Manual de Manejo de la Posta de Sementales
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Manual de Manejo de la Posta de Sementales ©2013 PIC Todos los Derechos Reservados. Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Nunca Paramos de Mejorar Tabla de Contenido Tabla de Contenido Lista de Figuras, Fotos, y Cuadros......................................................................................................2 Introducción…………………………………………………………………………....................................3 Parte 1. Anatomía y Fisiología General………………………………………….....................................5 Parte 2. Cuarentena y Aclimatación…………………………………………………................................8 Parte 3. Manejo General de los Sementales…………………………………......................................11 Parte 4. Manejo del Área de Sementales.………………………………………...................................12 Parte 5. Ventilación y Flujo de Aire……………………………………………………............................14 Parte 6. Condición Corporal……………………………………………………………...........................18 Parte 7. Alimentación y Nutrición…………………………………………………..................................19 Parte 8. Entrenamiento………………………………………………………………………....................21 Entrenamiento para Colección Manual............................................................……………..21 Entrenamiento usando un Sistema de Colección Automatizado..........................................22 Parte 9. Colección del Semental………………………………………………………............................23 Parte 10. Bienestar Animal y Salud…………………………………………………...............................25 Temperatura Corporal y Apetito…………............................................................................25 Pruebas de Diagnóstico.....................................................................................................25 Criterio para el cierre de la Posta……................................................................................26 Manejo y Eutanasia............................................................................................................26 Transporte de Sementales.................................................................................................27 Parte 11. Gestión del Laboratorio…………………………………………………..................................28 Calidad del Agua..................................................................................................................29 Llegada del Semen...............................................................................................................30 Evaluación de Semen...........................................................................................................30 Determinación de la Concentración.....................................................................................31 Dilución del Semen...............................................................................................................32 Envasado de las Dosis de Semen……………………...........................................................32 Enfriamiento del Semen y Empaque de Dosis Enfriadas.....................................................33 Envío y Transporte del Semen.............................................................................................33 Parte 12. Control de Calidad……………………………………………………………..........................34 Parte 13. Manejo y Entrenamiento del Personal...............................................................................39 Parte 14. Indicadores Clave de Desempeño………………………………………………....................40 Parte 15. Benchmarking de Producción ………………………………………....................................41 Parte 16. Vida Útil del Semental y Tasa de Reemplazo………………………………….....................44 Referencias……………………………………………………………….................................................45 Colaboradores…………………………………………………………………………..............................46 Apéndice A. Requerimientos de Nutrientes para Cerdos …...………………………………………….47 Apéndice B. Especificaciones Mínimas en la Dieta PIC y Ejemplo de Dieta para Sementales….....48 Apéndice C. Sistemas automatizados de colección, Instrucciones paso a paso para su uso..........49 Apéndice D. Empaque de Dosis de Semen para Envío Usando Doble Hielera…............................52 Apéndice E. Guía de Preparación del Diluyente ………………………………………........................55 Apéndice F. Preparación de la Muestra de Agua para Análisis por Terceras Partes…………...........56 1 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Lista de Figuras, Fotos y Cuadros Lista de Figuras, Fotos y Cuadros Figura 1. Esquema de la Producción de Hormonas y Regulación de la Producción de Semen............................5 Cuadro 1. Proceso de Maduración del Semental………………………..…….................……………………............6 Foto 1. Flujo de Producción Espermática……….……………….........................................................………..........6 Foto 2. Órganos Reproductivos del Verraco….……………………………………....................……………….......…7 Cuadro 2. Factores de Manejo que Impactan la Calidad del Semen……………………………….......................13 Cuadro 3. Variables Ambientales del Edificio y Recomendaciones de Condiciones Optimas…………..............14 Figura 2. Velocidad Variable del Ventilador y su Relación con CFM………..…………………….....………...........16 Cuadro 4. Estimación de CFM Dependiendo del Tamaño del Ventilador……………………................................16 Foto 3. Condición Corporal Delgada.....................................................................................................................18 Foto 4. Condición Corporal Normal...........................................................................................…..........…….......18 Foto 5. Condición Corporal Obesa.......................................................................................................................18 Cuadro 5. Impacto de Micotoxinas en Alimento sobre el Desempeño del Semental…...................………..........20 Cuadro 6. Intervalo de Colección por Edad del Semental en Líneas Genéticas Terminales……………..............24 Cuadro 7. Recomendaciones de Densidades Basadas en Peso, Temperatura y Distancia a Viajar…................27 Figura 3. Flujo del Laboratorio…………………………………………………...................……………………..........28 Cuadro 8. Parámetros para Calidad del Agua y sus Especificaciones…..………………............…………...........29 Cuadro 9. Tipos de Contaminación Microbiológica………………………………..................…………………........29 Cuadro 10. Especificaciones de la Calidad del Agua para Laboratorio………………………...........………..........30 Cuadro 11. Criterio de Aceptación de la Calidad del Semen………………………....................……………..........31 Cuadro 12. Directrices del Fabricante para la Preparación de Muestras para Revisiones de la Motilidad..........34 Cuadro 13. Ejemplo de Sistema de Registro del Diluyente ………………………….....................………….........34 Foto 6. Ejemplo de Suavizador de Agua…...........................................................................................................36 Foto 7. Medidor de Agua de Osmosis Inversa......................................................................................................36 Foto 8. Tanques de Desionizacion para Sistemas de Agua..................................................................................37 Foto 9. Sistema Micron...................................................................................................................…...................37 Foto 10. Ejemplo de Lámpara UV.........................................................................................................................37 Cuadro 14. Medida de Control de Calidad y Frecuencia de Medición……………….......………………….......….38 Cuadro 15. Indicadores Clave de Desempeño para Centros de Sementales………………………………...........40 Figura 4. Células Viables por Eyaculado por Línea Genética por Semana de Producción..................................41 Cuadro 16. Células Viables por Eyaculado por Línea Genética Promediado por 5 Semanas de Producción…..42 Figura 5. Promedio de dosis por Colección, por Edad y Línea Genética, asumiendo Dosis de 2500 millones de Células Espermáticas Viables y un Promedio de 1.2 Colecciones por Semana por la Vida del Útil del Semental....................................................................................................................................42 Cuadro 17. Resumen del Promedio de Dosis por Colección, por Edad y Línea Genética.................……….......43 Figura 6. Realización del Semental Terminal.......................................................................................................43 2 Nunca Paramos de Mejorar Introducción Introducción Bienvenido a la última versión del Manual de Manejo de Centro de Sementales. Esperamos que lo encuentre útil para su operación. Ahora más que antes, los studs de sementales deben estar a la vanguardia en la incorporación de nuevas tecnologías que ayuden a producir dosis de semen de la más alta calidad, mediante evaluaciones consistentes y precisas, mientras aseguramos la salud y bienestar de los sementales. Lo que hacemos en la posta de sementales es vital para alcanzar las metas de producción y mantener nuestra ventaja competitiva global en el futuro. Creemos que la información incluida en el manual será muy útil para enseñar a los nuevos empleados, así como desafiante para el personal experimentado, reevaluando el área de sementales y los procesos del laboratorio. La producción de semen es revisada así como los manejos área de machos y el laboratorio, en el orden de mejorar la calidad del semen y producción del centro. PIC se compromete a hacer mejoramientos en los procesos de los centros de sementales ya funcionando. Además, somos impacientes en la búsqueda de nuevos conocimientos que garanticen que los productores sigan siendo competitivos a nivel mundial. 