Der Produktname-Agar
Transcription
Der Produktname-Agar
MacConkey-Agar nach EP/USP 1460220020/1460220120 (heipha 0126e), 1460660020/1460660100 (heipha 126ph), 1464270020 (heipha 240e) Zweckbestimmung und Anwendungsbereich MacConkey-Agar ist ein mäßig selektiver Nährboden zum Nachweis von Enterobacteriaceae bzw. E. coli in pharmazeutischen Produkten, Lebensmitteln, Wasser und anderen Materialien. Der Nährboden entspricht in seiner Zusammensetzung den Empfehlungen der aktuellen European Pharmacopoeia (EP), der United States Pharmacopoeia (USP) sowie weitgehend dem § 64 LFGB. Der Nährboden ist als LI-Medium in 90 mm Schalen (Art.-Nr. 1460220020/1460220120 (heipha 0126e)), als Standardmedium in 90 mm Schalen (Art.-Nr. 1460660020/1460660100 (heipha 126ph)) und als RTAbklatschmedium (Art.-Nr. 1464270020 (heipha 240e)) verfügbar. Typische Zusammensetzung pro l Pankreashydrolysat aus Gelatine 17 g Fleisch- und Caseinpepton 3g Lactose-Monohydrat 10 g NaCl 5g Cholate (Gallensalze) 1,5 g Kristallviolett Neutralrot 30 mg Agar 1 mg 13,5 g pH 7,1 0,2 Der Agar ist klar und rotbraun gefärbt. Lagerbedingungen und Verwendungsdauer Das Produkt ist gemäß den Angaben auf dem Etikett aufrecht bei 15-25°C (Artikelnummern 1460220020/1460220120 (heipha 0126e) und 1464270020 (heipha 240e)) bzw. 4-12°C (Artikelnummer 1460660020/1460660100 (heipha 126ph)) zu lagern sowie vor direkter Sonneneinstrahlung, Licht und starken Temperaturschwankungen zu schützen. Plötzliche Temperaturschwankungen sowie die seitlich liegende Lagerung von Platten können die Bildung von Kondenswasser verstärken. Die Haltbarkeit des Produktes im ungeöffneten Zustand ist auf dem Etikett angegeben. Nach Ablauf des Verfalldatums sollte es nicht mehr verwendet werden. Warnhinweise und Vorsichtsmaßregeln Die Berührung sowie das Anhusten oder -niesen eines unbeimpften Nährmediums ist generell zu vermeiden, da dies zur Kontamination des Nährmediums führen kann. Nach einem solchen Vorfall ist das Nährmedium zu verwerfen und darf nicht mehr eingesetzt werden. Nährmedien, die Inhaltsstoffe tierischen oder menschlichen Ursprungs enthalten (wie z. B. Schaf- oder Humanblut oder Fleischpepton - siehe Zusammensetzung) sind als potentiell infektiös anzusehen. Ein Kontakt des Anwenders mit solchen Medien ist zu vermeiden. Nach direktem Kontakt mit dem Medium wird die Desinfektion des betroffenen Hautareals empfohlen. Mikrobiologische Fertigmedien sind zum einmaligen Gebrauch bestimmt. Seite 1 von 3 1460220020/1460220120-5-0411 Prinzip der Methode und Verfahrensbeschränkungen Gallensalze und Kristallviolett hemmen weitgehend das Wachstum Gram-positiver Bakterien. Neutralrot zeigt Säurebildung aus Lactose durch pinkfarbene oder rot gefärbte Kolonien an. Bakterien, wie E. coli und andere Säurebildende Bakterien, wachsen als pinkfarbene bis rote Kolonien und sind von einem Hof aus präzipitierten Gallensalzen umgeben. Lactose-negative Bakterien wachsen als farblose Kolonien. Das Wachstum von Enterobacteriaceae auf MacConkey-Agar gehört zur Definition dieser Familie. Abbildung 1: Kolonien von E. coli ATCC 8739 auf MacConkey-Agar (Art.