltweit mit ≈ 1 Mrd. t angegeben (Isermeyer et al. 2008). Diese Situation unterstreicht die Notwendigkeit, Reduzierungspotenziale zu erkennen und umzusetzen (s. Lebzien und Flachowsky 2008). Tabelle 5: Treibhausgasemissionen, global (Isermeyer et al. 2008) Region Welt davon Landwirtschaft Seite 312 CO2 Äquivalente (Mrd t/Jahr) Gesamt in % CO2 CH4 N2O 31,9 6,0 3,1 41,4 100 7,6 3,1 2,6 13,4 32 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Nutztiere als „Opfer“ Es steht außer Frage, dass bei den stattfindenden bzw. zu erwartenden Klimaveränderungen, wie beispielsweise: Ansteigende Temperatur (≈ 1oC im 20. Jahrhundert in Deutschland, DWD 2008; global: 0,74oC), Höhere CO2-Konzentration in der Atmosphäre (Anstieg z.Z. ≈ 2 ppm CO2/Jahr, IPCC 2006), Anstieg des Meeresspiegels (1,8 mm/Jahr im Zeitraum 1961 – 2003; 3,1 mm/Jahr im Zeitraum 1993 – 2003; IPCC 2006), • Zunehmende Witterungsumbilden (Unwetter, Starkregen, Sommertrockenheit u.a.). erhebliche Auswirkungen auf Futterwirtschaft und Tierproduktion haben werden. Die Konsequenzen der Klimaveränderungen für die Nutztiere sind im Einzelfall noch nicht vorhersehbar. Sie müssen auch nicht immer eindeutig negativ sein, wie häufig postuliert wird. Beispielsweise kann die höhere CO2-Konzentration in der Atmosphäre bei ausreichender Wasser- und Düngerbereitstellung zu höheren Erträgen bei Getreide führen (Tab. 6), da CO2 wichtiger Pflanzennährstoff für die Photosynthese ist. • • • Nachfolgend werden zu erwartende Auswirkungen auf Futterwirtschaft und Tierproduktion aufgelistet: - Auswirkungen auf Futterwirtschaft Ertragsverluste bis –ausfälle bei Trockenheit und/oder Unwetter Ertragssteigerung bei optimalen Bedingungen (z.B. Wasser, Dünger) Anderes Befallsmuster durch Schädlinge, weiteres Vordringen von Schädlingen in den Norden Zusammensetzung und Futterwert der Futtermittel, evtl. stärkere Lignifizierung, größeres oder kleineres Endopserm (Schmachthorn) in Samen • Andere Futterpflanzen • Konsequenzen für Futtervorratswirtschaft (z.B. mehrjährige Vorräte bei Ertragsausfall) • • • • - Ausgewählte Auswirkungen auf Tierproduktion Konsequenzen höherer Temperaturen auf Futteraufnahme und Leitung der Tiere, Ausreichende Tränkewasserbereitstellung (z.B. + 2l je Milchkuh und Tag je 1oC höhere Temperatur; Meyer et al. 2004) • Kühlung im Stall, am Tier; Dachbegrünung u.a. • Weiterentwicklung von Fütterungs- und Haltungssystemen • Auftreten neuer bzw. bisher in Mitteleuropa nicht oder kaum auftretender Tierkrankheiten • Herausforderung für Tierzüchtung, bessere Anpassung der Tiere. • • Tabelle 6: Einfluss erhöhter CO2-Gaben (555 gegenüber 360 ppm) und unterschiedlicher N-Düngung auf Ertrag und Proteingehalt der Körner von Wintergerste und Winterweizen (Effekte bei 360 ppm CO 2 =ˆ 100 %; Weigel und Manderscheid 2005) N-Düngung (kg/ha) Wintergerste 132 264 Kornertrag + 13,0 + 12,0 Proteingehalt - 12,1 - 13,0 Kornertrag + 7,8 + 15,6 Proteingehalt - 11,2 - 4,5 Winterweizen 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 313 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Forschungsbedarf und Schlussfolgerungen aus der Sicht der Tierproduktion Aus Sicht der Tierproduktion können u.a. folgender Forschungsbedarf sowie entsprechende Schlussfolgerungen für eine effiziente Ressourcennutzung, die Reduzierung der Emissionen und die Anpassung an eintretende Klimaänderungen abgeleitet werden: - Effizienzsteigerungen in allen Gliedern der Nahrungskette (s. Abb. 1) mit dem Ziel der Erhöhung der Leistung und der Verminderung der Tierzahlen (global) • Fossile Energie • Wasser • Fläche • Begrenzt verfügbare Rohstoffe (z.B. Phosphor) - Reduzierung der CH4- und N-Austräge durch zootechnische Maßnahmen (Tierernährung,- haltung, -züchtung, Exkrementmanagement u.a.) - Bessere Quantifizierung der Ein- und Austräge in die Nahrungskette (s. Abb. 1) - Spezifische Fragen zur besseren Quantifizierung der Zusammenhänge: CO2 CH4 N2O Prüfung und Überführung von Möglichkeiten zur Reduzierung der Methanbildung Senkung der N-Ausscheidungen bei Lebensmittel liefernden Tieren, Bedarfsdeckung „auf den Punkt“ Erfassung der N2O-Bildung in Abhängigkeit von verschiedenen Einflussfaktoren Insgesamt Verbesserung der Kenntnisse über Energieeinsatz bzw. CO2-Austrag bei der Futtererzeugung (Pflanzenschutzmittel, Zusatzstoffe, u.a.), Transport, Lagerung, Tierhaltung u.a. Bewertung des Energieeinsatzes für die Aufbereitung von Nebenprodukten und Futterbehandlungsverfahren Betrachtung von komplexen Systemen (z.B. Rind als Milchund Fleischlieferant) Life Cycle Assessments (Ökobilanzen) entlang der gesamten Nahrungskette (-netzwerkes) - Konsequenzen der globalen Entwicklungen (steigender Bedarf an Nahrungsmitteln, Rohstoffverbrauch für Bioenergie u.a.) auf die Intensität der heimischen Agrarproduktion, die Bedeutung der Biotechnologie sowie der Ressourceneffizienz - Umfassende Bewertung zu erwartender Klimaänderungen auf Futterbau, Futterwert und praktische Fütterung (Klimafolgenforschung) Literatur Delgado C., Rosegrant M., Steinfeld H., Ehni S. and Courbois C. (1999): Livestock to 2020 „The next food revolution“, Food, Agriculture and the Environment Discussion Paper 28, IFFRE/FAO/ILRI/ Washington, DC. DWD (2008): Entwicklung des Klimas in Deutschland im 20. Jahrhundert, Res.besprechnung, Berlin, 08.09.2008. Flachowsky G. (2002): Efficiency of energy and nutrient use in the production of edible protein of animal origin. J. Appl. Anim. Re., 22, 1-24. Seite 314 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Flachowsky G. und Brade W. (2007): Potenziale zur Reduzierung der Methan-Emissionen bei Wiederkäuern. Züchtungskd. 79, 417-465. Flachowsky G., Meyer U. (2008): CO2-Footprints für Lebensmittel tierischer Herkunft – Notwendigkeit, Wissensstand und Einflussfaktoren. 7. BOKU-Symp., Tierernährung, 4. Dezember 2008, Wien, (im Druck). IPCC – Intergovernmental Panel on Climate Change: 2006 IPCC Guidelines for National Greenhouse Gas Inventories. Vol. 4, Agriculture, Forestry and other Land use (2006). http://www.ipce-nggip.iges.or.jp/public/2006/gl/vol4.htm. Isermeyer F., Otte A., Christen O., Frohberg K., Hartung J., Kirschke D., Schmitz M. und Sundrum A. (2008): Nutzung von Biomasse zur Energiegewinnung – Empfehlungen an die Politik, Gutachten, Berichte über Landwirtschaft, SH 116, 198 S. Keyzer M.A., Merbis M.D., Pawel I.F.P.W. and Wesenbeeck C.F.A. (2005): Diet shifts towards meat and the effects on cereal use: can we feed the animals in 2030? Ecol. Economics 55, 187-202. Lebzien P., Flachowsky G. (2008): Zur Bewertung des Methan-Reduzierungspotenzials von Futtermitteln und –zusatzstoffen im Pansen. 7. BOKU-Symp., Tierernährung, 4. Dezember 2008, Wien, (im Druck). Meyer U., Everinghoff M., Gädeken D. and Flachowsky. (20049: Investigations on the water intake of lactating dairy cows. Livest. Prod. Sci. 90, 117-121. Steinfeld H., Gerber P., Wassenaar T. Castel V., Rosales M. and De Haan C. (2006): Livestock’s long shadow, Environmental issues and options. Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO), Rom. http://www.virtualcentre.org/en/library/key_pub/longshad/AO70IF00.pdf Weigel H.-J. and Manderscheid R. (2005): CO2-enrichment effects on forage and grain nitrogen content of posture and cereal plants. J. Crop Improvements 13, 73-89. Autorenanschrift Prof. Dr. Gerhard Flachowsky Institut für Tierernährung Friedrich-Loeffler-Institut (FLI) Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit Bundesallee 50, 38116 Braunschweig e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 315 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Zur Bewertung des Methan-Reduzierungspotenzials von Futtermitteln und –zusatzstoffen im Pansen P. Lebzien und G. Flachowsky Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit Braunschweig Einleitung Im Jahre 1884 hat erstmals Tappeiners in der Zeitschrift für Biologie auf die Methanbildung unter anaeroben Verhältnissen hingewiesen (zitiert nach Kellner 1905). Kellner (1905) und andere Klassiker der Tierernährung (z.B. Fingerling, Kühn, Zuntz) beklagten bereits vor mehr als 100 Jahren die Methanverluste im Pansen, die sie mit ≈ 10 % der nutzbaren Energie bezifferten. Zu diesen Klagen vergangener Jahre über Energieverluste gesellte sich in den letzten Jahren die Diskussion über die klimarelevante Wirkung des Methans (CH4; etwa 23 x so hoch wie CO2; IPCC 2006). Methan entsteht als unvermeidbares Nebenprodukt der mikrobiellen Umsetzungen vor allem im Verdauungstrakt der Wiederkäuer (Abb. 1). Im Mittel werden etwa 6-8 % der aufgenommenen Bruttoenergie als Methan abgegeben, im Extremfall können es 2-15 % sein (s. Tab. 1). Bei Nichtwiederkäuern sind diese Mengen deutlich geringer. Bezogen auf die verzehrte Futtertrockensubstanz werden bei Wiederkäuern im Mittel 20-25 g CH4/kg T ausgeschieden (Tab. 1). Tabelle 1: Methanausscheidungen verschiedener Tierarten (Literaturauswertung) Methanausscheidung in % g/kg T-Aufnahme der Bruttoenergieaufnahme Mittelwerte und (Variationsbreite) Wiederkäuer 6 bis 8 (2 bis 15) 20 bis 25 (10 bis 40) Pferde 2 bis 3 (1 bis 5) 6 bis 8 (2 bis 12) 0,5 (0 bis 2) 2 bis 3 (0 bis 8) Schweine 1) 1) Höchste Werte bei güsten Sauen, geringste Werte bei Ferkeln Über die Quellen und Wege der Methanbildung sowie Faktoren, die diese beeinflussen, wurde bereits wiederholt berichtet (z.B. Rouviere und Wolfe 1988, van Soest 1994), so dass an dieser Stelle nicht darauf eingegangen werden soll. Seite 316 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Methan stellt, wie bereits erwähnt, nicht nur einen Energieverlust für die Nutztiere und somit auch einen ökonomischen Verlust für den Tierhalter dar, sondern hat wegen seines hohen Treibhauspotenzials auch erhebliche Klimarelevanz. Diese Bedeutung beruht auf der Verminderung der Leitfähigkeit der Atmosphäre und damit der geringeren Möglichkeit zur Wärmeabstrahlung. Global wird jährlich mit einem Methanfall von ≈ 260 Mio. t (≈ 6 Mrd. t CO2Äq) kalkuliert, von denen ≈ 86 Mio. t/Jahr (33 %) den mikrobiellen Umsetzungen in den Verdauungsräumen der Tiere und dabei vor allem der Wiederkäuer zugeschrieben werden (Steinfeld et al. 2006). Insgesamt werden die weltweit anfallenden CO2Äq-Mengen mit 41,4 Mrd. t angegeben, von denen 13,4 Mrd. t (32 %) auf die Landwirtschaft bzw. 3,1 Mrd. t CO2Äq auf Methan aus der Landwirtschaft entfallen sollen (Isermeyer et al. 2008). Andererseits haben die Wiederkäuer weltweit sowohl als Nahrungslieferanten, als auch als Zug- und Tragetiere, als Lieferanten von Bekleidungsrohstoffen sowie für viele andere Funktionen und als Nutzer von vegetativen Pflanzenbestandteilen (überwiegend β-gluc. gebundene Kohlenhydrate und somit keine Nahrungskonkurrenz zum Menschen und zum Nichtwiederkäuer) eine herausragende Bedeutung (s. Potenziale in Abb. 1). Unter Berücksichtung dieser Situation sollten die Vorteile des Wiederkäuers und seiner Vormagenfermentation maximal genutzt und die Grenzen/Nachteile minimiert werden. Für die Forschung resultiert daraus vor allem die Frage nach einer nachhaltigen Verminderung der Methanemission aus dem Pansen. Potenziale Akteure Bakterien (≈ 1010ml -1 ≈ 200 Spezies ) Protozoen (≈ 106 ml -1 ≈ 25 Gattungen ) Zellwandabbau Proteinsynthese Vitaminbildung Abbau unerwünschter Stoffe Grenzen Zucker-, Stärke- und Proteinabbau Energieverluste Methanbildung Anaerobe Pilze (≈ 8 % der mikrobiellen Biomasse im Pansen , 5 Gattungen) Weitere Akteure Archaen (Methanogene) Bakteriophagen Abbildung 1: Potenziale, Grenzen und ausgewählte Akteure im Pansen Methan-Reduzierungspotenziale Die Fachdisziplin Tierernährung verfügt über ein umfangreiches Instrumentarium zur Reduzierung des Methananfalls bei Wiederkäuern, über das kürzlich wiederholt berichtet wurde (z.B. Flachowsky und Brade 2007, Flachowsky und Lebzien 2007, Jouany 2008, Kebrab et al. 2006, Kreuzer und Soliva 2008, Soliva 2008). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 317 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Tabelle 2: Ausgewählte Fütterungsmaßnahmen zur Reduzierung der Methanbildung Bedeutung für Mitteleuropa Einschätzung des Forschungsbedarfes stärkereiche) Weitgehend ausgeschöpft ~ Einsatz von Futterfetten bzw. Fettsäuren bzw. Ölsaaten Weitgehend ausgeschöpft (↑) Maßnahme Kraftfutterreiche (zellwandarme, Rationsgestaltung Einsatz von Futterzusatzstoffen • Halogenverbindungen In EU nicht erlaubt ~ • Ionophore (z.B. Monensin) In EU nicht erlaubt ↑ • Einsatz wasserstoff-bindender Substanzen mit Energielieferung für Wiederkäuer (z.B. Fumarsäure, Acrylsäure) Einsatz von phytogenen Zusatzstoffen bzw. Futterpflanzen mit diesen Substanzen (z.B. Tannine, Saponine) Weitere Zusatzstoffe, wie Hefen, Enzyme u.a. z.Z. keine Bedeutung ↑↑ z.Z. keine Bedeutung ↑↑ z.Z. keine Bedeutung ↑ • • ↑↑ hoher Forschungsbedarf, ↑ Forschungsbedarf (↑) geringer Forschungsbedarf ~ kein Forschungsbedarf Möglichkeiten zur Bewertung des CH4-Reduzierungspotenzials Die eingangs erwähnten Fakten haben weltweit zu umfangreichen Forschungen zur Reduzierung der Methanemissionen geführt. Dabei stehen Futtermittelzusatzstoffe im Focus der Betrachtungen. Beispielsweise wurde kürzlich eine spanisch-britische Studie publiziert (Bodas et al. 2008), in der die Autoren 450 Pflanzen in getrockneter Form bezüglich ihrer antimethanogenen Wirkung in vitro testeten. Dabei zeigte sich, dass 35 Pflanzen die Methanbildung um > 15 % und 6 Pflanzen um > 25 % mit keinen nachteiligen Effekten auf die Verdaulichkeit und die Bildung an flüchtigen Fettsäuren reduzierten (Abb. 2). Auch bei anderen Substanzen (s. Tab. 2) wurden vor allem in vitro-Studien zur Bewertung des CH4Reduzierungspotenzials herangezogen. Besonders wirksam zeigten sich dabei Halogenderivate, wie z.B. CHCl3, aber auch CH2Cl2, CCl4, CH2BrCl sowie ein Halbacetal aus Chloral und Stärke (Trei und Olson 1969, Trei und Scott 1971). Mit diesen Verbindungen ist eine völlige Hemmung der Methanbildung möglich (Trei und Olsen 1969, Trei und Scott 1971). Dabei werden jedoch auch andere Prozesse im Pansen beeinflusst. Außerdem sind Minderleistungen bei den Tieren zu erwarten, vor allem verursacht durch Verzehrsdepressionen (Chalupa 1977, Trei und Scott 1971). Vergleichende Studien von Moss und Givens (1997) zeigten nur einen losen Zusammenhang zwischen der Methanbildung in vitro und in vivo (Abb. 3). Diese Feststellung trifft auch auf die Bewertung der methanhemmenden Wirkung von Fumarsäure als Wasserstoffakzeptor bzw. Propionatvorstufe auf der Basis von in vitro bzw. in vivo Versuchen zu (Abb. 4). Seite 318 7. BOKU-Symposium Tierernährung von flüchtigen Fettsäuren Effekt auf die Produktion Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Effekt auf Methan Abbildung 2: Relative Veränderungen (Erhöhung bzw. Verminderung in % der Kontrollgruppe) in der Methanproduktion (µmol/g T) und Produktion an flüchtigen Fettsäuren (mmol/g T) nach 24 h Inkubation nach Zusatz von Pflanzenproben oder Extrakten (Bodas et al. 2008) Methanbildung in vivo (l kg-1 T) 55 50 r2 = 0,264 45 40 35 30 25 20 15 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Methanbildung in vitro (l kg-1 T) in 24 h Abbildung 3: Zusammenhang zwischen Methanbildung in vivo und in vitro bei unterschiedlichen Rationen (Moss und Givens 1997) 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 319 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment 100 Kontrolle 80 Fumarsäure 60 umhüllte Fumarsäure 40 20 0 in vitro (24 h) in vivo Abbildung 4: Einfluss von Fumarsäure und umhüllter Fumarsäure auf die Methanbildung in vitro und in vivo (Kontrolle = 100 % nach Wallace et al. 2006) Bewertung des Reduzierungspotenzials Die erwähnten Beispiele demonstrieren die Notwendigkeit von Versuchen an Wiederkäuern zur Bewertung der Wirkungen der Methaninhibitoren. Experimente an den Zieltierarten sind jedoch gegenwärtig nur in begrenzter Zahl verfügbar. Langzeitstudien, die auch evtl. Adaptationseffekte zeigen, existieren kaum. Die Empfehlungen zur Nutzung verschiedener Substanzen resultieren meist aus in vitro Studien. Aus diesen Gründen ist ein mehrstufiges Herangehen zur Bewertung des CH4Reduzierungspotenzials erforderlich. So sollten in vitro Studien für ein Screening und den Vergleich verschiedener Substanzgruppen der Ausgangspunkt der Bewertung sein. Zur Verifizierung der Befunde sind Tierexperimente erforderlich, da hierbei u.a. die Akzeptanz durch die Tiere, eventuelle negative Wirkungen auf Verdaulichkeit, Futteraufnahme und Gesundheit der Tiere sowie eine mögliche Adaptation der Pansenmikroben an den Zusatzstoff erfasst werden können. Zu einer komplexen Bewertung der Methan-Reduzierungspotenziale von Fütterungsmaßnahmen bzw. Futtermittelzusatzstoffen schlagen wir deshalb folgendes Drei-Stufen-Programm vor: 1. Testung des Methanreduzierungspotenzials in-vitro (eventuell verschiedene Rationsgestaltungen; geeignet für ein erstes Screening einer Vielzahl von Substanzen). 2. Prüfung der Wirkung geeigneter Substanzen im Vergleich zu unsupplementierter Kontrollgruppe an den Zieltierarten (Kurzzeitstudien; Einfluss auf Futteraufnahme, Messung der Methanbildung, Einfluss auf Umsetzungen im Pansen und andere) 3. Langzeitstudien (über gesamte Laktationsperiode oder gesamte Mastdauer) mit Substanzen, die in Prüfungsstufe 2 erfolgreich waren, an den Zieltierarten im Vergleich zu unsupplementierten Kontrolltieren (Einfluss auf Methanbildung und Umsetzungen im Pansen im Versuchsverlauf, Erkennen von Gewöhnungseffekten, Einfluss auf Leistungshöhe, Tiergesundheit und Produktqualität sowie Verhalten des Zusatzstoffes in der Umwelt). Seite 320 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Schlussfolgerungen Untersuchungen zur Reduzierung der Methanemission bei Wiederkäuern stellen eine Herausforderung für die Tierernährung dar. Zur Vermeidung von „Vorab-Schlussfolgerungen“ für Öffentlichkeit und Praxis sind Langzeitversuche mit den Zieltierarten/-kategorien erforderlich. In vitro-Studien als Screening und Kurzzeittests (Futteraufnahme u.a.) sollten den Langzeitversuchen vorgeschalten werden. Literatur Bodas R, Lopez S, Fernandez M, Garcia-Gonzales R., Rodriguez A.B., Wallace R.J. and Gonzales J.S. (2008): In vitro screening of the potential of numerous plant species as antimethanogenic feed additives for ruminants. Anim. Feed Sci. Technol. 145, 245-258. Chalupa W. (1977): Manipulating rumen fermentation, J. Anim. Sci. 46, 585-599 Flachowsky G. und Brade W. (2007): Potenziale Zur Reduzierung der Methan-Emissionen bei Wiederkäuern. Züchtungskd. 79, 417-465. Flachowsy G. und Lebzien P. (2007): Lebensmittel liefernde Tiere und Treibhausgase – Möglichkeiten der Tierernährung zur Emissionsminderung. Übersicht. Tierern. 35, 191-231. Isermeyer F., Otte A., Christen O., Frohberg K., Hartung J., Kirschke D., Schmitz M. und Sundrum A. (2008): Nutzung von Biomasse zur Energiegewinnung – Empfehlungen an die Politik, Gutachten, Berichte über Landwirtschaft, SH 116, 198 S. IPCC – Intergovernmental Panel on Climate Change: 2006 IPCC Guidelines for National Greenhouse Gas Inventories. Vol. 4, Agriculture, Forestry and other Land use. http://www.ipce-nggip.iges.or.jp/public/2006/gl/vol4.htm. Jouany J.-P. (2008): Enteric methane production by ruminants and its control. In: Gut efficiency; the key ingredient in ruminant. Ed. by A. Andrieu D. Wilde, Wageningen Academic Publ., 35-59. Kellner O. (1905): Die Ernährung der landwirtschaftlichen Nutztiere, Verlag Paul Parey, Berlin, 638 S. Kebreab E., Clark K., Wagner-Riddle C. and France J. (2006): Methane and nitrous oxide emissions from Canadian animal agriculture. A review: Can. J. Anim. Sci. 86, 135-158. Kreuzer M. and Soliva C.R. (2008): Nutrition: Key to methane mitigation in ruminants. Proc. Soc. Nutr. Physiol. 17, 168-171. Moss A.R. and Givens, D.I. (1997): Methane production from a tange of feedstuffs as determined in vitro using the cumulative gas production technique and compared with that measured in vivo, Proc. Of the Brit. Soc. Of Anim. Scie., 194 (Abstr.). Rouviere P.E. and Wolfe R.S. (1988): Novel biochemistry of methanogenesis. J. Biol. Chem. 263, 7913-7916. Soliva C.R. (2008): Chancen und Grenzen einer fütterungsinduzierten Methansenkung beim Wiederkäuer in der Schweiz, Schriftenreihe ETH-Zürich, Tagungsbericht, 06. Mai 2008, 65-73. Steinfeld H., Gerber P., Wassenaar T., Castel V., Rosales M., and de Haan C. (2006): Livestock’s long shadow. Environmental issues and options. Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO), Rom. http://www.virtualcentre.org/en/libarary/key_pub/longshad/AO701E00.pdf Trei J.E. and Olson W.A. (1969): Effect of Chlorine containing analogues of methane on rumen fermentation. J. Anim. Sci., 29, 173 (Abstr.). Trei J.E. and Scott G.C. (1971): Performance of steers on the methane inhibitor-HCS. J. Anim. Sci. 33, 301 (Abstr.) Van Soest P. (19949: Nutritional ecology of the ruminant. Cornell Univ. Press, 476 Wallace R.J., Wood T.A., Rowe A., Price J., Yanez D.R., Williams S.P., Newbold C.J. (2006): Encapsulated fumaric acid as a means of decreasing ruminal methane emissions, Intern. Congress Series 1293, 148-151. Autorenanschrift Dr. Peter Lebzien Institut für Tierernährung Friedrich-Loeffler-Institut (FLI) Bundesforschungsinstitut für Tiergesundheit Bundesallee 50, 38116 Braunschweig e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 321 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment The effects of bacterial and chemical silage additives on grass silage on fermentation quality and aerobic stability Karin Schöndorfer1, Gudrun Böck1, Yunior Acosta Aragón2, Alfred Klimitsch1, and Gerd Schatzmayr1 1 BIOMIN Research Center, Technopark 1, 3430 Tulln, Austria 2 BIOMIN GmbH, Industriestraße 21, 3130 Herzogenburg, Austria Introduction Ensiling is a widely used method for conservation of forage. Even though the method has been employed for years in many parts of the world, a changing market and demand for high quality feed still induce a need to research and improve silage quality, which is a matter of quick acidification and reduction of Clostridia, yeasts and moulds and their respective toxins. In order to achieve this, biological as well as chemical silage additives are in use. While chemicals are often corrosive and expensive, biological additives, usually composed of lactic acid bacteria (LAB) offer a natural alternative lacking these inconvenient properties. The aim of the following experiment was to compare a chemical additive containing calcium formiate and sodium nitrite with two different mixtures of LAB (Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus kefiri) and an untreated control in grass silage to evaluate fermentation quality and aerobic stability. Materials and methods The lab scale experimental set up was as follows: 1. Product A: Mixture of LAB (Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus kefiri) at a dosage of 1 x 106 cfu/g silage 2. Product B: Mixture of LAB (Enterococcus faecium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus kefiri) at a dosage of 1 x 106 cfu/g silage, more heterofermentative LAB 3. Chemical A: containing calcium formiate and sodium nitrite 4. Untreated control Seite 322 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Each trial group consisted of 12 model silos (six with 0,5 kg, six with 2 kg), of which three small ones were opened after 3 and 7 days, respectively and three large ones after 48 and 93 days, respectively. The raw material used was grass, first cut. Parameters analysed included pH, dry matter (DM) loss, organic acids (by HPLC analysis) and aerobic stability (measurement of temperature rise according to Honig, 1990). Results Figure 1: DM loss in grass silage with LAB or chemical (n=3) Figure 2: Acidification of grass with LAB or chemical (n=3) 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 323 Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Figure 1 shows that the chemical additive caused the highest dry matter loss while Product B showed losses as low as 2,5 %, which was same as in the control. Concerning acidification (Fig.2) both silages with LAB-mix reached a lower pH than the one with chemical additive or the control within a week, and by the end of the ensiling period they still had a lower pH than the chemically treated and the control group. However, in all treated groups the pH at the end of the trial was significantly lower than in the control. Figure 3: Lactic and acetic acid contents in grass silage treated