CK-MB
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D02017_05_Insert_CK-MB_MU Konelab™ / T Series CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml THIS PACKAGE INSERT IS APPLICABLE FOR USE OUTSIDE THE US. ANY REFERENCE TO THE KONELAB SYSTEMS ALSO REFERS TO THE T SERIES. INTENDED USE For the in vitro quantitative determination of the B subunit of the isoenzyme CK-MB of creatine kinase (ATP: Creatine N-Phosphotransferase (CK), EC 2.7.3.2) activity in human serum or plasma on Konelab analyzers. All test results must be interpreted with regard to the clinical context. SUMMARY (1,2) Creatine kinase (CK) is a dimer composed of two subunits, M (muscular) and B (brain). Three different pairs of subunits can exist: BB (or CK-1), MB (or CK-2), and MM (or CK-3). CK-MB is present to varying degrees, in heart muscle and also in skeletal muscle. The major CK activity in normal serum is due to CK-MM. CK-BB is usually present in serum at low concentration. CK-MB is present in low concentration in normal human serum but is increased as a result of heart injury and rarely skeletal muscle damage. Storage (4) The sample can be stored for 2 days at 20…25 °C, for 7 days at 4…8 °C or for 4 weeks at -20 °C in dark. TEST PROCEDURE Refer to the Reference Manual and Application Notes for an automated procedure on your Konelab analyzer. Any application which has not been validated by Thermo Fisher Scientific Oy cannot be performance guaranteed and therefore must be evaluated by the user. Materials provided Reagents as described above. Materials required but not provided Control as indicated below. Calibration The response (dA/min) is converted to result units by a calculation factor. Quality Control Use quality control samples at least once a day and after each calibration and every time a new bottle of reagent is used. Available controls: CK-MB Control, code: 981908 CK-MB Control High, code: 981255 The Control intervals and limits must be adapted to the individual laboratory requirements. The results of the quality control sample should fall within the limits pre-set by the laboratory. PRINCIPLE OF THE PROCEDURE A number of methods are available for the determination of CK-MB activity. This reagent utilises an immunoinhibition method employing a polyclonal antibody to the CK-M monomer. It inhibits completely the activity of CK-MM and one-half the activity of CK-MB. The activity of the non inhibited CK-B monomer is then assayed. Creatine kinase catalyses the reaction between creatine phosphate and ADP (adenosine5’-diphosphate) with formation of creatine and ATP (adenosine-5’-triphosphate). The latter compound phosphorylates glucose to G-6-P (glucose-6-phosphate) in the presence of HK (hexokinase). G-6-P is oxidised to 6-PG (gluconate-6-phosphate) and in the same time an equimolar amount of NADP (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) is reduced to NADPH in a reaction catalysed by G-6P-DH (glucose-6-phosphate dehydrogenase). The increase in absorbance at 340 nm, resulting from the formation of NADPH, is proportional to the activity of creatine kinase in the sample. (3) CALCULATION OF RESULTS The results are calculated automatically by the Konelab analyzer as follows: CK Creatine phosphate + ADP ⎯→ Creatine + ATP Conversion factor μkat/l = (U/l)/60 HK Glucose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ REAGENT INFORMATION Reagent A: Substrate Code: 981373 Code: 981776 Reagent B: Buffer Code: 981373 Code: 981776 for 10 x 10 ml for 8 x 3 ml 10 x 10 ml 8 x 3 ml Concentrations in the reconstituted reagent: Buffer (Imidazole) 104 mmol/l Creatine phosphate 31 mmol/l Adenosine-5’-diphosphate (ADP) 2 mmol/l Magnesium salt 10 mmol/l D-glucose 21 mmol/l Adenosine-5’-monophosphate (AMP) 5 mmol/l Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) 2 mmol/l 10 μmol/l Di(adenosine-5’)pentaphosphate (AP5A) N-acetyl-L-cysteine (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokinase (HK) > 3500 U/l Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G-6-P-DH) > 2000 U/l Anti human polyclonal CK-M antibody (from sheep or goat) sufficient to inhibit up to 2000 U/l of CK-MM at 37 °C. NaN3 < 0.1 % Precautions For in vitro diagnostic use only. Exercise the normal precautions required for handling all laboratory reagents. The reagent contains sodium azide as preservative. Do not swallow. Avoid contact with skin and mucous membranes. Preparation Dissolve the contents of Reagent A with the entire contents of Reagent B. Cap vial and mix. Note: Check that there are no bubbles in the bottleneck or on the surface of the reagent when you insert the reagent vials or vessels in the Konelab analyzer. Storage and Stability Reagents in unopened vials are stable at 2…8 °C until the expiration date printed on the label. Refer to the Application Notes of your Konelab analyzer for the on board stability of reagents. If the freshly reconstituted reagent has an absorbance at 340 nm higher than 0.700 when measured against a blank of water, do not use. If the reagent shows turbidity, do not use. SPECIMEN COLLECTION Sample Type Use clear, unhemolyzed serum or heparin plasma. Avoid exposure of samples to strong light. Precautions Human samples should be handled and disposed of as if they were potentially infectious. Activity in U/l = dA/min x Factor Factor = where: TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P TV= Total reaction volume in ml SV= Sample volume in ml 6.22= Extinction coefficient of NADPH at 340 nm P= Cuvette pathlength = 1 Multiply CK-B activity (U/l) by 2 to obtain activity in terms of CK-MB (U/l). LIMITATIONS OF THE PROCEDURE (6, 7) Because of the limited amount of CK-M antibody added in the reagent, samples with high total CK values should be diluted so that the value of total CK is not over 2000 U/l. High CK-BB or atypical CK-BB-macro isoenzymes may cause false high CK-MB results. Interference Criterion: Recovery within + 10% of initial values. Conjugated bilirubin: No interference found up to 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Hemolysis: Do not use hemolyzed specimen. Lipemia: Do not use lipemic specimen. For other interfering substances, please refer to the reference 5. EXPECTED VALUES (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) The quoted values should serve as a guide only. It is recommended that each laboratory verify this range or derives a reference interval for the population that it serves. MEASURING RANGE 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Extended measuring range after secondary dilution: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). PERFORMANCE CHARACTERISTICS Detection limit 7 U/l (0.12 μkat/l) The detection limit represents the lowest measurable concentration/activity that can be distinguished from zero. It is calculated as the concentration of zero sample + 3 SD (within run, n=24). Imprecision Within run Between day Total SD 1.6 0.9 3.0 Mean 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 SD 3.0 4.1 6.6 Mean 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 Mean 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 A precision study was performed using Konelab 30 during 10 days, with the number of measurements being n = 40. Method comparison A comparison between this CK-MB reagent (y) and a commercially available test based on immunoinhibition of CK-M subunit (x) gave following results: Linear regression (result unit U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 The results obtained in individual laboratories may differ from the given performance data. BIBLIOGRAPHY 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. EN Template: D01162_4 Page 1 Page 2 6) D02017_05_Insert_CK-MB_MU Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. 7) MANUFACTURER Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Date of revision (yyyy-mm-dd) 2009-12-02 Changes from previous version The line beside the text indicates changes. Sicherheitsmaßnahmen Nur zur In-vitro-Diagnostik. Befolgen Sie die üblichen Sicherheitsmaßnahmen beim Umgang mit Laborreagenzien. Das Reagenz enthält Natriumazid als Konservierungsmittel. Nicht schlucken. Kontakt mit Haut und Schleimhäuten vermeiden. Vorbereitung Inhalt von Reagenz A mit dem vollständigen Inhalt von Reagenz B auflösen. Phiole verschließen und durchmischen. Hinweis: Achten Sie darauf, dass sich im Flaschenhals oder an der Reagenzoberfläche keine Luftblasen befinden, wenn Sie die Reagenzien in das Konelab-Analysengerät einsetzen. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Reagenzien in ungeöffneten Gefäßen sind bei 2…8 °C bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar. Die Haltbarkeit der Reagenzien nach Einsetzen in das Konelab-Analysengerät ist in der entsprechenden Arbeitsanleitung angegeben. Reagenz nicht verwenden, wenn es bei 340 nm eine Extinktion von über 0.700 aufweist (gegen eine Leermessung mit Wasser). Reagenz ebenfalls nicht verwenden, wenn es Trübungen aufweist. UNTERSUCHUNGSMATERIAL Probentyp Klares, nicht hämolysiertes Serum oder Heparinplasma verwenden. Probenmaterial vor starkem Lichteinfall schützen. CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml DIESE PACKUNGSBEILAGE IST FÜR DEN GEBRAUCH AUSSERHALB DER USA VORGESEHEN. JEDER VERWEIS AUF KONELAB-SYSTEME BEINHALTET AUCH DIE T SERIES. ANWENDUNGSBEREICH Für den quantitativen In-Vitro-Aktivitätsnachweis der B-Subeinheit des Isoenzyms CK-MB der Kreatinkinase (ATP: Kreatin-N-Phosphotransferase (CK), EC 2.7.3.2) in Humanserum oder -plasma mit dem Konelab-Analysengerät. Alle Testergebnisse müssen mit Bezug zum klinischen Zusammenhang interpretiert werden. ZUSAMMENFASSUNG (1,2) Die Kreatinkinase (CK) ist ein Dimer, das aus den zwei Untereinheiten M (Muskeln) und B (Gehirn) besteht. Drei Kombinationen von Untereinheiten sind möglich: BB (CK-1), MB (CK-2) oder MM (CK-3). CK-MB liegt in unterschiedlichen Mengen in der Herz- und auch Skelettmuskulatur vor. Der Großteil der Kreatinkinase-Aktivität in normalem Serum entfällt auf CK-MM. CK-BB liegt im Serum normalerweise nur in geringen Konzentrationen vor. CK-MB ist im normalen Humanserum nur in geringen Mengen vorhanden, bei Herzverletzungen und, in seltenen Fällen, bei Verletzungen der Skelettmuskulatur, steigt der Spiegel. TESTPRINZIP Für die Bestimmung der CK-MB-Aktivität stehen verschiedene Verfahren zur Auswahl. Dieses Reagenz basiert auf einer Immun-Inhibitionsreaktion, bei der ein polyklonaler Antikörper gegen das CK-M-Monomer eingesetzt wird. Dieser hemmt die Aktivität von CKMM vollständig, die von CK-MB zur Hälfte. Daraufhin lässt sich die Aktivität des nicht inhibierten CK-B bestimmen. Die Kreatinkinase wirkt als Katalysator für die Reaktion zwischen Kreatinphosphat und ADP (Adenosin-5’-diphosphat), bei der Kreatin und ATP (Adenosin-5’-Triphosphat) entstehen. In Gegenwart von HK (Hexokinase) phosphoryliert ATP wiederum Glukose zu G-6-P (Glukose-6-phosphat). G-6-P wird zu 6-PG (Glukonat-6-phosphat) oxidiert, gleichzeitig wird eine äquimolare Menge NADP (Nikotinamidadenindinukleotidphosphat) zu NADPH reduziert. Letztere Reaktion wird durch G-6P-DH (Glucose-6-phosphatdehydrogenase) katalysiert. Der Anstieg der Extinktion bei 340 nm infolge der NADPHBildung verläuft proportional zur Aktivität der Kreatinkinase im Probenmaterial. (3) Aufbewahrung (4) Die Probe kann 2 Tage lang bei 20…25 °C, 7 Tage lang bei 4…8 °C oder 4 Wochen lang bei -20 °C im Dunkeln gelagert werden. TESTDURCHFÜHRUNG Angaben zur Automatisierung mit dem Konelab-Analysengerät dem Referenzhandbuch und den Hinweisen zur Anwendung entnehmen. Bei Verwendung von Applikationen, die nicht durch Thermo Fisher Scientific Oy validiert wurden, kann keine Garantie für die angegebenen Leistungsdaten übernommen werden. Für die Validierung derartiger Applikationen ist der Anwender daher selbst verantwortlich. Lieferumfang Reagenzien, wie oben beschrieben. Erforderlich, jedoch nicht im Lieferumfang enthalten Kontrollen wie nachstehend beschrieben Kalibrierung Die Reaktion (dE/min) wird durch einen Berechnungsfaktor in Ergebniseinheiten umgerechnet. Qualitätskontrolle Mindestens einmal täglich sowie nach jeder Kalibrierung und bei jeder Verwendung einer neuen Flasche Reagenz eine Qualitätskontrolle durchführen. Lieferbare Kontrollen: CK-MB Control, Bestellnr: 981908 CK-MB Control High, Bestellnr: 981255 Zeitabstände und Grenzwerte der Kontrollen sind den spezifischen Anforderungen des Labors entsprechend zu wählen. Die Ergebnisse der Qualitätskontrollen sollten innerhalb der vom Labor vorgegebenen Grenzwerte liegen. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Die Ergebnisse werden vom Konelab-Analysengerät automatisch wie folgt errechnet: Aktivität in U/l = dE/min x Faktor Faktor = wobei: GV × 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ 6.22 × PV × OW GV = Gesamtes Reaktionsvolumen in ml PV = Probenvolumen in ml 6.22 = Extinktionskoeffizient von NADPH bei 340 nm OW = Optische Weglänge durch die Küvette = 1 CK Kreatinphosphat + ADP ⎯→ Kreatin + ATP Konversionsfaktor μkat/l = (U/l)/60 HK Glukose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP Die CK-B-Aktivität (U/l) multipliziert mit 2 ergibt die für CK-MB ausgedrückte Aktivität (U/l). G-6P-DH G-6-P + NADP ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ + REAGENZDATEN Reagenz A: Substrat Bestellnr.: 981373 Bestellnr.: 981776 Reagenz B: Puffer Bestellnr: 981373 Bestellnr: 981776 für 10 × 10 ml für 8 × 3 ml 10×10 ml 8 × 3 ml Konzentrationen im rekonstituierten Reagenz: Puffer (Imidazol) 104 mmol/l Kreatinphosphat 31 mmol/l Adenosin-5’-diphosphat (ADP) 2 mmol/l Magnesiumsalz 10 mmol/l D-Glukose 21 mmol/l Adenosin-5’-monophosphat (AMP) 5 mmol/l Nikotinamidadenindinukleotidphosphat (NADP) 2 mmol/l Di(adenosin-5’)pentaphosphat (AP5A) 10 μmol/l N-acetyl-L-cystein (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokinase (HK) > 3500 U/l Glucose-6-phosphat-dehydrogenase (G-6-P-DH) > 2000 U/l Polyklonale Anti-Human-CK-M-Antikörper (von Schaf oder Ziege), ausreichend zur Inhibition von bis zu 2000 U/l CK-MM bei 37 °C. NaN3 < 0.1 % GRENZEN DES VERFAHRENS (6, 7) Aufgrund der begrenzten Menge CK-M-Antikörper im Reagenz sind Proben mit hohen Gesamtwerten für Kreatinkinase so zu verdünnen, dass der CK-Gesamtwert nicht über 2000 U/l liegt. Ein hoher CK-BB oder atypische CK-BB-Makroisoenzyme können falsch hohe CK-MB-Werte ergeben. Störfaktoren Kriterium: Rückkehr auf +10 % des Ausgangswerts. Konjugiertes Bilirubin: Keine Interferenzen bei bis zu 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Hämolyse: Kein hämolysiertes Untersuchungsmaterial verwenden. Lipämie: Kein lipämisches Untersuchungsmaterial verwenden. Siehe Literaturhinweis 5 für weitere Substanzen, die Störfaktoren darstellen können. ERWARTETE WERTE (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Die angegebenen Werte gelten nur als Richtlinie. Es wird empfohlen, dass jedes Labor diesen Bereich überprüft oder ein Referenzintervall für die betroffene Population ableitet. MESSBEREICH 22-500 U/l (0.37-8.3 μkat/l) Erweiterter Messbereich nach automatischer Verdünnung: 22-2500 U/l (0.37-41.7 μkat/l). LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN Nachweisgrenze 7 U/l (0.12 μkat/l) Die Nachweisgrenze stellt die unterste messbare Konzentration/Aktivität dar, die von null unterschieden werden kann. Sie wird als Konzentration der Nullprobe + 3 SD (in der Serie, n=24) berechnet. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / T Serie Sicherheitsmaßnahmen Proben, die Humanserum enthalten, sind als potenziell infektiös zu betrachten und dementsprechend zu behandeln und zu entsorgen. Template: D01162_4 DE Page 3 D02017_05_Insert_CK-MB_MU Impräzision In der Serie Von Tag zu Tag Gesamtwert Mittelwert 66 U/l %VK 2.3 1.3 4.3 SA 1.6 0.9 3.0 Mittelwert 143 U/l %VK 2.2 3.0 4.7 SA 3.0 4.1 6.6 Mittelwert 264 U/l SA %VK 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Mit dem Konelab 30 wurde eine Präzisionskontrolle über 10 Tage mit n = 40 Messungen durchgeführt Vergleich der Methoden Ein Vergleich zwischen dem vorliegenden CK-MB-Reagenz (y) und einem im Handel erhältlichen Test, der ebenfalls auf der Immuninhibition der CK-M-Subeinheit basiert (x), ergab folgende Resultate: Lineare Regression (Ergebnisse in U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Die Ergebnisse einzelner Laboratorien können von den angegebenen Leistungsdaten abweichen. LITERATURHINWEISE 1) Burtis, C.A. und Ashwood, E. R. (Hrsg.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5. Aufl., W. B. Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (Hrsg.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1. Aufl., TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W. und Waldenström, J., Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder W.G., Narayanan S., Wisser H., Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. 6) Wu, A.H.B. und Bowers, G.N. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. 