Anormalidades em espermatozoides de carpa comum, Cyprinus

Transcription

Ciência Animal - Suplemento, 2012
Anormalidades em espermatozoides de carpa comum, Cyprinus carpio, frescos ou
criopreservados em diluidor a base de água de coco em pó (ACP-104®)
Abnormalities in Cyprinus carpio sperm, fresh or cryopreserved in extender based on
coconut water powder (ACP-104®)
Francisco Renan Aragão Linhares1,*; José Ferreira Nunes1; Maria Audália Marques de
Carvalho1; Júlia Trugillio Lopes1; Rômulo Roberto Ribeiro Pinheiro1; Carminda Sandra
Brito Salmito-Vanderley1
1
Universidade Estadual do Ceará.
*E-mail: [email protected]
ABSTRACT
The aim of this study was to observe the occurrence of abnormalities in fresh sperm (n=
07, three years old) and cryopreserved semen (ACP-104™ or CCSE2 extenders plus
DMSO 10%) of Cyprinus carpio. So, three sperm pools were diluted in respective
freezing media on a ratio of 1:1 (sperm:media) followed by packaging into the 0.25 ml
straws and quickly frozen into a dry shipper vessel (-170°C). After 10 minutes, they
were stored at -196°C. The fresh and frozen/thawed sperm abnormalities (head, tail
sperm defects) were evaluated on Bromophenol blue dye. The percentage of abnormal
spermatozoa increased from 4.72% (fresh sperm) to 18,82% in both extenders, the same
way as tail abnormalities increased from 3.06% to 17,54±4,53%. So in conclusion, the
cryopreservation has reduced the number of sperm viability. However, this
cryopreservation protocol using ACP104™ is favorable to carp sperm conservation.
Key words: Fish, sperm, sperm morphology, sperm cryopreservation.
Palavras-chave: Peixe; sêmen, morfologia espermática, congelação seminal.
INTRODUÇÃO
A carpa comum, Cyprinus carpio, apresenta grande valor comercial e ampla
distribuição geográfica. Entretanto, no estado do Ceará pouco ou nenhum estudo foi
realizado sobre a reprodução desta espécie, notadamente sobre as condições de saúde
gonadal e espermática. Estudos sobre morfoanomalias espermáticas são importantes
durante a criopreservação uma vez que os danos causados pelo frio reduzem a
Trabalho apresentado no VI Congresso Norte Nordeste de Reprodução Animal
671
sobrevivência dos espermatozoides, influenciando diretamente no sucesso da
fertilização.
Diversos estudos existem sobre a criopreservação do sêmen de carpa comum (Li
et al., 2010) porém, nenhuma estudo existe sobre anormalidades espermáticas após
congelação em diluidor a base de água de coco em pó (ACP). Deste modo, este
trabalho observou a ocorrência de anormalidades tanto nos espermatozoides de carpa
frescos bem como após congelação utilizando o ACP104 como meio diluidor.
MATERIAL E MÉTODOS
Os sêmens de sete animais com três anos de idade coletado após 14 horas da
indução hormonal (1 mg/kg de peso vivo, extrato hipofisário de carpa) formaram três
pools que foram diluídos na proporção de 1:1 (sêmen:diluidor) nos diluidores: ACP104® e CCSE2 conforme Irawan et al., (2010) adicionados de 10% de DMSO, com pH
ajustados para 7,7 e 320mOsmol.kg-1. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL e
imediatamente congelado em Dry shipper. Após dez minutos a -170ºC as palhetas
foram transferidas para um botijão de estocagem a -196°C. Para detecção das
anormalidades o sêmen fresco foi diluído em solução citrato-formol a 4% na proporção
de 1:2000 e o sêmen congelado/descongelado em banho Maria a 25°C/30s foi diluído
na proporção de 1:250.
De cada amostra três lâminas foram coradas pela deposição de 100 µL de sêmen
fixado e 2 µL de azul de bromofenol. A leitura de 100 espermatozoides/lâmina ocorreu
em microscópio óptico NIKON Eclipse E200, ocular 10x e objetiva de 40x. Os dados
foram expressos como media±desvio padrão e analisados por meio de análise de
variância seguido pelo teste de Tukey (p<0,05) para identificar diferenças significativas
utilizando o programa estatístico ASSISTAT® versão 7.6 beta (2012).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
O percentual de espermatozoides normais observados no sêmen fresco deste
estudo (Tabela 1) foram comparáveis aos 90-92% espermatozoides normais observados
por Massar et al. (2011). Com relação ao sêmen criopreservado o congelamento em
ACP104 inferiu um acréscimo de 17,12% de anormalidades quando comparado ao
sêmen fresco, enquanto no meio CCS2 este aumento foi de apenas 11,09%.
672
Assim como nos experimentos de Gwo & Arnold (1992) e Massar et al. (2011)
no presente trabalho observou-se um aumento no percentual de cauda enrolada em
ambos os tratamentos após congelação/descongelação comparado ao sêmen fresco,
sugerindo os efeitos do processo de criopreservação. Para espécies como a carpa este
aumento no percentual de anormalidades no sêmen criopreservado poderá ter pouca
influência sobre o sucesso da fertilização, porém testes de fertilização deverão ser
realizados para estabelecimento de um mínimo aceitável para o sêmen criopreservado.
Tabela 1. Anormalidades em espermatozoides de Cyprinus carpio, frescos ou criopreservados
em ACP104 e CCS2 e ativados com NaCl 50mM.
Criopreservados
Defeitos
Fresco
ACP+DMSO
a
78,16±12,94
CCSE2+DMSO
b
83,66±3,40ab
Normais
95,28±2,31
Macrocefalia
0,14±0,25a
0,16%±0,28b
2,16±1,52b
Cabeça estourada
1,42±1,40a
0,0±0,0b
0,16±0,28b
Cauda enrolada
0,85±0,70a
16,30±10,05b
11,83±3,78b
Cauda dobrada
2,21±1,85a
5,3%±3,21b
1,66±1,15b
Total defeitos
4,72±0,71
21,84±4,67
15,81±1,68
Letras minúsculas distintas, na mesma linha, indicam diferença significativa (p<0,05) entre os
tratamentos.
CONCLUSÃO
Muito
embora
a
criopreservação
tenha
aumentado
o
percentual
de
anormalidades, o protocolo usando ACP104® é favorável à congelação dos
espermatozoides de carpa comum.
AGRADECIMENTOS
FINEP
REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS
GWO, J-C.; ARNOLD, C.R. Cryopreservation of atlantic croaker spermatozoa:
evaluation of morphological changes. The Journal of Experimental Zoology, v. 264,
p.444-453, 1992.
673
IRAWAN, H.; VUTHIPHANDCHAI, V.; NIMRAT, S. The effect of extenders,
cryoprotectants and cryopreservation methods on common carp (Cyprinus carpio)
sperm. Animal Reproduction Science, v. 122, p.236-243, 2010.
LI, P.; HULAK, M.; P. KOUBEK, P.; SULC, M. et al. Ice-age endurance: the effects
of cryopreservation on proteins of sperm of common carp, Cyprinus carpio L.
Theriogenology 74 (2010) 413–423
MASSAR, B.; DEY, S.; DUTTA, K. An electron microscopic analysis on the ultra
structural abnormalities in sperm of the common carp Cyprinus carpio L. inhabiting a
polluted lake, Umiam (Meghalaya, India). Microscopy Research and Technique, v. 74,
p.998-1005, 2011.
674
Áreas aptas para produção de alevinos de tilapia segundo fatores extremos no
Estado do Maranhão: El Niño e La Niña.
Suitable area for production tilapia fingerlings second extreme factors in the Maranhão
State: El Niño and La Niña.
Maria Jose Bouéres Damasceno Neta1; Dayane de Jesus Valois Lima1; Jorgelia de Jesus
Pinto Castro1*; Erivânia Gomes Teixeira1; Ronaldo Menezes Barroso1; José Milton
Barbosa1.
1
Universidade Estadual do Maranhão.
*Email: [email protected]
ABSTRACT
This study evaluated through thermal zoning, the minimum and maximum temperatures
that occur in the Maranhão State and identify free areas of negative interferences of El
Niño and La Niña in the tilápia production. We used orbital data from thirteen weather
stations of Maranhão and a spreadsheet with the minimum and maximum temperatures
was constructed. The temperature variation was obtained by thermal maps zoning with
the application Surf program and the suitable regions for tilapia production according to
the requirements of the specie. The results expressed as heat maps quarterly to suggest
that El Niño and La Niña phenomenon, in the Maranhão State can directly influence the
success of fry production of Nile Tilapia.
Key-words: Pisciculture, Oreochomis niloticus, reproduction, mapping.
Palavras-chave: Piscicultura, Oreochomis niloticus, reprodução, mapeamento.
INTRODUÇÃO
Os cenários climáticos atuais demonstram um aumento nas frequências e
intensidades dos eventos extremos relativos a grandes variações de temperatura, ventos
e chuvas que tem reforçado a importância de estudos de possíveis prejuízos tangíveis à
pesca e aquicultura. Os eventos climáticos mundialmente conhecidos como El Niño e
La Niña representam alterações do sistema oceano-atmosfera no Oceano Pacífico
tropical, que tem conseqüências no tempo e no clima em todo o planeta (OLIVEIRA,
2001).
No caso do Maranhão, quando em ano de El Niño, é afetado por grandes secas
enquanto que em La Niña ocorre a redução da temperatura. Neste contexto, o objetivo
675
do presente trabalho foi avaliar, através de zoneamento térmico, as temperaturas
mínimas e máximas que ocorrem no Estado do Maranhão e identificar áreas livres das
interferências negativas dos fenômenos El Niño e La Niña na produção de tilápias do
Nilo.
MATERIAL E MÉTODOS
Foi realizado um levantamento de campo e uso de dados orbitais de treze
estações meteorológicas em todo o Estado e construída uma planinha do Microsoft
Office Excel (versão 2007) com as temperaturas mínimas e máximas. Para a obtenção
das variações de temperatura das respectivas áreas no período de trinta anos, foram
confeccionados mapas de zoneamento térmico com a aplicação do programa Surfe. Este
estipulou as regiões adequadas para a reprodução de tilápia do Nilo de acordo com a
exigência da espécie.
Nos anos de El Niño, (Fig. 1), no primeiro trimestre somente a região centrooeste apresentou faixa média de temperatura de 25,7°C, ficando abaixo da recomendada
para reprodução de tilápia que é de 26° a 28°C (FIGUEIREDO & VALENTES,
2008), enquanto a região sul apresentou maior média de temperatura (27,8°C)
indicando portanto, uma possível influência positiva na reprodução da espécie. No
segundo trimestre, as médias de temperatura da região sul e centro-oeste foram de
aproximadamente de 29° e 25,8°C respectivamente, indicando interferência negativa no
ciclo reprodutivo da tilápia. Neste mesmo período, a região sudeste com média de
27,8°C, sugeriu
uma interferência positiva e
nas regiões norte e nordeste as
temperaturas ficaram na faixa ideal. No terceiro e quarto trimestre, caracterizados pelo
período de estiagem no Maranhão, somente a regiaõ sul e pequena parte do centro oeste
não apresentaram área adequada para reprodução com temperatura média superior a
30ºC.
O segundo mapeamento indicou o período do fenômeno La Niña (Fig. 2), onde
observou-se que no primeiro trimestre nas regiões norte, nordesde, sul e sudeste a
média de temperatura variou de 25,9 a 26,8ºC, evidênciando influência positiva na
reprodução de tilápia, enquanto numa pequena parte da região centro oeste a
temperatura foi inferor a 25,6°C. O segundo trimestre somente parte das regiões sul e
676
sudeste, com temperaturas médias de 25,2°C, sugeriu leve influência negativa do
fenômeno na reprodução da espécie. Nos dois últimos trimestres todo o estado
apresentou média de temperatura na faixa média exigida para a reprodução da tilápia.
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Fig.1.Mapeamento trimestral da temperatura durante o fenômeno El Niño no Maranhão.
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Longitude
Fig. 2: Mapeamento trimestral da temperatura durante o fenômeno La Niña no Maranhão
CONCLUSÃO
Os resultados do zoneamento térmico nos anos dos fenômenos El Niño e La
Niña sugerem que as regiões Sul, Sudeste e Centro-Oeste não possuem áreas aptas para
produção de alevinos de tilápia do Nilo enquanto que as regiões Norte e Nordeste, por
apresentarem faixa de temperaturas entre 26 e 28ºC são propícias para a atividade.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
FIGUEIREDO, J.A.C; VALENTES, J.S.A. Cultivo de Tilápias no Brasil: Origem e
Cenário Atual. Sociedade Brasileira de Economia, Administração e Sociologia Rural
677
-42
Rio Branco-Acre. 2008. Disponível em:< http://www.sober.org.br> acesso em 18 de
abril. 2012.
OLIVEIRA, G.S. O El Niño e Você - o fenômeno climático. Ed. Transtec - São José
dos Campos (SP), março de 2001.
678
Avaliação da motilidade espermática de Piaractus brachypomus utilizando
diferentes ativadores
Assessment of sperm motility Piaractus brachypomus using different activators
Priscila Silva de Almeida*1, Júlia Trugilio Lopes1, Larissa Teixeira Nunes1, Marcelo
José Da Ascensão Feitosa Vieira2, Aldeney Andrade Soares Filho1, Carminda Sandra
Brito Salmito-Vanderley1.
1
Universidade Estadual do Ceará; 2Departamento Nacional de Obras Contra as Secas;
ABSTRACT
Piaractus brachypomus (pirapitinga) is a fish of great commercial importance for
pisciculture. This study
evaluates
the
effects of
activators distilled
water, 100mOsm NaCl, 100 mOsm NaHCO3 and184 mOsm NaHCO3 on the rate and
duration
of motility of
pirapitinga
sperm.
In
this
study,
100
mOsm NaCl
and NaHCO3 100mOsm was the best activators of this species sperm.
Key-words: fish, spermatozoa, motility duration
Palavra chave: peixe, espermatozóide, duração da motilidade
INTRODUÇÃO
A Pirapitinga, Piaractus brachypomus (Cuvier, 1818), é um peixe originário das
Bacias dos rios Amazonas e Orinoco e de grande importância comercial para a
piscicultura (Fresneda et al., 2004).
A conservação gamética em peixes tem sido bastante estudada para um grande
número de espécies através da criopreservação. Um dos parâmetros mais avaliados na
técnica de conservação seminal é a taxa de motilidade espermática, pois estabelece uma
correlação entre a qualidade do sêmen e a fertilidade (Godinho, 2000).
Desta forma, a determinação da solução adequada à ativação da motilidade
espermática, sem comprometer a qualidade seminal, torna-se uma questão importante
em trabalhos de criopreservação em peixes (Bedore, 1999).
Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito de diferentes ativadores
sobre a taxa e tempo de motilidade dos espermatozóides de pirapitinga.
679
MATERIAL E MÉTODOS
O trabalho foi realizado no Centro de Pesquisas em Aquicultura do
Departamento Nacional de Obras Contra as Secas, em Pentecoste – CE e no Núcleo
Integrado de Biotecnologia na Universidade Estadual do Ceará. Foram utilizados 16
machos adultos da espécie pirapitinga.
O sêmen foi coletado através de massagem abdominal para formação de quatro
pools. Cada pool foi diluído com diferentes soluções ativadoras (água destilada, NaCl
100mOsm, NaHCO3 100mOsm e NaHCO3 184mOsm) na proporção de 1:50
(sêmen:ativador). Imediatamente após a adição da solução ativadora foram verificados a
taxa de motilidade espermática (%), através do Sperm Class Analise, e o tempo de
motilidade (min). Os dados foram expressos em média ± desvio padrão. A porcentagem
de espermatozóides móveis e o tempo de motilidade foram analisados utilizando
ANOVA e seguido por teste de Tukey. Os dados foram significativos em P≤0,05.
Os valores médios de espermatozóides móveis e o tempo de motilidade
espermática estão expressos na tabela 1.
Uma boa solução ativadora é aquela que induz a ativação de espermatozoides
sem expô-los a condições osmóticas extremas e promove o prolongamento da
motilidade (Marques, 2001).
A determinação da solução adequada à ativação da motilidade espermática, sem
comprometer a qualidade seminal, torna-se uma questão importante em trabalhos de
criopreservação em peixes (Bedore, 1999). Entre as soluções ativadoras da motilidade
espermática, merecem destaque a água destilada, soluções salinas de NaHCO3, NaCl e
KCl em diferentes osmolaridades, dependendo da espécie (Ravinderet al., 1997).
Foi observado que a taxa de motilidade não variou entre os ativadores.
Entretanto, o tempo de motilidade variou, sendo que água destilada e NaCl 100 mOsm
apresentaram menor e maior tempo, respectivamente.
O tempo de motilidade não é interferido apenas pela osmolaridade, mas também
pela composição do ativador. A concentração de cloreto no sêmen influencia o potencial
de membrana do espermatozóide e a motilidade em associação com cátions. Assim,
pode-se inferir que a presença de cloro no NaCl, proporciona maior tempo de
motilidade (Catunda et al, 2009).
680
Tabela 1. Efeitos de diferentes ativadores na porcentagem de espermatozóides móveis e
no tempo de motilidade do sêmen de pirapitinga (Piaractusbrachypomus)
Ativadores
Espermatozóides Móveis (%)
a
Tempo de Motilidade (min)
1,18 ± 0,15c
Água Destilada
91,6 ± 4
NaCl 100mOsm
93,8 ± 2a
66,03 ± 11,41a
NaHCO₃ 100mOsm
93,7 ± 2a
27,33 ± 4,74b
NaHCO₃ 184mOsm
90,8 ± 6a
33,32 ± 15,26 b
a-c
Médias seguidas por letras diferentes sobrescrito na mesma coluna, diferem entre si, pelo teste
de Tukey (P≤0,05).
CONCLUSÃO
Diante dos resultados pôde-se concluir que a solução de NaCl 100mOsm é a
mais adequada para ativação de sêmen de pirapitinga (P. brachypomus).
AGRADECIMENTOS
FINEP
BEDORE, A.G. Características criopreservação do sêmen de pacu-caranha (Piaractus
mesopotamicus) e de piracanjuba (Bryconorbignyanus). 1999. 53 p. Dissertação
(Mestrado Biologia Celular) - Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte.
CATUNDA, A.G.V; CAMPOS, A.C.N.; PERREIRA, J.F.; LIMA, I.C.S.; ARAÚJO,
A.A.; MATINS, G.A. Variação mensal nas concentrações de macroelementos no
plasma seminal de caprinos criados em clima tropical úmido. Ciência Animal Brasileira,
v.10, n. 4. 2009.
FRESNEDA, A.; LENIS, G. AGUDELO E.; ANGEL, M. O. Espermiacióninducida y
crioconservación de semen de Cachama Blanca (Piaractus brachypomus). RevColCienc
Pec., v. 17,p. 46-52, 2004. Suplemento.
GODINHO, H.P. Criopreservação de sêmen de peixes. Informe Agropecuário, v.21,
n.203, p.6- 20, 2000
MARQUES, S. Preservação a curto prazo do sêmen de teleósteos neotropicais de agua
doce.Dissertação (Mestrado Zoologia de Vertebrados) – Pontífica. Universidade
Católica de Minasgerais, Belo Horizonte. 83 p., 2001.
681
RAVINDER, K.; NASARUNDDIN, K.; MAJUMDAR, K.C.; SHIVAJI, S.
Computerized analysis of motility, motility patterns and motility parameters of
spermatozoa of carp following short-term storage of semen. Journalof Fish Biology,
London, v. 50, n. 6, p. 1309-1328, June 1997.
682
Avaliação de três corantes para a observação da morfologia espermática em sêmen
criopreservado de Cyprinus carpio
Evaluation of three dyes for observation of sperm morphology on cryopreserved semen
of Cyprinus carpio
Thais Maia Torres¹*; Francisco José Lopes Cajado¹; Rômulo Roberto Ribeiro Pinheiro¹;
Cristiane Clemente De Mello Salgueiro¹; Maria Eduarda Magalhães De Souza¹;
Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley¹
¹ Universidade Estadual do Ceará;
ABSTRACT
The aim of this study was to evaluate the effect of three different dyes on the
morphology of Cyprinus carpio sperm after cryopreservation process. The analyses of
spermatozoa morphology were obtained by staining used three dyeing: Rose Bengal,
Bromophenol Blue and Panopticon. The spermatozoa were classified as normal and
deformation tail. The results were evaluated by Tukey test (P<5%). No difference was
observed in the percentage of spermatozoa with these characteristics in comparison of
the three dyes, so the three can be used efficiently.
Key words: dyes, sperm pathology, Carp, fish.
Palavras-chave: corantes, patologia espermática, Carpa, peixe.
INTRODUÇÃO
Carpa (Cyprinus carpio), espécie originária da Europa Oriental e da Ásia
Ocidental, foi uma das primeiras espécies a serem cultivadas em aqüicultura mundial.
(Querol et al., 2005).
A criopreservação seminal por ser uma metodologia bastante aplicável na
piscicultura, ela vem sendo alvo de diversos estudos. Essa biotecnologia beneficia
programas de melhoramento genético e pode auxiliar a reprodução artificial entre
produtores (Piironen, 1993), porém, essa técnica muitas vezes promove baixa taxa de
fertilização. A avaliação das morfopatologias espermáticas é considerada uma análise
importante para a qualidade do sêmen (Hafez & Hafez, 2000), pois é um parâmetro que
poderá explicar a baixa capacidade de fertilização em um reprodutor ou em um sêmen
criopreservado.
Para análises morfológicas dos espermatozoides de peixes são
683
utilizadas várias metodologias de coloração para a confecção de lâminas. Diante disso, o
objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de três diferentes corantes sobre a morfologia
espermáticas de carpa pós-processo de criopreservação.
MATERIAL E MÉTODOS
Quinze machos pertencentes ao plantel do Centro de Pesquisa em Aquicultura
(CPAq), do Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS), foram
submetidos a tratamento com extrato bruto de hipófise de carpa para induzir a
espermiação. Do sêmen extrusado e coletado foram confeccionados três pools. Cada
pool foi criopreservado segundo metodologia de Irawan et al. (2010).
Após o descongelamento, cada pool foi fixado em solução formol-citrato a 4%
na proporção de 1:250 (sêmen:fixador). Posteriormente, os pools foram corados para
análise da morfologia utilizando três corantes: Rosa Bengala, Azul de Bromofenol ou
Panótico de Hemograma. Para realizar a coloração com Azul de bromofenol e com o
corante Rosa bengala, as amostras do sêmen descongelado e fixado foram diluídas no
corante na proporção de 1:1 e 2:1 (sêmen:corante), respectivamente, em seguida, foram
realizados os esfregaços de cada coloração. Para a visualização espermática, utilizando
o Panótico de hemograma, foi realizado o esfregaço de 4µL do sêmen fixado,
posteriormente a lâmina foi imersa durante um minuto em cada uma das três diferentes
soluções do Kit Panótico, obedecendo a intervalos de um minuto entre cada solução.
Para a análise morfológica, foram observados 200 espermatozoides por meio de
microscopia ótica na objetiva de 40X. Os espermatozoides foram classificados como:
normal e defeitos na cauda. Os dados foram expressos como média±desvio padrão e
analisados por meio de análise de variância, seguido pelo teste de Tukey, para a
morfologia espermática em um mesmo corante (p<0,001) e para os diferentes tipos de
corantes utilizados (p<0,05), utilizando o programa estatístico ASSISTAT® versão 7.6
beta (2012).
Todos os corantes utilizados apresentaram uma maior porcentagem de
espermatozoides normais do que de espermatozóides com patologias e permitiram uma
boa visualização de cabeça e flagelo (Tabela 1).
684
Tuset et al. (2008) comparando três técnicas de coloração para o estudo
morfométricos em truta arco-íris observou que o corante Diff-Quik foi o melhor para a
digitalização enquanto que o Spermac era o melhor para a visualização do flagelo.
Streit Jr.et al. (2004) comparou três corantes e observou que o Rosa Bengala mostrou-se
melhor na definição da cor e agregou menos sujidade quando comparado com o
Vermelho Congo e Williams-modificado em sêmen de Pacu. Neste trabalho não foi
observado diferença significativa em relação à visualização ou presença de patologias
entre os diferentes corantes utilizados.
Tabela 1 - Médias ± desvio padrão com os dados encontrados em porcentagem.
Corantes
Normais
Cauda Dobrada
Cauda Enrolada
Rosa Bengala
94,5±1,9aA
3,33±0,8bA
2,25±0,7bA
Panótico de Hemograma
92,8±2,0aA
3,5±1,5bA
3,17±0,6bA
Azul de Bromofenol
91,7±4,4aA
3,60±1,7bA
2,50±0,5bA
Letras minúsculas distintas, na mesma linha, indicam diferença significativa (p<0,001) e letras
maiúsculas distintas, na mesma coluna, indicam diferença significativa (p<0,05).
CONCLUSÃO
Todos os corantes testados neste trabalho podem ser utilizados com eficiência
para a análise da morfologia espermática de Carpa.
AGRADECIMENTOS
FINEP
IRAWAN, H., Vuthiphandchai, V., Nimrat, S. The effect of extenders, cryoprotectants
and cryopreservation methods on common carp (Cyprinus carpio) sperm. Animal
Reproduction Science, v.122, p.236-246, 2010
HAFEZ, E.S.E; HAFEZ, B. (ed). Reproduction in farm animals. 7. ed. Philadelphia:
Lippicott Williams and Wickins, 2000. 509p.
PIIRONEN, J. Cryopreservation of sperm from brown trout (Salmo trutta m. lacustris
L.) and arctic charr (Salvelinus alpinus L.). Aquaculture, v.116, p.275-285, 1993.
685
QUEROL; M.V.M.; QUEROL; E.; PESSANO, E.F.C & AZEVEDO, C.L.
Ocorrência da carpa húngara , Cyprinus carpio (LINNAEUS, 1758) e disseminação
parasitária, no arroio felizardo, Bacia do Médio Rio Uruguai, Uruguaiana, RS, Brasil.
Biodiversidade Pampeana, v.3, n.1, p. 21-23, 2005
TUSET,
V.M.;
DIETRICH,
G.J.;
WOJTCZAK,
M.;
SLOWINSKA,
M.;
MONSSERRAT, J.; CIERESKO, A. Comparison of three staining techniques for the
morphometric
study
of
rainbow
trout
(Oncorhynchus
mykiss)
spermatozoa.
Theriogenology, v.69, p.1033-1038, 2008.
STREIT-JR, D.P.; MORAES, G.V.; RIBEIRO, R.P.; POVH, J.A.; SOUZA, E.D.;
OLIVEIRA, C.A.L. Avaliação de diferentes técnicas para coloração de sêmen de
peixes. Arquivos de ciências veterinárias e zoologia. UNIPAR, v.7, p.157-162, 2004.
686
Avaliação de três diferentes corantes na detecção de anormalidades de cauda em
espermatozoides de tambaqui (Colossoma macropomum)
Evaluation of three different dyes in the detection of abnormalities in sperm tail
tambaqui (Colossoma macropomum)
Maria Eduarda Magalhães de Souza*1, Fátima De Cássia Evangelista de Oliveira¹,
Mayara Setúbal Oliveira¹, João Paulo Silva Pinheiro¹, Jordana Sampaio Leite¹,
Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley¹.
1
Universidade Estadual do Ceará
* Email: [email protected]
ABSTRACT
This present study aimed at comparing the performance of different dies in the sperm
morphological analysis of tambaqui. Twelve animals were selected and induced to
release semen. Of semen samples collected, four pools were prepared. A sample of
each pool was fixed in formalin saline solution and stained with Rose Bengal, or
Panoptic Bromophenol Blue, and then the, slides were observed under an optical
microscope (400x). The three dyes tested are effective in the subjective analysis of
tambaqui sperm morphology.
Key words: sperm, dye, morphology, fish
Palavras-chave: sêmen, corantes, morfologia, peixes
INTRODUÇÃO
O tambaqui é o peixe nativo mais produzido atualmente no Brasil (IBAMA,
2007), e que se tem bom conhecimento para seu manejo em estoques naturais e para sua
criação em cativeiro (Araujo-Lima & Goulding,1997). Para o melhoramento genético
em piscicultura, a avaliação seminal é um dos métodos utilizados. Sabe-se que a
presença de algumas morfoanomalias pode afetar significativamente a fertilidade. Para
análises morfopatológicas confeccionam-se lâminas com espermatozoides corados,
porém nenhum corante foi bem estabelecido ainda para espermatozoides de tambaqui.
Objetivou-se neste trabalho avaliar a eficiência de corantes no estudo da morfologia
espermática em tambaqui.
687
MATERIAL E MÉTODOS
Doze tambaquis adultos, provenientes do plantel do Departamento Nacional de
Obras Contra as Secas, Pentecoste-CE, tiveram a reprodução induzida por aplicação de
extrato hipofisário de carpa, em dosagem única de 1,5mg/kg de peso vivo. A coleta do
sêmen deu-se 14h após a indução (massagem abdominal), em tubos graduados de 2mL
e foram preparados quatro pools (três animais por pool). De cada pool foi retirada uma
alíquota de 2µL para fixação em 200µL de solução formol salina-citrato 4%.
