Informerende artikel (pdf)
Transcription
Informerende artikel (pdf)
Det afgørende Bevis Efterår 2011, Nr. 4 I denne tid begås flere og flere voldtægter, folk bliver skudt på åben gade i forbindelse med bandekrigen og flere kvinder får børn uden at vide hvem faderen er. I dette nummer vil vi belyse hvordan disse sager bliver opklaret. Dna – profil bliver det afgørende bevis i efterforskningen på dræbt lærer. En lærer fra Greve Gymnasium er På gerningsstedet er der senere blevet En retsmediciner fortæller hvordan blevet fundet dræbt i eget hjem. fundet noget DNA som ikke stammer man laver en DNA – profil. Læreren er blevet skudt i hovedet fra læreren selv. Materialeliste kan findes på næste med to riffelskud. På gerningsstedet er der fundet nogle fingeraftryk og nogle tøjfibre. Det viser sig i imidlertid at fingreaftrykket stammer fra en anden lærer på skolen, men at tøjfibrene stammer fra en elev, som læreren underviste. Politiet arbejder på at finde flere beviser, som kan bekræfte Det vil vise sig at DNA – profilen, side. bliver det afgørende spor i sagen om ’Det første man skal gøre, er at finde den dræbte lærer. alle materialerne frem. Så skal man På de næste sider kan du læse om, hvordan en DNA- profil bliver lavet og hvordan den skal analyseres og forstås. Detaljeret fremgangsmåde vil være at finde. tage fire tomme eppendorfrør og skrive 1,2,3 og 4 på dem, så man kan skelne dem fra hinanden. Rørene placeres i en skumplastholder. Først kommer man 10 µl RXN – puffer i hvert af de fire tomme rør, efter at hvem af de to mistænkte, der er man har banket røret med RXN – gerningsmanden. puffer ned i bordet, så man er sikker på at det hele ligger i bunden af røret. I DETTE NUMMER Detaljeret fremgangsmåde og materialeliste til fremstilling af en DNA- profil. RXN – puffer fremmer enzymernes virkning, så processen går hurtigere. Så fulgte vi skemaet bagerst i vores forsøgsvejledning og kom først 15 µl På billedet ses en lidt forenklet udgave af en DNA – profil, men ellers er den magen DNA fra mistænkte 1 (person A) i de til dem politiet bruger. to første rør (1&2) og bagefter kom vi 15 µl DNA fra mistænkte 2 (person B) i de to sidste rør (3&4). I Lorem Ipsum MATERIALER Vandbad 37 C Vandbad 60 C Isterninger Agar Måleglas og tragt til agar Elektroforesepuffer Måleglas til elektroforesepuffer Elektroforeseapparat Strømforsyning DNA-farve Bakker til DNA-farvning RXN – puffer fremmer enzymernes Først tager man gelkammeret og virkning, så processen går hurtigere. lukker hver af enderne med Så kommer man først 15 µl DNA fra malertape og derefter kommer man mistænkte 1 (i dette tilfælde eleven) i kammen i. Så tager man lidt 4 eppendorfrør de to første rør (1&2) og bagefter 15 flydende agar med en pipette og 1 rør GS 1 µl DNA fra mistænkte 2 ( her er det kommer rundt langs siderne for at 1 rør GS 2 læreren) i de to sidste rør (3&4). I lukke eventuelle udgange. Efter det 1 rør DNA 1 (fra person A) forbindelse med pipetring af DNA er tager man 40 ml agar og hælder ned i 1 rør DNA 2 (fra Person B) det vigtigt at man skifter pipettespids gelkammeret, og så lader man 1 rør markør efter hver afpipetering, så ikke man massen størkne i ca. 20 minutter. 1 rør RXN puffer får blandet DNA’et sammen. Efter Når DNA – blandingerne har stået i det tager man 15 µl af enzym 1 og ca. 45 minutter tages de op og så 1 rør enzym 1 på is 1 rør enzym 2 på is kommer ned i rør 1 og 3 og 15 µl af kommer man 5 µl loading opløsning (LO) i hvert rør for at stoppe enzym 2 og kommer ned i rør 2 og 4. 1 rør loading-opløsning (LO) Enzymerne er dem der klipper enzymernes reaktion. Loading Krus med is DNA’et i små stykker. Når man har opløsningen er blå, og det betyder at Skumplastholder til gjort det knipser man lidt på rørene, man kan se hvornår man skal stoppe eppendorfrør så det hele blandes og efterfølgende elektroforesen, for den blå farve går Pipetter til 5, 10, 15 og 40 µl lukker man rørene. Så sætter man de nemmere gennem gelen end DNA Pipettespidser 4 rør med blandinger i ned i et 37 gør, så når den blå farve når ned mod Affaldsstativ grader varmt vandbad, så enzymerne den anden ende, er det tid til at Gelkammer med kam kan arbejde under de vilkår de slukke. Når man har gjort