FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1 Klon EP12

FLEX
Monoclonal Rabbit
Anti-Human
Cyclin D1
Klon EP12
Bruksfärdig
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Kod IS083
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, klon EP12, bruksfärdig (Dako Autostainer/Autostainer Plus), är
avsedd för användning vid immunhistokemi tillsammans med Dako-instrumenten Autostainer/Autostainer Plus.
Antikroppar mot cyklin D1 är användbara vid identifieringen av mantelcellslymfom (1–3). Den kliniska tolkningen
av all färgning eller frånvaro av färgning måste göras genom morfologiska studier, med användning av lämpliga
kontroller, och måste utvärderas av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens anamnes och andra
diagnostiska tester.
Synonymer för antigen
PRAD-1, CCND1, Bcl-1 (1).
Sammanfattning och
förklaring
Cyklin D1 är ett 36 kDa-protein som kodas av CCND1 (bcl-1)-genen, belägen på kromosom 11q13. Cyklin D1
associeras med och aktiverar cyklinberoende kinaser (CDK) CDK4 och CDK6 (1,4,5). Proteinet fungerar som en
CDK-beroende regulator av cellcykeln genom fosforylering och inaktivering av retinoblastomproteinet, vilket
därmed medger progression genom cellcykelns G1-S-fas (1,4,5). Cyklin D1 är också involverat i cellcykel- eller
CDK-oberoende funktioner, inklusive associering med och reglering av ett antal olika transkriptionsfaktorer och
transkriptionella samregulatorer. Cyklin D1 har också visat sig vara involverat i regleringen av cellulär metabolism,
fettcellsdifferentiering och cellmigrering (1,4,5). Överexpression av cyklin D1 är förknippat med tumörgenes, och
förstärkning och/eller överexpression av cyklin D1 har påvisats i ett antal olika humana tumörer, bland annat
mantelcellslymfom, bröstkarcinom, skivepitelcellskarcinom i huvud och hals samt esofageal cancer (1,6). Bland
lymfoida neoplasmer har en underuppsättning av kronisk lymfotisk leukemi, små lymfotiska lymfom och
plasmacellsmyelom rapporterats uttrycka cyklin D1. Följande neoplasmer har rapporterats vara negativa för
cyklin D1: diffust stort B-cellslymfom, extranodalt marginalzonslymfom av MALT, follikulärt lymfom,
marginalzonslymfom, lymfoplasmacytiskt lymfom (1T- och 1B-ursprung), extranodalt NK/T-cellslymfom, perifert
T-cellslymfom, NOS, anaplastiskt storcelligt lymfom och Hodgkins lymfom (7, 8).
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning eller detektionssystemets instruktioner om
IHC-procedurer för: (1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning,
(5) Färgningsprocedur, (6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar.
Medföljande reagens
Bruksfärdig monoklonal kaninantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein
och 0,015 mol/L natriumazid.
Klon: EP12.
Immunogen
Syntetisk peptid motsvarande rester nära C-terminus hos humant cyklin D1.
Specificitet
I Western blotting av MCF7-cellysater färgar antikroppen ett större band på cirka 36 kDa, vilket motsvarar den
förväntade molekylvikten av cyklin D1.
Försiktighetsåtgärder
1.
För yrkesmässigt bruk.
2.
Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I
produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte
metallazider ansamlas i avloppet.
3.
I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
Förvaring
(121315-002)
4.
Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
5.
Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Förvaras vid 2–8 °C. Använd inte efter utgångsdatum et som anges på flaskan. Användaren måste validera alla
förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som tyder på
instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller analyseras samtidigt med
patientproverna. Kontakta Dakos tekniska support om du observerar en oväntad färgning som inte kan förklaras
med variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det är något problem med antikroppen.
P01467SE_002_IS083/2011.04 sid. 1/4
Provberedning
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Antikroppen kan användas för färgning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt. Vävnadsprover skall
snittas i cirka 4 µm tjocka snitt.
Förbehandling med värmeinducerad epitopåtervinning (heat-induced epitope retrieval, HIER) krävs med användning
av PT Link (kod PT100/PT101) från Dako. Se användarhandboken för PT Link för närmare information. Optimala
resultat erhålls genom förbehandling av vävnader med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(kod K8010/K8004) i 20 minuter vid 97 °C följt av 5 minuter i EnVision FLEX Wash Buffer (kod K8007).
Paraffininbäddade snitt: Förbehandling rekommenderas av formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med
användning av 3-i-1-provberedningsproceduren för Dako PT Link. Följ den förbehandlingsprocedur som beskrivs
i bipacksedeln till EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kod K8010/K8004).
OBS! Efter färgningen måste snitten dehydreras, klargöras och monteras med permanent monteringsmedium.
Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren.