Os espermatozoides fixados foram corados com Azul de Bromofenol, Rosa
Bengala e Panótico de Hemograma. No corante Azul de Bromofenol, foi utilizada
amostra com 1µL de sêmen fixado para 10µL do corante. Corou-se as amostras com
Rosa Bengala a uma proporção de 3:20 (corante:sêmen). Com 4µL de espermatozoides
corados fez-se os esfregaços com o Rosa Bengala e o Azul de Bromofenol. Para o
Panótico a metodologia foi: primeiro, realizou-se esfregaço com 4µL da solução de
espermatozoides fixados, em seguida, a lâmina foi imersa por 1min em cada solução
que compunha o kit Panótico, com intervalo de 1min entre cada solução.
Foram analisados defeitos de cauda (dobrada ou enrolada). De cada lâmina
confeccionada com cada corante foram analisados 200 espermatozoides em microscópio
ótico, aumento de 400x. Os dados foram expressos como media±desvio padrão e
analisados por meio de análise de variância, seguido pelo teste de Tukey (5%),
utilizando o programa ASSISTAT® versão 7.6 beta (2012).
Em todas as lâminas analisadas, independente do corante utilizado, a
porcentagem de espermatozoides normais foi superior a 90% (Tabela 1) e permitiram a
visualização de cabeça e flagelo, sendo que o Azul de Bromofenol permitiu, ainda, a
visualização da peça intermediária. Não foram encontradas diferenças entre os corantes
em relação a detecção de caudas dobradas ou enroladas.
Streit-Jr et al., 2008, utilizando o corante Rosa Bengala, observaram 56,74% ±
2,79 de espermatozoides normais em Salminus maxillosus, enquanto que Medina et al,
2008, observando o sêmen de Piaractus brachypomus in natura encontraram 69% de
espermatozoides normais utilizando o corante Azul de Bromofenol. Segundo Herman et
al., 1994, a presença de anormalidades espermáticas podem estar relacionada com a
deficiência nutricional, idade dos reprodutores, variações ambientais e genéticas
688
(Miliorini, 2006) como por falhas durante a espermatogênese. Essas anormalidades
observadas no sêmen fresco também podem ser devido à manipulação do sêmen através
da fixação com solução formolizada, técnica de esfregaço ou influência do corante.
Tabela 1: Percentagem de espermatozoides normais, com cauda dobrada e cauda enrolada
(médias ± desvio padrão) no sêmen in natura corado com Rosa Bengala, Panótico de
Hemograma ou Azul de Bromofenol.
Corantes
Normais
Cauda Dobrada
Cauda Enrolada
Rosa Bengala
97,62 ± 0,89A
0,87 ± 0,54B
1,5 ± 0,61B
Panótico de Hemograma
92,62 ± 3,00A
4,62 ± 1,88B
2,75 ± 1,44B
Azul de Bromofenol
95,75 ± 1,03A
1,87 ± 0,85B
2,37 ± 0,48B
Letras distintas na mesma coluna indicam diferença significativa (p<0,05).
CONCLUSÃO
Os três corantes testados são eficazes na análise subjetiva de anormalidades em
cauda de espermatozoides de tambaqui.
AGRADECIMENTOS
FINEP
ARAÚJO-LIMA, C.R.M.; GOULDING, M.; So fruitful fish: ecology, conservation, and
aquaculture of the Amazon’s tambaqui. New York: Columbia University Press, 1997.
157p.
HERMAN, H.A.; MITCHELL, J.R.; DOAK, G.A. Evaluation of semen – morphology.
In: HERMAN, H.A., MITCHELL, J.R.; DOAK, G.A. The artificial insemination and
embryo transfer of dairy and beef cattle.8. ed. Dauville: Interstate Publishers, Inc., p.
85-92, 1994.
IBAMA – Recursos Pesqueiros: Estatística da pesca, 2007. Brasília. Disponível em:
<http://www.ibama.gov.br/phocadownload/category/40?download=4156%3Aestatsticapesqueira>
MILIORINI, A.B. Ativadores e concentrações de metanol e dimetilsufoxido na
qualidade do sêmen criopreservado de curimba (Prochilodus lineatus). 2006. 99
689
f. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) – Universidade Federal de Lavras,
Lavras, 2006.
MEDINA, S.P.V. Criopreservação do sêmen de pirapitinga Piaractus brachypomus
(PISCES, CHARACIDAE), Dissertação de mestrado, Fortaleza, 2008.
STREIT-JR, D.P.; MORAES, G.V.; RIBEIRO, R.P.; POVH, J.A.; SOUZA, E.D.;
OLIVEIRA, C.A.L. Evaluación de técnicas para colorear sémen de peces. Arq. ciên.
vet. zool. UNIPAR, 7(2): p. 157-162, 2004.
690
Características do sêmen de ariacó (Lutjanus synagris)
Lane snapper (Lutjanus synagris) semen characteristics
Vettorazzi, M.B.1*, M.A.A., Furtado Neto¹, Maggioni, R.¹, Oliveira, F.C.E2., SalmitoVanderley, C.S.B.2
1
Universidade Federal do Ceará. 2Universidade Estadual do Ceará.
ABSTRACT
The fish sperm motility is induced and influenced by many physical-chemicals
characteristics, such as osmolality, pH and temperature. Along with these features and
adding the sperm concentration and the ejaculated volume one can characterize a fish
species semen. The aim of this study was to obtain the physical-chemical features of
Lutjanus synagris semen. Concentration was assessed with Neubauer chamber, the
volume was obtained by graduate syringes, the osmolality and pH measured by a digital
osmometer and pH meter, respectively. The results were 4.88 ± 2.9 x 109 spz/mL, 0.47
± 0.26 mL, 366.14 ± 22.78 mOsm/kg and 7.9 ± 0.17 for sperm concentration, ejaculated
volume, osmolality and pH respectively. The specimes of L. synagris used in assisted
reproduction should be selected based on their individual sperm features.
Key words: Lutjanus synagris; Sperm osmolality; Marine teleosts semen.
Palavras-chave: Lutjanus synagris; osmolaridade seminal; Sêmen de teleósteos
marinhos.
INTRODUÇÃO
Na maioria das espécies de peixes os espermatozoides são imóveis no plasma
seminal, dentro do testículo (BILLARD, 1986). Por isso, a motilidade é induzida logo
após a liberação do sêmen no meio aquoso. Existem relações entre as composições do
flúido seminal e as do meio aquoso em que a reprodução deve proceder. A motilidade é
afetada por muitos fatores, sendo os principais a concentração de componentes
osmoticamente ativos (osmolaridade), pressão osmótica, pH e temperatura. A
concentração dos espermatozoides no sêmen é frequentemente usada para caracterizar o
sêmen e, juntamente com o volume de sêmen ejaculado (V), é utilizada para estimar a
produção total de espermatozoides durante um evento reprodutivo (TRIPPEL, 2003). O
691
objetivo deste trabalho foi avaliar as características espermáticas do sêmen de ariacó
(Lutjanus synagris).
MATERIAL E MÉTODOS
O sêmen foi coletado em seringas plásticas descartáveis de 3mL e o volume
aferido com precisão de 0,1mL. O sêmen foi extrusado até a exaustão. Este parâmetro
foi determinado individualmente (n=7).
A concentração (n=7) foi obtida através da câmara de Neubauer a partir do sêmen
fixado em solução de formol salino (0,1%) na proporção de 1:4000 (sêmen:formol
salino). Os valores médios encontrados nas contagens da câmara de Neubauer (n) foram
multiplicados pelo fator de diluição: n x 200,05 x 106.
A produção total de espermatozoides (PT) (n=7) foi calculada pelo produto da
concentração espermática (Ce) pelo volume ejaculado (V): PT = Ce x V
A osmolaridade do sêmen fresco (n=7) foi obtida com o auxílio de osmômetro
eletrônico Roebling®. O pH de sêmen fresco (n=9) foi medido por peagâmetro digital
com microeletrodo Hanna Instruments®.
RESULTADO E DISCUSSÃO
Os resultados obtidos nas análises de sêmen de L. synagris encontram-se na tabela
1. A concentração espermática encontrada por Sanches e Cerqueira (2010) para a
mesma espécie foi similar, 2,2 ± 0,2 x 109 spz/mL.
Tabela 1 - Valores médios ± desvio padrão e coeficiente de variação das características
seminais de L. synagris.
Características Seminais
Média ± D.P.
Concentração espermática (x 109 spz/mL)
Volume ejaculado (mL)
Produção Total de Espermatozoides (x 109 spz)
Osmolaridade (mOsm/kg)
pH
4,88 ± 2,9
0,47 ± 0,26
1,93 ± 1,57
366,14 ± 22,78
7,9 ± 0,17
Coeficiente de
Variação (%)
59,43
55,32
81,35
6,22
2,15
Sanches e Cerqueira (2010) reportaram que o volume de sêmen ejaculado de L.
synagris foi de 0,61 ± 0,35 mL, sendo, portanto, um volume superior ao obtido nas
presentes análises. De acordo com Viveiros e Godinho (2009), o volume de sêmen é
692
bastante variável em teleósteos, o que explica o alto coeficiente de variação (C.V.).
encontrado na presente análise. A produção total média de espermatozóides foi de 1,20
± 0,73 x 109 spz por indivíduo. No caso de espécies que produzem pequenos volumes
de sêmen, a produção total média de espermatozóides parece ser mais indicada para
avaliar e definir a proporção de machos e fêmeas utilizada na hora da formação de
casais quando da reprodução em cativeiro. Mesmo assim, são raros os relatos de
produção total de espermatozoides na literatura, e parece ter sido este o primeiro para
teleósteos marinhos brasileiros. O alto coeficiente de variação demonstra que este índice
varia bastante e que existe a necessidade da pré-seleção dos machos para a formação de
casais.
Não há relatos de estudos com L. synagris sobre osmolaridade, porém os valores
médios de osmolaridade encontrados por Riley et al. (2008) para L. griseus e L.
campechanus foram 428 ± 15 e 411 ± 5 mOsm/kg, respectivamente, sendo maiores que
os valores encontrados para L. synagris no presente trabalho que foi de 378,5 ± 65,1
mOsm/kg. Vettorazzi et al. (2010), utilizando fitas graduadas, encontraram pH, 8,0 para
o sêmen de L. synagris, valor semelhante ao encontrado no presente trabalho.
CONCLUSÃO
As características espermáticas de L. synagris apresentam elevado desvio padrão
refletindo numa alta variabilidade individual o que sugere uma necessidade de préseleção dos machos a serem utilizados em programas de reprodução assistida.
AGRADECIMENTOS
Á Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, ao Núcleo
Integrado de Biotecnologia/ UECE, ao Centro de Estudos Ambientais Costeiros /UFC e
a FINEP.
BILLARD, R., Spermatogenesis and spermatology of some teleost fish species,
Reproductive Nutritional Developement, v.26, p.877–920, 1986.
MORISAWA, M., Initiation mechanism of sperm motility at spawning in teleosts.
Zoological Science 2, 605–615, 1985.
693
RILEY et al., Field Collection, Handling, and Refrigerated Storage of Sperm of Red
Snapper and Gray Snapper, North American Journal of Aquaculture, v.70, p.356-364,
2008.
SANCHES, E.G., CERQUEIRA, V.R., Refrigeração do sêmen de ariacó, Lutjanus
synagris, Boletim do Instituto de Pesca, são Paulo, v.36, n.4, p.293-305, 2010.
TRIPPEL, E.A., Estimation of male reproductive success of marine fishes, Journal
Northwest Atlantic Fishes Science, v.33, p.81-113, 2003.
VETTORAZZI, M.B., GOMES, E.T., SOUZA, R.L.M., CÉSAR, J.R.O e FURTADO
NETO,M.A.A., Motilidade espermática do sêmen de ariacó, Lutjanus synagris, Arquivo
de ciências do Mar, Fortaleza, v.43(2), p.21-26, 2010.
VIVEIROS, A. T. M.; GODINHO, H. P., Sperm quality and cryopreservation of
Brazilian freshwater fish species: a review. Fish Physiology Biochemistry., v.35, p.137–
150, 2009.
694
Características do sêmen fresco de Carpa comum (Cyprinus carpio) em latitude
equatorial.
Characteristics of fresh sperm of common carp (Cyprinus carpio) in equatorial latitude.
Rômulo Roberto Ribeiro Pinheiro*1; Juliana Carollyne Moreira Jorge1; Maria Eduarda
Magalhães de Souza1; Maria Audália Marques De Carvalho1; Francisco Renan Aragão
Linhares1; Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley1.
1
Universidade Estadual do Ceará;
ABSTRACT
The objective of this study was to assess the sperm characteristics of common carp in
equatorial latitudes. We used 06 animals, belonging to the roster of the National
Department of Works Against Drought (DNOCS), Ceará, Brazil. The animals received
a single dose of carp pituitary extract (EHC, 1 mg / kg body weight). Semen was
collected 14 hours after induction. Sperm volume was observed through graduated tubes
(mL), osmolality was evaluated through digital osmometer (mOsm / kg), pH through a
measuring paper, motility was estimated by microscopic analysis subjective. The sperm
concentration was determined using a Neubauer chamber. Data were expressed as mean
± standard deviation. Found average sperm volume, pH, motility, osmolarity and
concentration of 20.41 ml; 8.30; 94.80 %; 290.30 mOsm and 20.90 x 109 sptz.ml-1,
respectively. The sperm characteristics had standard values for fresh water fish.
Palavras-chave: sêmen, peixe, motilidade, concentração espermática.
Key words: sperm, fish, motility, sperm concentration
INTRODUÇÃO
A carpa comum, Cyprinus carpio, considerada uma das espécies domesticadas
com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, foi
introduzida no Nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras as
Secas (DNOCS) no ano de 1977. A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial,
forte apelo culinário e esportivo e uma das mais cultivadas em todo o mundo. O
objetivo desse trabalho foi avaliar as características seminais de carpa comum (Cyprinus
carpio) em latitude equatorial.
695
MATERIAIS E MÉTODOS
Foram utilizados 06 animais, com idade média de três anos, pertencentes ao
plantel do Centro de Pesquisas em Aquicultura (CPAq), do DNOCS, Ceará, Brasil. Os
animais receberam uma dose única de extrato hipófisário de carpa (EHC; 1 mg/kg de
peso vivo, intra-celomático). O sêmen foi coletado 14 horas após a indução hormonal.
Características individuais como o volume (mL) foi aferido por meio de tubos
graduados, osmolaridade (mOsm/Kg) por meio de osmômetro digital, pH através de
fitas de pH e
motilidade estimada através de análise microscópica subjetiva. A
concentração de espermatozoides foi estimada em câmara de Neubauer numa diluição
prévia de 1:2000 (sêmen: formol citrato).