with LAB or chemical vs. control (n=3) Figure 3 shows that the lactic acid content is significantly higher in all treated groups than in the control. However, LAB treatment leads to higher lactic acid contents than addition of Chemical A. This explains the lower pH in the LAB-treated groups. Acetic acid was highest in the group with Chemical A, however, as acetic acid contents are desired to be no higher than 35 g/kg DM (Magraff, 2006), Product B showed the most favourable level. As depicted in figure 4 stability was higher after 93 days than after 48 days and higher in all treated groups than in the control. Based on the overly high acetic acid content Chemical A had the longest aerobic stability. According to DLG (2006, “Praxishandbuch Futterkonservierung”) silage should be aerobically stable for at least 3 days, which was achieved in all groups. Seite 324 7. BOKU-Symposium Tierernährung Tierernährung und Umwelt / Animal Nutrition and Environment Figure 4: Aerobic stability in treated and untreated grass silage after 48 and 93 days of ensiling (n=3) Conclusion LAB addition, in contrast to the chemical additive, led to faster and more efficient acidification, lower DM loss and a more favorable organic acid profile. Aerobic stability was not as high after 48 days, but reached the recommended duration and exceeded the stability of the control by about 2 days. Of the two LAB-mixes Product B – containing more heterofermentative LAB – proved to be more effective concerning DM-loss, acetic acid level and consequently aerobic stability. References Honig, H. (1990): Evaluation of Aerobic Stability. Grass Forage Rep.Spec.76-82. Landwirtschaftskammer Schleswig-Holstein (2006): Praxishandbuch Futterkonservierung-Silagebereitung, Siliermittel, Dosiergeräte; Silofolien, 7 edn, DLG-Verlags-GmbH, Frankfurt am Main. Margraff, J. (2006): Grassilage auf Gärqualität untersuchen lassen: Vorteile der Gärsäurenbestimmung und ihre Kosten. [accessed December 13, 2006] http://www.dlreifel.rlp.de/internet/global/themen.nsf/4052d651e90ebb1cc1256ed30047291c/11486b748be4bb97c1257044004e 5a10?OpenDocument Author’s address DI(FH) Karin Schöndorfer Biomin Holding GmbH Technopark 1, 3430 Tulln e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 325 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Messung des Pansen-pH-Wertes und der Temperatur mit einer intraruminalen, kabellosen Messeinheit Anwendung Rindern unter verschiedenen Rationsbedingungen bei J. Gasteiner, M. Fallast, M. Rosenkranz, J. Häusler, K. Schneider und T. Guggenberger Lehr- und Forschungszentrum Raumberg-Gumpenstein Einleitung ,Ein Abfall des Pansen-pH-Wertes bei Rindern unter die physiologische Norm, in der häufigsten Ausprägung als subakute Pansenazidose (Subacute Rumen Acidosis, SARA) auftretend, stellt ein weit verbreitetes und zumeist auch bestandsweise gehäuft auftretendes Problem in der Rinderproduktion dar. Das Risiko für SARA erhöht sich naturgemäß in Produktionssystemen, in welchen ein erhöhter Einsatz von leicht verdaulichen Kohlenhydraten bei zumeist gleichzeitiger Verdrängung von rohfaserwirksamen Strukturkohlenhydraten zur Erzielung höherer Wachstumsraten bzw. Zunahmen oder höherer Milchleistungen vorzufinden ist. Die negativen tiergesundheitlichen Auswirkungen von SARA sind vielfältig und stellen einen zentralen, die Produktion mindernden Faktor der Rinderhaltung dar. Aus verschiedenen Gründen ist SARA ein nicht immer einwandfrei nachzuweisender krankhafter und krankmachender Zustand. Ein Mangel an einfachen und spezifischen Nachweismethoden bzw. die geringe Akzeptanz der Pansensaftentnahme bei Rindern in der Praxis, aber auch aufgrund der Anfälligkeit bestehender Nachweismethoden gegenüber Diagnostikfehlern mancher Methoden führte dazu, dass der Nachweis bislang vorwiegend indirekt und retrospektiv (z.B. Fettgehalt Milch, FettEiweißquotient) und basierend auf sekundären klinischen Symptomen (z.B. dünner, breiiger Kot mit erhöhtem Anteil an unverdauten Bestandteilen) basierte. In der weiteren Folge wird das Vorliegen einer SARA in einer Herde zumeist erst nach Korrektur des Fütterungsregimes im Nachhinein bestätigt, wenn sich indirekte Parameter normalisiert oder sekundäre klinische Symptome verbessert haben. Erst die Kombination von klinischer Untersuchung, Futtermittelbeurteilung, Rationsbewertung bzw. – berechnung sowie die Analyse des Pansensaftes stellen die Grundlagen zur frühzeitigen Erkennung, noch besser zur Vorbeuge des Herdenproblems SARA dar. Im folgenden Beitrag sollen die Möglichkeiten zur Gewinnung von Pansensaft sowie die Messung des pH-Wertes der Pansenflüssigkeit als zentraler Parameter näher beschrieben und diskutiert werden. Eigene Untersuchungen und Ergebnisse zu einer neuartigen Methode zur Messung des Pansen-pHWertes werden vorgestellt. Seite 326 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Entstehung von subklinischer und klinischer Pansenazidose Pansenazidose wird vorrangig durch ein Überangebot an rasch fermentierbaren Kohlenhydraten (Stärke, Zucker) ausgelöst. Ein zumeist gleichzeitig bestehender Mangel an strukturwirksamen Kohlenhydraten (allgemein als Rohfaser bezeichnet) führt zu vermindertem Wiederkäuen mit verminderter Speichelproduktion und folglich geringerer Pufferkapazität im Pansen. In der Folge kommt es im Pansen zu einer Veränderung der Bakterienflora und folglich zu einer vermehrten und rascheren Produktion von organischen Säuren, welche aufgrund der verminderten Speichelproduktion nicht abgepuffert werden können. Die Azidose ist deshalb als pathologische Konsequenz (Erkrankung) der Störung des chemischen, physikalischen und mikrobiologischen Gleichgewichtes des Panseninhaltes anzusehen. In Abhängigkeit von Abwesenheit bzw. Bestehen klinischer Symptome kann zwischen subklinischer und klinischer Azidose unterschieden werden. Nach Verfütterung einer besonders stärkehaltigen Ration werden von bestimmten Bakterienstämmen im Pansen große Mengen an Glukose freigesetzt. Die physiologische Konzentration von Glukose im Pansensaft beträgt etwa 160 mg/dl. Durch die große Amylase-Aktivität dieser Bakterien kann der Glukosegehalt im Pansensaft 1400 mg/dl überschreiten. Dieses Überangebot an Glukose führt zu einer rapiden Vermehrung von üblicherweise nicht kompetitiven Bakterien wie Sc. bovis, welche in erster Linie Laktat produzieren. Andere opportunistische Bakterien, insbesondere Koliforme und Aminosäure-Decarboxylierende Mikroben vermehren sich ebenfalls stark und produzieren Endotoxine und Amide (Histamin), welche bei deren Lysis wieder frei werden. Durch den erhöhten Glukosegehalt im Pansen wird auch die Osmolarität des Pansensaftes erhöht, wodurch sich die Absorption von freien Fettsäuren aus dem Pansen vermindert. Den Ingesta wird in diesem Zusammenhang auch nur wenig Flüssigkeit entzogen, sie entwickeln sogar einen osmotischen Sog, es kommt zu Durchfallerscheinungen und der Körper dehydriert (Owens et al. 1998). Als weitere Ursache für Azidose sind eine abrupte Veränderungen der Rationsbedingungen sowie eine unregelmäßige Futteraufnahme (variierende Mengen von Grund- und Kraftfutter) sowie die Fütterungsfrequenz (Kraftfutter nur 1 mal oder 2 mal täglich, siehe auch Abbildung 1), zumeist bei Kühen in Anbindehaltung bei händischer Zuteilung, anzusehen. Die Pansenbakterien können aufgrund ihrer Stoffwechselleistung auch in „Laktat-Produzenten“ und „Laktat-Zehrer“ unterteilt werden. Unter physiologischen Verhältnissen besteht zwischen diesen beiden Gruppen ein Gleichgewicht. Da jedoch nur die Laktat-Zehrer sehr sensibel gegenüber pHWertveränderungen sind und unter sauren Bedingungen absterben, kommt es zu einer weiteren Vermehrung der Laktat-Produzenten und somit zu einer Akkumulation von Laktat (Owens et al. 1998). Krankheitserscheinungen und Folgen einer Pansenazidose Eine direkte Folge des Absinkens des Pansen-pH-Wertes ist die schmerzhafte Entzündung der Vormagenschleimhaut (Ruminitis) sowie eine daraus resultierende Störung der Entwicklung der Pansenzotten. Das erkrankte Rind weist eine verminderte oder gar sistierende Fresslust auf und der Kot wird dünnbreiig bis wässrig. Die Zusammenhänge zwischen Ruminitis und dem vermehrten Auftreten von Leberabszessen ist ebenfalls als gesichert anzusehen (Dirksen et al. 1985). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 327 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding 7,0 Kraftfutter 12 x Kraftfutter 2 x 2 x Kraftfuttergabe Pansen pH-Wert 6,6 6,2 5,8 5,4 5,0 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 Uhrzeit, Stunden Abbildung 1: Einfluss der Häufigkeit von Kraftfuttergaben auf den Pansen-pH-Wert (French u. Kennelly 1990) 8,5 Fütterung Fütterung 8,0 pH-Wert 7,5 7,0 6,5 6,0 KF 50 % schnell KF 50 % langsam Grünfutter 5,5 KF 25 % schnell KF 25 % langsam 5,0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 Stunden Abbildung 2: Einfluss der Rationsgestaltung auf den Pansen-pH-Wert Seite 328 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Die Anflutung des Blutes mit sauren Stoffwechselprodukten kann zu einer metabolischen Blutazidose mit schweren klinischen Krankheitserscheinungen führen. Infolge der Freisetzung von Endotoxinen und Histamin können akute und chronische Krankheitserscheinungen der Klauenrehe ausgelöst werden. In jüngerer Zeit wird die Klauenrehe als die Hauptursache für die meisten Erkrankungen der Klauen angesehen (Boosman 1990; Gantke et al. 1998; Lischer und Ossent 1996; Nordlund et al. 1995; Ossent et al. 1997). Aufgrund der verminderten/gestörten Futteraufnahme kommt es zu einer vermehrten Mobilisierung von körpereigenen Fettreserven und es kommt zuu einer subklinischen oder klinischen Ketose. Negative Zusammenhänge zwischen Pansenazidose, die vorwiegend in ihrer subklinischen Erscheinungsform größte tiergesundheitliche Probleme nach sich zieht, lassen sich auch zur Fruchtbarkeitsleistung der betreffenden Tiere herstellen (Jouany 2006). Eine gestörte Futteraufnahme, die verminderte Verdauung bzw. Resorption von Nährstoffen und die daraus resultierende negative Energiebilanz sowie die bereits beschriebenen möglichen Folgekrankheiten einer subklinischen Pansenazidose führen zu signifikant schlechteren Fruchtbarkeitsergebnissen bei diesen Kühen. Als weitere Anzeichen für eine Pansenazidose können eine schlechte Körperkondition, Durchfall, Thrombosen der Beckenvenen mit den Folgen Epistaxis und Hämoptysis, Erkrankungen des Labmagens, aber auch eine Immunsuppression und damit verbundene Infektionen wie die des Euters oder auch des Geschlechtsapparates angegeben (Nordlund 2003). Diese Zusammenhänge sind auch unter praktischen Verhältnissen immer wieder zu finden, lediglich der Beweis einer ursächlichen Beteiligung der Pansenazidose kann nur in den seltensten Fällen, also bei Vorliegen von entsprechenden Untersuchungsergebnissen (Pansensaftuntersuchungen), erbracht werden. Verminderte Fettgehalte in der Milch bzw. ein zu niedriger Fett-Eiweißquotient lassen auf eine Pansenübersäuerung schließen. Häufigkeit und Auftreten von Pansenazidose Enemark und Jorgensen (2001) geben die Häufigkeit der Pansenazidose bei Milchkühen in Dänemark mit 22 % an. Nach einer Ketose-Häufigkeit von 26 % war somit die Pansenazidose die zweithäufigste Erkrankung unter den Milchrindern. Eine Unterteilung in klinische und subklinische Verlaufsformen wurde dabei nicht vorgenommen. Oetzel (2003) gibt die Häufigkeit der subklinischen Pansenazidose bei frischlaktierenden Kühen mit 15 % an. Milchfettgehalt und weitere Hinweise auf Pansenazidose Der Milchfettgehalt wird von einigen Faktoren wesentlich beeinflusst, insbesondere vom Laktationsstadium (Milchleistung), der Rasse und von der Zusammensetzung der Ration (Grummer et al. 1991; Spohr et al 1992). Es besteht eine positive lineare Korrelation zwischen Azetat + Butyrat : Propionat im Pansen und dem Milchfettgehalt (Sutton et al. 1987). Bei der experimentellen Auslösung einer Pansenazidose bei Milchkühen fiel auch der Fettgehalt in der Milch drastisch ab (Nipcon und Heiljasz 1987), was auf die erhöhten Propionat- und abgesenkten Butyratgehalte im Pansen zurückgeführt wird. Dass aus diesen Beobachtungen immer wider ein direkter Zusammenhang „Milchfettdepression = Pansenazidose“ abgeleitet wurde kann nach heutigem Kenntnisstand so nicht mehr bestätigt werden. Richtig ist, dass die Milchfettdepression wie die Pansenübersäuerung eine zum Teil gleiche Entstehungsgrundlage haben und daher auch eine positive Korrelation besteht, aber es kommt nicht selten zu falsch positiven oder auch falsch negativen Aussagen bzw. Interpretationen (Rossow 2008). 