docAnti - Labex
download 
Report Transcription
Anti - Labex
Användarmöte Stockholm November 2012 Gertrud Naess Quality Assurance Manager Produktansvarig ID-Systemets produkter Spädningslösningar till ID-systemet • ID-Diluent-1 Enzymlösning, Bromelin • ID-Diluent-2 Liss-lösning • ID-CellStab, ID-CellStab W.A Liss-lösning, förvaringslösning för erytrocyter Enzym ID-Diluent-1 Enzymlösning, Bromelin Hållbarhet öppnad flaska: 6 månader Enzym • Sensitiv teknik med lägre specificitet än IAT • Förhöjer sensitiviteten för vissa ag-ak reaktioner. Rh-systemet • Förstör vissa antigen Fya, Fyb M, N, S, s Användning av Enzym i Skandinavien Antikroppsundersökningar • Papain är att föredra som enzym • Bromelin används endast vid speciallaboratorium Användning av Enzym i Skandinavien Antigenundersökningar • För att åstadkomma agglutination i de fall vi inte har tillgång till IgM-antikroppar • Förstärka reaktioner när vi söker svaga antigen • Fya, Fyb, M, N, S och s kan inte typas • Viktigt med Ctl-brunn. Falskt positiva reaktioner i Enzymteknik • • • • DAT + Neoantigen (Anti-T) Köldantikroppar (Anti-HI) Kemisk påverkan på celler (Silicon) DAT+ falskt positiva i Enzym • Ctl innehåller samma sak som övriga brunnar utom antikroppar Ctl vid ABO/RhD-gruppering • Polyklonala antikroppar och ID-Diluent-1 • Använd alltid kort med ctl-brunn • Falskt positiv reaktion kan leda till felgruppering Ex Patient A RhD Neg med svaga isoagglutininer (Anti-B) Ej Tolkningsbar ctl pos AB RhD pos Ctl fenotypningar • Patienter Kort med ctl bör användas för att säkerställa rätt resultat Ex Rh-feno+K+Ctl • Blodgivare Typas för att hitta negativa Sällan DAT+ Ctl kan uteslutas Fallbeskrivning Jka-typning • • • • • • • • EQUALIS-prov testat manuellt Jka + (2+) Svar från EQUALIS Jka: neg Prov omsatt i ID-GelStation Neg Prov omsatt manuellt med susp i glasrör 2+ Prov omsatt manuellt med susp i plaströr neg Silikonet i glasröret Har setts med olika fabrikat av rör Ctl och bruk av monoklonala antikroppar och ID-Diluent-2 • Ej Falskt positiva vid DAT+ • Ej Anti-T i antiserat. • Enda teoretiskt tänkbara orsaken till falskt positiva reaktioner Ospec. köldantikroppar VARNING • Kontaminering från en brunn till en annan kan ge falskt positiva reaktioner • Detta fångas inte i ctl om det inte är just den brunnen som drabbats LISS ID-Diluent-2 ID-CellStab ID-CellStab W.A Hållbarhet öppnad flaska: Utgångsdatum Niss-miljö Innehåll • • • • NaCl med låg jonstyrka Albumin EDTA Antibiotika Trimethoprim Sulfamethoxazol Falskt positiva reaktioner • Antikroppar mot co-trimoxazole • Antikroppar mot EDTA • Neoantigen Fallbeskrivning Antikroppar mot co-trimoxazole • Pat Anti-E+K • Morgon: MG-test neg med E-, K- Erytrocyter Fallbeskrivning Antikroppar mot co-trimoxazole • Nytt prov EM Pos mot samtliga testade erytrocyter (MG-test, Screeningceller, panelceller och egna) • Test i rör med ”AABB-LISS” Negativ mot E-K- erytrocyter • Möjlig förklaring – Pat insatt på antibiotika mellan provtagningarna Antikroppar mot Co-trimoxasole • Reagerar i IAT med testerytrocyterspädda i ID-CellStab, ID-CellStab WA eller ID-Diluent-2 • Ger falskt positiv DAT om cellerna späds i ID-CellStab, ID-CellStab WA eller ID-Diluent-2 • Ingen klinisk betydelse hos patienter Transfusion Volume 52, April 2012 844-848 Neoantigen • Kan blottas vid påverkan på cellerna Bakteriepåverkan Diskmedel Klister från etiketter Fallbeskrivning Neoantigen • • • • • ID-GelStation Screen pos 2+ en eller flera celler ~ 20% av alla testade prov Reproducerbart med celler från samma flaska Negativa reaktioner med celler från förvaringsrör Fallbeskrivning Neoantigen • Något i flaskorna påverkar cellerna så de reagerar med en antikropp som ca 20% av