Os dados foram expressos como média ± desvio padrão. Os parâmetros de
concentração espermática foram analisados por meio de análise de variância, seguido
pelo teste de Tukey, para comparação entre os aspectos seminais (p<0,05), utilizando o
programa estatístico ASSISTAT® versão 7.6 beta (2012).
O volume encontrado foi de 20,41 ± 10,52 ml durante o mês de janeiro em
latitude equatorial. Christ et al., (1996) encontrou na carpa comum um volume de
sêmen de 2,88 ml em março e 6,50 ml em maio em clima temperado. O pH encontrado
foi de 8,30± 0,26 conforme o esperado para espécies de água doce que, segundo
Tabares et al., (2005) varia entre 6,5 a 8,5. Os espermatozoides ativados com água do
tanque tiveram motilidade média subjetiva de 94,80 ± 2,92. Foi observada uma
homogeneidade na qualidade do sêmen antes da adição de solução ativadora (sem
ativação espontânea).
Segundo Chambeyron & Zohar (1990), este parâmetro é tão confiável quanto à
análise objetiva. A osmolaridade encontrada foi de 290,30 ± 73,00 mOsm/Kg, estando
dentro dos valores encontrados
em ciprinídeos (Alavi & Cosson, 2006). A
concentração de espermatozoides encontrada neste trabalho foi de 20,90 x 109 ± 2,16.
No que diz respeito ao aspecto seminal, três amostras apresentaram aspecto
branco cremoso obtendo uma média de concentração espermática de 21,36 x 109 ± 2,25
sptz.mL-1, e três amostras apresentaram aspecto branco leitoso obtendo média de
concentração espermática de 20,40 x 109 ± 2,42 sptz.mL-1 (Tabela 1) (p>0,05). Porém, a
concentração espermática pode variar em relação à sazonalidade (Christ et al., 1996). O
696
conhecimento deste parâmetro é importante para se otimizar procedimentos de
fertilização artificial através da definição da melhor dose inseminante.
Tabela 1. Parâmetros de concentração espermática de Ciprinus carpio em relação ao aspecto
seminal.
Concentração espermática
Branco cremoso
21,36 x 109 ± 2,25a
Branco leitoso
20,40 x 109 ± 2,42a
Letras minúsculas sobrescritas distintas, na mesma coluna, indicam diferença significativa
(p<0,05).
CONSIDERAÇÕES FINAIS
As características seminais de carpa comum em latitude equatorial são
semelhantes àquelas da época reprodutiva em regiões de clima temperado.
Aparentemente o aspecto do sêmen não influencia a concentração espermática.
AGRADECIMENTOS
FINEP
ALAVI, S.M.H; COSSON, J. Sperm motility in fishes. (II) Effects of ions and
osmolality: A review. Cell Biology International, v. 30, p.1-14, 2006.
CHAMBEYRON, F.; ZOHAR, Y. A diluent for sperm cryopreservation of gilthead
seabream, Sparus aurata. Aquaculture, v. 90, p. 345-352, 1990.
CHRIST, S. A.; TOTH, G. P.; MCCARTHY, H. W.; TORSELLA, J. A.; SMITH, M. K.
Monthly variation in sperm motility in common carp assessed using computer-assisted
sperm analysis (CASA) Journal of Fish Biology, v. 48, p. 1210–1222, 1996.
TABARES, J.; TARAZONA, A.; OLIVEIRA, M. Fisiología de la activación del
espermatozoide en peces de agua dulce. Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias, v.
18, p. 149-16. 2005.
697
Characterization of lane snapper (Lutjanus synagris) semen using the Computer
Assisted Semen Analysis
Caracterização do sêmen de ariacó (Lutjanus synagris) utilizando o sistema de Análise
de Sêmen Assistido por Computador
Vettorazzi, M.B.1*, Maggioni, R.,1, Furtado Neto, M.A.A.¹, Lopes, J.T.2, SalmitoVanderley, C.S.B.2
1
Universidade Federal do Ceará. 2Universidade Estadual do Ceará.
ABSTRACT
Computer Assisted Semen Analysis systems are great to produce high quality
information about semen motility and morphometry. The aim of this work was to
characterize the Lutjanus synagris semen using Sperm Class Analyzer (SCA). Fresh
semen was accessed for its motility and for morphology it was necessary to fix it in
saline formaldehyde and stain it with Panoptic CBC. The total progression, straightness
and wobble were 70.97, 63.24 and 67%, respectively. VCL and VAP were 39.54 and
26.3 µm/s, respectively. ALH and BCF were 2.96 µm and 4.6 Hz, respectively.
Key words: Lutjanus synagris; Computer Assisted Semen Analysis; Marine fish semen.
Palavras-chave: Lutjanus synagris; Analise de Sêmen Assistida por Computador;
Sêmen de peixes marinhos.
INTRODUCTION
The softwares which analyze sperm features (CASA) figure as a great
methodology to the quick and complex access to sperm quality, either concerning
motility or morphology, and it has been employed to determine individual variations in
many different species, playing an essential role in aquaculture (LAHNSTEINER e
PATZNER, 1998). The aim of this work was to qualitatively characterize the Lutjanus
synagris semen, concerning its motility and morphometry using the Computer Assisted
Sperm Analysis (CASA), from SCA (Sperm Class Analyzer, SCA®2005, Microptics
S.L., Spain).
698
MATERIAL AND METHODS
To access the sperm motility, a semen aliquot of 2µL was activated and
homogenized with sea water (1120mlOsm). The images were analyzed immediately
under the pH1 filter and objective of 10x. It was considered, at least, the motility of
2000 spermatozoa per semen samples. To sperm head morphometry analyses it was
necessary the preparation of a fixed solution of semen and saline formaldehyde (0.1%),
at 1:10 proportion (fresh semen: fixative). The smear was subjected to stain technique
with the kit for Panoptic CBC (Instant-Prov) and taken to SCA software analyses. It was
considered 200 spermatozoa from each semen sample.
RESULTS AND DISCUSSION
The obtained results related to the motility parameters are placed in table 1.
Vettorazzi et al. (2010) subjectively analyzing the initial motility of L. synagris fresh
semen found value of 82.5 ±12.5%, slightly higher than the one found in the present
work, nevertheless the technique used in our studies was much more rigorous, as it is
performed by computer. Tuset, et al. (2008), analyzing Gadus mohrua semen found
mean values of straightness and wobble of 85.43% e 85%, respectively, higher than the
ones obtained in the present work. Using the SCA software, Tuset et al. (2008)
demonstrated that the G. mohrua’s spermatozoa VCL ranges between 151.5–201.5
µm/s, greatly large than L. synagris’s spermatozoa VCL. Regarding VAP, our result
was lower than the ones reported for Boops boops, Diplodus sargus, Mullus barbatus e
Trachurus mediterraneus (LAHNSTEINER e PATZNER, 1998), which were 70.2
µm/s, 76.6 µm/s, 92.2 µm/s e 69.5 µm/s respectively. It is interesting to point out that
works using CASA systems to evaluate marine teleosts semen are rare, especially to the
ones occurring in the Brazilian coast.
The morphology analyzes results of L. synagris semen are shown in table 2. The
L. synagris spermatozoa head presented a subtle elliptic shape. Tuset et al. (2008), in G.
mohrua morphology study found two different groups as for the shape of the head:
being 85.5% of elongated head (mean ellipticity of 1.72), and 14.5% of round head.
Marco-Jiménez et al. (2008) using SCA® software to evaluate the spermatozoa
morphometry of Sparus aurata and Diplodus puntazzo found mean values of lenth of
1.97 ± 0.01 and = 2.57 ± 0.01µm; width, 1.80 ± 0.01 e 2.22 ± 0.02 µm; area, 3.16 ± 0.03
e 4.44 ± 0.02 µm e perimeter 6.52 ± 0.04 e 7.70 ± 0.02 µm, respectively for the two
699
species. The data leads to the conclusion that L. syangris spermatozoa are around 40%
and 24% bigger than the ones of S. aurata e D. puntazzo, respectively. Spermatozoa
morphology is quite peculiar and varies considerably within the same species.
CONCLUSIONS
Accordingly to the results obtained, the L. synagris sperm presents low velocities
when compared to other marine teleosts. The spermatozoa head shape is subtly elliptic
and it is slightly bigger than the ones of other marine teleosts.
ACKNOWLEDGEMENTS
We acknowledge the Personnel Improvement Coordination of Postgraduate
Education (CAPES), the Biotechnology Integrated Nucleus (NIB - UECE), the Coastal
Environmental Studies Center (CEAC - UFC) and the FINEP.
Table 1 – L. synagris sperm motility parameters expressed in mean values ± standard VCL –
Curvilinear velocity; VSL – Velocity in a straight line; VAP – Average path velocity; ALH –
Lateral head displacement; BCF – Beat cross frequency.
Progression (%)
Total Estatics
70.97
29.03
Velocity (%)
Fast/
Mediums
(20 to 42
µm/s)
28.9
Velocity (µm/s)
Amplitude
Slows
(<20
µm/s)
Sraightness
Wobble
VCL
VSL
VAP
ALH
(µm)
BCF
(Hz)
71.1
63.24
67
39.54
16.64
26.3
2.96
4.6
Table 2 – Mean values ± standard deviation and coefficient of variation of L. synagris
spermatozoa size and shape.
Characteristic
Lenth (µm)
Width (µm)
Area (µm2)
Perimeter (µm)
Ellipticity
Elongation
Roughness
Regularity
Mean ± D.P.
3.3 ± 0.04
2.95 ± 0.04
8.73 ± 0.18
10.45 ± 0.12
1.12 ± 0.02
0.06 ± 0.01
1.00 ± 0.00
0.87 ± 0.00
C.V. (%)
1.21
1.36
2.06
1.15
1.79
16.67
0
0
700
REFERENCES
LAHNSTEINER, F.; PATZNER, R., Sperm motility in the marine teleosts Boops
boops, Diplodus sargus, Mullus barbutus and Trachurus mediterraneus. Journal of Fish
Biology., v.52, p.726–742, 1998.
MARCO-JIMÉNEZ ET AL., Morphometric characterization of sharpsnout sea bream
(Diplodus puntazzo) and gilthead sea bream (Sparus aurata) spermatozoa using
computer-assisted spermatozoa analysis (ASMA), Journal of Applied Ichthyology, n24,
p.382-385, 2008.
TUSET, V. M.; TRIPPEL, E. A.; DE MONSERRAT, J., Sperm morphology and its
influence on swimming speed in Atlantic cod, Journal of Applied Ichthyology, v.24,
p.398–405, 2008.
VETTORAZZI, M.B., GOMES, E.T., SOUZA, R.L.M., CÉSAR, J.R.O e FURTADO
NETO,M.A.A., Motilidade espermática do sêmen de ariacó, Lutjanus synagris, Arquivo
de Ciências do Mar, Fortaleza, v.43(2), p.21-26, 2010.
701
Comparação entre duas técnicas de coleta de sêmen de Oreochromis niloticus
Comparison between two collection techniques of Oreochromis niloticus semen
Mayara Setúbal Oliveira1*, Erivânia Gomes Teixeira2, Larissa Teixeira Nunes1, Mônica
Aline Parente Melo-Maciel1, Liliane Veras Leite1, Carminda Sandra Brito SalmitoVanderley1
1
2
Universidade Estadual do Maranhão
ABSTRACT
The objective of the present study was evaluate if the collect techniques interfere on the
contamination level from semen of Nile Tilapia (Oreochromis niloticus). Twelve Nile
Tilapia males were used and were divided in two groups. The first group was underwent
to the semen collect through a slight abdominal massage and the second group was
sacrificed for gonadal dissection. Samples visibly contaminated were discarded, while
others which did not shown changes in their color have been analyzed. From the six
animals that were underwent through the semen collecting by abdominal massage, five
presented self-activation, and suggesting sample contamination by urine or mucus. The
semen collected from the dissected testicles did not showed self-activation, because this
technique prevents the semen contact with water or the specimen mucus. It was
concluded that testicular dissection is the best suited for semen collection in this
species.
Key-words: gonads, dissected, fish
Palavras-chave: gônadas, dissecação, tilápia do Nilo.
INTRODUÇÃO
A tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) é uma espécie de peixe nativa da
África, e atualmente constituem um dos mais importantes grupos de peixes em termos
de produção mundial, representando a espécie de maior produção no Brasil (IBAMA,
2007). A tilapicultura vem se mostrando uma ótima alternativa para a piscicultura de
água doce e estuarina. Criadores têm buscado linhagens geneticamente melhoradas e
aptas aos nossos ambientes, visando o aumento da produção em cativeiro.
702
Durante a coleta do sêmen é necessário que haja todo um cuidado para evitar
que este entre em contato com a água ou qualquer outro contaminante como sangue,
fezes, urina ou muco que podem ativar a motilidade do sêmen (Kime et. al, 2001). A
coleta de sêmen de peixe pode ser realizada através de massagem abdominal (Maria,
2005) ou dissecação da gônada (Pan et al, 2008). Este trabalho objetivou avaliar se as
técnicas de coleta interferem no nível de contaminação do sêmen de tilápia.
MATERIAL E MÉTODOS
Foram utilizados 12 machos de tilápia do Nilo (O. niloticus) pertencentes a
estação de piscicultura do Centro de Biotecnologia Aplicada à Aquicultura localizada na
Universidade Federal do Ceará. Os animais foram divididos em dois grupos, sendo que
o primeiro foi submetido à coleta de sêmen por meio de uma leve massagem abdominal
(grupo 1), e o outro foi sacrificado para a dissecação das gônadas (grupo 2). Em ambos
os grupos, os animais foram sedados através de sua imersão em solução contendo
Eugenol e tiveram a região urogenital enxuta com papel toalha para evitar a
contaminação do sêmen com água. Os animais do grupo 1 foram envoltos com uma
toalha úmida sobre os olhos para facilitar sua contenção. Após isto, foram feitas suaves
compressões na região abdominal do peixe no sentido ântero-posterior. O sêmen foi
então coletado individualmente através de seringas. Os animais do grupo 2, após a
sedação, foram sacrificados para a remoção cirúrgica das gônadas. Após a remoção, as
gônadas foram enxutas e colocadas em placa de Petri, sendo em seguida feito um corte
transversal na gônada para a liberação do sêmen. As amostras foram coletadas em tubos
de polietileno. Foram descartadas todas as amostras contaminadas com sangue ou fezes
através de observação da coloração modificada. As amostras que se apresentavam
aparentemente livres de contaminação foram observadas para verificar a presença de
urina e muco e possivelmente auto-ativação.
