Diapositiva 1 - PrenatalSAFE

Esame Prenatale Non Invasivo (NIPT)
mediante analisi del DNA fetale libero
da sangue materno
Cos’è
E’ un test prenatale non invasivo (NIPT) che, analizzando il DNA fetale libero
circolante isolato da un campione di sangue materno, rileva aneuploidie fetali
comuni in gravidanza, quali:
Trisomia 21 (Sindrome di Down)
Trisomia 18 (Sindrome di Edwards)
Trisomia 13 (Sindrome di Patau)
Monosomia X (Sindrome di Turner)
XXX (Trisomia X)
XXY (Sindrome di Klinefelter)
XYY (Sindrome di Jacobs)
Il test prevede anche un livello di approfondimento che consente di valutare
aneuploidie e alterazioni cromosomiche strutturali (delezioni e
duplicazioni) fetali a carico di ogni cromosoma, con risultati molto simili
all’analisi del cariotipo fetale mediante tecniche invasive di diagnosi prenatale.
analizza il DNA fetale libero
circolante nel sangue materno
Campione di sangue materno
DNA libero
di origine
materna
DNA libero
di origine
fetale
Il DNA fetale libero (cfDNA) circolante nel sangue materno
Durante la gravidanza, alcuni frammenti
del Dna del feto circolano nel sangue
materno.
Il DNA fetale è rilevabile a partire dalla 5˚
settimana di gestazione. La sua
concentrazione aumenta nelle settimane
successive e scompare subito dopo il
parto.
La quantità di DNA fetale circolante dalla
10˚ settimana di gestazione è sufficiente
per garantire l’elevata specificità e
sensibilità del test.
Origine del DNA fetale libero (cfDNA)
Il DNA fetale libero consiste in
corti frammenti di DNA
(~145/200 bp) presenti nel
plasma in percentuali variabili
a seconda del periodo
gestazionale
Viene rilasciato, attraverso il
processo dell’apoptosi (morte
cellular programmata)
Origina dai trofoblasti
placentari.
Caratteristiche del test
PrenatalSafe®: Tecnologia FAST ad Alta Risoluzione
Risultato in 3 giorni
Grazie alla recente introduzione della innovativa tecnologia FAST ad
elevata profondità di lettura (~30 milioni di sequenze), è possibile
ottenere i risultati dell'esame dopo soli 3 giorni lavorativi, mantenendo i
medesimi parametri di sensibilità e specificità del test.
La procedura FAST è attualmente applicabile solo ai test:
PrenatalSafe® 3 (aneuploidie dei cromosomi 21, 18, 13 e sesso fetale)
PrenatalSafe® 5 (aneuploidie dei cromosomi 21, 18, 13, X, Y);
PrenatalSafe® Karyo (analisi del cariotipo fetale).
Test eseguito da GENOMA
Maggiore accuratezza rispetto al Bi-test
I test di screening del primo trimestre (Bi-Test) presentano un’incidenza del 5% di falsi
positivi, comportando un aumento significativo di esami invasivi non necessari, e non
rilevano il 5-15% dei casi di trisomia 21 (falsi negativi)
Indicazioni all’esecuzione del test
Gravidanze in cui è controindicata la
diagnosi prenatale invasiva (es. rischio
di aborto spontaneo)
Screening del primo trimestre (Bi-Test)
positivo
Età materna avanzata (>35 anni)
Quadro ecografico di anomalie fetali
suggestive di aneuploidia
Anamnesi personale/familiare di
anomalie cromosomiche
Partner(s) della coppia portatore(i) di
traslocazione cromosomica bilanciata.
Gravidanze a basso rischio (casistica
limitata)
A chi è dedicato il test
A tutte le donne in gravidanza con un età gestazionale di almeno 10 settimane
gravidanze singole ottenute mediante:
concepimento naturale
tecniche di fecondazione assistita omologhe
tecniche di fecondazione assistita eterologhe
gravidanze gemellari ottenute mediante:
concepimento naturale
tecniche di fecondazione assistita omologhe
tecniche di fecondazione assistita eterologhe
precedenti gravidanze andate a termine
precedenti gravidanze esitate in aborto
spontaneo o seguite da interruzione volontaria
di gravidanza
prevede 5 livelli di indagine
PrenatalSafe®
3 rileva le principali trisomie fetali
Il test PrenatalSafe® rileva le trisomie 21, 18 e 13 sia nelle gravidanze singole che in quelle gemellari
Cromosomi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Trisomia 13
o
19
Trisomia 21
20
21
22
XX-sesso
femminile
Trisomia 18
XY-sesso
maschile
prevede 5 livelli di indagine
PrenatalSafe®
5 rileva anche le aneuploidie dei cromosomi sessuali
Il test PrenatalSafe® 5 rileva sia le trisomie 21, 18 e 13, che le aneuploidie dei cromosomi
sessuali (solo nelle gravidanze singole). Nelle gravidanze gemellari, viene rilevata la presenza o
l’assenza del cromosoma Y.