befolkningen har • Flaskorna diskas • Blötläggs för att lösa etikett • Klisterrester förorenar insidan av flaskan • Klistret påverkar cellytan så att något neoantigen blottas. Vilket spädningsmedium ska man använda? LÄS METODANVISNINGEN!!! Fallbeskrivning P1 typning • • • • • • EQUALIS-prov Vid typning P1 neg Svar från EQUALIS P1 positiv Omsättning P1 neg Kontakt med support på Labex Felsökning – Fel spädningslösning Vilken metod bör man välja vid antigentypning • Mitt förslag • Så långt som möjligt kort med monoklonala antikroppar och ID-Diluent-2 Mindre risk för ”strulreaktioner” Ctl-brunnen kan i de flesta fall uteslutas Ingen inkubering krävs Fallbeskrivning Fyx • • • • • • • 3 prov typat tidigare till Fyb pos. Vid validering av IH-1000 Fyb neg Dessa var Fyx ”svagt Fyb-antigen” ”variant Fyb” Kan skiljas ut i genotypning (DNA) Frekvens ca 7% i en Skandinavisk befolkning Fallbeskrivning Fyx klinisk relevans • Typning av blodgivare till transfusion: Fyx har inte beskrivits ge transfusions-komplikationer till individer med Anti-Fyb • Typning av testcellsgivare för screening: FyaFyx kan typas felaktigt till Homozygot Fya Svagt anti-Fya hos patienter kan missas Fallbeskrivning DAT • DAT Gelstation Liss/Coombs kort 2+ • DC-Screening II (IgG-C3d-ctl) neg • DAT+ celler sfäriska tyngre än de icke sfäriska cellerna Fallbeskrivning DAT • Vid centrifugering av prov hamnar de tunga cellerna i botten av röret och de lättar överst. • Instrument tar alltid cellerna från botten av röret. • Vid manuell sättning tas celler från toppen av erytrocytskiktet. • Motsvarande har setts vid ABO/RhD-typning av transfunderad patient med microcytär anemi. Pat blodgrupp B Givare blodgrupp O Anti-A kloner i gelkort • LA-2: ABD-confirmation for patients ABD-confirmation for donors ABO/D for Newborn BAS-test AHG(Svenskt kort) BAS-test IgG(Svenskt kort) • A5: Alla övriga kort innehållande Anti-A Fallbeskrivning 1 AB • ABO/D+Rew A54+ G½ 4+ • ABD-conf, BAS-test LA-2 LB-2 2+ 4+ Fallbeskrivning 1 AB • Händer ofta i vissa Batcher • Rapporterades från flera olika blodcentraler • Analys av logglistor från ID-GelStation gjordes Fallbeskrivning 1 AB • ABO/D+Rev 50741 1002 st AB resultat kontrollerade av dessa var 27 st (2,69%) <2+ eller dp • ABO-confirmation for donors 1197 st AB resultat kontrollerade av dessa var 130 st (10,86%) <2+ eller dp Fallbeskrivning 1 AB • Prov som ”strulat” skickades till Bio-Rad • Vissa förändringar gjordes i brunnarna med dessa prov som ”standard” • Andelen icke godkända grupperingar med LA2klonen är nu låg. Fallbeskrivning 2 AB • ABO/D+Rew Anti-A Anti-B • ABD-conf Anti-A Anti-B • Rör-teknik Seraclone DiaClon A5 G½ 1+ 4+ LA-2 LB-2 4+ Anti-A Anti-A A003 A5 3/m.f och 1/m.f Fallbeskrivning 2 AB • Har setts vid flera tillfälle • DNA-typning: A2B • För svagt Anti-A? • Ett prov skickades till BioRad • Utreddes i Bern Fallbeskrivning 2AB • • • • Serologiska fynd bekräftas H-typning neg vilket talar mot A2B Bern svarar: fel i A-transferas Mycket ovanligt • Nytt prov kommer skickas till Bio-Rad men även utredas i Lund Fallbeskrivning Missat Anti-A1 • Nationell serologisk kontroll i Norge • Prov svagt A med Anti-A1 • ID-systemet missat Anti-A1, grupp utsvarad NI • Alla tekniker olika bra på olika typer av antikroppar • Gel-tekniken (collon-teknikerna) är inte optimal för IgM-antikroppar • Troligtvis beroende på sämre blandning av ag-ak. Reaktioner med Anti-A och Anti-B • A1, A2, A1B och A2B Ske ge ≥3+ reaktion för godkänt resultat Reaktioner ≤2+ eller dp ska verifieras Test av A3 (Universitetskliniken i Innsbruck) • 14 A3B • 9 A3 • A5: 22 av 23 detekterade • LA-2: 22 av 23 detekterade Test av Ax (French National Centre for Scientific Research) • 16 