-Nr. 1460480020/1460480120 (heipha 0110e)) Inkubation: 1Tag; 34 ± 1°C Hinweis: Aufgrund der geringen Selektivität dieses Nährmediums innerhalb der Enterobacteriaceae sind Salmonellen, die nur in geringer Anzahl vorhanden sind, bei gleichzeitig großer Anzahl von Begleitfora nicht nachweisbar. Untersuchungsmaterial und Testvorbereitung / Beschreibung der Durchführung; Leistungsdaten Das Untersuchungsmaterial wird für den Nachweis von E. coli entsprechend den Vorgaben der aktuellen Pharmakopöen vorbereitet. Nach der selektiven Voranreicherung in MacConkey-Bouillon bei 42-44 °C (Artikelnummer 1464630010 (heipha 528101)) wird ein Aliquot of auf MacConkey-Agar subkultiviert. Kulturbedingungen Entsprechend der Angaben in den aktuellen Pharmakopöen (EP und USP) wird der Nährboden für 18 bis 72 Stunden bei 30-35 °C inkubiert. Qualitätskontrolle Teststamm Inokulum / Inkubationsbedingungen Wachstumseigenschaften Escherichia coli ATCC 8739 10-100 KBE/ 16-18 h bei 30-35 °C Wiederfindung ≥ 50% Escherichia coli ATCC 8739 10-100 KBE/ 18-48 h bei 30-35 °C Rote Kolonien mit Präzipitathof Seite 2 von 3 1460220020/1460220120-5-0411 Wachstumseigenschaften Proteus mirabilis ATCC 29906 Inokulum / Inkubationsbedingungen 10-100 KBE / 16-18 h; 30-35 °C Salmonella Typhimurium ATCC 14028 10-100 KBE / 16-18 h; 30-35 °C Wiederfindung 50 %, honigfarbene Kolonien Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 10-100 KBE / 16-18 h; 30-35 °C Wiederfindung 50 %, kleine, farblose Kolonien; Nährboden honigfarben Staphylococcus aureus ATCC 6538 104-105 KBE 44-48 h bei 30-35°C Kein Wachstum Enterococcus faecalis ATCC 19433 104-105 KBE 44-48 h bei 30-35°C Kein Wachstum Teststamm Wiederfindung 50 %, cremefarbene Kolonien, kein Schwärmen Weiterführende Identifizierung Wachstum von Kolonien deutet auf die mögliche Anwesenheit von E. coli hin. Dies sollte durch Identifizierungstests bestätigt werden. Das Produkt entspricht der Spezifikation, wenn keine Kolonien auf MacConkey-Agar gewachsen sind oder die Identifizierung negativ ist. Für die kulturelle Bestätigung eignen sich die chromogenen Nährböden TBX-Agar (Art.-Nr. 1463260020/1463260100 (heipha 1875e)) oder Coli 2G-Agar (Art.-Nr. 1460390020/1460390100 (heipha 111e)), die den Nachweis der β-Glucoronidase ermöglichen. Typische Nachweis-Reaktionen für E.coli sind eine positive Indol-Reaktion (z.B. mit Tryptophan-Bouillon Art.-Nr. 1461710020 (heipha 2220r) und Kovac´s Reagenz Art.-Nr. 1465100001 (heipha 63000)) sowie eine negative Oxidase- und KatalaseReaktion. Entsorgung Bitte beachten Sie bei der Entsorgung von bewachsenen Nährmedien die jeweils gültigen gesetzlichen Vorschriften (z. B. 20 Minuten bei 121°C autoklavieren, desinfizieren, verbrennen usw.). Literatur Amtliche Sammlung von Untersuchungsvorschriften nach § 64 LFGB (Mai 1988): L 59.00-1: Untersuchung von Lebensmitteln. Nachweis von Escherichia coli und coliformen Keimen in natürlichem Mineralwasser, Quell- und Tafelwasser. Referenzverfahren. European Pharmacopoeia 7.0 (2011): 2.6.13. Microbial examination of non-sterile products: Test for specified microorganisms. MacConkey, A. (1905): Lactose-fermenting bacteria in faeces. J. Hyg.; 8: 333-379. United States Pharmacopeia 34 – NF 29 (2011): <62> Microbiological examination of nonsterile products: Tests for specified microorganisms. heipha Dr. Müller GmbH Lilienthalstraße 16 D-69214 Eppelheim Tel. +49 (0) 62 21 -7 59 01 -0 Fax +49 (0) 62 21 -7 59 01 -9 90 e-mail [email protected] www.heipha.com Seite 3 von 3 1460220020/1460220120-5-0411