O sêmen de todos os animais foi
observado imediatamente após a coleta em microscópio óptico (400X) para a
verificação de motilidade espermática antes da ativação com água do tanque. Para esta
análise, uma alíquota de 2 µL de cada amostra foi colocada em lâmina/lamínula e em
seguida ativada com 50µL de água do tanque. As amostras que apresentavam
espermatozoides móveis foram consideradas contaminadas com urina ou muco.
703
Dos seis animais submetidos à coleta de sêmen por massagem abdominal, cinco
apresentaram sêmen com auto-ativação, indicando que a maioria das amostras coletadas
por esta técnica foram contaminadas com urina ou muco. Geralmente este tipo de
contaminação ocorre durante a coleta devido à pressão exercida sobre a região genital,
digestivo e urinário do animal que se encontram sobrepostos anatomicamente,
possibilitando a liberação de fezes e urina. Além disso, pode ocorrer o extravasamento
de sangue dos vasos que irrigam a região interna da área genital. O sêmen coletado
diretamente dos testículos dissecados não apresentou auto-ativação, pois esta técnica
previne o contato do sêmen com a água ou com o muco do peixe. A desvantagem da
técnica de dissecação é a necessidade de sacrificar o animal, porém isso permite a
utilização de sêmen de animais que já seriam abatidos para o consumo. Além disso, é
importante o desenvolvimento de protocolos para a utilização do sêmen post-mortem
em casos de espécimes de alto valor genético (Dietrich et al., 2005).
CONCLUSÃO
Conclui-se que a técnica de dissecação testicular é mais adequada para a coleta
do sêmen de O. niloticus quando comparada a técnica de massagem abdominal.
AGRADECIMENTOS
FINEP
DIETRICH, G.; KOWALSKI, R.; WOJTCZAK, M.; DOBOSZ, S.; GORYCZKO, K.;
CIERESZKO. A. Motility parameters of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)
spermatozoa in relation to sequential collection of milt, time of post-mortem storage and
anesthesia. Fish Phys. Bioch. 31, 1-9, 2005
KIME, D.E.; LOOK, K.J.W. Van; MCALLISTER, B.G.; HUYSKENS, G.;
RURANGWA, E.; OLLEVIER, F.; Computer-assisted sperm analysis CASA/ as a tool
for monitoring sperm quality in fish. Comparative Biochemistry and Physiology Part C
130 (2001) 425-433.
704
PAN, J.; DING, S.; GE, J.; YAN, W.; HAO, C.; CHEN, J.; HUANG, Y.; Development
of cryopreservation for maintaining yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco sperm.
Aquaculture 279 (2008) 173–176.
IBAMA. Recursos Pesqueiros: Estatística pesqueira, 2007. Brasília. Acesso em 09 abril
de 2012 Disponível em: http://www.ibama.gov.br/.
MARIA, A.N. Diluidores e crioprotetores no resfriamento e congelamento do sêmen de
piracanjuba (Brycon orbignyanus). 2005. 71 p. Dissertação (Mestrado) – Universidade
Federal de Lavras, Lavras, MG.
705
Efeito de meios de refrigeração sobre a motilidade e morfologia do sêmen de
Colossoma macropomum (Cuvier, 1818).
Effect of the cooling media on motility and morphology of Colossoma macropomum
(Cuvier, 1818) sperm.
Larissa Teixeira Nunes1,*, Mayara Setúbal Oliveira1, Fátima de Cássia Evangelista de
Oliveira1, Júlia Trugilio Lopes1, Jordana Sampaio Leite1, Carminda Sandra Brito
Salmito-Vanderley1
1
ABSTRACT
The aim this study was to evaluate the effect of diluent Ringer associated with two
cryoprotectants on sperm motility and morphology of tambaqui until 24 hours of
cooling (4 °C). The sperm was diluted with Ringer (DMSO or MG) and a sample
without dilution (control). To evaluate the spermatic morphology a smear from the fixed
semen and stained with bromophenol blue and the total motility was performed by
CASA. The control with 24 hours of cooling showed higher motility than diluted
samples, but no significant difference (p<0.005) between the percentage of normal
spermatozoa in fresh semen and diluted.
Key words: tambaqui; cooling; spermatic abnormalities.
Palavras-chave: tambaqui; resfriamento; anormalidades espermáticas.
INTRODUÇÃO
O tambaqui, Colossoma macropomum (Cuvier, 1818), pertencente à família
Characidae, é oriundo da Bacia Amazônica, de grande interesse econômico, sendo a
espécie brasileira de maior produção (IBAMA, 2012). Dentre as principais técnicas de
reprodução assistida, o resfriamento seminal é uma técnica simples que promove menor
estresse durante o prolongamento da viabilidade espermática, em temperaturas ao redor
de 4 °C (Dilauro, 1994). Neste trabalho, o objetivo foi avaliar o efeito do diluente
Ringer associado a dois crioprotetores sobre a motilidade e morfologia espermáticas de
tambaqui resfriado até 24 horas de resfriamento (4 ºC).
706
MATERIAL E MÉTODOS
Doze machos da espécie tambaqui, pertencentes ao Departamento Nacional de
Obras Contra as Secas (DNOCS; Pentecoste – Ceará) foram induzidos com extrato
hipofisário de carpa para a coleta seminal. Quatro pools de sêmen foram formados e
diluídos em solução de Ringer modificado para peixe (Rana, 1995) associado ou não a
crioprotetor, totalizando quatro tratamentos: Ringer sem crioprotetor; Ringer + 10% de
Dimetilsufóxido (DMSO); Ringer + 10% de Metilglicol (MG), na proporção de 1:5
(sêmen:diluidor); e in natura (sem diluição representando o grupo controle). As análises
foram realizadas imediatamente após a adição dos diluidores (H0) e 24 horas após a
diluição (H24) e o resfriamento a 4 °C. A determinação da taxa de motilidade
espermática foi por Computer Assisted Sperm Analysis (CASA), e o sêmen foi ativado
com NaCl 50 mM. Para a avaliação morfológica do espermatozoide, o sêmen foi fixado
em solução formol salina-citrato 4% e corado com Azul de Bromofenol para confecção
de esfregaços e posterior observação de 200 espermatozoides em microscópio ótico. Foi
calculada a porcentagem de espermatozoides normais. Os dados foram expressos
como média±desvio padrão e analisados por meio de ANOVA seguido pelo teste de
Tukey (p<0,05), entre os tratamentos, e teste T, entre o tempo de exposição aos
diluidores, utilizando o programa estatístico ASSISTAT® versão 7.6 beta (2012).
A taxa de motilidade obtida no tempo H0 foi significativamente superior
(p<0,05) no sêmen in natura quando comparado ao diluído nos diferentes tratamentos.
Após 24 horas de resfriamento o sêmen in natura apresentou motilidade média acima de
70%, enquanto nas amostras tratadas a maior taxa de motilidade foi de 48%, observado
com Ringer + DMSO. Em todos os tratamentos, no H0 a porcentagem de
espermatozóides morfologicamente normais foi próxima a 90% (p>0,05) e superior a
encontrada em H24 (p<0,05). Em H24 o in natura mostrou-se superior (p<0,05; Tab.1).
A redução da taxa de motilidade no momento da diluição e após um dia de
resfriamento a 4 °C utilizando Ringer já foi descrita na literatura para outras espécies
Characiformes (Moraes, 2004; Maria, 2005). Apesar da importância, poucos trabalhos
avaliam as alterações morfológicas após resfriamento. Maria et al (2006) relatam que a
adição de crioprotetores prolonga a viabilidade do sêmen por mais de 24 horas, porém
faz-se necessário a escolha da combinação ideal entre diluente e crioprotetor.
707
Tabela 1: Taxa de motilidade e porcentagem de espermatozoides de tambaqui
morfologicamente normais no sêmen in natura e diluído em Ringer associado ou não aos
crioprotetores DMSO ou MG no momento da diluição (H0) e após 24 horas de resfriamento
(H24).
Tratamentos
Motilidade (%)
Normais (%)
H0
H24
H0
H24
Ringer
71,5 ± 16,5aA
16,7 ± 6,3ªB
95,2 ± 0,7ªA
80,0 ± 1,0aB
Ringer + DMSO
62,8 ± 4,0aA
48,2 ± 8,9bB
89,5 ± 0,9bA
81,1 ± 1,1abB
Ringer + MG
74,9 ± 9,8ªA
27,4 ± 18,1abB
94,3 ± 1,1ªA
84 ± 3,3bB
in natura
96,62 ± 2,1bA
73,73 ± 12,9cB
95,25 ± 1,1ªA
88,5 ± 0,5cB
Letras minúsculas distintas na mesma coluna e maiúsculas na mesma linha indicam diferença
significativa. (p>0,05).
Nas condições deste trabalho, a adição de Ringer como diluidor, independente
da sua associação com crioprotetores, diminui a qualidade seminal de tambaqui.
AGRADECIMENTOS
FINEP
DILAURO, M.N.; KRISE, W.F.; HENDRIX, M.A.; BAKER, S.E. Short term storage
of Atlantic sturgeon sperm. The Progressive Fish-Culturist, 56(1): 143-144, 1994.
IBAMA. Recursos Pesqueiros: Estatística pesqueira, 2007. Acesso em: 09 de abril de
2011. Disponível em: http://www.ibama.gov.br/.
RANA, K.; GOETZ, F.W. and THOMAS, P. Cryopreservation of aquatic gametes and
embryos: recent advances and Applications, Austin, Texas, USA, 1995. In: Proceedings
on the Reproductive Physiology of Fish, 1995, Fish Symposium. p. 85-89.
piracanjuba (Brycon orbignyanus). 2005. 71p. Dissertação de mestrado. Universidade
Federal de Lavras. Lavras.
MARIA, A.N.; VIVEIROS, A.T.M.; FREITAS, R.T.F.; OLIVEIRA, A.V. Extenders
and cryoprotectants for cooling and freezing of piracanjuba (Brycon orbignyanus)
708
semen, an endangered Brazilian teleost fish. Aquaculture, v. 260, n. 1/4, p. 298–306,
2006.
MORAES, G.F. Resfriamento e congelamento do sêmen de piau-açu (Leporinus
macrocephalus). 2004. 68f. Dissertação (Mestrado) - Departamento de Zootecnia,
Universidade Federal de Lavras, Lavras, MG.
709
Efeitos da indução hormonal sobre as características seminais de Piaractus
brachypomus (pirapitinga)
Effects of hormonal induction on seminal characteristics of Piaractus brachypomus
João Paulo Silva Pinheiro1*, Jordana Sampaio Leite1, Mônica Aline Parente Melo1,
Fátima de Cássia Evangelista de Oliveira1, José Ferreira Nunes1, Carminda Sandra Brito
Salmito-Vanderley1
1
ABSTRACT
The objective of this study was to compare sperm characteristics chemicals, physical,
kinectic and morphological of pirapitinga hormonally induced and not induced. We
selected 16 males (10 hormonally induced, 6 not induced). For collection, the animals
were sedated and semen collected by abdominal massage. The semen was evaluated for
motility, concentration, volume, pH, and morphology. Data were expressed as mean ±
standard deviation and Tukey Test (P<5%). Males induced responded to treatment,
while the non-induced, only three responded. The semen of animals induced and not
induced showed very similar data regarding weight, pH, subjective motility before and
after activation. After induction was noted an increased semen volume and a reduction
in sperm concentration. Regarding morphology, the percentage of normal sperm was
very similar between the animals induced and not induced. It is concluded that the
hormonal induction of the pirapitinga does not interfere with sperm quality, allowing
possible processes of artificial fertilization.
Key words: hypophysation; reproduction; fish.
Palavras-chave: hipofisação; reprodução; peixe.
INTRODUÇÃO
A pirapitinga, Piaractus brachypomus (Cuvier, 1818), é um peixe de rápido
crescimento, grande aceitação no mercado e condições excelentes para a piscicultura
(Fresneda et al., 2004). A reprodução desta espécie em ambientes naturais ocorre por
meio da migração rio-acima (piracema). No entanto, em cativeiro, este movimento é
impossibilitado fazendo-se assim necessário a utilização de técnicas de indução
hormonal, como a hipofisação (Woynarovich & Horvath, 1983). Logo, o objetivo deste
710
trabalho foi comparar as características químicas, físicas, cinéticas e morfológicas do
sêmen de Pirapitinga induzidos e não induzidos hormonalmente.
MATERIAL E MÉTODOS
A pesquisa foi desenvolvida no Departamento Nacional de Obras contra as
Secas (DNOCS) em Pentecoste-CE e no Núcleo Integrado de Biotecnologia na
Universidade Estadual do Ceará. Avaliaram-se doze machos de pirapitinga, seis
induzidos hormonalmente com extrato pituitário de carpa (2mg/Kg de peso corporal) e
seis não induzidos. Para a coleta, os animais foram sedados e o sêmen foi coletado por
meio de massagem abdominal. Logo após a coleta, foi avaliada subjetivamente a
motilidade seminal, antes e após a ativação com água do tanque. Foram ainda
determinados coloração, viscosidade, volume e pH seminal. Uma amostra do sêmen foi
fixada em formol-salino 1% na proporção 1:4000 (sêmen:fixador) para mensuração da
concentração espermática. Outra alíquota foi fixada em solução formol-citrato 4% na
proporção 1:10 (sêmen:fixador) para análises de morfologia das amostras de sêmen dos
animais induzidos e na proporção de 1:40 para as dos não induzidos. Para análise da
morfologia, utilizou-se o corante Azul de Bromofenol e confeccionados esfregaços. Foi
observada a morfologia da cauda (normal, dobrada e enrolada) de 200 espermatozoides
de cada amostra. Os dados de peso, motilidade e morfologia foram expressos em média
± desvio-padrão e pH, volume e concentração espermática foram submetidos ao Teste
de Tukey (ASSISTAT Versão 7.6 beta 2012) com nível de significância de 5%.