Cromosomi
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Trisomia 13
o
19
20
21
Trisomia 21
XXX
22
XX-sesso
femminile
Monosomia X
Trisomia 18
XY-sesso
maschile
XXY
XYY
prevede 5 livelli di indagine
prevede 5 livelli di indagine
Il nuovo test prenatale non invasivo
per lo studio del cariotipo fetale
E’ il test prenatale non invasivo (NIPT)
tecnologicamente più avanzato e rappresenta una
evoluzione dei tradizionali test di screening non
invasivi che analizzano il cfDNA da sangue materno
Prenatalsafe Karyo rileva:
Aneuploidie fetali (sia quelle comuni in gravidanza
che quelle meno frequenti);
Alterazioni cromosomiche strutturali fetali
(delezioni e duplicazioni segmentali)
a carico di ogni cromosoma del cariotipo fetale
E’ un test prenatale non invasivo (NIPT) che consente
di studiare il cariotipo fetale
Il test prenatale non invasivo che
studia il cariotipo fetale
Nessun altro NIPT oggi disponibile offre un livello d’indagine così avanzato.
Gli altri test prenatali non invasivi analizzano solamente alcuni cromosomi fetali,
quali i cromosomi 21, 18, 13, X e Y.
prevede 2 livelli di indagine
Detection rate
Il test evidenzia il 92.6%
delle anomalie
cromosomiche fetali
rilevabili in epoca
prenatale, ed il 96.2% di
quelle riscontrate alla
nascita
Livello di detection rate molto simile
al cariotipo fetale tradizionale
Cariotipo fetale tradizionale vs
prevede 2 livelli di indagine
Plus Detection rate
Il test evidenzia il 95.5%
delle anomalie
cromosomiche fetali
rilevabili in epoca
prenatale, ed il 99.1% di
quelle riscontrate alla
nascita
Livello di detection rate molto simile
Plus al cariotipo fetale tradizionale
Cariotipo fetale tradizionale vs
Plus
E’ consigliabile ricorrere all’utilizzo del PrenatalSafe® Karyo Plus solo in determinati contesti clinici
(esempio dubbi ecografici suggestivi di sindrome da microdelezione cromosomica)
Esempi di casi clinici
Esempio di un recente caso clinico (Caso 1)
Paziente di 31 anni
12^ settimana di gestazione
5
Risultato Negativo
20^ settimana di gestazione
Anomalie fetali ecografiche
(ipoplasia del cervelletto; ventricolomegalia)
Amniocentesi
Rianalisi con
Chr. 5
Identifica una delezione 5p
confermata con array-CGH
Chr. 5
Del5p15.33-13.2
34 Mb
Liquido
Amniotico
cfDNA
Array-CGH
PrenatalSafe® Karyo
Esempio di un recente caso clinico (Caso 2)
Paziente di 32 anni
13^ settimana di gestazione
5
Risultato Negativo
21^ settimana di gestazione
Anomalie fetali ecografiche
(difetto interventricolare, piede torto, intestino iperecogeno,
dismorfismo facciale, arteria ombelicale unica)
Amniocentesi
Chr. 18
Identifica due delezioni (18p e
18q) confermate con array-CGH
Chr. 18
Del18p11.32-p11.31
3,8 Mb
Liquido
Amniotico
cfDNA
Del18q21.32-q23
21,3 Mb
Array-CGH
PrenatalSafe® Karyo
Esempio di un recente caso clinico (Caso 3)
Paziente di 32 anni
Chr. 7
Portatrice di traslocazione reciproca 46,XX,t(7;9)(p15;q22)
Gravidanza ottenuta con PMA
11^ settimana di gestazione
Risultato Patologico
rilevato cariotipo fetale con traslocazione sbilanciata
Anomalie fetali ecografiche
(labiopalatoschisi; idrocefalia tetraventricolare, ipoplasia cuore
12^ settimana di gestazione
Villocentesi
Risultato confermato
Chr. 9
Identifica una traslocazione
sbilanciata confermata con array-CGH
Dup7p22.3p21.2
Array-CGH
Villi Coriali
15 Mb
PrenatalSafe® Karyo
cfDNA
Dup9p24.3-q31.1 107.5 Mb
Array-CGH
Villi Coriali
PrenatalSafe® Karyo
cfDNA
Esempio di un recente caso clinico (Caso 4)
Paziente di 35 anni
13^ settimana di gestazione
Amniocentesi
(cariotipo tradizionale)
Risultato Negativo
(Cariotipo fetale 46, XY)
20^ settimana di gestazione
Anomalie fetali ecografiche
(Sospetta Sindrome di DiGeorge)
Sindrome di DiGeorge
Amniocentesi
Identifica una gravidanza con
Plus sindrome di DiGeorge
Chr.22
Del22q11.21
Sindrome di DiGeorge
4 Mb
Liquido
Amniotico
cfDNA
Array-CGH
PrenatalSafe® Karyo
Esempio di un recente caso clinico (Caso 5)
Paziente di 40 anni
13^ settimana di gestazione
NIPT
(screening 5 cromosomi)
Esame eseguito da altro laboratorio
Risultato Positivo
Alto Rischio per Trisomia 21
Trisomia 21 non rilevata
Rilevata CNV materna
Identificata causa del risultato
Falso Positivo riportato dal
test eseguito da altro
laboratorio
Riduce il rischio di falsi positivi
determinati da CNV materni
Array-CGH
Prelievo ematico gestante
PrenatalSafe® Karyo
cfDNA
La tecnologia
La Tecnologia del test
l’evoluzione tecnologica
PrenatalSAFE® utilizza la tecnologia avanzata di sequenziamento massivo parallelo (MPS)
dell’intero genoma umano, a differenza di altri test disponibili in commercio che invece
impiegano una strategia diagnostica mirata, in cui il processo è limitato ai soli cromosomi 21, 18,
13, X e Y.
