Elektrochemilumineszenz-Immunoassay (ECLIA) für die quantitative

Elecsys® Tacrolimus
Elektrochemilumineszenz-Immunoassay (ECLIA)
für die quantitative In-vitro-Bestimmung
von Tacrolimus in humanem Vollblut
Indikation
Der Elecsys® Tacrolimus Assay wird als Hilfsmittel für die Überwachung der Tacrolimus-Therapie bei Patienten mit Herz-, Leberund Nierentransplantaten eingesetzt. Transplantationspatienten werden mit Immunsuppressiva (engl. immunosuppressant drugs,
ISD) wie Tacrolimus behandelt, damit das transplantierte Organ nicht vom Immunsystem abgestossen wird. Mit Assays zur
Überwachung der immunsuppressiven Therapie wird die Wirkstoffkonzentration im Blut des Patienten als Richtschnur für eine
wirksame und gut verträgliche Dosierung bestimmt, da die gewünschte therapeutische Wirkung nur in einem eng umgrenzten
therapeutischen Bereich erzielt werden kann: Die Dosis muss einerseits so hoch sein, dass eine Abstossung des Organs verhindert wird, und andererseits so niedrig, dass eine Medikamententoxizität und opportunistische Infektionen vermieden werden.
Manuelle Probenvorbehandlung
Als Probenmaterial für den Elecsys® Tacrolimus Assay werden humane Vollblutproben verwendet. Da Tacrolimus in hohem
Masse an Erythrozyten und Proteine gebunden ist, ist eine manuelle Probenvorbehandlung in einem Schritt notwendig, um den
Analyten von den Proteinen zu lösen. Das Vorbehandlungsreagenz wird universell für alle Elecsys® Assays zur Überwachung der
immunsuppressiven Therapie verwendet.
1
300 µl gut gemischtes Vollblut
(oder Kalibrier- oder Kontrolllösung)
2
300 µl des ISDProbenvorbehandlungsreagenzes
2,0-ml-Mikrozentrifugenröhrchen
Vortexen
Klaren Überstand in ein neues
dann 4 Min. bei
Probenröhrchen transferieren
10.000 g/RT zentrifugieren
Testprinzip: Kompetitiver Immunoassay
Tacrolimus in der
vorbehandelten Probe
Ru
+
Ru
Ru
Streptavidinbeschichtete
Mikropartikel
Ru
9 Min.
Ru-KomplexTacrolimus-spezifischer
markiertes
biotinylierter Antikörper
Tacrolimus-Derivat
+
Ru
Ru
9 Min.
Ru
Bestimmung
Erstinkubation (9 Minuten)
35 µl der vorbehandelten Probe werden mit einem Tacrolimus-spezifischen, biotinylierten Antikörper und einem Ruthenium­
komplex-markierten Tacrolimus-Derivat inkubiert. Je nach Analytkonzentration in der Probe und Bildung des entsprechenden
Immun­komplexes wird die markierte Antikörper-Bindungsstelle teils mit Probenanalyt und teils mit ruthenyliertem Hapten besetzt.
Zweitinkubation (9 Minuten)
Nach Hinzufügen der Streptavidin-beschichteten Mikropartikel wird der Komplex durch Interaktion von Biotin und Streptavidin an
die Festphase gebunden.
Messung
Das Reaktionsgemisch wird in die Messzelle gesaugt, in der die Mikropartikel magnetisch auf der Elektrodenoberfläche gefangen
werden. Dann werden nicht gebundene Substanzen entfernt. Durch Anlegen einer elektrischen Spannung an die Elektrode wird ein
Chemilumineszenzsignal erzeugt, das mit einem Photomultiplier gemessen werden kann.
Elecsys Technologie
Die Elektrochemilumineszenz (ECL) ist eine Technologie von Roche für den Nachweis mittels Immunoassays. Elecsys liefert auf der
Grundlage dieser Technologie und in Kombination mit gut konzipierten, spezifischen und empfindlichen Immunoassays zuverlässige Resultate. Die Entwicklung der ECL-Immunoassays basiert auf der Verwendung eines Rutheniumkomplexes und Tripropylamin
(TPA). Die Chemilumineszenzreaktion zum Nachweis des Reaktionskomplexes wird durch Anlegen einer elektrischen Spannung an
die Probenlösung in Gang gesetzt und dadurch eine präzise kontrollierte Reaktion erzeugt. Die ECL-Technologie kann viele Immuno­
assay-Prinzipien vereinen und bietet dabei eine überragende Leistung.
Merkmale des Elecsys® Tacrolimus Assays
Testdauer
Testprinzip
Rückführbarkeit
Probenmaterial
Probenvolumen
LoB, LoD, LoQ*
Messbereich
Laborpräzision (repräsentative Daten)
Bestellinformationen
Elecsys® Tacrolimus
Elecsys® Tacrolimus Kalibratorset
18 Min.
Kompetitiver Assay
Standardisiert gegen Referenzstandards, die nach Gewicht
auf Tacrolimus-Referenzmaterial (USP = US-amerikanische
Pharmakopöe) rückführbar sind
EDTA-Vollblut
300 μl
0,3 ng/ml, 0,5 ng/ml, 1,0 ng/ml
0,5–40 ng/ml
cobas e 411 Analysegerät: 2,1–14,2 %
cobas e 601/e 602 Module: 2,4–10,4 %
Niedrigste gemessene Konzentration: 1,2 ng/ml
100 Tests pro Rackpackung
3x1 ml jeweils pro Tacrolimus-Kalibratorset
Stufe 1 und 2
05889057 190
05889065 190
PreciControl ISDs
1x3 ml jeweils pro PreciControl ISD
1, 2 und 3
05889081 190
Probenvorbehandlung für Immunsuppressiva
1x30 ml (= 100 Anwendungen)
05889073 190
*LoB = Erfassungsgrenze; LoD = Nachweisgrenze; LoQ = Bestimmungsgrenze (Gesamtfehler 20 %)
COBAS, COBAS E, LIFE NEEDS ANSWERS und ELECSYS sind Marken von Roche.
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