3 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales 4 Nunca Paramos de Mejorar Parte 1: Anatomía y Fisiología General Parte 1: Anatomía y Fisiología General El cerebro produce las hormonas GnRH (hormona liberadora de gonadotropina), LH (hormona luteinizante) y FSH (hormona folículo estimulante), las cuales trabajan en conjunto para promover y regular la producción de testosterona (T) y, por último, el desarrollo de las células espermáticas y la conducta del macho (Figura 1). Estos procesos tienen que ocurrir para que la reproducción sea posible. Figura 1 Esquema de la Producción de Hormonas y Regulación de la Producción de Semen El proceso de desarrollo testicular y el desarrollo de células espermáticas del semental comienza tempranamente durante la etapa fetal con una conducta reproductiva que parte desde el primer mes y tiene un incremento en la producción de semen a los 6 meses (Cuadro 1). 5 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Cuadro 1 Parte 1: Anatomía y Fisiología General Edad Proceso de Maduración del Semental Proceso de Maduración Feto (día 20 – 40 gestación) División de células germinales y diferenciación Feto (día 60 gestación) Descenso testicular desde el abdomen hasta el escroto 1 – 2 meses Muestra comportamiento de monta 3 meses 2da división de las células germinales y aumento de los testículos en relación al peso corporal 4 meses Espermatozoides aparecen en túbulos seminíferos y pueden ocurrir erecciones 5 ½ meses Inicio de la pubertad con presencia de espermatozoides en el eyaculado 6 – 18 meses Aumenta tamaño de testículos, concentración de semen y volumen de eyaculado (Knox, 2003) Los testículos son responsables de la producción de espermatozoides y testosterona. Los espermatozoides son producidos y llevados hacia el centro de cada testículo o mediastino (área blanca) y luego continúan hacia la cabeza del epidídimo (Foto 1). Un semental sexualmente maduro es capaz de producir 16 x 109 espermatozoides por día desde ambos testículos (Senger, 2005). • La producción espermática, o espermatogénesis, es un proceso altamente complejo que ocurre en compartimentos especializados en los testículos llamados túbulos seminíferos. En cualquier momento, habrá células espermáticas en diferentes etapas de desarrollo para permitir una continua producción espermática. El proceso de espermatogénesis toma en promedio 39 días en un semental (Senger, 2005). Foto 1. Flujo de Producción Espermática TP= Parénquima testicular, EH= Cabeza del epidídimo ET= Cola del epidídimo, M= Mediastino (Senger, 2005) 6 Nunca Paramos de Mejorar Parte 1: Anatomía y Fisiología General El epidídimo se compone de tres secciones incluyendo la cabeza, cuerpo y cola. Cada sección juega un papel en el almacenamiento de los espermatozoides, en su sustento y en la finalización del proceso de maduración (9-14 días). Las células espermáticas deben transitar a través del epidídimo para adquirir el potencial para la fertilización. Sin el epidídimo, la reproducción del semental no sería posible. Las glándulas sexuales accesorias incluyen la glándula prostática, glándulas vesiculares, y glándulas bulbos uretrales y son importantes para la adición de plasma seminal a las células espermáticas. La función de la glándula prostática es remover la orina y las bacterias del tracto reproductivo antes de que el espermatozoide entre en la uretra. Las glándulas vesiculares producen secreciones viscosas y lechosas en apariencia y componen la mayor parte del volumen del eyaculado. Por último, las glándulas bulbos uretrales producen la fracción de gel del eyaculado y son grandes y densas en el semental (Knox, 2003; Senger, 2005). Foto 2. Órganos Reproductivos del Verraco (Senger, 2005) El pene está dividido en tres secciones; incluyendo la base, pene y glande del pene. El glande contiene nervios sensoriales y es responsable del inicio de la eyaculación. La forma del glande es similar a un sacacorchos, lo que es único en el semental (Senger, 2005). 7 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 2: Cuarentena y Aclimatación Parte 2: Cuarentena y Aclimatación Típicamente, los sementales entran en cuarentena a los 6 meses de edad y permanecen ahí entre 4 a 8 semanas. Este periodo de tiempo debe ser usado para evaluar posibles enfermedades importantes y para establecer protocolos de vacunación. Dependiendo del número de vacunaciones, éstas deben ser espaciadas durante el periodo de cuarentena para distribuir el estrés asociado con las vacunas. Las instalaciones de la cuarentena y su ubicación dependen de la densidad de cerdos que hay en la región. Normalmente, una distancia de 2.4 - 3.2 km (1.5 – 2.0 millas) al stud es preferida, pero en un área más densa de cerdos es mejor tener la cuarentena más cerca del stud, pudiendo estar conectados ambos sectores por un pasillo cerrado. La entrada al centro debe ser cerrada durante el periodo de cuarentena hasta que se tengan los resultados del diagnóstico de los sementales que están cuarentenados. Con el desarrollo e implementación de filtros de aire en la granja, se deben tomar medidas para reducir la posibilidad de diseminar una enfermedad hacia el centro de sementales. Si el centro tiene filtros para prevenir la entrada de alguna enfermedad, la cuarentena deberá tener filtros también. Si el centro no tiene filtros debido a que se ubica en un área de baja densidad de cerdos, el aire de salida de la cuarentena puede ser filtrado para prevenir la aparición de alguna enfermedad. Los filtros pueden ser abiertos después de la evaluación, cuando se indique que el grupo es negativo a las enfermedades en cuestión. Que Hacer: • Tener un baño con ducha separado del edificio. • Los trabajadores del centro pueden hacerse cargo de la unidad de cuarentena al final del día, con un tiempo de vacío de una noche antes de volver al stud. • Realizar un muestreo estadístico inicial y evaluar a los sementales dentro de los primeros siete días desde la llegada. Sin embargo, al final del periodo de cuarentena se deberá evaluar al 100% de la población. • En el caso de que la cuarentena esté lejos del centro de machos, asegúrese de que el camión de transporte sea lavado, desinfectado y secado antes de mover los machos desde la cuarentena hacia el stud. • Mueva los sementales al centro tan pronto como sea posible después de recibir los resultados negativos. Que No hacer: • Ubicar el edificio de cuarentena muy cerca del centro de machos (menos de 400 metros) si no tiene filtros de salida aire y el centro principal no tiene filtros de aire. 8 Nunca Paramos de Mejorar Los gerentes pueden elegir entrenar a los sementales en cuarentena o en el centro. Cualquiera de las opciones funcionará mientras se cuente con un protocolo adecuado de entrenamiento en el lugar (ver Parte 8: Entrenamiento). Parte 2: Cuarentena y Aclimatación Los sementales deben ser alojados individualmente y no deben ser mezclados durante la transferencia al centro de machos. Se debe registrar diariamente la temperatura máxima y mínima de la posta. Los sementales deben ser aislados tras la entrega desde la granja fuente, según acuerdo comercial de PIC (Condiciones de Venta). El edificio debe ser lavado, desinfectado y secado entre cada grupo de sementales que ingrese ala cuarentena. Se recomienda un periodo de reposo de 1 día después de una apropiada limpieza, desinfección y secado. El periodo mínimo de aislamiento es de 30 días después de la última entrada de sementales a la unidad de cuarentena. Todos los sementales en cuarentena deben ser clínicamente monitoreados diario. Se debe registrar la información de cada individuo que presente signos clínicos o requiera tratamientos. Cualquiera de los sementales que no esté comiendo o esté clínicamente enfermo, se le debe registrar su temperatura, ser monitoreado y manejado individualmente. El aumento de la incidencia de animales que no comen o que se encuentran en estado febril día tras día, es un indicador de la introducción de una enfermedad. Es recomendado que el Gerente del centro de sementales notifique a su Veterinario si ocurre alguna enfermedad clínica o muerte de machos. La evaluación para la liberación de los sementales hacia la posta incluye lo siguiente: • Evaluar una muestra estadística de los sementales a los 7 días de llegada. • Evaluar serológicamente para PRRS al 100% de los sementales al término de la cuarentena, antes de la liberación de los sementales a la posta, usando ELISA (individual) y PCR (pool de cinco). • Asegurar que el laboratorio de diagnóstico corra el PCR antes que la prueba de ELISA para evitar contaminación. Un Médico Veterinario debe determinar que la población es negativa antes de ingresar los animales al centro principal. • Los requerimientos de evaluación de enfermedades variarán de país en país y región/estado. Consulte a su Veterinario. • Vea Parte 10: Bienestar y Salud, para detalles adicionales en evaluaciones en cuarentena. 9 Parte 2: Cuarentena y Aclimatación Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales No mueva a los sementales de la cuarentena al centro de machos si PIC le notifica algún problema de salud en la granja fuente o si la cuarentena está pasando por un brote de alguna enfermedad. Antes de liberar a los animales de la cuarentena hacia el centro, comuníquese con su Veterinario de granja o con el Departamento de Aseguramiento Sanitario de PIC para verificar el estatus actual de salud de la granja fuente. La bioseguridad del edificio de cuarentena debe ser mantenida de forma estricta y se debe requerir que todo el personal tome un baño al entrar y al salir del edificio de cuarentena. • El personal de servicio que entra al edificio de cuarentena debe seguir las mismas restricciones usadas en el centro y debe adherirse a las mismas reglas sobre tiempo de vacío sanitario. • El equipo de producción puede visitar y trabajar en la unidad de cuarentena después de trabajar en el centro, pero debe cumplir con una noche de vacío sanitario antes de volver a ingresar al stud. PIC informará al personal del centro sobre cualquier cambio significativo en el estatus sanitario de la granja fuente de PIC. El stud o sus Veterinarios serán proveídos con los resultados de las evaluaciones serologicas realizadas en la granja fuente para los sementales que son destinados a ser colocados en el edificio de cuarentena. 