Todos os machos induzidos hormonalmente responderam ao tratamento. Dos
machos não induzidos, apenas três espermiaram após massagem. O sêmen dos machos
induzidos apresentou o aspecto seminal branco e não viscoso, enquanto que o sêmen
dos machos não induzidos apresentou aspecto seminal branco e viscoso. O sêmen dos
animais induzidos e não induzidos apresentaram dados semelhantes em relação ao peso
(3,25 ± 0,42 vs 3,17 ± 0,75 kg), pH seminal (8,75 vs 8,83; P < 0,05), motilidade
subjetiva antes da ativação (0,00 ± 0,00 vs 0,00 ± 0,00 %) e motilidade subjetiva após
ativação (100 ± 0,00 vs 100 ± 0,00%) respectivamente. Após a indução hormonal
notou-se um aumento no volume seminal (2,3 vs 0,07 ; P < 0,05) e uma redução na
concentração espermática (9,10 vs 36,67 x 109sptz/mL ; P < 0,05). A morfologia
711
espermática apresentou dados similares entre os animais induzidos e não induzidos
(Cauda normal: 96,15 ± 1,78% vs 92,00 ± 1,41%; Cauda dobrada: 2,50 ± 0,78% vs 6,50
± 0,00; Cauda enrolada: 1,35 ± 1,31% vs 1,50 ± 1,41%, respectivamente). O aumento
no volume seminal e redução na concentração espermática podem ter ocorrido em
virtude do processo de hidratação testicular, gerado pela indução hormonal, como visto
em Colossoma macropomum (Maria et al., 2010) e Brycon orbignyanus (Bedore, 1999).
Quanto às alterações morfológicas decorrentes do processo de indução hormonal, pode
ser observado no presente estudo que não houve diferença em relação aos
espermatozoides dos machos induzidos comparados ao dos não induzidos, diferindo
assim do que é visto em algumas espécies de Characiformes, como pacu, Piaractus
mesopotamicus, (Streit Jr et al., 2006), piapara, Leporinus elongatus, (Streit Jr et al.,
2008b), dourado, Salminus maxillosus, (Streit Jr et al., 2008a).
CONCLUSÃO
Logo, pode-se concluir que a indução hormonal com extrato pituitário de carpa
em Piaractus brachypomus não interfere na qualidade seminal, viabilizando assim,
possíveis processos de fertilização artificial.
AGRADECIMENTOS
FINEP
BEDORE, A.G. (1999). Características e criopreservação do sêmen de pacu-caranha
(Piaractus mesopotamicus) e de Piracanjuba (Brycon orbignyanus). MS Thesis,
Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, Brazil. 53 pp.
FRESNEDA, A.; LENIS, G.; AGUDELO, E.; ANGEL, M. O. Espermiación inducida y
crioconservación de semen de Cachama Blanca (Piaractus brachypomus). Revista
Colombiana de Ciências Pecuárias., v. 17, p. 46-52, 2004. Suplemento.
MARIA, A.N.; AZEVEDO, H.C.; SANTOS, J.P.; CARNEIRO, P.C.F. Hormonal
induction and semen characteristics of tambaqui Colossoma macropomum. Cambridge
University Press, 2010.
STREIT JR., D.P, BENITES, C., MORAES, G.V., RIBEIRO, R.P., SAKAGUTI, E.S.
& CALDIERI, R.F. Sêmen de pacu (Piractus mesopotamicus) criopreservado com
712
diluentes utilizados para sêmen de suínos. Ciência Animal Brasileira, v. 7, p. 289–297,
2006.
STREIT JR., D.P., SIROL, R.N, RIBEIRO, R.P, MORAES, G.V, GALO, J.M. &
DIGMYER, M. Parâmetros qualitativos do sêmen dourado (Salminus maxillosus) em
cativeiro. Boletim do Instituto de Pesca, v. 34, p. 337–344, 2008a.
STREIT JR., D.P., SIROL, R.N., RIBEIRO, R.P., MORAES, G.V., VARGAS, L.D.M.
& WATANABE, A.L. Qualitative parameters of the piapara semen (Leporinus
elongatus Valenciennes, 1850). Brazilian Journal of Biology, v.68, p. 373–377, 2008b.
WOYNAROVICH, E.; HORVATH, L. A propagação artificial de peixes de águas
tropicais. FAO/CODEVASF/CNPq. 1983.
713
Efeitos do diluidor Glicose sobre a taxa de motilidade e morfologia espermática do
sêmen resfriado de tambaqui (Colossoma macropomum)
Effects of Glucose on motility and morphology of cooled tambaqui sperm
Júlia Trugilio Lopes1*; Carminda Sandra Brito Salmito-Vanderley1; Priscila Silva de
Almeida1; José Agenor Soares Galvão2; João Paulo Silva Pinheiro1; José Ferreira
Nunes1
1
Universidade Estadual do Ceará; 2Departamento Nacional de Obras contra as Secas;
ABSTRACT
The aim of this study was to test the effect of 5% Glucose on motility and morphology
of Colossoma macropomum sperm, after zero (H0) and 24 hours (H24) of cooling. One
sperm aliquot was diluted in 5% Glucose and another one was kept undiluted, and then
stored at 4ºC for 24 hours. Immediately after dilution (H0) as H24, the undiluted sperm
showed greater motility rates: 97%(H0) and 78%(H24), than diluted sperm: 78%(H0)
and 15%(H24). Glucose addition does not affect spermatic morphology until 24 hours
of cooling when compared to undiluted sperm but, the motility rates of cooled C.
macropomum sperm decline when Glucose is added.
Key-words: Fish; Characiform; Spermatozoa; Cooling; Extenders
Palavras-chave: Peixe; Characiforme; Espermatozoides; Resfriamento; Diluidor
INTRODUÇÃO
O tambaqui, Colossoma macropomum (Curvier, 1818), é um peixe de origem
Amazônica. É a espécie nativa de maior produção em cativeiro, por possuir grande
apelo comercial e esportivo. Em cativeiro, a qualidade do sêmen é fundamental para o
processo reprodutivo. As avaliações de motilidade e morfologia do espermatozoide são
essenciais para avaliar a qualidade do sêmen. A preservação do sêmen de peixes, por
meio da técnica de resfriamento, visa a manutenção da viabilidade espermática por
horas ou dias, porém existem poucos trabalhos que utilizaram o resfriamento como
método de conservação seminal em espécies nativas brasileiras, apesar de essa
metodologia apresentar resultados promissores (Maria, 2005). No processo de
resfriamento, a diluição do sêmen a ser preservado permite o aumento do volume total
do ejaculado (Derivaux, 1980), porém tais diluidores devem possuir baixa toxicidade
714
para as células e alta solubilidade em água (Maria, 2005). Portanto, esse estudo teve
como objetivo avaliar o efeito da conservação a 4º C do sêmen in natura e diluído em
glicose a 5% sobre a motilidade e morfologia espermáticas do tambaqui, nos tempos 0 e
24 horas de resfriamento.
MATERIAL E MÉTODOS
Foram selecionados 16 machos de tambaqui provenientes do plantel do Centro
de Pesquisa em Aquicultura do Departamento Nacional de Obras Contra as Secas
(CPAq/DNOCS). Doze horas após a indução hormonal, o sêmen foi coletado e mantido
em caixa térmica a 4°C. Em seguida, realizou-se a ativação de cada amostra de sêmen e
as amostras com motilidade ótima (>80%) foram selecionadas para a composição de
quatro pools, transportados até o Núcleo Integrado de Biotecnologia, Fortaleza, CE. Os
pools foram separados em duas alíquotas – uma delas diluída em solução Glicose a 5%,
numa proporção de 1:5 (sêmen:diluidor) e a outra mantida in natura. A motilidade
espermática foi objetivamente avaliada utilizando a Analise Seminal Assistida por
Computador (CASA) no momento da diluição (H0) e após 24 horas de resfriamento a
4ºC (H24). Para a análise da morfologia, uma alíquota de cada pool, diluído e in natura,
foi fixada em solução formol-citrato a 1% na proporção de 1:10 (sêmen:fixador). Foram
confeccionados esfregaços de cada tratamento, corados com o corante azul de
bromofenol. Duzentos espermatozoides de cada lâmina foram analisados em
microscópio ótico e classificados quanto à presença de patologias. Calculou-se a
porcentagem de espermatozóides normais em cada tratamento. Os dados foram
expressos como média±desvio padrão e analisados por meio de análise de variância,
seguida pelo teste de Tukey (p<0,05).
A porcentagem de espermatozoides móveis obtida no momento da diluição (H0),
foi de 97,1±1,7% para o sêmen in natura, e 80,9±10,5% para o sêmen diluído em
glicose. Após 24h da diluição (H24), a taxa de motilidade do sêmen in natura foi de
78,6±5,5, enquanto o sêmen diluído apresentou 15,7 ±4,1% de espermatozoides móveis.
A diminuição da média da motilidade espermática no momento da diluição seminal e
após um dia de resfriamento a 4 °C foi, também, observada por Oliveira (2006),
715
trabalhando com o sêmen de Salminus maxillosus diluído em glicose 5%, e por Maria
(2006) quando o sêmen de Brycon orbignyanus foi diluído em solução Kurokura.
Porém, Murgas et al. (2007) afirmam que a incorporação de diluentes é fundamental
para proporcionar meio osmótico e nutricionalmente ideal aos espermatozóides durante
a aplicação da biotecnologia. O sêmen in natura, em H0, apresentou 95,8±1,0% de
espermatozoides morfologicamente normais, e o sêmen diluído apresentou 93,7±1,3%
(p<0,05). Em H24, a porcentagem de espermatozoides morfologicamente normais foi de
88,7±0,5% para o sêmen in natura e de 90,0±0,7% para o sêmen diluído (p>0,05). No
entanto a porcentagem de espermatozoides normais foi inferior em H24 quando
comparada a H0 (p<0,05). A avaliação dos parâmetros morfopatológicos seminais é
raramente analisada nos processos que envolvem manipulação de gametas, muito
embora, as anormalidades morfológicas possam causar sensível redução na motilidade
dos mesmos e, consequentemente, perda da capacidade de fertilização (Moraes, 2004).
A adição de glicose provoca redução da motilidade seminal de tambaqui. A
morfologia espermática é afetada pelo processo de resfriamento e, não há influência da
adição de glicose sobre esta após 24 horas de resfriamento. Porém, a realização de
outros estudos se faz necessária para avaliar os efeitos da glicose sobre o prolongamento
da qualidade seminal após um período maior de conservação.
AGRADECIMENTOS
FINEP
DERIVAUX, J. Reprodução dos Animais Domésticos. Zaragoza, Editora Acribia, 1980.
Piracanjuba (Brycon orbignyanus). 2005. 84p. Dissertação do Programa de PósGraduação em Zootecnia, Universidade Federal de Lavras.
MORAES, G.; STREIT Jr., D.; RIBEIRO, R.; SAKAGUTI, E.; SOUZA, E.; POVH, J.
Ação de diferentes indutores reprodutivos hormonais no aparecimento de anormalidades
morfológicas em espermatozóides de piavuçu (Leporinus macrocephalus), Curimbatá
716
(Prochilodus lineatus) e carpa comum (Cyprinus carpio).Boletim Instituto da Pesca. v.
30, n. 2, p. 109-116, 2004.
MURGAS, L.D.S; MILIORINI, A.B; FREITAS, R.T.F. DE; PEREIRA, G.J.M.
Criopreservação do sêmen de curimba (Prochilodus lineatus) mediante adição de
diferentes diluidores, ativadores e crioprotetores. Revista Brasileira de Zootecnia. v. 36,
n. 3, p. 526-531, 2007.
OLIVEIRA, A.V. Resfriamento e criopreservação do sêmen de dourado Salminus
maxillosus e de pirapitinga Brycon nattereri. 2006. 94 p. Dissertação - Universidade
Federal de Lavras – Lavras: UFLA.
717
Motilidade do sêmen de Piaractus brachypomus utilizando soluções ativadoras
com diferentes osmolaridades
Piaractus brachypomus semen motility using an activator at different osmolarities
Juliana Carollyne Moreira Jorge*1; Rômulo Roberto Ribeiro Pinheiro; Mônica Aline
Parente Melo-Maciel; Júlia Trugilio Lopes; José Agenor Soares Galvão; Carminda
Sandra Brito Salmito-Vanderley
1
*Email:[email protected]
ABSTRACT
The objective of this study was to evaluate the effect of osmotic activation solution on
the rate and duration of sperm motility of Pirapitinga (Piaractus brachypomus). Four
pools were obtained from the semen of sixteen animals. Each pool was added in three
different activation solutions (distilled water, 50 mOsm NaCl or 100 mOsm NaCl) the
sperm motility and duration were analized by optical microscopy. There were no
differences in motility among different treatments. The time of motility after addition
of distilled water was lower in relation to the activator 50 and 100 mOsm NaCl (2.7,
10.6 and 57.7 min, respectively, p <0,05). Therefore, the 100 mOsm NaCl solution is
best for the activation of sperm of this species.
Key-words: fish; sperm; activator; motility duration
Palavras-chave: peixe, sêmen, ativador, duração da motilidade
INTRODUÇÃO
A
Pirapitinga, Piaractus brachypomus (Cuvier,1818),
é
uma
espécie
characiforme brasileira de grande importância ecológica e comercial, por isso estudos
estão sendo realizados para o aprimoramento de sua reprodução assistida. Dentre os
parâmetros a serem considerados na análise da qualidade do sêmen de peixes, a
motilidade espermática é um dos principais (Solis-Murgas et al., 2011).
Os espermatozoides de espécies dulcícolas não possuem motilidade dentro dos
testículos e sua ativação é realizada por meio do contato com uma solução
hiposmótica, permanecendo móveis por um curto período de tempo (Marques et al,
2001). A hipotonicidade é um dos principais fatores que afetam a indução da
motilidade em peixes de água doce (Stoss, 1983). Esse trabalho se justifica pela
718
necessidade de se conhecer os efeitos de diferentes osmolaridades da solução ativadora
(NaCl) sobre a motilidade do sêmen de pirapitinga, visando estabelecer um protocolo
adequado de ativação seminal para uma posterior fertilização. Portanto, o objetivo
deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes osmolaridades da solução ativadora
sobre a taxa e tempo de motilidade dos espermatozoides de pirapitinga.
MATERIAL E MÉTODOS
O trabalho foi realizado no Centro de Pesquisas em Aquicultura do
Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (Pentecoste-CE) e no Núcleo
Integrado de Biotecnologia na Universidade Estadual do Ceará. Utilizou-se 16 machos
adultos de pirapitinga com reprodução induzida por extrato hipofisário de carpa
(EHC).
O sêmen foi coletado por massagem abdominal e foram formados quatro pools
de sêmen. Cada pool foi avaliado quanto a taxa de motilidade espermática (%) e o
tempo de motilidade (min) após a adição de soluções ativadoras na proporção 1:50
(sêmen: ativador) em diferentes osmolaridades: água destilada, NaCl 50 mOsm, NaCl
100 mOsm. A taxa de motilidade foi avaliada por meio do sistema SCA (Sperm Class
Analizer), e a duração da motilidade em microscópio óptico. Os dados apresentados
como média ± desvio padrão foram submetidos à análise de variância seguido pelo
teste de Tukey (p<0,05), utilizando o programa estatístico ASSISTAT® versão 7.6 beta
(2012).