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 329 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Aber auch bei Kühen mit „normalem“ Milchfettgehalt kann ein ausgeprägtes Pansenazidoseproblem bestehen. Insbesondere bei neumelkenden Kühen findet sich zugleich auch fast immer eine Ketose und dabei steigt der Milchfettgehalt infolge Mobilisation von Körperfett an, sodass bei gleichzeitigem Vorliegen von Ketose und einer Pansenübersäuerung durchaus „normale“ Werte für den Fettgehalt der Milch und den Fett-Eiweißquotienten (1,1 bis 1,4) vorgefunden werden. Dies führt dann zu einer falschen Interpretation der Milchinhaltsstoffe aufgrund einer kompensierten Keto-Azidose. Deswegen sind zusätzlich unbedingt auch die Eiweiß- und Harnstoffwerte der Milch von Kühen in vergleichbarem Laktationsstadium zu berücksichtigen. Als weitere Hinweise für das Bestehen von Pansenazidose können verminderte und abgeschwächte bis fehlende Pansengeräusche im Rahmen der Auskultation, Durchfall, sowie die Ergebnisse von Kotwaschungen (erhöhter Anteil unverdauter Futterpartikel) gedeutet werden. Zwischen dem pH-Wert im Pansensaft und der NSBA im Harn konnte nur eine unbefriedigende Korrelation festgestellt werden, die Sensitivität lag zwischen 9 % und 52 % und auch die Spezifität betrug lediglich 59 %. Auch der Säuren-Basen-Quotient im Harn kann nur bedingt zur Abschätzung des Pansen-pH-Wertes herangezogen werden (Sensitivität 24 % bis 52 %). Von den Blutparametern haben weder ein erhöhter Laktatgehalt, noch erhöhte Werte für GLDH und auch der Ketonkörpergehalt nur eine eingeschränkte Aussagekraft (Seemann und Spohr 2007). Durch entsprechende Futtermittelanalysen und Rationsberechnungen gelingt es zu einem guten Teil, Hinweise auf eine drohende „pansenaggressive“ Ration zu erhalten bzw. dieser vorzubeugen. Dabei sollte insbesondere auf die Rohfaserfraktionen sowie auf den Zucker-, Stärke-, Fett- und den Rohproteingehalt Rücksicht genommen (Nordlund 2003) bzw. das Verhältnis Grundfutter:Kraftfutter beachtet werden. Pansenaggressive Kraftfutterkomponenten sollte man vermeiden. Mit diesen Erhebungen und Berechnungen kann jedoch eine Pansenazidose nicht eindeutig nachgewiesen werden, da die Kuh nicht unbedingt das frisst, was gerade berechnet wurde („tatsächlich aufgenommene Ration“) und weil auch die Verdauungs- und Resorptionsvorgänge, insbesondere in den Vormägen, von vielen Variablen abhängig sind. Zusätzlich zum Nährstoffgehalt in der Ration hängt der Pansen-pH-Wert u.a. von der Gesamtfutteraufnahme, der Partikelgröße und dem Feuchtigkeitsgehalt des Futters, den Verzehrsgewohnheiten der Einzelkuh und der Wiederkautätigkeit ab. Möglichkeiten zur Gewinnung von Pansensaft Die Untersuchung des Pansensaftes, insbesondere des pH-Wertes stellt die definitive Untersuchungsmethode zur Erkennung einer Pansenazidose dar (Oetzel 2003). Der Pansen-pH-Wert unterliegt jedoch starken tageszeitlichen Schwankungen, weshalb das Ergebnis besonders vom Zeitpunkt der Probenahme im Bezug zur letzten Futteraufnahme abhängig ist. Auch die Methode der Probenahme beeinflusst das Ergebnis signifikant (Geishauser 1996, Seemann und Spohr 2007). Unter praktischen Bedingungen gibt es grundsätzlich 2 Möglichkeiten zur Gewinnung von Pansenflüssigkeit: 1. Gewinnung von Pansenflüssigkeit via Schlundsonde 2. Gewinnung von Pansenflüssigkeit via Rumenozentese Ad Schlundsonde: Bei dieser Methode, die auch unter praktischen Bedingungen relativ rasch und einfach durchgeführt werden kann, wird dem zu untersuchenden Rind eine Schlundsonde gesetzt und Pansensaft wird aktiv Seite 330 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding über eine Pumpe gewonnen oder Pansensaft fließt nach Absenken des Kopfes aus der Sonde (Dirksen 1975). Die verschiedenen Bauarten von Sonden und die Möglichkeiten des Sondenschutzes haben als Gemeinsamkeit, dass es durch den Akt des Setzens der Sonde zu einer Anregung der Speichelproduktion und damit zu vermehrtem Speichelfluss kommt. Da die Probe üblicherweise aus dem Haubenbereich stammt, in welchem ohnehin bereits etwas höhere pH-Verhältnisse herrschen als im übrigen Vormagensystem, sind derart gewonnene Pansensaftproben in den meisten Fällen vermehrt speichelhältig. Durch den pH-Wert des Speichels (etwa 8,5) bzw. auch durch dessen Pufferkapazität wird das Ergebnis dieser Proben verfälscht, man erhält falsche, zu hohe Werte. So ermittelten Strabel et al. (2007), dass per Schlundsonde entnommene Proben durchschnittlich 0,5 pHEinheiten (0,2 bis 1,9 pH-Einheiten) höhere Werte zeigten als solche, die per Ruminozentese entnommen wurden. Ein Unterschied von 0,5 pH-Einheiten ist jedoch für die Diagnose „Pansenazidose ja oder nein“ von maßgeblicher Bedeutung und führt unweigerlich zu falschen Ergebnissen („nicht Erkennen von SARA“). Das Verwerfen der ersten 100-200 ml der Probe wird deshalb empfohlen, damit soll sichergestellt werden, dass eine weniger speichelhältige Charge der Probe gemessen wird. Für mehrmalige Untersuchungen an einem Tier innerhalb weniger Stunden oder für Reihenuntersuchungen stellt sich die Probenahme per Schlundsonde als eher problematisch dar. Durch spezielle Bauarten von Schlundsonden wurde versucht, dieses Problem der Speichelbeimengung zu minimieren. Als „Fehler“ bei dieser Methode bleibt aber immer noch der Umstand, dass der pHWert in der Haubenregion allgemein höher ist als im restlichen, weitaus voluminösren Vormagensystem und dass diese Proben deshalb nur bei niedrigem pH-Wert-Messergebnis beweisend für eine Pansenazidose. Bei physiologischen Ergebnissen kann aber dennoch eine Pansenazidose bestehen. Ad Rumenozentese: Bei der Rumenozentese wird mittels Punktion des ventralen Pansensackes mit einer Kanüle (vorzugsweise 1,6 X 100 mm) Pansensaft durch Erzeugung von Unterdruck mit einer Spritze gewonnen. Die Punktionsstelle liegt 1-2 handbreit vor dem linken Kniegelenk (Seemann und Spohr 2007) auf Höhe des Patellaoberrandes (Strabel et al 2007) und wird lege artis nach Rasur unter aseptischen Kautelen und unter Sedierung und Schmerzausschaltung durchgeführt. Die dabei gewonnene Menge Pansensaft beträgt einige ml und die Probe ist nicht mit Speichel kontaminiert. Nordlund (2003) beschreibt die Methode der Rumenozentese ohne Anwendung einer Sedierung und ohne Schmerzausschaltung unter praktischen Bedingungen als durchführbar, was unter österreichischen Bedingungen rechtlich nicht möglich erscheint (TSchG: schmerzhafter Eingriff). Verschiedene Publikationen - auch jüngeren Datums, insbesondere aus dem angloamerikanischen Raum), sind immer wieder bemüht, die Rumenozentese als eine einfache, praxisnahe und ungefährliche Methode zur Gewinnung von Pansensaft aussehen zu lassen (Duffield et al. 2004; Kleen et al. 2004; Nordlund 1995). Tatsache ist, dass die durch Rumenozentese gewonnenen Proben im Vergleich zu per Schlundsonde gewonnenen Proben realistischere Pansen-pH-Werte liefern (Duffield et al 2004; Geishauser und Gitzel 2005), die Methode ist also deutlich sensitiver als die Gewinnung von Pansensaft per Schlundsonde. Dies wurde auch durch den Vergleich mit per Pansenfistel gezogenen Proben nachgewiesen. Mögliche Blutbeimengungen zum Pansensaft können jedoch die gewonnene Probe fehlerhaft und damit und nutzlos machen. Fehler und Probleme während der Probenahme wie etwa verstopfte Kanülen und deshalb notwendiges Spülen oder Einpressen von Luft (und damit CO2) können auch bei dieser Methode zu verfälschten Untersuchungsergebnissen führen. Als besonders problematisch sind auch die nicht ungefährliche Probenahme für das zu untersuchende Tier und für den Probenzieher anzusehen. Hämatome oder sogar mögliche Infektionen, Abszesse und peritonitische Verwachsungen um den Bereich des Stichkanals gefährden die Tiergesundheit. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 331 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Aufgrund möglicher massiver und unberechenbarer Abwehrbewegungen (Schmerzen) der Kuh während des Punktionsvorganges ist auch die Gesundheit des Probenziehers gefährdet (Strabel et al 2007). Welche Methode zur Gewinnung von Pansensaft herangezogen wird, liegt letztlich in der Entscheidung des Tierarztes, der auch die Verantwortung für sein Handeln zu übernehmen hat. Die möglichen Probleme, Nachteile und Risken der beiden Methoden sind bekannt und dem Tierhalter mitzuteilen. Da in den eher klein strukturierten Betrieben Österreichs die Unversehrtheit des Einzeltieres eine weitaus größere Bedeutung hat als in angloamerikanischen Großbetrieben, wird auch der Verlust eines Tieres nach missglückter Rumenozentese bei uns anders bewertet werden als in einem US-amerikanischen Großbetrieb. Die gewonnene Information, nämlich die Kenntnis über die Zusammensetzung des Pansensaftes, steht deshalb nicht unbedingt in einem Verhältnis zum Risiko, welches durch die Probenahme per Rumenozentese besteht. Zeitpunkt der Probenahme Wiederkauen Minuten pro Stunde 60 40 Fressen 20 0 4 8 12 16 22 24 Tageszeit Abb. 3 Tageszeitliche Verteilung der Aktivitäten Fressen und Widerkauen (Mc DOWELL 1972) Wie aus Abbildung 3 zu erkennen, sind sowohl Fressen als auch Wiederkauen rhythmische Aktivitäten, wobei nach dem Fressen immer zunächst eine „Ruhephase“ von 1-3 Stunden eintritt. Erst nach dieser Ruhephase beginnt das Wiederkauen. Nach dem Fressen setzen die Umsetzungsvorgänge im Pansen unmittelbar ein und durch die Produktion von Säuren sinkt der pH-Wert und zwar auch deshalb, weil der pH-puffernde Speichel erst mit dem Vorgang des Wiederkauens in großen Mengen produziert wird und dann erst im Pansen wirksam werden kann. Ein Mangel an strukturwirksamer Rohfaser führt zu einer verminderten Wiederkauaktivität und verstärkt die Absäuerung im Pansen. Da der pH-Wert im Pansen keine konstante Größe darstellt sondern von Rationszusammensetzung, aufgenommener Futtermenge, Wiederkautätigkeit usw. abhängig ist, hat der Zeitpunkt der Probenahme in Bezug zur letzten Fütterung größte Bedeutung auf das Untersuchungsergebnis. Die Empfehlungen zum optimalen Zeitpunkt der Probenahme liegen bei 3 – 5 Stunden nach der letzten Fütterung. Dies ist unter heute gängigen Fütterungsbedingungen (ad libidum-Fütterung, Mischrationen, Kraftfutterstation mit kurzen Fütterungsintervallen) nur schwer einzuhalten und die gewonnenen Ergebnisse sind, unabhängig von der Methode der Probenahme, entsprechend schwieriger zu beurteilen. Seite 332 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Methoden zur pH-Feststellung In der Praxis wird zur Feststellung des pH-Wertes üblicherweise Indikatorpapier verwendet. Eine relativ große Messungenauigkeit sowie die Anfälligkeit für Messfehler liefern aber eher ungenaue Ergebnisse (±0,15). Die Methode der Wahl wäre hier sicherlich ein pH-Meter, wobei Kosten und Praktikabilität (Eichung,..) eine wichtige Rolle spielen. Interpretation von weiteren Untersuchungsergebnissen des Pansensaftes Tabelle 1: Zusammensetzung des Pansensaftes (Belknap u. Navarre 2000) Parameter Ergebnis Interpretation Farbe grün phys.: Grünfutter gelbbraun phys.: Silage grünbraun phys.: GF + KF milchig-braun path.: KF-Überschuss aromatisch phys. sauer path.: KF-Überschuss alle Größen und Spezies phys. keine großen Entodinimorphe ggr. Indigestion keine Entodinimorphe mittl. Indigestion keine Protozoen Pansenazidose Methylenblau- < 150 sek phys. Entfärbungszeit > 150 sek Panseninaktivität Geruch Protozoen (Pansenazidose) Sedimentation/ 4 - 8 min phys. Flotation beschleunigt bei Inappetenz verlangsamt schaumige Gärung Gram - > Gram + phys. Gram +> Gram - path.: Pansenazidose < 30 mmol/l phys. > 30 mmol/l abomasaler Reflux 6,2 – 7,2 phys. 5,5 – 6,2; zeitweilig auch < 5,5 path.: latente Azidose permanent < 5,5 path.: akute Azidose > 7,5 path.: N-Überschuss Gram-Färbung Chlorid-Gehalt pH-Wert phys.: gesund; path.: krankhaft verändert 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 333 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Eigene Untersuchungen Zur kontinuierlichen Messung des pH-Wertes im Pansen (exakte Lage im Retikulum) wurde von Mitarbeitern der Technischen Universität Graz (Sciencepark) eine Sonde entwickelt und an pansenfistulierten Rindern des LFZ Raumberg-Gumpenstein getestet. Eine weitere Spezifikation der pH-Sonde ist, dass die gemessenen Werte (pH-Wert und zugleich auch die Temperatur) in der Sonde abgespeichert und von außerhalb des Pansens ausgelesen werden können. Dieses System zur Messung des Pansen-pH-Wertes überträgt die Messergebnisse drahtlos. Die Empfangseinheit ist direkt mit einem Laptop verbunden, wo die Ergebnisse sogleich abgelesen, graphisch dargestellt und interpretiert werden können. Die derzeitige Spezifikation der Pansen-pH-Sonde beinhaltet vom Anwender wählbare Messintervalle (von 1 Sekunde bis zu Stundenintervallen) und kann aufgrund seiner Bauart auch einem erwachsenen, nicht pansenfistulierten Rind per os eingegeben werden. Da die Energieversorgung der Sonde noch die limitierende Größe hinsichtlich der Messdauer darstellt, wurde die Sonde bislang nur an pansenfistulierten Rindern (n=5) erprobt. Die intraruminalen Messungen der vorliegenden Studie wurden halbstündlich durchgeführt, ohne Batteriewechsel ist eine Messdauer von bis zu 20 Tagen möglich. Nach der Kalibration der Sonden mittels Eichlösungen wurden der Pansen-pH-Wert und die Temperatur im Pansen unter folgenden Fütterungsbedingungen gemessen: 1. 