Ląstelių terapija: CTL infekcijoms gydyti

Citotoksiniai T limfocitai (CTL) infekcijoms gydy7 Adomas Bukauskas Vilma Valčeckienė HOTC 2011-­‐01-­‐24 Paskaitos planas • 
• 
• 
• 
• 
• 
• 
• 
Problemos aktualumas Trumpa virusų charakteris7ka Imuninio atsako mechanizmas T limfocitai Imunoterapija Monitoravimas Straipsnių apžvalga Diskusija Mir7es priežastys po aloKKLT Infekcinės mir7es priežastys po aloKKLT Infekcijos po KKLT Iššūkiai • 
• 
• 
• 
Ligonių imunosupresija TPŠL profilak7ka – pvz. CsA, MMF, MTX Bakterinės infekcijos kontroliuojamos a/b. Persistuojantys virusai: CMV, AdV, EBV, herpes, poliomos virusai Citomegalovirusas •  Herpesviridae šeima •  Betaherpesviridae pošeimis •  DNR linijinė, dvigubos vijos, 230 baltymų •  Didžiausias žmogaus virusas •  DNR polimerazė – an7virusinių taikinys •  50-­‐80% populiacijos užsikrėtė •  30-­‐40% CD4+ ir CD8+ reaktyvūs prieš CMV •  Intensyviausiai ekspresuojami an7genai pp150 (UL32) ir pp65 (UL83) EBV •  90% populiacijos užsikrėtę •  An7virusinis gydymas problema7škas, nes an7virusiniai vaistai aktyvūs 7k dauginimosi stadijoje, o dauguma virusų laten7nėje stadijoje. •  Orofaringinis kelias •  Veikimas: •  Downregula7on daugelio imunogeniškų baltymų, sumažinta MHC ekspresija •  EBNA1,2,3a,3b,3c LMP1,2a,2b EBER ir BARF0 •  CTL specifiniai li7nei stadijai nu=udo ląsteles dalijimosi stadijoje ir užkerta kelią viruso patekimui i organizmą, laten7nėje stadijoje užkerta kelią dauginimuisi. EBV Herpesviridae šeima Gammaherpesviruses pošeimis DNR linijinė, dvigubos vijos 90% populiacijos užsikrėtę An7virusinis gydymas komplikuotas, nes veiksmingas dauginimosi metu •  Intensyviausiai ekspresuojami an7genai: • 
• 
• 
• 
• 
–  EBNA1,2,3A,3B,3C; –  LMP1,2A,2B; –  EBER ir BARF0 Adenovirusas •  Adenoviridae šeima •  47 sero7pai •  Neturi išorinio apvalkalo •  DNR – dvigubos vijos •  A-­‐F pogrupiai Gydymo galimybės • An7virusiniai vaistai • Ląstelių terapija An7virusiniai vaistai •  CMV: –  Pirmos eilės gydymas – Gancikloviras (neutropenija) –  Antros eilės gydymas – Foscarnet (nefrotoksiškumas) –  Cidofovir (nefrotoksiškas) •  AdV: Cidofovir (nefrotoksiškas) •  EBV: Rituximab (an7-­‐CD20 an7kūnai) Ląstelių terapija Straipsnių apžvalga •  Dozė -­‐ 1,2 x 103/kg – 3,3 x 104/kg (M = 8,6 x 103/kg) •  Suleistos per 4 val. •  Grynumas 95.6% •  Toksiškumas nestebėtas •  Transplantuotų CTL pikas 12-­‐30 dienomis •  CD8+ nustatomos po 10 dienų po infuzijos •  CMV viremija sumažėjo visais atvejais CMV Allogeneic Virus-­‐Specific T cells with HLA Alloreac>vity do not Produce GVHD in Human Subjects • 
• 
• 
73 CTLs recipientai from an HLA mismatched donor we have not observed GVHD associated with the cell infusion GVHD in Mismatched Pa2entsOf the 73 recipients of HLA mismatched virus-­‐specific CTLs, 34 received EBV-­‐specific CTLs from an unrelated donor mismatched at one or more HLA an2gens, while 13 received EBV-­‐ specific CTLs produced from an HLA haploiden2cal family member. Five received bivirus-­‐ specific CTLs from unrelated donors mismatched at 1 or 2/10 HLA an2gens and 6 from haploiden2cal donors. Six subjects received trivirus CTLs from an unrelated donor mismatched at 1-­‐3/10 an2gens and 9 from a haploiden2cal family member. The overall incidence of acute GVHD was 6.5%, with all episodes represen2ng reac2va2ons and no significant difference in the incidence between recipients of matched or mismatched CTLs (Table 1). Since GVHD only occurred in pa2ents with previous episodes of the disease, the absence of de-­‐novo GVHD a[er CTL infusions and the lack of correla2on with the degree of mismatching of the CTLs indicated that mismatched CTLs did not induce GVHD. Since GVHD only occurred in pa7ents with previous episodes of the disease, the absence of de-­‐novo GVHD aqer CTL infusions and the lack of correla7on with the degree of mismatching of the CTLs indicated that mismatched CTLs did not induce GVHD. Effec7ve and long-­‐term control of EBV PTLD aqer transfer of pep7de-­‐selected T cells • 