10 Nunca Paramos de Mejorar Parte 3: Manejo General de los Sementales Se debe llevar un registro de todos los sementales que estén en tratamiento o que no estén comiendo lo suficiente. Cuando se coloque a los sementales en el centro, éstos deben ser ubicados por línea genética y luego por edad. Agrupe juntos a los machos jóvenes y evite mezclarlos con machos adultos. Parte 3: Manejo General de los Sementales El administrador o el técnico asignado debe supervisar los corrales diariamente, identificando a los animales que no han comido lo suficiente, levantando a los sementales al momento de la alimentación para buscar signos de cojeras y también para identificar problemas de tos u otros problemas respiratorios. Consulte a su Veterinario por protocolos de tratamiento. 11 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 4: Manejo del Área de Sementales Parte 4: Manejo del Área de Sementales Las recomendaciones de manejo aplican tanto para la zona de cuarentena como para el centro principal. Los sementales son animales tranquilos, pero el equipo del área necesita prevenir cualquier riesgo innecesario cuando los entrena, muestrea, trata, pasea y los colecta. Cuando lleve animales a la zona de colección o los saque de ella, camine detrás de los machos y utilice una tabla de manejo (Para mayor información vea la Parte 10: Bienestar Animal y Salud). La temperatura óptima para la producción de espermatozoides es entre 18 – 20°C (64 - 68°F). Rociadores, atomizadores, refrigeración por evaporación y aire acondicionado son usados para controlar la temperatura de la posta pero se debe evitar crear un medio ambiente húmedo. Los corrales deben tener una adecuada ventilación y un movimiento de aire suficiente para reducir los niveles de amoniaco y los niveles de olor, manteniendo una temperatura ambiental aceptable tanto para los sementales como para el personal del stud (Ver Parte 5. Ventilación y Flujo de Aire). La parte trasera de las jaulas no debe ser sólida, debe ser de barras abiertas para crear un flujo adecuado de aire y una temperatura óptima alrededor de los testículos de los sementales. La tasa mínima de flujo de agua es 1cuarto de lt/min (250 ml / min), ya que los sementales consumen en promedio 5.6 – 7.8 L (1.5 – 2 galones) de agua por día. El flujo de agua se debe medir trimestralmente (una vez a la semana durante los meses de verano) para asegurarnos de que los sementales tienen suficiente acceso al agua y así prevenir la falta de agua en los tejidos o la deshidratación. Las evaluaciones físico químicas del agua deben ser realizadas dos veces al año para detectar niveles de impurezas, minerales y bacterias. Los Municipios locales pueden requerir evaluaciones más frecuentes. El pediluvio con una solución de sulfato de cobre debe ser usado a la entrada y salida del edificio de cuarentena. En la posta, los sementales deben caminar a través del pediluvio con sulfato de cobre durante el camino de regreso a sus jaulas después de la colección. Esto ayudará a endurecer las pezuñas y prevenir problemas de cojera. 12 Se debe colocar tapetes bajo los sementales con problemas en los pies o pezuñas para asegurar su confort y promover su recuperación. Debe haber suficientes tapetes para cubrir al 10% de los machos de la posta. Nunca Paramos de Mejorar Revise y asegúrese de que NO existe flujo de corriente eléctrica por las líneas de agua y equipos. Situación Factores de Manejo que Impactan la Calidad del Semen Descripción Efecto en Sementales Referencia Cuadro 2 Recuperación Alta temperatura >29°C (85°F) por 3 Fuerte aumento en McNitt y First, 1970 ambiente días o más espermatozoides Wetteman et al., 1976 2 meses Suriyasomboon, 2005 6-8 semanas McNitt y First, 1970 8 semanas Kennedy y Wilkins, 1984 Descanso 2 semanas anormales por eyaculado Temperaturas 26 - 29°C (79 - 85°F) Incremento gradual en ambientales + 75% o más de espermatozoides moderadas y alta humedad por 4 anormales por eyaculado humedad semanas o más Fiebre (causada por Temperatura Fuerte aumento en vacunación o Corporal >39°C espermatozoides enfermedad) (103°F) por 2+ días anormales por eyaculado Regímenes de Decremento gradual en colección >3 veces por número de aumentados y semana espermatozoides erráticos Parte 4: Manejo del Área de Sementales Diferentes factores de manejo en la granja pueden impactar la calidad del semen (Cuadro 2). normales por eyaculado Reducción de >15% reducción en Libido reducido y nutrientes en la energía o proteína decremento gradual en ingesta en ingesta por más espermatozoides de 8 semanas normales por eyaculado >16 horas de luz o Decremento gradual del Fotoperiodos <8 horas de libido y la producción de Subóptimos oscuridad espermas no es Variable. Depende en la Louis et al., 1994 a, b severidad de la restricción Sancho, 2004 NA consistente Bajo volumen de semen, Sementales <6 a 7 meses bajo número de inmaduros dependiendo del espermatozoides genotipo normales y presencia de Tiempo necesario para Kennedy y Wilkins, 1984 alcanzar madurez gota citoplasmática Después de que las colecciones son terminadas, el área de colección debe ser lavada diariamente con agua caliente a alta presión. Las áreas de limpieza incluyen el área de pre-calentamiento, corrales o jaulas de colección, potro de monta y tapetes. Después del lavado, el área debe estar limpia de material orgánico (ej. excremento, semen). Una vez por semana se debe desinfectar el área de colección después del lavado con un producto hecho específicamente para instalaciones de animales. Asegúrese de incluir todas las superficies (ej. Paredes, barras de las jaulas). 13 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 5: Ventilación y Flujo de Aire Parte 5: Ventilación y Flujo de Aire Optimizar las condiciones ambientales para los sementales es algo crítico por varias razones: • Se optimiza la producción de células espermáticas y se mejora la calidad del semen. • Se regulan los requerimientos de alimento para mantenimiento diario. • Controla el crecimiento bacteriano en el ambiente. • Promueve la salud y reducción de cojeras. El objetivo de un programa de ventilación es alcanzar la temperatura deseada del cuarto (TDC o DRT por sus siglas en inglés) y humedad, a través de la remoción del calor húmedo para crear confort. TDC se refiere a la temperatura óptima para el confort del semental en un ambiente dado. Se deben realizar los ajustes necesarios para alcanzar la TDC en diferentes tipos de ambientes, ya sea con distintos tipos de pisos o diferentes tipos de construcciones. • Diferentes TDC han sido asociados a distintos “puntos de partida” (punto en el cual el ventilador aumenta su velocidad) considerando ambientes variables para alcanzar el máximo confort del semental (Cuadro 3; extracto de la Herramienta Modelo de Ventilación PIC, disponible a petición). Cuadro 3 Variables Ambientales del Edificio y Recomendaciones de Condiciones Optimas Ejemplo 1 Ejemplo 2 Ejemplo 3 Ejemplo 4 Tipo de Piso Slats Slats Solid Solid Tipo de Construcción Sólida a los lados Cortina Sólida a los lados Cortina Temperatura Deseada del Cuarto 66°F, 19°C 68°F, 20°C 63°F, 17°C 65°F, 18°C Punto Partida en Invierno 69°F, 21°C 71°F, 22°C 66°F, 19°C 68°F, 20°C Punto de Partida en Verano 65°F, 18°C 67°F, 19°C 62°F, 16°C 64°F, 18°C La Humedad Relativa en la posta de sementales debe ser entre 40 y 65%. La Humedad y TDC son controladas mediante el manejo y manipulación del flujo de intercambio de aire entre el interior y exterior, lo que es medido en pies cúbicos por minuto (CFM). • Durante la respiración normal del semental se produce calor y vapor de agua, causando un incremento de la temperatura y humedad del ambiente, a menos que exista un buen intercambio de aire. • Se recomienda un flujo de aire mínimo de 14 CFM para mantener los requerimientos de temperatura y humedad. 14 Nunca Paramos de Mejorar La velocidad del aire que ingresa es importante para lograr una mezcla efectiva de aire fresco y poder eliminar las corrientes y áreas de condensación. La velocidad es medida en pies por minuto (FPM por sus siglas en Ingles). • Una velocidad de aire de 800 es óptima para ventiladores que funcionan a alta velocidad, mientras que 400 FPM es mucho más práctico en ventiladores que funcionan a baja velocidad. • Rutinariamente evalúe la velocidad del aire para asegurar una mezcla apropiada de aire en la sala. Se requerirán calefactores adicionales para controlar las temperaturas mínimas críticas y son esenciales en situaciones de emergencia. • Cada edificio requiere la adición de calefactores adicionales para asegurar el control de temperaturas bajas críticas y calefactores para ser usados en situaciones de emergencia. • Si los calefactores están programados demasiado cerca al punto óptimo de temperatura, el consumo de gas o propano será excesivo. Programe el calefactor con un mínimo de 2 grados menos que el óptimo e incremente la velocidad del ventilador al punto óptimo. Ej. Si la temperatura óptima es de 21ºC, los calefactores se encenderán a los 18ºC. Parte 5: Ventilación y Flujo de Aire • Cuando la humedad y temperatura están afuera del rango óptimo, se requerirá cambiar el flujo de aire para dejar salir apropiadamente el exceso de calor y reemplazarlo con aire más fresco y más seco. • El aire más fresco retiene menos vapor de agua, permitiendo una caída efectiva de la humedad relativa en la sala. • Incrementar el flujo de ventilación para mejorar la humedad relativa cuando la temperatura exterior es superior a la deseada, no mejorará la humedad relativa. La secuencia de los ventiladores es establecida para mantener la temperatura de la sala tan cerca como sea posible a la temperatura deseada del cuarto, sin causar mayores variaciones de la temperatura mediante la remoción progresiva de calor y humedad. • La velocidad de los ventiladores no es igual a los CFM (ej. el 50% de la velocidad de los ventiladores no equivale al 50% de los CFM). Por esto, es importante entender la relación entre las velocidades de los ventiladores y tasa de salida de aire (Figura 2). 