7) The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. HERSTELLER Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Datum der Überarbeitung (JJJJ-MM-TT) 2009-12-02 Änderungen gegenüber der vorherigen Fassung Die Linie neben dem Text weist auf Änderungen hin. L’augmentation de l’absorbance à 340 nm résultant de la formation de NADPH est proportionnelle à l’activité de la créatine kinase dans l’échantillon. (3) CK Créatine phosphate + ADP ⎯→ Créatine + ATP HK Glucose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ INFORMATIONS SUR LE RÉACTIF Réactif A : Substrat Code : 981373 pour 10 x 10 ml Code : 981776 pour 8 x 3 ml Réactif B : Tampon Code : 981373 10 x 10 ml Code : 981776 8 x 3 ml Concentrations dans le réactif reconstitué : Tampon (imidazole) 104 mmol/l Créatine phosphate 31 mmol/l Adénosine-5’-diphosphate (ADP) 2 mmol/l Sel de magnésium 10 mmol/l D-glucose 21 mmol/l Adénosine-5’-monophosphate (AMP) 5 mmol/l Nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADP) 2 mmol/l 10 µmol/l Di(adénosine-5’)pentaphosphate (AP5A) N-acétyl-L-cystéine (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokinase (HK) > 3500 U/l Glucose-6-phosphate déshydrogénase (G-6-P-DH) > 2000 U/l Anticorps polyclonal anti-CK-M humaine (de mouton ou de chèvre)en quantité suffisante pour inhiber jusqu’à 2000 U/l de CK-MM à 37 °C. NaN3 < 0.1 % Précautions Usage diagnostique in vitro uniquement. Respecter les précautions habituelles requises lors de la manipulation de tout réactif de laboratoire. Ce réactif contient de l’azide de sodium en tant que conservateur. Ne pas avaler. Éviter tout contact avec la peau et les muqueuses. Préparation Dissoudre le contenu du flacon de réactif A avec la totalité du contenu du flacon de réactif B. Boucher le flacon et mélanger. Remarque : S’assurer de l’absence de bulles au niveau du goulot du flacon ou à la surface du réactif lors de la mise en place des flacons ou récipients de réactifs dans l’analyseur Konelab. Conservation et stabilité Les réactifs contenus dans les flacons scellés sont stables à 2…8 °C jusqu’à la date de péremption figurant sur l’étiquette. Se référer à la fiche d’application de l’analyseur Konelab en ce qui concerne la stabilité des réactifs dans l’appareil. Si le réactif fraîchement reconstitué présente une absorbance à 340 nm supérieure à 0.700 par rapport à un blanc d’eau, ne pas l’utiliser. Si le réactif est trouble, ne pas l’utiliser. PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS Type d’échantillon Utiliser du sérum clair, non hémolysé ou du plasma hépariné. Éviter l’exposition des échantillons à la lumière vive. CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml CETTE NOTICE EST VALABLE POUR UTILISATION EN DEHORS DES ÉTATS-UNIS. TOUTE RÉFÉRENCE AUX SYSTÈMES KONELAB FAIT ÉGALEMENT RÉFÉRENCE À LA GAMME T. UTILISATION Pour la détermination quantitative in vitro de la sous-unité B de l’isoenzyme CK-MB de la créatine kinase (ATP: créatine N-phosphotransférase (CK), EC 2.7.3.2) dans le sérum ou le plasma humains au moyen des analyseurs Konelab. Tous les résultats obtenus doivent être interprétés en tenant compte du contexte clinique. RÉSUMÉ (1,2) La créatine kinase (CK) est un dimère constitué de deux sous-unités, M (musculaire) et B (cérébrale). On peut rencontrer trois paires de sous-unités différentes : BB (ou CK-1), MB (ou CK-2) et MM (ou CK-3). La CK-MB est présente en quantités variables au niveau du muscle cardiaque, ainsi que dans les muscles squelettiques. La majeure partie de l’activité de la CK dans le sérum normal est due à la CK-MM. La CKBB est habituellement présente à faible concentration dans le sérum. La CK-MB est présente à faible concentration dans le sérum humain normal, mais elle augmente suite à des lésions cardiaques et, plus rarement, à des lésions des muscles squelettiques. PRINCIPE DE LA PROCÉDURE Il existe un certain nombre de méthodes pour la détermination de l’activité de la CK-MB. Ce réactif utilise une méthode d’immuno-inhibition basée sur un anticorps polyclonal dirigé contre le monomère CK-M. Il inhibe totalement l’activité de la CK-MM et à moitié l’activité de la CK-MB. On dose ensuite l’activité du monomère CK-B non inhibé. La créatine kinase catalyse la réaction entre la créatine phosphate et l’ADP (adénosine-5’diphosphate) avec formation de créatine et d’ATP (adénosine-5’-triphosphate). Ce dernier composé phosphoryle le glucose en G-6-P (glucose-6-phosphate) en présence d’hexokinase (HK). Le G-6-P est oxydé en 6-PG (gluconate-6-phosphate) et, en même temps, une quantité équimolaire de NADP (nicotinamide adénine dinucléotide phosphate) est réduite en NADPH au cours d’une réaction catalysée par la G-6P-DH (glucose-6phosphate déshydrogénase). Conservation (4) Les échantillon peuvent être conservés pendant 2 jours à 20…25 °C, pendant 7 jours à 4…8 °C ou pendant 4 mois à -20 °C dans l’obscurité. PROCÉDURE DE TEST Se référer au manuel de référence et à la fiche d’application pour une description de la procédure automatisée sur l’analyseur Konelab. Toute application n’ayant pas été validée par Thermo Fisher Scientific Oy ne peut pas être garantie en ce qui concerne ses performances et doit par conséquent être évaluée par l’utilisateur. Matériel fourni Réactifs comme décrits ci-dessus. Matériel requis mais non fourni Contrôle comme indiqué ci-dessous. Calibrage La réponse (dA/min) est convertie en unités de résultat à l’aide d’un facteur de calcul. Contrôle de qualité Utiliser les échantillons de contrôle de qualité au moins une fois par jour, après chaque calibrage et chaque fois que l’on entame un nouveau flacon de réactif. Contrôles disponibles : CK-MB Control, code : 981908 CK-MB Control High, code : 981255 Les intervalles et les limites de contrôle doivent être adaptés aux besoins de chaque laboratoire. Les résultats de l’échantillon de contrôle de qualité doivent se situer dans la plage de tolérance prédéfinie par le laboratoire. CALCUL DES RÉSULTATS Les résultats sont calculés automatiquement par l’analyseur Konelab de la manière suivante : Activité en U/l = dA/min x facteur VT x 1000 Facteur = —————— 6.22 x VE x L où : VT = Volume total de réaction en ml VE = Volume d’échantillon en ml 6.22 = Coefficient d’extinction du NADPH à 340 nm L = Longueur du trajet de la cuvette = 1 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / Gamme T Précautions Les échantillons d’origine humaine doivent être manipulés et éliminés comme des matériaux potentiellement infectieux. Template: D01162_4 FR Page 4 D02017_05_Insert_CK-MB_MU Facteur de conversion µkat/l = (U/l)/60 Multiplier l’activité de la CK-B (U/l) par 2 pour obtenir l’activité en termes de CK-MB (U/l). LIMITES DE LA PROCÉDURE (6, 7) En raison de la quantité limitée d’anticorps anti-CK-M ajoutés au réactif, les échantillons ayant des valeurs de la CK totale élevées doivent être dilués de telle sorte que la valeur de la CK totale ne dépasse pas 2000 U/l Des concentrations élevées de l’isoenzyme CKBB ou de l’isoenzyme atypique CK-BB-macro peuvent engendrer des résultats CK-MB faussement élevés. Interférence Critère : Acceptation se situant dans les limites de ± 10 % des valeurs initiales. Bilirubine conjuguée : Aucune interférence observée jusqu’à 650 µmol/l (38.0 mg/dl). Hémolyse : Ne pas utiliser un échantillon hémolysé. Lipémie : Ne pas utiliser un échantillon lipémique. Pour les autres substances interférentes, se reporter à la référence 5. VALEURS ATTENDUES (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Les valeurs citées sont données à titre indicatif uniquement. Il est recommandé que chaque laboratoire établisse les valeurs physiologiques pour la population qui constitue sa clientèle. DOMAINE DE MESURE 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 µkat/l) Domaine de mesure étendu après dilution secondaire : 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 µkat/l). CARACTÉRISTIQUES EN MATIÈRE DE PERFORMANCES Limite de détection 7 U/l (0.12 µkat/l) La limite de détection représente la plus faible concentration/activité mesurable qu’il est possible de distinguer de zéro. Elle est calculée comme la concentration d’un échantillon zéro + 3 ET (répétabilité, n=24). Imprécision Répétabilité Reproductibilité Total Moyenne 66 U/l CV % 2.3 1.3 4.3 ET 1.6 0.9 3.0 Moyenne 143 U/l CV % 2.2 3.0 4.7 ET 3.0 4.1 6.6 Moyenne 264 U/l ET CV % 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 L’étude de précision a eu lieu sur un analyseur Konelab 30 pendant 10 jours, le nombre de mesures étant de n = 40. Comparaison de méthodes Une comparaison entre ce réactif CK-MB (y) et un test commercial basé sur l’immunoinhibition de la sous-unité CK-M (x) a fourni les résultats suivants : Régression linéaire (unités du résultat : U/l) : y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 FABRICANT Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tél. +358 9 329 100, télécopie +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Date de révision (aaaa-mm-jj) 2009-12-02 Modifications par rapport à la version précédente Le trait en regard du texte indique les modifications. Template: D01162_4 BIBLIOGRAPHIE 1) Burtis, CA and Ashwood, ER (eds), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, WB Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B, List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in : Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. 6) Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. 7) The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Les résultats obtenus dans chaque laboratoire peuvent différer des données de performances indiquées. D02017_05_Insert_CK-MB_MU Konelab™ / Série T CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml TENTO PŘÍBALOVÁ INFORMACE JE URČENA PRO POUŽITÍ MIMO ÚZEMÍ USA. KAŽDÁ ZMÍNKA O SYSTÉMECH KONELAB SE ROVNĚŽ TÝKÁ SÉRIE T. URČENÉ POUŽITÍ Pro kvantitativní stanovení aktivity podjednotky B isoenzymu CK-MB kreatinkinázy (ATP: kreatin-N-fosfotransferáza (CK), EC 2.7.3.2) v lidském séru nebo plazmě in vitro na analyzátorech Konelab. Všechny výsledky testů musejí být interpretovány s ohledem na klinický kontext. SHRNUTÍ (1,2) Kreatinkináza (CK) je dimer složený ze dvou podjednotek, M (svalové) a B (mozkové). Mohou existovat tři různé páry podjednotek: BB (neboli CK-1), MB (neboli CK-2) a MM (neboli CK-3). CK-MB je v různém stupni přítomna v srdečním svalu a rovněž v kosterním svalstvu. Hlavní aktivita CK v normálním séru je způsobena CK-MM. Podjednotka CK-BB je obvykle přítomna v séru v nízkých koncentracích. CK-MB je přítomna v nízkých koncentracích v normálním lidském séru, avšak v důsledku poškození srdce a ve vzácných případech i kosterních svalů dochází k jejímu zvýšení. PRINCIP POSTUPU Pro stanovení aktivity CK-MB existuje několik metod. Toto reagens používá imunoinhibiční metodu, která využívá polyklonální protilátku monomeru CK-M. Tato protilátka zcela inhibuje aktivitu CK-MM a polovinu aktivity CK-MB. Je tedy prováděn kvantitativní rozbor aktivity neinhibovaného monomeru CK-B. Kreatinkináza katalyzuje reakci mezi kreatinfosfátem a ADP (adenosin-5’-difosfát), při níž se vytváří kreatin a ATP (adenosin-5’-trifosfát). Druhá z těchto sloučenin fosforyluje glukózu na G-6-P (glukózo-6-fosfát) za přítomnosti HK (hexokinázy). G-6-P je oxidována na 6-PG (glukonát-6-fosfát) a zároveň je ekvimolární množství NADP (nikotinamid adenin dinukleotid fosfát) redukováno na NADPH v reakci katalyzované G-6P-DH (glukózo-6fosfát dehydrogenáza). Zvýšení absorbance při 340 nm, které je důsledkem vytvoření NADPH, proporcionálně odpovídá aktivitě kreatinkinázy ve vzorku. (3) CK Kreatinfosfát + ADP ⎯⎯ Kreatin + ATP HK Glukóza + ATP ⎯→ G-6-P + ADP Uchovávání (4) Vzorek lze uchovávat ve tmě po dobu 2 dnů při teplotě 20…25 °C, po dobu 7 dnů při teplotě 4…8 °C nebo 4 týdny při teplotě -20 °C. POSTUP TESTU Údaje o automatizovaném postupu práce na analyzátoru Konelab naleznete v Referenčním manuálu a aplikačních poznámkách. Nelze zaručit provedení žádné aplikace, která nebyla validována společnosti Thermo Fisher Scientific Oy. Taková aplikace proto musí být hodnocena uživatelem. Dodané materiály Reagencia uvedená výše. Požadované, avšak nedodávané materiály Kontrolní materiály uvedené dále. Kalibrace Reakce (dA/min) je přepočtena pomocí faktoru výpočtu na výsledné jednotky. Řízení jakosti Používejte vzorky pro řízení jakosti alespoň jednou denně, po každé kalibraci a vždy, když použijete novou lahvičku reagens. Dostupné kontrolní materiály: CK-MB Control, kód: 981908 CK-MB Control High, kód: 981255 Intervaly a limity kontrolních materiálů musejí být upraveny podle požadavků jednotlivých laboratoří. Výsledky vzorku pro řízení jakosti by měly vyhovovat limitním hodnotám přednastaveným laboratoří. VÝPOČET VÝSLEDKŮ Výsledky jsou automaticky vypočteny analyzátorem Konelab, a to dále uvedeným způsobem: Aktivita v U/l = dA/min x Faktor TV x 1 000 Faktor = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P kde: TV = Celkový reakční objem v ml SV = Objem vzorku v ml 6.22 = Extinkční koeficient NADPH při 340 nm P = Optická tloušťka kyvety = 1 Faktor přepočtu μkat/l = (U/l)/60 Vynásobte aktivitu CK-B (U/l) dvěma, získáte tak aktivitu v rámci CK-MB (U/l). G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ OMEZENÍ POSTUPU (6, 7) Vzhledem k omezenému množství protilátky proti CK-M přidané do reagens, je nutné vzorky s vysokými celkovými hodnotami CK ředit tak, aby hodnota celkového CK nebyla vyšší než 2 000 U/l. Vysoké hodnoty CK-BB nebo atypické hodnoty isoenzymů CK-BB makro mohou způsobit falešně vysoké výsledky CK-MB. INFORMACE O REGENCIÍCH Reagens A: Substrát Kód: 981373 Kód: 981776 Reagens B: Pufr Kód: 981373 Kód: 981776 Interference Kritérium: Recovery v rozpětí + 10% počátečních hodnot. Konjugovaný bilirubin: Až do 650 μmol/l (38.0 mg/dl) nebyla zjištěna interference. Hemolýza: Nepoužívejte hemolyzovaný vzorek. Lipémie: Nepoužívejte lipemický vzorek. Údaje o dalších interferujících látkách naleznete v odkazu č. 5. pro 10 x 10 ml pro 8 x 3 ml 10 x 10 ml 8 x 3 ml Koncentrace Koncentrace v rekonstituovaném reagens: Pufr (imidazol) 104 mmol/l Kreatinfosfát 31 mmol/l Adenosin-5’-difosfát (ADP) 2 mmol/l Hořečnatá sůl 10 mmol/l D-glukóza 21 mmol/l Adenosin-5’-monofosfát (AMP) 5 mmol/l Nikotinamid adenin dinukleotid fosfát (NADP) 2 mmol/l Di(adenosin-5’)penta-fosfát (AP5A) 10 μmol/l N-acetyl-L-cystein (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokináza (HK) > 3500 U/l Glukózo-6-fosfát dehydrogenáza (G-6-P-DH) > 2000 U/l Polyklonální protilátka proti lidské CK-M (z ovcí nebo koz) postačující pro inhibici až 2 000 U/l CK-MM při 37 °C. NaN3 < 0.1 % Zvláštní opatření Určeno pouze pro diagnostické použití in vitro. Používejte běžná bezpečnostní opatření vyžadovaná pro manipulaci se všemi laboratorními reagencii. Reagens obsahuje jako konzervační látku azid sodný. Nepolykejte. Zabraňte kontaktu s kůží a sliznicemi. Příprava Obsah reagens A rozpusťte s celým obsahem reagens B. Lahvičku uzavřete a její obsah promíchejte. Poznámka: Překontrolujte, zda při vkládání lahviček nebo nádob s reagencii do analyzátoru Konelab nejsou v hrdle lahvičky nebo na povrchu reagens bubliny. Uchovávání a stabilita Reagencia v neotevřených lahvičkách jsou stabilní při teplotě 2…8 °C, a to do data ukončení použitelnosti vytištěného na štítku. Údaje o stabilitě reagencií “on-board“ naleznete v aplikačních poznámkách svého analyzátoru Konelab. Pokud je absorbance čerstvě rekonstituovaného reagens při 340 nm vyšší než 0.700, je-li měření provedeno proti vodě jako blanku, nepoužívejte je. Jeví-li reagens známky turbidity, nepoužívejte je. ODBĚR VZORKŮ Typ vzorků Používejte čisté, nehemolyzované sérum nebo heparinizovanou plazmu. Zabraňte expozici vzorků silnému světlu. Zvláštní opatření S lidskými vzorky je nutné nakládat a likvidovat je, jako by byly potenciálně infekční. PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Uvedené hodnoty by měly sloužit pouze jako vodítko. Doporučuje se, aby každá laboratoř toto rozpětí ověřila nebo odvodila referenční interval pro populaci, jíž poskytuje služby. ROZPĚTÍ MĚŘENÍ 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Rozšířené rozpětí měření po sekundárním ředění: 22 - 2 500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). CHARAKTERISTIKY ÚČINNOSTI Limitní hodnota detekce 7 U/l (0.12 μkat/l) Limitní hodnota detekce představuje nejnižší měřitelnou koncentraci/aktivitu, kterou lze odlišit od nulové hodnoty. Vypočítává se jako koncentrace nulového vzorku + 3 SD (v rámci série, n = 24). Nepřesnost V rámci série Mezi dny Celkem Střední hodnota 66 U/l SD % CV 1.6 2.3 0.9 1.3 3.0 4.3 Střední hodnota 143 U/l SD % CV 3.0 2.2 4.1 3.0 6.6 4.7 Střední hodnota 264 U/l SD % CV 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Byla provedena studie přesnosti pomocí analyzátoru Konelab 30, která trvala 10 dní; počet provedených měření byl n = 40. Srovnání metod Srovnání mezi tímto reagens pro stanovení CK-MB (y) a komerčně dostupným testem založeným na imunoinhibici podjednotky CK-M (x) poskytlo dále uvedené výsledky: Lineární regrese (jednotky výsledku U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Výsledky získané v jednotlivých laboratořích se mohou od uvedených dat účinnosti lišit. SEZNAM LITERATURY 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. CS Template: D01162_4 Page 5 Page 6 4) 5) 6) 7) D02017_05_Insert_CK-MB_MU Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. VÝROBCE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O.Box 100, FI-01621 Vantaa Tel.: +358 9 329 100, Fax: +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Datum revize (rrrr-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Změny oproti předchozí verzi Svislá čára podél textu označuje změny. D02017_05_Insert_CK-MB_MU Konelab™ / Σειρά T CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml ΑΥΤΟ ΤΟ ΕΝΘΕΤΟ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ ΠΡΟΤΙΘΕΤΑΙ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΕΚΤΟΣ ΤΩΝ ΗΠΑ. ΟΠΟΙΑΔΗΠΟΤΕ ΑΝΑΦΟΡΑ ΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ KONELAB ΑΝΑΦΕΡΕΤΑΙ ΕΠΙΣΗΣ ΣΤΗ ΕΙΡΑ T. ΠΡΟΟΡΙΖΌΜΕΝΗ ΧΡΉΣΗ Για in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της δραστικότητας της υπομονάδας B του ισοενζύμου CK-MB κρεατινικής κινάσης (ATP: Κρεατίνη Ν-φωσφοτρανσφεράση (CK), EC 2.7.3.2) σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα σε αναλυτές Konelab. Όλα τα αποτελέσματα της εξέτασης πρέπει να ερμηνεύονται σε σχέση με το κλινικό περιβάλλον. ΠΕΡΙΛΗΠΤΙΚΑ (1,2) Η κρεατινική κινάση (CK) είναι ένα διμερές που αποτελείται από δύο υπομονάδες, Μ (μυϊκή) και Β (εγκεφαλική). Μπορούν να υπάρχουν τρία διαφορετικά ζεύγη υπομονάδων: BB (ή CK-1), MB (ή CK-2), και MM (ή CK-3). Το CK-MB συναντάται σε διαφορετικούς βαθμούς, στον καρδιακό μυ και στον σκελετικό μυ. Η βασική δραστηριότητα του CK σε φυσιολογικό ορό οφείλεται στο ζεύγος CK-MM. Το CKBB είναι συνήθως παρόν σε ορό σε χαμηλή συγκέντρωση. Το CK-MB είναι παρόν σε χαμηλή συγκέντρωση σε φυσιολογικό ανθρώπινο ορό αλλά αυξάνεται ως αποτέλεσμα καρδιακού τραυματισμού και σπανίως βλάβης του σκελετικού μυ. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ Υπάρχουν διαθέσιμες διάφορες μέθοδοι για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας CKMB. Το αντιδραστήριο αυτό χρησιμοποιεί την μέθοδο ανοσοαναστολής χρησιμοποιώντας ένα πολυκλονικό αντίσωμα στο μονομερές CK-M. Αναστέλλει πλήρως τη δραστικότητα του CK-MM και κατά το ήμισυ τη δραστικότητα του CK-MΒ. Η δραστικότητα του μονομερούς που δεν έχει υποστεί αναστολή εξετάζεται στη συνέχεια. Η κρεατινική κινάση δρα ως καταλύτης στην αντίδραση μεταξύ της φωσφοκρεατίνης και του ADP (διφωσφορική-5’-αδενοσίνη) με τον σχηματισμό κρεατίνης και ΑΤΡ (τριφωσφορικής-5’-αδενοσίνης). Το τελευταίο συστατικό φωσφορυλιώνει γλυκόζη σε G-6P (φωσφορική-6-γλυκόζη) παρουσία ΗΚ (εξοκινάσης). Το G-6-P οξειδώνεται σε 6-PG (φωσφορικό-6-γλυκονικό) και ταυτοχρόνως ισομοριακό ποσό NADP (φωσφορική νικοτιναμίδη αδενίνη δινουκλεοτίδιο) μειώνεται σε NADPH σε μία αντίδραση με καταλύτη G-6P-DH (φωσφορική-6-γλυκόζη διυδρογενάση). Η αύξηση απορρόφησης στα 340 nm, που προκύπτει από τον σχηματισμό NADPH, είναι αναλογική προς τη δραστικότητα της κρεατινικής κινάσης στο δείγμα. (3) CK Φωσφοκρεατίνη + ADP ⎯→ Κρεατίνη + ATP HK Γλυκόζη + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Αντιδραστήριο Α: Υπόστρωμα Κωδικός: 981373 για 10 x 10 ml Κωδικός: 981776 για 8 x 3 ml Αντιδραστήριο Β: Ρυθμιστικό διάλυμα Κωδικός: 981373 10 x 10 ml Κωδικός: 981776 8 x 3 ml Προφυλάξεις Τα ανθρώπινα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται και να απορρίπτονται σαν να ήταν δυνητικά μολυσματικά. Αποθήκευση (4) Το δείγμα μπορεί να αποθηκευτεί για 2 ημέρες στους 20…25 °C, για 7 ημέρες στους 4…8 °C ή για 4 εβδομάδες στους -20 °C στο σκοτάδι. ΔΙΑΔΙΚΑΣΊΑ ΕΞΈΤΑΣΗΣ Ανατρέξτε στα φυλλάδια του Εγχειριδίου Αναφοράς και των Σημειώσεων Εφαρμογών για μια αυτόματη διαδικασία του αναλυτή σας Konelab. Η καλή λειτουργία οποιασδήποτε εφαρμογής που δεν έχει επικυρωθεί από την Thermo Fisher Scientific Oy, δεν μπορεί να έχει εγγύηση απόδοσης και επομένως πρέπει να εκτιμηθεί από το χρήστη. Παρεχόμενα Υλικά Αντιδραστήρια όπως περιγράφονται παραπάνω. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται Δείγμα ποιοτικού ελέγχου όπως περιγράφεται παρακάτω. Βαθμονόμηση Η απόκριση (dA/min) μετατρέπεται σε μονάδες αποτελέσματος από έναν παράγοντα υπολογισμού. Ποιοτικός Έλεγχος Χρησιμοποιήστε δείγματα ποιοτικού ελέγχου τουλάχιστον μία φορά τη μέρα και μετά από κάθε βαθμονόμηση και κάθε φορά που χρησιμοποιείται νέα φιάλη αντιδραστηρίων. Διαθέσιμα δείγματα ποιοτικού ελέγχου: CK-MB Control, κωδικός: 981908 CK-MB Control High, κωδικός: 981255 Τα όρια και τα διαστήματα του μάρτυρα πρέπει να προσαρμόζονται στις συγκεκριμένες απαιτήσεις κάθε εργαστηρίου. Τα αποτελέσματα του δείγματος ποιοτικού ελέγχου πρέπει να εμπίπτουν εντός των ορίων που έχει προκαθορίσει το εργαστήριο. ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Τα αποτελέσματα υπολογίζονται αυτομάτως από τον αναλυτή Konelab ως εξής: Ενεργότητα σε U/l = Παράγων x (dA/min) TV x 1000 Παράγων = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P όπου: TV= Ολικός όγκος αντίδρασης σε ml SV= Όγκος δείγματος σε ml 6.22= Συντελεστής εξασθένησης του NADPH στα 340 nm P= Μήκος διαδρομής κυψελίδας = 1 Παράγων μετατροπής μkat/l = (U/l)/60 Διπλασιάστε τη δραστικότητα CK-B (U/l) για να λάβετε δραστικότητα με όρους CK-ΜB (U/l). ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ (6, 7) Λόγω της περιορισμένη ποσότητας αντισώματος CK-M που προστίθεται στο αντιδραστήριο, δείγματα με υψηλές τιμές CK πρέπει να αραιώνονται ώστε η τιμή συνολικού CK να μην υπερβαίνει τα 2000 U/l. Υψηλές τιμές CK-BB ή άτυπων μάκρο ισοενζύμων CK-BB μπορεί να προκαλέσουν εσφαλμένα υψηλά αποτελέσματα CK-MB. Παρεμβολές Κριτήριο: Ανάκτηση εντός + 10% των αρχικών τιμών. Συζευγμένη χολερυθρίνη: Δε βρέθηκε παρεμβολή έως 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Αιμόλυση: Μη χρησιμοποιείτε αιμολυμένα δείγματα. Λιπαιμία: Μη χρησιμοποιείτε λιπαιμικό δείγμα. Για άλλες παρεμβαλλόμενες ουσίες, παρακαλούμε να ανατρέξετε στην παραπομπή 5. Συγκεντρώσεις στο ανασυσταθέν αντιδραστήριο: Ρυθμιστικό διάλυμα (ιμιδαζόλιο) 104 mmol/l Φωσφοκρεατίνη 31 mmol/l Διφωσφορική-5’-αδενοσίνη (ADP) 2 mmol/l Άλας μαγνησίου 10 mmol/l Δ-γλυκόζη 21 mmol/l Μονοφωσφορική-5’-αδενοσίνη (AΜP) 5 mmol/l Φωσφορική νικοτιναμίδη αδενίνη δινουκλεοτίδιο (NADP) 2 mmol/l Δι(αδενοσίνη-5’)πενταφωσφορική (AP5A) 10 μmol/l N-ακετυλκυστίνη (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Εξοκινάδη (ΗΚ) > 3500 U/l Φωσφορική-6-γλυκόζη διυδρογενάση (G-6-P-DH) > 2000 U/l Αντιανθρώπινα πολυκλονικά αντισώματα CK-M (από πρόβατο ή γίδα) επαρκή για αναστολή έως και 2000 U/l CK-MM στους 37 °C. NaN3 < 0.1 % ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΑΞΊΕΣ (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Οι προαναφερθείσες τιμές πρέπει να εκλαμβάνονται ως οδηγός μόνον. Συνιστάται το κάθε εργαστήριο να διεξάγει την επαλήθευση αυτού του εύρους τιμών ή να παράγει ένα διάστημα αναφοράς για τον πληθυσμό με τον οποίο ασχολείται. Προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση μόνο. Εφαρμόζετε τις κανονικές προφυλάξεις που απαιτούνται για το χειρισμό όλων των εργαστηριακών αντιδραστηρίων. Το αντιδραστήριο περιέχει νατραζίδιο ως συντηρητικό. Μην καταπίνετε. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και με τους βλεννογόνους. Ανακρίβεια Προετοιμασία Διαλύστε το περιεχόμενο του αντιδραστηρίου Α με όλο το περιεχόμενο του αντιδραστηρίου Β. Τοποθετήστε το πώμα στο φιαλίδιο και αναμίξτε. Σημείωση: Ελέγξτε ότι δεν υπάρχουν φυσαλίδες στο λαιμό ή στην επιφάνεια του φιαλιδίου αντιδραστηρίου όταν εισάγετε τα φιαλίδια ή τα δοχεία αντιδραστηρίων στην αναλυτή Konelab. Αποθήκευση και σταθερότητα Αντιδραστήρια σε φιαλίδια που δεν έχουν ανοιχτεί παραμένουν σταθερά στους 2…8 °C έως την ημερομηνία λήξης που αναφέρεται στην ετικέτα. Ανατρέξτε στις Σημειώσεις Εφαρμογών του αναλυτή Konelab για την σταθερότητα των αντιδραστηρίων όταν αυτά είναι φορτωμένα στο μηχάνημα. Αν το μόλις ανασυσταθέν αντιδραστήριο έχει απορρόφηση στα 340 nm υψηλότερη από 0.700 όταν μετράται με τυφλό νερού, μην το χρησιμοποιείτε. Αν το αντιδραστήριο παρουσιάζει θολότητα, μην το χρησιμοποιείτε. ΔΕΙΓΜΑΤΟΛΗΨΙΑ Τύπος δείγματος Χρησιμοποιήστε διαυγή, μη αιμολυόμενο ορό ή πλάσμα ηπαρίνης. Αποφύγετε έκθεση των δειγμάτων σε δυνατό φως. ΕΎΡΟΣ ΜΈΤΡΗΣΗΣ 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Εκτεταμένο εύρος μέτρησης μετά από δευτερογενή αραίωση: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΚΤΕΛΕΣΗΣ Όριο ανίχνευσης 7 U/l (0.12 μkat/l) Το όριο ανίχνευσης αντιπροσωπεύει τη χαμηλότερη συγκέντρωση/ενεργότητα που μπορεί να μετρηθεί και να διακριθεί από το μηδέν. Υπολογίζεται ως η συγκέντρωση του δείγματος μηδέν + 3 SD (εντός της εκτέλεσης, n=24). Εντός της εκτέλεσης Μεταξύ ημερών Συνολικό Μέση τιμή 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 SD 1.6 0.9 3.0 Μέση τιμή 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 SD 3.0 4.1 6.6 Μέση τιμή 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Εκτελέστηκε μελέτη ακριβείας χρησιμοποιώντας τη συσκευή Konelab 30 για 10 ημέρες, με αριθμό μετρήσεων n = 40. Σύγκριση μεθόδου Σύγκριση μεταξύ αυτού του αντιδραστηρίου CK-MB (y) και ενός εμπορικού τεστ που βασίζεται σε ανοσοαναστολή της υπομονάδας CK-M (x) έδωσε τα παρακάτω αποτελέσματα: Γραμμική στατική παρεμβολή (μονάδα αποτελέσματος U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε ξεχωριστά εργαστήρια πιθανόν να διαφέρουν από τα δεδομένα απόδοσης. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΊΑ 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. EL Template: D01162_4 Page 7 Page 8 3) 4) 5) 6) 7) D02017_05_Insert_CK-MB_MU Gerhardt, W and Waldenstrom, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΤΗΣ Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01620 Vantaa Τηλ. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Ημερομηνία αναθεώρησης (εεεε-μμ-ηη) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Αλλαγές από την προηγούμενη έκδοση Η γραμμή δίπλα στο κείμενο υποδεικνύει αλλαγές. D02017_05_Insert_CK-MB_MU Konelab™ / Serie T CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml ESTE PROSPECTO ES PARA USO FUERA DE EE. UU. TODAS LAS REFERENCIAS A LOS SISTEMAS KONELAB SE REFIEREN TAMBIÉN A LA SERIE T. USO Para la determinación cuantitativa in vitro de la actividad de la subunidad B de la isozima CK-MB de creatina quinasa (ATP: Creatina N-fosfo-transferasa (CK), EC 2.7.3.2) en suero o plasma humano en analizadores Konelab. Todos los resultados del test deben interpretarse en función del contexto clínico. RESUMEN (1,2) La creatina quinasa (CK) es un compuesto dímero de dos subunidades, M (muscular) y B (cerebral). Pueden existir tres pares de subunidades distintos: BB (o CK-1), MB (o CK-2), y MM (o CK-3). CK-MB se presenta en grados diferentes, en la musculatura cardiaca y también en la musculatura ósea. La actividad principal de la CK en suero normal se debe a CK-MM. CK-BB se encuentra por lo general en suero en baja concentración. CK-MB se encuentra en baja concentración en suero humano normal pero aumenta como resultado de lesión cardiaca y, en raras ocasiones, como resultado de daños en la musculatura ósea. PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO Existen una serie de métodos para determinar la actividad de CK-MB. El reactivo utiliza un método de inmuno-inhibición que emplea un anticuerpo policlonal para el monómero CKM. De este modo, inhibe completamente la actividad de CK-MM y la mitad de la actividad de CK-MB. La actividad del monómero CK-B sin inhibir es probada entonces. La creatina quinasa cataliza la reacción entre el fosfato de creatina y ADP (5'-difosfato de adenosina) con formación de creatina y ATP (5'-trifosfato de adenosina). El último compuesto fosforila la glucosa en G-6-P (glucosa-6-fosfato) en presencia de HK (hexokinasa). G-6-P se oxida a 6-PG (gluconato-6-fosfato) y, al mismo tiempo, una cantidad equimolar de NADP (fosfato nicotinamida adenina dinucleótido) se reduce a NADPH en una reacción catalizada por G-6P-DH (glucosa-6-fosfato dehidrogenasa). El aumento de la absorbencia en 340 nm, producido por la formación de NADPH, es proporcional a la actividad de la creatina quinasa en la muestra. (3) CK Fosfato de creatina + ADP ⎯→ Creatina + ATP HK Glucosa + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ INFORMACIÓN SOBRE LOS REACTIVOS Reactivo A: Substrato Código: 981373 para 10 x 10 ml Código: 981776 para 8 x 3 ml Reactivo B: Solución tampón Código: 981373 10 x 10 ml Código: 981776 8 x 3 ml Concentraciones en el reactivo reconstituido: Tampón (Imidazol) 104 mmol/l Fosfato de creatina 31 mmol/l 5'-difosfato de adenosina (ADP) 2 mmol/l Sal de magnesio 10 mmol/l D-glucosa 21 mmol/l 5'-monofosfato de adenosina (AMP) 5 mmol/l Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP) 2 mmol/l 10 μmol/l Di(adenosina-5')pentafosfato (AP5A) N-acetil-L-cisteína (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexoquinasa (HK) > 3500 U/l Glucosa-6-fosfato dehidrogenasa (G-6-P-DH) > 2000 U/l Anticuerpo CK-M policlonal antihumano (de oveja o cabra) suficiente para inhibir hasta 2000 U/l de CK-MM a 37° C. NaN3 < 0.1 % Precauciones Para uso exclusivo de diagnóstico in vitro. Tome las precauciones habituales necesarias para el manejo de todos los reactivos de laboratorio. El reactivo contiene azida sódica como agente de conservación. No lo ingiera. Evite el contacto con piel y mucosas. Preparación Disuelva el contenido del Reactivo A en el contenido total del Reactivo B. Cierre el vial y mézclelos. Nota: Compruebe que no haya burbujas en el cuello de la botella ni en la superficie del reactivo cuando inserte los viales o recipientes en el analizador Konelab. Almacenamiento y estabilidad Los reactivos en viales sin abrir son estables a 2…8 °C hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta. Consulte las notas de aplicación de su analizador Konelab para determinar la estabilidad de los reactivos abiertos y puestos en el analizador. Si la absorbencia del reactivo reconstituido recién abierto es de 340 nm por encima de 0.700 en la nueva medición con muestra de agua, no lo utilice. Si el reactivo presenta turbidez, no lo utilice. RECOGIDA DE MUESTRAS Tipo de muestra Utilice suero o plasma de heparina limpio y sin hemolizar. No exponga las muestras a una luz intensa. Precauciones Las muestras de origen humano deben manejarse y desecharse como si se tratase de material potencialmente infeccioso. Almacenamiento (4) La muestra puede almacenarse durante 2 días a 20…25 °C, durante 7 días a 4…8 °C o durante 4 semanas a -20 °C en la oscuridad. PROCEDIMIENTO DEL TEST Consulte el Manual de Referencia y las notas de aplicación para el procedimiento automático en el analizador Konelab,. No puede garantizarse la fiabilidad de ninguna aplicación no aprobada por Thermo Fisher Scientific Oy, por lo que deberá evaluarla el usuario. Materiales suministrados Reactivos descritos anteriormente. Material requerido pero no suministrado Controles descritos a continuación. Calibración La respuesta (dA/min) se convierte en unidades de resultado con un factor de cálculo. Control de calidad Utilice muestras de control de calidad al menos una vez al día, después de cada calibración y siempre que utilice un nuevo frasco de reactivos. Controles disponibles: CK-MB Control, código: 981908 CK-MB Control High, código: 981255 Los intervalos y límites de control deben adaptarse a los requisitos del laboratorio concreto. Los resultados de la muestra de control de calidad deben estar dentro de los límites establecidos previamente por el laboratorio. CÁLCULO DE RESULTADOS El analizador Konelab calcula los resultados automáticamente de la manera siguiente: Actividad en U/I = dA/mín. x factor Factor = donde: TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P TV= Volumen total de reacción en ml SV= Volumen de muestra en ml 6.22= Coeficiente de extinción de NADPH a 340 nm P= Longitud de recorrido de cubeta = 1 Factor de conversión μkat/l = (U/l)/60 Multiplique la actividad CK-B (U/I) por 2 para obtener la actividad en términos de CK-MB (U/I). LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO (6, 7) Dada la cantidad limitada de anticuerpo CK-M añadida al reactivo, las muestras con valores totales elevados de CK deberán disolverse para que el valor total de CK no supere 2000 U/I. Las isozimas de CK-BB alto o CK-BB-macro atípico pueden dar resultados elevados falsos de CK-MB. Interferencias Criterio: Recuperación entre + 10% de los valores iniciales. Bilirrubina compuesta: Sin interferencias encontradas hasta 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Hemólisis: No utilice muestras hemolizadas. Lipemia: No utilice muestras lipémicas. Si desea información sobre la interferencia de otras sustancias, consulte la referencia 5. VALORES PREVISTOS (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Los valores mencionados sirven sólo como guía. Se recomienda que cada laboratorio verifique este rango o derive un intervalo de referencia para la población a la que atiende. RANGO DE MEDIDA 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Rango de medida aumentado después de la segunda dilución: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). CARACTERÍSTICAS DEL RESULTADO Límite de detección 7 U/l (0.12 μkat/l) El límite de detección representa la concentración / actividad más baja mensurable que puede distinguirse de cero. Se calcula como la concentración de muestra cero + 3 SD (intraserie, n=24). Imprecisión Intraserie Interdiario Total Media 66 U/l SD CV% 1.6 2.3 0.9 1.3 3.0 4.3 Media 143 U/l SD CV% 3.0 2.2 4.1 3.0 6.6 4.7 Media 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Se llevó a cabo un estudio de precisión con Konelab 30 durante 10 días, siendo el número de medidas n = 40. Comparación de métodos Una comparación realizada entre este reactivo CK-MB (y) y un test disponible en el mercado basado en la inmuno-inhibición de la subunidad de CK-M (x) dio los siguientes resultados: Regresión lineal (unidad U/I de resultado): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Los resultados obtenidos en cada laboratorio pueden diferir de los datos de los resultados presentados. BIBLIOGRAFÍA 1) Burtis, CA y Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5ª edición, W B Saunders Company, Filadelfia, 2001, págs. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1ª edición, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Alemania, 1998, pág. 73. 3) Gerhardt, W y Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), págs. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Folleto sobre: Muestras: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. ES Template: D01162_4 Page 9 Page 10 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 5) 6) 7) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5ª edición, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. Wu, AHB y Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), págs. 2017-2021, 1982. Comité de Enzimas de la Sociedad Escandinava de Qúimica Clínica y Fisiología Clínica (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Actvity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. Proyecto Químico Clínico Nórdico (Nordchem) Helsinki, Finlandia 1981. FABRICANTE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Telf. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Fecha de revisión (aaaa-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Cambios desde la versión anterior Una línea junto al texto indica modificaciones. Page 11 D02017_05_Insert_CK-MB_MU ET KATSEPROTSEDUUR Teave automaatse katseprotseduuri kasutamise kohta Konelab analüsaatoril on esitatud juhendis ja tehnilistes märkustes. Thermo Fisher Scientific Oy poolt valideerimata rakendusviiside sooritusnäitajaid tagada ei saa, seetõttu peab neid hindama lõppkasutaja. Konelab™ / T seeria CK-MB Kaasasolevad materjalid Eespool kirjeldatud reaktiivid. 10 x 10 ml 8 x 3 ml PAKENDI INFOLEHT ON KOOSTATUD KASUTAMISEKS VÄLJASPOOL USA-D. KONELAB SYSTEMSI VIITED KEHTIVAD ÜHTLASI T SEERIA KOHTA. SIHTOTSTARVE Kreatiinkinaasi (ATP: kreatiin N-fosfotransferaasi (CK), EC 2.7.3.2) isoensüümi Balamüksuse aktiivsuse in vitro kvantitatiivseks määraimiseks inimese vereseerumis või plasmas Konelab analüsaatorite abil. Katsetulemuste tõlgendamisel tuleb alati arvesse võtta kliinilist tausta. KOKKUVÕTE (1,2) Kreatiinkinaas (CK) on kahest alamüksusest, M (lihas) ja B (aju) koosned dimeer. Esineda võib kolme erinevat alamüksuste paari: BB (või CK-1), MB (või CK-2) ja MM (või CK-3). CK-MB-d esineb erineval määral südamelihases ja ka skeletilihases. Normaalse seerumi peamine CK aktiivsus tuleneb CK-MM-st. CK-BB kontsentratsioon seerumis on tavaliselt madal. CK-MB kontsentratsioon normaalses inimseerumis on madal ning tõuseb südamekahjustuse ja harva ka skeletilihase kahjustuse korral. MEETODI PÕHIMÕTE CK-MB aktiivsuse mõõtmiseks on kasutusel mitmeid metoodikaid. Antud reaktiivi puhul kasutatakse ära immuunsuse inhibitsiooni meetodit, mille käigus lisatakse CK-M monomeerile polüklonaalne antikeha. See pärsib aktiivsuse CK-MM täielikult ja aktiivsuse CK-MB poole võrra. Seejärel testitakse inhibeerimta CK-B monomeeri aktiivsust. Kreatiinkinaas katalüüsib reaktsiooni kreatiinfosfaadi ja ADP (adenosiin-5’-difosfaat) vahel, reaktsioonis tekivad kreatiin ja ATP (adenosiin-5’-trifosfaat). Viimane fosforüülib glükoosi HK (heksokinaas) juuresolekul glükoos-6-fosfaadiks (G-6-P). G-6-P oksüdeerub 6-PG-ks (glükonaat6-fosfaat), samal ajal redutseerub ekvimolaarne NADP (nikotiinamiidadeniindinukleotiidfosfaat) kogus G-6P-DH (glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaas) katalüüsitavas reaktsioonis NADPH-ks. NADPH tekkest tingitud neelduvuse tõus lainepikkusel 340 nm on võrdeline kreatiinkinaasi aktiivsusega proovis. (3) CK Kreatiinfosfaat + ADP ⎯→ Kreatiin + ATP HK Glükoos + ATP ⎯→ G-6-P + ADP 10 x 10 ml kohta 8 x 3 ml kohta Ettevalmistamine Kogu A-reaktiiv lahustatakse kogu B-reaktiivis. Viaal suletakse korgiga ja segatakse. Märkus: Enne reaktiiviviaalide või -nõude viimist Konelab analüsaatorisse tuleb kontrollida, et pudelikaelas ega reaktiivi pinnal ei oleks mulle. Säilitamine ja stabiilsus Avamata viaalides püsivad reaktiivid temperatuuril 2…8 °C stabiilsena sildile trükitud aegumistähtajani. Teave laetud reaktiivide stabiilsuse kohta on esitatud Konelab analüsaatori tehnilistes märkustes. Kui värskelt valmis segatud reaktiivi neelduvus lainepikkusel 340 nm mõõdetuna vee suhtes on suurem kui 0.700, on reaktiiv kasutuskõlbmatu. Hägune reaktiiv ei sobi kasutamiseks. PROOVIDE VÕTMINE Proovi tüüp Kasutada selget, hemolüüsumata seerumi- või plasmaproove. Proove tuleb hoida tugeva valguse eest. käsitsemisel ja TULEMUSTE ARVUTAMINE Tulemused arvutab Konelab analüsaator automaatselt järgmisel viisil: Aktiivsus (U/l) = dA/min x tegur TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P Tegur = kus: TV = reageerivate ainete kogumaht (ml) SV = proovi maht (ml) 6.22 = NADH ekstinktsioonitegur 340 nm juures P= küveti optiline teepikkus = 1 Teisendustegur μkat/l = (U/l)/60 Korrutad CK-B aktuuvsus (U/l) kahega, et saada CK-MB (U/l) kohane aktiivsus. PROTSEDUURI KASUTAMIST PIIRAVAD TEGURID (6, 7) Kuna reaktiivile lisatakse CK-M antikehasid piiratud hulgal, tuleb suure CK koguväärtusega proove lahjendada nii, et CK koguväärtus ei ületaks 2000 U/l. Kõrge CKBB või ebatüüpiline CK-BB-makro isoensüümide tase võib põhjustada CK-MB valenäidu. kõrvaldamisel lugeda võimalikeks Säilitamine (4) Proovi võib temperatuuril 20…25 °C säilitada kuni 2 päeva, temperatuuril 4…8 °C kuni 7 päeva ja pimedas, temperatuuril -20 °C kuni 4 nädalat. MÕÕTEPIIRKOND 22 -500 U/l (0.37 -8.3 μkat/l) Pikendatud mõõtepiirkond pärast sekundaarset lahjendust: 22 -2500 U/l (0.37 -41.7 μkat/l). SOORITUSNÄITAJAD Avastamispiir 7 U/l (0.12 μkat/l) Avastamispiir on madalaim mõõdetav kontsentratsioon/aktiivsus, mis on nullist eristatav. See leitakse kui nullproovi kontsentratsioon + 3 SD (katseseeriasisene, n=24). Ebatäpsus Katseseeriasisene Eri päevad Summarne Keskmine 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 SD 1.6 0.9 3.0 Keskmine 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 SD 3.0 4.1 6.6 Keskmine 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Konelab 30 peal viidi 10 päeva jooksul läbi täpsusuuring, mõõtmiste arv uuringus oli vähemalt n = 40. Meetodite võrdlus Võrdlevas uuringus käesoleva CK-MB reaktiivi (y) ja müügiloleva CK-M immuunsuse inhibitsioonil põhineva analüüsi (x) vahel saadi järgmised tulemused: Lineaarne regressioon (tulemuse ühik U/l): y = 0.96 x -1 r = 0.993 n = 70 Individuaalsetes laborites saadavad tulemused võivad erineda esitatud sooritusnäitajatest. KIRJANDUS 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Hoiatused Kasutamiseks ainult in vitro diagnostikas. Kõigi laborireaktiivide käsitsemisel tuleb rakendada tavapäraseid ettevaatusabinõusid. Reaktiiv sisaldab säilitusainena naatriumasiidi. Mitte neelata. Vältida kokkupuudet naha ja limaskestadega. tuleb Kvaliteedikontroll Kvaliteedikontrolliproove kasutatakse vähemalt kord päevas, pärast iga kaliibrimist ja iga kord, kui kasutatakse uut reaktiivipudelit. Saadaval on järgmised kontrollproovid: CK-MB Control, koodiga: 981908 CK-MB Control High, koodiga: 981255 Kontrollide vahemikud ja piirid tuleb kohaldada individuaalsete laborite vajadustele. Kvaliteedi kontrollproovide abil saadud tulemused peavad jääma labori poolt eelnevalt kehtestatud piiridesse. OODATAVAD TULEMUSED (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Toodud väärtused on mõeldud suunitluslikena. Kõigil laboritel on soovitatav seda vahemikku kontrollida, või tuletada ise etalonvahemik teenindatava populatsiooni seas. 10 x 10 ml 8 x 3 ml Kontsentratsioonid valmis segatud reaktiivis: Puhver (Imidazole) 104 mmol/l Kreatiinfosfaat 31 mmol/l Adenosiin-5’-difosfaat (ADP) 2 mmol/l Magneesiumisool 10 mmol/l D-glükoos 21 mmol/l Adenosiin-5’-monifosfaat (AMP) 5 mmol/l Nikotiinamiidadeniindinukleotiid fosfaat (NADP) 2 mmol/l Di(adenosiin-5’)pentafosfaat (AP5A) 10 μmol/l N-atsetüül-L-süsteiin (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Heksokinaas (HK) > 3500 U/l Glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaas (G-6-P-DH) > 2000 U/l Mitte-inipäritolu polüklonaalne CK-M antikeha (lammas või kits), millest piisab 2000 U/l CK-MM inhibeerimiseks temperatuuril 37 °C. NaN3 < 0.1 % Hoiatused Inimpäritolu proovid nakkusallikateks. Kaliibrimine Vastus (dA/min) teisendatakse ühikuliseks tulemuseks vastava arvutusteguri abil. Segavad mõjud Tingimus: Saagis algväärtuse suhtes ± 10%. Konjugeeritud bilirubiin: Kontsentratsioonini kuni 650 μmol/l (38.0 mg/dl) segavat mõju ei täheldatud. Hemolüüs: Hemolüüsunud proove mitte kasutada. Lipeemia: Lipeemilisi proove mitte kasutada. Muid segavaid aineid on käsitletud viites 5. G-6-P-DH G-6-P + NADP ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ + TEAVE REAKTIIVIDE KOHTA A-reaktiiv: substraat kood: 981373 kood: 981776 B-reaktiiv: Puhver kood: 981373 kood: 981776 Vajalikud materjalid, mida kaasas pole Allpool kirjeldatud kontroll. Template: D01162_4 981373 981776 Page 12 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 6) 7) Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. TOOTJA Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Faks +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Teksti läbivaatamise kuupäev (aaaa-kk-pp) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Muudatused võrreldes eelmise versiooniga Teksti kõrval olev joon tähistab muudatusi. Page 13 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml EZ A TÁJÉKOZTATÓ AZ EGYESÜLT ÁLLAMOKON KÍVÜLI HASZNÁLATRA VONATKOZIK. A KONELAB RENDSZEREKRE TETT MINDEN UTALÁS A T SOROZATRA IS VONATKOZIK. RENDELTETÉS Emberi szérum, illetve plazma kreatin-kináz (ATP: Kreatin N-foszfotranszferáz (CK), EC 2.7.3.2) CK-MB izoenzim B alegységének in vitro kvantitatív aktivitás-meghatározásához Konelab analizátorokban. Minden vizsgálati eredményt a klinikai képpel összefüggésben kell értékelni. ÖSSZEGZÉS (1,2) A kreatin-kináz (CK) egy két alegységből - M (“muscle”, izom) és B (“brain”, agy) - álló dimer. Három különböző alegységpár létezik: BB (vagy CK-1), MB (vagy CK-2), és MM (vagy CK-3). A CK-MB változó mennyiségben megtalálható a szívizomban és a vázizomzatban. A normál szérum fő CK-aktivitását a CK-MM adja. A CK-BB a szérumban általában alacsony koncentrációban van jelen. A CK-MB a normál emberi szérumban alacsony koncentrációban található meg, azonban szívkárosodás, valamint ritkán vázizomsérülés eredményeképpen szintje megemelkedik. AZ ELJÁRÁS ALAPELVE Számos módszer létezik a CK-MB aktivitásának meghatározására. E reagens CK-M monomer ellenes poliklonális antitesteket tartalmaz és az immun-inhibíciós módszert alkalmazza. Teljesen gátolja a CK-MM, és félig a CK-MB aktivitását. Ezután mérhető a nem gátolt CK-B monomer aktivitása. A kreatin kináz a kreatin-foszfát és az ADP (adenozin-5’-difoszfát) közti reakciót katalizálja, mely során kreatin és ATP (adenozin-5’-trifoszfát) keletkezik. Az utóbbi vegyület foszforilálja a glukózt G-6-P-tá (glukóz-6-foszfát) HK (hexokináz) jelenlétében. A G-6-P 6-PG-tá (6-foszfoglukonát) oxidálódik, miközben ekvimoláris mennyiségű NADP (nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát) NADPH-vá redukálódik a G-6P-DH (glukóz-6-foszfát dehidrogenáz) által katalizált reakcióban. A 340 nm-en mért abszorbancia NADPH-képződés következtében létrejött növekedése arányos a minta kreatin kináz aktivitásával. (3). Tárolás (4) A minta sötétben 20...25 °C-on 2 napig, 4…8 °C-on 7 napig, -20 °C-on pedig 4 hétig tárolható. A VIZSGÁLATI ELJÁRÁS Automatizált eljárás kivitelezéséhez olvassa el a Konelab analizátorhoz tartozó Használati kézikönyvet és Alkalmazási tudnivalókat. Nem garantálható semmilyen olyan alkalmazás eredménye, amelyet a Thermo Fisher Scientific Oy nem hagyott jóvá, ezért ezeket a felhasználónak kell értékelnie. Szolgáltatott anyagok A fent leírt reagensek. Szükséges, de nem szolgáltatott anyagok Az alább leírt kontrollok. Kalibrálás A válasz (dA/min) egy számítási tényező segítségével eredményegységekre átszámítva jelenik meg. Minőségellenőrzés Használjon minőségellenőrző mintákat naponta legalább egyszer, minden kalibrálás után, illetve minden új üveg reagens felnyitásakor. Rendelkezésre álló kontrollminták: CK-MB Control, kód: 981908 CK-MB Control High, kód: 981255 Az ellenőrzési intervallumokat és határértékeket az aktuális laboratóriumi követelményekhez kell igazítani. A minőségellenőrző minta eredményeinek a laboratórium által előre beállított határértékek közé kell esniük. AZ EREDMÉNYEK KISZÁMÍTÁSA Az eredményeket a Konelab analizátor automatikusan kiszámítja a következők szerint: Aktivitás U/l = dA/min x faktor Faktor = ahol: TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P TV = teljes reagáló térfogat ml-ben SV = minta térfogata ml-ben 6.22= a NADPH extinkciós együtthatója 340 nm-en P= küvetta úthossza = 1 Átváltási faktor μkat/l = (U/l)/60 CK Kreatin-foszfát + ADP ⎯→ Kreatin + ATP A CK-MB (U/l) aktivitásának meghatározásához kettővel meg kell szorozni a CK-B aktivitást (U/l). HK Glukóz + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI (6,7) A reagensben lévő CK-M antitest korlátozott mennyisége miatt a magas össz-CK értékkel bíró mintákat fel kell hígítani, hogy az össz-CK értéke 2000 U/l alatt legyen. Magas CK-BB aktivitás, illetve atípusos CK-BB makro izoenzimek tévesen magas CK-MB eredményeket okozhatnak. REAGENSEK ADATAI A reagens: Szubsztrát Kód: 981373 Kód: 981776 B reagens: Puffer Kód: 981373 Kód: 981776 Interferencia Kritérium: Az értékek a kezdeti értékek ±10%-án belül maradnak. Konjugált bilirubin: Nem észleltek interferenciát 650 μmol/l (38.0 mg/dl) értékig. Hemolízis: Ne használjon hemolizált mintát. Lipaemia: Ne használjon lipémiás mintát. Egyéb interferenciát okozó anyagok tekintetében lásd az 5. referenciát. 