Polyclonal Rabbit Anti-Human Kappa Light Chains/APC

Polyclonal Rabbit Anti-Human Kappa Light Chains/APC, Rabbit F(ab’)2
Polyclonal Rabbit Anti-Human Kappa Light Chains/FITC, Rabbit F(ab’)2
Polyclonal Rabbit Anti-Human Kappa Light Chains/RPE, Rabbit F(ab’)2
Avsedd användning
Kodnr. C0222
Kodnr. F0434
Kodnr. R0436
För diagnostisk användning in vitro.
C0222, F0434 och R0436 är avsedda för användning inom flödescytometri. Vid flödescytometri är antikroppar
mot kappa light chains användbara för påvisandet av kappa light chains på cellytan och således för identifiering
av monoklonalitet (klonalt överskott) vid B-cellslymfoproliferativa sjukdomar tillsammans med en panel av
andra antikroppar (1-4). Tolkning måste göras av kvalificerad specialist inom ramen för patientens anamnes
och andra diagnostiska tester.
Introduktion
De flesta B-celler, med undantag av pre-B-progenitorceller, pre-B-celler och mogna plasmaceller, uttrycker
immunoglobulin på ytan. Varje cell uttrycker bara en typ av light chain. I normalt perifert blod och i lymfkörtlar
finns det en blandning av kappa-positiva och lambda-positiva celler, där två tredjedelar av cellerna uttrycker
kappa och en tredjedel uttrycker lambda (5). Eftersom lymfneoplasmer oftast är en klonal utveckling av en enda
cell, uttrycker maligna celler likformigt samma light chain-isotyp. Neoplastiska B-cellslymfoproliferativa
sjukdomar kan ofta misstänkas, grundat på påvisande av en markerad övervägande del som uttrycker en enda
light chain-typ (4). Ovanliga fall av kappa-negativa eller lambda-negativa B-cells Non-Hodgkins lymfom har
beskrivits (4, 6).
Ingående reagenser
Anti-Kappa Light Chains conjugates, C0222, F0434 och R0436, har tillverkats av ett F(ab')2-fragment av
affinitetsisolerad polyklonal antikropp från kanin. Konjugaten levereras i vätskeform i en buffert innehållande 1%
bovinserumalbumin (BSA) och 15 mmol/L NaN3, pH 7,2. Använd 10 µL av produkten för färgning av upp till 106
leukocyter från normalt humant perifert blod.
Konjugatkoncentration g/L: Se etikett på flaskan.
Antikroppskod nr.
Provpreparation
Fluorokrom
Ig-reagens
kod nr.
C0222
APC (Allophycocyanin)
X0998
F0434
FITC (Fluorescein isothiocyanate isomer 1)
X0929
R0436
RPE (R-Phycoerythrin)
X0930
1.
Antikroppen som används för APC-, FITC- och RPE-konjugering har fast-fas absorberats med humant
plasmaprotein för att avlägsna spår av kontaminerande antikroppar.
2.
Den absorberade antikroppen har vidare renats med affinitetskromatografi på en kolonn med
immobiliserade humana kappa light chains.
3.
Den affinitetsisolerade antikroppen har sedan degraderats med pepsin och F(ab')2-fragmentet har
isolerats genom gelfiltrering.
4.
Slutligen har F(ab')2-fragmentet konjugerats med allofykocyanin, fluoresceinisotiocyanatisomer 1 eller Rfykoerytrin
Immunogen
Polyklonala immunoglobulin light chains av kappa-typ isolerade från en pool av human sera.
Specificitet
Anti-Kappa Light Chains reagerar med fria kappa chains liksom också kappa chains i intakta
immunoglobulinmolekyler. Specificiteten har fastställts enligt beskrivning nedan. För att erhålla maximal
sensitivitet utfördes specificitetstestet crossed immunoelektrofores, före affinitetsreningen och
pepsinnedbrytningen.
Crossed immunoelectrophoresis: Endast kappa-relaterade precipitat framträder när antikroppen körs mot
humanplasma. Färgning: Coomassie Brilliant Blue.
Flödescytometri: När Anti-Kappa Light Chains används enligt beskrivningen i färgningsproceduren tillsammans
med Anti-CD19/RPE, HD37 eller Anti-CD19/FITC, HD37 på lyserat humant helblod, uppstår en specifik
färgning av en del av CD19-positiva B-lymfocyter som motsvarar det förväntade intervallet av uttryck av kappalight chains.
Flödescytometrisk analys av enkla cellsuspensioner från formalinfixerade paraffininbäddade vävnadsprover visade
att anti-Kappa light chains märker reaktiva hyperplastiska lymfnoder (10/10 fall). I icke-Hodgkins lymfom, märkte
antikroppen 4/10 fall (5). De återstående fallen var positiva för lambda light chains (5/10 fall) eller visade inte något
uttryck av light chains (1/10 fall) (4).
Flödescytometrianalys av perifera blodlymfocyter visade att anti-kappa light chains märkte en del kroniska Bcellslymfatiska leukemier. Därför var, i en studie av 121 fall (2), 37 positiva för kappa. I en annan studie av 165 fall
(3) var 97 positiva för kappa.
Anvisningar
och försiktighetsåtgärder
1. För professionella användare.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är synnerligen toxisk i ren form. I
produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten när det slås bort för att
förhindra att metallazider byggs upp i avloppet.