15 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 5: Ventilación y Flujo de Aire Figura 2 • Tamaños diferentes de ventiladores, juanto con la presencia de un cono, influencian los CFM que sale (Cuadro 4) Cuadro 4 Estimaciones de CFM Dependiendo del Tamaño del Ventilador CFM, ventiladores con cono Tamaño, cm CFM, salida 16 20 450 500 25 1100 1200 31 1500 1600 46 3500 3600 61 5700 6000 91 9700 10000 122 17000 18000 127 22000 23000 140 23000 24000 Nunca Paramos de Mejorar Para proveer un ambiente óptimo a los machos se requiere de muchos factores que deben operar en conjunto. En la medida que los CFM aumentan se deben considerar lo siguiente: • Cada pulgada2 de inlet del techo provee 4.5 ft3 de aire por minuto. • Cada pulgada2 del inlet provee 2.5 ft3 de aire por minuto. • Si el sistema no tiene el apropiado número de inlets abiertos y la cantidad apropiada de inlet en el ático, no importa cuántos ventiladores estén trabajando, el aire no entrará a la nave efectivamente. Parte 5: Ventilación y Flujo de Aire • Las curvas de los motores dependen de los diferentes tamaños de los ventiladores y se obtienen de la relación entre los voltajes entregados al motor y las revoluciones por minuto resultantes (RPM). • La adaptación incorrecta de la curva del motor y el tamaño del motor puede quemar los ventiladores o causar velocidades de ventilación no precisas, ej. Un ajuste del 60% en la velocidad de ventilación puede resultar en 90% de velocidad de ventilación. • La tasa de intercambio de aire puede aumentar debido a que aumentan las temperaturas del exterior, hay cambios de estación o incrementa la temperatura interior porque aumenta la actividad de los machos. • Se deben hacer cambios moderados en la ventilación y se deben evitar incrementos del doble de CFM. Se puede utilizar agua para refrescar el ambiente por medio de goteros o enfriamiento por evaporación. El propósito de los sistemas de gotero es refrescar los testículos para optimizar la temperatura para la producción de espermatozoides. • Tener más agua en el aire y en el piso incrementa el riesgo de elevar la humedad del ambiente, aumenta la probabilidad de desarrollar cojeras y crea un ambiente ideal para el crecimiento bacteriano. • Para secar el piso se debe aumentar la tasa de ventilación. 17 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 6: Condición Corporal Parte 6: Condición Corporal La condición corporal es importante para mantener óptimos niveles de libido, producción de semen y una adecuada habilidad de montar en el potro de colección. El objetivo es que el 90% de los sementales del stud tengan una condición corporal normal (Vea las Figuras 3, 4 y 5). Fotografía 3: Condición Corporal Delgada Fotografía 4: Condición Corporal Normal Fotografía 5: Condición Corporal Obesa 18 Nunca Paramos de Mejorar Parte 7: Alimentación y Nutrición Los sementales en condiciones corporales normales deberán ser alimentados con 2.3-2.7 kg. (5-6 lb.) de alimento una vez al día. Ajuste la alimentación para lograr el objetivo corporal deseado (Ver Parte 6: Condición Corporal). Un semental obeso debe ser limitado a 1.6-1.8 kg. (3.5-4 lb) de alimento al día, mientras que un semental delgado deberá recibir 3.2-3.6 kg (7-8 lb) al día. Si se utilizan comederos automáticos de caída, pese muestras una vez por trimestre para verificar la precisión del comedero. Las mediciones deberán efectuarse con cualquier ajuste de ingredientes para considerar los cambios de densidad. Parte 7: Alimentación y Nutrición Los sementales deben ser alimentados a libre acceso cuando llegan a la cuarentena, esto permite mejorar la transición hacia el edificio. Este nivel de alimentación debe ser mantenido por 2 semanas y después se debe reducir a 2.3 kg/día. (5 lb.) por lo que resta del periodo de cuarentena. Los comederos deben ser ajustados cada 2 semanas para mantener una condición corporal apropiada y una buena producción de semen. El mantenimiento adecuado de la condición corporal ayudará a mantener un buen nivel de libido y una correcta habilidad de trabajo de los sementales. Un adecuado nivel de consumo y la fortificación de nutrientes deben ser provistos para optimizar la producción de semen (véase los Apéndices A y B). Las micotoxinas pueden tener varias consecuencias detrimentales sobre el desempeño del semental, incluyendo impactos negativos en la calidad del semen (Cuadro 5). Evite el uso de los subproductos o co-productos donde se puedan encontrar micotoxinas. Seleccione ingredientes de alta calidad y monitoree regularmente los niveles de micotoxinas en ellos. 19 Parte 7: Alimentación y Nutrición Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Cuadro 5 Impacto de las Micotoxinas en el Alimento sobre el Desempeño del Semental. Micotoxina Efecto Retraso de la pubertad Zearalenona Reduce el tamaño testicular Disminución del libido Pobre calidad espermática Edema del prepucio – pérdida de vello Pobre calidad espermática Aflatoxinas Disminución de la concentración espermática Incremento de anormalidades morfológicas Reducción de la capacidad de fertilización No come Ocratoxina Úlceras gástricas Pobre calidad espermática Tricotecenos No come (T2, DON, DAS) Vómito (P. Matzat, resumen de varias fuentes) 20 Nunca Paramos de Mejorar Parte 8: Entrenamiento Entrenamiento para Colección Manual Nunca comience a entrenar a un semental antes de los 150 días de edad. Identifique a las personas que estén dispuestas a dedicar tiempo y sean pacientes para entrenar a los sementales jóvenes. Comience el entrenamiento entre los 3 a 5 días de la llegada del semental. Asegúrese que un sistema de registro se encuentre en su lugar para registrar el progreso de cada semental. Todos los machos deben estar entrenados después de 4 semanas de iniciado el entrenamiento. Parte 8: Entrenamiento Antes de iniciar el entrenamiento, ajuste la altura del potro para que esté a la altura de los sementales jóvenes. El área de recolección deberá estar libre de corrientes y tener un buen piso. Se debe seguir el siguiente protocolo: • Remover cualquier fuente distractora en el área de colección. • Asegurarse que el semental esté cómodo con el contacto humano y asegurarse de la seguridad del personal. • Apriete el divertículo del prepucio para estimular al semental y haga todo el esfuerzo para que el semental ponga atención al potro. • Una vez que el semental monte el potro, asegure el pene y proceda con la colección. • Observe posibles problemas anatómicos en los sementales. (por ejemplo, pene flácido, frenillo persistente) en este momento. • El siguiente semental deberá ser colocado en la zona de calentamiento para ser preparado para el entrenamiento mientras que el primer semental está siendo recolectado. • Si el semental no muestra interés para montar el potro en 10 minutos, llévelo al área de calentamiento y administre una prostaglandina natural. Espere 5 a 10 minutos y trate nuevamente de colectarlo. • Una vez que el semental ha sido entrenado, repita el proceso 3 días seguidos para reforzar su experiencia de aprendizaje. • Una vez que los sementales ya estén entrenados, deberán ser recolectados 1 vez por semana. 21 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 8: Entrenamiento Entrenamiento usando un Sistema de Colección Automátizado El sistema de colección automática incluye un cérvix artificial (CA), un brazo deslizante, un cérvix artificial sujetador y un potro. El CA imita el cérvix de la cerda y brinda presión para estimular al semental. El brazo deslizante permite movimientos hacia delante y atrás durante la colección. • Sigua los pasos anteriormente mencionados para el primer día de recolección. • Al segundo día, colecte la primera porción del eyaculado manualmente por aproximadamente 1 minuto con la mano izquierda. • Después de 1 minuto asegure el pene al sistema de colección automática y permita al semental terminar la colección. • Repita el proceso en el día 3 de entrenamiento. • El tiempo de aclimatación de cada semental al sistema dependerá en cada individuo. Vea el Apéndice C para ver las instrucciones con fotos. 22 Nunca Paramos de Mejorar Parte 9: Colección del semental La higiene deberá ser mantenida durante la colección para limitar la contaminación bacteriana. El método del guante doble es preferido. Los termos recolectores deberán ser preparados un día antes de la colección y deben ser almacenados en un área limpia, cerrada, higiénica y tibia (37°C o 98°F) hasta su uso. El eyaculado del semental tiene 4 fracciones: • Pre-espermática • Rica en espermatozoides • Post-espermatica • Gelatinosa (tapón) Parte 9: Colección del semental Los sementales siempre deberán ser llevados al área de calentamiento antes de la colección. Esto le permite al semental prepararse para ser colectado. El prepucio debe limpiarse en el área de calentamiento y asegúrese de que el divertículo del prepucio esté libre de contenidos. El vello alrededor del prepucio deberá ser recortado periódicamente. El semen deberá ser colectado en un contenedor limpio desechable, incluyendo bolsas de polietileno, contenedores de plástico, etc. Todos los métodos deberán utilizar un filtro para remover el material gelatinoso. Una vez montado en el potro, el semental hará intentos de desenvainar el pene y con la mano con un guante limpio atrape y retenga el glande del pene (sacacorchos) y sigua el movimiento del semental hasta que se sujete. Evite colectar la fracción pre-espermática dentro del contenedor. Esta es típicamente una emisión clara que contiene orina y bacterias. La fracción rica en espermatozoides es seguida de la fase preespermática. Recolecte el semental hasta que termine con la eyaculación. Típicamente este proceso toma de 8 a 10 minutos, algunos sementales pudieran tardar más. Después de la recolección, el filtro deberá ser removido de la bolsa en la zona de colección y no debe entrar al laboratorio. 