A melhor solução ativadora da motilidade espermática é aquela na qual o
sêmen atinge maior taxa de motilidade associada ao maior tempo de duração desta
(Marques et al., 2001). Neste trabalho, as taxas de motilidade não foram afetadas pela
osmolaridade dos ativadores, variando de 90 a 93% (p>0,05).Porém, o tempo em que
os espermatozoides permaneceram móveis variou com a osmolaridade dos ativadores
(p<0,05), de forma que a adição de água destilada promoveu um rápido decréscimo da
motilidade (~2 min). Os espermatozoides ativados com soluções de NaCl apresentaram
maior tempo de motilidade em relação à agua destilada. A adição de NaCl 50 mOsm
promoveu um tempo de motilidade médio de 10 min, enquanto que os
espermatozoides ativados com NaCl 100 mOsm apresentaram tempo de motilidade
719
superior aos dos outros ativadores (~57min). Os valores médios de espermatozoides
móveis e o tempo de motilidade espermática estão expressos na Tabela 1.
Tabela 1: Efeitos de diferentes ativadores no percentual de móveis e no tempo de motilidade
de espermatozoides de pirapitinga. (Piaractus brachypomus).
Ativadores
Espermatozoides
(%)
Móveis
Tempo de Motilidade (min)
Água Destilada
90,1 ± 5ª
2,73 ± 2,99a
NaCl 50mOsm
91,9 ± 2a
10,60 ± 1,85a
NaCl 100mOsm
93,4 ± 3a
57,74 ± 10,67b
Letras minúsculas distintas, na mesma coluna, indicam diferença significativa (P<0,05) entre
os tratamentos.
Em muitos animais, a hipotonicidade é prejudicial à estrutura do
espermatozoide e à duração motilidade da espermática (Maggese et al., 1984). Isto foi
observado por Billard et al (1995), onde verificaram que uma solução de NaCl
proporcionou menor desorganização da estrutura do flagelo espermático de carpa que a
água destilada, e a mudança osmótica gerada pela solução salina foi suficiente para
iniciar uma motilidade mais duradoura. Neste trabalho, esta relação entre a
osmolaridade da solução ativadora e o tempo de motilidade dos espermatozoides
também pode ser observado.
CONCLUSÃO
Dentre os ativadores testados neste trabalho, a solução de NaCl 100 mOsm é a
mais indicada para a reprodução assistida desta espécie, pois garantiu uma alta taxa de
espermatozoides móveis e a maior duração da motilidade.
AGRADECIMENTOS
FINEP
BILLARD, R.; COSSON, J.; PERCHEC, J.; LINHART, O. Biology of sperm and
artificial reproduction in carp. Aquaculture, Amsterdam, v. 29, n. 1/4, p.95-112, Jan.
1995.
720
MAGGESE, M.C.; CUKIER, M.; CUSSAC, V.E. Morphological changes, fertilizing
ability and motility of Rhamdia sapo (Pisces, Pimelodidae) sperm induced by media of
different salinities. Revista Brasleira Biologia, v.44, n.4, p.541-546, 1984.
MARQUES, S. Prazo a curto prazo do sêmen de teleósteos neotropicais de agia doce.
2001. 98f. Dissertação (Mestrado de Zoologia de Vertebrados) – Pontifícia
Universidade Católica de Minas Gerais, Programa de Pós Graduação em Zoologia,
Belo Horizonte, 2001.
SOLIS-MURGAS, L.D.; FELIZARDO, V.O.; FERREIRA, M.R.; ANDRADE, E.S.;
VERAS, G.C. Importância da avaliação dos parâmetros reprodutivos em peixes
nativos. Revista Brasileira de Reprodução Animal. v.35, n.2, p.186-191, 2011.
STOSS, J. Fish gamete preservation and spermatozoa physiology. In: HOAR, W. S.,
RANDALL, D. J., DONALDSON, E. M. (eds.). Fish physiology. v.9. London: B.
Academic Press, 1983. Cap.6, p.305-350.
721
Relação peso-comprimento e fator de condição (kn) no período reprodutivo do
Arapaima gigas (Schinz, 1822) em cativeiro
Length-weight relationship and condition factor (kn) in the reproductive period of
Arapaima gigas (Schinz, 1822) in captivity
Perila Maciel Rebouças1*, José Antonio Delfino Barbosa Filho1, Meirelane Chagas da
Silva1, Carine Belarmino do Nascimento1, Marília Lessa de Vasconcelos Queiroz1, José
Agenor Soares Galvão2
1
Universidade Federal do Ceará - Centro de Ciências Agrárias; 2 Departamento
Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS);
ABSTRACT
The study was conducted at the National Department of Works Against Drought located
in Pentecoste-Brazil. It was analyzed the length-weight relationship and condition factor
of 68 Arapaima gigas. Couples were formed in a ratio of one male to one female, stored
in nurseries with area of 350m² and 400m2. The animals were fed with commercial feed
(32 crude protein) and fish paste. The compare means carried by the Tukey test, with
factorial (2x2), two genders (male and female) and two types of nurseries (350m2 and
400m2). The results showed that in both treatments the fishes were subjected to the
same welfare, affirmed by the values of Kn, confirming the not negative influence in the
reproductive period cultivated.
Key words: fulton’s condition; pirarucu; reproduction
Palavras-chave: condição de fulton; pirarucu; reprodução
INTRODUÇÃO
O fator de condição é um indicador quantitativo do bem-estar de peixe, partindo
do pressuposto que indivíduos com maior massa em um dado comprimento estão em
melhores condições (Le Cren, 1951). Estudos que correlacionem este parâmetro em
pirarucu, espécie de potencial reprodutivo, e sua disseminação são escassos. Portanto, o
objetivo deste trabalho foi verificar a relação peso-comprimento e fator de condição
como indicadores de bem-estar no período reprodutivo do pirarucu em cativeiro.
722
MATERIAL E MÉTODOS
Foram utilizados 68 reprodutores (34 fêmeas e 34 machos), com 5 anos de idade
e identificados quanto ao sexo pela diferenciação da coloração das escamas. Cada casal
reprodutor selecionado, foi estocado em 17 viveiros escavados de 350m² (T1) e 17
viveiros escavados de 400m² (T2), obedecendo à relação de 1 macho e 1 fêmea para
cada viveiro. A dieta foi composta por ração comercial extrusada, contendo 32% de PB
e pasta de peixe, obtida pela trituração de tilápia, utilizada na proporção de 20% da
ração, compactados em prensa manual, oferecida em 2 tratos diários. Após o período de
reprodução foi realizada a despesca e biometria (peso e comprimento). Esses dados
foram utilizados para o cálculo do fator de condição relativa (kn) e da relação pesocomprimento, realizado através da equação Pt=aCb, onde Pt é o peso total em
gramas e C o comprimento padrão (Cp) em cm, a e b são constantes, sendo comparado
com o padrão Kn=1.00 (Le Cren, 1951). A análise estatística foi aplicada através de
fatorial (2x2) sendo dois gêneros (masculino e feminino) e dois tipos de viveiros (350m2
e 400m2) pelo software Assistat 7.6, sendo a comparação das médias realizada pelo teste
de Tukey.
RESUTADOS E DISCUSSÃO
Os reprodutores dos viveiros de 350m2 (T1) apresentaram peso médio 56,65kg
(±0,82) e comprimento médio de 174,85cm (±1,14). Já os reprodutores dos viveiros de
400m2 (T2) apresentaram médias de 52,46kg (±0,94) e de comprimento de 169,02cm
(±2,0) para peso e comprimento, respectivamente (Tab. 1). De acordo com o Kn, em
ambos os viveiros, os peixes apresentaram a mesma condição de bem-estar, não
havendo diferença significativa entre tratamentos ou entre gêneros (Tab. 2). A média de
valores de Kn esteve próxima de 1,0,indica que esses animais estariam em boas
condições de cultivo, pois quanto maiores os valores do Kn melhores são as condições
de bem-estar dos peixes no ambiente (Le Cren, 1951). Tavares- Dias et al.(2010),
relataram dois resultados similares onde a relação peso-comprimento e Kn dos pirarucus
provenientes de cultivo semi-intensivo em diferentes ambientes demonstraram uma
variação média de 1.007 ± 0.059, indicando que o peso real é maior que o estimado e
em outro estudo, também foram encontrados valores elevados de Kn para A. gigas
(1.002 ± 0.072) criados durante 16 meses em estufa em São Paulo em sistema fechado
de recirculação de água.
723
Tabela 1. Médias de peso e comprimento de Pirarucu em dois modelos de viveiros.
Peso
Comprimento
T1
56,65±0,82ª
174,85±1,14ª
T2
52,46±0,94b
169,02±2,00b
Médias seguidas de mesma letra nas colunas não diferem entre si, pelo Teste de Tukey, a 1% de
probabilidade.
Tabela 2. Síntese para analise de variância para as variáveis dependentes de comprimento, peso
e fator kn para macho e fêmea criados em dois modelos de viveiros.
Comprimento
Peso
Kn
Gênero (G)
0,12ns
0,27 ns
0,3 ns
Tipo de viveiro (T)
6,17**
10,94**
0,96 ns
GxT
0,01 ns
0,13 ns
0,03 ns
Resíduo
93,34
27,23
0,03
Média
54,55
171,94
0,99
CV
5,61
9,56
17,96
** significativo a 0,05 pelo teste F, ns Não significativo pelo teste F, Coeficiente de variação.
CONCLUSÕES
Desta forma, conclui-se que ao se utilizar um viveiro de 400m², este estaria
sendo subutilizado, pois oferece as mesmas condições de bem-estar que um de 350m².
A relação peso-comprimento e fator de condição pode ser utilizada como indicador de
bem-estar em reprodutores de pirarucu criados em cativeiro.
LE CREN, E. D. The lenght-weight relationship and seasonal cycle in gonad and
conditions in the perch (Perca fluviatilis). Journal of Animal Ecology, v. 20, p.201-219,
1951.
TAVARES-DIAS M.; ARAÚJO C. S. O.; SANNY A. L. S. G.; ANDRADE M. S.
Relação peso-comprimento e fator de condição relativo (Kn) do pirarucu Arapaima
gigas Schinz, 1822 (Arapaimidae) em cultivo semi-intensivo no estado do Amazonas,
Brasil. Revista Brasileira de Zoociências, v. 12, n. 1, p. 59 - 65, 2010.
724
Uso de incubadoras confeccionadas de garrafas de pet na reprodução artificial de
tambaqui
Use of hatcheries made from pet bottles on the artificial reprodution of tambaqui
Silvio Alencar Cândido Sobrinho1*, Liliane Veras Leite1, Francisco Renan Aragão
Linhares1, Fátima Cássia Evangelista de Oliveira1, Mayara Setúbal Oliveira1, Carminda
Sandra Brito Salmito Vanderley1
1
ABSTRACT
The tambaqui, Colossoma macroporum, is a fish of great ecological and commercial
interests, so information and strategies for artificial reproduction is essential for
aquaculture in Brazil. The main objective was evaluate hatcheries made from pet bottles
of 2.5 L, with a final volume of 2 L in parallel with traditional fiberglass incubators of
20 L so a comparison was made to determine the feasibility of alternative laboratorial
methodology and commercial hatching of eggs. The gametes were collected from
hormonally induced breeders where subsequently underwent in vitro fertilization and
development was monitored in stereoscopic until hatching. A Tukey Test (5%) was
applied to evaluate the media differences and it have not a significant difference. The
pet hatcheries on tambaqui artificial fertilization have shown as same statistics as
traditional hatcheries so it can be used on experiments or small productions.
Key words: Colossoma macroporum; alternative breeding; embryo development.
Palavras-chave: Colossoma macroporum; criação alternativa; embriogênese.
INTRODUÇÃO
A Aquicultura consiste no cultivo de organismos aquáticos em áreas continentais
ou costeiras, envolvendo intervenção no processo de criação para aprimorar a produção
(FAO, 2008).
O tambaqui (Colossoma macropomum, Curvie 1818) é um peixe migrador
brasileiro e representa a espécie de maior produção na aquicultura brasileira entre os
nativos de água doce (IBAMA. 2007). Investimento em pesquisas de novas tecnologias
na fertilização artificial visam a maior eficiência reprodutiva por meio da otimização do
uso dos reprodutores e de seus gametas.
725
A reprodução artificial desta espécie é realizada pelo método de fertilização a
seco e utilização de incubadoras (KUBTZA, 2004). Em experimentação, a utilização de
incubadoras de baixo volume se torna necessária, pois além de possibilitar o aumento
do número de unidades experimentais, também permite um maior controle do
experimento. Este trabalho objetivou testar a eficiência de uma incubadora de baixo
volume, confeccionada a partir de matérias de baixo custo financeiro, na fertilização
artificial de tambaqui.
MATERIAL E MÉTODOS
Foram confeccionadas incubadoras utilizando garrafas de pet (polietileno
tereftalato) invertidas de 2,5 L (volume útil de 2 L) com telas nas laterais e fluxo de
água constante de baixo para cima, a fim de manter os ovos sob suave turbilhonamento.
Como controle, foram utilizadas incubadoras tradicionais de fibra de vidro, cônicas de
fluxo contínuo e capacidade de 20 L, utilizadas nas fertilizações artificiais de tambaqui
e outras espécies de peixes (KUBTZA, 2004).
Para obtenção dos gametas, foram selecionadas duas fêmeas e cinco machos
provenientes do Centro de Pesquisas em Aquicultura (CPAq) do Departamento
Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS), Pentecoste – Ceará, os quais receberam
tratamento hormonal com Extrato de Hipófise de Carpa (EHC). A coleta dos gametas
ocorreu através de massagem abdominal para formação de um pool de sêmen e um pool
de ovócitos.
Os ovócitos foram divididos em amostras (n=4) de 5g e de 50g que foram
fertilizadas com alíquotas de 40µL e 400µL do pool de sêmen, respectivamente. Após a
mistura dos gametas, as amostras de 5g receberam 40mL de água do tanque onde
permaneceram por cinco minutos, para a ativação dos espermatozoides, e
posteriormente os ovos foram transferidos para incubadoras de garrafas de pet. As
amostras de 50g foram hidratadas com 400mL de água do tanque permaneceram sob
hidratação também por cinco minutos, e posteriormente transferidas para incubadoras
tradicionais. Em ambos os casos, os ovócitos foram fertilizados com dose de 100.000
espermatozoides/ovo (LEITE, 2012).
Para avaliar as taxas de fertilização nas diferentes incubadoras foram
considerados ovos fertilizados aqueles que ultrapassaram o estágio de gástrula (357
horas-grau). A porcentagem de ovos fertilizados foi calculada através da observação de
726
300 ovos de cada incubadora por estereoscopia. As taxas de fertilização foram expressas
em Média±Desvio Padrão e comparadas pelo teste de Tukey (5%), com o programa
ASSISTAT 7.6 beta (2012).
