PRACTICA 04 - Universidad de Costa Rica

Práctica 4 :Diversidad celular
I.
OBJETIVOS
Al final del laboratorio el estudiante debe ser capaz de:
* Aplicar los procedimientos para preparar materiales y observarlos en el microscopio.
* Identificar estructuras celulares y sus respectivas funciones.
* Realizar esquemas de las estructuras celulares y rotularlos adecuadamente utilizando el aumento del
microscopio.
II.
Introducción
En la práctica anterior, aprendimos los pasos que se requieren para el uso correcto del microscopio, así como
algunas técnicas utilizadas regularmentepara el análisis de la morfología y estructura celular. En esta práctica
tendremos la oportunidad de aplicar esos conocimientos con el fin de observar y para caracterizar distintos
tipos celulares.
Existen básicamente dos tipos celulares: células procariotas, que se encuentran únicamente en los dominios
bacterias y arqueobacterias; y células eucariotas, presentes tanto en organismos unicelulares como
multicelulares, en los 4 reinos que comforman el dominio Eucaria. (protistas, plantas, hongos y animales)
animales
hongos
plantas
protista
Hasta muy recientemente, las bacterias
y arqueobacterias se agrupaban dentro
del dominio Monera, pero otras
investigaciones han demostrado que,
aunque son muy similares en
apariencia
microscópica,
existen
diferencias marcadas entre estos
grupos, desde el punto de vista
fisiológico y a nivel de la secuencia
del ADN. Por lo tanto, Bacteria y
Arqueobacterias actualmente se ubican
en dominios diferentes.
La mayoría de los procariotas son unicelulares, pero en algunos casos forman agregados o verdaderas
colonias, donde se evidencia algún grado de especialización celular y, por ende, división de labores. La
característica distintiva de la célula procariota es la ausencia de una membrana que delimite el núcleo u otro
compartimiento intracelular en forma de organela. El material genetico, en forma de ADN circular de cadena
sencilla, se encuentra disperso en el citoplasma o unido a la membrana citoplásmica, constituyendo un solo
cromosoma. Con la excepción del género Micoplasma, todas las bacterias poseen una pared celular de
peptidoglicanos que provee protección física y previene la ruptura de la célula en ambientes hipotónicos.
Los procariotas son aproximadamente 1000 veces más pequeños (1-10 m), en volumen que las células
eucariotas por lo que es necesario utilizar técnicas de tinción específicas, así como lentes de inmersión, para
ser observadas al microscopio. Por otra parte, las arquebacterias son muy difíciles de cultivar en el
laboratorio por lo que no serán estudiadas en esta práctica.
El genoma de las células eucariotas se encuentra condensado en un núcleo bien definido y delimitado por una
doble membrana (envoltura nuclear) altamente especializada para el transporte de moléculas desde y hacia el
citoplasma. Las células eucariontes presentan compartimentos internos (separaciones parciales del
citoplasma) rodeados de membrana, que originan diversas estructuras subcelulares denominadas organelos,
Prohibida la reproducción parcial o total de este manual
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA
con funciones propias de cada tipo de organelo. Esta característica permite inferir que la complejidad de
funciones celulares de las células eucariotas es mayor compararada con las células eucariotas. Es importante
mencionar que tanto eucariotas como procariotas poseen ribosomas encargados de la síntesis de proteínas, sin
embargo, presentan una diferencia sustancial en cuanto al tipo de ARN ribosomal que lo forma.
Célula Procariota
Célula Eucariota (animal)
Existe una amplia variedad de formas de organización en las células eucariotas, que va desde organismos
unicelulares (en los reinos protistas y hongos), hasta multicelulares, principalmente en los reinos Animalia y
Plantae. Los protistas es el reino mas diverso ya que incluye ancestros de los otros reinos de eucariotas.
Podemos encontrar en este grupo organismos unicelulares microscópicos, tales como Amoeba o
Paramecium, organismos multicelulares de gran tamaño (algas pardas) que no forman tejidos, asi como
organismos coloniales (Volvox). En este grupo existen representantes con formas de nutrición muy diferentes
(heterótrofos, autótrofos e incluso, una combinación de ambos). Quizás una buena definición del reino
protista es que lo conforma organismos que NO son hongos, animales ni plantas.
Los hongos son organismos multicelulares heterótrofos que en su mayoría forman un cuerpo fructífero
compuesto por filamentos cenocíticos o multicelulares. Cada células está rodeada por una pared celular de
quitina, un polisacárido que nunca se encuentra en las plantas y que le confiere rigidez . En contraste, las
plantas (reino Plantae) son organismos multicelulares, todos autótrofos, cuyas células se caracterizan por la
presencia de una pared celular de celulosa. La mayoría de las plantas tienen órganos y tejidos formados por
diferentes tipos de celulas con funciones especificas.
Finalmente, todas las especies que pertenecen al reino Animalia son multicelulares, todos heterótrofos,
constituidos por una variedad muy amplia de órganos, tejidos y tipos celulares.
III. Procedimiento en el laboratorio.
Durante esta sesión de laboratorio examinaremos las características de varios tipos celulares e
identificaremos algunas de las estructuras celulares que pueden ser visibles al microscopio de luz.
Para ello, cada subgrupo realizará y analizará los 3 ejecicios completos, siguiendo las indicaciones de su
instructor.
Al finalizar los experimentos, se hará una discusión de los resultados obtenidos. Cada subgrupo debe estar
preparado para discutir sus resultados.
Prohibida la reproducción parcial o total de este manual
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA
Ejercicio 1
Organismos unicelulares
EQUIPO Y MATERIALES
SOLUCIONES