(104231-007)
C0222/F0434/R0436/SE/LHP/2013.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
3. Som med alla produkter som kommer från biologiska källor måste korrekta procedurer användas vid
hanteringen.
4. Använd lämplig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögon och hud.
5. Oanvänd lösning måste kasseras enligt lokala och statliga föreskrifter.
o
Förvaring
Förvaras mörkt vid 2-8 C. Använd inte efter utgångsdatum som är angivet på flaskan. Om reagenserna
förvaras i annan miljö än de specificerade, måste förhållandena verifieras av användaren. Det finns inga tydliga
tecken som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller köras samtidigt
med patientprover. Under förvaring kan ett litet precipitat ibland bildas och orsaka en finkornig icke-specifik
färgning. En enkel filtrering (0,22 µm cellulosaacetatfilter) återställer konjugatets ursprungliga höga kvalitet.
Konjugat ska inte lagras i utspädd form. Kontakta vår tekniska support om oväntad färgning observeras som
inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara något problem med
antikroppen.
Anm. om utförandet
Före färgningen av prover från perifert blod, måste mononukleära celler isoleras genom centrifugering i ett
separationsmedium eller så måste blodprovet tvättas för att avlägsna lösliga serumproteiner. Eftersom humana
monocyter binder serumimmunoglobuliner via dess yt-Fc-receptorer måste dessa celler avlägsnas med reducering
eller identifiering.
Färgningsprocedur
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
UppsamLa venöst blod i ett provrör innehållande ett antikoaguleringsmedel.
Överför 100 µL av ej koagulerat blod till provröret.
Tillsätt 2 mL 0,01 mol/L PBS, pH 7,4. Blanda försiktigt med en vortexblandare.
Centrifugera vid 300 x g i 5 minuter, aspirera sedan klarskiktet och lämna kvar cirka 50 µL vätska.
Repetera steg 3 och 4 två gånger till.
Tillsätt 10 µL rabbit immunoglobulin fraction, kod nr. X0903, för blockering. Blanda försiktigt med en
vortexblandare och inkubera i mörker vid 37 °C unde r 30 minuter.
Tillsätt 10 µL av fluorokromkonjugerade anti-kappa light chains. Blanda försiktigt.
Använd ett icke-reaktivt F(ab’)2-fragment från kaninimmunoglobulin och som är konjugerat med samma
fluorokrom som negativ kontroll (se tabell).
Inkubera i mörker vid 4 oC i 30 minuter.
Tillsätt 1-2 mL erytrocytlyserande reagens i varje rör och blanda försiktigt. Följ reagenstillverkarens
rekommendationer angående tid och temperatur vid inkubation.
Centrifugera vid 300 x g i 5 minuter.
Aspirera supernatanten och lämna ungefär 50 µL vätska.
Tillsätt 2 mL 0,01 mol/L PBS, pH 7,4. Blanda försiktigt med en vortexblandare.
Upprepa steg 11 och 12.
Resuspendera pelleten i en lämplig vätska för flödescytometri, t.ex. 0,3 mL 1% paraformaldehyd
(fixeringsmedel) i 0,01 mol/L PBS, pH 7,4.
Analysera på en flödescytometer.
Det rekommenderas att ta med ett lämpligt positivt och negativt kontrollprov i varje körning för kontroll av
reagensen och förberedelserna. Observera att fluorescenskonjugat är ljuskänsliga och att proven därför skall
skyddas från ljus under färgningsproceduren och fram till dess analysen körs.
Referenser
1.
Johnson A, Olofsson T. Flow cytometric clonal excess analysis of peripheral blood, routine handling, and
pitfalls in interpretation. Cytometry 1993;14:188-95.
2.
Cartron G, Linassier C, Bremond JL, Desablens B, Georget MT, Fimbel B, et al. CD5 negative B-cell
chronic lymphocytic leukemia: clinical and biological features of 42 cases. Leuk Lymphoma 1998;31:20916.
3.
Gandini D, Lanza F, Latorraca A, Levato F, Del Senno L, Castoldi G. Immunophenotypic and genotypic
characterization of B-cell chronic lymphocytic leukemia patients from Northern Italy. Haematologica
1993;78:18-24.
4.
Leers MPG, Theunissen PHMH, Ramaekers FCS, Schutte B, Nap M. Clonality assessment of
lymphoproliferative disorders by multiparameter flow cytometry of paraffin-embedded tissue: an additional
diagnostic tool in surgical pathology. Hum Pathol 2000;31:422-7.
5.
Deegan MJ. B lymphocytes and plasma cells: their development and identification. In: Keren DF, editor.
Flow cytometry in clinical diagnosis. Chicago: ASCP Press; 1989. p. 139-63.
6.
Kaleem Z, Zehnbauer BA, White G, Zutter MM. Lack of expression of surface immunoglobulin light
chains in B-cell non-Hodgkin lymphomas. Am J Clin Pathol 2000;113:399-405.
Förklaring av symboler
(104231-007)
Katalognummer
Temperaturbegränsning
Använd före
In vitro diagnostisk medicinsk
apparat
Skydda från solljus
(se förvaringsavsnittet)
Tillverkare
Läs instruktionerna för
användning
Batchkod
C0222/F0434/R0436/SE/LHP/2013.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17