23 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 9: Colección del semental La identificación clara y precisa del semental, la genética y el técnico o el colector deben ser registrados y pegados a la bolsa o al contenedor que contiene el semen. 24 Todos los sementales, independientemente de la demanda de semen, deben ser colectados regularmente. Una guía para los intervalos de colección de machos terminales se presenta en la Cuadro 6. Se debe entender que cada semental y/o líneas se pueden desempeñar mejor a diferentes intervalos que los sugeridos; asumiendo que las recolecciones sean realizadas regularmente. Generalmente, las líneas maternas deberán ser recolectadas 1 vez por semana sin importar la edad. Cuadro 6 Intervalos de Colección por Edad del Semental en Líneas Genéticas Terminales Edad Intervalo <12 meses 1 x semana ≥12 meses 2 x semana Nunca Paramos de Mejorar Parte 10: Bienestar Animal y Salud Temperatura Corporal y Apetito Pruebas de Diagnóstico Se deben realizar pruebas semanales de PRRSv PCR de sangre o suero con la frecuencia y número adecuado para alcanzar una muestra estadística mínima de 95% de nivel de confianza con 5% de prevalencia basados en un tipo de muestra y la sensibilidad/ especificidad de la prueba PCR. Un muestreo más riguroso es dejado a criterio del stud. Muestras en pool hasta 5 son permitidas. Parte 10: Bienestar Animal y Salud Se debe medir la temperatura rectal de los sementales que no comen o que presenten signos clínicos de alguna enfermedad. Si la temperatura del semental se mantiene >40°C (104°F), el semental no deberá ser colectado ese día y se deberá notificar al Veterinario. Se debe considerar un diagnóstico de trabajo, incluyendo pruebas de PRRSv PCR en suero o hisopos de sangre. Si el número de sementales que no comen/o en estado febril aumenta de un día a otro, la posta debe ser cerrada y se debe iniciar un diagnóstico completo. Las pruebas para PCR deben ser colectadas y enviadas de acuerdo al protocolo del laboratorio de diagnóstico. Se recomiendan revisiones mensuales de PRRSv ELISA (30 muestras individuales) o pruebas semanales de un número similar. Considere hacer pruebas inmediatas de PRRSv PCR de muestras de sangre de cualquier semental con fiebre, que no coma o presente otros signos clínicos. Estas muestras deben ser examinadas por PCR de manera individual, en lugar de ser parte de un pool. La técnica del hisopo de sangre ha sido utilizada durante los últimos años y es una manera efectiva de recolectar sangre para pruebas semanales de PRRS PCR. Otro método utilizado es la vena tarsal en la parte posterior de la pierna del semental, es una buena técnica para recolectar sangre para PRRS PCR y ELISA. Contacte a su veterinario de granja o instrucciones de PIC acerca de la recolección de sangre. 25 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 10: Bienestar Animal y Salud Criterios para el cierre de la Posta La decisión de suspender el envío de semen desde el stud recae fuertemente en el juicio del Gerente y Veterinario de la granja. El semen no debe ser colectado para el envío si se tiene alguna duda del estatus de salud de cierto semental. Las temperaturas deben ser registradas si el semental es sospechoso de tener algún problema de salud. La suspensión de la venta de semen debe ser considerada cuando una enfermedad clínica (ejemplo: tos, diarreas, falta de apetito) sea evidente o existan temperaturas elevadas (>40°C o 104°F) en más del 5% de los sementales. Si el número de sementales con fiebre y con falta de apetito es menor al 5% pero está aumentando diariamente, la posta deberá cerrarse para elaborar un trabajo de diagnóstico. Otro motivo para detener el envío de semen es si el Veterinario o el Gerente de la granja tuviesen otras preocupaciones de riego para la granja, como problemas de bioseguridad. Las sospechas de enfermedad clínica o sub-clínica deben ser reportadas al Veterinario de la granja para determinar si se puede seguir distribuyendo el semen. Se debe confirmar los resultados positivos para enfermedades transmitidas vía semen, como PRRS. Manejo y Eutanasia Los sementales maduros son grandes y fuertes y pudieran causar lesiones a los cuidadores durante el manejo de los animales. Se debe tener especial cuidado cuando se mueven, tratan o toman muestras de los sementales. Si es necesaria una examinación detallada o se requiere de un tratamiento, el semental debe ser manejado de manera segura, efectiva y humanamente moderada. Las técnicas apropiadas para realizar eutanasia se encuentran en el documento “Eutanasia para Cerdos en la Granja: Recomendaciones para el Productor” (AASV y NPB,2009). 26 Nunca Paramos de Mejorar Transporte de los Sementales Cuadro 7 Recomendaciones de Densidades Basadas en Peso, Temperatura y Distancia a viajar Peso Requerimientos de ft² por Semental >90°F (32°C) y 80-90°F (27-32°C) >90°F (32°C) >250 miles lb Kg <80°F (27°C) 241-258 109-117 3.6 3.9 4.3 5.1 259-305 118-138 4.3 4.7 5.1 6.1 306-364 139-165 4.9 5.4 5.9 7.1 365-399 166-181 5.6 6.1 6.7 8 400-449 181-203 6.4 7 7.7 9.2 450-499 204-226 6.9 7.6 8.3 10 500 227 7.6 8.4 9.1 10.9 Parte 10: Bienestar Animal y Salud Los conductores que transporten sementales deben estar certificados para TQA®. La densidad durante el transporte deberá estar basada en peso, temperatura y distancia a viajar (Cuadro 7). 27 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 11: Gestión del Laboratorio Parte 11: Gestión del Laboratorio Al personal de la granja NO SE LE DEBE permitir entrar al laboratorio en ningún momento, a menos que se hayan bañado y cambiado de ropa. El personal del laboratorio deberá usar una ropa diferente al que usan los trabajadores del área de sementales. Estos artículos deben lavarse por separado de la ropa de la granja. • Batas de laboratorio y redes para el cabello deberán estar disponibles para el personal del laboratorio. • No se permite comer o fumar en el laboratorio. • Las mesas deberán ser limpiadas diariamente con una solución clorada después de que la producción ha sido finalizada. • Las mangueras deben ser enjuagadas con agua desionizada (DEI) mojadas con alcohol, enjuagadas nuevamente y colgadas para su secado antes de la producción del día siguiente. El laboratorio deberá estar listo para que el procesamiento de semen sea realizado con eficiencia (Figura 3). Figura 3. Flujo del Laboratorio 28 Nunca Paramos de Mejorar Calidad del Agua El agua purificada es el componente mayor en una dosis de semen y por lo tanto la calidad y control del agua es de suma importancia. Parte 11: Gestión del Laboratorio Las opciones son comprar agua purificada (mejor opción para inventarios con menos de 100 sementales) o instalar un sistema adecuado de purificación dentro de la posta. El costo puede ser variable, dependiendo de la calidad del agua y del origen de ella. Se debe llevar un monitoreo diario para asegurar que la calidad sea consistente. Muchos studs en Estados Unidos usan un equipo Myron ‘L’ 250 II para monitorear los Megaohms (MΩ) y tiene que estar colocado en el laboratorio, ya que arroja un resultado visual de inmediato. Los grados y especificaciones del agua, los niveles de contaminación microbiológica y las especificaciones de calidad del agua deben estar a la mano para su uso en el laboratorio (Tablas 8-10, ASTM, 1991). El objetivo de los sistemas de agua pura instalados en los studs de sementales es producir agua entre los grados Tipo I y Tipo III. Cuadro 8 Parámetros para Calidad del Agua y sus Especificaciones Parámetro Tipo I Tipo II Tipo III Tipo IV Conductividad Eléctrica, max, µS/cm a 298 K (25°C) 0.056 1.0 0.25 5.0 Resistividad Eléctrica, min, Ω-cm a 298 K (25°C) 18.0 1.0 4.0 0.2 pH a 298 K (25°C) A A A 5.0 to 8.0 Carbón Orgánico Total (TOC), Max, µg/L 50 50 200 No Límite Sodio, max, µg/L 1 5 10 50 Cloruros, max, µg/L 1 5 10 50 Sílice total, Max, µg/L 3 3 500 No Límite A: La medida de pH en Tipo de agua I, II, y III ha sido eliminada de esta especificación porque estos grados de agua no contienen componentes en suficiente cantidad para alterar significativamente el pH. Cuadro 9 Tipos de Contaminación Microbiológica Parámetro Tipo A Contenido Máximo de bacterias heterótroficas Cfu a /mL Endotoxina, EU /ml b a b Tipo B Tipo C 10/1000 mL 10/100 mL 100/10 mL 0.01 0.1 10 0.03 0.25 NA Cfu = Unidades formadoras de colonias; EU = unidades de endotoxinas 29 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Cuadro 10 Parte 11: Gestión del Laboratorio Especificaciones de la Calidad del Agua para Laboratorio Parámetro Target Bacteriología <1 cfu a /mL Pureza inorgánicos =18 MΩ @77°F (25°C) Orgánicos >0.001 AU@254 nm Carbono Orgánico total >50 ppb b pH 6.8 a 7.2 cfu = unidades formadoras de colonias; ppb = partes por billón; MΩ = megaohm – cm (resistencia eléctrica) aa b Si las muestras de agua no cumplen con éstas especificaciones, se deberá realizar un análisis extenso para poder corregir el problema. Llegada del Semen Una posta que pasa el semen al laboratorio a través de una ventana, debe tener una cámara de calentamiento para pre-calentar los termos de colección antes de la colecta. Debe estar programada a 37°C (98°F). Una posta que utiliza un sistema de entrega de tubo neumático debe también tener una cámara de calentamiento cerca al área de colección. El eyaculado de los sementales necesita ser claramente identificado con el arete del semental y con la línea genética. Los técnicos de granja necesitan evitar pasar contenedores sucios a través de la ventana. Los técnicos del laboratorio deben estar atentos cuando el eyaculado llegue a la ventana, ya que éste debe ser diluido dentro de los 10 minutos de su llegada. Evaluación del Semen Una vez que el semen llega al laboratorio se debe evaluar el color y el olor para determinar si existe presencia de sangre u orina en el eyaculado. El peso total del eyaculado debe ser medido en gramos mediante el uso de una balanza calibrada. 