Développement et validation d`une méthode LC-MS pour l

Développement et validation d’une méthode LC-MS pour
l’étude de stabilité de solutions de prostaglandine E1
D. Palmero1,2, E. Chavan1, L. Berger2, H. Henry3, J.-F. Tolsa4, A. Pannatier1, F. Sadeghipour1,2
1Section
des Sciences Pharmaceutiques, Ecole de Pharmacie Genève-Lausanne, Université de Genève; 2Service de Pharmacie, 3Laboratoire de Chimie Clinique,
4Service de Néonatologie, Centre Hospitalier Universitaire Vaudois, Lausanne.
Introduction:
Dans le Service de Néonatologie du CHUV, les perfusions iv continues des médicaments sont préparées et changées toutes les 24h.
La prostaglandine E1 (PGE1) est un médicament coûteux, administré en iv continu chez le nouveau-né souffrant d’une cardiopathie congénitale
pour maintenir temporairement la perméabilité du canal artériel. En règle générale, moins de la moitié de la perfusion est administrée au
patient après 24h. Dans ce cas, le solde est jeté et une nouvelle perfusion est préparée et administrée par le personnel infirmier.
Objectif:
L’objectif de ce travail était de développer et de valider une méthode LC-MS de quantification de la PGE1 afin d’évaluer la stabilité
effective des solutions et de détecter ses produits de dégradation.
Méthode:
Validation de la méthode LC-MS:
Développement de la méthode LC-MS:
• LC  RPLC:
- phase stationnaire: colonne C18 3.5μm 2.1 x 100mm
- phase mobile: H2O-ACN + 0.1% acide formique en mode
gradient
• Sélectivité:
- dégradations forcées de PGE1 par traitement acide,
basique, oxydant, thermique et UV
• MS  HRMS:
- source ESI
- analyseur de masse Orbitrap
- mode full scan m/z 50-500
• Recherche des conditions LC-MS optimales à l’aide d’un
mélange de PGE1 et de 10 impuretés disponibles dans le
commerce
4 séries
• Fonction de réponse, justesse, fidélité, exactitude, linéarité,
intervalle de dosage:
- selon recommandations de la SFSTP1
- standards d’étalonnage: 5 niveaux, 2 répétitions, sans la
matrice
- standards de validation: 3 niveaux, 3 répétitions, dans la
matrice
• Carry-over
• Stabilité des échantillons à 4 et -20°C
Résultats:
O
O
COOH
COOH
11-epi PGE1
HO
15-epi PGE1
HO
OH
OH
TIC
8-epi PGE1
O
O
O
COOH
COOH
15-keto PGE1
HO
O
PGE1
[H 2O2]
HO
PGE1
COOH
8-epi PGE1
[OH -]
HO
OH
O
PGB1
OH
8-epi PGA 1
m/z = 335.22169
O
COOH
PGA1
[OH -]
PGA 1
15-epi PGE1
[OH -]
[OH -] / [H +] / [H 2O2] / Δ / UV
11-epi PGE1
m/z = 353.23225
5,6-trans PGE2
COOH
15-keto PGE1
8-epi PGA1
PGE2
[OH -]
O
COOH
PGB1
m/z = 351.21660
100
13,14-dihydro PGE1
50
m/z = 355.24790
0
0
2
4
6
8
OH
Figure 1: Produits de dégradation de PGE1 observés lors des dégradations forcées
10
•
•
•
•
Sélectivité: facteur de résolution (RS) 1.35
Fonction de réponse: régression linéaire pondérée (1/x), R2 0.9985
Justesse: biais -1.8 à 0.3%
Répétabilité & fidélité intermédiaire: CV 1.9 à 4.7%
10
12
Temps [min]
14
16
18
20
22
Figure 2: Analyse du mélange de PGE1 et des 10 impuretés obtenues dans le commerce
•
•
•
•
Limite de quantification (LOQ): 0.100µg/ml
Limite de détection (LOD): 0.026µg/ml
Linéarité: R2 0.9966
Carry-over: 0.009 ± 0.002%
 Limites d’acceptation: 8%, pour un intervalle de dosage compris entre 0.100 et 0.188μg/ml
• Stabilité des échantillons: à 4°C: après 9h: 100.9 ± 2.4%
à -20°C: après 1 semaine: 91.8 ± 5.4%, après 2 semaines: 93.3 ± 7.6%
Discussion - Conclusions
Une méthode LC-MS de quantification de la PGE1 et de détection de ses produits de dégradation a été développée et validée. Sur la base des
résultats obtenus, cette méthode pourra être appliquée pour l’étude de la stabilité effective de solutions de PGE1.
1Commission
SFSTP. Validation des procédures analytiques quantitatives - Harmonisation des démarches. STP Pharma Pratiques 2003;13:101-38.
GSASA-pp64
Contact: [email protected]
OH
Intensité [%]
OH