Metodi di sequenziamento mirato (5 cromosomi)
Analisi dell’intero genoma mediante Sequenziamento Massivo Parallello (MPS)
Tecnologia di sequenziamento
totale del genoma fetale
VeriSeq™ NIPT Analysis Software
21
Le sequenze cromosomiche del DNA fetale vengono
quantificate mediante sofisticate analisi
bioinformatiche, al fine di determinare la presenza di
eventuali aneuploidie cromosomiche.
Per l’analisi bioinformatica viene utilizzato il software
VeriSeq™, fornito in licenza esclusiva da Illumina /
Verinata;
Il software VeriSeq™ è marcato CE-IVD, e quindi
utilizzabile per applicazioni cliniche diagnostiche in
vitro, in conformità alla normativa Europea (Direttiva
97/79/CE) ed al D.lgs. 332/2000;
Il software VeriSeq™ è stato validato su centinaia di
migliaia di campioni clinici;
Maggiore garanzia dei risultati.
4
+
7
+
(Example)
15
…
VeriSeq™ NIPT Analysis Software
Tecnologia di nuova generazione
Migliore qualità dei risultati
Totale Automazione e High Throughput
Procedura di laboratorio
completamente automatizzata,
dall’estrazione del DNA all’analisi
dei dati
Capacità di analisi di elevati volumi
di campioni
Tecnologia di nuova generazione
Migliore qualità dei risultati
Maggiore risoluzione
L’introduzione del Sequenziamento bidirezionale (Paired-end) del genoma
fetale raddoppia il numero di letture, migliorando l’affidabilità del test.
Tecnologia di nuova generazione
Migliore qualità dei risultati
Tecnologia di nuova generazione
Migliore qualità dei risultati
Determinazione della frazione fetale più accurata
Differenziazione del DNA di origine fetale da quello materno
in base alla differente lunghezza
rileva le aneuploidie anche a
bassa FF (<4%)
Fiorentino et al., Prenatal Diagnosis (2016) 36:304-311
rileva le aneuploidie anche a
bassa FF (<4%)
Le linee guida Italiane e Internazionali* concordano nel dedicare particolare
attenzione ai campioni a bassa frazione fetale in quanto ritenuti a
maggiore rischio (da 4 a 10 volte) di aneuploidie cromosomiche
*-Ministero della Salute. Linee-Guida Screening prenatale non invasivo basato sul DNA (Non Invasive Prenatal Testing – NIPT). Maggio 2015
-Committee Opinion No. 640: Cell-free DNA Screening for Fetal Aneuploidy. Obstet Gynecol 2015; 126:e31-7.
-Society for Maternal-Fetal Medicine (SMFM) Publications Committee #36: Prenatal aneuploidy screening using cell-free DNA. Am J Obstet Gynecol
2015;212:711-6.
-Benn P, Borrell A, Chiu RW, et al. Position statement from the Chromosome Abnormality Screening Committee on behalf of the Board of the
International Society for Prenatal Diagnosis. Prenat Diagn 2015; 35:725-34.
Fiorentino et al., Prenatal Diagnosis (2016) 36:304-311
Fiorentino et al., Prenatal Diagnosis (2016) 36:304-311
Performance procedura Standard
Performance procedura FAST
Validazione pre-clinica del test
Fiorentino et al., EJHG conference 2016
Procedura e Servizi gratuiti
Procedura semplice ed intuitiva
Servizi gratuiti forniti con il test
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