10 x 10 ml-hez 8 x 3 ml-hez 10 x 10 ml 8 x 3 ml Koncentrációk az előkészített reagensben: Puffer (imidazol) 104 mmol/l Kreatin-foszfát 31 mmol/l Adenozin-5’-difoszfát (ADP) 2 mmol/l Magnéziumsó 10 mmol/l D-glukóz 21 mmol/l Adenozin-5’-monofoszfát (AMP) 5 mmol/l Nikotinamid-adenin-dinukleotid -foszfát (NADP) 2 mmol/l Di-(adenozin-5’)-pentafoszfát (AP5A) 10 μmol/l N-acetil-L-cisztein (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokináz (HK) > 3500 U/l Glukóz-6-foszfát dehidrogenáz (G-6-P-DH) > 2000 U/l 37 °C hőmérsékleten 2000 U/l CK-MM gátlásához elegendő anti-humán poliklonális CK-M antitest (birkából vagy kecskéből). NaN3 < 0.1 % VÁRHATÓ ÉRTÉKEK (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) A feltüntetett értékek kizárólag tájékoztató jellegűek. Minden laboratórium esetében ajánlott a normál tartomány megerősítése, illetve a kiszolgált populációra jellemző referenciaintervallum kialakítása. MÉRÉSI TARTOMÁNY 22 -500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Kiterjesztett mérési tartomány másodlagos hígítás után: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l) TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK Detektálási határérték 7 U/l (0.12 μkat/l) A detektálási határérték az a legkisebb mérhető koncentráció/aktivitás, amely még megkülönböztethető a nullától. Kiszámítása a következő: nulla minta koncentrációja + 3 SD (mérés közben n=24). Pontatlanság Óvintézkedések Kizárólag in vitro diagnosztikus használatra. Tartsa be a laboratóriumi reagensek kezelésére vonatkozó szokásos előírásokat. A reagens tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaz. Ne nyelje le. Kerülje érintkezését a bőrrel és a nyálkahártyákkal. Előkészítés Oldja fel az A reagens tartalmát a B reagens teljes tartalmával. Zárja le az üveget és keverje össze. Megjegyzés: Ellenőrizze, hogy nincs-e buborék az üveg nyakánál vagy a reagens felszínén, amikor reagenst tartalmazó üvegeket, illetve edényeket tesz a Konelab analizátorba. Tárolás és stabilitás Felbontatlan üvegben tárolt reagensek 2...8 °C között a címkén feltüntetett lejárati időpontig stabilak. A reagensek elemzőkészüléken belüli stabilitásához olvassa el a Konelab analizátorhoz tartozó Alkalmazási tudnivalókat. Amennyiben a frissen elkészített reagens 340 nm-en mért abszorbanciája vízzel szemben mérve magasabb, mint 0.700, ne használja. Amennyiben a reagens zavaros, ne használja. MINTAVÉTEL A minta típusa Tiszta, hemolizálatlan szérumot vagy heparinos plazmát használjon. Tartsa távol a mintákat erős fénytől. Óvintézkedések Az emberi mintákat úgy kell kezelni és kidobni, mintha azok fertőzőek lennének. Mérés közben Napok közt Teljes Középérték 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 SD 1.6 0.9 3.0 Középérték 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 SD 3.0 4.1 6.6 Középérték 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Pontossági mérést végeztek Konelab 30 használatával 10 napon keresztül, 40-es mérésszámmal (n = 40). Módszerösszehasonlítás E CK-MB reagens (y) és egy forgalomban lévő, a CK-M alegység immun-inhibícióján alapuló teszt (x) összehasonlítása során a következő eredmények születtek: Lineáris regresszió (eredmény egység U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Az egyes laboratóriumokban nyert értékek különbözhetnek a megadott teljesítmény adatoktól. BIBLIOGRÁFIA 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / T sorozat Template: D01162_4 HU Page 14 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 4) 5) 6) 7) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. GYÁRTÓ Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Ellenőrzés időpontja (éééé-hh-nn) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Változtatások az előző változathoz képest A szöveg melletti vonal a változásokat jelöli. Page 15 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml IL PRESENTE INSERTO NELL’IMBALLO PUO’ ESSERE APPLICATO AL DI FUORI DEGLI STATI UNITI. EVENTUALI RIFERIMENTI A KONELAB SYSTEMS SI RIFERISCONO ANCHE ALLA SERIE T. USO CONSIGLIATO Per la determinazione quantitativa in vitro della subunità B dell'isoenzima CK-MB della creatinchinasi attività (ATP: Creatina N-Fosfotransferasi (CK), EC 2.7.3.2) nel siero o nel plasma umani con gli analizzatori Konelab. I risultati del test devono essere sempre interpretati in riferimento al contesto clinico specifico. SOMMARIO (1,2) La creatinchinasi (CK) è un enzima dimerico composto da due subunità: M (muscolare) e B (cerebrale). Possono esistere tre diverse coppie di subunità: BB (o CK-1), MB (o CK-2) e MM (o CK-3). La CK-MB è presente in proporzioni variabili nel muscolo cardiaco e anche nei muscoli scheletrici. La maggiore CK attività nel siero in condizioni di normalità è dovuta alla CK-MM. La CKBB di solito è presente nel siero in basse concentrazioni. La CK-MB è presente in basse concentrazioni nel siero umano in condizioni di normalità, ma viene aumentata come risultato di una lesione a livello cardiaco e, raramente, di un danno a livello del muscolo scheletrico. PRINCIPIO DELLA PROCEDURA Sono disponibili numerosi metodi per determinare la CK-MB attività. Questo reagente utilizza un metodo di immunoinibizione, il quale fa uso di un anticorpo policlonale per il monomero della CK-M. Esso inibisce completamente l’attività della CK-MM e metà dell’attività della CK-MB. A questo punto viene valutata l’attività del monomero CK-B non inibito. La creatinchinasi catalizza la reazione fra il creatinfosfato e l’ADP (adenosina-5’-difosfato) con la formazione di creatina e ATP (adenosina-5’-trifosfato). L’ultimo composto fosforila il glucosio in G-6-P (glucosio 6-fosfato) in presenza di HK (esochinasi). Il G-6-P viene ossidato in 6-PG (6-fosfo gluconato) e allo stesso tempo una quantità equimolare di NADP (nicotinammide adenin-dinucleotide fosfato) viene ridotta in NADPH nel corso di una reazione catalizzata dal G-6P-DH (glucosio 6-fosfatodeidrogenasi). L'aumento nell’assorbenza a 340 nm, risultante dalla formazione del NADPH, è proporzionale all’attività della creatinchinasi nel campione. (3) CK Creatinfosfato + ADP ⎯→ Creatina + ATP HK Glucosio + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ INFORMAZIONI SUI REAGENTI Reagente A: Substrato Codice: 981373 per 10 x 10 ml Codice: 981776 per 8 x 3 ml Reagente B: Tampone Codice: 981373 10 x 10 ml Codice: 981776 8 x 3 ml Concentrazioni nel reagente ricostituito: Tampone (Imidazolo) 104 mmol/l Creatinfosfato 31 mmol/l Adenosina-5’-difosfato (ADP) 2 mmol/l Sale di magnesio 10 mmol/l D-glucosio/destrosio 21 mmol/l Adenosina-5’-monofosfato (AMP) 5 mmol/l Nicotinammide adenin-dinucleotide fosfato (NADP) 2 mmol/l Di(adenosina-5’)pentafosfato (AP5A) 10 μmol/l N-acetil-L-cisteina (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Esochinasi (HK) > 3500 U/l Glucosio 6-fosfatodeidrogenasi (G-6-P-DH) > 2000 U/l L'anticorpo policlonale anti-CK-M umana (derivato dalle pecore o dalle capre) è sufficiente per inibire fino a 2000 U/l di CK-MM a 37 °C. NaN3 < 0.1 % Precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro. Rispettare le normali precauzioni previste per l’utilizzo di tutti i reagenti di laboratorio. Il reagente contiene sodio azide come conservante. Non ingerire. Evitare il contatto con la cute e le membrane mucose. Preparazione Disciogliere il contenuto del Reagente A con l’intero contenuto del Reagente B. Chiudere la fiala e miscelare. Nota: controllare che non siano presenti bolle sul collo del flacone o sulla superficie del reagente quando si inseriscono flaconi o recipienti nell'analizzatore Konelab. Conservazione e stabilità I reagenti in fiale intatte sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta, se conservati a una temperatura di 2…8 °C. Per la stabilità dei reagenti sullo strumento, fare riferimento alle note applicative dell'analizzatore Konelab in uso. Se a 340 nm il reagente appena ricostituito ha un’assorbenza superiore a 0,700, quando misurato contro una provetta di acqua, non utilizzarlo. Se il reagente è torbido, non utilizzarlo. RACCOLTA DEL CAMPIONE Tipo di campione Utilizzare siero o plasma-eparina limpidi e non emolizzati. Non esporre i campioni a una forte luce. Precauzioni I campioni umani devono essere maneggiati e smaltiti come campioni potenzialmente infetti. Conservazione (4) I campioni possono essere conservati per 2 giorni a 20…25 °C, per 7 giorni a 4…8 °C oppure per 4 settimane a -20 °C al buio. PROCEDURA ANALITICA Per le procedure automatiche consultare il manuale d’uso e le note applicative dell'analizzatore Konelab. Tutte le applicazioni non esplicitamente approvate da Thermo Fisher Scientific Oy non possono essere garantite in termini di prestazioni e dovranno pertanto essere valutate dall'utilizzatore. Materiali inclusi nel kit I reagenti sopra descritti. Materiali necessari ma non inclusi nel kit I controlli indicati di seguito. Calibrazione La risposta (dA/min) è convertita nelle unità di misura del risultato per mezzo di un fattore di calcolo. Controllo di qualità Utilizzare i campioni del controllo di qualità almeno una volta al giorno, dopo ogni calibrazione e ogni volta che si utilizza un nuovo flacone di reagente. Controlli disponibili: CK-MB Control, codice: 981908 CK-MB Control High, codice: 981255 Gli intervalli e i limiti del Control vanno adattati alle esigenze del singolo laboratorio. I risultati dei campioni del controllo di qualità devono rientrare nei limiti di variabilità stabiliti a priori dal laboratorio. CALCOLO DEI RISULTATI I risultati vengono calcolati automaticamente dall’analizzatore Konelab come segue: Attività in U/l = dA/min x Fattore TV x 1000 Fattore = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P dove: TV= Volume di reazione totale in ml SV= Volume del campione in ml 6.22= Coefficiente di estinzione del NADPH a 340 nm P= Lunghezza della cuvetta = 1 Fattore di conversione μkat/l = (U/l)/60 Per ottenere l’attività in termini di CK-MB (U/l), moltiplicare la CK-B attività (U/l) per 2. LIMITI DELLA PROCEDURA (6, 7) A causa della quantità limitata di anticorpi CK-M aggiunta al reagente, i campioni con alti valori totali di CK andrebbero diluiti, in modo tale che il valore totale di CK non superi le 2000 U/l. Alti livelli di isoenzimi CK-BB o di isoenzimi macro-CK-BB atipici possono determinare risultati CK-MB erroneamente alti. Interferenze Criterio: Recupero entro + 10% del valore iniziale. Bilirubina coniugata: Non sono state rilevate interferenze fino a 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Emolisi: Non usare campioni emolizzati. Lipemia: Non usare campioni lipoidei. Per le altre sostanze interferenti, fare riferimento alla Bibliografia 5. VALORI PREVISTI (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) I valori citati dovranno servire esclusivamente come riferimento. Si raccomanda a ogni laboratorio di verificare l'applicabilità di questo intervallo alla propria popolazione di pazienti e, se necessario, di determinare appositi intervalli di riferimento. INTERVALLO DI MISURAZIONE 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Intervallo di misurazione ampliato dopo la seconda diluizione: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI Limite di rilevamento 7 U/l (0.12 μkat/l) Il limite di rilevamento rappresenta la concentrazione/attività più bassa che può essere distinta da zero. È calcolato come la concentrazione misurata nel campione zero + 3 SD (entro la serie, n=24). Imprecisione Entro la serie Entro il giorno Totale DS 1.6 0.9 3.0 Media 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 DS 3.0 4.1 6.6 Media 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 Media 264 U/l DS CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Uno studio di precisione è stato condotto usando l’analizzatore Konelab 30 nell’arco di 10 giorni e con un numero di misurazioni pari a 40. Metodo di confronto Un confronto fra questo reagente CK-MB (y) e un test disponibile in commercio, basato sulla immunoinibizione della subunità della CK-M (x), ha dato i seguenti risultati: Regressione lineare (unità di misura del risultato espressa in U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 I risultati ottenuti nei singoli laboratori possono differire dai dati sulla performance riportati. BIBLIOGRAFIA 1) Burtis, CA e Ashwood, E R (curatori), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, quinta edizione, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (curatore), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, prima edizione, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Francoforte sul Meno, Germania, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W e Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / Serie T Template: D01162_4 IT Page 16 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 4) 5) 6) 7) Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Fascicolo in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, quinta edizione, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. Wu, AHB e Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibition and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myocardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Project (Nordchem) Helsinki, Finlandia 1981. PRODUTTORE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Data della revisione (aaaa-mm-gg) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Modifiche rispetto alla versione precedente La linea accanto al testo indica le modifiche apportate. Page 17 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml ŠIOS PAKUOTĖS INFORMACINIS LAPELIS TINKAMAS NAUDOTI UŽ JAV RIBŲ. BET KOKIA NUORODA Į KONELAB SYSTEMS APIMA IR T PRODUKTŲ SERIJĄ. PASKIRTIS Skirtas in vitro kiekybiniam kreatino kinazės izofermento CK-MB B subvieneto (ATP: kreatinas N-fosfotransferazė (CK), EC 2.7.3.2) aktyvumo nustatymui žmogaus serume arba plazmoje, naudojant Konelab analizatorius. Visi tyrimų rezultatai turi būti interpretuojami atsižvelgiant į klinikinį kontekstą. SANTRAUKA (1,2) Kreatino kinazė (CK) - tai dimeras, sudarytas iš dviejų subvienetų, M (raumenų) ir B (smegenų). Gali būti trys subvienetų poros: BB (arba CK-1), MB (arba CK-2) ir MM (arba CK-3). Įvairūs CK-MB kiekiai randami širdies ir skeleto raumenyse. Normaliame serume CK aktyvumą sukelia CK-MM. CK-BB koncentracija serume dažniausiai yra žema. CK-MB koncentracija normaliame žmogaus serume - žema, bet dėl širdies ligos ar skeleto raumenų pažeidimo ji padidėja. PROCEDŪROS PRINCIPAS Yra nemažai metodų CK-MB aktyvumui nustatyti. Šis reagentas naudoja imunoinhibicijos metodą polikloniniam antikūniui prie CK-M monomero pritraukti. Visiškai nuslopinamas CK-MM aktyvumas ir pusė CK-MB aktyvumo. Tiriamas nenuslopinto CK-B monomero aktyvumas. Kreatino kinazė katalizuoja kreatino fosfato ir ADP (adenozin-5’-difosfatas) reakciją, sudarydama kreatiną ir ATP (adenozin-5’-trifosfatą). Pastarasis junginys fosforilinina gliukozę į G-6-P (gliukozės-6-fosfatas) esant HK (heksokinazė). G-6-P oksiduojama į 6-PG (gliukonato-6-fosfatas) ir tuo pat metu, toks pat NADP (nikotinamidadenindinukleotido fosfatas) kiekis redukuojamas į NADPH reakcijoje, kurią katalizuoja G-6P-DH (gliukozė-6fosfato dehidrogenazė). Dėl susidariusio NADPH padidėjusi absorbcijos geba, esant 340 nm yra proporcinga kreatino kinazės aktyvumui mėginyje. (3) CK Kreatino fosfatas + ADP ⎯→ kreatinas + ATP HK Gliukozė + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ + INFORMACIJA APIE REAGENTUS A reagentas: Substratas Kodas: 981373 skirtas 10 x 10 ml Kodas: 981776 skirtas 8 x 3 ml B reagentas: Buferis Kodas: 981373 10 x 10 ml Kodas: 981776 8 x 3 ml Koncentracijos atstatytuose reagentuose: Buferis (Imidazolas) 104 mmol/l Kreatino fosfatas 31 mmol/l Adenozin-5’-difosfatas (ADP) 2 mmol/l Magnio druska 10 mmol/l D-gliukozė 21 mmol/l Adenozin-5’-monofosfatas (AMP) 5 mmol/l Nikotinamidadenindinukleotido fosfatas (NADP) 2 mmol/l Di(adenozin-5’)pentafosfatas (AP5A) 10 μmol/l N-acetil-L-cisteinas (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Heksokinazė (HK) > 3500 U/l Gliukozė-6-fosfato dehidrogenazė (G-6-P-DH) > 2000 U/l Antižmogiškas polikloninis antikūnis CK-M (iš avių ar ožkų) gali inhibuoti iki 2000 U/l CKMM prie 37 °C NaN3 < 0.1 % Atsargumo priemonės Tik in vitro diagnostiniam naudojimui. Laikykitės įprastų atsargumo priemonių, kurios būtinos dirbant su laboratorijos reagentais. Reagento sudėtyje yra natrio azidas, kaip konservantas. Negalima ryti. Saugokite, kad nepatektų ant odos ir gleivinės. Paruošimas Ištirpinkite A reagento turinį visame B reagento turinyje. Uždarykite buteliuką ir sumaišykite. Pastaba: Įstatydami reagento buteliukus ar indus į Konelab analizatorių, patikrinkite ar prie buteliuko kaklelio arba reagento paviršiuje nėra burbuliukų. Saugojimas ir pastovumas Reagentai uždarytuose buteliukuose yra pastovūs prie 2…8 °C iki galiojimo datos, užrašytos ant etiketės. Konelab analizatoriaus, Pastabose apie pritaikymą, skaitykite apie prietaise patalpintų reagentų pastovumą. Jei naujai atstatyto reagento absorbcijos geba prie 340 nm yra aukštesnė nei 0.700, matuojant pagal vandens ruošinį, nenaudokite jo. Jei reagentas susidrumstęs, nenaudokite jo. MĖGINIŲ SURINKIMAS Mėginio rūšis Naudokite skaidrų, nehemolizuotą serumą arba heparino plazmą. Saugokite mėginius nuo stiprios šviesos. Atsargumo priemonės Su žmonių mėginiais reikia dirbti ir juos šalinti taip, lyg jie būtų potencialiai užkrečiami. Saugojimas (4) Mėginį galima laikyti 2 dienas, esant 20…25 °C temperatūrai, 7 dienas, esant 4…8 °C arba 4 savaites, tamsoje, esant -20 °C temperatūrai. TYRIMO TVARKA Apie automatizuotą procedūrą naudojant Konelab analizatorių skaitykite Nuorodų vadove ir Pastabose apie Pritaikymą. Jei prietaisas naudojamas procedūroms, kurių nepatvirtino Thermo Fisher Scientific Oy, negalima garantuoti tų procedūrų sėkmės ir tokį pritaikymą turi įvertinti vartotojas. Skiriamos medžiagos Anksčiau aprašyti reagentai. Būtinos, bet neskiriamos medžiagos Toliau aprašytos kontrolinės medžiagos. Kalibravimas Atsakas (dA/min.) paverčiamas rezultato vienetais, pritaikant skaičiavimo koeficientą. Kokybės valdymas Naudokite kokybės valdymo mėginius bent kartą per dieną ir po kiekvieno kalibravimo, taip pat kiekvieną kartą, kai naudojate naują reagento buteliuką. Kontrolinės medžiagos: CK-MB Control, kodas: 981908 CK-MB Control High, kodas: 981255 Kontrolės intervalai ir apribojimai turi būti pritaikyti individualios laboratorijos poreikiams. Kokybės kontrolės mėginių rezultatai turi įeiti į laboratorijos nustatytų verčių intervalą. REZULTATŲ APSKAIČIAVIMAS Konelab analizatorius automatiškai apskaičiuoja rezultatus, tokiu būdu: Aktyvumas išreikštas U/l = dA/min. x koeficientas TV x 1000 Koeficientas = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P kai: TV= Bendras reakcijos tūris ml SV= Mėginio tūris ml 6.22 = NADPH ekstinkcijos koeficientas prie 340 nm P= Kiuvetės trajektorijos ilgis = 1 Konversijos koeficientas μkat/l = (U/l)/60 Padauginę CK-B aktyvumą (U/I) iš 2, gausite CK-MB (U/I) aktyvumą. PROCEDŪROS RIBOTUMAI (6, 7) Dėl riboto CK-M antikūnio kiekio pridėto į reagentą mėginius, kurių bendros CK vertės didelės, reikia atskiesti, kad CK vertė neviršytų 2000 U/l. Aukštas CK-BB arba netipiniai CK-BB makroizofermentai gali įtakoti dirbtinai aukštus CK-MB rezultatus. Interferencija Kriterijus: Pradinių verčių atstatymas + 10% ribose. Konjuguotasis bilirubinas: Iki 650 μmol/l (38.0 mg/dl) interferencija nepastebėta. Hemolizė: Nenaudokite hemolizuotų mėginių. Lipemija: Nenaudokite lipemizuotų mėginių. Daugiau apie interferencijos medžiagas skaitykite 5 nuorodoje. NUMATOMOS VERTĖS (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Šios vertės turi būti naudojamos tik kaip orientyras. Rekomenduojama, kad kiekviena laboratorija patikrintų šį diapazoną arba išvestų atskaitos intervalą populiacijai, kuriai ji tarnauja. MATAVIMO SRITIS 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Praplėsta matavimo sritis antrą kartą atskiedus: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). EKSPLOATACIJOS CHARAKTERISTIKOS Aptikimo ribos 7 U/l (0.12 μkat/l) Aptikimo riba žymi žemiausią išmatuojamą koncentraciją/ aktyvumą, kurį galima atskirti nuo nulio. Ji apskaičiuojama kaip nulinio mėginio koncentracija + 3 SD (serijoje, n=24). Netikslumas Serijoje Kas dieną Viso Vidurkis 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 SD 1.6 0.9 3.0 Vidurkis 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 SD 3.0 4.1 6.6 Vidurkis 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Tikslumo studija atlikta 10 dienų naudojant Konelab 30, matavimų skaičius n= 40. Metodų palyginimas CK-MB reagento (y) ir komerciškai prieinamo tyrimo, grindžiamo CK-M subvieneto (x) imunoinhibicija palyginimo rezultatai: Linijinė regresija (rezultatų vienetas U/I): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Individualiose laboratorijose gauti rezultatai gali skirtis nuo pateiktų duomenų. BIBLIOGRAFIJA 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. 6) Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / T Series Template: D01162_4 LT Page 18 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 7) The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. GAMINTOJAS Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Faksas +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Peržiūros data (mmmm-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Pokyčiai nuo ankstesnės versijos Linija šalia teksto reiškia, kad tekstas pakeistas. Page 19 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml ŠIS IEPAKOJUMA PIELIKUMS IR PIELIETOJAMS ĀRPUS ASV. JEBKURA ATSAUKSME UZ KONELAB SISTĒMU ATSAUCAS ARĪ UZ T SĒRIJU. PAREDZĒTĀ LIETOŠANA In vitro kvantitatīvai kreatīna fosfokināzes izoenzīma KFK-MB B subvienības (ATF: kreatīna N-fosfotransferāze (KFK), EC 2.7.3.2) aktivitātes noteikšanai cilvēka serumā vai plazmā ar Konelab analizatoriem. Visi testa rezultāti ir jāinterpretē, vadoties pēc klīniskā konteksta. KOPSAVILKUMS (1,2) Kreatīna fosfokināze (KFK) ir dimērs, kas sastāv no divām apakšvienībām - M (muskuļu) un B (smadzeņu). Var veidoties trīs dažādi apakšvienību pāri. BB (vai KFK-1), MB (vai KFK-2) un MM (vai KFK-3). KFK-MB mainīgos daudzumos atrodas sirds muskuļa šūnās un arī skeleta muskulatūrā. Parasti seruma lielāko KFK aktivitāti veido KFK-MM. KFK-BB parasti serumā sastopams zemās koncentrācijās. KFK-MB parasti cilvēka serumā ir zemās koncentrācijās, bet tas paaugstinās sirds bojājuma gadījumā un reti - skeleta muskuļu bojājuma gadījumā. PROCEDŪRAS PRINCIPS Ir pieejamas vairākas metodes KFK-MB aktivitātes noteikšanai. Šis reaģents pielieto imunoinhibīcijas metodi, izmantojot poliklonālus antigēnus pret KFK-M monomēru. Tas pilnībā inhibē KFK-MM aktivitāti un pusi no KFK-MB aktivitātes. Pēc tam tiek analizēta neinhibētā KFK-B monomēra aktivitāte. Kreatīna fosfokināze katalizē reakciju starp kreatīna fosfātu un ADF (adenozīn-5’difosfātu), kuras rezultātā veidojas kreatīns un ATF (adenozīn-5’-trifosfāts). ATF fosforilizē glikozi par G-6-P (glikozes-6-fosfāts) HK (heksokināzes) klātbūtnē. G-6-P oksidējas par 6PG (glikonāta-6-fosfāts), un tajā pašā laikā tāds pats molu skaits NADP (nikotīnamīda adenīna dinukleotīda fosfāta) tiek reducēts par NADPH reakcijā, kuru katalizē G-6P-DH (glikozes-6-fosfāta dehidrogenāze). Absorbcijas palielinājums pie 340 nm, kas rodas no NADPH izveidošanās, ir proporcionāls kreatīna fosfokināzes aktivitātei paraugā. (3) KFK Kreatīna fosfāts + ADF ⎯→ Kreatīns + ATF HK Glikoze + ATF ⎯→ G-6-P + ADF G-6-P-DH G-6-P + NADF+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADFH + H+ INFORMĀCIJA PAR REAĢENTU Reaģents A: Substrāts Kods: 981373 izmantošanai ar 10 x 10 ml Kods: 981776 izmantošanai ar 8 x 3 ml Reaģents B: Buferšķīdums Kods: 981373 10 x 10 ml Kods: 981776 8 x 3 ml Koncentrācijas atšķaidītā reaģentā: Buferšķīdums (imidazols) 104 mmol/l Kreatīna fosfāts 31 mmol/l Adenozīna-5’-difosfāts (ADF) 2 mmol/l Magnija sāls 10 mmol/l D-glikoze 21 mmol/l Adenozīna-5’-monofosfāts (AMF) 5 mmol/l Nikotīnamīda adenīna dinukleotīda fosfāts (NADF) 2 mmol/l Di(adenozīn-5’)pentafosfāts (AP5A) 10 μmol/l N-acetil-L-cisteīns (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Heksokināze (HK) > 3500 U/l Glikozes-6-fosfāta dehidrogenāze (G-6-P-DH) > 2000 U/l Antihumānais poliklonālais KFK-M antigēns (auna vai kazas), kas spēj inhibēt ne vairāk par 2000 U/l KFK-MM 37 °C temperatūrā. NaN3 < 0.1 % Piesardzības pasākumi Tikai in vitro diagnostikai. Ievērojiet parastos piesardzības pasākumus par apiešanos ar visiem laboratorijas reaģentiem. Reaģents satur nātrija azīdu kā konservantu. Nenorīt. Izvairieties no kontakta ar ādu un gļotādām. Sagatavošana Izšķīdiniet reaģentu A visā reaģenta B tilpumā. Noslēdziet pudelīti ar vāciņu un sajauciet. Piezīme: Ievietojot reaģenta pudelītes vai traukus Konelab analizatorā, pārliecinieties, ka pudelītes kakliņā vai uz reaģenta virsmas nav gaisa burbuļu. Uzglabāšana un stabilitāte Reaģenti neatvērtās pudelītēs ir stabili 2…8 °C temperatūrā līdz derīguma termiņa beigām; derīguma termiņš ir uzdrukāts uz etiķetes. Lai iegūtu informāciju par ievietoto reaģentu stabilitāti, sk. Konelab analizatora “Pielietojuma piezīmes”. Neizmantot, ja svaigi atšķaidīta reaģenta absorbcija pie 340 nm, mērot pret ūdeni, ir augstāka par 0.700. Neizmantojiet, ja reaģents ir duļķains. PARAUGU IEGŪŠANA Parauga veids Izmantojiet dzidru, nehemolizētu serumu vai heparīna plazmu. Nepakļaujiet paraugus spēcīgas gaismas ietekmei. Piesardzības pasākumi Ar no cilvēkiem iegūtajiem paraugiem jārīkojas un no tiem jāatbrīvojas tā, it kā tie būtu iespējami infekciozi. Uzglabāšana (4) Paraugu var uzglabāt 2 dienas 20…25 °C temperatūrā, 7 dienas 4…8 °C temperatūrā vai 4 nedēļas -20 °C temperatūrā; paraugs jāuzglabā tumsā. TESTA PROCEDŪRA Sk. “Uzziņu rokasgrāmatu” un “Pielietojuma piezīmes”, lai iegūtu informāciju par Konelab analizatora automātisko procedūru. Jebkāds pielietojums, kuru nav apstiprinājis Thermo Fisher Scientific Oy, nevar sniegt garantētu rezultātu, tādēļ tas jāizvērtē pašam lietotājam. Piegādātie materiāli Iepriekš aprakstītie reaģenti. Nepieciešamie materiāli, kas netiek piegādāti Kontroles, kā aprakstīts tālāk. Kalibrācija Atbilde (dA/min) tiek konvertēta rezultāta vienībās, izmantojot aprēķinu faktoru. Kvalitātes kontrole Izmantojiet kvalitātes kontroles paraugus vismaz reizi dienā un pēc katras kalibrācijas, kā arī ikreiz, kad tiek izmantota jauna reaģenta pudele. Pieejamās kontroles: CK-MB Control, kods: 981908 CK-MB Control High, kods: 981255 Kontroles intervāli un robežlielumi ir jāpiemēro individuālajām laboratorijas prasībām. Kvalitātes kontroles paraugu rezultātiem jābūt laboratorijas noteikto vērtību robežās. REZULTĀTU APRĒĶINĀŠANA Konelab analizators rezultātus automātiski aprēķina šādi: Aktivitāte U/l = dA/min x faktors TV x 1000 Faktors = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P kur: TV= kopējais reakcijas tilpums ml SV= parauga tilpums ml 6.22= NADFH zuduma koeficents pie 340 nm P= kuvetes ceļš = 1 Konversijas faktors μkat/L = (U/l)/60 Lai iegūtu KFK-MB aktivitāti (U/l), sareiziniet KFK-B aktivitāti (U/l) ar 2. PROCEDŪRAS IEROBEŽOJUMI (6,7) Tā kā reaģentam pievienotā KFK-M antigēna daudzums ir ierobežots, paraugi ar augstām kopējā KFK vērtībām ir jāatšķaida tā, lai kopējā KFK vērtība nepārsniegtu 2000 U/l. Augsta KFK-BB koncentrācija vai atipiski KFK-BB makro izoenzīmi var radīt kļūdaini augstus KFKMB rezultātus. Mijiedarbība Kritērijs: Atjaunošana + 10% robežās no sākotnējām vērtībām. Saistītais bilirubīns: Līdz 650 μmol/l (38.0 mg/dl) interference nav novērota. Hemolīze: Neizmantot hemolizētu paraugu. Lipēmija: Neizmantot lipēmisku paraugu. Informācijai par citām interferējošām vielām, lūdzu, sk. 5. atsauci. VĒLAMĀS VĒRTĪBAS (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Minētās vērtības ir tikai ar rekomendējošu nozīmi. Ieteicams, lai katra laboratorija apstiprinātu šo diapazonu vai izstrādātu referentos lielumus populācijai, kuru tā apkalpo. MĒRĪŠANAS DIAPAZONS 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Paplašinātais mērīšanas diapazons pēc otrreizējas atšķaidīšanas: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). VEIKTSPĒJAS RAKSTUROJUMS Uztveršanas robeža 7 U/l (0.12 μkat/l) Uztveršanas robeža ir zemākā izmērāmā koncentrācija/aktivitāte, ko var atšķirt no nulles. Tā tiek aprēķināta kā nulles parauga koncentrācija + 3 SD (darbības laikā, n=24). Neprecizitāte Darbības laikā Ar dienas starpību Kopā Vidējais 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 SD 1.6 0.9 3.0 Vidējais 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 SD 3.0 4.1 6.6 Vidējais 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Precizitātes izpēte tika veikta 10 dienu laikā, izmantojot Konelab 30; mērījumu skaits n = 40. Metodes salīdzinājums Šī KFK-MB reaģenta (y) salīdzinājums ar citiem komerciāli pieejamiem testiem, kuru darbība balstīta uz KFK-M apakšvienības imunoinhibīciju (x), sniedza šādus rezultātus: Lineārā regresija (rezultāta vienība U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Rezultāti, kas iegūti atšķirīgās laboratorijās, var atšķirties no dotajiem veiktspējas datiem. BIBLIOGRĀFIJA 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. 6) Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / T Sērijas Template: D01162_4 LV Page 20 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 7) The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. RAŽOTĀJS Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O.Box 100, FI-01621 Vantaa Tālr. +358 9 329 100, Fakss +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Pārskatīšanas datums (gggg-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Veiktās izmaiņas Līnija blakus tekstam norāda uz izmaiņām. Page 21 D02017_05_Insert_CK-MB_MU PL POMIAR Należy odnieść się do instrukcji i aplikacji dla zautomatyzowanej procedury na analizatorze Konelab. Aplikacja, która nie została autoryzowana przez Thermo Fisher Scientific Oy nie może być gwarancją i musi zostać oceniona przez użytkownika. Konelab™ / Seria T CK-MB Dostarczone materiały Odczynniki wymienione powyżej. 10 x 10 ml 8 x 3 ml NINIEJSZA ULOTKA OPAKOWANIA PRZEZNACZONA JEST DO STOSOWANIA POZA GRANICAMI USA. WSZELKIE ODNIESIENIA DO SYSTEMÓW KONELAB ODNOSZĄ SIĘ RÓWNIEŻ DO SERII T. ZASTOSOWANIE Do ilościowego oznaczania in vitro aktywności podjednostki B izoenzymu CK-MB kinazy kreatynowej (ATP: Kreatyna N-Fosfotransferaza (CK), EC 2.7.3.2) w ludzkiej surowicy lub osoczu na analizatorach Konelab. Interpretacji wyników należy dokonać w kontekście klinicznym. WPROWADZENIE (1,2) Kinaza kreatynowa (CK) jest złożona z dwóch podjednostek M (muscular) i B (brain). Podjednostki mogą tworzyć trzy różne pary BB (lub CK-1), MB (lub CK-2) i MM (lub CK-3). CK-MB jest obecny zarówno w mięśniu sercowym i mięśniach szkieletowych. Główna aktywność CK w normalnej surowicy spowodowana jest izoenzymem CK-MM. CK-BB jest obecny w surowicy w niskim stężeniu. CK-MB w surowicy jest obecny w niskim stężeniu, wzrasta w zawale serca i rzadko w urazach mięśni szkieletowych. ZASADA METODY Aktywność CK-MB możemy oznaczać różnymi metodami. Odczynnik wykorzystuje metodę immunoinhibicji, w której wykorzystuje się przeciwciała monoklonalne dla monomeru CKM. Zostaje zahamowana całkowita aktywność CK-MM i częściowe zahamowanie aktywności izoenzymu CK-MB. Oznaczamy aktywność nie zahamowanego monomeru CK-B. Kinaza kreatynowa katalizuje reakcję między fosforanem kreatyny i ADP (adenozyno-5’dwufosforan) z utworzeniem kreatyny i ATP (adenozyno-5’-trójfosforan). Następuje złożona fosforylacja glukozy do fosforanu G-6-P (6-fosfoglukoza) w obecności HK (heksokinazy). G-6-P jest utleniana do 6-PG (6-fosfoglukonian) i w tym samym czasie ilość jonów NADP (fosforan dinukleotydu nikotynamidoadeninowego) jest zredukowana do NADPH w reakcji katalizowanej G-6P-DH (dehydrogenaza 6-fosfoglukozy). Wzrost absorbancji przy 340nmn jest wynikiem utworzenia NADPH i jest proporcjonalny do ilości kinazy kreatynowej w próbce. (3) CK Fosforan kreatyny + ADP ⎯→ Kreatyna + ATP Kalibracja Wynik otrzymujemy w jednostkach mnożąc odczyt (dA/min) przez współczynnik kalkulacyjny. Kontrola jakości Kontrola jakości powinna być wykonywana co najmniej raz dziennie oraz po każdej kalibracji i przy zmianie butelki z odczynnikiem. Dostępne kontrole: CK-MB Control, numer 981908 CK-MB Control High, numer 981255 Przedziały i limity kontroli muszą być dostosowane do indywidualnych wymagań laboratorium. Wyniki kontroli jakości powinny odpowiadać wartościom ustanowionym wstępnie przez laboratorium. OBLICZANIE WYNIKÓW Wyniki obliczane są automatycznie przez analizator Konelab używając wzoru: Aktywność w U/l = dA/min x faktor TV x 1000 Faktor = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P gdzie: TV= Objętość mieszaniny reakcyjnej w ml SV= Objętość próbki w ml 6.22= Współczynnik ekstynkcji NADPH przy 340 nm P= Światło kuwety = 1 Współczynnik przeliczeniowy μkat/l = (U/l)/60 Aktywność CK-B (U/l) pomnóż przez 2 aby otrzymać CK-MB (U/l). OGRANICZENIA PROCEDURY (6, 7) Z powodu ograniczonej ilości przeciwciał CK-M w odczynniku, próbki z wysokimi wartościami CK powinny zostać rozcieńczone, aby wartość całkowitego CK nie była wyższa niż 2000 U/l. Wysokie CK-BB albo atypowe makro izoenzymy CK-BB mogą spowodować fałszywie wysoki wynik CK-MB. Interferencje Kryterium: Zakres ± 10% wartości początkowych. Bilirubina związana: Nie ma wpływu aż do 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Hemoliza: Nie używaj próbek zhemolizowanych. Lipemia: Nie używaj próbek lipemicznych. Dla innych interferujących substancji, odnieś się do pozycji 5. HK ATP + Glukoza ⎯→ ADP + G-6-P G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ INFORMACJA O ODCZYNNIKU Odczynnik A: Substrat Numer: 981373 po 10 x 10 ml Numer: 981776 po 8 x 3 ml Odczynnik B: Bufor Numer: 981373 10 x 10 ml Numer: 981776 8 x 3 ml WARTOŚCI OCZEKIWANE (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Powyższe dane są jedynie wartościami orientacyjnymi. Każde laboratorium powinno ustalić swoje własne zakresy dla danej populacji. ZAKRES POMIARU 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Rozszerzony zakres pomiaru po rozcieńczeniu: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). 104 mmol/l 31 mmol/l 2 mmol/l 10 mmol/l 21 mmol/l 5 mmol/l 2 mmol/l 10 μmol/l 21 mmol/l 2 mmol/l > 3500 U/l > 2000 U/l ludzkiemu CK-M, aby zahamować aż < 0.1 % Środki ostrożności Wyłącznie do diagnostyki in vitro. Zachować środki ostrożności wymagane dla odczynników laboratoryjnych. Odczynnik zawiera azydek sodu jako konserwant. Nie połykać. Unikać kontaktu ze skórą i błonami śluzowymi. Przygotowanie Rozpuść zawartość odczynnika A z całą zawartością odczynnika B. Zamknij i zamieszaj. Uwaga: Sprawdź przed wstawieniem naczynia z odczynnikiem do analizatora Konelab, czy w fiolce i na powierzchni odczynnika nie znajdują się pęcherzyki powietrza. Przechowywanie i stabilność Zamknięte odczynniki są trwałe w temperaturze 2...8 °C aż do daty ważności podanej na opakowaniu. Trwałość odczynników w analizatorze podana jest w aplikacji analizatora Konelab. Nie używaj odczynnika, w którym absorbancja przy 340nm wobec wody jest wyższa niż 0.700. Nie używać mętnego odczynnika. POBRANIE I PRZYGOTOWANIE PRÓBKI Rodzaj próbki Jasna, niezhemolizowana surowica lub osocze pobrane na heparynę. Unikaj wystawiania próbek na działanie świtała. Środki ostrożności Próbki badane powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne. Przechowywanie (4) Próbki mogą być przechowywane przez 2 dni w 20…25 °C, przez 7 dni w 4…8 °C lub 4 tygodnie w -20 °C bez dostępu światła. CHARAKTERYSTYKA PRACY Granica wykrywalności 7 U/l (0.12 μkat/l) Granica wykrywalności to najniższe wymierne stężenie/aktywność, które może zostać odróżnione od zera. Obliczane jest jako stężenie próbki zerowej + 3 SD (wewnątrz serii, n =24). Nieprecyzyjność Wewnątrz oznaczenia Pomiędzy oznaczeniami Całkowita Średnia 66 U/l SD CV% 1.6 2.3 0.9 1.3 3.0 4.3 Średnia 143 U/l SD CV% 3.0 2.2 4.1 3.0 6.6 4.7 Średnia 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Precyzja została wykonana używając Konelab 30 przez 10 dni z ilością pomiarów n = 40. Metoda porównawcza Porównanie pomiędzy tym odczynnikiem CK-MB (y) i powszechnie dostępnej metodzie opartej na immunoinhibicji podjednostki CK-M (x) dało następujące wyniki: Regresja liniowa (wyniki w jednostkach U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Rezultaty w indywidualnych laboratoriach mogą różnić się dla podanych precyzji oraz danych dla metod porównawczych. PIŚMIENNICTWO 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. 6) Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Stężenia w rozpuszczonym odczynniku: Bufor (Imidazolu) Fosforan kreatyny Adenozyno-5’-difosforan (ADP) Sól magnezowa D-glukoza Adenozyno -5’-monofosforan (AMP) Fosforan dinukleotydu nikotynamidoadeninowego (NADP) Pentafosforan diadenozyny (AP5A) N-acetylo-L-cysteina (NAC) EDTA Heksokinaza (HK) Dehydrogeanaza-6-fosforglukozy (G-6-P-DH) Przeciwciała poliklonalne (owcy albo kozła) przeciw do 2000 U/l CK-MM w 37 °C. NaN3 Materiały wymagane, nie należące do zestawu Kontrole wskazane poniżej. Template: D01162_4 981373 981776 Page 22 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 7) The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. PRODUCENT Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Data zatwierdzenia (rrrr-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Zmiany w stosunku do poprzedniej wersji Linia obok tekstu oznacza zmiany. Page 23 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml ESTE FOLHETO INFORMATIVO É APLICÁVEL PARA USO FORA DOS E.U.A. QUALQUER REFERÊNCIA AOS SISTEMAS KONELAB TAMBÉM SE REFERE À SÉRIE T. USO A QUE SE DESTINA Para a determinação quantitativa in vitro da actividade da subunidade B da isoenzima CKMB da creatina cinase (ATP: Creatina N-fosfotransferase (CK), EC 2.7.3.2) em soro ou plasma humanos nos analisadores Konelab. Todos os resultados deverão ser interpretados dentro do contexto clínico. RESUMO (1,2) A Creatina Cinase (CK) é um dímero constituído por duas subunidades, M (músculo) e B (cérebro). Podem existir três pares diferentes de subunidades: BB (ou CK-1), MB (ou CK2), e MM (ou CK-3). A CK-MB está presente em vários graus, no músculo cardíaco e também no músculo esquelético. A principal actividade da CK no soro normal deve-se a CK-MM. CK-BB está habitualmente presente no soro em baixas concentrações. CK-MB está presente em baixas concentrações no soro humano normal, mas os seus níveis aumentam em consequência de lesão cardíaca e, raramente, de lesão do músculo esquelético. PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO Encontram-se disponíveis vários métodos para a determinação da actividade da CK-MB. Este reagente utiliza um método de imuno-inibição que utiliza um anticorpo policlonal contra o monómero CK-M. Este inibe por completo a actividade da CK-MM e metade da actividade da CK-MB. A actividade do monómero CK-B, não inibida, é então analisada. A creatina cinase catalisa a reacção entre fosfato de creatina e PAD (adenosina-5'difosfato), com formação de creatina e ATP (adenosina-5'-trifosfato). O último composto fosforila a glicose em G-6-P (glicose-6-fosfato) na presença de HK (hexocinase). G-6-P é oxidada em 6-PG (gluconato-6-fosfato) e, simultaneamente, uma quantidade equimolar de NADP (nicotinamida adenina dinucleótifo fosfato) é reduzida em NADPH numa reacção catalisada por G-6P-DH (desidrogenase da glicose-6-fosfato). O aumento da absorvância a 340 nm, resultante da formação de NADPH, é proporcional à actividade de creatina cinase na amostra. (3) CK Fosfato de creatina + ADP ⎯→ Creatina + ATP HK Glicose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ INFORMAÇÕES DOS REAGENTES Reagente A: Substrato Cód: 981373 para 10 x 10 ml Cód: 981776 para 8 x 3 ml Reagente B: Tampão Cód: 981373 10 x 10 ml Cód: 981776 8 x 3 ml Concentrações no reagente reconstituído: Tampão (Imidazole) 104 mmol/l Fosfato de Creatina 31 mmol/l Adenosina-5'-difosfato (ADP) 2 mmol/l Sal de magnésio 10 mmol/l D-glicose 21 mmol/l Adenosina-5'-monofosfato (AMP) 5 mmol/l Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP) 2 mmol/l Di(adenosina-5 ') pentafosfato (AP5A) 10 μmol/l N-acetil-L-cisteína (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexocinase (HK) > 3500 U/l Desidrogenase da glicose-6-fosfato (G-6-P-DH) > 2000 U/l Anticorpo policlonal CK-M anti-humano (de ovelha ou cabra) suficiente para inibir um máximo de 2000 U/l de CK-MM a 37 °C. NaN3 < 0.1 % Precauções Exclusivamente para diagnóstico in vitro. Tome as precauções normais exigidas para manipulação de todos os reagentes de laboratório. O reagente contém azida sódica como conservante. Não ingira. Evite o contacto com a pele e membranas mucosas. Preparação Dissolva o conteúdo do Reagente A com a totalidade do conteúdo do reagente B. Tape o frasco e misture. Nota: Verifique que não existem bolhas no gargalo do frasco nem na superfície do reagente quando introduzir os frascos ou recipientes de reagente no analisador Konelab. Armazenamento e Estabilidade Os reagentes em frascos fechados permanecem estáveis a 2...8 °C até ao final da data de validade impressa no rótulo. Consulte as Notas da Aplicação do seu analisador Konelab quanto à estabilidade dos reagentes no analisador. Se o reagente fresco reconstituído apresentar uma absorvância a 340 nm superior a 0.700 quando medido contra um branco de água, não utilize. Se o reagente apresentar turvação, não utilize. COLHEITA DE AMOSTRAS Tipo de Amostra Utilize soro transparente, não hemolisado, ou plasma em heparina. Evite a exposição das amostras a luz forte. Precauções As amostras humanas devem ser manipuladas e eliminadas como se fossem potencialmente infecciosas. Armazenamento (4) A amostra pode ser armazenada durante 2 dias a 20…25 °C, durante 7 dias a 4…8 °C ou durante 4 semanas a -20 °C no escuro. PROCEDIMENTO DE TESTE Consulte o Manual de Referência e as Notas da Aplicação para um procedimento automatizado no seu analisador Konelab. Não é possível garantir o desempenho de qualquer aplicação que não tenha sido validada pela Thermo Fisher Scientific Oy, pelo que deve ser avaliada pelo utilizador. Material fornecido Reagentes conforme descrito acima. Material necessário mas não fornecido Controlo, conforme indicado em baixo. Calibração A resposta (dA/min) é convertida em unidades de resultados por um factor de cálculo. Controlo de Qualidade Utilize amostras de controlo de qualidade pelo menos uma vez por dia e depois de cada calibração e sempre que utilizar uma novo frasco de reagente. Controlos disponíveis: CK-MB Control, código: 981908 CK-MB Control High, código: 981255 Os intervalos e limites de controlo devem ser adaptados aos requisitos individuais do laboratório. Os resultados da amostra de controlo de qualidade devem cair dentro dos limites predefinidos pelo laboratório. CÁLCULO DOS RESULTADOS Os resultados são calculados automaticamente pelo analisador Konelab, da seguinte forma: Actividade em U/l = dA/min x Factor Factor = TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P onde: TV = Volume total de reacção em ml SV = volume da amostra em ml 6.22 = Coeficiente de extinção do NADPH a 340 nm P = Comprimento do trajecto da cuvete = 1 Factor de conversão µkat/l = (U/l)/60 Multiplique a actividade de CK-B (U/l) por 2 para obter a actividade em termos de CKMB (U/l). LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO (6, 7) Dada a quantidade limitada de anticorpo CK-M adicionada no reagente, amostras com valores de CK total elevados devem ser diluídas, de forma a que o valor de CK total não seja superior a 2000 U/l. CK-BB elevado ou isoenzimas CK-BB-macro atípicas podem dar origem a resultados de CK-MB falsamente elevados. Interferência Critério: Recuperação dentro de + 10% dos valores iniciais. Bilirrubina conjugada: Não foi encontrada qualquer interferência até 650 µmol/l (38.0 mg/dl). Hemólise: Não utilize amostras hemolisadas. Lipemia: Não utilize amostras lipémicas. Para outras substâncias interferentes, por favor consulte a referência 5. VALORES ESPERADOS (7) <25 U/l (<0.42 µkat/l) Os valores referidos deverão servir apenas como orientação. Recomenda-se que cada laboratório confirme este intervalo, ou que derive um intervalo de referência para a população a que atende. INTERVALO DE MEDIÇÃO 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Intervalo de medição estendido após diluição secundária: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO Limite de detecção 7 U/l (0.12 μkat/l) O limite de detecção representa a concentração/actividade mais baixa mensurável que pode ser distinguida de zero. É calculado como a concentração da amostra zero + 3 DP (intra-execução, n=24). Imprecisão Intra-execução Entre Dias Total Média 66 U/l DS CV% 1.6 2.3 0.9 1.3 3.0 4.3 Média 143 U/l DS CV% 3.0 2.2 4.1 3.0 6.6 4.7 Média 264 U/l DS CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Foi efectuado um estudo de precisão utilizando o Konelab 30 durante 10 dias, com um número de medições de n = 40. Comparação de métodos Uma comparação entre este reagente CK-MB (y) e um teste disponível no mercado baseado na imuno-inibição da subunidade CK-M (x) produziu os seguintes resultados: Regressão linear (unidade dos resultados U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Os resultados obtidos nos laboratórios individuais podem diferir dos dados de desempenho apresentados. BIBLIOGRAFIA 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / Série T Template: D01162_4 PT Page 24 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 4) 5) 6) 7) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Amostras: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. FABRICANTE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Data de revisão (yyyy-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Alterações em relação à versão anterior A linha junto ao texto indica alterações. Page 25 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml ACEST PROSPECT INTRODUS ÎN PACHET ESTE APLICABIL PENTRU FOLOSIREA ÎN AFARA S.U.A. ORICE REFERINŢĂ LA KONELAB SYSTEMS SE REFERĂ ŞI LA SERIA T. UTILIZAREA PREVÃZUTÃ Pentru determinarea cantitativã in vitro a activitãþii subunitãþii B a izoenzimei CK-MB a creatin-kinazei (ATP: creatin N-fosfotransferaza (CK), EC 2.7.3.2) din serul sau plasma umane, cu dispozitivele de analizã Konelab. Toate rezultatele trebuie interpretate în context clinic. SUMAR (1,2) Creatin-kinaza (CK) este un dimer compus din douã subunitãþi, M (muscularã) şi B (cerebralã). Pot exista trei perechi diferite de subunitãþi: BB (sau CK-1), MB (sau CK-2) şi MM (sau CK-3). CK-MB este prezentã în diferite grade în muşchiul cardiac şi , de asemenea, în muşchii scheletici. Activitatea cea mai mare a CK în serul normal se datoreazã CK-MM. CK-BB este prezentã de obicei în ser în concentraþii reduse. CK-MB este prezentã în concentraþii reduse în serul uman normal, dar acestea cresc ca urmare a unor leziuni cardiace şi , rareori, ca urmare a unor leziuni ale muşchilor scheletici. PRINCIPIUL DETERMINÃRII Sunt disponibile mai multe metode pentru a determina activitatea CK-MB. Acest reactiv foloseşte metoda imunoinhibiþiei, folosind un anticorp policlonal pentru monomerul CK-M. Acesta inhibã complet activitatea CK-MM şi , pe jumãtate, activitatea CK-MB. Dupã aceea este analizatã activitatea monomerului CK-B. Creatin-kinaza catalizeazã reacþia dintre creatin-fosfat şi ADP (adenozin-5’-difosfat) cu formare de creatinã şi ATP (adenozin-5’-trifosfat). Ultimul compus fosforileazã glucoza la G-6-P (glucozo-6-fosfat) în prezenþa HK (hexokinazei). G-6-P este oxidat la 6-PG (gluconat-6-fosfat) şi , totodatã, o cantitate echimolarã de NADP (nicotinamid-adenindinucleotid fosfat) e redusã la NADPH printr-o reacþie catalizatã de G-6P-DH (glucozo-6fosfat dehidrogenazã). Creşterea absorbanþei la 340 nm, care rezultã din formarea de NADPH, este proporþionalã cu activitatea creatin-kinazei din probã. (3) CK Creatin-fosfat + ADP ⎯→ Creatinã + ATP HK Glucozã + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ INFORMAÞII PRIVIND REACTIVII Reactiv A: Substrat Cod: 981373 Cod: 981776 Reactiv B: Tampon Cod: 981373 Cod: 981776 pentru 10 x 10 ml pentru 8 x 3 ml 10 x 10 ml 8 x 3 ml Concentraþii în reactivul reconstituit: Tampon (Imidazol) 104 mmol/l Creatin-fosfat 31 mmol/l Adenozin-5’-difosfat (ADP) 2 mmol/l Sare de magneziu 10 mmol/l D-glucozã 21 mmol/l Adenozin-5’-monofosfat (AMP) 5 mmol/l Nicotinamid-adenin-dinucleotid fosfat (NADP) 2 mmol/l 10 μmol/l Di(adenozin-5’)pentafosfat (AP3353340A) N-acetil-L-cisteinã (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokinazã (HK) > 3500 U/l Glucozo-6-fosfat dehidrogenazã (G-6-P-DH) > 2000 U/l Anticorp policlonal antiuman CK-M (de oaie sau de caprã) suficient pentru a inhiba pânã la 2000 U/l de CK-MM la 37 °C. NaN3 < 0.1 % Precauþii Numai pentru diagnostic in vitro. Adoptaþi mãsurile normale de precauþie necesare pentru mânuirea reactivilor de laborator. Reactivul conþine azidã de sodiu drept conservant. Nu înghiþiþi. Evitaþi contactul cu pielea şi membranele mucoasei. Pregãtirea Dizolvaþi conþinutul Reactivului A cu întreg conþinutul Reactivului B. Închideþi flaconul şi omogenizaþi. Notã: Verificaþi sã nu existe bule în gâtul flaconului sau la suprafaþa reactivului când introduceþi fiolele sau recipientele cu reactiv în dispozitivul de analizã Konelab. Depozitarea şi stabilitatea Reactivii din fiolele nedeschise sunt stabili la 2…8 °C pânã la data de expirare tipãritã pe etichetã. Consultaþi Notele de Aplicare ale dispozitivului dv. de analizã Konelab pentru stabilitatea reactivilor în cazul respectiv. Dacã reactivul proaspãt reconstituit are o absorbanþã la 340 nm mai mare de 0.700 când e comparat cu o probã oarbã de apã, nu-l folosiþi. Dacã reactivul este tulbure, nu-l folosiþi. RECOLTAREA PROBELOR Tipul de probe Folosiþi ser sau plasmã heparinizatã limpezi, nehemolizate. Evitaþi expunerea probelor la luminã puternicã. Precauþii Probele umane trebuie mânuite şi aruncate ca şi cum ar fi potenþial infecþioase. Depozitarea (4) Proba poate fi depozitatã timp de 2 zile la 20…25 °C, timp de 7 zile la 4…8 °C sau timp de 4 sãptãmâni la -20 °C, la întuneric. PROCEDURA DE ANALIZARE Consultaþi Manualul de Referinþã şi Notele de Aplicare pentru procedura automatã cu dispozitivul dv. de analizã Konelab. Toate aplicaþiile care nu au fost validate de Thermo Fisher Scientific Oy nu garanteazã performanþa şi , prin urmare, trebuie evaluate de cãtre utilizator. Materiale furnizate Reactivii mai sus-menþionaþi. Materiale necesare, dar care nu sunt furnizate Martorii indicaþi mai jos. Calibrarea Rezultatul (dA/min) e convertit ca sã se obþinã unitãþi, cu ajutorul unui factor de calcul. Controlul de calitate Folosiþi probe pentru controlul de calitate cel puþin o datã pe zi şi dupã fiecare calibrare şi de fiecare datã când se foloseşte un flacon nou de reactiv. Martori disponibili: CK-MB Control, cod: 981908 CK-MB Control High, cod: 981255 Intervalele şi limitele Martorului trebuie adaptate la necesitãþile individuale ale laboratorului. Rezultatele probei pentru controlul de calitate trebuie sã se încadreze în limitele stabilite de laborator. CALCULAREA REZULTATELOR Rezultatele sunt calculate automat de dispozitivul de analizã Konelab dupã cum urmeazã: Activitatea în U/l = dA/min x Factor Factor = unde: TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P TV= Volumul total de reacþie în ml SV = Volumul probei în ml 6.22 = Coeficientul de extincþie al NADPH la 340 nm P = Lungimea eprubetei cu secþiune pãtratã = 1 Factor de conversie μkat/l = (U/l)/60 Înmulþiþi activitatea CK-B (U/l) cu 2 pentru a obþine activitatea pentru CK-MB (U/l). LIMITELE PROCEDURII (6, 7) Din cauza cantitãþii limitate de anticorp CK-M adãugat în reactiv, probele cu valori totale ridicate ale CK trebuie diluate, astfel încât valoarea CK totale sã nu fie mai mare de 2000 U/l. Izoenzimele CK-BB ridicate sau macro-CK-BB atipice pot produce rezultate ridicate false pentru CK-MB. Interferenþe Criteriu: Recuperare în interval + 10% din valorile iniþiale. Bilirubinã conjugatã: Nu s-au gãsit interferenþe pânã la 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Hemolizã: Nu folosiþi probe hemolizate. Lipemie: Nu folosiþi probe lipemice. Pentru alte substanþe care pot interfera, vã rugãm sã consultaþi referinþa 5. VALORI ESTIMATE (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Valorile menþionate au doar caracter indicativ. Se recomandã ca fiecare laborator sã verifice acest interval sau sã elaboreze un interval de referinþã pentru populaþia pe care o deserveºte. INTERVAL DE MÃSURARE 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Interval extins de mãsurare dupã a doua diluþie: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). CARACTERISTICILE PERFORMANÞEI Limitã de detecþie 7 U/l (0.12 μkat/l) Limita de detecþie reprezintã cea mai micã concentraþie/activitate mãsurabilã care poate fi distinsã de zero. Este calculatã ca fiind concentraþia probei zero + 3 SD (în cadrul aceleiaş analize, n=24). Imprecizie În cadrul aceleiaş analize Între zile Total SD 1.6 0.9 3.0 Medie 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 Medie 143 U/l SD CV% 3.0 2.2 4.1 3.0 6.6 4.7 Medie 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Un studiu asupra preciziei a fost efectuat folosind Konelab 30 într-un interval de 10 zile, cu numãrul mãsurãtorilor n = 40. Comparaþia metodelor O comparaþie între acest reactiv CK-MB (y) şi un test disponibil din comerþ bazat pe imunoinhibiþia subunitãþii CK-M (x) a dat urmãtoarele rezultate: Regresia liniarã (unitate pentru rezultate U/l): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Rezultatele obþinute în laboratoarele individuale pot diferi de datele referitoare la performanþã menþionate. BIBLIOGRAFIE 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. 