det, arbejder bedst i - så går det hurtigst. kommer man sin gel op i Markørpen Der skal de stå i ca. 45 minutter. elektroforesen, sådan at ’hullerne’ Mens at rørene står i vandbadet skal vender mod den negative pol. Efter man lave gelen, som skal bruges til det fylder man elektroforesepuffer elektroforesen. ned i karret. Elektroforesepuffer optager en hydron (H+ ) fra DNA’et, 3 sådan at det bliver lidt negativt ladet. Så kommer man 20 µl af hver opløsning i hullerne, som vist i skemaet under. Brønd 1 2 3 4 5 6 7 8 Markør GS1 GS2 1 2 3 4 markør nr. Prøve Markøren viser, om DNA’et er vandret mod den positive pol, som den skal. Så sætter man 135 V over gelen og lader den stå i ca. 30 minutter. Når elektroforesen er færdig, tager man gelkammeret op og skubber forsigtigt gelen over i en plastbakke, hvor den skal farves. Så tager man handsker på og lægger den blå side af et DNA-farvekort på gelen. Man tager et par fingre og glatter kortet ud på hele gelen. Farven vil trænge ned til DNA’et og farve det, så man kan se hvordan båndene lægger sig, og det skal man vide til analysen. Gelen skal stå med farven på i ca. 10 minutter og så skal den ’skylles’ med destilleret vand. rutrufermentum sagittis, libero leo mollis libero, eget facilisis mauris neque vitae nisi. Mauris odio nunc, dapibus non ornare et, feugiat nec dolor. Curabitur nec tortor risus. Ut fringilla, massa eu sodales blandit, lorem nulla lobortis sem, vel accumsan leo turpis eget metus. In justo nulla, elementum non convallis at, venenatis interdum arcu. Pellentesque habitant morbi tristique senectus et netus et malesuada fames ac turpis egestas. Phasellus in sem erat, et rhoncus purus. Cras dapibus dolor vel tortor molestie vulputate. Sed nec placerat odio. Mauris est nisi, rhoncus sed tincidunt sit amet, semper ut sapien. Vestibulum interdum purus in orci Analyse af DNA-profil bibendum sit amet pretium nulla sodales. Når man kigger på DNA rækkerne fra gerningsstedet (række to og tre) kan man Pellentesque scelerisque ullamcorper adipiscing. Phasellus sed suscipit justo. se at der i række tre er et DNA stykke der ligger længere oppe end de andre. I Aenean venenatis lectus sed nisl pellentesque porta. række syv kan man ligeledes se, at der også ligger et stykke DNA højere oppe Vestibulum lectusNår magna, nec blandit Nam scelerisque nec end de andrenec stykker. man kigger på denlacus. nederste DNA – profil påaugue billedet mi bibendum. consectetur, lorem nonsyv. rhoncus kanelementum man se at række to og treQuisque er identiske med række seks og Det betyder at porttitor, tortor nulla consectetur quam, interdum sapien vi har en gerningsmand. Gerningsmanden hara samme DNA, somturpis det dersed er risus. ante ipsum faucibus luctus et fundetVestibulum på gerningsstedet. Rækkeprimis fire oginfem er heltorci anderledes endultrices to og tre, og posuere Curae; sodales, nisl sit amet aliquam eleifend, nulla derfor kancubilia det ikke være Integer eleven, der er gerningsmanden. elit adipiscing ligula, consectetur facilisis lacus felis quis dolor. Man kan ud fra DNA – profilen konkludere, at det er læreren der er Cras vehicula malesuada fermentum. laciniabevis. felis interdum risus gerningsmanden, og det blev hermed detNulla afgørende interdum tincidunt. Mauris condimentum dignissim ligula, id eleifend ante mollis et. Nulla blandit, augue sed viverra rhoncus, eros nulla blandit nisl, PCR – maskinen Når man finder DNA på et gerningssted finder man ofte kun en lille smule og det er ikke nok til at lave en DNA- profil. Man kan bruge en PCR – maskine til at forstørre mængden af DNA op. Processen består af 3 trin. Først bliver DNA’et varmet op til ca. 90 grader, så hydrogenbindingerne mellem baserne forsvinder. DNA – stigen bliver delt i to ’kamme’. Så bliver DNA’et nedkølet til 55 grader, og primerne kommer på. Primere er små stykker af RNA, som fortæller, at her skal replikationen starte. I det tredje trin bliver DNA’et igen opvarmet, men denne gang til 72 grader. Nu vil Taq polymerase sørge for at nukleotiderne, som er baser, bliver sat rigtigt på. Primere og nukleotider er noget, man selv skal putte ned i maskinen. Der skal mange nukleotider til. Replikationen gentages til man har nok DNA.