Ax • A5: 9 av 16 detekterade • LA-2: 10 av 16 detekterade Anti-A,B i rutintester? • Vid bruk av humana antisera Anti-A reagerar sämre med svaga A jämfört med monoklonaler Anti-AB producerad av en 0-individ Denna antikropp reagerar bättre med svaga A-antigen än Anti-A Anti-AB • • • • • Monoklonala reagens Mix av: Anti-A Birma-1 Anti-B ES-4 Anti-AB ES-131 Anti-A,B i rutintester? • Vid bruk av monoklonala antisera Anti-A reagerar bättre med svaga A än humana antisera. Anti-A,B är en mix av Anti-A, Anti-B och Anti-A,B Reaktionerna med svaga A anses inte markant starkare än med Anti-A AweakB positiv reaktion med Anti-B Vad händer om felgruppering sker • Grupperas Aweak till 0 eller AweakB till B Blodmottagare Förenligt blod transfunderas Blodgivare Oförenligt blod kan transfunderas Blodgivare Aweak eller AweakB som inte reagerar med Anti-A • De flesta A3 och Ax fångas med de Anti-A som finns i Gelkorten • Fångas normal i diskrepans i plasmakontrollen • Om provet är Aweak och innehåller Anti-A1 eller annan irreguljär IgM-antikropp kan det • felgrupperas till grupp 0 Blodgivare Aweak eller AweakB som inte reagerar med Anti-A • Anti-A1 och övriga irreguljära IgM-antikroppar reagerar dåligt i geltekniken. Antikroppen ska vara mycket stark för att ge reaktion, detta hör till ovanligheterna. • Svagare A än A3 och Ax ger oftast negativa reaktioner med Anti-A i samtliga tekniker men även här fångas detta i plasmakontrollen. • För att så säkert som möjligt gruppera Aweak och AweakB bör plasmakontroll utföras mot A1-A2-B-0 celler. Varför plasma-kontroll med endast A1 och B celler? • I Skandinavien har det i geltekniken under ca 10 års tid grupperats väldigt många prover och många av dessa har varit blodgivargrupperingar • Inget fall av felgruppering eller transfusionskomplikation rapporterat beroende på missat svagt A-antigen hos blodgivare Kliniska aspekter för missade IgM-antikroppar • Blodmottagare: • Anti -A1 -H -P1 -Le –M m.m. • ”Kalla” antikroppar saknar i de flesta fall klinisk betydelse • Anses vara en fördel att inte hitta • Inget fall beskrivet av missade kliniskt viktiga IgM-antikroppar ex. Anti-Tja, Vel • MG-test: Data förenlighetstest • Om MG-test utförs för att hitta ABO-oförenlighet bör man överväga teknik med bättre sensitivitet. Kort med AntiHumanGlobulin • Liss-Coombs Anti-IgG (polyklonal, kanin) (Kan reagera med lätta kedjan i IgM och IgA) Anti-C3d (Reagerar även med C3b och osplittat C3) • Coombs IgG Anti-IgG (polyklonal, kanin) (Kan reagera med lätta kedjan i IgM och IgA) • Monospecifik IgG Anti-IgG (polyklonal, kanin) (Reagerar endast med IgG) Antikroppar Liss-Coombs – Coombs IgG • IAT Fånga Ag-Ak-reaktion in vitro • Om man använder serum och Liss utan EDTA kan man få en komplementaktivering invitro med C3d mantling och fånga den reaktionen i ett Liss-Coombskort • Vi använder EDTA-rör och Liss med EDTA • Komplementaktiveringen inhiberad • Osplittat C3 kan ospecifikt mantla på erytrocyter (PEG + ?) och ge ”falskt” positiva reaktioner Liss-Coombs – Coombs IgG • DAT • Ska spegla det som skett In Vivo • Prov ska tas så inget händer in Vitro - EDTA-rör • Viktigt att fånga in Vivo komplementaktivering • Rekommenderas Liss-Coombs kort Anti-D i QC-Basic • • • • • 10ng/ml (0,05 IU/ml) Council of Europe: Minigräns för en godkänd IAT Ger i de flesta fall 2+ med R1R1 och R2R2 Monoklonal antikropp Ej förväntad förstärkning i enzymteknik (papain) Certificate of Quality Assurance Certificate of Quality Assurance • Finns nu på LABEX hemsida att ladda ner • Fr.o.m. 1 december skickas inga papperskopior • Fil med CQA kommer sparas hos Labex i 10 år Certificate of Quality Assurance Informationsbrev skickas vecka 48 till ”reagensansvariga”