2431GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / T Series Template: D01162_4 RO Page 26 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 5) 6) 7) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. PRODUCÃTOR Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Data reviziei (yyyy-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Modificãri faþã de versiunea precedentã Linia de lângă text indică modificări. Page 27 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml TENTO PRÍBALOVÝ LETÁK JE URČENÝ PRE KRAJINY MIMO USA. AKÁKOĽVEK ZMIENKA SYSTÉMOV KONELAB SA VZŤAHUJE AJ NA SÉRIU T. POUŽITIE Kvantitatívne in vitro stanovenie B podjednotky izoenzýmu CK-MB aktivity kreatín kinázy (ATP: kreatín N-fosfotransferáza (CK), EC 2.7.3.2) v ľudskom sére, alebo plazme v Konelab analyzátoroch. Všetky výsledky testov musia byť interpretované s ohľadom na klinický kontext. ZHRNUTIE (1,2) Kreatín kináza (CK) je dimér zložený z dvoch podjednotiek, M (svalová) a B (mozgová). Existujú tri rôzne páry podjednotiek: BB (alebo CK-1), MB (alebo CK-2), a MM (alebo CK3). CK-MB je prítomné do rôznej miery v srdcovom svale a taktiež v kostrovom svale. Najväčšia CK aktivita v normálnom sére je kvôli CK-MM. CK-BB je obvykle prítomná v sére v nízkych koncentráciách. CK-MB je prítomná v nízkych koncentráciách v normálnom ľudskom sére, ale zvýšená v dôsledku poškodenia srdca a zriedkavejšie kostrového svalu. PRINCÍP METÓDY Na určenie aktivity CK-MB je dostupných viacero metód. Toto činidlo využíva metódu imunoinhibície pomocou polyklonálnej protilátky proti CK-M monoméru. Úplne inhibuje aktivitu CK-MM a polovicu aktivity CK-MB. Potom sa testuje aktivita neinhibovaného CK-B monoméru. Kreatín kináza katalyzuje reakciu medzi kreatín fosfátom a ADP (adenozín-5-difosfát) a tvorí sa kreatín a ATP (adenozín-5-trifosfát). Posledná zlúčenina fosforyluje glukózu na G6-P (glukóza-6-fosfát) za prítomnosti HK (hexokinázy). G-6-P sa oxiduje na 6-PG (glukonát-6-fosfát) a súčasne sa equimolárne množstvo NADP (nikotínamid adenín dinukleotid fosfát) redukuje na NADPH v reakcii katalyzovanej G-6P-DH (glukóza-6-fosfát dehydrogenázou). Zvýšenie absorbancie pri 340 nm, ktoré je výsledkom vzniku NADPH je proporčné k aktivite kreatín kinázy vo vzorke. (3) CK Kreatín fosfát + ADP ⎯→ Kreatín + ATP HK Glukóza + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ INFORMÁCIE O ČINIDLÁCH Činidlo A: Substrát Kód: 981373 na 10 x 10 ml Kód: 981776 na 8 x 3 ml Činidlo B: Pufer Kód: 981373 10 x 10 ml Kód: 981776 8 x 3 ml Koncentrácie v rekonštituovanom činidle: Pufer (Imidazol) 104mmol/l Kreatín fosfát 31 mmol/l Adenozín-5’-difosfát (ADP) 2 mmol/l Magnéziová soľ 10 mmol/l D-glukóza 21 mmol/l Adenozín-5’-monofosfát (AMP) 5 mmol/l Nikotínamid adenín dinukleotid fosfát (NADP) 2 mmol/l Di(adenozín-5’)penta-fosfát (AP5A) 10 μmol/l N-acetyl-L-cysteín (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokináza (HK) > 3500 U/l Glukóza-6-fosfát dehydrogenáza (G-6-P-DH) > 2000 U/l Anti ľudská polyklonálna CK-M protilátka (ovčia alebo kozia) dostatočná na inhibíciu do 2000 U/l CK-MM pri 37 °C. NaN3 < 0.1 % Varovanie Len na in vitro diagnostiku. Dodržujte normálne bezpečnostné opatrenia, ktoré sú nevyhnutné pri manipulácii so všetkými laboratórnymi činidlami. Činidlo obsahuje azid sodný ako konzervačnú látku. Neprehĺtajte/nepožívajte. Zabráňte styku s pokožkou a sliznicami. Príprava Rozrieďte obsah činidla A s celým obsahom činidla B. Zatvorte nádobku a premiešajte. Poznámka: Pred vložením nádobiek do analyzátora Konelab skontrolujte, či sa v hrdle nádobky, alebo na povrchu činidla nenachádzajú bubliny. Uskladnenie a trvanlivosť Činidlá v neotvorených nádobkách sú stabilné pri 2…8 °C až do dátumu exspirácie vytlačeného na štítku. Informácie o stabilite činidiel nájdete v Používateľskej príručke vášho analyzátora Konelab. Ak má čerstvé činidlo absorbanciu pri 340 nm vyššiu ako 0.700 pri meraní oproti vzorke vody, tak ho nepoužívajte. Ak má čerstvé činidlo zakalenie, tak ho nepoužívajte. ODBER VZORIEK Typ vzorky Použite čisté nehemolyzované sérum, alebo heparinizovanú plazmu. Nevystavujte vzorky silnému svetlu. Varovanie Manipulujte a znehodnocujte ľudské vzorky ako potenciálne infekčný materiál. Uskladnenie (4) Vzorka sa môže uskladňovať 2 dni pri teplote 20...25 °C, 7 dní pri 4...8 °C, alebo 4 týždne pri -20 °C v tme. TESTOVACÍ POSTUP Automatický postup použitia analyzátora Konelab nájdete v manuáli a Používateľskej príručke. Meranie postupom, ktorý nie je validizovaný firmou Thermo Fisher Scientific Oy nie je garantované a musí byť vyhodnotené užívateľom. Poskytnuté materiály Činidlá popísané vyššie. Materiály potrebné, ale neposkytované Kontroly uvedené nižšie. Kalibrácia Výsledok (dA/min) sa konvertuje na výsledné jednotky pomocou prepočtového koeficientu. Kontrola kvality Používajte vzorky na kontrolu kvality aspoň raz denne a vždy, keď použijete novú fľašku s činidlom. Dostupné kontroly: CK-MB Control, kód: 981908 CK-MB Control High, kód: 981255 Intervaly a rozmedzia kontrolných hodnôt sa musia prispôsobiť individuálnym požiadavkám laboratória. Výsledné hodnoty kontrolných vzoriek by mali byť v rozmedzí referenčných hodnôt laboratória. VÝPOČTY VÝSLEDKOV Výsledky sa vypočítajú automaticky Konelab analyzátorom: Aktivita v U/l = dA/min x faktor TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P Faktor = kde: TV = celkový reagujúci objem v ml SV = Objem vzorky v ml 6.22= Extinkčný koeficient NADPH pri 340 nm P= Veľkosť kyvety = 1 Konverzný faktor μkat/l = (U/l)/60 Vynásobte CK-B aktivitu (U/l) dvomi a získate aktivitu CK-MB (U/l). OBMEDZENIA METODIKY (6,7) Pretože do činidla je pridané obmedzené množstvo CK-MB protilátky, vzorky s vysokými celkovými hodnotami CK by sa mali zriediť, aby celková hodnota CK nepresahovala 2000 U/l. Vysoké CK-BB alebo atypické CK-BB makro izoenzýmy môžu spôsobiť falošne vysoké výsledky CK-MB. Interferencie Kritérium: Návrat k východziemu stavu + 10% počiatočných hodnôt. Konjugovaný bilirubín: Bez interferencie do 650 μmol/l (38.0 mg/dl) Hemolýza: Nepoužívajte hemolyzované vzorky. Lipémia: Nepoužívajte lipemické vzorky. Ďalšie interferujúce substancie nájdete v Bibliografii č.5. OČAKÁVANÉ HODNOTY (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Tieto hodnoty slúžia len ako smernica. Odporúča sa, aby si každé laboratórium prispôsobilo rozsah referenčných hodnôt na konkrétnu populáciu. MERACÍ ROZSAH 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Rozšírený merací rozsah po sekundárnom rozriedení: 22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l). PREVÁDZKOVÉ CHARAKTERISTIKY Hranica citlivosti detekcie 7 U/l (0.12 μkat/l) Hranica citlivosti detekcie reprezentuje najnižšiu merateľnú koncentráciu/aktivitu, ktorá sa dá odlíšiť od nuly. Vypočíta sa ako koncentrácia nulovej vzorky + 3 SD (počas procesu, n=24). Nepresnosti Počas procesu Medzi jednotlivými dňami Celkovo Priemer 66 U/l CV% 2.3 1.3 SD 1.6 0.9 3.0 4.3 Priemer 143 U/l CV% 2.2 3.0 SD 3.0 4.1 6.6 4.7 Priemer 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 Vykonala sa štúdia presnosti s prístrojom Konelab 30 počas 10 dní, s počtom meraní n = 40. Porovnanie metódy Porovnanie medzi CK-MB činidlom (y) a komerčne dostupným testom založenom na imunoinhibícii CK-M podjednotky (x) malo nasledujúce výsledky: Lineárna regresia (výsledok v jednotkách U/I): y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Výsledky získané v jednotlivých laboratóriách sa môžu líšiť od daných prevádzkových dát. BIBLIOGRAFIA 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, THBooks Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. 6) Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / Séria T Template: D01162_4 SK Page 28 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 7) The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. VÝROBCA Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Dátum revízie (RRRR-MM-DD) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Zmeny od predchádzajúcej verzie Čiara vedľa textu naznačuje zmeny. Page 29 D02017_05_Insert_CK-MB_MU CK-MB 981373 981776 10 x 10 ml 8 x 3 ml DENNA BIPACKSEDEL GÄLLER UTOM USA. EVENTUELLA HÄNVISNINGAR TILL KONELAB SYSTEMS AVSER ÄVEN T SERIEN. AVSEDD ANVÄNDNING För in vitro-kvantitativ bestämning av B-underenheten i isoenzymet CK-MB av kreatinkinas (ATP: Creatine N-Phosphotransferase (CK), EC 2.7.3.2) aktivitet i humant serum eller plasma på Konelab-analysatorer. Alla testresultat måste tolkas med hänsyn till det kliniska sammanhanget. SAMMANFATTNING (1,2) Kreatinkinas (CK) är en dimer sammansatt av två underenheter, M (muskulär) och B (hjärna). Tre olika par av underenheter kan förekomma: BB (eller CK-1), MB (eller CK-2) och MM (eller CK-3). CK-MB finns i varierande grader i hjärtmuskeln och även i skelettmuskulatur. Den större CK-aktiviteten i normalt serum beror på CK-MM. CK-BB finns vanligen i serum vid låg koncentration. CK-MB finns vid koncentration i normalt humant serum men ökar som resultat av hjärtskada och sällan skelettmuskulaturskada. PRINCIP FÖR PROCEDUREN Det finns ett antal metoder tillgängliga för bestämning av CK-MB-aktivitet. Detta reagens använder en immuninhiberingsmetod med hjälp av en polyklonal antikropp till CK-Mmonomer. Det inhiberar CK-MM-aktiviteten fullständigt och hälften av CK-MB-aktiviteten. Den icke inhiberade CK-B monomerens aktivitet analyseras sedan. Kreatinkinas katalyserar reaktionen mellan kreatinfosfat och ADP (adenosin-5’-difosfat) med bildande av kreatin och ATP (adenosin-5’-trifosfat). Den senare föreningen fosforylerar glukos till G-6-P (glukos-6-fosfat) i närvaro av HK (hexokinas). G-6-P oxideras till 6-PG (glukonat-6-fosfat) och samtidigt reduceras en ekvimolär mängd NADP (nikotinamid-adenindinukleotidfosfat) till NADPH i en reaktion som katalyseras av G-6PDH (glukos-6-fosfatdehydrogenas). Ökningen i absorbans vid 340 nm som resulterar från bildandet av NADPH är proportionell mot kreatinkinasets aktivitet i provet. (3) CK Kreatinfosfat + ADP ⎯→ Kreatin + ATP HK Glukos + ATP ⎯→ G-6-P + ADP G-6-P-DH G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+ REAGENSINNEHÅLL Reagens A: Substrat Artikelnr.: 981373 Artikelnr.: 981776 Reagens B:. Buffert Artikelnr.: 981373 Artikelnr.: 981776 för 10 x 10 ml för 8 x 3 ml 10 x 10 ml 8 x 3 ml Koncentrationer i det rekonstituerade reagenset: Buffert (Imidazol) 104 mmol/l Kreatinfosfat 31 mmol/l Adenosin-5’-difosfat (ADP) 2 mmol/l Magnesiumsalt 10 mmol/l D-glukos 21 mmol/l Adenosin-5’-monofosfat (AMP) 5 mmol/l Nikotinamid-adenin dinukleotid fosfat (NADP) 2 mmol/l Di(adenosin-5’)pentafosfat (AP5A) 10 μmol/l N-acetyl-L-cystein (NAC) 21 mmol/l EDTA 2 mmol/l Hexokinas (HK) > 3500 U/l Glukos-6-fosfatdehydrogenas G-6-P-DH > 2000 U/l Antihuman polyklonal CK-M-antikropp (från får eller get) tillräcklig för att inhibera upp till 2000 U/l av CK-MM vid 37 °C. NaN3 < 0.1 % Försiktighetsåtgärder Endast för in vitro-diagnostik. Vidta normala försiktighetsåtgärder som vid all hantering av laboratoriereagenser. Reagenset innehåller natriumazid som konserveringsmedel. Får ej sväljas. Undvik kontakt med hud och slemhinnor. Beredning Lös upp innehållet i Reagent A med hela innehållet i Reagent B. Sätt på vialens lock och blanda. Obs: Kontrollera att det ej finns bubblor i flaskhalsen eller på ytan av reagenset då behållarna placeras i Konelab-analysatorn. Förvaring och hållbarhet Reagenser i oöppnade vialer är stabila vid 2...8 °C fram till det utgångsdatum som är tryckt på etiketten. Se Application Notes för aktuell Konelab-analysator för information om reagensernas hållbarhet i instrumentet. Om det nyligen rekonstituerade reagenset har en absorbans högre än 0,700 vid 340 nm när den mäts mot en blank med vatten skall du inte använda det. Om reagenset är grumligt skall du inte heller använda det. PROVTAGNING Provtyp Använd klart, icke hemolyserat serum eller heparinplasma. Utsätt inte proven för starkt ljus. Försiktighetsåtgärder Humana prover ska behandlas som potentiellt smittförande, både vid hantering och kassering. Förvaring (4) Provet kan förvaras i 2 dagar vid 20…25 °C, i 7 dagar vid 4…8 °C eller i 4 veckor vid -20 °C, i mörker. TESTUTFÖRANDE Se referenshandboken och Application Notes för automatiskt utförande på aktuell Konelab-analysator. Varje applikation som ej har validerats av Thermo Fisher Scientific Oy kan ej garanteras vad gäller prestanda och måste därför utvärderas av användaren. Bifogat material Reagenser enligt ovan. Erforderligt material som ej medföljer Kontroller enligt nedan. Kalibrering Svaret (dA/min) omvandlas till resultatenheter med en omräkningsfaktor. Kvalitetskontroll Använd kvalitetskontrollprover minst en gång om dagen och efter varje kalibrering samt varje gång en ny flaska med reagens används. Tillgängliga kontroller: CK-MB Control, artikelnr: 981908 CK-MB Control High, artikelnr: 981255 Kontrollintervaller och -gränser måste anpassas efter det enskilda laboratoriets krav. Resultaten från kvalitetskontrollprovet bör ligga inom de av laboratoriet fastställda gränserna. BERÄKNING AV RESULTAT Resultaten beräknas automatiskt av Konelab-analysatorn enligt följande: Aktivitet i U/l = dA/min x Faktor Faktor = där: TV x 1000 ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P TV = Total reaktionsvolym i ml SV = Provvolym i ml 6.22=Extinktionskoefficient för NADPH vid 340 nm P = Kyvettlängd = 1 Omvandlingsfaktor μkat/l = (U/l)/60 Multiplicera CK-B-aktiviteten (U/l) med 2 för att få aktiviteten i CK-MB (U/l). PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR (6, 7) På grund av den begränsade mängd CK-M antikropp som tillsätts i reagenset, bör prover med höga totala CK-värden spädas så att värden för total CK inte överstiger 2000 U/l. Hög CK-BB eller atypiska CK-BB-makroisoenzymer kan orsaka falskt höga CK-MB-resultat. Interferens Kriterium: Utbyte inom +10 % av initialvärdena. Konjugerat bilirubin: Ingen interferens har konstaterats upp till 650 μmol/l (38.0 mg/dl). Hemolys: Använd ej hemolyserade prover. Lipemi: Använd ej lipemiska prover. För andra interfererande ämnen, se referens 5. FÖRVÄNTADE VÄRDEN (7) < 25 U/l (< 0.42 µkat/l) Angivna värden är endast avsedda som vägledning. Vi rekommenderar att varje laboratorium verifierar detta område eller fastställer ett referensintervall för populationen som gäller. MÄTOMRÅDE 22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l) Utökat mätområde efter sekundär spädning: 22 -2500 U/l (0.37 -41.7 μkat/l) RESULTATKARAKTERISTIKA Detektionsgräns 7 U/l (0.12 µkat/l) Detektionsgränsen representerar lägsta mätbara koncentration/aktivitet som kan skiljas från noll. Den beräknas som koncentrationen av nollprov + 3 SD (standardavvikelser) (inom serien, n=24). Imprecision Inom serie Mellandags Totalt SD 1.6 0.9 3.0 Medel 66 U/l CV% 2.3 1.3 4.3 SD 3.0 4.1 6.6 Medel 143 U/l CV% 2.2 3.0 4.7 Medel 264 U/l SD CV% 4.9 1.9 13.0 5.0 14.0 5.4 En precisionsstudie genomfördes med användning av Konelab 30 under 10 dagar där antalet mätningar var n = 40. Metodjämförelse En jämförelse mellan detta CK-MB-reagens (y) och ett i handeln tillgängligt test baserat på immuninhibering av CK-M-underenheten (x) gav följande resultat: Linjär regression (resultatenhet U/l) y = 0.96 x - 1 r = 0.993 n = 70 Resultaten som erhålls vid varje enskilt laboratorium kan skilja sig från angivna data för prestanda. REFERENSER 1) Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358. 2) Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73. 3) Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979. 4) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996. 5) Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC Press, Washington, D.C., 3-239, 2000. © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Konelab™ / T serien Template: D01162_4 SV Page 30 D02017_05_Insert_CK-MB_MU 6) 7) Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem. 28(10), pp. 2017-2021, 1982. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981. TILLVERKARE Thermo Fisher Scientific Oy Clinical Diagnostics Finland Ratastie 2, PB 100, FI-01621 Vanda Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300 www.thermo.com/konelab Rev. datum (åååå-mm-dd) 2009-12-02 Template: D01162_4 © 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Ändringar från tidigare utgåva Raden vid sidan av texten anger ändringar.