100 % Heufütterung ad lib. 2. Täglich Weidegang (ab 6:00 Uhr) und Heufütterung abends ad lib., 3. 50:50 Heufütterung : Kraftfutter (6:00 Uhr und 13:00 Uhr), bei dieser Untersuchung wurden zeitgleich 2 Pansensensoren in einem Tier eingelegt. Zugleich wurden in 2-stündigen Intervallen Pansensaftproben über die Pansenfistel gezogen, mit einem pH-Meter gemessen und mit dem Ergebnis der beiden Pansensonden verglichen. Die statistische Auswertung wurde per GLM ((Statgraphic Plus 5.1) und den Bonferroni-Holm-Test durchgfeführt. ad1: 100 % Heufütterung ad lib. Die mittlere Temperatur im Pansen (mean 38,40±0,70° C) wurde bei reiner Heufütterung signifikant durch die Wasseraufnahme beeinflusst (dies trifft auch auf Versuch 2 und 3 zu), aber die Temperatur zeigt keine Beziehung zum Fütterungszeitpunkt. Das unperiodisch auftretende signifikante Absinken der Temperatur hängt also mit der Wasseraufnahme zusammen und kann dadurch erklärt werden. Der mittlere pH lag bei 6,49±0,39 und der tiefste gemessene Wert lag bei pH 6,14. ad 2: Täglich Weidegang (ab 6:00 Uhr) und Heufütterung abends ad lib., Seite 334 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding 40 7,5 7 38 37 6,5 36 6 ph-Wert Temperatur (°C) 39 35 5,5 34 ph-Wert Temperatur 20:00 16:00 12:00 08:00 04:00 00:00 20:00 16:00 12:00 08:00 04:00 5 00:00 33 Uhrzeit Abb. 4.: Zeitlicher Verlauf des Pansen-pH-Wertes und der Temperatur bei reiner Heufütterung 40 7,5 7 38 37 6,5 36 6 ph-Wert Temperatur (°C) 39 35 5,5 34 Temperatur ph-Wert 20:00 16:00 12:00 08:00 04:00 00:00 20:00 16:00 12:00 08:00 04:00 00:00 20:00 16:00 12:00 08:00 04:00 5 00:00 33 Uhrzeit Abb. 5: Zeitlicher Verlauf des Pansen-pH-Wertes und der Temperatur bei Weidegang und Heufütterung 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 335 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Die mittlere Temperatur im Pansen betrug 38,12±0,80° C, der mittlere pH-Wert betrug 6,36±0,22. Der tiefste gemessene Wert war pH 5,34 während der Weidephase und pH 6,16 während der Raufutterphase. Die Futteraufnahme auf der Weide hatte einen signifikanten Einfluss auf den ph-Wert im Pansen. ad 3: 50:50 Heufütterung:Kraftfutter 7,5 40 7 38 37 6,5 36 6 ph-Wert Temperatur (°C) 39 35 5,5 34 Temperatur ph-Wert 01:00 23:30 22:00 20:30 19:00 17:30 16:00 14:30 13:00 11:30 10:00 08:30 07:00 05:30 04:00 02:30 5 01:00 33 Uhrzeit Abb. 6: Zeitlicher Verlauf des Pansen-pH-Wertes und der Temperatur bei 50:50 Heufütterung:Kraftfutter Die mittlere Temperatur im Pansen betrug 38,55±0,83° C und der mittlere pH-Wert lag bei 6,37±0,24. Der tiefste Wert war pH 5,29. Das Absinken des Pansen-pH-Wertes korrelierte signifikant mit der Verabreichung von Kraftfutter. Beim Vergleich der Ergebnisse der Simultanmessungen mit 2 Messsonden in einem Tier lag der absolute statistische Fehler für die Temperatur bei 0,6±0,65° C und 0,15±0,19 für den Pansen-pHWert. Die Unterschiede der Messergebnisse der beiden Sonden können durch den dynamischen Pansenstoffwechsel sowie durch die inhomogene Mischung der Ingesta im Pansen erklärt werden. Seite 336 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Schlussfolgerungen Die Ergebnisse zeigen, dass das vorgestellte System zur Messung des pH-Wertes und der Temperatur im Pansen eine innovative und verlässliche Grundlage zur Klärung wissenschaftlicher Fragestellungen hinsichtlich der Pansenphysiologie und der Pansenpathologie darstellt. So kann nun etwa auch der zeitliche Verlauf des Pansen-pH-Wertes unter verschiedenen Rationsbedingungen dokumentiert werden, dadurch können Zeitphasen mit azidotischer Belastung leichter erkannt bzw. definiert werden. Da die vorgestellten Messsonden auch per os eingegeben werden können, dürfte es nur eine Frage der Zeit und der Kosten sein, bis ein adaptiertes und verbessertes System auch unter praktischen Bedingungen, vorzugsweise in Großbetrieben, zur Überwachung der Ration („Indikatortiere“) und auch der Tiergesundheit zum Einsatz kommt. Mitteilung und Danksagung Für die vorliegenden Untersuchungen an pansenfistulierten Rindern liegt eine Tierversuchsgenehmigung lt. TVG vom zuständigen Amt der Steiermärkischen Landesregierung vor (GZ FA 8C-41A1/24-04 bzw. GZ 68205/89-C/gd/2007). Wir möchten uns auf diesem Weg bei den Vertretern der Behörde, namentlich bei Fr. Dr. Gertraud Odörfer und Fr. Mag. Beate DeRoja für die gute Zusammenarbeit bedanken. Ein weiterer Dank gilt den Mitarbeitern der vorgesetzten Dienststelle, dem BMLFUW, für die freundliche Genehmigung und Unterstützung des Projektes „Pansensensor“. Literatur Literaturstellen können beim Autor angefordert werden Anschrift des Verfassers Dr. Johann Gasteiner (ECBHM), Leiter des Institutes für Artgemäße Tierhaltung und Tiergesundheit LFZ Raumberg- Gumpenstein, A-8952 Irdning Tel: ++43/3682/22451-360; Fax: ++43/3682/22451-210; e-mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 337 Firmensponsoring - Agrarmarkt Austria Marketing GesmbH., Dresdner Straße 68a, A-1200 Wien Seite 338 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Einfluss der Stalltemperatur auf die Leistung von Mastschweinen Brigitte Brandner und W. Wetscherek Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften- und technologie Einleitung Die meisten Schweineställe sind Warmställe. Durch ihre geschlossenen Bauweise, bieten sie Schutz gegen Außentemperaturen. Da Wärmeställe fortlaufend Wärme über den Boden, die Decke, die Wände und die Lüftungen verlieren, muss für eine ausreichende Wärmedämmung gesorgt werden. Heizung, Lüftung, Beleuchtung und eine gute Isolierung sind für diese Art von Stall unverzichtbar. In den letzten Jahren erfahren in der Schweinemast nicht wärmegedämmte Stallsysteme eine immer größere Verbreitung. Diese Systeme sollen eine tiergerechte und kostengünstige Haltung von Mastschweinen ermöglichen. Kälte und Hitze, aber auch Staub und Schadgase in der Luft wirken sich in jeder Haltungsform negativ auf die Gesundheit der Tiere aus und können zu einem Tierschutzproblem werden. Der Versuch beschäftigt sich mit der Frage, ob und in welcher Weise das Stallklima einen Einfluss auf Mastleitung, Verfettung der Tiere, Futterverbrauch und Wasserverbrauch nimmt. Insbesondere wird überprüft, wie sich die Temperaturverhältnisse im klimatisierten Warmstall gegenüber denen im Kaltstall unterscheiden. Versuchsdurchführung Um einen Einfluss der Jahreszeiten überprüfen zu können, wurden zu drei Terminen von 6 bis 8 Zuchtsauen die Ferkel an der LFS-Hatzendorf aufgezogen und jeweils 40 Ferkel für den Mastversuch ausgewählt. Bei der Einteilung der Gruppen wurde auf eine gleichmäßige Verteilung von Geschlecht, Wurf und Gewicht geachtet. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 339 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Die Schweine wurden in den ersten 4 Wochen mit dem Schweinemastalleinfutter I ad libitum gefüttert. Danach erfolgte die Umstellung auf das Schweinemastalleinfutter II, welches wieder ad libitum angeboten wurde. Die Rezepturen und die wertbestimmenden Bestandteile werden in der Tabelle 2 dargestellt. Die Tiere wurden bei der Einstellung, nach vier bzw. sechs Wochen sowie zu Versuchsende gewogen. Der Futter- und Wasserverbrauch wurde ebenfalls für diese Abschnitte ermittelt. Die Temperaturmessung erfolgte in den Ställen durch spezielle Messgeräte (Hotdogs, zur Verfügung gestellt von dem Institut für Tierhaltung und Tierschutz der Veterinärmedizinische Universität Wien), Seite 340 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding die im Stundenintervall jeweils die Raum- und Liegetemperatur, im Warmstall zusätzlich die Luftfeuchtigkeit, aufgezeichnet haben. Eine weitere Messung der Außentemperatur, Luftfeuchtigkeit und Niederschlagsmenge erfolgte durch die Wetterstation des „Wegener Zentrums für Klima und Globalen Wandel“ der Karl- Franzens- Universität Graz, in der Nähe der Schule. Die Daten wurden hier in 5-minütigen Zeitintervallen aufgezeichnet. Mast- und Schlachtleistungsergebnisse Die Ergebnisse der Mast- und Schlachtleistung zeigten ein sehr hohes Niveau und sind in der Tabelle 3 zusammengefasst. Der Vorteil für den Warmstall betrug bezüglich der Tageszunahmen etwa 7%. In der Periode 5. und 6. Mastwoche waren die beiden Stallsysteme gleichwertig. Im Gegensatz zu den ersten Mastwochen zeigten die Tiere im Kaltstall in den letzten Mastwochen einen um 12,8 % signifikant höheren Tageszuwachs. Die Unterschiede in den Tageszuwächsen basieren auf den beiden ersten Versuchsdurchgängen mit kalten Außentemperaturen. Der dritte Durchgang in den Sommermonaten zeigte insgesamt eine leichte Überlegenheit für den Kaltstall in allen Mastabschnitten. Dies führte bei der Betrachtung der gesamten Mastperiode und allen drei Versuchsdurchgängen einen etwa gleich hohen Tageszuwachs in beiden Stallsystemen. Die Futterverwertung zwischen Kalt- und Warmstall zeigte über die gesamte Mastperiode keine signifikanten Unterschiede. Der Wasserverbrauch ist im Kaltstall im Jahresdurchschnitt um etwa 0,7 l je Tier und Tag höher, besonders deutlich war dies in den Sommermonaten (Juli bis Oktober). Hier lag der Verbrauch durchschnittlich 1½ Liter je Tier und Tag über dem Wasserverbrauch im Warmstall. Der Magerfleischanteil war mit ca. 59% bei allen drei Durchgängen zwischen Warm- und Kaltstall in etwa gleich. Auch die Auswertung der übrigen Schlachtergebnisse brachte keine wesentlichen Unterschiede bezüglich Speckmaß, Fleischmaß und Filzgewicht hervor. Stallraumtemperatur Wie aus Graphik 1 ersichtlich, war die durchschnittliche Stallraumtemperatur (Mittelwert der 24 Stundenmesswerte je Tag) im Warmstall relativ konstant mit wenigen Schwankungen 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 341 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding (ausgenommen mit Temperaturspitzen im Sommer), gegenüber dessen sich die Stallraumtemperatur im Kaltstall stark abhängig mit der Außentemperatur veränderte. Es waren hier auch kurzfristige, starke Temperaturschwankungen (>10 °C) möglich. Liegeplatztemperatur Wie aus Graphik 2 ersichtlich, schwankte die Temperatur der Liegeplätze im Kaltstall stärker als im Warmstall, wobei die beiden Kurven einen ähnlichen Verlauf nahmen. Die Außentemperatur wirkte sich schwach, aber doch auf beide Kurven aus, wobei naturgemäß der Kaltstall stärker beeinflusst wurde. Fazit In den ersten Mastwochen wirken sich die höheren Temperaturen im Warmstall bei geringen Außentemperaturen positiv auf die Wachstumsrate aus. Gegen Ende der Mast schneidet der Warmstall bezüglich des Tageszuwachses schlechter ab. Dies ergibt insgesamt etwa gleich gute Leistungen für beide Systeme. Futterverwertung war über die gesamte Mastperiode zwischen den Stallsystemen ähnlich. Der Magerfleischanteil wurde durch die Haltungssysteme nicht beeinflusst. Graphik 1 Durchschnittliche Stallraumtemperatur in °C erster Durchgang zweiter Durchgang dritter Durchgang 35 30 25 20 15 10 5 0 Außentemperatur Kaltstall Warmstall 16 .1 1. 