30 Prepare una muestra para evaluarla, diluyendo el semen fresco con el diluyente o una solución de citrato de sodio en una dilución 1:20. Si el eyaculado es muy líquido, una dilución 1:10 deberá ser utilizada o si es muy cremoso o concentrado utilice una dilución 1:40. Esto es importante debido a que puede tener un impacto en la precisión al determinar la concentración del semen. Nunca Paramos de Mejorar Cuadro 11 Criterios de Aceptación de la Calidad del Semen Característica Umbral Motilidad Total ≥80% Espermatozoides normales ≥70% Gotas Citoplasmáticas, proximales y distales <15% Aglutinación <30% Un microscopio puede usarse para evaluar la motilidad total usando una placa cubierta calentada a 37°C y/o un Sistema de Análisis de Semen Asistido por Computadora (CASA). Los sistemas CASA pueden evaluar la morfología en la misma muestra usada para evaluar la motilidad. Si este sistema no es usado, se debe preparar una muestra y se debe contar 100 células para tener el porcentaje de células normales en un eyaculado. Parte 11: Gestión del Laboratorio Una vez que el semen llega al laboratorio, utilizando un microscopio, se debe evaluar la motilidad y morfología de los espermatozoides y los resultados deben cumplir con los estándares de calidad propuestos (Cuadro 11). Se debe registrar la presencia de desechos celulares y aglutinación de células espermáticas. Menos de un 10% de los eyaculados deben se descartados porque no cumplen con los criterios de calidad. Si este número es más alto, hay que realizar un análisis detallado de las razones de desecho para entender dónde existe el problema. Determinación de la Concentración Las opciones para medir la concentración del eyaculado incluyen hematocitómetro, fotómetro, espectrofotómetro o los sistemas CASA. Las técnicas apropiadas de mezclado de semen fresco y de pipeteo son importantes para asegurar tener una muestra representativa del eyaculado diluido y así determinar la concentración total de espermatozoides. Dependiendo del equipo disponible, esto proporcionará una medición expresada como total de células espermáticas en millones por ml. de semen fresco. 31 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 11: Gestión del Laboratorio Dilución del semen El personal del laboratorio necesita saber con antelación cuántas dosis se necesita hacer para que puedan preparar suficiente diluyente para un día normal de colecta. Una regla general es multiplicar el número objetivo de dosis por el volumen total por dosis y sumar 5 a 10% más para tener suficiente diluyente para la producción de semen y usos consecuentes como dilución de semen fresco, derrames, pre-diluciones, u órdenes de último minuto. Siga exactamente las instrucciones del fabricante del diluyente o conservador. El peso preciso del agua purificada y del diluyente es vital para una producción correcta de dosis. Las desviaciones de esto pueden alterar la osmolaridad de la mezcla. El diluyente necesita ser continuamente mezclado por 1 hora para permitir que los componentes de éste se estabilicen antes de agregar el semen. La temperatura del diluyente debe ser mantenida a 35°C (95°F). Una colección de semen tiene una temperatura de 37-38°C (98-100°F) y hay una caída de 2-3 grados de temperatura del eyaculado durante el proceso de evaluación. Consecuentemente el diluyente necesita guardarse a 35°C (95°F). Después que el eyaculado y el diluyente hayan sido mezclados, observe una muestra al microscopio antes de llenar las dosis. Los diluyentes pueden contener uno o múltiples antibióticos. Los antibióticos en el diluyente pueden ser modificados y adaptados a su situación. Una comunicación abierta con su proveedor es necesaria. Envasado de las Dosis de Semen Después de la dilución, el semen debe ser puesto en un baño de agua a 35°C (95°F) o se deben envasar las dosis inmediatamente. Antes del envasado, el semen debe ser mezclado suavemente ya que los espermatozoides se pueden asentar en el fondo. Todo el proceso, desde el tiempo en que llega el semen a la ventana hasta el envasado de dosis, debe tomar máximo 20 minutos. 32 Nunca Paramos de Mejorar Enfriamiento del Semen y Empaque de las Dosis Enfriadas Para mover, almacenar y enfriar el semen, se pueden utilizar estantes de alambre o carros de transporte. Esto permite el flujo de aire fresco y un enfriamiento más uniforme de las dosis de semen. Las dosis necesitan bajar la temperatura de dilución (35°C o 95°F) a la temperatura de conservación (15 - 17°C o 59 – 63°F). Con el uso de diluyentes modernos, las dosis pueden ser movidas inmediatamente al cuarto frío. El semen debe ser enfriado por 4 horas antes de su distribución. Esto es especialmente importante para el semen que es transportado en una caja doble de espuma de poliestireno™ que es una combinación más fresca, ya que estas hieleras conservan una temperatura constante durante el transporte. Se puede utilizar registradores de temperatura (loggers) para monitorear las temperaturas en tránsito. La clave es que el semen se enfríe hasta la temperatura de conservación antes de ser empacado. Parte 11: Gestión del Laboratorio Se utilizan cuartos frescos para enfriar y almacenar el semen antes de que éste sea distribuido. La temperatura debe mantenerse entre 15- 17°C (59 - 63°F). Un ventilador debe ser usado para asegurar la circulación del aire. Registre diariamente las altas y bajas temperaturas del cuarto. Envío y Transporte del Semen El semen enviado a través de un servicio de mensajería externa, tal como UPS o FedEx, debe ser empacado en cajas dobles de espuma de poliestireno™, ya que será entregado al día siguiente. El semen que se envíe al exterior debe ser empacado y sellado dentro de un ambiente controlado (17°C o 63°F). Para pedidos grandes, no se deben empacar más de 200 dosis en una hielera Styrofoam™ (poliestireno). Por ejemplo, un cliente que ordena 1200 dosis recibiría 6 hieleras de 200 dosis cada una. Cuando las temperaturas son mayores a 26°C (80°F) o menores a 4°C (40°F), las dosis deben ser empacadas utilizando una doble hielera Styrofoam™ con paquetes de gel en los espacios de aire en el interior, de otra manera una simple hielera puede ser usada. En el invierno (<4°C o 40°F) utilice 2 paquetes de gel entibiado y en el verano (>26°Co 80°F) utilice 1 paquete de gel congelado (o 2 refrigerados) entre las hieleras. Vea el Apéndice D para más instrucciones de empaque. Para el semen que es enviado vía servicio de mensajería interna, la temperatura debe ser revisada en el lugar de entrega. 33 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 12: Control de Calidad Parte 12: Control de Calidad Evaluación de la Motilidad Post-producción • Garantizar la calidad de las dosis de semen es de vital importancia. El mejor indicador que el laboratorio tiene que evaluar es la viabilidad de las dosis conservadas, aplicando una revisión de motilidad post-producción de todos los lotes y colecciones de un solo macho. • Una muestra de cada lote o de una colección de un solo semental debe ser guardada en un tubo de vidrio de 5 ml. o en una bolsa usada para empaque. Las muestras deben ser preparadas para su evaluación de acuerdo a las direcciones provistas por el fabricante del conservador (ver la Cuadro 12). Cuadro 12 Directrices del Fabricante para la Preparación de Muestras para Revisiones de la Motilidad a Fabricante Conservador IMV Gedil Magapor Vitasem Minitube Androhep Muestra Temp Time 1-5 ml enfriado, conservado 99°F, 37°C 10 minutos 3 ml enfriado, conservado 99°F, 37°C Evaluación Motilidad 5 minutos Motilidad 5 ml enfriado, conservado 100°F, 38°C 20 minutos Motilidad Enduraguard a Sólo para propósito de ejemplo. PIC no avala a los fabricantes de diluyentes específicados. • Las postas deben realizar revisiones de motilidad postproducción al día 1, 3 y 5 como mínimo, donde el día de colección es día 0. • Si las dosis tienen una motilidad menor a 70%, realice una revisión de motilidad post-producción una segunda vez para confirmar los resultados. Si se confirman los resultados, una llamada debe de hacerse a los clientes quienes recibieron el semen instruyéndoles que deben desechar el semen. Preparación del Diluyente y Trazabilidad Cuadro 13 • Imprima y pegue en el área de dilución, una guía de referencia en la que se indique cómo preparar el diluyente, indicando la cantidad de agua y diluyente que recomienda el fabricante. Una guía puede ser preparada para cada tipo de diluyente disponible en una posta particular (vea Apéndice E). • Genere un sistema de registro para seguir rastreando el diluyente usado. Este registro debe incluir el tipo de conservador, nombre y número de lote del fabricante (Cuadro 13). Ejemplo de Sistema de Registro del Diluyente Diluyente: xxx Tasa de Dilución: xx g/kg Fecha Agua, kg Conservador, g Lote # Iniciales 11/01/2012 34 1 kg 50 g 1234 XX Notas Nunca Paramos de Mejorar Registro de Materiales Desechables Especificaciones de Control de Calidad del Distribuidor • Pida que su distribuidor le provea todas las regulaciones que ellos llevan a cabo para la producción de los insumos. Por ejemplo, el distribuidor del diluyente debe indicar cuál es el protocolo que llevan a cabo para la prueba biológica de materiales plásticos. También pregunte a los distribuidores sobre la certificación ISO 9000. Parte 12: Control de Calidad • Registre cuando cambie de distribuidor y cuando cambien los productos que tengan contacto directo con el semen. Todas estas entradas necesitan ser incluidas con fechas y número de lote. • Desarrolle un ensayo en laboratorio para monitorear los efectos perjudiciales potenciales (ej., reducción de motilidad). • Por ejemplo, cuando un nuevo lote de tubos de dosis sea recibido, prepare una muestra utilizando un tubo del lote nuevo y otra muestra utilizando un tubo del lote antiguo, ambas muestras deben contener semen del mismo macho. • Evalúe la motilidad y morfología de ambas muestras durante los días 1, 3 y 5. • Para otros consumibles nuevos como guantes, corte un pedazo de un guante nuevo y un pedazo de un guante del lote antiguo y sumérjalos en muestras de semen del mismo pool y evalúe el semen como se describió arriba. Calibración del Equipo • Se debe calibrar semanalmente las balanzas, las técnicas de pipeteo se deben evaluar mensualmente y los termómetros de láser infrarrojo cada año. En el laboratorio debe haber disponible una tabla de pesos maestros, una balanza sensible (lectura a 0.001 g) para volúmenes de pipeta (para canales simples de desplazamiento de aire de las pipetas) y un kit de calibración para el termómetro láser infrarrojo. Análisis de Agua Pura • Las postas que tienen un sistema de purificación de agua (Fotografía 6-10) deben establecer un proceso de verificación para asegurar que todos los componentes están operando apropiadamente. La frecuencia del análisis de agua depende en la calidad original del agua y de la fuente. Filtros de carbón y arena deben ser usados para capturar las partículas de mayor tamaño. Estos equipos son funcionales para >500 mil galones de agua. Los filtros deben ser revisados cada trimestre. • Monitoree los niveles de sales en el suavizador de agua (Fotografía 6) para asegurar una relación adecuada de ablandador consumido versus agua producida. 