As incubadoras de garrafas de pet demostraram ser eficientes pois a taxa média
de fertilização observada nestas incubadoras foi de 82±9.50%, sendo semelhante a
observada
nas
incubadoras
tradicionais,
88±8.5%
(p>0,05).
O
padrão
de
desenvolvimento embrionário foi semelhante em todas as amostras, não sendo
observada diferença da qualidade dos embriões entre as incubadoras de pet ou
tradicionais. Além disso, as incubadoras de garrafa de pet foram de fácil confecção,
além utilizar material reciclado e possuir um baixo custo (R$6,79 por unidade) em
relação às incubadoras tradicionais (R$4.820 por unidade, MFRural). Como cada
amostra foi criada simultaneamente e submetidas às mesmas condições, observou-se
que o volume das incubadoras não interfere no sucesso de reprodução, contanto que se
respeitem detalhes como a simulação de correntezas pela turbulência da água, por
exemplo.
CONCLUSÃO
Os resultados mostraram que a incubadora confeccionada de garrafa de pet é
viável para fertilização artificial de tambaqui, podendo ser adotada experimentalmente
ou por pequenos produtores.
AGRADECIMENTOS
FINEP
FAO, FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION. The State of World Fisheries
and Aquaculture. 2010. Rome, Italy. p. 3
BRASIL, IBAMA – Recursos Pesqueiros: Estatística da pesca, 2007. Acesso em 6 de
abril
de
2012.
Disponível
em:
<http://www.ibama.gov.br/phocadownload/category/40?download=4156%3Aestatsticapesqueira>
727
KUBTZA, F. Coletânea de informações aplicadas ao cultivo do tambaqui, do cau e de
outros peixes redondos. Panorama da aquicultura. v.12, n.82, p 27-39, 2004.
LEITE,
Liliane
Veras.
DOSE
INSEMINANTE,
EMBRIOGÊNESE
E
CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN DE TAMBAQUI (Colossoma macropomum).
Dissertação – Curso de Pós-graduação em Ciências Veterinárias, Universidade Estadual
do Ceará.
MFRural,.
Acesso
em
27
de
Abril
de
2012
Disponível
em:
<http://tinyurl.com/MFRural-cod94837>
728
Utilização de diferentes diluidores no processo de resfriamento seminal de
Tambaqui, Colossoma macropomum
Use of different cooling media in the cooling process of the tambaqui sperm, Colossoma
macropomum
Jordana Sampaio Leite*1, João Paulo Silva Pinheiro1, Liliane Veras Leite1, Francisco
José Lopes Cajado1, Larissa Teixeira Nunes1, Carminda Sandra Brito SalmitoVanderley1
1
ABSTRACT
The objective of the present study was comparing the different cooling media used in
the cooling process of tambaqui sperm. The animals were induced with carp pituitary
extract to form four pools of sperm. The sperm samples were analyzed for motility rate,
sperm curvilinear velocity (VCL) and mophopathologies rate at the time of dilution
(T0) and after 24 hours kept at 4 ° C (T24). The fresh semen showed an average
percentage of motility rate 97% and 78% at T0 and T24 after cooling (P<0,05). The
semen in natura maintained the vitality and sperm morphological parameters for up to
24 hours of cooling. The association of glucose with cryoprotectants DMSO or
methylglycol in this study did not provide protection to sperm during cooling at 4 ° C
for 24 hours.
Key-words: freezing media; mophopathologies; fish.
Palavras-chave: diluidores; morfopatologias; peixe.
INTRODUÇÃO
O tambaqui, Colossoma macropomum (Curvier, 1818), é um peixe originário da
Bacia Amazônica que apresenta uma boa adaptação ao cativeiro, facilitando, assim, o
cultivo. O resfriamento seminal é um método de preservação de sêmen de peixes que
apresenta baixa complexidade e possibilita grande aplicação prática nos procedimentos
de reprodução (Sanches, et al 2011). Porém, para o sucesso dessa técnica tornam-se
necessárias avaliações sobre condições de estocagem e diluidores que possibilite a
redução do metabolismo sem que haja danos às células espermáticas.
729
Desse modo, o presente estudo tem como objetivo comparar a utilização de
diferentes diluidores no processo de resfriamento seminal de tambaqui.
MATERIAL E MÉTODOS
Foram utilizados 16 reprodutores da espécie tambaqui do Centro de Pesquisas
em Aqüicultura (CPAq) pertencente ao Departamento Nacional de Obras Contra as
Secas (DNOCS). Os animais foram induzidos com extrato hipofisário de carpa para
confecção de quatro pools de sêmen. Posteriormente, cada pool foi diluído na proporção
de 1:5 (sêmen:diluidor) em solução de glicose à 5% adicionada de Dimetilsufóxido ou
Metilglicol. Uma amostra foi mantida in natura para compor o grupo controle.
As amostras seminais foram analisadas quanto à taxa de motilidade, velocidade
espermática curvilinear (VCL) e taxa de morfopatologias no momento da diluição (T0)
e após 24 horas mantidas à 4 °C (T24). Os parâmetros de motilidade foram analisados
através de Analise Seminal Assistida por Computador (CASA). Para a avaliação da
morfologia, as amostras foram fixadas em solução formol salina-citrato 4% e corados
com Azul de bromofenol para observação de 200 espermatozoides em microscopia
óptica. Os dados foram expressos como media ± desvio padrão e analisadas por meio de
análise de variância seguido pelo teste de Tukey (p<0,05) utilizando o programa
estatístico ASSISTAT® versão 7.6 beta (2012).
RESULTADO E DISCUSSÃO
O sêmen in natura apresentou uma porcentagem média de motilidade de 97% e
78% no T0 e T24 após o resfriamento, respectivamente. Também o sêmen diluído nos
diferentes diluidores apresentou redução na porcentagem de espermatozoides móveis
em ambos os tempos analisados (P<0,05). No T24 o sêmen in natura foi superior ao
sêmen diluído (P<0,05). A velocidade curvilinear apresentou redução em todos os
tratamentos no T24 (P<0,05). Segundo Viveiros et al. (2010), esta velocidade apresenta
grande correlação com a capacidade fertilizante. A redução da motilidade após a
diluição em glicose associado à DMSO já foi relatada por Oliveira (2006) em sêmen de
dourado com redução de 10% na motilidade após diluição. Maria et al. (2006),
utilizando diluentes simples e mais complexos associados a diferentes crioprotetores
730
(metanol, DMSO ou Metilglicol) também observaram que após 24 horas de
resfriamento ocorreu queda de 30% a 100% na motilidade espermática de piracanjuba.
Em relação à porcentagem média de patologias espermáticas do sêmen in natura
e diluído em diferentes diluidores no T0, todos apresentaram a porcentagem média de
espermatozoides normais acima de 95%, porém ao avaliar após 24 horas de
resfriamento observou que ocorreu redução no percentual de normalidades espermáticas
(P<0,05). Há poucos trabalhos sobre o efeito da diminuição da temperatura sobre a
morfologia espermática, apesar de conhecer a importância desse parâmetro (Moraes et
al., 2004).
CONCLUSÃO
O sêmen in natura mantêm a vitalidade espermática e parâmetros morfológicos
por até 24 horas de resfriamento, e a associação da glicose com crioprotetores DMSO
ou Metilglicol, nesse estudo, não promoveu proteção aos espermatozoides durante o
resfriamento a 4 °C por 24 horas.
AGRADECIMENTOS
FINEP
MARIA, A.N.; VIVEIROS1, A.T.M.; ORFÃO, L.H., OLIVEIRA, A.V., MORAES,
G.F. Effects of cooling and freezing on sperm motility of the endangered fish
piracanjuba Brycon orbignyanus (Characiformes, Characidae). Anim. Reprod., v.3, n.1,
p.55-60, Jan./Mar. 2006
MORAES, G.; STREIT Jr., D.; RIBEIRO, R.; SAKAGUTI, E.; SOUZA, E.; POVH, J.
Ação de diferentes indutores reprodutivos hormonais no aparecimento de anormalidades
morfológicas em espermatozóides de piavuçu (leporinus macrocephalus), Curimbatá
(prochilodus lineatus) e carpa comum (cyprinus carpio). Boletim Instituto da Pesca. v.
30, n. 2, p. 109-116, 2004.
OLIVEIRA, A.V. Resfriamento e criopreservação do sêmen de dourado Salminus
maxillosus e de pirapitinga Brycon nattereri. Dissertação - Universidade Federal de
Lavras – Lavras: UFLA, 94 p. 2006.
731
SANCHES, E.G.; CERQUEIRA,V.R.; Preservação de sêmen refrigerado de cioba com
diluentes e atmosfera modificada . Pesq. agropec. bras., Brasília, v.46, n.12, p.16731680, dez. 2011.
VIVEIROS, A.T.M.; NASCIMENTO, A.F.; ORFÃO, L.H.; ISAÚ, Z.A. Motility and
fertility of the subtropical freshwater fish streaked prochilod (Prochilodus lineatus)
sperm cryopreserved in powdered coconut water. Theriogenology, 74:551-556, 2010.
732
Zoneamento térmico de áreas aptas para reprodução de Oreochromis niloticus no
estado do Maranhão.
Thermal zoning of suitable areas for reproduction Oreochromis niloticus in the state
of Maranhão.
Ana Karolina Ribeiro Sousa1; Jorgelia de Jesus Pinto Castro1*; Dayane de Jesus Valois
Lima1; Maria José Bouéres Damasceno Neta1; Bruna Aguiar Campelo1; Erivania
Gomes Teixeira1
1
Universidade Estadual do Maranhão.
ABSTRACT
This study demonstrated monthly mapping for average temperature for the last 30
years and identified favorable areas to the production of tilapia fingerlings through
thermal zoning in the State of the Maranhão. We used orbital data from thirteen
weather stations of the Maranhão and the temperature variation was obtained by
thermal maps zoning with the application Surf program and the suitable regions for
tilapia production according to the requirements of the specie was designed. The result
were expressed as maps quarterly and suggested that the North and Northwest have
temperature range suitable for tilapia production. This proves the potential of the State
of the Maranhão for culture of the specie.
Key-words: pisciculture, tilapia, culture, mapping
Palavras-chave: Piscicultura, tilápia, cultivo, mapeamento
INTRODUÇÃO:
A característica climática predominante no Maranhão é configurada como
tropical. As temperaturas médias anuais são superiores a 24°C, enquanto os índices
pluviométricos variam entre 1500 e 2500 mm anuais. Outro fator condicionante do
clima no Estado é sua posição geográfica, dividida entre a área situada no complexo
amazônico, ao noroeste, onde o clima tende à equatorial, e a área situada na região
semi-árida do Nordeste brasileiro (RABELO J.M & SILVA F. S, 1999). O estado do
Maranhão devido a sua posição geográfica apresenta condições favoráveis para cultivo
de várias espécies de peixes.
733
A reprodução controlada e a produção de juvenis saudáveis são fundamentais
para viabilização de qualquer cultura com objetivo de produzir uma espécie em
cativeiro (SAMPAIO et al., 2010). De acordo com o mesmo autor, o ganho em peso
de uma determinada espécie, pode ser incrementado com o emprego de rações mais
apropriadas, porém isto depende de condições favoráveis, como temperaturas
adequadas de manutenção do organismo em cultivo.
A temperatura da água é considerada uma das variáveis ambientais mais
importantes, por afetar diretamente o metabolismo e consequentemente, o consumo de
oxigênio, o crescimento e a sobrevivência dos organismos. Desta maneira, o presente
trabalho teve por objetivo demonstrar o mapeamento mensal da temperatura média nos
últimos 30 anos e identificar áreas propicias para a produção de alevinos de tilápias
através de zoneamento térmico em condições normais no estado do Maranhão.
MATERIAS E MÉTODOS
Foram coletados e analisados dados de treze estações meteorológicas. Estes
foram organizados em planilha do Microsoft Office Excel (versão 2007) para avaliação
da temperatura média nos últimos 30 anos em todo o Estado do Maranhão.
Posteriormente os mapas meteorologicos foram construídos por meio do programa
SURF que estipulou a distribuição de temperatura em determinadas regiões.
RESULTADOS
O mapeamento foi dividido em quatro trimestres (Fig. 1). Nos primeiros meses
as regiões norte, nordeste e noroeste mostraram possuir temperaturas superiores ao
restante do estado, tendo sua máxima de 26,8°C, sugerindo que estas áreas são
favoráveis a reprodução da espécie neste período enquanto que a região centro-oeste
está fora da temperatura limite que é de 26°C. No segundo trimeste, uma pequena
parte da região centro-oeste também apresentou uma faixa média de temperatura
semelhante a anterior, entre 26°C e 27°C, entretanto o mapeamento das regiões sul e
sudeste apresentaram temperaturas abaixo de 26°C com minima 25,02°C, o que pode
interferir negativamente na reprodução e consequentemente na produção de alevinos
de tilápia. Os meses de julho a dezembro (terceiro e quarto trimestre) foram
caracterizados pelo período de estiagem no Maranhão, quando grande parte do estado
possui temperatura ótima (26°C a 28°C) para a reprodução de Oreochromis niloticus
734
(PARIZOTTO & BRIANESE, 2004), exceto numa pequena parte do centro-oeste nos
meses de agosto e setembro.
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2° TRIMESTRE
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3° TRIMESTRE
4° TRIMESTRE
Fig. 1: mapeamento da média de temperatura dos últimos 30 anos no Maranhão.
CONCLUSÃO
O mapeamento sugere que as regiões Norte e Noroeste do Maranhão possuem faixa
térmica adequada para produção de alevinos de tilápia durante todo o ano, o que
comprova o potencial do estado para cultivo da espécie, principalmente nas regiões
mencionadas.
AGRADECIMENTO
CAPES , Geonúcleo-UEMA.
PARIZOTTO, M. L.V; BRIANESE, R. H; Referência modular para o Oeste do Paraná
Agricultor familiar, semi-intensivo, Tanques escavados, clima Cfa; Paraná 2004.
735
REBELO, J. M; SILVA, F. S. Distribuição das abelhas Euglossini (Hymenoptera:
Apidae) no estado do Maranhão, Brasil. An. Soc. Entomol. Bras. [online]. 1999,
vol.28, n.3, pp. 389-401.
SAMPAIO et al.,
Avanços da maricultura na primeira década do século
XXI: piscicultura e carcinocultura marinha. R. Bras. Zootec. [online]. 2010, vol.39,
suppl., pp. 102-111. ISSN 1806-9290.
736

Anormalidades em espermatozoides de carpa comum, Cyprinus

Transcription

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