20 06 14 .1 2. 20 06 11 .0 1. 20 07 08 .0 2. 20 07 08 .0 3. 20 07 05 .0 4. 20 07 03 .0 5. 20 07 31 .0 5. 20 07 28 .0 6. 20 07 26 .0 7. 20 07 23 .0 8. 20 07 20 .0 9. 20 07 18 .1 0. 20 07 -5 Seite 342 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Graphik 2 Durchschnittliche Liegeplatztemperatur in °C erster Durchgang zweiter Durchgang dritter Durchgang 35 30 25 20 15 10 5 0 Außentemperatur Kaltstall Warmstall 07 .1 0 .2 0 07 18 .0 9 .2 0 07 20 .0 8 .2 0 07 23 .0 7 .2 0 07 26 .0 6 .2 0 07 28 .0 5 .2 0 07 31 .0 5 .2 0 07 03 .0 4 .2 0 07 05 .0 3 .2 0 07 08 .0 2 .2 0 07 08 11 .0 1 .2 0 06 .2 0 .1 2 14 16 .1 1 .2 0 06 -5 Autorenanschrift Ao. Univ.- Prof. Dr. Wolfgang Wetscherek Department für Lebensmittelwissenschaften und –technologie Abteilung Tierische Lebensmittel, Tierernährung und Ernährungsphysiologie Universität für Bodenkultur Wien Gregor Mendel Straße 33, 1180 Wien e-Mail: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 343 Firmensponsoring - DSM Nutritional Products Ltd, P.O. Box 3255, CH-4002 Basel Seite 344 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding The effect of naturally moulded feedstuff on nutrients utilization Anna Vasatkova 1, Sarka Krizova 1, Vojtech Adam 1,2, Libor Kalhotka3 and Ladislav Zeman 1 1 Department of Animal Nutrition and Forage Production 2 Department of Chemistry and Biochemistry 3 Department of Agrochemistry, Soil Science, Microbiology and Plant Nutrition Introduction The production of safe food is the priority of developed countries. More than 25 % of worldwide production of cereals is contaminated by fungi, therefore mouldy feedstuffs are currently global question on agriculture field. Moulds are fungi that grow by producing long filaments called hyphae. They are plants that contain no chlorophyl and can grow in the absence of natural light. The primary metabolites of fungi and other organisms are those compounds that are essential for growth. Secondary metabolites are formed in the final stages of the exponetial growth phase. Under fields conditions, stress and subsequently reduced vigor often predispose plants to infestition and colonization by toxigenic fungi. In stored grain, toxigenic fungal infection and mycotoxin production results from a complex interactions among moisture, temperature, substrate, oxygen and carbon dioxide concentration, insect presence and fungal abundance. First, the biggest way of mycotoxin’s absorption is oral, the transcutaneous absorption is minor [1]. Then, mycotoxins go through the digestive system. They can be absorbed in different part of digestive system, but generally that’s happened in bowel [2]. Then the absorbed mycotoxins go through the plasma, and are distributed to hepatocytes via a passive transmembrane scattering [3]. The liver stays the main organ in relation with mycotoxins. In the liver, arises the first phase of biotransformation which is generally the oxidation of mycotoxins. The liver is the main prey of mycotoxins. According to this, most of the experimentations are realized on this organ, but the mechanism of toxicity of mycotoxins is applicable to all the others animals’ organs [4]. Researches show some differences of absorption or metabolism between the different part of the gastric system. Moreover, metabolism and absorption vary between species. The greatest deepoxidation activity happens in colon, and in duodenum and jejunum, it does not seem to be any metabolism. In addition, some mycotoxins act as neurotixins, while others act by interfering with cellular proteins synthesis, producing skin sensitivity and extreme immunodeficiency. The toxigenic 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 345 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding fungi involved in human and animals food chains belong mainly to three genera: Aspergillus, Fusarium and Penicilum. In our experiment we tested effect of moulded feedstuffs in experimental feed mixtures on animals health. We monitoried grow characteristic, feed intake and feed conversion. Material and methods In experimental equipment of Department of Animal Nutrition and Forage Production at Agronomic Faculty of Mendel University of Agriculture and Forestry Brno two experiments were finished. As experimental model, Wistar albino male rats from conventional breeding at BioTest s.r.o., Konarovice were in growing experiment used. Experimental animals were kept in vivarium with regulated air temperature (in range 23 ± 1°C), photoperiod (managed artificially according to scheme 12 hours day : 12 hours night with maximal intensity 200 μE.m-2s-1 lx), and continual air humidity at level of 60 %. From chemical conditions was limited CO2 content in stable air – max. 0.25 % and NH3 content – max. 0.0025 %). Rats were stabled to plastic cages with slotted floor. Animals were colour-coded to provide individual monitoring of growth intensity, emergence and health state. Tempered feed mixtures and drinking water were accessible ad libitum, feed consumption was monitored in groups. Leavings of nonconsumed feeds and faeces were sampled in groups, dried and weighted – uneaten feedstuff for experimental groups’ net feed intake determination. Animals were weighted once a week and at the same time monitored weight gain, feed intake, conversion and health state. In the growth experiment 28 Wistar male albino rats entered in age 28 days. The animals were allotted to 4 groups (7 male rats per group). Average initial weight in groups was in range from 67.8 to 71.4 g which is conform to standard specification, according to which maximal difference between groups 5 g is to be admitted [5]. We used feed mixtures with different content of naturally mouldy wheat or fungy (Tab.1). The rats were administrating by these mixtures for 28 days. During the experiment were observed consumption of testing feeding mixture and coefficient of dry matter digestibility, nitrogen mass, fat and ashes. Health condition of testing animals and weight gain were monitored weekly. Fungi identification and quantification in mouldy wheat: Mouldy wheat (app. 20 g) was shaking in 180 ml distilled water for 15 min. The suspension was 10 times diluted with water. Then, ten times diluted suspension (1 ml) was introduced onto Petri dish with cultivation medium (Chloramphenicol Glucose Agar, Biokar Diagnostics, France). Fungi were cultivated for 125 hours at 25 °C. Detection of fungi species was performed microscopically. Total number of fungi was 2 106 CFU/g (colony forming unit per a gram of mouldy wheat). Seite 346 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Table 1. Scheme of experimental diets composition: Control 33 % mouldy wheat 66 % mouldy wheat 100 % mouldy wheat 60 40.2 20.4 - - 19.8 39.6 60 12 12 12 12 Starch 22.14 22.14 22.14 22.14 Lysin 78% 0.46 0.46 0.46 0.46 Mineral premix 3 3 3 3 Vitamin premix 0.4 0.4 0.4 0.4 2 2 2 2 100 100 100 100 Group Ingredient (%) Wheat Mouldy wheat Soybean meal 47.5% Snflower oil Sum Results and conclusion : control mouldy wheat (33 %) mouldy wheat (66 %) mouldy wheat (100 %) 12 11 10 9 8 7 6 5 1 week 2 week 3 week 4 week Figure 1.: Monitoring ADG behind whole experiment 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 347 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 33 Contro 66 100 Figure 2.: Feed conversion kg FM /kg ADG The result of our experiment showed that the AVG was decreasing and the feed conversion was worse in relation with increased mouldy wheat content in feed mixture (Fig. 1, 2). We found out that the control group had the best feed conversion, wich was 2.71 kg FM /kg ADG. The worst feed conversion had the group with 66 % moulded wheat in feed and it was 3.32 kg FM /kg ADG. Control group had the highest average weight gain from 1st till 28th day, which was 227.91 ± 24.22 g. Group fed mixture with 100 % mouldy wheat had the worst weight gain, which was 186.5 ± 8.9 g. References and Notes [1] L. LIU, J.M DANIEL, R.K. STEWART, T.E. MASSEY, 1990, In vitro prostaglandin H synthetase and monooxygenase-mediated binding of Aflatoxin B1 to DNA in guines pig tissue microsomes, Carcinogenesis,N° 11, 1915-1919 [2] S. KUMAGAI, 1989, Intestinal Absorption and excretion of aflatoxin in rats, Toxicol.Appl.Pharmacol., N°97, P 88-97 [3] N. MULLER, E. PETZINGER, 1988, Hepatocellular uptake of Aflatoxin B1 by nonionic diffusions. Inhibition of bile acid transport by interference with membrane lipids, Biochim, Biophys.Acta, N°938, p 334-344 [4] P. GUERRE, P. GALTIER, V. BURGAT, 1996, Les aflatoxicoses chez l’animal : des manifestations cliniques aux mécanismes d’action, Revue Médicale Vétérinaire, N°147.7, p497-518 [5] KACEROVSKÝ, O. et. al.: Zkoušení a posuzování krmiv. SNZ Praha 1990, 216s. ISBN 80-209-0098-5 Address of corresponding autor Vasatkova Anna, Ing. Department of Animal Nutrition and Forage Production, Faculty of Agronomy, Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno Zemedelska 1, 613 00 Brno, Czech Republic e-mail:[email protected] tel.: +420 545 133 167 Seite 348 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Vergleich der Rohproteinaufnahme mit dem Bedarf in der Aufzucht männlicher Fleckviehkälber Karl Rutzmoser, Thomas Ettle und Anton Obermaier Institut für Tierernährung und Futterwirtschaft Grub Einleitung Der Nettobedarf an Rohprotein (RP) von Aufzuchtkälbern wurde faktoriell ermittelt und mit Multiplikationsfaktoren der Bedarf an Rohprotein (in g je Tag) abgeleitet (GfE 1995, 1999). Das aus Fütterungsversuchen vorliegende Datenmaterial bietet sich an für einen Vergleich der Empfehlungen mit den gemessenen Rohprotein-Aufnahmen bei Aufzuchtkälbern. Ableitung des Bedarfes Bei der faktoriellen Ableitung wird der Nettobedarf an Rohprotein für die unvermeidlichen Verluste (entspricht Erhaltungsbedarf) und für den Ansatz bestimmt. Die unvermeidlichen Verluste setzen sich aus endogenem Harn- und Kot-N sowie den Oberflächenverlusten zusammen. Auf Rohprotein berechnet (Faktor N * 6,25 = RP) werden folgende Gleichungen verwendet: Endogene Harnverluste (Bezugsgröße: log10 des Lebendgewichtes W in kg): RP in Harn, endogen: ( 5,9206 * log( W ) – 6,76 ) * 6,25. Endogene Kotverluste (Bezugsgröße: Futtertrockenmasseaufnahme TM in kg): RP in Kot, endogen: ( 2,19 * TM ) * 6,25. Oberflächenverluste (Bezugsgröße: metabolisches Lebendgewicht W in kg): RP in Oberflächenverlusten: ( 0,018 * W**0,75 (exp) ) * 6,25. Der Nettobedarf für den Ansatz ist die im Zuwachs enthaltene Proteinmenge. Diese wurde im Rahmen der Ableitungen zur Energieversorgung bearbeitet (GfE 1997). Im Leerkörper wird ein konstanter Anteil von 188 g Rohprotein je kg angenommen, wobei ein mit dem Lebendgewicht fallender Leerkörperanteil (und damit ein fallender RP-Gehalt im Zuwachs) unterstellt wird. Der so errechnete Nettobedarf aus Erhaltung und Ansatz wird mit Faktoren aus dem Anteil an Aminosäure-N am 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 349 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Gesamt-N, der Absorbierbarkeit und der Verwertung der Aminosäuren zum Bruttobedarf hochgerechnet. Bis 60 kg Lebendgewicht (überwiegend Milchernährung) wird ein Faktor von 1,4 (73 %), ab 120 kg (Wiederkäuer) ein Faktor von 2,3 (43 %) verwendet, dazwischen wird gleitend interpoliert. Rohproteinaufnahme und Ausnutzung für den Nettobedarf Bei gegebenem Lebendgewicht und gemessener TM-Aufnahme je Tag lässt sich mit den genannten Formeln aus den N-Verlustgrößen der Erhaltungsbedarf an Rohprotein errechnen. Für den Ansatz an Rohprotein im Zuwachs kann mit geringem Fehler ein konstanter Wert von 175 g RP/kg Zuwachs verwendet werden, welcher dem Gehalt bei leichteren Kälbern und auch dem angesetzten Gehalt in der Anfangsmast von Bullen nahe kommt. Somit ergibt sich der Nettobedarf für den Zuwachs aus dem Gehalt von 175 g RP/kg und der Tageszunahme (g/1000 = kg). Wird die Summe des Nettobedarfes (Verluste, Ansatz) auf die aufgenommene Rohproteinmenge bezogen, ergibt sich eine „Ausnutzung“ (in %) als Kennzahl der Rohproteinverwertung. Diese kann mit den Faktoren (bzw. deren Kehrwerten in %) aus der Bedarfsableitung verglichen werden. Nach den Gegebenheiten im Tierkörper kann man davon ausgehen, dass unter Bedingungen einer knappen Rohproteinversorgung die Ausnutzung bis zu einer Grenze ansteigt, bei der dann die Leistung (Zunahme) durch das Rohprotein begrenzt ist. Das Tier kann auf eine derartige Unterversorgung vor allem mit einer geringeren Futteraufnahme oder einem vermehrten Fettansatz reagieren, beides führt zu geringeren Zunahmen. Höhere Rohproteinzufuhren werden verstoffwechselt und ergeben eine niedrigere Ausnutzung. Folglich ist das Ziel dieser Auswertung, die in den Versuchen verwirklichte maximale Ausnutzung des Rohproteins heraus zu finden. Daten der Fütterungsversuche Für die Auswertungen wurden die Ergebnisse von 6 Aufzuchtversuchen mit männlichen Kälbern der Rasse Fleckvieh, durchgeführt an der Landesanstalt in Grub verwendet. Zu den von Rutzmoser u. a. (2007) verwendeten Daten wurde ein weiterer Versuch aufgenommen. In 3 der 6 Fütterungsversuche wurde die Wirkung unterschiedlicher Rohproteinträger (Getreidetrockenschlempe, Rapsextraktionsschrot und Sojaextraktionsschrot auf die Zunahmeleistung untersucht (Spiekers u. a. 2005a, 2005b, 2006). In zwei weiteren Untersuchungen wurde die Auswirkung eines abgesenkten Rohproteingehaltes im Kraftfutter (19 und 16 % bzw. 20 und 17%) geprüft (Horn u. a. 2007, Preißinger u. a. 2008). Ein weiterer Versuch befasste sich mit dem Einsatz eines Futterzusatzstoffes. Zur Beschreibung des Datenmaterials sind in Tabelle 1 die mittleren Werte nach Gewichtsklassen angeführt. Seite 350 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Tabelle 1: Aufnahme im Futter und Leistung in Gewichtsklassen Gew.