• 
• 
• 
6 ligoniai su PTLD IFN-­‐gama selekcija Dozė – 2-­‐7 x 104/kg Pilnas atsakas 2 iš 6 ligonių Long term outcome of EBV-­‐specific-­‐T cell infusions to prevent or treat EBV-­‐related lymphoprolifera7ve disease in transplant recipients •  Profilak7kai T-­‐cell depleted, HLA-­‐disparate, unrelated HSCT. •  Dozė 0,5 x 106 ląstelių/kg •  Polikloninės CTL •  Sekimo mediana – 10 metų (3-­‐15) •  CTL dauginasi in vivo •  114 pacientų profilak7kai CTL. Efektyvumas 100% •  11 iš 13 su PTLD ilgalaikį pilną atsaką. Efektyvumas 80% •  Gene7škai pažymėtos CTL 9 metus rastos •  Daugeliui imunosupresija nutraukta, likusiems sumažinta •  Toksiškumas minimalus •  Kaina 6059 doleriai •  None of the pa7ents developed de novo GVHD aqer CTL infusions. Of 108 evaluable pa7ents, 11 developed limited chronic GVHD and 2 extensive chronic GVHD. Ninety-­‐five did not develop this complica7on. Figure 6 Overall survival of the 114 patients receiving CTLs
Heslop, H. E. et al. Blood 2010;115:925-935
Copyright ©2010 American Society of Hematology. Copyright restrictions may apply.
• 
• 
• 
• 
• 
Refrakterūs an7virusiniam gydymui 18 ligonių Polikloniniai CTL Dozė 21x103/kg In 83% of cases CMV infec7on was cleared or viral burden was significantly reduced, even in cases of CMV encephali7s (n=2). Surface staining was performed using satura7ng condi7ons of the following an7bodies: an7-­‐CD4 or an7-­‐CD8 (clones SK3 or SK1), an7-­‐IFNγ (clone 25723.11), an7-­‐CD3 (clone SK7), all from Becton Dickinson/Heidelberg/Germany. Safe adop>ve transfer of virus-­‐specific T-­‐cell immunity for the treatment of systemic adenovirus infec>on aHer allogeneic stem cell transplanta>on •  9 chemorezisten7ški an7virusiniams vaistams •  Isola7on was based on γ-­‐interferon (IFN-­‐γ) secre7on aqer short in vitro s7mula7on with viral an7gen, resul7ng in a combina7on of CD4+ and CD8+ T cells •  Dozė – 1.2–50 × 103/kg T limfocitų •  5 iš 6 viremija išnyko ar ženkliai sumažėjo •  TPŠL 1 ligoniui II of the skin •  In conclusion, specific T-­‐cell immunotherapy was performed as a new treatment approach in nine children with systemic HAdV-­‐
infec7on aqer allogeneic SCT, who would otherwise have a poor prognosis. Immunotherapy was shown to be feasible with no acute toxici7es or increased risk of GvHD induc7on and resulted in successful transfer of specific immunity to the host. In vivo expansion of specific T cells was independent of the T-­‐cell dose and may have protected from HAdV-­‐related complica7ons. Proof of principle for this approach was demonstrated in five out of six evaluable pa7ents. The method could be easily applied to other infec7ous an7gens and to an7-­‐tumour immunotherapy protocols. Mul7 centre phase II clinical trials are now required to further inves7gate the therapeu7c poten7al of this approach. Perspektyvos •  Techninis progresas sutrumpins CTL produkcijos laiką •  Gilesnės žinios apie in vivo selekciją, išgyvenamumą, aktyvumą •  Ląstelių bankai •  Įsivyraus HLA-­‐mul7merai ir gama catch metodai Ačiū už dėmesį DISKUSIJA: –  Profilak7kai/ankstyvam gydymui –  Su kokiom infekcijomis sunkiausiai susitvarkome? –  Kaina/nauda vs an7virusiniai vaistai –  Donorų bankai –  Techninės galimybės –  HLA mul7merai vs IFN-­‐gama sekrecija