35 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales - Monitoree los niveles de sales en el suavizador de agua (Fotografía 6) para asegurar una relación adecuada de ablandador consumido versus agua producida. Parte 12: Control de Calidad Fotografía 6. Ejemplo de Suavizador de Agua - La máquina de Osmosis Inversa RO, necesita un mantenimiento dos veces por año, reemplazando los cartuchos y filtros. El uso de medidores RO y pruebas de cinta pueden ser usadas para monitorear localmente el agua producida por el sistema purificador de agua (ejemplo, fabricado por Myron L Company, Fotografía 7). Fotografía 7. Medidor de Agua Osmosis Inversa - Los tanques de Desionización DEI deben trabajar en pares y necesitan ser reemplazados dos veces por año. (Fotografía 8). Si el sistema tiene un indicador de luces que cambian de verde a rojo, existirá un periodo de una semana de tiempo para reemplazar el tanque agotado. El par de tanques opera en las posiciones de “trabajo y pulido”. El tanque agotado es aquel que está en la posición de trabajo y cuando el tanque de reemplazo llegue, el tanque bueno existente se debe mover desde la posición de pulido a la posición de trabajo y el tanque nuevo va a la posición de pulido. 36 Nunca Paramos de Mejorar Fotografía 8: Tanques de Desionización para Sistemas de Agua Fotografía 9. Sistema Micron Parte 12: Control de Calidad - El sistema 0.25 micron y lámpara UV deben ser cambiados cada año (Fotografías 9-10). Fotografía 10. Ejemplo de lámpara UV - Las tuberías de agua desde la lámpara UV hasta las salidas de agua en el laboratorio deben ser desinfectadas cada mes para controlar bacterias. Desinfecte las líneas de agua y las salidas de los grifos en el laboratorio, usando una solución de blanqueador de lavandería. Déjelos en remojo por la noche y luego enjuague bien. - Semanalmente revise el sistema completo para identificar posibles fugas de agua. 37 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Hay muchas medidas de control de calidad en el laboratorio. Una lista de mediciones (Cuadro 14) debe estar disponible para el técnico de laboratorio con el nombre de la persona responsable para cada tarea. Cuadro 14 Parte 12: Control de Calidad Medidas de Control de Calidad y Frecuencia de Medición Medida de control de calidad Frecuencia 38 Revisiones de Motilidad Día 1, 3 y 5 Materiales desechables Número de lote Nuevo o productos Calibración de balanzas Semanalmente Calibración de Pipetas Mensualmente Calibración de Termómetro Infrarrojo Anualmente Máquina Osmosis Inversa Reemplazar filtro 2 veces por año Tanques DEI Reemplazar 2 veces por año Líneas de Agua y grifos Desinfectar mensualmente Sistema .25 micron Reemplazar 1vez por año Lámpara UV Reemplazar 1vez por año Análisis de Evaluación de Terceras Partes • Para asegurar que las dosis de semen diluidas cumplan con los estándares mínimos de calidad, mensualmente se debe implementar una evaluación del agua, diluyente y semen diluido. • Establezca un programa de monitoreo periódico de la calidad de las dosis de semen producidas en la posta. Esto consiste en mandar a un tercero una cantidad de dosis elegidas al azar para revisar cómo está funcionando el control de calidad que se hace en el laboratorio del stud, concentración de células espermáticas, motilidad total, morfología y volumen de dosis de semen. Al mismo tiempo, envíe muestras de agua purificada, muestras de diluyentes y muestras de semen diluido para realizarles análisis bacteriológicos. Siga el protocolo para preparación de muestras de agua y diluyente que se presenta en el Apéndice F. Después que la tercera parte entregue los resultados de las evaluaciones, compárelos con sus metas objetivas. • El número de muestras de semen a enviar debe ser igual a un 1% de las dosis que se producen en un día normal de producción o un mínimo de 10 dosis seleccionadas al azar entre lotes. • La frecuencia de los envíos para evaluación debe ser calendarizada mensualmente y las muestras deben ser tomadas aleatoriamente de todos los lotes de dosis. • Los objetivos deben ser establecidos para cada parámetro que se mida y la variación de estar entre los rangos aceptables. • Cuando una fuente de consumibles o número de lote cambia, se deben enviar muestras del mismo lote, usando ambas fuentes/lotes y la tercera parte debe estar consciente del cambio. • La tercera parte que hace el servicio de evaluación de semen necesita ser una entidad confiable e independiente. Vea a un representante PIC para solicitar recomendaciones. Nunca Paramos de Mejorar Las postas de sementales deben mantener una relación empleado: semental igual a 1:60, con 60% de los empleados trabajando en la posta y un 40% en el laboratorio. Los empleados deben tener el certificado PQA Plus®. El personal que trabaja directamente con los animales debe ser entrenado sobre el movimiento animal y cómo se deben manejar los sementales para garantizar la seguridad de los trabajadores. El personal del laboratorio debe ser entrenado por otro empleado con varios años de experiencia o mediante un programa de entrenamiento a través de un tercero. Se debe estandarizar los conocimientos de los empleados una vez por trimestre, a través de una referencia cruzada entre el personal del laboratorio sobre cómo preparar dosis, etc. Parte 13: Manejo y Entrenamiento del Personal Parte 13: Manejo y Entrenamiento del Personal 39 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 14: Indicadores Clave de Desempeño Parte 14: Indicadores Clave de Desempeño 40 Tal como en las granjas de hembras, los studs de sementales deben también dar seguimiento a los parámetros que son indicativos sobre el desempeño del semental y calidad del semen (Cuadro 15). Cuadro 15 Indicadores Clave de Desempeño para Centros de Sementales KPI Objetivo Espermatozoides totales por eyaculado >30 mil millones Colecciones por semental por semana 1.2 Sementales no entrenables <3.0% Uso de Prostaglandina <1.5% Colecciones desechadas <6% Dosis no usadas <5% Mortalidad sementales <5% Nunca Paramos de Mejorar Parte 15: Benchmarking de Producción Se pueden hacer estimaciones de células espermáticas y producción de dosis de líneas PIC basadas en la información propia, de un afiliado, de un grupo de usuarios o tomando datos de clientes de las postas de sementales (Figuras 4-6; Cuadros 16, 17). Figura 4. Parte 15: Benchmarking de Producción Pocos estudios han investigado el tiempo límite de cuándo la calidad del semen para inseminación artificial comienza a deteriorarse. La investigación (Wolf y Smital, 2009) sugiere que el volumen de semen, número total de espermatozoides y los espermatozoides funcionales alcanzan su máximo cuando el semental tiene 2 años de edad. La concentración espermática aumenta hasta el mes 11 seguido de una disminución de la concentración hasta que los sementales cumplen 3 años. El porcentaje de espermatozoides anormales aumenta a la edad de 8 a 48 meses. La motilidad se reduce a un ritmo constante en el tiempo pero solamente por 1% de reducción. Células Viables (vivos, normales) por Eyaculado por Línea Genética por Semana de Producción 41 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 15: Benchmarking de Producción Cuadro 16 42 Células Viables por Eyaculado por Línea Genética Promediado por 5 Semanas de Producción Linea W1-5 W6-10 W11-15 W16-20 W21-25 W26-30 W31-35 W36-40 W41-45 L02 35.0 46.1 53.8 58.2 60.0 62.0 63.2 64.6 64.8 L03 39.3 47.5 53.3 57.4 59.8 59.9 61.0 61.2 61.0 PIC280/L15 34.7 43.5 50.4 56.0 58.8 60.3 62.1 63.6 64.3 L19 36.5 47.4 55.4 60.3 62.5 64.0 65.7 64.6 66.5 PIC327/L27 28.6 42.3 51.3 56.7 60.0 61.6 62.6 63.7 65.1 PIC337/L65 26.8 44.2 52.3 57.5 61.4 63.5 65.5 66.6 67.2 PIC359 30.2 47.1 57.9 66.6 70.8 74.3 76.0 77.3 79.5 PIC380 41.6 52.0 60.2 65.4 69.1 71.3 72.5 73.7 75.1 Figura 5. Promedio de dosis por Colección, por Edad y Línea Genética, asumiendo Dosis de 2500 millones de Células Espermáticas Viables y un Promedio de 1.2 Colecciones por Semana por la Vida del Útil del Semental. Nunca Paramos de Mejorar Cuadro 17 Dosis PIC Línea <12 meses ≥12 meses L02 19.1 25.1 L03 19.6 24.2 PIC280/L15 18.2 24.7 L19 19.7 25.8 PIC327/L27 17.6 25.0 PIC337/L65 17.8 25.8 PIC359 19.8 30.1 PIC380 21.7 28.8 Figura 6: Realización del Semental Terminal Parte 15: Benchmarking de Producción Promedio de Dosis por Colección por Edad y Línea Genética 43 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Parte 16: Vida Útil del Semental y Tasa de Reemplazo Parte 16: Vida Útil del Semental y Tasa de Reemplazo 44 En los años anteriores, PIC en asociación con economistas de las universidades, han desarrollado un modelo económico para determinar el momento óptimo para desechar un semental de la posta. La Vida Optima del Semental OBL (por sus siglas en ingles) usa costos personalizados de las postas (alojamiento, comida, precio de compra, costos de cuarentena, regalías, etc.) e ingresos proyectados (el valor de las dosis de semen producidas por el semental y el valor genético del semental comparado con su potencial de reemplazo) para determinar objetivamente el momento óptimo en que un semental debe permanecer en la posta. Hay dos modelos de OBL que se acomodan a clientes integrados que son dueños de una posta de sementales y de una unidad de hembras y también existe un modelo desarrollado para centros de transferencia genética y venta de semen. Estos modelos entregan tasas objetivas de reemplazo y proveen métricas basadas en información precisa y tiempo real. Por favor contacte a Servicios Genéticos de PIC para más información sobre OBL y su uso en su sistema. Nunca Paramos de Mejorar Referencias American Association for Swine Veterinarians and National Pork Board. On-farm Euthanasia for Swine: Recommendations for the Producer. Des Moines, IA. 2009. ASTM International. 1991. D1193: Standard Specification for Reagent Grade Water. Retrieved November 2012 from http://www.astm.org. Knox, R. 2003. The Anatomy and Physiology of Sperm Production in Boars. Referencias Kennedy, B.W. and J.N. Wilkins. 1984. Boar, breed and environmental factors influencing semen characteristics of boar used in artificial insemination. Can. J. Anim. Sci. 64: 833-843. Louis, G.F., A.J. Lewis, W.C. Weldon, P.S. Miller, R.J. Kittok, and W.W. Stroup. 1994. The effect of protein intake on boar libido, semen characteristics and plasma hormone concentrations. J. Anim. Sci. 72: 2038-2050. McNitt, J.I. and N.L. First.1970. Effects of 72-hour heat stress on semen quality in boars. Int. J. Biometeor. 14: 373-380. Pineda M.H. 1989. Veterinary Endocrinology and Reproduction. 4th ed. McDonald, LE. Lea & Febiger. Sancho,S., E. Pinart, M. Briz, N. Garcia-Gil, E. Badia, J. Bassols, E. Kádár, A. Pruneda, E. Bussalleu, M. Yeste, M.G. Coll, and S. Bonet. 2004. Semen quality of postpubertal boars during increasing and decreasing natural photoperiods. Theriogenology. 62. 7:1271-1282. Senger, P.L. 2005. Pathways to Pregnancy and Parturition. 2nd rev. ed. Pullman, WA: Current Conceptions, Inc. Suriyasomboon, A. 2005. Herd investigation on sperm production in boars, and sow fertility under tropical conditios. With Special Reference to Season, Temperature and Humidity. Doctoral thesis. Swedish University of Agricultural Sciences. Uppsala. Wettemann, R. P., M.E. Wells, I.T. Omtvedt, C.E. Pope, and E.J. Turman. 1976. Influence of elevated ambient temperatura on reproductive performance of boars. J. Anim. Sci. 42: 664-669. Wolf, J. and J. Smital. 2009. Quantification of factors affecting semen traits in artificial insemination boars from animal model analyses. J. Anim. Sci. 87: 1620-1627. 45 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Colaboradores Colaboradores Equipo del Proyecto del Manual PIC Contribuyentes Juárez, Arturo Engle, Mark Minton, Amanda Geiger, Jerome Morales, Jaime Lewis, Craig Pinilla, Juan Carlos Matzat, Paul Thompson, Bob McCulley, Nick Turley, Malcolm Melody, Brian Culbertson, Matt Neill, Casey Torgersen, Ole 46 Nunca Paramos de Mejorar Apéndice A Requerimientos Nutricionales para Cerdos Unidades NRC 1 2012 NSNG 2 2010 PIC 2011 Vitamina A IU/lb 1818 4,000 5,000 Vitamina D IU/lb 91 300 800 Vitamina E IU/lb 20 30 50 Vitamina K mg/lb 0.5 2 2 Colina mg/lb 568 0 300 Niacina mg/lb 4.5 22 20 Riboflavina mg/lb 1.7 4 4.5 d-Pantothenate mg/lb 5.5 12 15 Vitamina B-12 mcg/lb 15 20 17 Ácido Fólico mcg/lb 591 0 750 d-Biotina mcg/lb 91 0 250 Tiamina mg/lb 0.5 0 1 Piridoxina mg/lb 0.5 0 1.5 Zinc ppm 100 165 125 Hierro ppm 100 165 100 Manganeso ppm 20 30 50 Cobre ppm 5 16 15 Iodo ppm 0.5 0.3 0.65 Selenio ppm 0.3 0.3 0.3 1 2 Apéndice A Nutriente NRC = Requerimiento de Nutrientes del Cerdo NSNG = Guía Nacional de Nutrición del Cerdo 47 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Apéndice B Apéndice B Especificaciones Mínima de la Dietaa Nutriente NRC ME, Kcal/lb 1400 Proteína, % 16 Fibra, % 4.5 to 6.0 SID lisina , % 0.62 Calcio, % 0.80 aFósforoc, % 0.40 Sal adherida, % 0.45 Acido Linoleico, % 1.90 b Cantidad / lb de dieta completa. SID = Estandarizado ileal digestible. c a = disponible a b Ejemplo Dieta para Sementales Ingrediente Porcentaje Maíz 69.32 Pasta de Soya (2.62% SID Lisina) 13.75 Aceite de Soya 1.00 Fosfato monocálcico, 21% P 1.10 Limestone 1.20 Sal 0.45 Lisina HCl 0.11 DL-Metionina 0.02 L-Treonina 0.05 Cáscara de Soya 12.50 PIC Boar Stud VTM + Fitasa 0.50 100.00 48 Nunca Paramos de Mejorar Apéndice C Sistemas Auitomatizados para Colección. Instrucciones paso a paso para el uso. 1. Apéndice C Prepare el cérvix artificial (CA) colocándolo a través del anillo y envolviendo el revestimiento exterior alrededor de este. 2. Apriete el divertículo del prepucio para vaciar su contenido 3. Una vez extendido el pene, límpielo con una toalla desechable usándola una sola vez. 49 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales 4. Apéndice C Pegue el CA a la palma del guante con su mano exponiendo el tape. Cuando el semental comience a empujar, agarre el pene. 5. Coloque el final del CA en el sujetador y presione el gatillo hacia abajo. La punta del pene debe llevarse ligeramente al final del CA. Después de colectar la fracción preespermática del eyaculado remueva y deseche la bolsa interior del CA. 6. Coloque el exterior de la bolsa dentro del termo de colección y utilice un anillo y boca del termo para crear un sellado. 50 Nunca Paramos de Mejorar 7. Apéndice C 8. Una el termo de colección al potro de monta pero no le aplique fuerza excesiva de modo de evitar que se doble. Libere el seguro del brazo deslizable para permitir el libre movimiento durante el proceso de colección. Durante la colección, el semen va desde la bolsa externa del CA hasta el filtro de la bolsa de colección localizada en el termo de colección. Una vez que se complete la eyaculación, el semental retirará su pene del CA y se desmontará. Libera la tensión en el gatillo para quitar el CA y el termo de colección. Retire el CA del anillo y deséchalo. Quite la parte de arriba de la bolsa de colección que contiene el filtro y deséchelo. El eyaculado se encuentra ahora en la bolsa de colección y puede ser entregado al laboratorio para ser procesado. 51 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Apéndice D Empaque de Dosis de Semen para Envío Usando Doble Hielera. Apéndice D 1. Prepara los revestimientos y hieleras. 2. Coloque las dosis adentro de la bolsa Thermalast adentro de la hielera interna. 3. Ponga un paquete de gel con la temperatura del cuarto. 52 Nunca Paramos de Mejorar 4. Apéndice D Ponga la tapa y séllela con cinta. 5. Envuelve la hielera interna con una bolsa Thermalast. 6. Ponga la hielera interna dentro de la hielera externa y agregue paquetes de gel (caliente o frío dependiendo de la temporada). 53 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales 7. Apéndice D Tape y selle la caja con cinta. 8. Ponga la caja dentro de la caja para envío. 54 Nunca Paramos de Mejorar Apéndice E Guía de Preparación del Diluyente Diluyente: XXX Volumen Recomendación Proveedor: 50 g/kg de agua Tub: Agua a Diluyente Volumen Agua a Diluyente Volumen Agua a Diluyente Volumen 5kg Agua a Diluyente diluyente agregar a agregar diluyente agregar a agregar diluyente agregar a agregar diluyente agregar a agregar (kg) (g) (L o kg) (kg) (g) (L o kg) (kg) (g) (L o kg) (kg) (g) 1 1 50 26 26 1300 51 51 2550 76 76 3800 2 2 100 27 27 1350 52 52 2600 77 77 3850 3 3 150 28 28 1400 53 53 2650 78 78 3900 4 4 200 29 29 1450 54 54 2700 79 79 3950 5 5 250 30 30 1500 55 55 2750 80 80 4000 6 6 300 31 31 1550 56 56 2800 81 81 4050 7 7 350 32 32 1600 57 57 2850 82 82 4100 8 8 400 33 33 1650 58 58 2900 83 83 4150 9 9 450 34 34 1700 59 59 2950 84 84 4200 10 10 500 35 35 1750 60 60 3000 85 85 4250 11 11 550 36 36 1800 61 61 3050 86 86 4300 12 12 600 37 37 1850 62 62 3100 87 87 4350 13 13 650 38 38 1900 63 63 3150 88 88 4400 14 14 700 39 39 1950 64 64 3200 89 89 4450 15 15 750 40 40 2000 65 65 3250 90 90 4500 16 16 800 41 41 2050 66 66 3300 91 91 4550 17 17 850 42 42 2100 67 67 3350 92 92 4600 18 18 900 43 43 2150 68 68 3400 93 93 4650 19 19 950 44 44 2200 69 69 3450 94 94 4700 20 20 1000 45 45 2250 70 70 3500 95 95 4750 21 21 1050 46 46 2300 71 71 3550 96 96 4800 22 22 1100 47 47 2350 72 72 3600 97 97 4850 23 23 1150 48 48 2400 73 73 3650 98 98 4900 24 24 1200 49 49 2450 74 74 3700 99 99 4950 25 25 1250 50 50 2500 75 75 3750 100 100 5000 Apéndice E (L o kg) 55 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales Apéndice F Preparación de la Muestra de Agua para Análisis por Terceras Partes Apéndice F (Desarrollado por G. Althouse, J. Morales y B. Thompson) • Se deben recolectar muestras de agua en una bolsa estéril Whirl-Pak® y sellar inmediatamente después de la recolección. - Use guantes desechables antes de tomar la muestra. - Limpie la superficie externa del grifo con un trapo sin pelusa con un ligero spray con 70% de alcohol; asegúrese que no sea saturado. Limpie físicamente el grifo e inserte ligeramente el trapo en el extremo del grifo. Espere 30 segundos para que se evapore el alcohol - Permita que el agua que sale del proceso de ósmosis inversa corra por 3 minutos para evacuar completamente las líneas. - Abra la Whirl-Pak® y recolecte la muestra a la mitad del flujo de la corriente. - Muestree todos los grifos con la misma técnica. • Muestree el conservador diluido: - El empleado que pesa y adhiere el conservador al agua debe usar una máscara N95 y usar guantes desechables cuando trabaje con conservadores en polvo. - Use una técnica similar con alcohol para limpiar el tubo de la bomba peristáltica. Limpie la superficie externa del tubo de conexión al Auto-diluyente y limpie por dentro dándole tiempo a que se seque el alcohol. - Recolecte aproximadamente 1 litro de conservador diluido en el contenedor. Reduzca la velocidad de la bomba y tome una muestra en una Whirl-Pak® y selle inmediatamente. 56 Nunca Paramos de Mejorar 57 Manual PIC de Manejo de la Posta de Sementales 58