- Anzahl mittleres Tages- ME MJ RP g RP g RP g RP g Ausnutz. klasse Gruppen Gewicht zun. g Aufn. Aufn. Erhalt. Ansatz Nettob. RP % 80 28 84 577 13,6 186 44 101 145 79 100 32 98 893 22,5 315 58 156 214 68 120 30 119 1163 33,0 444 75 204 279 63 140 23 141 1422 44,8 575 94 249 343 60 160 22 161 1350 51,4 658 104 236 340 52 180 17 181 1517 56,9 694 113 265 378 55 200 6 195 1581 61,0 736 119 277 396 54 Die Aufzuchtversuche mit den Bullenkälbern begannen mit etwa 75 kg und dauerten meist 14 bis 16 Wochen. Die Tiere erreichten dann etwa 200 kg Lebendgewicht bei durchschnittlich 1122 g Zunahmen je Tag. Ein Versuch endete nach 11 Wochen mit rund 160 kg. In jedem Versuch standen 2 Gruppen mit je 21 Kälbern, die Tierwiegungen erfolgten wöchentlich, in einem Versuch 2-wöchig. Der Milchaustauscher wurde bis zu einem Lebendgewicht von etwa 120 kg mit einer Abrufstation verabreicht, je nach Versuch auch Kraftfutter tierbezogen zugeteilt. Grundfutter (Heu, Maissilagen) und zum Teil Kraftfutter (als Mischration) wurden gruppenweise zugewogen. Deshalb gehen die Auswertungen von Mittenwerten je Gruppe und Wiegeabschnitt (Woche) aus. Aus den festgestellten Futtermengen und deren Gehalten wurden die Aufnahmen an Trockenmasse, Rohprotein und ME insgesamt und aus Milchaustauscher errechnet. Entsprechend der dargestellten Ableitung (175 g Rohprotein/kg Zuwachs) wurde für jede Gruppe und Woche der Nettobedarf an Rohprotein ermittelt und mit dem Bezug auf die Rohproteinaufnahme die in diesem Wiegeabschnitt tatsächlich erreichte Ausnutzung des Rohproteins (%) bestimmt. Ergebnisse Aufgrund der Streuungen der Zunahmen auf Wochenebene ergeben sich für den Nettobedarf und die Ausnutzung des Rohproteins ebenfalls erhebliche Streuungen. Während die Aufnahme an Rohprotein mit geringen Schwankungen gemessen werden kann, ergeben sich durch unvermeidliche Zufallsfehler bei den Wiegungen erhebliche Streuungen der Tageszunahmen. Eine höhere Zunahme führt zu einer höheren RP-Ausnutzung und umgekehrt. Da die Auswertung auf die maximal erreichbare Ausnutzung abzielt, sind Mittenwerte der RP-Ausnutzung beispielsweise über Fütterungsgruppen nicht aussagekräftig, weil damit eine unterschiedliche Fütterung eingeebnet wird. Damit ein gesuchter Maximalwert der Ausnutzung nicht zu sehr durch Zufallsfehler entsteht, wurde versucht, innerhalb einer Fütterungsgruppe (Behandlung, Durchgang) die Werte zu glätten. Als brauchbares Verfahren, die zufallsbedingten Ausschläge einzugrenzen zeigte sich das Zusammenfassen zu 4-WochenAbschnitten. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 351 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Abbildung 1: Ausnutzung des Rohproteins in % nach Lebendgewicht für Gruppen-Wochen, 4-Wochen und Vorgaben der GfE Die Ausnutzung des aufgenommenen Rohproteins für den Nettobedarf ist in Abbildung 1 dargestellt. Darin sind die einzelnen Wochenwerte der Gruppen, die gemitteten 4-Wochenwerte und zum Vergleich die Werte aus den Multiplikationsfaktoren der GfE (1999) zum jeweiligen Lebendgewicht gezeigt. Es ist offensichtlich, dass über den gesamten Gewichtsbereich die realisierten Ausnutzungen über den GfE-Vorgaben liegen, wobei naturgemäß die Wochenwerte weiter streuen. Die Absicht ist nun, über die gefundenen Punkte eine obere Linie zu ziehen, welche als maximal erreichbare Rohproteinausnutzungen (für das entsprechende Lebendgewicht) angesehen werden können. Aus der Grafik kann man für die Gewichtsbereiche folgende Ausnutzungsraten herauslesen: Lebendgewicht Ausnutzung des Rohproteins bis 80 kg 90 % (überwiegend Milchernährung) bis 120 kg auf 65 % abfallend bis 160 kg auf 60 % abfallend bis 200 kg auf 55 % abfallend Seite 352 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Folgerungen Beim Vergleich der Rohproteinmenge, welche von den Versuchstieren aufgenommen wurde und dessen Ausnutzung für den Nettobedarf mit den in der Bedarfsableitung dafür angesetzten Werten zeigten sich merkliche Unterschiede. Eine differenzierte Rohproteinzufuhr war nur in einzelnen der verfügbaren Versuche beabsichtigt, wobei die Fütterungsbedingungen praxisnah gestaltet wurden. Trotzdem ergaben sich günstige Ausnutzungsraten des Rohproteins, weil die erbrachten Leistungen mit geringeren Rohproteinaufnahmen erreicht wurden, als in den GfE-Empfehlungen angegeben. Bei der Ermittlung des Nettobedarfes darf von geringen Fehlerquellen ausgegangen werden, so dass zweckmäßigerweise für die Ableitung des (Brutto-) Rohproteinbedarfes die Ausnutzungsrate angepasst werden sollte. Wird der Nettobedarf (gestaffelt nach Lebendgewicht und Tageszunahmen) mit den Ausnutzungen (angepasst nach Lebendgewicht) verrechnet, wie sie in den Fütterungsversuchen gefunden wurden, ergeben sich erkennbar niedrigere Richtwerte an Rohprotein für Aufzuchtkälber. Es erscheint angebracht, die mit den verfügbaren Fütterungsversuchen gefundenen Ergebnisse mit weiteren Versuchsergebnissen zu überprüfen, um für die Anwendung in Beratung und praktischer Fütterung gesicherte Empfehlungen verfügbar zu haben. Der Tierhalter braucht entsprechende Hilfestellungen für den schmalen Grat zwischen leistungsmindernder Unterversorgung und teurer und umweltbelastender Überversorgung. Literatur Ausschuss für Bedarfsnormen der Gesellschaft für Ernährungsphysiologie (GfE) (1995): Energie- und Nährstoffbedarf landwirtschaftlicher Nutztiere. Nr. 6 Empfehlungen zur Energie- und Nährstoffversorgung der Mastrinder. DLG-Verlag Frankfurt (Main) Horn, A., Köhn, R., Meiser, H., Preißinger, W., Spiekers, H. (2007): Zur Rohproteinversorgung von Fressern der Rasse Fleckvieh im Lebendmassebereich von 80 – 200 kg. Forum angewandte Forschung in der Rinder- und Schweinefütterung, Fulda 2007, 78 – 82. Mitteilungen des Ausschusses für Bedarfsnormen der Gesellschaft für Ernährungsphysiologie (1997): Empfehlungen zur Energieversorgung von Aufzuchtkälbern und Aufzuchtrindern. Proc. Soc. Nutr. Physiol. 6, 201 – 212 Mitteilungen des Ausschusses für Bedarfsnormen der Gesellschaft für Ernährungsphysiologie (1999): Empfehlungen zur Proteinversorgung von Aufzuchtkälbern. Proc. Soc. Nutr. Physiol. 8, 155 – 164 Preißinger, W., Obermeier, A., Spiekers, H. (2008): Unterschiedliche Rohproteingehalte in der intensiven Fresseraufzucht mit Fleckvieh (LM 80 – 200 kg). Forum angewandte Forschung in der Rinder- und Schweinefütterung, Fulda 2008, 105 – 108. Rutzmoser, K., Preißinger, W., Obermaier, A. (2007): Vergleich der ME-Aufnahme mit den Empfehlungen bei der Aufzucht männlicher Fleckviehkälber bis etwa 200 kg Lebendgewicht. Tagungsband 6. BOKU-Symposium Tierernährung, Wien 2007, 332 – 336 Spiekers, H., Dunkel, S., Preißinger, W., Engelhard, T. (2005a): Eiweißquelle mit Zukunft. Neue Landwirtschaft 2005 (11), 6770. Spiekers, H., Südekum, K.-H., Preißinger, W., Chudaske, C. (2005b): Futterwert und Einsatz von Getreideschlempe beim Wiederkäuer. VDLUFA-Schriftenreihe (61) 2006, 143-151. Spiekers, H., Urdl, M., Preißinger, W., Gruber, L. (2006): Bewertung und Einsatz von Getreideschlempe beim Wiederkäuer. Tagungsband 5. BOKU-Symposium Tierernährung, Wien 2006, 25-34. Autorenanschrift Dr. Karl Rutzmoser, Institut für Tierernährung und Futterwirtschaft Grub Prof.-Dürrwaechter-Pl. 3, 85586 Poing Email: [email protected] 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 353 Firmensponsoring – Trouw Nutrition Deutschland GmbH, Gempfinger Str. 15, D-86666 Burgheim Seite 354 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding The velocity of body weight growth and dynamic phenotype expression in pigs Novák L., Zeman L. and Mareš P. Mendel University of Agriculture and Forestry Brno, Czech Republic Introduction The body weight growth velocity in the fattened pigs influences the time; the animal needs to reach the slaughtering weight. The shorter the fattening period, the better hope to have a good economic results. The velocity of the body weight growth is represented by the derivation of the body weight growth curve. The dynamic phenotype yields the description of the individual growth curve and the velocity of body weight growth by three constants e.g. body weight at the beginning of the growth curve (G0, kg), the genetic limit of the body weight (GLi, kg) and the maximum growth velocity in the inflexion point of the body weight growth curve (dG max, kg/d) as described in our previous publications (Novák 2006). The constants of the dynamic phenotype specified in the process of interlining the Gompertz´s growth curve and the experimental body weight estimates represent mathematic description of the curves development. The feature of this methodical approach is based on unambiguous definition of mathematic constants (a, b, c), needed to the solution of mathematic formulas for integration and derivation by means of the Dynamic phenotype parameters. Prader, Tanner and Harnack (1963) have verified on the growth curve of children, the principle of developmental canalization of the growth process as the expression of the individual’s genotype, postulated by Waddington . The idea of heritable fixation of the growth curve form in the genotype seems interesting also from the point of fattening the pigs. Is the form of the body weight growth fixed in the genotype of the individual pig, the expression of the genotype may be however accomplished only in the conditions of appropriate feeding and the environment capable to accept all the heat produced by the animal, and containing the minimum of stressing factors. In our previous publications (Novák et all. 2006) it was demonstrated in the growth of body weight in children, as in the growth of body weight of pigs the practical significance of description of the growth process by the dynamic phenotype, namely the great differences of the maximum growth velocity values between individuals. In this contribution we do focus the attention to the experimental proof to individual development of body weight in pigs, namely to the broadness of the body weight channel under a standard conditions of feeding, stabling and veterinary care of pigs. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 355 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Material and methods To evaluation of individual body weight curves by the method of Dynamic phenotype was calculated according the protocols of experiments curried in pigs hybrids gilt- piglets and boar piglets from the Farm Žabčice. In the experiment the pigs were housed in pens with plastic floor in total pen. There was heated mattress, two feeding pump and feeder with six places. The pen’s area was 6,3 m2 . Pigs were weighted every two weeks. Individual weight was red with accuracy ± 25 g. The climate in the stable was controlled and registered automatically every 30 minutes all day. The feed mixture was based on following compounds: wheat, barley, maize, soybean extract meal (45 % of crude protein) fish meal, milk products, energy supplements (fatty acids)mineral and vitamin additives. The feed and water were accessible ad bibitum. Dynamic phenotype constants were estimated for the Gompertz growth curve by means of a Microsoft Excel by fitting the growth curve within the measured body weight displayed on the screen. The fitted growth curve was calculated according the equation Gt = GLi.exp(-GLi/G0). exp(-e. dG max/GLi. t)) [kg] (1) [kg/d] (2) and the velocity of growth according the equation dG/dt = e.dGmax.ln(GLi)/GLi – e.dGmax.G . lnG/GLi (e= 2,7183) The calculation of the Gompertz´s growth curve fitted among the estimated vales of body weight is done according the equation (1) in the spreadsheet and simultaneously projected on the monitor. The generated growth curve is formed by the dynamic phenotype constants (G0, GLi and dGmax). The correct values of the dynamic phenotype are reached and registered in the moment when the difference between the displayed measured body weight values and the fitted Gompertzś growth curve is minimal. The minimal difference between the calculated growth curve and measured body weight values is controlled on the monitor by ye and simultaneously by calculation of determination coefficient. Results and discussion The calculated constants of the dynamic phenotype are presented for each individual pig in Table I. As the G0 for each individual pig is taken the pig’s body weight at the begin of the experiment. The genetic limit for pigs delivered from the breeding farm Žabčice was taken as GLi=320 kg uniformly for all pigs. The form of the simulated growth curve is in this case regulated mainly by the value of (dGmax) the maximum body mass velocity in the inflexion point of the growth curve. The time course of the body weight growth velocity is calculated according the equation (2). The dynamic phenotype constants (G0, GLi, dGmax) of each pig taken in the experiment are in Table I. shown in separate columns together with values of body weight in the inflexion point (G*, kg) together with age (t*, day) calculated for each individual pig. The process of the described fitting the growth among the measured experimental values demonstrates the Fig. 1. (gilt No 9) the Fig. 2. (boar No 22). The differences among the slow, medium and fast growing individual boars are shown in Fig. 3. The body weight development of slow, medium and fast growing individual gilts are shown in Fig. 4. Seite 356 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Interesting is to observe that the body weight growth curve in Fig. 1. and Fig. 2., fit well with the estimated values of body weight. On contrary the velocity values estimated from the differences in body weight in a two weeks intervals of weighing the pigs do exhibit greater differences. The commonly used average velocity of body weight calculated from the general body weight gain in the time of the experiment is evidently far away from the real body weight growth velocity outlined by the velocity curve dG/dt. The constants of dynamic phenotype of body weight growth (G0, GLi, dGmax) represent the specificity of the genotype expression of that particular individual in the conditions of actual nutrition and stabling environment. In the described experiment we have been able to consider the genetic body weight limit (GLi) as common genetic mark for our pigs coming from the same breeding farm. Shall we have on contrary the animals from different breeding farms, this genetic mark expressed in the constants of dynamic phenotype by the parameter (GLi), would be probably different because of different lines of parents used for the particular hybrid combination. In other word the three constants of the dynamic body weight phenotype do reflect the individuality of the genotype gained in the fertilization of the egg cell by the sperm. The genotype shaped in the zygote after the fusion of egg cell and the sperm chromosomes estimates the future development of body weight within the given corridor or channel of the body weight growth development. Of course the growth occurs only in the case the environment will be able to fulfill the physical needs joined with the processes of conversion the energy of the food into the energy needed for maintenance of vital functions and energy which shall be accumulated into proteins, fats and saccharides in the growing body weight of the fattened pig. As demonstrated the broadness of the body weight channel or corridor in our experimental conditions is relatively narrow. The broadness of the body weight channel in our pigs is approximately ± 5 % of the body weight average. That means the variation in the development of individual body weight is much smaller than the variation of the statistical body weight average that is usually in diapason from 10 to 15% or more. Conclusion The described method of expression the body weight growth curve of individual animals in the form of the three dynamic phenotype parameters can be the interesting tool for visualization of the individuals’ genotype expression. The observed regularities among the maximum body weight growth velocity and the narrowness of individual body weight development corridor may give the new impulse in investigation of animals feeding under the defined climatic conditions in the presence of different stressing factors for pigs of various hybrid combinations. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 357 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Tab. I. Body weight growth of barrows (1) and gilts (2) during the fattening period and calculated dynamic phenotype constants of body weight growth (G0, GLi, dGmax) for each individual. Body weight in inflexion point (G*, kg) and age (t*, day) in which the inflexion point is reached. Seite 358 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding 2,00 1,80 1,60 1,40 1,20 1,00 0,80 0,60 50 300 2,00 0 50 250 200 150 100 50 0 350 1,80 1,60 1,40 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 100 200 Age [d] 150 250 Gilt No. 9, medium growth velocity 250 Boar No. 22. Medium growth velocity 200 Age [d] 150 (data Zeman Mareš, calculation Novák) 300 Growth velocity [kg/d] (data Zeman Mareš, calculation Novák) 100 300 250 200 150 100 50 0 350 Seite 359 7. BOKU-Symposium Tierernährung 0,40 0,20 0,00 0 Body weight t [ kg] Body weight [kg] Fig. 2. The fitting of the body weight growth Fig.1 The fitting of the body weigth growth curve curve among the estimated body weight among the estimainated body weight values. The values. The maximum velocity of growth and maximum velocity of growth and the inflexion point the inflexion point are marked by the circle are marked by the circle Growt h v elocit y [ kg/d] Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Body weight growth of barrows born at 16.4.2003 (data Zeman Mareš, calculation Novák) PIC m 11 22 M DFGgomp DFGgomp 11 PIC m 1 PIC m 22 1 M DFGgomp 160 140 Body weight [kg] 120 100 80 60 40 20 0 0 28 56 84 112 140 168 196 Age [d] Fig. 3. Dynamic phenotype barrow G0 [kg] GLi [kg] dGmax [kg G* [kg] t* [den] 1m 9,1 320 0,99 117,7 194,0 22 m 8,6 320 1,15 117,7 174,6 11 m 9,55 320 1,24 117,7 162,3 Simulated body weight of slow growing, medium growing and fast growing inndividuals according their dynamic phenotype parameters indicated in the table. Seite 360 7. BOKU-Symposium Tierernährung Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Body weight growth of gilts born at 16.4.2003 (data Zeman Mareš, calculation Novák) PIC f 9 DFGgomp 9 PIC f 12 DFGgomp 12 PIC f 18 DFGgomp 18 PIC f 2 DFGgomp 2 180 160 140 Body weight [kg] 120 100 80 60 40 20 0 0 28 56 84 112 140 168 196 Age [d] Fig. 4. Dynamic pfenotype glts G0 [kg] GLi [kg] dGmax [kg G* [kg] t* [den] 12 f 9,35 320 0,85 117,7 222,8 9f 10,7 320 0,94 117,7 196,2 18 f 10,85 320 1,20 117,7 172,8 Simulated body weight of slow growing, medium growing and fast growing inndividuals according their dynamic phenotype parameters indicated in the table. Abscisae do mark the deviation of ±5% of the average. 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 361 Technische und biologische Aspekte, praktische Fütterung / Technical and Biological Aspects, Practical Feeding Coding of Dynamic phenotype parameters for body weight G0 – body weight at the begiin of experiment GLi – genetic limit for body weight (upper asymptote belonging the hybrid combination) dG max – maximum growth velocity in the inflexion point of the growth curve. The work. was supported by Grant NAZV QF3070, and Grant NAZV QG60118 Literatura Prader A. Tanner J M. von Harnack G. 1963: Catch-up growth follovinng illness or starvation. An example of developmental canalization in man. J. Pediatr. May; 62:646-659. PRADER A. 1984: Biomedical and endocrinological aspects of normal growth and development. In: Borms J., Hauspie R.Sand R, Susanne C, Hebbelinck M :Human Growth and development. Plenum PressNew York and London, 1984: 1- 22. NOVÁK L. 2006: Dynamic phenotype and its significance for animal and human growth assessment. Scripta Medica 79 (5-6) 298-299 (Abstract) Novák L. Zeman L. Novák P. 2006: Simulation of body mass growth of livestock using the method of the phenotype values. Tagungsband 5. BOKU-Symposium TIERERNÄHRUNG : 02. November 2006 Wien, 174-178. ISBN-10 3-900962-66-1 Mareš P., Novák L., Zeman L., Kratochvílová P., Večerek M. 2007a: The evaluation of phytogenic additives using in pig nutrition. Tagungsband 6. BOKU-Sympoium Tierernährung : 15. November Wien, 149 –151. Novák L., Zeman L., Novák L. 2007b: The evaluation of additives effect on individual growth of animals body weight. Tagungsband 6. BOKU-Sympoium Tierernährung : 15. November 2007 Wien, 342 –345 NOVÁK L. KUKLA L. ZEMAN L. 2007c: Characteristic Difference between the Growth of Man and the other Animals. Prague Medical Report Vol. 108 No. 2, p. 155-166. Novák, L., Kukla, L., Čuta M. 2008: Child and adolescent longitudinal growth data evaluation using the logistic curve fitting with use of the dynamic phenotype method. Scripta Medica 81: 33 – 46. Contact to authors Prof. Ing. Ladislav Zeman, CSc. Department of animal nutrition and forage production Mendel University of Agriculture and Forestry Brno Zemedelska 1, 613 00 Brno e-mail: [email protected] Seite 362 7. BOKU-Symposium Tierernährung Sponsoren Wir danken folgenden Firmen für ihre großzügige Unterstützung: Alphabetische Reihenfolge Agentur für Gesundheit und Ernährungssicherheit GmbH Spargelfeldstraße 191 1226 Wien Agrarmarkt Austria Marketing GesmbH Dresdner Straße 68a A-1200 Wien AGRANA Bioethanol GmbH Industriegelände Pischelsdorf A-3435 Pischelsdorf Agromed Austria GmbH Bad Haller Straße 23 A-4550 Kremsmünster Alltech Deutschland GMBH Mühlenweg 143 D- 22844 Norderstedt BASF ChemTrade GmbH Kornfeldgasse 21 g A-2512 Tribuswinkel BIOMIN GmbH Industriestraße 21 A-3130 Herzogenburg 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 363 Sponsoren Delacon Biotechnik Ges.m.b.H. Weissenwolffstraße 14 A-4221 Steyregg DSM Nutritional Products Ltd P.O. Box 3255 CH-4002 Basel Dr. Eckel GmbH Im Stiefelfeld 10 D-56651 Niederzissen Evonik Degussa GmbH Rodenbacher Chaussee 4 D-63457 Hanau Lohmann Animal Health GmbH & Co.KG Heinz-Lohmann-Strasse 4 D-27472 Cuxhaven METALL UND FARBEN GESELLSCHAFT M B H Leibnizgasse 1/4/4 A-1100 Wien Pancosma S.A. Voie-des-Traz 6 CH-1218 Le Grand-Saconnex JRS J.Rettenmaier & Söhne GmbH+Co.KG Holzmühle 1 D-73494 Rosenberg Seite 364 7. BOKU-Symposium Tierernährung Sponsoren H. Willhelm Schaumann GmbH & Co. KG Jakob-Fuchs-Gasse 25-27 A-2345 Brunn am Gebirge Trouw Nutrition Deutschland GmbH Gempfinger Str. 15 D-86666 Burgheimr Zinpro Animal Nutrition Gerard Doustraat 4a NL-5831 CC Boxmeer 7. BOKU-Symposium Tierernährung Seite 365