För att vävnadssnitten ska fästa bättre på objektglasen rekommenderas användning av Silanized Slides från Dako
(kod S3003).
Färgningsprocedur
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(kod K8010) som ska användas enligt nedanstående protokoll. Reagenser måste spädas på lämpligt sätt innan
de används. Alla steg ska utföras vid rumstemperatur (20–25 °C).
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Inkubera vävnadssnitt med 200 µL EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (kod DM821) i 5 (±1) minuter.
Skölj i EnVision™ FLEX Wash Buffer (kod K8007) i 1–5 minuter.
Inkubera vävnadssnitt med 200 µL Primary Antibody (kod IS083) i 20 (±1) minuter.
Skölj i EnVision™ FLEX Wash Buffer (kod K8007) i 1–5 minuter.
Inkubera vävnadssnitt med 200 µL EnVision™ FLEX/HRP (kod DM822) i 20 (±1) minuter.
Skölj i EnVision™ FLEX Wash Buffer (kod K8007) i 1–5 minuter.
Inkubera vävnadssnitt med 200 µL EnVision™ FLEX Wash Buffer (kod K8007) i 5 (±1) minuter.
Skölj i EnVision™ FLEX Wash Buffer (kod K8007) i 1–5 minuter.
Inkubera vävnadssnitt med 200 µL EnVision™ FLEX Substrate Working Solution (kod DM823 och DM827)
i 5 (±1) minuter.
Inkubera vävnadssnitt med 200 µL EnVision™ FLEX Substrate Working Solution (kod DM823 och DM827)
i 5 (±1) minuter.
Skölj i EnVision™ FLEX Wash Buffer (kod K8007) i 1–5 minuter.
Motfärga objektglas med EnVision™ FLEX Hematoxylin (kod K8018) i 5 (±1) minuter.
Skölj i avjoniserat vatten i 1–5 minuter.
Inkubera vävnadssnitt med 200 µL EnVision™ FLEX Wash Buffer (kod K8007) i 5 (±1) minuter.
Skölj i avjoniserat vatten i 1–5 minuter.
Montera objektglas med permanent monteringsmedel.
Programmeringsnät för rekommenderad analys:
Alla inkubationssteg skall utföras vid rumstemperatur. Se användarhandboken för instrumentet i fråga för detaljer.
Det ytterligare steget ska ställas in på "sköljbuffert" i färgningskörningar med ≤10 objektglas. För färgningskörningar
med mer än 10 objektglas skall det ytterligare steget ställas in på ”ingen”. Detta säkerställer jämförbara tvättider.
(121315-002)
P01467SE_002_IS083/2011.04 sid. 2/4
Optimala förhållanden kan variera beroende på prov- och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt
laboratorium. Om den utvärderande patologen önskar en annan färgningsintensitet kan en
applikationsspecialist/teknisk servicespecialist från Dako kontaktas för information om omprogrammering av
protokollet. Bekräfta att prestandan för det justerade protokollet fortfarande är giltig genom att utvärdera att
färgningsmönstret är identiskt med det färgningsmönster som beskrivs i "Prestandaegenskaper".
Motfärgning i hematoxylin med EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kod K8018)
rekommenderas. Icke-vattenhaltigt, permanent monteringsmedel rekommenderas.
Det rekommenderas att positiva och negativa kontroller körs samtidigt med patientproverna med samma
protokoll. Den positiva kontrollvävnaden bör inkludera tonsill och cellerna/strukturerna bör visa reaktionsmönster
som beskrivs för denna vävnad i "Prestandaegenskaper" i alla positiva prover. Det rekommenderade negativa
kontrollreagenset är FLEX Negative Control, Rabbit, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kod IS600).
Tolkning av färgningen
Det cellulära färgningsmönstret är i huvudsak nukleärt.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: (9)
Vävnadstyp
(antal testade)
Benmärg (3)
Binjure (3)
Bisköldkörtel (3)
Bröst (2)
Bukspottkörtel (3)
Cerebellum (3)
Cerebrum (3)
Cervix (2)
Esofagus (3)
Hjärtmuskel (3)
Hud (3)
Hypofys (3)
Lever (3)
Livmoder (3)
Lunga (3)
Magsäck (3)
Mesotelceller (3)
Mjälte (3)
Nerv, perifer (3)
Njure (3)
Prostata (3)
Skelettmuskel (3)
Sköldkörtel (3)
Spottkörtel (3)
Testikel (3)
Tjocktarm (3)
Tonsill (3)
Tunntarm (3)
Tymus (3)
Äggstock (3)
Positivt färgade vävnadselement
1/3 Myeloida celler (<1 %), nukleära
1/3 Epitelceller (<1 %), nukleära
1/3 Epitelceller (<1 %), nukleära
1/3 Epitelceller (<5 %), nukleära
1/3 Epitelceller (30 %), nukleära
1/2 Duktala epitelceller (<10 %), nukleära
1/2 Duktala epitelceller (<1 %), nukleära
3/3 Epitelceller (25–30 %), nukleära
2/3 Astrocyter (<1 %), nukleära
2/3 Sällsynta positiva celler (<1 %), nukleära
1/2 Basala epitelceller (10 %), nukleära
1/2 Basala epitelceller (40 %), nukleära
3/3 Epitelceller (20–30 %), nukleära, stromala celler (sällsynta), nukleära
1/3 Hjärtmuskelceller (<10 %), nukleära, bindvävs- och stromala celler (<5 %),
nukleära
1/3 Bindväv (<5 %), nukleära
1/3 Skivepitelceller (30–40 %), nukleära
1/3 Skivepitelceller (<5 %), nukleära
1/3 Epitelceller (<10 %), nukleära
2/3 Epitelceller (40 %), nukleära
1/3 Parenkymala epitelceller (20 %), nukleära
2/3 Parenkymala epitelceller (<1 %), nukleära
3/3 Endometriala epitelceller och stromala celler (<5 %), nukleära
1/3 Alveolära epitelceller (30 %)
2/3 Alveolära epitelceller (10–20 %)
2/3 Epitelceller (<5 %), nukleära
0/3
1/3 Lymfocyter och littorala celler (10 %), nukleära
2/3 Lymfocyter och littorala celler (5 %), nukleära
1/3 Mesenkymala epitelceller (<1 %), nukleära
1/3 Schwann-celler (<5 %), nukleära
1/3 Epitelceller (<5 %), nukleära
2/3 Epitelceller (10–20 %), nukleära
1/3 Glandulära epitelceller och stromala celler (10 %), nukleära
1/3 Glandulära epitelceller och stromala celler (<5 %), nukleära
1/3 Glandulära epitelceller (<10 %) och stromala celler (<5 %), nukleära
0/3
2/3 Follikulära epitelceller och stromala celler (<1 %), nukleära
2/3 Glandulära epitelceller (<5 %), nukleära
1/3 Glandulära epitelceller (10 %), nukleära och cytoplasmiska
3/3 Stromala celler (<1 %), nukleära
3/3 Epitelceller (20–30 %), nukleära, stromala celler (sällsynta), nukleära
3/3 Epitelceller (30 %), nukleära, lymfocyter (sällsynta), nukleära
3/3 Kryptepitelceller (40–50 %), nukleära
3/3 Lymfoida celler (<1 %), nukleära
2/3 Stromala äggstocksceller (sällsynta), nukleära
OBS! Positiv färgning av endotelceller observerades hos största delen av de analyserade normala vävnaderna.
(121315-002)
P01467SE_002_IS083/2011.04 sid. 3/4
Referenser
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Donnellan R, Chetty R. Cyclin D1 and human neoplasia. J Clin Pathol: Mol Pathol 1998;51:1-7.
De Boer CJ, Schuuring E, Dreef E, Peters G, Bartek J, Kluin PM, van Krieken HJM. Cyclin D1 protein
analysis in the diagnosis of mantle cell lymphoma. Blood 1995;86:2715-23.
Falini B, Martelli MP, Tiacci E, Ascani S, Thiede C, Pileri SA. Immunohistochemical surrogates for genetic
alterations of CCDN1, PML, ALK, and NPM1 genes in lymphomas and acute myeloid leukemia. Best
Practice & Research Clin Haematol 2010:23:417-31.
Lukas J, Pagano M, Staskova Z, Draetta G, Bartek J. Cyclin D1 protein oscillates and is essential for cell
cycle progression in human tumour cell lines. Oncogene 1994;9:707-18.
Fu M, Wang C, Li Z, Sakamaki T, Pestell RG. Minireview: Cyclin D1: normal and abnormal functions.
Endocrin 2004;145:5439-47.
Reis-Filho JS, Savage K, Lambros MBK, James M, Steele D, Jones RL, et al. Cyclin D1 protein
overexpression and CCND1, PML, ALK, and NPM1 genes in lymphomas and AML. Clin Haematology.
2006:19:999-1009.
Cheuk W, Wong K, Wong C, Chan J. Consistent immunostaining for Cyclin D1 can be achieved on a
routine basis using a newly available rabbit monoclonal antibody. Am J Surg Pathol 2004;28:801-7.
Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, et al. Rabbit monoclonal antibodies: A
comparative study between a novel category of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal
antibodies. Am J Clin Pathol 2005;124:1-8.
M3642 (IHC003-D03559).
Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, klon EP12, har framställts av Epitomics Inc. med användning av Epitomics
patentskyddade monoklonala kaninantikroppsteknik som skyddas av patentnummer 5 675 063 och 7 402 409.
Utgåva 05/11
(121315-002)
P01467SE_002_IS083/2011.04 sid. 4/4