Microscopio
Cultivo de protistas y bacterias
Portaobjetos y cubreobjetos
Papel para limpiar lentes
Papel toalla
dH2O
Aceite de inmersión
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Tome una gota de uno de los cultivos y colóquela en el centro del portaobjeto
2. Cubra cuidadosamente la preparación con un cubreobjeto siguiendo los siguientes pasos:
(2) Arratre el cubreobjeto hasta tocar la muestra.y que
la solución fluya por debajo del cubreobjeto.
(1) Sujete el cubreobjeto por los bordes y en un área alejada
de la muestra, forme a un ángulo de 30° con el portaobjeto,
(3) Lentamente baje el cubreobjeto hasta liberarlo sobre la muestra
3. Coloque la preparación en la platina del microscopio y, siguiendo el procedimiento para el uso correcto del
microscopio, observe la muestra a bajo y mediano poder.
4. Identifique los organismos que observa. Trate de reconocer alguna estructura particular de cada organismo
5. Retire la preparación y repita los pasos 1 - 4, utilizando otro cultivo que esté disponible en el labortorio.
6. En su reporte, haga un dibujo de lo observado en el microscopio. Recuerde rotular las estructuras celulares
que identificó, el aumento utilizado en cada dibujo y el tamaño de cada organismo
7. Una vez finalizado el ejercico, limpie cuidadosamente el área de trabajo, revise que los objetivos y oculares
estén limpios.
Ejercicio 2
Organismos multicelulares.- Células de plantas
EQUIPO Y MATERIALES
SOLUCIONES





Microscopio
Cortes de cebolla, chile dulce y papa
Hojas de zebrina
dH2O
Orceína
Prohibida la reproducción parcial o total de este manual
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA





Muestra de Elodea
Portaobjetos y Cubreobjetos
Papel para limpiar lentes
Papel toalla
Navajilla
(A) Células de epidermis de cebolla (Allium cepa)
1.
Escoja una lámina de epidermis de cebolla y colóquela en forma estirada en el centro de un portaobjeto
limpio
2.
Añada una gota de dH2O.
3.
Cubra la preparación con un cubreobjetos, siguiendo el procedimiento anterior.
4.
Observe la preparación al microscopio con un aumento de 10X. Observe los límites de la célula y demás
estructuras. Cambie al objetivo de 40X.
5.
Retire correctamente la preparación del microscopio (recuerde la práctica pasada) y añada una gota de
orceína sin quitar el cubreobjetos (en los bordes de éste), como se muestra en la siguiente figura:
papel
toalla
colorante
añada una gota del tinte cerca del borde del cubreobjeto mientras sostiene en el extremo opuesto, una pieza de
papel toalla.
6.
Limpie el exceso de colorante
7.
Coloque nuevamente la muestra en la platina y obsérvela al microscopio con un lente de 10X. Anote las
diferencias que observa en presencia del colorante. Cambie al objetivo de 40X.
8.
Dibuje e identifique en el reporte todas las estructuras que observa (núcleo, pared celular, etc). No
olvide indicar el aumento utilizado en cada dibujo y el tamaño de cada organismo
9.
Una vez finalizado el ejercico, limpie cuidadosamente el área de trabajo, revise que los objetivos y
oculares estén limpios
(B) Células de hoja de Elodea (planta acuática)
1.
Corte una lámina delgada de una hoja joven de Elodea y colóquela en el centro de un portaobjeto limpio
2.
Añada una gota de dH2O.
3.
Cubra la muestra con un cubreobjeto y retire el exceso de agua con papel toalla
10. Observe al microscopio utilizando objetivos de 10X y 40X. Dibuje e identifique en el reporte las
siguientes estructuras: pared celular, citoplasma, vacuola central, cloroplasto, núcleo. No olvide indicar
el aumento utilizado en cada dibujo y el tamaño de cada organismo
4.
Observe el movimiento citoplasmático llamado ciclosis (el citoplasma es transparente pero se nota el
movimiento de los cloroplastos).
5.
Una vez finalizado el ejercico, limpie cuidadosamente el área de trabajo, revise que los objetivos y
oculares estén limpios
Prohibida la reproducción parcial o total de este manual
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA
(C) Cromoplastos
1.
Corte una lámina delgada de epidermis de chile (Capsicum sp) y colóquela en el centro de un portaobjeto
limpio.
2.
Añada una gota de dH2O.
3.
Cubra la muestra con un cubreobjeto y retire el exceso de agua con papel toalla
4.
Observe al microscopio utilizando objetivos de 10 X y 40 X.
5.
Dibuje e identifique en el reporte las siguientes estructuras: vacuola, granos de almidón, núcleo,
cromoplastos, pared celular. No olvide indicar el aumento utilizado en cada dibujo y el tamaño de cada
organismo
6.
Una vez finalizado el ejercico, limpie cuidadosamente el área de trabajo, revise que los objetivos y
oculares estén limpios.
(D) Amiloplastos
1.
Corte una lámina delgada de de papa (Solanum tuberosum); y colóquela en el centro de un portaobjeto
limpio.
2.
Añada una gota de solución de Lugol.
3.
Cubra la muestra con un cubreobjetoy retire el exceso de colorante con papel toalla
4.
Observe al microscopio utilizando objetivos de 10X y 40X.
5.
Dibuje e identifique en el reporte todas las estructuras que observa. No olvide indicar el aumento
utilizado en cada dibujo y el tamaño de cada organismo.
6.
Una vez finalizado el ejercico, limpie cuidadosamente el área de trabajo, revise que los objetivos y
oculares estén limpios
(E) Estomas
En las plantas, la función de los estomas es la regulación de la pérdida de vapor de agua y el ingreso de
dióxido de carbono. Su estudio se ha centralizado principalmente en el estudio de la transpiración y
fotosíntesis.
1.
Coloque un pedazo del envés de una hoja de zebrina(Tradescantia zebrina) sobre un portaobjeto limpio
2.
Cubra la muestra con un cubreobjeto. Con un papel de toalla, limpie el exceso de colorante
3.
Observe al microscopio utilizando objetivos de 10X y 40X. Identifique las siguientes estructuras: células
oclusivas, ostiolos, cloroplastos, epidermis.
4.
Para observar la apertura de los estomas, añada agua carbonatada a la preparación.
5.
Utilizando un estereocopio y sobre un portaobjetos, realice cortes transversales seriados y los más
delgados posibles de una hoja
6.
Añada una gota de agua
7.
Cubra la muestra con un cubreobjeto y retire el exceso de agua con papel toalla
8.
Observe al microscopio utilizando objetivos de 10X y a 40X. Identifique las siguientes estructuras:
epidermis, paránquimas (esponjoso y empalizado), xilema y floema, estomas
Prohibida la reproducción parcial o total de este manual
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA
9.
Una vez finalizado el ejercico, limpie cuidadosamente el área de trabajo, revise que los objetivos y
oculares estén limpios
Ejercicio 3
Organismos multicelulares: Células de animales
Un grupo de células íntimamente asociadas y que cumplen una función única específica se denomina tejido.
Los tejidos animales generalmente se clasifican en tejido epitelial, conectivo, muscular y nervioso. Cada uno
de estos tipos de tejidos está formado por células con tamaño, forma y organización característica.
EQUIPO Y MATERIALES
SOLUCIONES









Microscopio
Palillos (mondadientes)
Portaobjetos y Cubreobjetos
Papel para limpiar lentes
Papel toalla
Láminas preparadas de tejidos
dH2O
Orceína
Azul de metileno
(A) Células epiteliales
1. Coloque una gota de dH2O en el centro de un portabjeto limpio
2. Con ayuda de una paleta o palillo de dientes, frote suavemente un extremo contra el interior de sus
mejilas.
3. Remueva el palillo o paleta en la gota de dH2O. Coloque un cubreobjetos y con un papel de toalla, limpie
el exceso de solución
4. Añada una gota de orceína o azul de metileno, sin quitar el cubreobjetos, siguiendo el procedimiento
anterior . Con un papel de toalla, limpie el exceso de colorante
5. Observe la preparación a 10x y luego a 40x.
6. En el reporte haga un esquema de sus observaciones e identifique las distintas estructuras que la
componen.
7. Una vez finalizado el ejercico, limpie cuidadosamente el área de trabajo, revise que los objetivos y
oculares estén limpios
(B)Tipos de tejidos: epitelial, muscular y nervioso
Observe detenidamente cada una de las láminas disponibles en el laboratorio y describa las características
de cada tipo de tejido con base en el tipo de célula, tamaño celular, distribución en el cuerpo
¡R E C U E R D E!
Limpie completamente el área de trabajo una vez que finalice los
experimentos.
Revise que los objetivos y oculares estén limpios
Regrese el microscopio a la posición de guardar
Prohibida la reproducción parcial o total de este manual
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA