Ph.D. Fulltext - Weizmann Institute of Science

Transcription

‫‪77‬‬
‫אפ<ון המערכת הפוגווסעגוט<ת ומנגנון הרגולציה‬
‫האוסמוגוית באצה הלופ<ל<ת‬
‫‪PARVA‬‬
‫חיבור‬
‫‪DUNALIELLA‬‬
‫לשם קבלת תואר‬
‫לפילוסופיה‬
‫דוקטור‬
‫מאת‬
‫עמ< בן־ א מ ו ץ‬
‫הוגש‬
‫למועצה‬
‫המדעית‬
‫של‬
‫מבון‬
‫ויצמן‬
‫למדע‬
‫רחובות‬
‫ניסן‬
‫תשליג‬
‫אפריל נד‪9‬ו‬
‫אפ<ון המערכת הפוטוס<נג\‪<17‬ת ומנגנון הרגולציה‬
‫האוסמו‪7‬ו<ת באצה הלופ*ל<ת‬
‫‪PARVA‬‬
‫חיבור‬
‫‪DUNALIELLA‬‬
‫לשם קבלת תואר‬
‫לפילוסופיה‬
‫דוקטור‬
‫מאת‬
‫ע מ י בוי א מ ו ץ‬
‫הוגש‬
‫למועצה‬
‫המדעית‬
‫של‬
‫מבון‬
‫ויצמן‬
‫למדע‬
‫רחובות‬
‫ניסן‬
‫תשליג‬
‫אפריל ב‪197‬‬
‫ז ו נעשתה בהדרכתו‬
‫עבודה‬
‫של פרופ׳ מרדכי א ב ד ו ן ‪,‬‬
‫המחלקה‬
‫מכון‬
‫תודתי‬
‫המסורה‬
‫נ ת ו נ ה ל מ ר ד כ י א ב ד ו ן על הדרכתו‬
‫ו ע ל כל אשר למדתי מהעבודה‬
‫במחיצתו‪.‬‬
‫לתברי‬
‫ושיתוף‬
‫בקבוצה ת ו ד ה על העזרה‬
‫המעולה‪.‬‬
‫לביוכימיה‪,‬‬
‫ו י צ מ ן למדע‪.‬‬
‫לבת‪-‬עסי‪,‬‬
‫שליוותבי‬
‫כל‬
‫הדרך‪.‬‬
‫תוכז‬
‫הענינים‬
‫קמוד‬
‫רשימת טבלאות‬
‫רשימת‬
‫ציורים‪.‬‬
‫רשימת‬
‫קיצורים‬
‫מ ב ו א‬
‫‪D u n a l i e l l a parva‬‬
‫‪Dunaliella‬‬
‫‪1‬‬
‫‪4‬‬
‫‪.4‬‬
‫‪5‬‬
‫הצד ה מ ת ו ז ר של מערכת ה א ו ד ה ר א ש ו נ ה ‪.‬‬
‫ש י ט ו ת‬
‫‪.1‬‬
‫‪8‬‬
‫‪8‬‬
‫אורגניזם‬
‫גידול‬
‫‪.2‬‬
‫תנאי‬
‫ג י ד ו ל ומצע‬
‫‪.3‬‬
‫תנאי‬
‫ג י ד ו ל והכנת ת מ צ י ו ת ת ו פ ש י ו ת מתאים של אצות אחרות‬
‫‪.4‬‬
‫הכנת שברי‬
‫‪D. parva‬‬
‫‪9‬‬
‫‪8‬‬
‫ו ת מ צ י ת חופשיה מתאים בשבירה א ו ס מ ו ט י ת‬
‫‪8‬‬
‫‪9‬‬
‫‪.6‬‬
‫קביעת כ ל ו ר ו פ י ל‬
‫‪9‬‬
‫‪.7‬‬
‫מקורות אור‬
‫‪9‬‬
‫‪.8‬‬
‫מדידת ש י נ ו י י‬
‫‪.9‬‬
‫תיזור פריציאניד‬
‫‪10‬‬
‫ח י מ צ ו ן ‪ -‬ח י ז ו ר בציטוכרומים‬
‫‪10‬‬
‫‪.10‬‬
‫חיזור‬
‫ציטוכרום‪0‬‬
‫‪10‬‬
‫‪.11‬‬
‫חיזור‬
‫דיכלורופנול אינדופנול‬
‫‪10‬‬
‫‪.12‬‬
‫ח י ז ו ר פרדוקםין‬
‫‪10‬‬
‫‪1‬‬
‫‪NADH‬‬
‫‪.14‬‬
‫^‪7NADPH‬‬
‫‪11‬‬
‫קליטה ו פ ל י ט ת חמצן‬
‫‪ATP‬‬
‫‪14‬‬
‫‪12‬‬
‫‪12‬‬
‫בתמצית חופשיה מתאים של‬
‫‪.19‬‬
‫השפעת ‪ DSPD‬על י צ י ר ת כ ל ו ר ו פ י ל ‪ ,‬ג ל י צ ר א ל ד ה י ד ‪ - 3 -‬פ ו ס פ ט‬
‫ד ה י ד ר ו ג נ ז ו ת ה ת ל ו י ו ת ‪ N A D o‬או ‪ N A D P‬ו י כ ו ל ת פ ו ט ו ס י נ ט ט י ת‬
‫‪E. g r a c i l i s‬‬
‫‪,‬ן‬
‫‪14‬‬
‫ב‬
‫א י‬
‫‪13‬‬
‫‪.21‬‬
‫אינקורפורצייז‬
‫‪ TLC‬צ ל ו ל ו ז‬
‫ל‬
‫‪'^COo‬‬
‫ת א י‬
‫והפרדת ה ת ו צ ר י ם על פלטות‬
‫ם ו ד ב י ט ו ל ו נ פ ח המים במשקע תאים שלמים של‬
‫קביעת ר י כ ו ז ג ל י צ ר ו ל בתאים‬
‫‪.23‬‬
‫‪parva,‬‬
‫‪15‬‬
‫מ ד י ד ה א נ ז י מ ט י ת של ג ל י צ ר ו ל‬
‫‪14‬‬
‫‪D.‬‬
‫‪16‬‬
‫‪16‬‬
‫‪.25‬‬
‫קביעה כ י מ י ת של ג ל י צ ר ו ל י‬
‫ן רדוקטז התלוי ב־‬
‫‪17‬‬
‫‪NADP‬‬
‫‪17‬‬
‫‪18‬‬
‫ת ו צ א ו ת‬
‫‪.1‬‬
‫ת כ ו נ ו ת א צ ו ת שלמות‬
‫‪18‬‬
‫‪.2‬‬
‫ת כ ו נ ו ת שברי אצות‬
‫‪22‬‬
‫‪.3‬‬
‫א‪.‬‬
‫פעילויות פוטוסינטטיות‬
‫‪22‬‬
‫ב‪.‬‬
‫פעילויות אנזימטיות‬
‫‪27‬‬
‫ג‪.‬‬
‫פ ע י ל ו י ו ת " כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם שלמים"‬
‫‪28‬‬
‫‪ N A D P‬הוא ח ו פ ר ב י נ י י ם הכרחי‬
‫האם‬
‫בפוםוסינםזה?‬
‫‪30‬‬
‫א‪.‬‬
‫הש‪9‬עת מ ע כ ב י ם‬
‫‪30‬‬
‫ב‪.‬‬
‫השפעת ‪ DSPD‬על התפתתות ה פ ו ט ו ס י נ ט ז ה ו פ ע י ל ו י ו ת‬
‫)‪NAD(P‬‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוספם דהידרוגנז תלויות ב‪-‬‬
‫‪37‬‬
‫שינויי‬
‫ג‪.‬‬
‫פ ל ו ד ו ם נ צ י ה כחולה ת ל ו י ה ב א ו ד באצות שלמות‬
‫‪44‬‬
‫‪39‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫‪46‬‬
‫של האצה‬
‫‪47‬‬
‫‪48‬‬
‫ב‪.‬‬
‫השפעת ר י כ ו ז המלת ב מ ד י ו ם על תכולת ה ג ל י צ ר ו ל באצות‬
‫‪48‬‬
‫ג‪.‬‬
‫השפעת ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם על ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל באצות‬
‫‪54‬‬
‫השפעת‬
‫ג ל י צ ר ו ל על פ ע י ל ו י ו ת‪,7.‬‬
‫‪in vitro‬‬
‫ב ‪D. p a r v a -‬‬
‫‪57‬‬
‫‪59‬‬
‫א‪.‬‬
‫ב‪.‬‬
‫ד י ו‬
‫ניקוי‬
‫‪61‬‬
‫דיהידרוכסיאצטון רדוקטז‬
‫ת כ ו נ ו ת ד י ה י ד ד ו כ ס י א צ ט י ז ד ד ו ק ט ז ‪ :‬י צ י ב ו ת ‪ ,‬פקדם ה ב ל י ע ה ‪,‬‬
‫‪, Km‬‬
‫‪ pH‬א ו פ ט י מ ל י ‪ ,‬קבוע ש ו ו י המשקל ה ת ר פ ו ד י נ מ י ‪,‬‬
‫פשקל מ ו ל ק ו ל ר י ‪ ,‬ה ס פ צ י פ י ו ת ל ס ו ב ם ט ר ט ‪ ,‬מ ע כ ב י ם ו מ ז ר ז י ם‬
‫ז‬
‫‪63‬‬
‫‪70‬‬
‫‪70‬‬
‫‪73‬‬
‫‪77‬‬
‫ס י כ ו ם‬
‫‪80‬‬
‫רשימת ספרות‬
‫‪82‬‬
‫סיכום‬
‫אנגלי‬
‫רשימת‬
‫טבלאו ‪n‬‬
‫‪24‬‬
‫שפעת פ ר ד ו ק ס י ן מ ע ל י סלק או מתאי‬
‫עמוד‬
‫‪25‬‬
‫‪ D. parva‬על ח י ז ו ר‬
‫‪NADP‬‬
‫ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם מחסה א ו שברי ‪D. parva‬‬
‫י ל ו י ו ת שיחלוף‬
‫‪ A T P - P i‬ו ‪ATPase -‬‬
‫‪26‬‬
‫ת ל ו י ו ת ב א ו ד בשברי‬
‫ו ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם מחסה‪.‬‬
‫ת של א נ ז י מ י ם בתמצית ג ל מ י ת מתאי‬
‫‪27‬‬
‫‪49‬‬
‫בתאי‬
‫‪.6‬‬
‫מרכיבים הדרושים לפעילות‬
‫מתאים של‬
‫‪.9‬‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז ע ״ י תמצית תופשית‬
‫‪60‬‬
‫‪62‬‬
‫‪.8‬‬
‫ה ס פ צ י פ י ו ת לסובסטרט של ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז‬
‫השפעת מעכבים על פ ע י ל ו ת‬
‫דיהידרוכםיאצטון רדוקטז‬
‫‪67‬‬
‫‪68‬‬
‫ו‬
‫ציורים‬
‫רשימת‬
‫עמוד‬
‫‪.1‬‬
‫השפעת ה ר י כ ו ז ה א ו ס פ ו ל ר י של ה מ ד י ו ם על פליטת חמצן בתאים שלמים‬
‫של‬
‫פקטרום ה ב ל י ע ה של תאים שלמים ושל תמצית א צ ט ו נ י ת בת ‪ 8 0 $‬של‬
‫‪20‬‬
‫‪f‬‬
‫יטוכרום‬
‫‪19‬‬
‫‪21‬‬
‫בתאים שלמים של‬
‫‪22‬‬
‫חיזור פריציאניד‬
‫בריכוז‬
‫המתקבל בהארה של‬
‫‪.6‬‬
‫‪18‬‬
‫ו פ ו ס פ ו ר י ל צ י ה ‪D. p a r v a - o‬‬
‫‪23‬‬
‫ב א ו ר בתלות‬
‫הפלח ה ח י צ ו נ י‬
‫‪14‬‬
‫ב‬
‫וחיזור פריציאניד‬
‫של‬
‫‪.8‬‬
‫ו‬
‫השפעת‬
‫ם לציטוכרום‬
‫״‬
‫כ‬
‫ל‬
‫ר‬
‫ו‬
‫פ‬
‫ל‬
‫ס‬
‫ט‬
‫י‬
‫ם‬
‫‪2‬‬
‫‪0‬‬
‫"‬
‫‪29‬‬
‫‪-‬‬
‫‪ sulfo DSPD‬על ה ח י ז ו ר ב א ו ר של פ ר ד ו ק ם י ן‬
‫‪2‬‬
‫‪31‬‬
‫‪C‬‬
‫‪3‬‬
‫ו מ ־ ‪ N A D P H‬ל ־ ‪DC IP‬‬
‫‪33‬‬
‫^‬
‫‪4‬‬
‫‪NADP‬‬
‫‪3‬‬
‫ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם של‬
‫‪.13‬‬
‫‪35‬‬
‫השפעת‬
‫של‬
‫‪.14‬‬
‫‪ p-ADPR‬על ח י ז ו ר צ י ט ו כ ר ו ס‬
‫‪C-‬‬
‫בכלורופלסטים‬
‫‪36‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫השפעת ‪DSPD.‬‬
‫דהידרוגנזות‬
‫בזמן‬
‫על י צ י ר ת כ ל ו ר ו פ י ל ‪,‬‬
‫ה ת ל ו י ו ת ^ ־ ‪ N A D‬אי‬
‫הארת ס ו ס פ נ ס י ת‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוספט‬
‫‪ NADP‬ויכולת פוטוסינטטית‬
‫‪ E. g r a c i l i s‬המועברת מ ת נ א י ח ו ש ך ‪.‬‬
‫‪38‬‬
‫‪.15‬‬
‫שינויי‬
‫‪.16‬‬
‫השפעת ‪D C M U‬‬
‫או‬
‫בהארת תאי‬
‫‪.17‬‬
‫שינויי‬
‫פ ל ו ר ו ס נ צ י ה כ ח ו ל ה ב א ו ר בתאים שלמים של‬
‫‪ D B M I B‬על רמת ה ע ל י ה ב פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה‬
‫ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה באור א ד ו ם ‪ -‬ר ח ו ק‬
‫ו ב א ו ר א ד ו ם בתאי‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫‪.18‬‬
‫השפעת ‪D C M U‬‬
‫בהארת אצות ב א ו ר‬
‫‪.19‬‬
‫‪715‬‬
‫‪nm‬‬
‫השפעת חמצן על ב י ט ו ל ע י כ ו ב ה ע ל י ה ב פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה‬
‫בנוכחות‬
‫‪.20‬‬
‫או‬
‫‪ D B M I B‬על רמת ה י ר י ד ה ב פ ל ו ד ו ס נ צ י ה הכחולה‬
‫‪DBMIB‬‬
‫השפעה מלח על מעבד א ל ק ט ר ו נ י ם‬
‫ו פ ו ם פ ו ר י ל צ י ה ב א ו ר בשברי‬
‫‪.21‬‬
‫השפעח מלח על‬
‫דהידרוגנז‬
‫פ ע י ל ו י ו ת לקטט ד ה י ד ר ו ג נ ז‬
‫בשברי‬
‫וגלוקוז‪-6-‬פוםפט‬
‫‪14‬‬
‫‪.22‬‬
‫קינטיקת אינקורפורצית‬
‫‪.23‬‬
‫השפעת ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם על תכולת ה ג ל י צ ר ו ל בתאי‬
‫‪.24‬‬
‫‪.25‬‬
‫נ ז י ל ת ה ג ל י צ ר ו ל מהתאים ל מ ד י ו ם בתלות‬
‫השפעת‬
‫המלח‬
‫‪.26‬‬
‫‪COj‬‬
‫לגליצרול‬
‫ולסוכדוז ב‪-‬‬
‫‪D . parva‬‬
‫ב ר י כ ו ז המלח ה ח י צ ו נ י‬
‫‪ FCCP‬על ה ש י נ ו י י ם בתכולת ה ג ל י צ ר ו ל בתלות ב ר י כ ו ז‬
‫במדיום‪.‬‬
‫ה ק י נ ט י ק ה של פ י ר ו ק‬
‫לשינויי‬
‫ויצירת הגליצרול ב‪-‬‬
‫ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם‬
‫בתגובה‬
‫‪21SZ‬‬
‫‪.27‬‬
‫השפעת ר י כ ו ז‬
‫‪ N a C I‬ב מ ד י ו ם על ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל באצות ב ת נ א י ם‬
‫‪54‬‬
‫לא מ ט ב ו ל י • ‪.‬‬
‫‪.28‬‬
‫השפעת ר י כ ו ז‬
‫‪ N a C I‬ב מ ד י ו ם על ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל באצות ב ת נ א י ם‬
‫‪55‬‬
‫מטבולימ‪.‬‬
‫‪.29‬‬
‫תאור סכמטי של ש י נ ו י י נפח תאי‬
‫ומטבולים‬
‫‪.30‬‬
‫שונים‬
‫השפעת ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם על פ י ז ו ר ה ג ל י צ ר ו ל ו ה נ פ ח הלא‬
‫אוסמוטי‬
‫‪.31‬‬
‫‪ D. parva‬בתנאים אוסמוטים‬
‫השפעת‬
‫‪56‬‬
‫במשקע תאי‬
‫‪57‬‬
‫ג ל י צ ר ו ל על מעבר א ל ק ט ר ו נ י ם‬
‫ו פ ו ס פ ו ר י ל צ י ה ב א ו ר בשברי‬
‫‪58‬‬
‫‪.32‬‬
‫השפעת ג ל י צ ר ו ל על פ ע י ל ו י ו ת לקטט ד ה י ד ר ו ג נ ז ‪,‬‬
‫דיפוספט‬
‫קרבוקסילז‬
‫ריבולוז‪1,5--‬‬
‫‪59‬‬
‫ו פ ו ם פ ו א נ ו ל פ י ר ו ב ט ק ר ב ו ק ס י ל ז בשברים של‬
‫‪200-‬‬
‫ונת‬
‫‪G‬‬
‫‪63‬‬
‫‪65‬‬
‫‪.35‬‬
‫‪Sephadex‬‬
‫‪pH‬‬
‫הערכת המשקל ה מ ו ל ק ו ל ר י של ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ץ ר ד ו ק ט ז‬
‫‪75‬‬
‫רשימת‬
‫צילומים‬
‫‪.1‬‬
‫מ י ק ר ו ג ר ף של‬
‫התוצרים‬
‫‪66‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫‪ D u n a l i e l l a parva‬מ ג י ד ו ל א ו מ ו ט ר ו פ י באור‬
‫ה ע ק ר י י ם של ק י ב ו ע ‪CC>2 2.‬‬
‫לאחר ‪ 5‬דקות הארה‪.‬‬
‫‪I‬־ ־‬
‫‪14‬‬
‫בתאי ‪D. p a r v a‬‬
‫־־־»־־‬
‫‪2‬‬
‫‪46‬‬
‫קצורים‬
‫ מת‬mi
,
HEPES ‫ ־‬N ‫ ־‬2 ‫ ־‬h y d r o x y e t h y l p i p e r a z i n e ‫ ־‬N ‫ ־‬2 ‫ ־‬e t h a n e s u l f o n i c a c i d
DCIP - 2 , 6 - d i c h l o r o p h e n o l indophenol
,
N A D P + , N A D P H - n i c o t i n e a d e n i n e d i n u c l e o t i d e phosphate a n d its r e d u c e d form
respectively.
N A D , N A D H ‫ ־‬nifcotine a d e n i n e d i n u c l e o t i d e a n d its reduced f o r m r e s p e c t i v e l y
+
A D P - adenosine d i p h o s p h a t e
ATP ‫ ־‬a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t e
DTT ‫ ־‬d i t h i o t h r e i t o l
DSPD ‫ ־‬d i s a l i c y l i d e n e p r o p a n e d i a m i n e
s u l f o DSPD - d i s u l f o d i s a l i c y l i d e n e p r o p a n e d i a m i n e
TLC - T h i n l a y e r c h r o m a t o g r a p h y
M C A ‫ ־‬methanol, chloroform, formic acid
Chronotropic acid - sodium-1,8-dihydroxynaphtalene‫־‬3,6‫־‬disulfonate
D C M U - 3 - ( 3 , 4 - d i c h l o r o p h e n y l ) - l , 1 - d i m e t h y l urea
PMS - p h e n a z i n e m e t h o s u l f a t e
P-ADPR - phosphoadenosinediphosphateribose
PS I , PS II - Photosystems] a n d II r e s p e c t i v e l y
CCCP - carbonyl cyanide m‫־‬chlorophenylhydrazone
FCCP - c a r b o n y l - c y a n i d e p - t r i f l u o r o m e t h o x y p h e n y l h y d r a z o n e
CAPS - c y c l o h e x y l a m i n o p r o p a n e s u l f o n i c a c i d
Diquat
1,1
‫ ' ־‬- e t h y l e n e - 2 , 2 ' ‫ ־‬d i p y r i d y l i u m dibromide
pCMB - p‫־‬chloromercuribenzoate
Isofloridoside - 0 - a - d - g l a c t o p y r a n o s y l - ( l - ! ) - g l y c e r o l
DHA - dihydroxyacetone
RuDP ‫ ־‬r i b u l o s e 1 , 5 - d i p h o s p h a t e
PGA - 3-P-glyceric acid
G a ‫ ־‬3 - P - 3-P-glyceraldehyde
DHAP - dihydroxyacetonephosphate
BDHB - n - b u t y l - 3 , 5 - d i i o d o - 4 - h y d r o x y b e n z o a t e
EDTA - d i s o d i u m e t h y l e n e d i a m i n e t e t r a a c e t a t e
EGTA - e t h y l e n g l y c o l - 2 - ( 2 - a m i n o e t h y l ) - t e t r a a c e t i c
acid
‫מ ב ו א‬
‫‪.1‬‬
‫האצה ה ה ל ו פ י ל י ת‬
‫בחוסר‬
‫ד ו פ ן תא ר ג י ד י‬
‫מלאכותי‪.‬‬
‫‪D u n a l i e l l a parva‬‬
‫ודינה אצה י ד ו ק ה חד תאית המשתייכת ל ס י ד ר ה‬
‫)צילום ‪.(1‬‬
‫האצה ב ו ד ד ה פ י ם ‪ -‬ה מ ל ח ו ג ו ד ל ה בתנאי מעבדה ב מ ד י ו ם‬
‫כמתואר ב צ י ל ו ם ‪ 1‬מלבד •חוסר ד ו פ ן תא ד ו מ ה‬
‫לאצה ה י ד ו ע ה כ ל מ י ד ו מ ו נ ם ממים מ ת ו ק י ם ‪.‬‬
‫התופס לערך מחצית מנפת התא‪.‬‬
‫ל‪-‬‬
‫‪ D. parva‬ב מ ב נ ה ‪,‬‬
‫כ ל ו ר ו פ ל ס ס אחר ג ד ו ל בצורת ספל‬
‫" ז ר ו ע ו ת " ה כ ל ו ר ו פ ל ס ט הציטופלסמה ו ב מ ר כ ז ה ה ג ר ע י ן ‪.‬‬
‫עמילן‪.‬‬
‫שוטונים‬
‫המאפשרים ת נ ו ע ה פ ו ט ו ט ק ם י ת ‪.‬‬
‫נ ת ו נ י ם לעיתים לעליות‬
‫וירידות‬
‫‪sa‬‬
‫‪.‬‬
‫‪D‬‬
‫‪I‬‬
‫‪C‬‬
‫‪a‬‬
‫בריכוז‬
‫‪N‬‬
‫ל‪-‬‬
‫‪+‬‬
‫‪-‬‬
‫‪.‬‬
‫‪2‬‬
‫‪ N a‬ה י א ס פ צ י פ י ת ל ל א י כ ו ל ת החלפה עם ק ט י ו נ י ם א ח ד י ם כמו‬
‫ל ה ח ל י ף את‬
‫‪NaCI‬‬
‫לחידקים‬
‫י ו נ י ה כ ל ו ר י ד עם א נ י ו נ י ם א ח ר י ם כ מ ו‬
‫נ י ט ד ט או‬
‫סולפט‪.‬‬
‫‪(1.‬‬
‫‪.‬‬
‫‪M‬‬
‫‪, K‬‬
‫ומסוגלים‬
‫‪( J o h n s o n et al‬‬
‫ב ע ו ד שהדרישה‬
‫‪Li‬‬
‫ו‪-‬‬
‫‪ Mg‬נ י ת ן‬
‫מאחר והאצה דורשת ר י כ ו ז‬
‫ל ג י ד ו ל של ‪ 5$ - 12#‬ו ס ו ב ל ת תחום ר י כ ו ז י פלח ר ח ב ‪ ,‬ה י א מקבילה ב מ ו ש ג י מ י נ ו ח‬
‫ה ה ל ו פ י ל י ם ה ב י נ ו נ י ם ‪ ,‬ו ל א ל ח י ד ק י ם ה ה ל ו פ י ל י ם ה ק י צ ו נ י י ם ה ד ו ר ש י ם ר י כ ו ז י מלח ‪,‬‬
‫ג ב ו ה י ם מ‪20#-‬‬
‫‪.2‬‬
‫‪0.8‬‬
‫‪0‬‬
‫לאצה ע י נ י ו ת ו ש נ י‬
‫ב ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם‬
‫ל ס ב ו ל תחום רחב של מלח מ מ ל ח י ו ת נ מ ו כ ה ו ע ד ת מ י ס ו ת כמעט ר ו ו י ו ת ‪.‬‬
‫של‬
‫גודל וצורה‬
‫בהרכז ה כ ל ו ר ו פ ל ם ט ב ו ל ט ה פ י ד נ ו א י ד המוקף ח ו מ ד התשמודת‬
‫ב י ן שתי‬
‫תאי‬
‫‪ Volvocales‬ו מ א ו פ י י נ ת‬
‫)‪.(2‬‬
‫ר ג ו ל צ י ה אוסמוטית ב ‪-‬‬
‫הבםים ל ט ב י ל ו ת המלח ה ג ב ו ה ו ה מ כ נ י ז ם האחראי‬
‫טרם נ פ ת ר ו ‪.‬‬
‫ר ו ב ה ע ב ו ד ו ת ב נ ו ש א זה ה צ י ע ו‬
‫על ק י ו ם ר י כ ו ז ג ב ו ה של מלח בתוך ה ת א י ם ‪.‬‬
‫ל ר ג ו ל צ י ה אוספוטית ^ ‪D u n a l i e l l a‬‬
‫א י ז ו ן א ו ס מ ו ט י ב י ן התאים ו ה מ ד י ו ם המתבסס‬
‫מ ד י ד ו ת של י ר י ד ת נ ק ו ד ת ה ק י פ א ו ן בתמצית תאי‬
‫‪- 2 -‬‬
‫צ י ל ו ם מסי ‪: 1‬‬
‫‪Dunaliella parva‬‬
‫מ י ק ר ו ג ר ף של‬
‫)המי־קרוגרף‬
‫לבוטניקה‬
‫התקבל‬
‫בתודה‬
‫האוניברסיטה‬
‫מפרופ'‬
‫העברית‬
‫ש‪.‬‬
‫מגידול‬
‫קליין‬
‫ירושלים(‪.‬‬
‫אוטוטרופי‬
‫וב‪.‬צ‪.‬‬
‫באור‬
‫גינזבורג‬
‫המחלקה‬
‫‪3 -‬‬
‫‪ ( D .‬הראו כי‬
‫‪s a l i n a (3‬‬
‫‪-‬‬
‫ה ר י כ ו ז ח א ו ס פ ו ט י התוך תאי ג ב ו ה מ ז ה הנקבע ל פ י רמת המלח ב מ ד י ו ם ‪.‬‬
‫מחברים א ל ו ה ס י ק ו מ מ ד י ד ו ת של קליטה ו ש י ח ל ו ף נ ת ר ן כ י האצות ח ד י ר ו ת במידה רבה ו ב ע י ק ר‬
‫ל‪NaCI(4-‬‬
‫‪ ( G i n z b u r g .‬הראתה כ י חלק פהנפח התא של‬
‫ג ב ו ה כפו‬
‫מולקולרי‬
‫במיקרוסקופ‬
‫סוכרוז‬
‫ו א י נ ו ל י ן כ ר א י ה ל ח ד י ר ו ת ג ב ו ה ה של פפברנת ה ת א י ם ‪.‬‬
‫א ל ק ט ר ו נ י הראו כ י‬
‫פרוטופלספטית‬
‫בלבד ) ‪. ( 5‬‬
‫‪ D. parva‬ח ד י ר ל ח ו מ ר י ם ב ע ל י משקל‬
‫‪ D. s a l i n a‬חסרת ד ו פ ן תא ר י ג י ד י‬
‫ש י נ ו י י ם אוםפוטיים בפדיום גרפו‬
‫תצפיות‬
‫ו כ י התאים פ ו ק פ י ם בפפברנה‬
‫ל ש י נ ו י י נפח תא ר ב ר ס י ב ל י ס‬
‫ו‬
‫ו ש י ח ל ו ף ‪1‬פים ב י ן התאים ל מ ד י ו ם ‪.‬‬
‫החזרת נפח התאים ל נ פ ח ה ר א ש ו נ י‬
‫של מלח דרך ממברנת התאים עד השגת ש ו ו י משקל א ו ס פ ו ט י‬
‫בין‬
‫יוחסה לחדירות גבוהה‬
‫ר י כ ו ז הפלח ב פ ד י ו ם ל ר י כ ו ז‬
‫הפלח התיר ת א י ‪.‬‬
‫בניגוד‬
‫לחדירות‬
‫אשלגן‬
‫יותר‬
‫ג ב ו ה ה של מלח דרך מפברנת התאים‪ ,‬פ ר י ד ו ת י ש י ר ו ת של ה ר י כ ו ז התוך תאי של‬
‫וכלוריד ב‪-‬‬
‫פ ‪0.2 M -‬‬
‫שינוי‬
‫ו ל ב ר ר פהו‬
‫סופי‬
‫‪(6‬‬
‫נתרן‪,‬‬
‫‪ ( D u n a l i e l l a‬הראו רמות מלח נ מ ו כ ו ת בהרבה מ ה ר י כ ו ז ה ח י צ ו נ י‬
‫‪ N a C I‬כאשר התאים ה ו ר ח פ ו ‪ n‬־ ‪1 . 7 M‬‬
‫‪.NaCI‬‬
‫ולא‬
‫י ו ת ר מ ז א ת ‪ ,‬לא נ ר א ה כל‬
‫ב ר י כ ו ז הפלח בתאים עם הרחפת האצות ב ר י כ ו ז י פלח ש ו נ י ם ‪.‬‬
‫בפסגדת‬
‫כפי‬
‫ל ה נ ח ו ת א ל ו הפיחסות את מ נ ג נ ו ן‬
‫ה א י ז ו ן האוספוטי‬
‫ב‪-‬‬
‫נ ו ש א זה פגפת העבודה היתה לעקוב אחר הבסיס ל ט ב י ל ו ת ה ג ב ו ה ה ל פ ל ח ^‬
‫ה פ כ נ י ז ם האחראי‬
‫ש י ת ו א ר בעבודה‬
‫זו‬
‫) ‪ ( 7‬האצה‬
‫גבוה כדרוש ל א י ז ו ן‬
‫רגולציה‬
‫בתגובה‬
‫אוסמוטית לפיו‬
‫ל ר ג ו ל צ י ה אוספוטית ב‪-‬‬
‫י ו צ ר ת ו צ ו ב ר ת ג ל י צ ד ו ל ח ו פ ש י בתאים ל ר י כ ו ז‬
‫ר י כ ו ז הפלח ב מ ד י ו ם ‪.‬‬
‫ה א י ז ו ן האוספוטי תלוי‬
‫ל ר י כ ו ז המלח ה ח י צ ו נ י ‪.‬‬
‫‪. D . parva‬‬
‫י ו ב א ו ר א י ו ת ל ק י ו ם ט י פ ו ס חדש של‬
‫ב י צ י ר ה א ו פ י ר ו ק של ג ל י צ ר ו ל פ נ י פ י‬
‫המסלול הממבולי‬
‫‪.3‬‬
‫האצה‬
‫ליצירת גליצרול ב‪-‬‬
‫‪ D. t e r t i o l e c t a‬מ י צ ר ת ג ל י צ ר ו ל במהלך ה פ ו ט ו ס י נ ט ז ה ב ת ג ו ב ה ל ע ל י ה בלחץ‬
‫ה א ו ם מ ו ט י של ה מ ד י ו ם ) ‪. ( 8 - 1 0‬‬
‫הפוטוםינטטיים‬
‫הראו כ י‬
‫המסלול המטבולי‬
‫נסיוניוז‬
‫?‬
‫י‬
‫ב‬
‫ו‬
‫‪^ C O j‬‬
‫ע‬
‫ג ל י צ ר ו ל מ ו פ י ע כתוצר ר א ש ו נ י‬
‫ב ז מ נ י ם ש ו נ י ם והפרדת ה ת ו צ ר י ם‬
‫ו ע ק ר י לאחר ס ו כ ר י הפזספט ) ‪. ( 1 1‬‬
‫עדיין‬
‫ה ע ו ב ד ה ש ס ו כ ד י הפוםפט‬
‫נעלם‪.‬‬
‫מסתמנים ר א ש ו נ ה מתאים להנחה כ י שלב ה ק י ב ו ע ה ר א ש ו ן של ד ו ‪ -‬ת ח מ ו צ ת הפחמן ע ו ק ב את מ ע ג ל‬
‫מ ס ל ו ל אפשרי ל י צ י ר ת ג ל י צ ר ו ל ) ‪ ( 9‬מתואר החל מהפיכת ג ל י צ ד א ל ד ה י ד ‪ - 3 -‬פ ו ם פ ט י‬
‫קלוי ן ‪. .‬‬
‫פוספט ע ״ י ה א נ ז י ם ה י ד ו ע בצמחים ו א צ ו ת כ ט ד י א ו ז פ ו ם פ ט א י ז ו מ ר ז ‪.‬‬
‫לדיהידרוכסיאצטון‬
‫גליצרול‪-3-‬פוטפט‬
‫פוספט‬
‫ד ה י ד ר ו ג נ ז התלוי‬
‫ו פ ו ם פ ט ז המפרק את ה א ח ר ו ן‬
‫לגליצרול‪.‬‬
‫א נ י מ ל י ם אך א י נ ו מ ו פ י ע ב צ מ ח י ם ‪.‬‬
‫ב^וםוםינסזה‪.‬‬
‫ל־‬
‫פעילותו תלויה‬
‫^ ‪ N A D H‬כ ר ד ו ק ט נ ט אשד א י נ ו‬
‫גליצרול־‪-3‬פוספמ דהידרוגנז תלוי‬
‫‪ NADPH- NAD, NADo‬טרנסהידרוגנז‪,‬‬
‫ג ל י צ ד ו ל ל ד י ה י ד ד ו כ ם י א צ ט ו ן ע ״ י ח י ד ק י ם מ ס ו י מ י ם בעיקר ם ה ג נ ו ם‬
‫ז מ ן רב ו מ ה ו ו ה הבסיס ל י צ ו ר תעשיתי של‬
‫ב ו ד ד ב א ו פ ן ח ל ק ימ‪^-NAD‬התלוי‪aerogens(14-18-‬‬
‫נמצא בלתי מ ס ו ג ל ל ה ח ל י ף את‬
‫‪•NAD‬‬
‫דיהידדופםיאצטון‬
‫‪ 2,3‬ב ו ט נ ד י א ו ל ‪.‬‬
‫‪,‬‬
‫ו ח ו מ ר יכלציה‪L i ,Zn‬‬
‫‪+‬‬
‫מסלול‬
‫של‬
‫דיהידרוכםיאצטון‬
‫לגליצרול‪-3-‬פוספט‬
‫‪K‬‬
‫ו‪-‬‬
‫‪ Rb‬ו מ ו ע כ ב ת ע ״ י‬
‫גליצרול לדיהידרוכםיאצטון‬
‫ב ‪ , N A D -‬וקבלת ד ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן פוספט ב פ ע י ל ו ת עוקבת‬
‫קינז ספציפי‪.‬‬
‫ע״י‬
‫•ו‬
‫‪ A e r o b a c t e r aerogens‬נעשה כ נ ר א ה בשתי‬
‫ד ר כ י ם ש ו נ ו ת ) ‪ « ( 1 6‬האחת ב ת נ א י ם א נ א י ר ו ב י ם ‪ ,‬כ ו ל ל ת ח י מ צ ו ן‬
‫ע״י‬
‫‪ 1,2‬פ ר ו פ נ ד י א ו ל‬
‫‪.‬‬
‫פירוק הגליצרול לפידובט ב‪-‬‬
‫ג ל י צ ר ו ל ד ה י ד ר ו ג נ ז התלוי‬
‫ו מ ‪E.coli)19.(NADP-‬‬
‫‪+‬‬
‫^‪/NH‬‬
‫‪Aerobacter‬‬
‫גליצרול דהידרוגנז‬
‫ה פ ע י ל ו ת היתה מ ק ס י מ ל י ת עם ג ל י צ ד ו ל ‪,‬‬
‫ה פ ע י ל ו ת ה א נ ז י מ ט י ת מ ז ו ר ז ת עיי י‬
‫‪+‬‬
‫)‪.(13‬‬
‫‪( A e r o b a c t e r‬‬
‫‪+‬‬
‫אז‬
‫נוצר ישירות‬
‫מ ת ו כ ן רק פ ע י ל ו ת פוסמטז ג ב ו ה ה י ד ו ע ה בתאי ‪. ( D u n a l i e l l a (12‬‬
‫חיפצון‬
‫ידוע‬
‫גליצרול‪-3-‬פוספט דהידרוגנז‬
‫י ד ו ע בתאים‬
‫קבלת ג ל י צ ר ו ל ל פ י סכמה ז ו דורשת ל כ ן מ צ י א ו ת ‪ 3‬ר א ק צ י ו ת א נ ז י מ ט י ו ת מ י ו ח ד ו ת‬
‫‪: Dunaliella‬‬
‫ופוםפםז‪,‬‬
‫ב ‪ N A D -‬מ ח ז ר את ה ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן פוספט ל ג ל י צ ר ו ל ‪- 3 -‬‬
‫גליצרוקינז‬
‫ו ה ש נ י ה ב ת נ א י ם א י ד ו ב י ם בהם ה ג ל י צ ד ו ל ה ו פ ך‬
‫וממנו‬
‫ל ט ר י א ו ז פוספט בשלב ח י מ צ ו ן ‪.‬‬
‫־ ‪5‬‬
‫רקפות‬
‫י ו נ ק י ם מכילות גליןידול ד ה י ד ד ו ג נ ז התלוי‬
‫ג ל י צ ר א ל י ד ה י ד ע ד י ף בהרבה על‬
‫)‪.(20‬‬
‫בעבודה‬
‫עד כה‪:‬‬
‫‪-‬‬
‫יתואר ב י ד ו ד‬
‫זו‬
‫ניקוי‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן רדוקטז התלוי‬
‫‪.4‬‬
‫דהידרוכסיאצטון‪.‬‬
‫ו א י פ י ו ן של א נ ז י ם חדש מ ‪-‬‬
‫^־‪.(NADP(21‬‬
‫ו צ ב י ר ה של כ מ ו י ו ת ג ד ו ל ו ת של ג ל י צ ר ו ל ב א צ ו ת ‪.‬‬
‫התאים‪.‬‬
‫‪3‬‬
‫ה ד ר ו ש ו ת כ פ י שנראה ל א י ז ו ן ה א ו ס פ ו ט י של‬
‫ציפזית‪.‬‬
‫ממסירת‬
‫ה נ ב ל ע י ם במערכת ה א ו ר ה ר א ש ו נ ה ג ו ר מ י ם ל ח י מ צ ו ן ‪P 700‬‬
‫מאופיינת‬
‫)‪.(22‬‬
‫"‬
‫הפזה ה ר א ש ו נ ה מ ה י ר ה פ י צ ג ת כ נ ר א ה חזרת א ל ק ט ר ו ן פ ‪ -‬״ א " ‪,‬‬
‫אלקטרונים ל‪P 700-‬‬
‫מהצד ה מ ח ו מ צ ן של אתר פעולת ה א ו ר‬
‫וההוכחות‬
‫)‪,(24‬‬
‫ל ק י ו מ ו הן ע ק י פ ו ת ‪.‬‬
‫ו ל ח ז ר צבעי‬
‫לאחרונה‬
‫הראשוני‬
‫פ ו ד ם פ ו מספד ע ב ו ד ו ת המתארות‬
‫"‪."x(26‬‬
‫חסדי‬
‫מראה‬
‫נ ו כ ח ו ת כמות ג ד ו ל ה של ח ל ב ו ן ב ר ז ל לא ה פ י נ י ‪.‬‬
‫‪V‬‬
‫ב‬
‫ר‬
‫‪V‬‬
‫‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫סה״כ ק ו ו נ ט ו ם ה נ ב ל ע‬
‫‪f‬‬
‫גם בחוסר פ ר ד ו ק ם י ן‬
‫ח י ז ו ר נמוך של ל פ ח ו ת ץ ‪ 0 5‬־ ) ‪, 83 , 8 4‬‬
‫‪.(25‬‬
‫ו ב י ד ו ד של האקצפטור‬
‫‪ EPR‬ת ל ו י ם ב א ו ר ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם‬
‫א נ ל י ז ה כ י מ י ת של כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם א ל ו‬
‫הערכת פ ו ט נ צ י א ל ה ח י פ צ ו ן ח י ז ו ר של‬
‫ל לא ה מ י נ י קשור ה מ כ ו נ ה " פ ו ט ו ר ד ו ק ס י ן " ז ו ה ה ל פ י‬
‫‪ EPR‬ה ת ל ו י ב א ו ר ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם בטמפרטורה נ מ ו כ ה‬
‫‪0.52‬‬
‫של ‪p 700‬‬
‫ה א ו פ י נ י ס ל ח ל ב ו נ י ב ר ז ל לא ה מ י נ י ‪.‬‬
‫‪.-0.33‬‬
‫סשקטרה של‬
‫ציםוכרום‬
‫‪ ( M a l k i n a n d Bearden‬פהארים ס י ג נ ל י ם‬
‫ז‬
‫)‪.(23‬‬
‫ז י ה ו י ללא א פ י ו ן‬
‫מרדוקםין‬
‫זה ה י א לפחות‬
‫)‪.(27‬‬
‫לקופפוננטה‬
‫זו‬
‫א נ ל י ז ה םפקטרלית ק י נ ט י ת ‪ ,‬מקבילה ל א ו פ י ח ב י פ ז י של החזרה בחושך‬
‫ט ח ו פ צ ן ‪ ,‬מתארת נ ו כ ח ו ת ט י פ ו ס ספקטרלי חדש המתחזר ומתחמצן ה פ ו ך ל ‪P 7 0 0 -‬‬
‫ו ה מ כ ו נ ה ‪P (28 430‬‬
‫הבליעה ב ‪-‬‬
‫פוטנציאל חיפצון‬
‫והשניה איטית נובעת‬
‫" ‪ x‬״ טרם ב ו ד ד מ כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם‬
‫כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם י כ ו ל י ם לחמצן‬
‫ו י ו ל ו ג ן בעלי‬
‫והעברת א ל ק ט ר ו ן‬
‫‪ x"P 700‬ח ו ז ר ל מ צ ב ו ה ר א ש ו נ י ב ה ת נ ה ג ו ת ספקטרלית‬
‫במערכת ה א ו ר ה ר א ש ו נ ה י ו צ ר הבדל פ ו ט נ צ י א ל של לערך ‪. 1 V‬‬
‫‪430‬‬
‫‪.Dunaliella‬‬
‫הצד ה מ ח ו ז ר של מערכת ה א ו ר ה ר א ש ו נ ה‬
‫לקופטוננטה״בלתי‬
‫פ ו ט נ צ י א ל של‬
‫‪ D. parva‬בלתי‬
‫ידוע‬
‫ל א נ ז י ם ת כ ו נ ו ת ה נ ו ט ו ת לאפשר פ י נ ט ז ה‬
‫מ ס ל ו ל מ ט ב ו ל י אפשרי י ת ו א ר ל י צ י ר ה ו פ י ר ו ק ג ל י צ ר ו ל ב ‪-‬‬
‫קוונטים‬
‫חלבון‬
‫־ ־ ‪ N A D P‬ה מ ז ר ז הפיכת ג ל י צ ר א ל ד ה י ד‬
‫‪nm‬‬
‫(‬
‫‪.‬‬
‫ה א ו פ י ה כ י מ י של ‪ P 430‬טרם ב ד ו ר אך‬
‫פתארים ח י ז ו ר ב ר ז ל לא ה פ י נ י‬
‫קשור‪.‬‬
‫נ י ת ן ל ה נ י ח כי‬
‫שינויי‬
‫עם כל זאתחםרות ע ד י י ן ה ו כ ח ו ת‬
‫פלאות כ י האקצפטוד ה ר א ש ו נ י למערכת ה א ו ר הראשונה הוא ח ל ב ו ן‬
‫ב ר ז ל לא ה מ י נ י ‪.‬‬
‫קבוצת‬
‫פקטורים!‬
‫כולן‬
‫ה ק ו פ פ ו נ נ ט ו ת הבאה בשרשרת מעבד ה א ל ק ט ר ו נ י ם ה פ ו ט ו ם נ ט ט י כ ו ל ל ת פספר דב של‬
‫בודדו מכלורופלםטים זוהו‬
‫ואופינו‪.‬‬
‫‪^ F R S , CRS, ORS‬‬
‫תרכובות אלו‬
‫‪eth‬־‪SI‬״‬
‫נ ר א ו ת ק ש ו ר ו ת חזק למםברנת ה כ ל ו ר ו פ ל ס ט ו נ ב ד ל ו ת ל כ ן ב ע י ק ר בשיטות הפרדתן‬
‫וניקויין‬
‫מממברנות‬
‫הכלורופלסטים‪.‬‬
‫‪(29‬‬
‫‪ , ( F R S‬מתקבל מ כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם לאחד ם ו נ י ק צ י ה ‪.‬‬
‫ה כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם פ ע י ל ו ת נ מ ו כ ה של ח י ז ו ר‬
‫מראים‬
‫פרדוקסין‬
‫ויולוגן‬
‫‪ FRS‬מעלה את ש י ע ו ר‬
‫ב א ו ר ב נ ו כ ת ו ת כ מ ו י ו ת א ו פ ט י מ ל י ו ת של‬
‫‪, NADP^nn‬‬
‫‪ , ( C R S‬מתקבל ם כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם ע ״ י מ צ ו י‬
‫הוספת‬
‫באצטון‪.‬‬
‫לשברים ל מ ל ר י ם מ ‪ A n a b e n a -‬מ ח ז י ר ה פ ע י ל ו ת ר א ק צ י ו ת ח י מ צ ו ן‬
‫התלויות‬
‫‪ CRS‬נ ק י‬
‫לכלורופלסטים‬
‫ח י ז ו ר ב א ו ר של צ י ט ו כ ר ו ם‬
‫‪C‬‬
‫במערכת ה א ו ר הראשונה ו פ ע י ל ו ת קליטת ח מ צ ן ‪.‬‬
‫‪eth‬־!‪(31‬‬
‫פקטור‬
‫ומחזירה פעילות ח י ז ו ד ‪ ,‬מ ת י ל‬
‫ופרדוקםין‪.‬‬
‫‪(30‬‬
‫או‬
‫ודדוקמז‪.‬‬
‫הוספת‬
‫‪NADP‬‬
‫לאחר הפרדתו משברי‬
‫הכלורופלסטים‬
‫‪S‬‬
‫( ב ו ד ד במסגרת מחקר א י מ ו נ ו ל ו ג י‬
‫םכלורופלסטים ע״י מ י צ ו י‬
‫זה נ י ט ר ל פעולת א נ ט י ב ו ד י ם המעכבים ח י ז ו ר צ י ט ו כ ר ו ם‬
‫‪C‬‬
‫באור ה ת ל ו י‬
‫ב ד י א ת י ל אתר‪.‬‬
‫בפרודוקםין‬
‫ו ק ל י פ ת חמצן ה ת ל ו י ה ב א נ ת ר ק י נ ו ן ‪.‬‬
‫לחלק פ ה פ ק ט ו ר י ם האלו ת כ ו נ ו ת משותפות‪8‬‬
‫ה‬
‫קבוצה‬
‫יכולת‬
‫‪5000‬‬
‫דלתון‪,‬‬
‫חפצן‬
‫באור החלויה‬
‫פ‬
‫זרוז‬
‫ר‬
‫ו‬
‫ט‬
‫ם‬
‫פוטופוםפורילציה‬
‫ט‬
‫ב ל י ע ה בתחום ה ‪-‬‬
‫י‬
‫ת‬
‫‪m‬‬
‫פסאודוציקלית‪,‬‬
‫‪n‬‬
‫‪ U.V.‬באורכי גל‬
‫‪ ,‬משקל מ ו ל ק ו ל ר י של לערך‬
‫ו נ י ט ר ו ל פעולת א נ ט י ב ו ד י לקליטת‬
‫בחיזור אנתדקינון‪.‬‬
‫ה ק ו מ פ ו נ נ ט ה הבאה במערכת מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם ה פ ו ט ו ם י נ ט ט י ה י א ה פ ר ד ו ק ס י ן ‪.‬‬
‫חלבון‬
‫ב ר ז ל לא ה מ י נ י ז ה ב ו ד ד א ו פ י ן‬
‫ו ז ו ה ה ב ע ב ו ד ו ת רבות‬
‫)‪.(108‬‬
‫הפרדוקםין‬
‫רחב של צמתים ו א צ ו ת בכמות של מ ו ל ק ו ל ה אחה ל ‪ 4 0 0 -‬מ ו ל ק ו ל ו ח כ ל ו ר ו פ י ל ) ‪. ( 3 2‬‬
‫לראקציות‬
‫התלויות בפרדוקםין‬
‫הובחנו‪:‬‬
‫א נ ט י ב ו ד י ספציפי לפרדוקסין‬
‫)‪;(33‬‬
‫מעכב כל ה ר א ק צ י ו ת ה ת ל ו י ו ח ב פ ר ד ו ק ס י ן ללא ע י כ ו ב ח י ז ו ר נ י ט ר י ט ) ‪( 3 4‬‬
‫בין‬
‫כמעכבים‬
‫‪ , DSPD‬שנמצא‬
‫ו ל כ ן ה ו צ ע אתר פ ע ו ל ת ו‬
‫מערכת האור הראשונה ו פ ד ד ו ק ס י ן ן ו ן ם ל ח ג ב ו ה המעכב ! את הקוםפלכם פ ד ד ו ק ס י ן‬
‫‪NADP‬‬
‫רדוקטז‬
‫)‪.(98 ,99‬‬
‫נ פ ו ץ בחחום‬
‫‪ -‬פלבופרוטאין‬
‫‪-‬‬
‫האנזים‬
‫לאנזים‬
‫פלבדפרוטאין‬
‫‪- 7‬‬
‫ ‪ ^ n v - N A D P‬מעביר אלקטרונים מפרדוקסין‬‫ציטוכרום‬
‫גם פ ע י ל ו י ו ת של ‪N A D P H‬‬
‫‪f‬‬
‫ר ד ו ^ ‪ N A D ,‬־ ‪ N A D P H‬טרנםהידרוגנז‬
‫ו ‪ N A D P H -‬צבע נ מ ו ך פ ו ט נ צ י א ל ר ד ו ק ט ז ) ‪ ( 3 5‬־‬
‫בפרודוקסין‬
‫ל א נ ז י ם עם‬
‫פ י ר ו פ ו ם פ ט נמצא מעכב כל ה ר א ק צ י ו ת ה ת ל ו י ו ת‬
‫מלבד ח י ז ו ר פ ר ד ו ק ם י ן עצמו ל כ ן ה ו צ ע אתר פ ע ו ל ת ו‬
‫מחוזר לפלבופרוטאין ‪NADP‬‬
‫‪1K‬‬
‫‪NADP‬‬
‫של לערך ‪ 1‬מ י ק ד ו מ ו ל ר‬
‫‪,NADP-V‬‬
‫רדוקטז ) ‪. ( 3 6 , 3 7‬‬
‫כעיכוב האינטראקציה ב י ן‬
‫‪ P-ADPR‬נמצא מעכב ס פ צ י פ י‬
‫)(‪«66‬‬
‫נחשב כאקצפטור הטבעי ה ס ו פ י במערכת מעבר האלקטרו נ י ם ה פ ו ט ו ס י נ ט ט י ה ד ר ו ש‬
‫במעגל ק ל ו י ן ־‬
‫הוכחות רבות ק י י מ ו ה ל ח י ז ו ר‬
‫מעקב אחר ח י ז ו ר‬
‫באור בכלורופלסטים‬
‫‪ N A D P‬ב א ו ר באצות שלמות קשה הרבה י ו ת ר ‪,‬‬
‫התלוי‬
‫בנוכחות פרדוקסין‪.‬‬
‫מחוסר‬
‫ח י ז ו ר ר צ י ף מצד אחד ו מ א י ה י כ ו ל ח של ‪ N A D P‬ל ח ד ו ר ל א צ ו ת שלמות מצד ש נ י‬
‫בליעה‪ .‬ס פ ק ט ר ו ס ק ו פ י ו ת עם הארת תאי אצות שלמים הראו ע ל י ה בבליעה בתחום ה ‪-‬‬
‫אשר נחשב כ ת י ז ו ר‬
‫כלפידומונס‬
‫‪ N A D‬או ‪. ( N A D P (38‬‬
‫לזיהוי‬
‫‪NAD(P‬‬
‫ל־־) ‪N A D ( P‬‬
‫מאחר‬
‫לפי‬
‫ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה המתקבלת עם א ק ס י ט צ י ה באור מ ז ח ‪. 3 6 0‬‬
‫זו‬
‫לחיזור‬
‫והשיטה כמדד כ ל ל י‬
‫עם הארת‬
‫ה ם י ג נ ל המתקבל י ו ח ס‬
‫ל ח י ז ו ר ) ‪ N A D ( P‬באצות ש ל מ ו ת ‪.‬‬
‫ו כ פ י ש י ת ו א ר שברי‬
‫ב פ ר ו ד ו ק ם י ן ) ‪ , ( 4 2‬נבדקה במסגרת‬
‫המחזר‬
‫מ נ ם י ו נ ו ת במוטנט‬
‫ס פ ק ט ר ו ס ק ו פ י ה פ ל ו ר ו ס צ נ ט י ת מ ה ו ו ה א מ צ ע י ר ג י ש ו ס פ צ י פ י הרבה י ו ת ר‬
‫אצות שלמות נראתה ע ל י ה ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה ר ב ר ס י ב ל י ת בחושך ) ‪. ( 4 1‬‬
‫והאם‬
‫‪U.V.‬‬
‫בעל ת כ ו ל ת כ ל ו ר ו פ י ל נ מ ו כ ה ו ב ח י ד ק פ ו ט ו ם י נ ט ט י בו לא נתקבלה הוכחה‬
‫‪. ( N A D ( P(40,3 9‬‬
‫‪)H‬‬
‫מ ס ק נ ו ת מ נ ו ג ד ו ת התקבלו‬
‫י‬
‫מדידות‬
‫‪ D. parva‬חסרו ה י כ ו ל ת לבצע כל ר א ק צ י ו ת א ו ר ה ת ל ו י ו ת‬
‫ז ו השאלה האם‬
‫‪ N A D P‬ה ו א פקטור א ו ב ל י ג ט ו ר י‬
‫בפוטוסינטזה‪,‬‬
‫נ י ת ן ל ה נ י ח השתתפות ק ו מ פ ו נ נ ט ה אחרת בצד ה מ ח ו ז ר של מערכת האור הראשונה כפקטור‬
‫‪0C‬‬
‫‪0‬‬
‫במעגל קלו י ן‬
‫‪.()43‬‬
‫‪8 -‬‬
‫ש‬
‫‪.1‬‬
‫י‬
‫ת‬
‫ו‬
‫אורגניזם‬
‫העבודה‬
‫)הפחלקה‬
‫‪.2‬‬
‫נעשתה‬
‫לבוטניקה‬
‫גידול‬
‫תנאי‬
‫האצות‬
‫‪, 2 0H2 MMgS0‬‬
‫‪4‬‬
‫ט‬
‫‪-‬‬
‫‪m‬‬
‫ופצע‬
‫בירושלים(‬
‫לאחר‬
‫במצע‬
‫גידול‬
‫‪0‬‬
‫אוטוטרופי‬
‫מים‪-‬המלח‪.‬‬
‫בידוד‬
‫ב ה ר כ ב הבא ‪, M N a C I 1 . 5 8‬‬
‫מלאכותי‬
‫‪4m M N‬׳ ‪, 1 0 m MCaC,NmMMgCI‬‬
‫‪2‬‬
‫‪,0.1 M K HP0‬‬
‫‪4‬‬
‫‪D una I Sella p a r v a‬‬
‫גידול‬
‫‪2‬‬
‫‪, 1 m M KNOg,185‬‬
‫באצה‬
‫האוניברסיןזה‬
‫גודלו‬
‫‪0‬‬
‫הירוקה‬
‫אשר‬
‫התקבלה‬
‫‪2‬‬
‫‪1 5|1M F e C I . 6 H 0‬‬
‫‪m‬‬
‫‪3‬‬
‫‪2‬‬
‫‪3‬‬
‫‪r‬‬
‫‪3‬‬
‫‪p‬‬
‫מצעים‬
‫מוצקים‬
‫אגר ו ־‬
‫בצלחות‬
‫התרבויות‬
‫בעלות‬
‫עוצמת א ו ר של‬
‫סיבובית‬
‫‪.3‬‬
‫תנאי‬
‫גידול‬
‫תאי‬
‫‪undum3‬‬
‫התאים למשך‬
‫התאים‬
‫מנורות‬
‫והכנת‬
‫לערך ‪15‬‬
‫שניות‬
‫הורתקו ע ״ י‬
‫הןרוטופלסםים ב‪25-‬‬
‫כלודופלסטים‬
‫‪2‬‬
‫מחסה‬
‫ת ו ם פ ת ‪2%‬‬
‫אינה‬
‫מטיפוס*‬
‫דו‪-‬תחמוצת‬
‫הכרתית‬
‫)‬
‫‪(SylvanSa‬‬
‫תודות‬
‫הפחמן‬
‫לריכוז‬
‫טולטלו על‬
‫מעורבב‬
‫המלח‬
‫גבי‬
‫באויר‪.‬‬
‫הגבוה‪.‬‬
‫שעות‪.‬‬
‫אחרות‬
‫אצות‬
‫ב מ ד י ו ם ל פ י ‪. ( H u t n e r (44‬‬
‫הוכנו כפי‬
‫^‬
‫‪4‬‬
‫טדיסין‬
‫בודדו כפי‬
‫שתואר‬
‫‪Amp‬‬
‫צנטרפוגציה‪.‬‬
‫מילימולר‬
‫האצה‬
‫‪. f o o t‬‬
‫א ו י ר א ו ‪5%‬‬
‫קיצונית‬
‫גודלו‬
‫ופרוטופלסטים‬
‫‪0‬‬
‫הזרמת‬
‫םטרליות‬
‫‪Euglena graciHos‬‬
‫גודלו‬
‫השבורים‬
‫בתוספת‬
‫תמציות של‬
‫שמירת‬
‫פלורוסצנטיות‬
‫‪candles‬‬
‫‪.25°‬‬
‫הדור ה ו א‬
‫לצורך‬
‫‪,7.4‬‬
‫התקבלו ע ״ י‬
‫‪0‬־‬
‫הגידול־‬
‫בהארה עם‬
‫בארלנמירים‬
‫נקבעה ל ‪-‬‬
‫בתנאים אלו ז מ ן‬
‫״י‬
‫גודלו‬
‫במבחנות‬
‫למצע‬
‫זכוכית‬
‫‪200‬‬
‫הטמפרטורה‬
‫סוניקצית‬
‫פטרי א ו‬
‫לערך‬
‫מטלטלת‬
‫‪20mMTr«$CS‬‬
‫‪2‬‬
‫‪m M N a acetate 5‬‬
‫‪,‬‬
‫‪2‬‬
‫‪O H .2CI M‬־‪pH‬‬
‫‪2‬‬
‫‪03‬‬
‫‪pMH B0‬‬
‫‪0‬‬
‫‪C002‬‬
‫פפרופ׳ ב‪.‬צ‪.‬‬
‫גינזבורג‬
‫‪7.5‬‬
‫ב‪-‬‬
‫תמצית מ ‪-‬‬
‫‪pH‬‬
‫שתואר‬
‫קודם ) ‪. ( 4 5‬‬
‫קודם‬
‫תמצית מ ‪-‬‬
‫)‪.(46‬‬
‫‪E. g r a c i l t i s‬‬
‫‪Branson s o n i f i e r‬‬
‫‪P.[uridum.‬‬
‫והשקעת‬
‫ת א י ‪Phormidium‬‬
‫השברים‪.‬‬
‫התקבלה ע ״ י‬
‫ב‬
‫ליזים‬
‫־‪C4°‬‬
‫־ ‪ 9‬־‬
‫‪.4‬‬
‫צנטרפוגציה‬
‫הכנת שברי‬
‫‪g-a1500‬‬
‫ב‪5-‬־‪ 1‬מולד‬
‫למשך‬
‫‪,‬‬
‫‪20‬‬
‫טריסין‬
‫ו ת מ צ י ת חופשיה מתאים בשבירה א ו ם מ ו מ י ת‬
‫‪5‬‬
‫‪,‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫דקות בטמפרטורת‬
‫מ י ל י פ ו ל ר ט ר י ס י ן ‪ 4‬־ ‪pH 7‬־‬
‫נמהלה בתערובת הראקציה ה ר צ ו י ה ״‬
‫ב‪-‬‬
‫‪.40‬‬
‫‪.5‬‬
‫הכנת " כ ל ו ר ו פ ל ם מ י ם " מ ‪D . parva -‬‬
‫" כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם " של‬
‫‪MgCI‬‬
‫‪-50‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪2‬‬
‫‪7.6‬‬
‫‪.6‬‬
‫ד ו ג מ א מהאצות ה מ ר ו כ ז ו ת במלח־ ‪.‬‬
‫ה ר י כ ו ז ה ס ו פ י של‬
‫ל צ ו ר ך קבלת תמצית ח ו פ ש י ה מתאים ה ו ר ח ק ו השברים ע ״ י‬
‫ה ח ד ר נ ש ט פ ו פעם‬
‫‪NaCI‬‬
‫שהתקבל ה י ה ‪ 25‬מ י ל י מ ו ל ר ‪.‬‬
‫צ נ מ ר פ ו ג צ י ה ב ‪ riOOOOg -‬למשך ‪ 10‬דקות‬
‫‪ D. parva‬התקבלו ע ״ י הרתפת התאים ב מ ד י ו ם ל פ י‬
‫‪2‬‬
‫‪5‬‬
‫!‬
‫‪2‬‬
‫‪MnC‬‬
‫‪,‬‬
‫‪(Walker(47‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫‪. H E P E S ,‬‬
‫קביעת כ ל ו ר ו פ י ל‬
‫לצורך‬
‫כללי‪,‬‬
‫‪.7‬‬
‫כלורוטיל‬
‫קביעת כ ל ו ר ו פ י ל מ ו צ ו התאים או‬
‫‪a‬‬
‫וכלורופיל‬
‫ה כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם ב‪ 80$•-‬א צ ט ו ן )‬
‫‪ b‬נ ק ב ע ו בתמיסה ה א צ ט ו נ י ת ל פ י‬
‫כלודופיל‬
‫‪.(v/v‬‬
‫‪.(Anion(48‬‬
‫מקורות אור‬
‫בחלק מ ה נ ס י ו נ ו ת מ ק ו ד ה א ו ר ה י ה מ ק ר ן ש י ק ו פ י ו ת ו ב ו מ נ ו ר ת ט ו נ ג ס ט ן בת ‪500‬‬
‫האור‬
‫ס ו נ ן דרך מ ס נ נ י א ו ר מ ט י פ ו ס‬
‫‪Inc.‬‬
‫‪ , ( B a i r d - A t o m i c ,‬מ ס נ נ י ם מטיפוס‬
‫)מתוצרת‬
‫ל‪ 140000-‬ל ו ק ס ‪.‬‬
‫‪.Schott‬‬
‫‪ ) Interference filter‬ס ו ג ‪ 3‬־ ‪B‬‬
‫‪^.5.‬מתוצרת‬
‫ווט‪.‬‬
‫‪.‬מתוצרת‬
‫‪ , ( C o r n i n g‬או מ ס נ נ י א ו ר מטיפים‪R.G.‬‬
‫ובןזלק אחר ה י ה מ ק ו ר ה א ו ר מ נ ו ר ו ת ל ב נ ו ת בעלות ע ו צ מ ה של עד‬
‫־ ‪• 1 0‬‬
‫מדידת ש י נ ו י י ח י מ צ ו ז‬
‫‪8‬־‬
‫המדידות‬
‫נעשו‬
‫‪ -‬ח^יזור ב צ י מ ו כ ר ו מ י ם‬
‫ב ס פ ק ט ר ו פ ו ט ו מ ט ר מטייפוס‬
‫הווו! ‪ 540‬המשמש כ א ו ר ך ג ל ק ב ו ע ־‬
‫‪C o ! n ! 1 C . S .‬‬
‫תוצרת‬
‫מתוצרת‬
‫‪ Baord A t o m i c‬שמעביר א ו ר‬
‫‪9‬־‬
‫‪640‬‬
‫‪g‬‬
‫‪n‬‬
‫‪nm‬‬
‫־‬
‫‪ ( p h o t o m t j l t i p l i e r‬נעשתה ע ״ י‬
‫הארה נעשתה דרך מ ס נ ן א ו ר )‬
‫בעוצמה של לערך‬
‫‪10‬‬
‫‪4‬‬
‫‪4‬‬
‫‪x‬‬
‫מסנן‬
‫‪(Interference filter‬‬
‫אדגים לם״מ‬
‫‪2‬‬
‫לשניה־‬
‫חיזור פריציאניד‬
‫בספקטרופוטומסר‬
‫המחובר לרשם־‬
‫‪A m l n c o - C h a n c e dual wavelength‬‬
‫הגנת מכפיל האוד )‬
‫עם‬
‫‪420‬‬
‫כ א ו ר א ק ט י נ י שימש‬
‫מתוצרת‬
‫‪640‬‬
‫‪ , B a l r d A t o m i c‬בעוצמה של לערך‬
‫מסנן אור‬
‫הגן‬
‫‪10‬־‬
‫‪4 - 9 6‬‬
‫ח י ז ו ר ציטוברום‬
‫‪• C.S.‬‬
‫־‬
‫‪nm‬‬
‫שהתקבל ע ״ י מ ס נ ן א ו ר מ ט י פ ו ס‬
‫‪4‬‬
‫‪10‬‬
‫מתוצרת‬
‫‪4‬‬
‫‪x‬‬
‫או‬
‫האקטיני‬
‫‪DC‬־‬
‫אדגים לם״מ‬
‫על מ כ פ י ל ה א ו ר‬
‫לשניה־‬
‫‪C‬‬‫ב‪-‬וזוח‪ 550‬ה א ו פ י נ י‬
‫‪ 5 5 0 n m ^ A m i n c o - C h a n c e‬פחות ‪ 5 4 0 n m‬־‬
‫ד ו מ ה ל ז ו של‬
‫‪2‬‬
‫‪Interference f i l t e r‬‬
‫‪.Corning‬‬
‫ה מ ד י ד ה נעשתה ב פ פ ק ט ר ו פ ו ט ו מ ט ר ‪C a r y - 14‬‬
‫בספקטדופוטופטר‬
‫‪Cary7 S c a t t e r a t t a c h m e n P‬‬
‫לצורה המחוזרת‪,‬‬
‫מערכת מ ס נ נ י ה א ו ר ו ה א ו ר‬
‫פריציאניד־‬
‫‪P111‬‬
‫חיזור‬
‫נעשה ב ת נ א י ם ד ו מ י ם ל א ל ו של ח י ז ו ר פ ר י צ י א נ י ד ב ש י נ ו י ה א ו ר ך ג ל ה מ ו ד ד ל ‪ -‬ו ז ו ח ‪5 7 5‬‬
‫פתות‬
‫‪ 5 4 0 n m‬נ ק ר א ה ה י ר י ד ה ב ב ל י ע ה כתוצאה מ ח י ז ו ר‬
‫»‬
‫‪12‬־‬
‫‪.1PDC‬‬
‫ת י ז ו ר פרדוקסיז‬
‫חיזור‬
‫פ ר ד ו ק ס י ן נ ק ר א ע ״ י ה י ר י ד ה ב ב ל י ע ה ב א ו ר ך ג ל של ‪497 (49‬‬
‫‪540‬‬
‫ו ב ת נ א י הארה ו מ ס נ נ י א ו ר בדומה‬
‫לחיזור‬
‫‪m‬‬
‫‪n‬‬
‫פריציאניד־‪nm‬‬
‫( פחות‬
‫־‬
‫ח»זור ‪N A D‬‬
‫‪13‬־‬
‫החיזור‬
‫‪ N A D P - 1‬או חי מ צ ו ‪N A D Hr‬‬
‫א‬
‫‪ C a i r y - 1 6 - o 340nm‬־‬
‫ולהגנת‬
‫מכפיל האור מ ס נ ן‬
‫תמיסה ר ו ו י ה‬
‫ש‬
‫ל‬
‫בפלואורימטר‬
‫או‬
‫‪7 - 6 0‬‬
‫‪CuS04‬־‬
‫‪Corning‬‬
‫הפלורוסנציה‬
‫קליטה‬
‫האחת ע ״ י ה ע ל י ה או‬
‫‪NAD‬‬
‫ב א ו ר ך ג ל של‬
‫‪C.S.‬‬
‫מתוצרת‬
‫‪ Coming‬ומסנן‬
‫מ ח ו ב ר לרשם ו מ ס ו ד ר להארת התא־‬
‫למיליליטר־‬
‫תוך‬
‫‪15‬־‬
‫חיזור‬
‫יצירת‬
‫‪1 4 - o 350 nm‬‬
‫א ו ד ב ע ו ב י ‪ 1‬ס״מ ה מ כ י ל‬
‫ו ‪NADPH -‬‬
‫‪C.S. 4 - 9 6‬‬
‫‪366‬‬
‫ו פ י ל ט ר צ י נ מ ו א י ד מ ם ' ‪ 62‬תוצרת‬
‫כ ו י ? י ו עם תמיסת‬
‫‪ Strand E l e c t r i c C o .‬־‬
‫‪ N A D (P JH‬בעלת ר י כ ו ז‬
‫שינויי‬
‫ידוע־‬
‫ו פ ל י ט ת חמצז‬
‫המחוברת לרשם־‬
‫דיותיוניט‬
‫‪Cary-‬‬
‫אור הפלורוםנציה לעידור‬
‫‪14,‬‬
‫קצב קליטה ו פ ל י ט ת חמצן נ מ ד ד עם אלקטרודח חמצן מ ט י פ ו ס‬
‫‪Springs‬‬
‫ה י ר י ד ה בבליעה‬
‫ו ה ש נ י ה ע ״ י עקוב אתר ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה ^ ‪N A D I h‬‬
‫‪EppendoHF‬‬
‫יל האוד ה ו ג ן ע ״ י פילטר‬
‫מחימצון‬
‫‪(P ) H‬‬
‫‪NADPH‬‬
‫ל צ ו ר ך הארה השתמשנו ב א ו ר א ק ט י נ י ב ד ו מ ה ל ח י ז ו ר פ ר י צ י א נ י ד‬
‫‪+‬‬
‫תוצרת‬
‫ו־‬
‫או התאמצו ן נ מ ד ד בשתי ש י ט ו ת ־‬
‫כתוצאה מ ח י ז ו ר ) ‪N A D ( P‬‬
‫י‬
‫‪11‬־‬
‫בהנחה‬
‫‪:‬‬
‫‪ C l a r k‬מתוצרת‬
‫‪Yellow‬‬
‫' כ י ו ל כמות התמצן בתערובת התמיסה נעשה ע ״ י תוספת ג ב י ש י ‪,‬‬
‫שכמות החמצן שנעלמה כתוצאה מהוםפה ז ו ש ו ו ה ל ‪ 2 4 -‬־ ‪ 0‬מ י ק ר ו מ ו ל חמצן‬
‫בשיטה ז ו‬
‫נמדדה פליטת ו ק ל י ט ת התמצן באצות שלמות ו ק ל י ט ת החמצן המתקבלת‬
‫)‪22‬‬
‫‪ ) D I q u a t‬ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם ובשברי אצות־‬
‫‪ATP‬‬
‫ראקציות‬
‫פ ו ט ו פ ו ס פ ו ר י ל צ י ה ה ו ד ג ר ו באמבט מ י ם מ כ ו ו ן‬
‫ל‪-‬‬
‫‪ 2 0 °‬בעוצמת א ו ר ל ב ן של‬
‫‪32‬‬
‫ת‬
‫‪140000‬‬
‫)‬
‫־‬
‫‪ATP‬‬
‫נמדדה כ י צ י ר ת‬
‫ה ר ד י ו א ק ט י ב י ו ת נמנתה ב מ ו נ ה שטף‬
‫‪ATP‬‬
‫מסומן ‪.‬ב‪P-‬‬
‫ל פ י שיטתו של‬
‫‪Avron‬‬
‫& א ו ט ו מ ט י מ ו ד ל ‪ 202‬תוצרת)‪, N u c l e a r C h i c a g o 46‬‬
‫‪12 -‬‬
‫‪c o‬‬
‫פיקטצית‬
‫‪.16‬‬
‫‪1‬‬
‫‪2‬‬
‫אינקורפורצ׳ית‬
‫תערובת‬
‫‪4‬‬
‫בתאים שלמים‬
‫‪0C‬‬
‫‪2‬‬
‫‪NaCI!1 5‬מ י ל י מ ו ל ד ‪,‬‬
‫‪jici‬‬
‫‪1‬‬
‫;‬
‫‪. 5 5 , 0 0 0‬‬
‫סריס ‪7.4‬‬
‫;‬
‫‪5‬‬
‫ל ו ק ס ל ת א י ם שלמים‬
‫‪pH‬‬
‫ואצות‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל ב‪3-‬‬
‫מהאצה ה כ י ל ה תערובת‬
‫^‬
‫הבילה‬
‫‪NaHCO‬‬
‫המכיל‬
‫‪3‬‬
‫המכילות ‪ 60‬מיקרוגרם‬
‫לכלורופלסטים‬
‫‪pH‬‬
‫־‬
‫‪14‬‬
‫‪1‬‬
‫ו ב ב ל ו ר ו פ ל ם ט י ם של‬
‫‪0‬‬
‫‪14‬‬
‫נ ע ש ת ה ב ‪ 2 2 -‬ב א ו ר ל ב ן של‬
‫הראקציח ‪ 1.5‬מ ו ל ד‬
‫‪C‬‬
‫‪-‬‬
‫;‬
‫‪1‬‬
‫מ״ל‪.‬‬
‫הראקציה ‪ 0.33‬מולר‬
‫‪MgC‬‬
‫ס ו ר ב י ט ו ל ; ‪50‬‬
‫; ‪5‬‬
‫מילימולר ‪ NaHCOg‬המכיל‬
‫‪14‬‬
‫‪1‬‬
‫‪C‬‬
‫‪C‬‬
‫לדוגמא‪,‬‬
‫‪JJ‬‬
‫הראקציה‬
‫המכילות ‪ 90‬מיקרוגרם‬
‫ואצות‬
‫הופסקה ע ״ י‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל בנפח‬
‫ת ו ס פ ת ‪ 0 . 5‬מ ל י של ‪ 3 0 $‬ח ‪.‬‬
‫כ ו ל ל של ‪ 3‬פ ל י ‪.‬‬
‫טריכלודואצטית‪.‬‬
‫נלקחו‬
‫דוגמאות‬
‫ויובשו‬
‫״‪14‬‬
‫על‬
‫תכולת ה ‪-‬‬
‫פלנצטות‪.‬‬
‫‪C‬‬
‫של‬
‫היציבות‬
‫התרכובות‬
‫נ ק ב ע ה ע ם מ ו נ ה שטף ג ז ת ו צ ר ת‬
‫לחומצה‬
‫‪.Nuclear Chicago‬‬
‫קביעת‬
‫‪.17‬‬
‫פעילויות‬
‫דהידרוגנז‪,‬‬
‫או‬
‫‪7.5‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫ס ו פ י של ‪2‬‬
‫גליצרול‬
‫לקביעת‬
‫במקום‬
‫תערובת‬
‫הראקציה לקביעת‬
‫‪ 5‬מילימולר‬
‫‪10‬‬
‫‪ATP‬ן‬
‫) ס י ג מ ה ( ; תמצית אצות‬
‫;‬
‫‪0‬‬
‫‪.‬‬
‫ותמצית תאי‬
‫לקביעת‬
‫גליצרול‪-3-‬פוספט‪,‬‬
‫טריסיןן‬
‫גליצרול‪-3-‬פוםפט‬
‫‪ MgCl‬ן‬
‫מיליליטר‪.‬‬
‫וגליצרול‬
‫קינז‬
‫גליצדאלדהיד‪-3-‬פוספט‬
‫נקבעו ע״י‬
‫קריאת חימצו?‪NAD(P)H‬‬
‫למעלה‪.‬‬
‫‪2‬‬
‫גליצרול‪3-‬־־פוספט‬
‫ת א י ם של‬
‫גלוק‪1‬ז‪-6-‬פוספט‬
‫בתנאים שתוארו‬
‫פילימולד‬
‫‪ 3..75‬פ י ל י מ ו ל ר‬
‫בנפח‬
‫גליצרול‪-3-‬פוספט‬
‫תערובת‬
‫לקטט‬
‫ח י ז ו ר ) )‪NAD(P‬‬
‫ן ‪2‬‬
‫אנזיממיות‬
‫ב ת מ צ י ת חסרת‬
‫וכמות‬
‫‪1‬‬
‫מולד‬
‫הידרזיןן‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫קינז‬
‫מ ר ו ו ה של‬
‫‪ 4 . 5‬מ י ל י מ ו ל ר ת־‬
‫פוספוגליצרית;‬
‫‪1‬‬
‫כמות‬
‫כלורופיל‬
‫מיקרוגרם‬
‫ג ל י צ ר ו ל פוספט‬
‫המתאימה ל ‪ 4 1 -‬מ י ק ר ו ג ד ם‬
‫‪ 0.75‬מילימולד‬
‫המתאימה ל ‪3 8 -‬‬
‫הכילה תערובת‬
‫ג ל י צ ר א ל ד ה י ד ‪• 3 -‬לפוספט‬
‫‪pH‬‬
‫ה כ י ל ה ! ‪ 0 . 2‬מ ו ל ר ט ר י ס ‪pH 9 . 8 ,‬‬
‫)חוצרח‬
‫סיגמה(‪.‬‬
‫‪NADP‬‬
‫‪J DTT‬‬
‫פוספוגליצדט‬
‫ו‪ 0.16-‬מילימולר‬
‫ב ‪ N A D -‬או‬
‫{‪04MgS‬ם י ל י מ ו ל ר‬
‫מ ר ו ו ה של‬
‫בנוסף ‪10‬‬
‫התלוי‬
‫‪NAD‬‬
‫קינז‬
‫‪ NADH‬או ‪. NADPH‬‬
‫‪t‬‬
‫־‬
‫ופירובט‬
‫ר י ב ו ל ו ז‪1,5-‬־^דיפוםפט קרבוקסילז‪,‬‬
‫פוספט ד י ‪ -‬ק י נ ז נ ק ב ע ו ל פ י‬
‫והופסקו‬
‫‪ 13‬־‬
‫עם תוספת ח ‪.‬‬
‫אינקורפורצית‬
‫‪^ 0 0‬‬
‫‪2‬‬
‫ט ר י כ ל ו ר ו א צ ט י ח ל ר י כ ו ז ס ו פ י של ‪. 3 $‬‬
‫למשך ‪ 30‬דקות ו ד ו ג מ א ו ת נ ל ק ח ו ל ‪ 1 0 -‬מ ל י‬
‫לחומצה‬
‫‪1‬‬
‫‪.18‬‬
‫‪pc‬‬
‫עמים‬
‫ק י נ ז הכילה‪ 75 8‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס ‪8 . 2 ,‬‬
‫‪10‬‬
‫צלולוז‬
‫)‪15‬‬
‫ו ש ו ב ע״י‬
‫‪1‬‬
‫‪x‬‬
‫‪ 12‬מ י ל י מ ו ל ר ב י ק ר ו ב נ ט‬
‫‪NaCI‬‬
‫מילימולר טריס‪,‬‬
‫מילימולר טריס‪,‬‬
‫צנטרפוגציה‬
‫‪, pH 7.5‬‬
‫‪7.5‬‬
‫לאחר ק צ י ר ה ‪ ,‬התאים נשטפו‬
‫‪ , p H‬בטמפרטורת התדר‪.‬‬
‫והושהה למשך ‪ 20‬דקוח ב ‪. 4 ° -‬‬
‫ס ״ מ ( נשטף ע ״ י ‪ 50‬מ ל ׳‬
‫‪ 0.1‬מולד‬
‫מ ל ׳ של‬
‫ה ו ר ד עם ‪ 0 . 5 6‬מ ו ל ד‬
‫‪NaCI‬‬
‫‪0.15‬‬
‫‪NaCI0.15‬‬
‫מולי‬
‫‪y‬‬
‫ו ‪ 0 . 3 -‬מולר טריס‪,‬‬
‫ט י פ ו ס י של פ ר ד ו ק ם י ן ב א ו ר ה נ ר א ה ‪.‬‬
‫‪7.5‬‬
‫‪,‬‬
‫ה נ ו ז ל ה ע ל י ו ן הועלה‬
‫‪NaCI‬‬
‫מולר טרים‪,‬‬
‫‪.pH‬‬
‫המשקע המתקבל נמהל ‪1/10‬‬
‫חאים שבורים הורחקו ע ״ י‬
‫^ ‪ N a C I -‬הוסף ל נ ו ז ל ה ע ל י ו ן עד ל ר י כ ו ז ס ו פ י של ‪ 0 . 2‬מ ו ל ר ‪.‬‬
‫‪0 . 1 3 5 0‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪ ATP‬י—‪ 15‬מ י ל י מ ו ל ר פ י ר ו ב ט ‪.‬‬
‫ב ו ד ד מאצות ה מ כ י ל ו ת ‪ 25‬מ י ל י ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ‪.‬‬
‫‪10‬‬
‫עם‬
‫המבחנות ח ו מ מ ו באמבט מ י ם ב ‪6 0 ° -‬‬
‫‪2MgCI{ 4‬מ י ל י מ ו ל ר א ר ס נ ט ן‬
‫מילימולד‬
‫ב י ד ו ד פ ר ד ו קם י ז מ ‪-‬‬
‫ב‪ 1.5-‬מולד‬
‫)‪.(106‬‬
‫ולחימום‪.‬‬
‫‪ 12‬מ י ל י מ ו ל ר ‪{ DTT6‬‬
‫מכיל‬
‫ה ר א ק צ י ו ת נעשו ב ‪2 5 ° -‬‬
‫‪ Bray‬לקראת ה מ נ י ה ה ר ד י ו א ק ט י ב י ת ב ת ר כ ו ב ו ת ה י צ י ב ו ת‬
‫תערובת ה ר א ק צ י ה לקביעת פ י ר ו ב ט פוספט ד י‬
‫‪{ 6‬‬
‫פוספואנול פירובט קרבוקסילז‬
‫‪.7.5pH‬‬
‫מולר טרים‪,‬‬
‫הפרדוקסין‬
‫פ ר ק צ י ה ז ו הראתה ספקטרום ב ל י ע ה‬
‫הכמות המבודדת ה ג י ע ה ל כ ‪ 1 / 5 0 0 -‬מתכולת ה כ ל ו ר ו פ י ל ה כ ל ל י ת‬
‫של התאים מהם ב ו ד ד ה פ ר ד ו ק ס י ן ‪.‬‬
‫‪.19‬‬
‫השפעת‬
‫‪a‬‬
‫‪DSPD‬‬
‫‪ N A D -‬או‬
‫על י צ י ר ת כ ל ו ר ו פ י ל ‪.‬‬
‫‪NADP‬‬
‫הכנת ת מ צ י ו ת מ ‪-‬‬
‫או‪NADP‬נעשתה‬
‫ימים‪.‬‬
‫והועברה‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוםפט דהידרוגנזות התלויות‬
‫ו י כ ו ל ת פ ו ט ו ס י נ ט ט י ת בתאי‬
‫‪Euglena‬‬
‫לקביעת‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוםפט ד ה י ד ר ו ג נ ז התלוי‬
‫ל פ י ‪. ( H u d o c k a n d F u l l e r (50‬‬
‫התרבית נמהלה פי ‪ 2‬ב מ ד י ו ם ה ט ר ו ט ר ו פ י‬
‫לאור‪.‬‬
‫מדי‬
‫י ו ם נלקחו‬
‫דוגמאות‬
‫‪E. g r a c i i i i s‬‬
‫תאי‬
‫ב‪NAD-‬‬
‫א א ו ג ל נ ה ג ו ד ל ו בחושך למשך מספר‬
‫ר ג י ל ‪ .‬עם ו ב ל י‬
‫ונבדקו לפעילות‬
‫‪ 0.1‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫ולכלורופיל‪.‬‬
‫‪ DSPD‬ן‬
‫־ ‪ 1 4‬־‬
‫‪20‬־‬
‫מ ד י ד ו ת פ ל ו ר ו ס נ צ י ה כ ח ו ל ה בתאים שלמלם של‬
‫מדידת‬
‫פ ל ו ר ו ס נ צ י ה כתולה )‬
‫‪)Aimesz a n d Duysens‬‬
‫טריסין‬
‫מולר‬
‫עוררו‬
‫‪pH 7,4‬‬
‫עם א ו ר‬
‫ש‬
‫ל‬
‫‪313 + 366 nm‬‬
‫ו ב ר י כ ו ז של כ ‪ 5 0 -‬מ י ק ר ו ג ר ם‬
‫ו פ י ל ט ר צ י נ מ ו א י ד מסי ‪ 62‬תוצרת‬
‫‪7‬‬
‫‪10‬‬
‫של‬
‫‪x‬‬
‫‪10‬‬
‫או‬
‫‪ S c h o t t‬ה נ ו ת נ י ם א ו ר מעל‬
‫‪1.2‬‬
‫‪313‬‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל ל ־ ‪ 3‬מלי‬
‫‪x‬‬
‫‪7.5‬‬
‫‪645‬‬
‫‪4‬‬
‫‪x‬‬
‫‪nm‬‬
‫‪nm l i t t s r f e r e n c e‬‬
‫אדגים ל‪-‬ם״מ‬
‫ב ע ו צ מ ה של‬
‫‪5‬‬
‫‪.‬‬
‫פילטרי‬
‫‪.Strand Electric Co.‬‬
‫א ר ג י ם לם״מ‬
‫לש‪3‬יה״בהתאמה‪.‬‬
‫‪10‬‬
‫‪2‬‬
‫או‬
‫‪3.5‬‬
‫‪5‬‬
‫‪x‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫בקווטת ק ו ר ץ ‪,‬‬
‫‪, ( Eppendorf f i l t e r Hg‬‬
‫‪4 - 9 6‬‬
‫ו ו ט דרך‬
‫‪2.8‬‬
‫‪366‬‬
‫ב ם פ ק ט ר ו פ ו ט ו מ ט ר‪Eppendorf41).‬‬
‫‪ D. p a r v a‬מ ו ר ח פ י ם ב‪ 1«5-‬מ ו ל ד‬
‫‪480‬‬
‫‪Cor‬‬
‫‪2‬‬
‫תאים שלמים של‬
‫) ‪ n m‬־‬
‫אור מ ו ג ן ע ״ י פילטר‬
‫‪ ( B l u e F l u o r e s c e n c e‬בתאים שלמים נעשתה ל פ י‬
‫מ ד י ד ו ת ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה נעשו‬
‫המתובר לרשם ו מ ס ו ד ר להארת התא״‬
‫‪20‬‬
‫‪C.S.‬‬
‫תוצרת‬
‫הארת האצות נעשתה ע ״ י‬
‫‪nm640‬‬
‫תוצרת ‪Baird A t o m i c‬‬
‫‪4‬‬
‫‪RG‬‬
‫א ו דרך פ י ל ט ר י‬
‫א ד ג י ם לם״מ‬
‫‪2‬‬
‫ל ש נ י ה ‪ ,‬ומעל‬
‫לשניה‬
‫‪14‬‬
‫‪parva‬‬
‫והפרדת ה ת ו צ ר י ם על פלטות‬
‫‪D‬‬
‫‪.‬‬
‫‪C‬‬
‫‪4‬ו‬
‫‪5‬‬
‫‪2‬‬
‫‪L‬‬
‫‪0‬‬
‫נעשתה ב ב ק ב ו ק י‬
‫בעוצמה של ‪ 2 0 , 0 0 0‬ל ו ק ס ‪.‬‬
‫‪ T‬צלולוז‬
‫ובהארה ב א ו ר ל ב ן‬
‫ו ר ב ו ר ג בטמפרטורה‬
‫תערובת הראקציה ה כ י ל ה בנפח כ ל ל י של ‪ 5‬מ ל י ? אצות ה מ כ י ל ו ת כ ‪1 0 0 -‬‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל מורחפות במדיום ה ג י ד ו ל ‪.‬‬
‫לאחר ‪ 5‬דקות של הארה מוקדמת ה ו ס פ ו ‪2 . 0‬‬
‫‪4‬ו‬
‫מיקרומול‬
‫ב י ק ר ב ו נ ט המכיל‬
‫פילטרציה‬
‫‪MCA)3m3^j‬‬
‫ונידוף‬
‫דרך־‬
‫‪-1‬‬
‫‪10‬‬
‫ב מ י ל י פ ו ר של ‪ 0 . 6‬מ י ק ר ו ן ללא שטיפה־‬
‫כ ל ו ר ו פ ו ר ם ‪ ,‬ת‪.‬‬
‫במעיך ‪ 12‬ש ע ו ת ‪.‬‬
‫פורמית;‬
‫‪;3/5/12‬‬
‫ה פ י ל ט ר עם האצות ה ו ע ב ר לתערובת ‪ 10‬מ ל י‬
‫‪-20°-‬האצות‬
‫עברו‬
‫מ י צ ו י למשך ל י ל ה ב‪v/v/v( ,‬‬
‫התמצית ה נ ו ת ר ת עברה * ב ו ש ב ק ו ר והמשקע מ ו צ ה שוב עם‬
‫המשקע ה נ ו ת ר מוצה בשלישית עם ‪ 5‬מ ל י מ י ם למשך ‪ 4‬שעות וי‪:‬יבש ב ק ו ר ‪.‬‬
‫מ י ק ר ו ל י ט ר מתמצית האצות נבדקוו על פלטות‬
‫עם? ‪17‬‬
‫*‬
‫‪C .100‬‬
‫‪ j j ! e‬ל א ח ר‬
‫ז מ נ י הארה ש ו נ י ם הופסקה ה ר א ק צ י ה ע ״ י‬
‫נורמל אמוניה‬
‫‪ /‬מים‬
‫‪ /‬פרופנול‬
‫‪ T I C‬צ ל ו ל ו ז ‪ ,‬בהרצה‬
‫‪ /‬איזופרופנול‬
‫‪ /‬בוטנול‬
‫‪ /‬ח‪.‬‬
‫‪ M C A‬באותה‬
‫ד ו ג מ א ו ת של‬
‫דו‪-‬כוונית‪.‬‬
‫בראשונה‬
‫איזובוטירית‬
‫‪EDTA /‬‬
‫‪ W , Simonis‬במחלקה‬
‫‪ D. parva‬נעשתה במעבדתו של פ ר ו פ ׳‬
‫~‬
‫הפרדת ת ו צ ר י ^ ^ ‪C Q 2 p‬‬
‫ל ב ו ט נ י ק ה ב א ו נ י ב ר ס י ט ת ו י ר צ ב ו ר ג ג ר מ נ י ה ‪ ,‬במסגרת מ ע נ ק מחקר לתקופה של חודש ו ח צ י ע ״ י‬
‫קרן פ ו ל ס ק ו ו ג ן ‪.‬‬
‫‪ 15‬־‬
‫)‪950 / 100‬‬
‫‪/‬‬
‫בוטנול‬
‫‪350 /‬‬
‫‪75 /‬‬
‫‪75 /‬‬
‫פרופנול‬
‫‪ /‬ח־‬
‫פרופיונית‬
‫הכרומטוגרמים‬
‫קריאת‬
‫הושהו‬
‫המניות‬
‫‪»22‬‬
‫י ש י ר ו ת על‬
‫מ ד י ד ו ת נ פ ת הםורביייטול‬
‫אצות‬
‫סורביטול־‪,‬‬
‫הועבר‬
‫לאחר‬
‫‪20jic/ml‬‬
‫‪H‬‬
‫למבחנות‬
‫השקעה‪,‬‬
‫פלסטיק‬
‫‪ 50‬מ י ק ר ו ל י ט ר‬
‫המסת‬
‫‪546 /‬‬
‫‪; 8 0 4 / 600 /‬‬
‫צילום‬
‫‪(v/v/v/v‬‬
‫נמדדו לפי‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל למל*‬
‫‪S‬‬
‫קביעת‬
‫‪, D. p a r v a‬‬
‫מיקרופיוג'‬
‫‪ N a C I‬הדרו שן‬
‫מהנוזל‬
‫ל צ נ ט ר פ ו ג צ י ה למשך ‪5‬‬
‫העליון‬
‫‪. ( R o t t e n b e r g et al‬‬
‫‪2‬‬
‫ו ת ת ך מהמשקע‬
‫‪pH 5 . 5‬‬
‫מלי‬
‫;‬
‫שיטת‬
‫‪3‬‬
‫ו‪-‬‬
‫‪, phialate‬‬
‫‪(51.‬‬
‫ריכוז‬
‫ה כ ל ו ר ו פ י ל הושקע ה ח ל ב ו ן‬
‫‪5-1‬‬
‫‪,24‬מילימולר‬
‫ד ו ג מ א ו ת של ‪ 0 . 2‬מ ל י‬
‫‪9‬‬
‫ריכוז‬
‫‪C sorbitol‬‬
‫דקות‬
‫‪14‬‬
‫קלינית‪.‬‬
‫נלקחו‬
‫למדידת כמות‬
‫מהפזה המימית‬
‫הגליצרול‬
‫הכימית‬
‫בשיטה‬
‫התרחיף‬
‫בטמפרטורת החדר‪.‬‬
‫הכלורופיל‬
‫ר ד י ו א ק ט י ב י ת של‬
‫)להלן(‪.‬‬
‫פוספט‬
‫לאחר‬
‫אצטון‪.‬‬
‫ד ו ג מ א ע ו ר ב ב ה עם ‪ 5 . 0‬מ ל י‬
‫דיאתיל אתר‪.‬‬
‫למניה‬
‫בופר‬
‫הועברו כל אחד ל ‪ 2 -‬מ ל י ‪8 0 $‬‬
‫כל‬
‫תרחיף‬
‫‪.jjic/ml‬‬
‫נקבע‬
‫‪3‬‬
‫‪gray‬‬
‫יום״‬
‫מ ו נ ה שטף מ ת ן ״‬
‫בצנטרפוגה‬
‫או‬
‫כםולבנטים‪.‬‬
‫‪ x - r a y s‬ת ו צ ר ת א ג פ א למשך ‪1 2‬‬
‫ו נ פ ת ה מ י ם במשקע ת א י ם ש ל מ י ם ש ל‬
‫ונפת המים‬
‫כ‪ 400-‬מיקרוגרם‬
‫‪3‬‬
‫ה פ ל ט ו ת עם‬
‫‪,(w/v/v/v/v/v/v‬‬
‫בתאים‬
‫נפח הםורביטול‬
‫הכיל‬
‫‪ /‬מים )‪77‬‬
‫ל א ו ט ו ר ד י ו ג ר פ ׳ ‪ -‬י ה עם נ י ר‬
‫נעשתה‬
‫‪2500 /‬‬
‫‪ 1,2 /‬ג ר ם ;‬
‫ו ב ש נ י ה עם?‬
‫‪H‬‬
‫בפזה האתרית‪,‬‬
‫‪14‬‬
‫י‪-‬‬
‫‪C‬‬
‫ת כ ו ל ת ה מ י ם במשקע‬
‫ב‪10-‬‬
‫מלי‬
‫נקבעה לפי‬
‫‪3‬‬
‫השואת‬
‫של‬
‫אקטיביות‬
‫‪C / H‬‬
‫למיליגרם‬
‫‪H‬‬
‫במשקע‬
‫בנוזל‬
‫ובנוזל‬
‫העליון‬
‫העליון‪.‬‬
‫לכמות המים‬
‫ובמשקע‪.‬‬
‫ריכוז‬
‫האוסמוטים‬
‫הנפת‬
‫הםורביטולי‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל בתאים‬
‫נקבע ע ״ י‬
‫האקטיביות‬
‫השואת‬
‫נקבע מהיתם של כמות‬
‫דיםטריביוצית‬
‫כלורופיל‪.‬‬
‫‪3‬‬
‫בתנאי‬
‫שינוי‬
‫אוסמולריות‬
‫תכולת‬
‫במדיום‬
‫נ ק ב ע ה מ ה י ח ס של‬
‫ה מ י ס ה כ ל ל י ת במשקע א צ ו ת‬
‫ק ט נ ו ת י־לפני‪ .‬ו א ח ר י‬
‫חימום‬
‫ב‪.80^-‬‬
‫נקבעה‬
‫גליצריל ל‪-‬‬
‫בנוסף לפי‬
‫‪H^O‬‬
‫במשקע‬
‫ובנוזל‬
‫העליון‪.‬‬
‫ש ק י ל ת משקע ת א י ם ב מ ב ח נ ו ת‬
‫‪,‬‬
‫זכוכית‬
‫־ ‪16‬‬
‫‪23‬־‬
‫מ ד י ד ה א נ ז י מ ט י ת של‬
‫תכולת‬
‫ע״י‬
‫כילה? ‪ 2‬־ ‪ 0‬מ ו ל ד‬
‫‪, 0‬‬
‫גליצין‪,‬‬
‫‪908‬‬
‫גליצרוקינז‬
‫‪7.5‬‬
‫‪,‬‬
‫)תוצרת מיגמה(‬
‫‪pH‬‬
‫ו ט ר י ם או‬
‫‪ 5 - D .‬־ ‪ 1‬מולר‬
‫ד ו ג מ א מתמצית‬
‫‪2‬‬
‫‪75‬־‪0‬‬
‫‪,‬‬
‫‪ATP‬־‬
‫ג ל י צ ר ו ל פוספט‬
‫‪ D. parva‬הוספה‬
‫‪NaCI‬‬
‫‪NAD^^ a,15‬מ י ק ד ו ג ר ם‬
‫ו‪ 1-‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫מ ד י ד ו ת תכולת ג ל י צ ר ו ל ב ‪-‬‬
‫א נ ז י מ ט י ס פ צ י פ י של‬
‫) ת ו צ ר ת ס י ג מ ה ( בנפח ס ו פ י של ‪ 3‬מ ל ״ ״‬
‫מאחר‬
‫תאי‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל בתאי האצות נקבעה ע ״ י ח י מ צ ו ן‬
‫‪ N A D‬ל ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן פ ו ס פ ט ‪><(NAD!HM(52 ,‬‬
‫ב‪parva‬‬
‫‪ M g C S g‬־ ‪ 1‬מולד ה׳זדרזין‪,‬‬
‫‪24‬״‬
‫‪-‬‬
‫‪0‬־גליצרופו‪0‬פט‬
‫הראקציה החלה עם תוספת של ‪ 7‬מ י ק ר ו ג ר ם‬
‫חיוור‬
‫‪ N A D‬נ מ ד ד ב‪-‬וזוח‪«340‬‬
‫‪P. parva‬‬
‫ט ר י ם י ן מ ה ר י ע י ם בקביעה ה כ י מ י ת של ג ל י צ ר ו ל ) ל ה ל ן ( נשטפו‬
‫‪5-1‬‬
‫מ י ל י פ ו ל ר בופר פוספט‪,‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫‪7,5pH‬־‬
‫ורוכזו‬
‫דוגמאות שוות‬
‫של אצות מ ר ו כ ז ו ת ‪ ,‬כל אחת מ כ י ל ה לערך ‪ 100‬ם י ק ר ו ג ר ם פ ל ו ר ו פ י ל נ מ ה ל ו בסידרת מ ב ח נ ו ת‬
‫ה מ כ י ל ו ת ‪ 16‬מ י ל י פ ו ל ר‬
‫פוספט‪,5‬‬
‫‪2‬‬
‫״‪7‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪,‬‬
‫‪2MgCI‬‬
‫ס ו פ י של ‪ 1‬מ ל י ־ שתי מ ב ת נ ו ת של ז מ ן אפס ) ה מ כ י ל ו ת ‪ 3 $‬ח ‪,‬‬
‫) ל ל א א צ ו ת ( ה ו כ ל ל ו בכל‬
‫נסיון־‬
‫טריכלורואצטית‬
‫ומים־‬
‫נזילת‬
‫לכל מבחנה־‬
‫תמיסה צ ל ו ל ה התקבלה ע ״ י‬
‫ט ר י ב ל ו ר ו א צ ט י ת ( ושתים של ב ל נ ק‬
‫המבחנות ה ו ע ב ר ו לאמבט מ י ם ב ‪ , 2 5 ° -‬ואם‬
‫ב א ו ר ל ב ן בעוצמה של ‪ 4 5 , 0 0 0‬ל ו ק ס ״‬
‫אותו‬
‫וריכוז‬
‫‪ N a C I‬ה ד ר ו ש בנפח‬
‫צ י י ן עם הארה‬
‫הראקציה הופסקה ע ״ י תוספת ‪ 1‬־ ‪ 0‬מ ל י ‪ 30$‬ח־‬
‫ר י כ ו ז של מלת התקבל בכל הסריה ע ״ י תוספת‬
‫צ נ ט ר פ ו ג צ י ה ב ‪ xg1000 -‬למשך ‪ 10‬דקות ב ^ ‪0 -‬‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל ‪ ,‬אצות‪ .‬ושברי האצוח ה ו ר ח ק ו ל פ נ י הוספת ח־‬
‫‪0‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫בנסיונות‬
‫טריכלורואצטית־‬
‫‪ 005‬מלי‬
‫של ה נ ו ז ל ה ע ל י ו ן התופשי מתאים ה ו ע ב ר ל מ ב ח נ ו ת חדשות ה מ כ י ל ו ת ‪5‬־‪ 1‬מל* מ י ם‬
‫נקבע בקביעה ה כ י מ י ת ‪ ,‬המתוארת ל ה ל ן ־‬
‫‪-‬‬
‫‪25‬־‬
‫קביעה כ י מ י ת של‬
‫לסרית‬
‫או‬
‫‪_ 17‬‬
‫מ ב ח נ ו ת ה מ כ י ל ו ת ‪5‬־‪ 1‬מל* מ י ם ה ו ס פ ו‬
‫‪ 0 , 5‬מל*‬
‫‪ 3‬ו ז ל ע ל י ו ן לאתר הרתקת ה ח ל ב ו ן‬
‫‪ 0 , 2‬מ ל י ‪ ,‬מהפזה המימית לאחר הרחקת האתר״ כפי שתואר ל מ ע ל ה ‪,‬‬
‫מיקרומולים‬
‫גליצרול־‬
‫ה מ כ י ל י ם ‪1,5‬‬
‫ג ל י צ ר ו ל נקבע ל פ י ‪( L a m b e r t a n d N e i s h (53‬‬
‫ו ‪ 0 , 5 -‬מל* של ‪ 0 , 1‬מ ו ל ר ס ו ד י ו ם פ ר י ו ד ט ה ו ס פ ו ת ר ך ע י ר ב ו ב ל כ ל מבחנה״‬
‫הפריודט״‬
‫‪OA‬‬
‫מל* של ‪ 1‬מ ו ל ר ם ו ד י ו ם א ר ס י נ י ט ה ו ס ף ־‬
‫‪1 - 0 0 5‬״‪ 0‬מ ל י מכל מבחנה ה ו ע ב ר למבחנה חדשה עם ‪ 10‬מ ל י‬
‫המבחנות‬
‫־‬
‫־ ‪1‬־‪0‬‬
‫‪1‬־‪ 0‬מ ל * ^ ‪I O N H j S O‬‬
‫לאתר כ ‪ 5 -‬דקות מהוספת‬
‫כ ‪ 5 -‬דקות לאחר הוספת ה א ר ם י נ י ט‬
‫‪ 6,3‬מ י ל י מ ו ל ר ראגנט ח‪.‬‬
‫כרומוטרופית‬
‫ע ו ר ב נ י ו ה ו ע ב ר ו לאמבט מ י ם ר ו ח ח י ם למשך ‪ 30‬ד ק ו ת ‪ ,‬לאחר ק ר ו ר ן נקראה ה צ פ י פ ו ת‬
‫האופטית ב‪-‬החח‪ 570‬ב ם פ ק ט ר ו פ ו ט ו מ ט ר ־‬
‫ב ל נ ק ללא אצות ו ע ק ו מ ת כ י ו ל עם ג ל י צ ר ו ל נ ק י צ ו ר פ ו‬
‫לכל מערכת־‬
‫‪26‬־‬
‫קביעת פ ע י ל ו ת‬
‫פעילות‬
‫‪ 1‬ם״מ‪,‬‬
‫הכילה;‬
‫‪0‬‬
‫בהתאמה‪,‬‬
‫ה א נ ז י ם נמדדה ם פ ק נ ן ר ו פ ו ט ו מ ט ר י ת ב ־ ‪ 340nm‬ב ק ו ו ט ו ת ק ו ו ר ץ של מעבר א ו ר‬
‫תערובת הראקציה הסטנדרטית לקביעת ח י ז ו ר ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן הכילה? ‪ 30‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫טריסין‪,‬‬
‫‪3‬‬
‫דיהידרוכםיאצטון רדוקטז התלוי ב‪-‬‬
‫‪NADP‬‬
‫‪7,4‬‬
‫‪ pH‬ן ‪ 2‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‪-‬‬
‫דיהידרוכסיאצטון ו‪ 20-‬מיקרומולר ‪NADPH‬־‬
‫טריסיןגליצין‪,‬‬
‫‪2‬‬
‫»‬
‫‪4‬‬
‫;‬
‫תערובת‬
‫‪ 9 p H‬־ ‪ 2‬מולר‬
‫ו ‪ 2 5 -‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ‪ . N A D P‬ה ר א ק צ י ה התלה עם תוספת‪ :‬ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן או‬
‫א ו עם תוספת ה א נ ז י ם ־‬
‫פ ע י ל ו ת ה א נ ז י ם נבדקה ל פ י ש י ע ו ר ח י ז ו ר ‪ N A D P‬או‬
‫‪,NADP‬‬
‫חימצון‬
‫‪ N A D P H‬לדקה לכמות א נ ז י ם ־‬
‫יחידת‬
‫בתנאים‬
‫ה נ י ת נ י ם למעלה‪.‬‬
‫ריכוז‬
‫בחלבון‬
‫א נ ז י ם אחת מ ו ג ד ר ת ככמות ה א נ ז י ם המתמצנת ‪ 1‬מ י ק ר ו מ ו ל ‪ N A D P H‬לדקה ב ‪2 5 ° -‬‬
‫ה ת ל ב ו ן נקבע ל פ י ב ל י ע ה ב ־ ת ז מ ‪ ( 1 0 7 ) 2 8 0‬או‬
‫סטנדרט ל כ ל ה ק ב י ע ו ת ־‬
‫לפי‬
‫‪ ( L o w r y ( 5 4‬עם ‪BSA‬‬
‫‪- 18 -‬‬
‫ת‬
‫חכונווו‬
‫ו‬
‫צ‬
‫א‬
‫ו‬
‫ת‬
‫"‪1.‬‬
‫אצות שלמות‬
‫בשלב ר א ש ו ן של העבודה ב ד ק נ ו האם המושג ה ל ו פ י ל י ו ת מתיחס לאצה‬
‫והאם‬
‫ציור‬
‫דומה האצה ב ת כ ו נ ו ת י ה ל א צ ו ת י ר ו ק ו ת א ת ר ו ת ‪.‬‬
‫מס‬
‫‪,‬‬
‫‪;1‬‬
‫צ י ו ר ‪ 1‬מתאר את הדרישה ה א ב ס ו ל ו ט י ת‬
‫השפעת ה ר י כ ו ז ה א ו ס מ ו ל ר י של ה מ ד י ו ם על פליטת חמצן בתאים שלמים של ‪D . p a r v a‬‬
‫האצות נשטפו ב־ ‪ 3‬א ו ס מ ו ל ר מ ל ח ‪ ,‬ג ל ו ק ו ז או ג ל י צ י ן ו ל א ח ר מ כ ן ה ו ר ח פ ו בתערובת‬
‫ב ר י כ ו ז סופי‬
‫ה ר א ק צ י ה ה מ כ י ל ה התמיסה ה נ ת ו נ ה ו־י‪ 10‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס י ן ‪p H 7 . 4 , ,‬‬
‫של ‪ 125‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ל ‪ 3 -‬מ ל י ‪.‬‬
‫‪1‬‬
‫י־‬
‫צ י ו ר מסי־‬
‫‪;2‬‬
‫‪19‬‬
‫‪-‬‬
‫ספקטרום ‪ ,,‬הבליעה של תאים שלמים ושל תמצית א צ ט ו נ י ת בת ‪ 80$‬של‬
‫‪ N a d‬ו‪20-‬‬
‫תערובת הראקציה )‪ 3‬מ ל י ( ל ס ו ם פ נ ס י ח האצות ה כ י ל ה ‪ 1.5‬מ ו ל ר‬
‫•יל ‪.pH‬‬
‫מילימולר םריםין‪,‬‬
‫‪4‬‬
‫לאוםמולריות‬
‫ג ב ו ה ה על מנת ל ק י י ם פליטת חמצן בתהליך‬
‫ממלאים אחר דרישה ז ו‬
‫בריכוזים אוסמולרים ש ו ו י ם ‪.‬‬
‫ע י כ ו ב ממשי מתקבל ב ר י כ ו ז י מלח ג ב ו ה י ם מ ‪ 3 -‬מ ו ל ר ‪.‬‬
‫העובדה‬
‫שגלוקוז‬
‫וגליצין‬
‫‪,NaCI‬‬
‫הפוטוםינםזה‪.‬‬
‫ג ל ו ק ו ז ‪ ,‬או‬
‫גליצין‬
‫כ ‪ 3 -‬א ו ס מ ו ל ר נ ד ר ש י ם ל פ ע י ל ו ת מ ק ס י מ ל י ת כאשר‬
‫למטה ם ‪ 0 . 3 -‬א ו ס מ ו ל ר פליטת החמצן ע ו כ ב ה ל ג מ ר י‬
‫י כ ו ל י ם ל ה ח ל י ף את המלח לפליטת חמצן מרמזת כ י לפחות ל ג ב י ת פ ק י ד זה‬
‫הדרישה העקרית ה י א א ו ם מ ו ט י ת ‪.‬‬
‫ספקטרום הבליעה של ס ו ס פ נ ם י ח ת א י ם ושל תמצית תאים ב ‪ ( v / v ) 8 0 $ -‬א צ ט ו ן ‪,‬‬
‫אצות‬
‫)ציור‬
‫ספקטרום‬
‫י ר ו ק ו ת אחרות‬
‫‪,a‬‬
‫) ‪ ( 5 5‬עם כ ל ו ר ו פ י ל‬
‫‪b‬‬
‫זהה ל ז ו של‬
‫ו ק ר ו ם נ ו א י ד י ם כמרכיבים ע ק ר י י •‬
‫‪.(2‬‬
‫ה ש י נ ו י כתוצאה מהארה‬
‫‪600‬‬
‫) צ י ו ר ‪ (3‬גם ה ו א ט י פ ו ס י עם ״‬
‫‪550‬‬
‫‪520‬‬
‫‪500‬‬
‫)‪(nm‬‬
‫‪450‬‬
‫‪" s h i f t‬‬
‫ושינויי‬
‫‪400‬‬
‫‪Wavelength‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫ספקטרום ההבדל באור של ס ו ם פ נ ט י ח תאי‬
‫צ י ו ר מסי ‪!3‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪7.4‬‬
‫‪NaCI,20‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס י ן ‪,‬‬
‫תערובת הראקציה הכילה ‪ 1.5‬מ ו ל י‬
‫מצויר השינוי‬
‫ו א צ ו ת ה מ כ י ל ו ת ‪ 120‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל בנפח ס ו פ י של ‪ 3‬מ ל י ‪.‬‬
‫‪ ,‬הנמדד בסטקטרו‪-‬‬
‫‪n‬‬
‫‪m‬‬
‫״‬
‫י‬
‫(לשניה‪2‬א ר ג י ס‬
‫אורך גל נ ג ד י ‪.‬‬
‫עם‬
‫‪5 4 0 A m i n c o - C h a n c e dual wavelength‬‬
‫פוטוממר‬
‫ק‬
‫ם‬
‫מ‬
‫‪m‬‬
‫‪n‬‬
‫‪- 21 -‬‬
‫‪I‬‬
‫‪552‬‬
‫ו‬
‫‪556‬‬
‫ו‬
‫ו‬
‫ו‬
‫ו‬
‫^‪k -‬‬
‫ו‬
‫‪I‬‬
‫‪0‬‬
‫‪564‬‬
‫‪560‬‬
‫)‪Wavelength (nm‬‬
‫‪ f‬המתקבל בהארה של‬
‫ספקטרום ההבדל של צ י ט ו כ ר ו ם‬
‫צ י ו ר מ ם ‪;4‬‬
‫‪p H 7.4‬‬
‫‪NaCI,20‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ם י ן‬
‫תערובת הראקציה )‪ 3‬מ ל י ( ה כ י ל ה ! ‪ 1.5‬מ ו ל ר‬
‫מצויר השינוי‬
‫‪ 1‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ‪ D C M U‬ו א צ ו ת ה מ כ י ל ו ת ‪ 162‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ‪.‬‬
‫‪nm540‬‬
‫(לשניה^‬
‫‪,‬‬
‫ל ם ״ מ ע ם‬
‫‪nm640)10 x4.5‬א ד ג י ם‬
‫המתקבל בהארה עם א ו ר‬
‫‪. A m i n c o - C h a n c e dual w a v e l e n g t h‬‬
‫אויר גל נ ג ר י בספקטרופוטומטר‬
‫‪,‬‬
‫׳‬
‫‪4‬‬
‫ציטוכרומים‬
‫‪. I p M DCMU‬‬
‫בולטים )‪.(56‬‬
‫צ י ו ר ‪ 4‬מתאר אח ח י מ צ ו ן‬
‫כ פ י שכבר ת ו א ר ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם מצמחים ע ל א י י ם )‪ (49‬ספקטרום ב ר ו ר נ ר א ה ב ת נ א י ם‬
‫א ל ו גם בתאי‬
‫פליטת‬
‫מקסימלי‬
‫ציטוכרום ‪f‬‬
‫ב א ו ר ב ס ו ם פ נ ם י ת אצות המכילה‬
‫היחס של צ י ט ו כ ר ו ם‬
‫החמצן ב ‪D . p a r v a -‬‬
‫‪f‬‬
‫ל כ ל ו ר ו פ י ל בתאים א ל ו ה ו א ‪.1/800‬‬
‫ע ו כ ב ה ב א ו פ ן מלא ע ״ י ‪ D C M U‬או ע ״ י‬
‫התקבל ב‪ 2-‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ו ב ‪ 3 0 -‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ‪ ,‬בהתאמה‪.‬‬
‫‪.BDHB‬‬
‫ע י כ ו ב חצי‬
‫השפעת עוצמת ה א ו ר על פליטת חמצן‬
‫‪o‬‬
‫פוטוסינטטי‬
‫מתוארת ב צ י ו ר ‪ ,5‬כ‪25-‬‬
‫ק י ל ו א ר ג י ם לם״מ‬
‫לשניה דרושים‬
‫לרוויה‪.‬‬
‫‪I‬‬
‫־‬
‫ציור מס‬
‫‪15‬‬
‫‪,‬‬
‫פליטת‬
‫תלות‬
‫תערובת‬
‫ואצות‬
‫החמצן‬
‫בעוצמה‬
‫הכילה ‪1.5‬‬
‫המכילות ‪150‬‬
‫תכונות‬
‫‪.2‬‬
‫א‪.‬‬
‫תאים‬
‫מתפוצצים‪,‬‬
‫הנ״ל‪.‬‬
‫פליטת‬
‫פעילות‬
‫שלמים של‬
‫‪NaCI,2 0‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫כלורופיל ב‪ 3-‬מ ל י ‪.‬‬
‫תוצרת‬
‫‪D. p o r v a‬‬
‫טריםין ‪7 . 4 ,‬‬
‫הארה‬
‫נעשתה‬
‫‪pH‬‬
‫באורוזוויו‪640‬‬
‫‪.Baird A t o m i c Inc.‬‬
‫אצות‬
‫פוטוטינטטיות‬
‫שלמים של‬
‫בוזאים‬
‫מולי‬
‫‪Interference f i l t e r‬‬
‫שבדי‬
‫האור‬
‫‪22‬‬
‫‪-‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫)ציור‬
‫‪.(6‬‬
‫החמצן‬
‫נפסקת‬
‫מקסימלית‬
‫אינם‬
‫עם ז א ת ‪,‬‬
‫כאשר‬
‫) צ י ו ר ‪(1‬‬
‫מתקבלת‬
‫מתחח‬
‫יכולים‬
‫לחזר‬
‫באור‬
‫ה א ו ס מ ו ל ר י ו ת של‬
‫והשברים‬
‫המתקבלים‬
‫ל ר י כ ו ז מ ל ח של‬
‫‪0.15‬‬
‫פריציאניד או‬
‫הםוםפנסיה‬
‫מסוגלים‬
‫מולד‪.‬‬
‫לקיים‬
‫מוקטנת‬
‫ל ב צ ע את‬
‫התאים‬
‫הראקציות‬
‫דרך‬
‫־ ‪ 2 3‬־‬
‫‪-C‬‬
‫‪o‬‬
‫‪E‬‬
‫‪X‬‬
‫‪200‬‬
‫‪100‬‬
‫‪PMS phosphorylation‬‬
‫‪CO‬‬
‫‪O‬‬
‫‪E‬‬
‫‪o‬‬
‫‪CP‬‬
‫‪E‬‬
‫‪X‬‬
‫‪CO‬‬
‫‪"e:‬‬
‫‪o‬‬
‫‪o‬‬
‫‪£‬‬
‫‪4.‬‬
‫‪50‬‬
‫‪reduction‬‬
‫־ ‪3c 1 0 0‬‬
‫‪o‬‬
‫‪Ferricyanlde‬‬
‫‪o‬‬
‫‪E‬‬
‫>‪0‬‬
‫‪g‬־‬
‫‪"E‬‬
‫‪a‬‬
‫‪a.‬‬
‫‪fc‬‬
‫>‪a‬‬
‫‪1‬‬
‫‪4 0 0 6 0 0 8 0 0 1000 1200‬‬
‫<‬
‫‪200‬‬
‫)‪NaCI concentration (mM‬‬
‫ציור מ ס‬
‫‪,‬‬
‫‪86‬‬
‫חיזור‬
‫תאים‬
‫‪7.4‬‬
‫פריציאניד‬
‫שלפינישל‬
‫‪pH‬‬
‫ופוספורילציה ב־‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫ונמהלו‬
‫בתערובת‬
‫תערובת‬
‫‪ D. parva‬ב א ו ר‬
‫נשטפו ב ־ ‪1 . 5‬‬
‫מולי‬
‫המכילה‬
‫הכילה‬
‫הראקציה )‪ 3‬מ ל י (‬
‫‪NaCI,2 0‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫ריכוז‬
‫‪7.8‬‬
‫‪0.35‬‬
‫נתרן‬
‫אשלגן‬
‫ו מילימולדקם^ ‪,‬‬
‫פוספט‬
‫‪5‬‬
‫‪3‬‬
‫לחיזור‬
‫טריםין‪,‬‬
‫‪ D. parva‬ה מ כ י ל י ם ‪6 5‬‬
‫תערובת‬
‫‪f‬‬
‫)‪Fe(CN K‬‬
‫‪6‬‬
‫לפוםפורלציה ע״י‬
‫‪2.5‬‬
‫‪4‬‬
‫המכילים‬
‫הנתון‪.‬‬
‫טריסין‬
‫‪pH‬‬
‫‪,7.8‬‬
‫מיקרומולר‬
‫‪30‬‬
‫המלח‬
‫ב נ ו ם ף נ ‪25‬‬
‫ותאי‬
‫‪pH,‬‬
‫בתלות‬
‫ברבוז‬
‫המלח‬
‫החיצוני‬
‫‪(>,V‬‬
‫‪PMS,‬‬
‫בנפח‬
‫‪PMS‬‬
‫ה כ י ל ה ‪25 :‬‬
‫ס ו פ י של ‪3‬‬
‫‪I3‬‬
‫‪2MgCI‬‬
‫מיליליטר‪.‬‬
‫‪3‬‬
‫ו ־ ‪p a r v a .0‬‬
‫‪p32cpm0 x‬‬
‫‪6‬‬
‫־ ‪- 2 4‬‬
‫ת כ ו נ ה מיותדת‬
‫ז ו של האצה איפשרה הכנת פרפרט שברי אצות ע ״ י מ י ה ו ל פשוט של ד ו ג מ ה‬
‫מ ר ו כ ז ת של אצות בתערובת האקציה בעלת א ו ס מ ו ל ר י ו ת כ ל ל י ת מתחת ‪ , 0 . 2‬טבלה ‪ 1‬מתארת את ה פ ע י ל ו ת‬
‫המתקבלת עם פ ר ג מ נ ט י ם א ל ו ״‬
‫טבלה מ ם‬
‫‪,‬‬
‫‪si‬‬
‫ב ר ו ר כי שברים א ל ו מראים פ ע י ל ו י ו ת ח י ז ו ר‬
‫פ ו ט ו ס י נ ט ט י ו ת של שברי‬
‫חיזור‬
‫וזירחוז‬
‫ת‬
‫באור‬
‫ס‬
‫ו‬
‫ת‬
‫פ‬
‫מיקרומולים אלקטרונים‬
‫ל מ ג י כ ל ו ר ו פ י ל לשעה‬
‫‪ATP‬‬
‫ל מ ג י כ ל ו ר ו פ י ל לשעה‬
‫ללא תוספת‬
‫‪25‬‬
‫‪60‬‬
‫‪65‬‬
‫‪PMS‬‬
‫‪200‬‬
‫‪95‬‬
‫‪80‬‬
‫‪35‬‬
‫‪280‬‬
‫‪Diquat‬‬
‫אםקורבט ‪+‬‬
‫‪D i q u a t + DCIP‬‬
‫‪ 14‬ר פ ר ד ו ק ם י ז‬
‫)מיקרומול‬
‫‪NADP‬‬
‫‪30‬‬
‫‪4‬‬
‫‪0‬‬
‫‪ ) N A D P‬מ י ק‪1‬ר ו מ ו ל ר פ ר ד ו ק ס י ן‬
‫ובת הראקציה )‪ 3‬מ ל י ( הכילה? ‪ 25‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫!‬
‫לחיזור‬
‫‪1.2‬מילימולר‬
‫‪ N A D P‬ממים‪,‬‬
‫א ז י ד ‪ 50 ,‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‪ 50‬פ י ק ר ו מ ו ל ר‬
‫‪,‬‬
‫פילימולר טריסין‪,‬‬
‫‪NaC‬‬
‫מאסקורבט‬
‫‪1-0.5‬‬
‫‪DCIP,‬‬
‫לחיזור פריציאניד‪,‬‬
‫‪ 0 . 5‬מ י ל י מ ו ל ר ‪ n ^ i N A D P‬קסי ן‬
‫‪;Diquat‬‬
‫ל ח י ז ו ר ‪Diquat‬‬
‫‪Diquat)30‬מ י ק ר ו מ ו ל ר‬
‫(‬
‫אסקורבט * ‪N A D P + D C I P‬‬
‫ה מ כ י ל ו ת ‪ 60‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ד ו פ י ל ו ה ת ו ם פ ו ח הבאוח!‬
‫פריציאניד;‬
‫אזיד‪,‬‬
‫‪5‬‬
‫‪2‬‬
‫(‬
‫‪3‬‬
‫‪2‬‬
‫אצות‬
‫גבוהות יחסית;‬
‫‪DCIP‬‬
‫כמצוין;‬
‫ו‪-‬‬
‫מאםקורבט‬
‫תערובות ראקציה ל פ ו ס פ ו ר י ל צ י ה ה כ י ל ו ‪,‬‬
‫‪7.8‬‬
‫‪ 0.5‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫ל ח י ז ו ר ‪Diquat‬‬
‫‪DCIP1.2‬‬
‫ו ‪ 3 . 5 -‬מ י ל י מ ו ל ר אםקורבט;‬
‫‪NADP,40‬מ י ק ר ו מ ו ל ר פ ר ד ו ק ם י ן ‪,‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪y‬‬
‫ממים‪,‬‬
‫^ ‪N A D P ^ t‬‬
‫‪ 3.5‬מ י ל י מ ו ל ר אטקורבט‬
‫בנוסף‪.‬‬
‫‪2MgCI‬‬
‫‪6‬‬
‫ו‪ 4-‬מילימולר‬
‫נ ת ר ן ‪ ,‬אשלגן פוספט‪,‬‬
‫כאשר מ צ ו י ן ‪ 35‬מ י ק ר ו מ ו ל ר‬
‫‪7.8‬‬
‫‪ PMS‬ה ו ס פ ו ‪.‬‬
‫‪ pH‬המכיל‬
‫‪3‬‬
‫‪mP10x‬‬
‫‪p‬‬
‫‪c‬‬
‫‪.‬‬
‫־‬
‫הפעילויות‬
‫היחיד‬
‫ג ב ו ה ו ת מאלו שהתקבלו קודם ל ב ן ב פ ר פ ר צ י ו ת של אצות‬
‫הבולט ה ו א תוסר ה י כ ו ל ת של ח ל ק י ק י ם א ל ו‬
‫מצמחים‬
‫ש ו ו ת או‬
‫‪25‬‬
‫‪-‬‬
‫בפרךוקסין״‬
‫^ ! ־ ‪ N A D P‬או‬
‫ירוקות ) ‪ ( 5 7‬״‬
‫ל ק י י ם ר א ק צ י ו ת א ו ר אחרות‬
‫עם תוספת ‪ 3‬מ י ק ד ו מ ו ל ר פ ר ד ו ק ס י ן ‪ ,‬המספיק ל ר ו ו ת את ה ח י ז ו ר ב כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם‬
‫כ מ ו י ו ת ג ד ו ל ו ת בהרבה של פ ר ד ו ק ס י ן‬
‫ע ל א י י ם ‪ ,‬לא נראתה כ ל פ ע י ל ו ת ממשית״‬
‫נ ד ר ש ו על מנת‬
‫לקבל ר י א ק צ י ה חלשה‪ ,‬ששיעורה עלה עם כמות ה פ ר ד ו ק ם י ן המוםפח עד ל ־ ‪ 4 0 -‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ‪.‬‬
‫כל ח י מ צ ו ן ^ ‪ N A D P I -‬בחושך‪,‬‬
‫מהסה״‬
‫בידדנו‬
‫פ ר ד ו ק ס י ן מתאי‬
‫יכולת‬
‫ז ו לתזר‬
‫‪ D . parva‬ו ב ד ק נ ו‬
‫‪ N A D P‬קשור ב ס פ צ י פ י ו ת‬
‫שברי אצות‬
‫לפרדוקסין‬
‫אנדוגני‪,‬‬
‫י כ ו ל ת ו ל ה ח ל י ף פ ד ד ו ק ם י ן מסלק ע ל י ם המקובל בשימוש״‬
‫השפעת פ ר ד ו ק ם י ז מ ע ל י סלק או מתא?‬
‫מחסה או בשברי‬
‫לא ה ו ב ח ן‬
‫ו ל א ע י כ ו ב של ת י ז ו ר ‪ N A D P‬עם ע י ר ב ו ב שברי אצות עם כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם‬
‫על מנת ל ב ד ו ק האם תוסר‬
‫מבלה מסי* ‪82‬‬
‫ההבדל‬
‫על ח י ז ו ר ‪ N A D P‬ב כ ל ו ר ו פ ל ט ט י ם‬
‫כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם מחסה‬
‫מקור‬
‫הפרדוקםין‬
‫מיקרומולים ‪ NADP‬מתוזרים‬
‫ל מ י ל י ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל שעה‬
‫‪0‬‬
‫‪90‬‬
‫‪0‬‬
‫‪22‬‬
‫תערובת הראקציה ) ‪ 3‬מ ל י (‬
‫‪ 5‬־ ‪ 0‬מילימולר‬
‫‪25‬‬
‫‪NADP‬‬
‫הכילה‪8‬‬
‫סלק ע ל י ם‬
‫‪ 25‬מילימולר טריסין‪,‬‬
‫‪pH 7 . 8‬‬
‫‪,‬‬
‫‪NaCI,3‬מ י ק ר ו מ ו ל ר פ ר ד ו ק ס י ן מ ס ל ק ‪ -‬ע ל י ם ‪ ,‬או‬
‫‪0.53‬‬
‫מ ‪ D . p a r v a -‬״ כ ל ו ר ו פלסטי ם מתסה ושברי אצות ה כ י ל ו ‪ 3 0‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ‪.‬‬
‫‪- 26 -‬‬
‫כמתואר‬
‫בטבלה ‪ 2‬כ ל אחד‬
‫אף אתד ל א ה י ה‬
‫טבלה‬
‫פעיל‬
‫‪3‬‬
‫טבלה מ ם ' ‪; 3‬‬
‫מהפרדוקםינים היה‬
‫בקבלת‬
‫מתארת‬
‫הקבלת‬
‫בשברי‬
‫פ ע י ל ו י ו ת שיחלוף‬
‫בקבלת‬
‫פעיל‬
‫חיזור‬
‫‪NADP‬‬
‫בכלורופלםטים‬
‫מחסה‪,‬‬
‫אך‬
‫האצות־‬
‫‪ATPase‬‬
‫‪ ATP-P5‬ו ‪-‬‬
‫‪ATP-PI‬‬
‫ושיתלוף‬
‫באור‬
‫תלויות‬
‫‪ ATPase‬ת ל ו י ו ת ב א ו ר בשברי‬
‫בשברי‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫ו ב ב ל ו ר ו פ ל ס ט י ם מחסה‬
‫‪ATPase‬‬
‫כלורופלסטים‬
‫שברי‬
‫למגי‬
‫)‬
‫‪I‬‬
‫‪a‬‬
‫‪C‬‬
‫‪mM N‬‬
‫ל‬
‫ו‬
‫פ‬
‫ב‪(58)-‬־‬
‫מחסה‬
‫משוחררים‬
‫‪ATP‬‬
‫לשעה‬
‫משוחלפים‬
‫פוספט‬
‫עם‬
‫לשעה‬
‫‪31.5‬‬
‫‪7.4‬‬
‫‪18.50‬‬
‫‪12.5‬‬
‫‪3‬־‪14‬‬
‫‪0.58‬‬
‫‪1.75‬‬
‫‪-DTT‬‬
‫‪7.4‬‬
‫‪11.6‬‬
‫‪0.04‬‬
‫‪1.08‬‬
‫‪+ Atebrin‬‬
‫‪11.5‬‬
‫‪10.3‬‬
‫‪0.07‬‬
‫‪0.93‬‬
‫‪-‬‬
‫‪-‬‬
‫‪0.14‬‬
‫‪0.99‬‬
‫;‪Tris;pH20‬‬
‫‪M‬‬
‫ר‬
‫פוספט‬
‫שברי‬
‫כלורופלםטים‬
‫למגי‬
‫ת ו ס פ ת‬
‫‪17‬־ ‪1‬‬
‫‪;7 mM‬‬
‫ו‬
‫שיחלוף‬
‫מחסה‬
‫‪ATP-P1‬‬
‫י‬
‫‪M‬‬
‫‪; 5 m M P M S . $5mM A T P‬‬
‫ל‬
‫‪5‬‬
‫‪m‬‬
‫‪7‬‬
‫מ ל א‬
‫בקרת‬
‫‪-ATP+ADP‬‬
‫‪J‬‬
‫‪8‬‬
‫‪8‬‬
‫‪DTT‬‬
‫‪MAtebrin160mMA D P‬‬
‫חושף‬
‫;‬
‫‪pM‬‬
‫‪p‬‬
‫ה‬
‫ר‬
‫א‬
‫ק‬
‫צ‬
‫י‬
‫ה נעשתה כמתואר‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫אצות‬
‫ע״י‬
‫ובכלורופלטןזיס‬
‫‪DTT‬‬
‫למרות‬
‫מילימולר‪.‬‬
‫‪,‬‬
‫ב‪.‬‬
‫‪ATPase‬‬
‫הדרישה‬
‫הפוטופוספורילציה‬
‫אופטימום‬
‫מחסה‪.‬‬
‫ופעילות‬
‫גם‬
‫בשברי‬
‫‪o‬־‪pH‬‬
‫התלות‬
‫השקעת‬
‫בחושך‬
‫מגנזיום‬
‫אצות‬
‫מתקבל‬
‫של‬
‫‪27‬‬
‫הבולט ב י ן‬
‫גבוהה‬
‫לריכוז‬
‫פעילות ב ‪7 . 8 -‬‬
‫ההבדל‬
‫‪-‬‬
‫שתי‪-‬המערכות הוא‬
‫בשברי‬
‫חוסר‬
‫האצות‪.‬‬
‫גבוה‬
‫במדיום‬
‫לגידול‬
‫בריכוז‬
‫המקובל‬
‫לכלורופלםטים‬
‫מערכת‬
‫הדרישה‬
‫ואפילו‬
‫הפןטופוספורילציה‬
‫האצה‪ ,‬ח צ י‬
‫בשברי‬
‫רווי‬
‫מצמחים‬
‫אצות‬
‫פעילות‬
‫ע ל א י י ם של‬
‫אינה‬
‫שונה‬
‫מבלה מ ם‬
‫שברי‬
‫האצות‬
‫פעילות‬
‫פעילות‬
‫נצרכים‬
‫המתקבלים‬
‫א נ ז י פ ט י ת רב‬
‫בשיטת‬
‫השוק‬
‫גוונית‪.‬‬
‫האוספוטי‬
‫כמתואר‬
‫מאפשרת‬
‫בטבלה ‪4‬‬
‫קבלת‬
‫מכילה‬
‫נוזל‬
‫התמצית‬
‫עליון‬
‫קבוצות‬
‫למגי‬
‫ספציפיות של‬
‫אנזימים‬
‫בתפצית‬
‫גלפית‬
‫ספציפית‬
‫נ‬
‫א‬
‫פתאי‬
‫ז‬
‫י‬
‫ם‬
‫םובסטרט‬
‫לשעה‬
‫‪85‬‬
‫ריבולוז‪-‬צ‪,‬‬
‫‪115‬‬
‫פוספואנולפירובט‬
‫‪42‬‬
‫‪5‬‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוספס‬
‫ד ה י ד ר ו ג נ ז )‪(NADP‬‬
‫‪0‬‬
‫תנאי‬
‫עם‬
‫‪.pH‬‬
‫ו‬
‫‪,‬‬
‫כ‪1-‬‬
‫‪.‬א נ ז י מ ט י ו ת‬
‫פכלורופיל בעל‬
‫‪84‬‬
‫עיכוב‬
‫‪-1‬דיפוספט‬
‫גליצרול‪-3-‬פוםפט‬
‫‪0‬‬
‫‪30‬‬
‫גלוקוז‪-6-‬פוספס‬
‫‪45‬‬
‫לקטט‬
‫‪0‬‬
‫פירובט‬
‫כמפורט‬
‫ב צ י ו ר י ם ‪21. , 3 2‬‬
‫ובפרק‬
‫^ז־בוכםילז‬
‫קרבוכםילז‬
‫קינז‬
‫פוספט‬
‫"שיטות"‪.‬‬
‫דיקינז‪.‬‬
‫)‪(NAD‬‬
‫)‪(NAD‬‬
‫חופשי‬
‫־ ‪- 2 8‬‬
‫א נ ז י מ י ם המשחיכים ל כ ל ו ד ו פ ל ס ט ו ק ש ו ר י ם ל פ ו ט ו ס י נ ט ז ה כמו‬
‫שונותן‬
‫וגליצראלדהיד‪-3-‬פוספט‬
‫ופוטוםינטזה‬
‫כמו‬
‫כמו‬
‫הגדלות‬
‫פוספט‬
‫ז ן נ ז י מ י ם המשתיכים ל מ ט ב ו ל י ז ם של ק ר ב ו ה י ד ר ט י ם‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוספט ד ה י ד ר ו ג נ ז‬
‫ריכוז‪-5-‬פוספט איזומרזן‬
‫ולקטט‬
‫)‪j(!NADP‬‬
‫דהידרוגנז‪.‬‬
‫ר י ב ו ל ו ז דיפוספט קרבוקםילז‬
‫)‪;(NAD‬‬
‫א נ ז י מ י ם המשתיכים ל מ ע ג ל ה פ נ ט ו ז ו ת‬
‫ו א נ ז י מ י ם צ י ט ו פ ל ס מ ט י י ם מ ס י ם י ם כמו‬
‫גלוקוז‪6-‬־פוספט דהידרוגנז‬
‫פ ר ו פ י ל פ ע י ל ו ת ה א נ ז י מ י ם ה מ ת ו א ר י ם ד ו מ ה ל פ ד ו פ י ל י ם מאצות י ר ו ק ו ת אחרות‬
‫ב ת נ א י ם פ ו ט ו א ו ט ו ט ר ו פ י י ם ) ‪ ( 5 9‬ההבדל ה ב ו ל ט ה ו א ב פ ע י ל ו ת ה נ מ ו כ ה של‬
‫דהידרוגנז ) ‪ (NADP‬ב‪-‬‬
‫ע ל י ה נ ד ו ן בהרחבה בהמשך־‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬‬
‫פעילות שני‬
‫אנזימי‬
‫ו•‬
‫הקרבוכסילציה‬
‫ר י ב ו ל ו ז ד י פוספט ק ר ב ו ק ס י ל ז‬
‫ו פ ו ס פ ו א נ ו ל פ י ר ו ב ט ק ר ב ו ק ס י ל ז ה י א ב א ו ת ו סדר ג ו ד ל‬
‫אך ח ו ס ר כל פ ע י ל ו ת של פ י ר ו ב ט פ ו ס פ ט ‪ .‬ד י ק י נ ז‬
‫מחזרות‬
‫ג־‬
‫‪ C 0 2‬ל ק ר ב ו ה י ד ר ט י ם דרך מעגל‬
‫קלוין־‬
‫פ ע י ל ו י ו ת " כ ל ו ר ו פ ל ט ט י ם שלמים"‬
‫השברים של‬
‫דו‪-‬חמצני‪.‬‬
‫ניסינו‬
‫‪ D. parva‬אשר ה ו כ נ ו ע ״ י‬
‫ל ז לפחח ט י פ ו ל ע ד י ז‬
‫כ‬
‫ל ל א הריסת י כ ו ל ת ם לקבע פחמן‬
‫בתמיסת ‪ 3 5‬״ ‪ 0‬מ ו ל ד ם ו ר ב י ט ו ל ‪.‬‬
‫יכונו‬
‫" כ ל ו ר ו פ ל ט ט י ם " של‬
‫ל פ ל ו ט חמצן ו ל ק ב ע פחמן‬
‫גם‬
‫) ‪ ( 6 0‬באקםטרקט‬
‫‪ D. parva‬מרמז כ י האצות‬
‫כלורופלםטים‬
‫הכלורופלםטים‬
‫טריס‪,‬‬
‫י ו ת ר אשר יאפשר כ נ י ס ת מ ק ב ל י א ל ק ט ר ו נ י ם לתאים‬
‫צ י ו ר ‪ 7‬מתאר קבלת מצב ד ו מ ה כאשר התאים ה ו ר ח פ ו‬
‫על מנת ל ה ב ד י ל ב י ן תאים מ ט ו פ ל י ם א ל ו‬
‫‪ D . parva‬־‬
‫דו‪-‬חמצני‪,‬‬
‫כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם א ל ו חסרו‬
‫ו ש ב ר י ם של‬
‫דו‪-‬חמצני־‬
‫פ י צ ו ץ א ו ס מ ו ט י ‪ ,‬כ מ ת ו א ר ‪ ,‬לא י כ ל ו לקבע פחמז‬
‫ב כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם א ל ו נ ש א ר י ם ‪ 10$‬לערך מ פ ע י ל ו ת התאים‬
‫ו ע ם זאח י כ ו ל ח ח י ז ו ר פ ר י צ י א נ י ד ש ו ו ה ל ז ו של שברי א צ ו ת ‪.‬‬
‫היכולת לחזר‬
‫‪.NADP‬‬
‫חוסר האפשרות ל ח י ז ו ר‬
‫‪ D. parva‬י ד ו ן בהרחבה ל ה ל ן ‪.‬‬
‫ב מ ד י ו ם ה מ כ י ל ם ו ר ב י ט ו ל ‪ ,‬ם נ י ט ו ל או‬
‫ט ר י ס י ן או פוספט ב־־‪6‬־‪7‬‬
‫‪• pH‬‬
‫ל ב י ן שברי האצות הם‬
‫‪ N A D P‬של‬
‫לא נ ר א ו ה ב ד ל י ם ב פ ע י ל ו ת‬
‫ג ל י צ ר ו ל עם ב ו פ ר י ם ש ו נ י ם כ מ ו‬
‫‪HEPES‬‬
‫‪- 29 -‬‬
‫‪u‬‬
‫‪a‬‬
‫‪E‬‬
‫‪E‬‬
‫‪5.0‬‬
‫«‬
‫‪o‬‬
‫‪E‬‬
‫‪4.0‬‬
‫ס־‬
‫>‪a‬‬
‫‪o‬‬
‫‪3‬‬
‫>‪a‬‬
‫‪3.0‬‬
‫‪-‬‬
‫>‪a‬‬
‫סי‬
‫‪c‬‬
‫‪o‬‬
‫‪>s‬‬
‫‪a‬‬
‫‪'E‬‬
‫‪2.0‬‬
‫‪/‬׳‪/‬‬
‫‪/‬‬
‫‪fixation‬‬
‫<י• ‪ion‬‬
‫‪2‬‬
‫‪0.6‬‬
‫‪C0‬‬
‫‪0‬‬
‫)‪Time (min.‬‬
‫ו ח ז ו ר פ ר י צ י א נ י ר " ב ב ל ו ר ו פ ל ס ט י ם " של‬
‫פליטת ח מ צ ן ‪ .‬ק י ב ו ע ‪C Q 2‬‬
‫צ י ו ר מ ס ‪;7‬‬
‫‪ 0.35‬מ ו ל ר ם ו ר ב י ט ו ל ‪,‬‬
‫תערוב!‪ :‬הראק^יה )‪ 3‬מ ל י ( לפליטת חמצן ה כ י ל ה ‪:‬‬
‫‪2MnCI‬‬
‫‪HEPES,p H 7.6‬מ י ל י מ ו ל ר ‪ 1 , M g C I 2‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‪,‬‬
‫טילימולר‬
‫‪ D. parva‬המכילים‬
‫ו‪-‬‬
‫‪HCO3‬‬
‫‪ ^^02C‬ה כ י ל ה ב נ ו ס ף‬
‫‪.‬‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל ת ע ר ו ב ת הראקציה ל ק י ב ו ע‬
‫ב י ק ר ב ו נ ט ת ע ר ו ב ת הראקציה ל ח י ז ו ר פ ר י צ י א נ י ד ה כ י ל ה בנוסף‪.‬‬
‫‪pc‬‬
‫‪C1.0‬‬
‫פרטים נ ו ט פ י ם כ מ צ ו י ן " ב ש י ט ו ת " ‪.‬‬
‫‪ 0.5‬מ י ל י מ ו ל ר פ ר י צ י א נ י ד ללא ב י ק ר ב ו נ ט ‪.‬‬
‫‪,‬‬
‫רוגרם‬
‫־ ‪30‬‬
‫האם‬
‫‪.3‬‬
‫‪NADP‬‬
‫כפי‬
‫תכשירים‬
‫נדון‬
‫ה ו א ח ו מ ר ב י נ י י ם הכרחי‬
‫ח ו פ ש י ם מתאים ל ח ז ר‬
‫נםיונות‬
‫יתוארו‪.‬‬
‫ש‬
‫‪NADP‬‬
‫ל‬
‫על‬
‫‪ N A D P‬ב פ ו ט ו ס י נ ט ז ה בכלל ו ב א צ ה‬
‫ב ש נ י ‪ ,‬הבדלה ב י ן השפעת מעכב ס פ צ י פ י על התפתתות‬
‫באצה‬
‫שלשה‬
‫בפרט‪.‬‬
‫ד ו ‪ -‬ת מ צ נ י בשברי‬
‫י כ ו ל ת ה פ ו ט ו ם י נ ט ז ה ל ב י ן השפעתו‬
‫‪ Euglena‬אשר ה ו ע ב ר ה מ ת נ א י חושך ל א ו ר ‪.‬‬
‫‪NADP‬‬
‫ובשלישי‪,‬‬
‫באצות שלמות?‬
‫השפעת מעכבים‬
‫‪DSPD‬‬
‫בפרדוקסין‬
‫י ד ו ע כמעכב ח י ז ו ר ב א ו ר של‬
‫)‪.(34‬‬
‫הראשונה ל ב י ן‬
‫)‪.(34‬‬
‫‪DSPD‬‬
‫ב י ן מערכה‬
‫צ י ו ר ‪ 8‬מתאר את ע י כ ו ב ה ח י ז ו ר ב א ו ר של פ ר ד ו ק ס י ן‬
‫כ‪ 50?4-‬ע כ ו ב נראה ב ס ב י ב ו ת‬
‫של ת י ז ו ר ב א ו ר של צ ב ע י ם בעלי‬
‫המוצע ל ‪-‬‬
‫‪NADP‬‬
‫ו ר א ק צ י ו ח א ו ר אחרות ה ת ל ו י ו ת‬
‫מאחר ו ל א נמצא ע י כ ו ב של ת י ז ו ר נ י ט ר י ט נקבע אתר פ ע ו ל ת ו‬
‫ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם מחסה‪.‬‬
‫העיכוב‬
‫בפרק זה‬
‫ב י ן מערכת א ו ר ה ר א ש ו נ ה‬
‫‪ N A D P‬ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם ו ב ק י ב ו ע פחמן‬
‫בדיקת השאלה האם נ י ת ן ל ע ק ו ב אחר ח י ז ו ר ב א ו ד של‬
‫אור‬
‫ב ר א ש ו ן ‪ ,‬השפעת מעכבים אשר אתר פעולתם הוא‬
‫אינדוקציה אנזים תלוי ב‪NADP -‬‬
‫א‪.‬‬
‫ה י א ח ו ס ר ה י כ ו ל ה של‬
‫ו ל ק י י ם שאד ר א ק צ י ו ת א ו ר ת ל ו י ו ת ב פ ר ד ו ק ט י ן ‪.‬‬
‫י־״ ‪ , N A D P‬בהקבלה על ח י ז ו ר ב א ו ר של‬
‫אצות‪.‬‬
‫בפוטוםינטזה?‬
‫ש ר א י נ ו אחת ה ת כ ו נ ו ת ה י ו צ א ו ח ד ו פ ן באצה‬
‫בדרישה ל ת י ז ו ר ב א ו ר‬
‫טיפוסי‬
‫־‬
‫‪ 0.1‬ב מ י ל י מ ו ל ר ‪.‬‬
‫פ ו ט נ צ י א ל נ מ ו ך כמו‬
‫מאתר ו ל א נראה כל ע י כ ו ב‬
‫‪ D i q u a t‬ת ו צ א ו ת א ל ו מאשרות את אתר‬
‫ב י ן מערכת האור ה ר א ש ו נ ה ל ב י ן ‪ ,‬פ ר ד ו ק ס י ן ‪.‬‬
‫לעומת ז א ת ‪ ,‬ה ת ו צ א ו ת‬
‫הבאות מראות כי אתר ה ע י כ ו ב ה ו א פ ד ד ו ק ס י ן עצמו ו ל א אתר ק ו ד ם כ פ י ש ה נ י ח ו אחרים‬
‫ה ת י ז ו ר ה א נ ז י מ ט י של צ י ט ו כ ר ו ם‬
‫פרדוקסין‪-‬‬
‫‪ C‬ע״י‬
‫‪- NADP‬רדוקטז‬
‫‪61‬‬
‫( ‪ , ( N A D P H‬ה ד ו ר ש השתתפות פ ל ב ו פ ר ו ט א י ן‬
‫ו פ ר ד ו ק מ י ן ‪ ,‬רגיש לגמרי‬
‫ה ד ו ר ש רק את ה פ ל ב ו פ ר ו ט א י ן א י נ ו מושפע ל כ ל ל‬
‫)‪.(34‬‬
‫ל‪-‬‬
‫)ציור ‪.(9‬‬
‫‪ , D S P D‬ב ע ו ד שזה של‬
‫‪,DCIP‬‬
‫ ו כ ‬
‫ס‪!.‬‬
‫‪0‬‬
‫‪0 . 5‬‬
‫)‪Sulfo-DSPD concentration (mM‬‬
‫ציור‬
‫מס‬
‫‪,‬‬
‫‪;8‬‬
‫‪ s u l f o DSPD‬ע ל‬
‫השפעת‬
‫תערובת‬
‫‪25‬‬
‫‪7.8‬‬
‫‪pH‬‬
‫מחסה‬
‫הפעילות‬
‫ל ‪-‬‬
‫מהגדרת כ ר מ ת‬
‫‪A A‬‬
‫‪3‬‬
‫‪1 0‬‬
‫הראקןציה‬
‫‪F‬‬
‫הכילה‬
‫החיזור‬
‫בנפח‬
‫כ ו ל ל של ‪ 3‬מ ל י ‪:‬‬
‫המכילים ‪53‬‬
‫חיזור‬
‫הפרדוקסין ב ‪-‬‬
‫של‬
‫‪2.5‬‬
‫באור של‬
‫פרדוקםיז‬
‫‪25‬‬
‫‪NaCI,4 . 5‬מ י ק ר ו מ ו ל ר‬
‫פרטים‬
‫םילימולר‬
‫נוספים‬
‫בופר‬
‫וכלורופלםטים‬
‫מתוארים‬
‫"בשיטות"‪.‬‬
‫‪ s t e a d ystate.1 0 0 $‬־ מתיחס‬
‫‪x‬‬
‫ב‪nm497-‬‬
‫מינוס‬
‫וחח‪.540‬‬
‫ו‬
‫‪- 32 -‬‬
‫)‪Sulfo-DSPD concentration (mM‬‬
‫ול‪-‬‬
‫‪40‬‬
‫‪C‬‬
‫‪ s u l f a DSPD‬על מעבר א ל ק ט ר ו נ י ם ‪ N A D P H - a‬ל צ י ט ו ב ר ו ם‬
‫צ י ו ר מ ם ' ‪ :9‬השפעת‬
‫‪ 25‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ם י ן ‪,‬‬
‫תערובת הראקציה ה כ י ל ה בנפח ס ו פ י של ‪ 3.0‬מ ל י ‪:‬‬
‫פלבופרוטאין‬
‫;‬
‫; ‪N A D P H N a C I‬‬
‫‪ D C I P‬או ‪ 3.5‬מ י ק ר ו מ ו ל ר צ י ט ו כ ר ו ם ‪C‬‬
‫מ נ ו ק ה בחלקו ו ‪ 2 0 -‬מ י ק ר ו מ ו ל ר‬
‫‪DCIP‬‬
‫פ ע י ל ו ת בת ״‪ 100/‬מתיחםת ל ‪ 8 -‬נ נ ו מ ו ל י ם‬
‫ו‪ 3-‬מיקרומולר פרדוקםין‪.‬‬
‫‪ C‬שהתחזרו ל ד ק ה ‪.‬‬
‫שהתחזרו לדקה או ס ו נ נ ו מ ו ל י ם צ י ט ו כ ר ו ם‬
‫בריכוזי‬
‫‪DSPD‬‬
‫ה ד ר ו ש י ם ל‪-‬־‪ 50?£‬ע י כ ו ב של ה ר א ק צ י ו ת ה ת ל ו י ו ת ב פ ר ד ו ק ם י ן לא‬
‫נראתה כל השפעה על פליטת חמצ‪ ^/‬פ ו ט ו ם י נ ט ט י בתאי‬
‫‪ ) D. parva‬צ י ו ר‬
‫‪.(10‬‬
‫‪DCIP‬‬
‫‪33 -‬‬
‫ציור‬
‫השפעת‬
‫מטי* ‪; 1 0‬‬
‫תערובת‬
‫‪25‬‬
‫על‬
‫‪DSPD‬‬
‫פליטת‬
‫בנפח‬
‫חמצז‬
‫כ ו ל ל של‬
‫‪7.6‬‬
‫‪-‬‬
‫ב‪-‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫‪ 2.5‬מ ל י‬
‫הכילה‪:‬‬
‫‪pH‬‬
‫ותאי‬
‫‪1.5‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫מולר‬
‫ה מ כ י ל י ם ‪54‬‬
‫מיקרוגרמים‬
‫ז ה בהתאמה ע ם‬
‫הרווחים על‬
‫פירופיםפט‬
‫עצמו‬
‫)‪,37‬‬
‫כמתואר‬
‫‪,(36‬‬
‫בציור ‪11‬‬
‫נמצא‬
‫ולכן‬
‫השפעות‬
‫דומות של‬
‫מעכב ז ה‬
‫באצות‬
‫מעכב כ ל‬
‫בפרדוקםין‬
‫תואר‬
‫פירופםפט‬
‫כמעכב‬
‫האנטראקציה של‬
‫מעכב ג ם‬
‫חיזור‬
‫פרדוקםין‬
‫‪ NADP‬ו ג ם‬
‫אחרות‬
‫)‪.(62‬‬
‫מלבד‬
‫מחוזר עם‬
‫חיזור‬
‫חיזור‬
‫הפלבופרוטאין‪.‬‬
‫בשיעור‬
‫דומה‪.‬‬
‫‪r‬‬
‫—‬
‫— ‪1 0 0 S — 8‬‬
‫‪c‬‬
‫‪o‬‬
‫‪o‬‬
‫‪o‬‬
‫‪50‬‬
‫‪F e r r edoxin‬‬
‫‪#‬‬
‫‪0‬‬
‫\‬
‫\‬
‫^ \‬
‫‪°‬‬
‫‪NADP‬‬
‫‪o‬‬
‫<‬
‫‪60‬‬
‫‪70‬‬
‫‪50‬‬
‫‪30‬‬
‫‪40‬‬
‫) ‪concentration ( m M‬‬
‫צ י ו ר מם‬
‫של‬
‫‪3‬‬
‫־‪10‬‬
‫מכאן‬
‫‪Pyrophospate‬‬
‫‪NADP‬‬
‫‪ :11‬השפעת פ י ר ו פ ו ם פ ט על ח י ז ו ר ב א ו ר של פ ר ד ו ק ם י ן ו ‪-‬‬
‫‪ 25‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ם י ן ‪,‬‬
‫תערובת הראקציה ה כ י ל ה בנפח כ ו ל ל של ‪ 3‬מ ל י ‪:‬‬
‫‪ , N a C I‬כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם מחסה ה מ כ י ל י ם ‪42‬‬
‫‪pH,25‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‪7.8‬‬
‫מ י ק ר ו ג ר מ י ם כ ל ו ר ו פ י ל ו ‪ 4 . 5 -‬מ י ק ר ו מ ו ל ר פ ר ד ו ק ם י ן או ‪ 0.1‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫פ ע י ל ו ת בת ‪ 100%‬מתיחסת ל ‪A A -‬‬
‫‪ N A D P‬ו‪ 4.5-‬מיקרומולר פרדוקםין‪.‬‬
‫‪ 5 4 0 x‬־ ‪ ,nm497‬או ל ־ ‪ 1 2 0‬מ י ק ר ו מ י ל ‪N A D P :‬‬
‫‪ 2‬ב־וחח‬
‫שהתחזרו ל מ ג י כ ל ו ר ו פ י ל לשעה‪.‬‬
‫ש פ י ר ו פ ו ם פ ט מתקשר י ש י ר ו ת עם‬
‫דו‪-‬חמצני‬
‫‪20‬‬
‫‪1‬‬
‫‪10‬‬
‫בתכשירי‬
‫כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם של‬
‫פרדוקטין‪.‬‬
‫כלורופלםטיס )‪, ( 6 3 - 65‬‬
‫פ י ר ו פ ו ם פ ט נמצא מ ז ר ז ו ל א מעכב ק י ב ו ע‬
‫ו נ י ג ו ד זה כבר ה ו ז כ ר‬
‫)‪.(37‬‬
‫גם בפרפרט‬
‫לא נראתה כל השפעה של פ י ר ו פ ו ם פ ט על פליטת ח מ צ ן ‪.‬‬
‫פחמן‬
‫‪-‬‬
‫‪P-ADPR‬‬
‫כמתואר‬
‫‪- 35‬‬
‫תואר כמעבב ס פ צ י פ י של ה פ ל ב ו פ ר ו ט א י ן‬
‫פרדו^סין‬
‫‪ - N A D P -‬רדוקטז‬
‫)‪.(66‬‬
‫ב צ י ו ר ‪12‬‬
‫צ י ו ר מטי‬
‫תערובת הראקציה‬
‫‪;12‬‬
‫(‬
‫‪ D C | P‬ב ב ל ו ר ו פלסטינו של‬
‫‪ p-ADPR‬על ח י ז ו ר‬
‫השפעת‬
‫‪HEPES, 7.6‬‬
‫‪pH‬‬
‫^ ^‬
‫‪ 50‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫מלי‪)3‬הכילה‪:‬‬
‫‪MnCI2,0.33‬מ ו ל ר ם ו ר ב י ט ו ל ‪,‬‬
‫‪ 1‬מילימולר ‪ I MgCI2‬מילימולר‬
‫‪ 50‬מ י ק ר ו ג ר נ ו א י ז ו צ מ ר ט ד ה י ד ר ו ג נ ז ‪,‬‬
‫איזוציטרית‪,I‬‬
‫‪ I‬מ י ל י מ ו ל ר חומצה‬
‫‪ D. p a r v a‬ה מ כ י ל י ם‬
‫מ י ק ר ו מ ו ל ר ‪ N A D P‬ותאי‬
‫‪DCIP.3.3‬‬
‫‪ 12‬מ י ק ר ו מ ו ל ו‬
‫ה י כ ן ש מ צ ו י ן הוסף ‪ 0.13‬מ י ל י מ ו ל ר ‪. P - A D P R‬‬
‫‪ 11.4‬מיקרן^גרם כ ל ו ר ו פ י ל ‪.‬‬
‫פעילות‬
‫התקבל‬
‫מסלק‬
‫הפלבופרוטאין‬
‫ב כ ל ו ר ו פ ל ם מ י ם על‬
‫בחיזור ציטוכרום‬
‫עלים‬
‫‪ C‬עם פ ל ב ו פ ר ו ט א י ן‬
‫‪•P-ADPR‬‬
‫ע ו כ ב ה על‬
‫ב כ ל ו ר ו פ ל ם ט י ם של‬
‫ע י כ ו ב דומה‬
‫‪ D. parva‬בתוספת פ ר ד ו ק ם י ן‬
‫) צ י ו ר ‪.(13‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫ו‬
‫‪1‬‬
‫‪Control‬‬
‫ו‬
‫ו‬
‫ו‬
‫‪y‬‬
‫—‬
‫‪5‬‬
‫—‬
‫‪4‬‬
‫‪CO‬‬
‫<נ>‬
‫‪(nm‬‬
‫—‬
‫‪o‬‬
‫‪C‬‬
‫‪3‬‬
‫—‬
‫‪+ P-ADPR‬‬
‫׳ ׳ ‪/‬‬
‫‪o‬‬
‫‪o‬‬
‫‪3‬‬
‫כד‬
‫‪a‬‬
‫>‪k.‬‬
‫‪O‬‬
‫>‪a‬‬
‫‪E 2‬‬
‫—‬
‫‪o‬‬
‫‪x:‬‬
‫‪w‬‬
‫‪1‬‬
‫—‬
‫‪1‬‬
‫‪8‬‬
‫‪1‬‬
‫‪7‬‬
‫‪1‬‬
‫‪6‬‬
‫ו‬
‫‪5‬‬
‫‪1 1‬‬
‫‪+ D. parva‬‬
‫‪1‬‬
‫‪4‬‬
‫‪3‬‬
‫‪2‬‬
‫‪o‬‬
‫‪o‬‬
‫‪/ /‬‬
‫‪T‬״>‬
‫‪1‬‬
‫‪Ci‬‬
‫‪0‬‬
‫)‪Time (min.‬‬
‫צ י ו ר מם־* ‪:13‬‬
‫בריכוזים‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫‪ C‬ב ב ל ו ר ו פ ל ס ט י ם של‬
‫‪ADPR‬־‪ P‬על ח י ז ו ר צ י מ ו ב ר ו ם‬
‫השפעת‬
‫‪ D C I P‬כמתואר ב צ י ו ר ‪ 12‬ו ה ש י נ ו י י ם ה ב א י ם ‪:‬‬
‫תערובת הראקציה ללא‬
‫‪ 0.5‬מ י ל י מ ו ל ר ‪N A D P‬‬
‫‪C,3‬מ י ק ר ו מ ו ל ר פ ר ד ו ק ם י ן ‪,‬‬
‫‪ 11‬מ י ק ר ו מ ו ל ר צ י ט ו כ ר ו ם‬
‫ה י כ ן ש מ צ ו י ן הוסף‬
‫‪ D . p a r v a‬ה מ כ י ל י ם ‪ 8.8‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ‪.‬‬
‫ותאי‬
‫‪. P-ADPR‬‬
‫‪ 0.65‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫המעכבים ראקציו*ן ה ת ל ו י ו ת ב פ ל ב ו פ ר ו ט א י ן ‪,‬‬
‫ה כ ל ו ר ! פלסטי ם לקבע פחמן‬
‫דו‪-‬חמצני‬
‫ולפלוט חמצן‪.‬‬
‫‪ P-ADPR‬א י נ ו תשפיע על‬
‫יכולח‬
‫ ד ב ‬
‫ב״‬
‫‪ DSPD‬על התפתחות ה פ ו ט ו מ י נ מ ז ה‬
‫השפעת‬
‫ב‪-‬‬
‫תלויות‬
‫)‪,67‬‬
‫התלוי‬
‫‪(50‬״‬
‫לכן‬
‫עיכוב‬
‫קטן‬
‫נ י ת ן לעכב י צ י ר ת א נ ז י ם ה ת ל ו י‬
‫צ י ו ר ‪ 14‬מתאר כ י עם נ ו כ ח ו ת‬
‫לעומת זאת פ ע י ל ו ת‬
‫עוכבה בצורה חזקה‪.‬‬
‫מיקרואטומים‬
‫‪ N A D P‬י ע כ ב גם את א י נ ד ו ק צ י ה‬
‫‪in v i v o‬‬
‫ה נ ס י ו ן נערך‬
‫‪ DSPD‬רק‬
‫לא נראה כל ע י כ ו ב‬
‫לגליצראלדהיד‪-3-‬פוספט דהידרוגנז‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוםפט ד ה י ד ר ו ג נ ז התלויה ב‪-‬‬
‫כך ב ת נ א י ם א ל ו התאים י כ ל ו‬
‫‪NADP‬‬
‫ל ק י י ם פ ו ט ו ס י נ ט ז ה ב ש י ע ו ר של ‪390‬‬
‫חמצן נ פ ל ט ל מ י ל י ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל לשעה ב ע ו ד ש פ ע י ל ו ת‬
‫ה ת ל ו י ה ‪ N A D P - o‬היתה ‪ 120‬מ י ק ר ו מ ו ל י ם של‬
‫לשעה‪.‬‬
‫ולכן‬
‫ר י כ ו ז מתאים של‬
‫נראה על י צ י ר ת כ ל ו ד ו פ י ל לתא ו י כ ו ל ת פ ו ט ו ם י נ ט ט י ת ל ת א ‪.‬‬
‫של ה י כ ו ל ת ה פ ו ט ו ס י נ ט ט י ת ה נ ו צ ר ת ל מ י ל י ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל או‬
‫התלוי‬
‫נצפה‬
‫ד ה י ד ר ו ג נ ז ) ‪ ( N A D P‬ללא ע י כ ו ב ה פ ו ט ו ם י נ ט ז ה ‪.‬‬
‫כמעכב ס פ צ י פ י ‪.‬‬
‫ב‪.NAD -‬‬
‫וליצירת הכלורופיל‬
‫ב ‪ N A D P H -‬ללא ע י כ ו ב ה פ ו ט ו ס י נ ט ז ה ״‬
‫‪ DSPD‬מהמעכבים ה נ ת ו נ י ם ח ו ד ר לתאים שלמים‬
‫‪DSPD‬‬
‫י צ י ר ת ‪ N A D P H‬א י נ ה מ ה ו ו ה דרישה הכרתית‬
‫כ י תוספת אחד פהמעכבים ה נ ת ו נ י ם למעלה המעכב ח י ז ו ר‬
‫רק‬
‫פעילות‬
‫ב ‪ N A D P -‬מופיעה באופן מקביל ל י כ ו ל ת ה פ ו ט ו ם י נ ט ט י ת‬
‫ג'ליצראלדהיד‪-3-‬פוספט‬
‫עם‬
‫‪ Euglena‬ה ג ד ל י ם בחושך ל א ו ר נמצא כי‬
‫א ם ‪ ,‬כפי שמראות ת ו צ א ו ת י נ ו ‪,‬‬
‫לפוטוסינטזה‪,‬‬
‫ופעילויות‬
‫‪NAD(P) :‬‬
‫עם העברת תאי‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוספמ דהידרוגנז‬
‫‪ N A D P H‬המחחמצנים ל מ י ל י ג ר ם‬
‫‪-‬‬
‫‪50‬‬
‫‪40‬‬
‫‪30‬‬
‫‪20‬‬
‫‪10‬‬
‫‪-‬‬
‫‪38‬‬
‫‪40‬‬
‫‪0‬‬
‫)‪(hours‬‬
‫ציור‬
‫‪30‬‬
‫‪20‬‬
‫‪10‬‬
‫‪0‬‬
‫‪Time‬‬
‫‪ DSPD‬על י צ י ר ת ב ל ו ר ו פ י ל ‪ ,‬ג ל י צ ר א ל ד ה י ד ‪ - 3 -‬פ ו ס פ ט ד ה י ד ר ו ג נ ז ו ת‬
‫השמעת‬
‫מסי ‪: 1 4‬‬
‫ה ת ל ו י ו ת ב ‪ N A D P -‬א ו ב ‪ N A D -‬ו י כ ו ל ת פ ו ט ו ס י נ ט ט י ת בזכיז הארת ס ו ם פ נ ם י ת‬
‫‪ E. q r a c i l l i s‬המועברת מ ת נ א י חוי‪:‬סר‪.‬‬
‫מ י ל י מ ו ל ר ‪ft,Tris.7pH :><5‬‬
‫מ ד י ו ם הבדיקה ל א נ ז י מ י ם ה כ י ל‬
‫מ י ל י מ ו ל ר‪DTT,0.16ATP‬‬
‫‪, 3‬‬
‫‪04MgS,1.2‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‪NADH,4 . 5‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ח ‪ .‬פ ו ם ר י ו ג ל י צ ר י ת ‪ ,‬כמות‬
‫^ ^ • " • ^ ‪ N A D P R‬אי‬
‫לפרטים נ ו ס פ י ם‬
‫‪. Euglena‬‬
‫מ ר ו ו ה של פ ו ס פ ו ג ל י צ ר ט ק י נ ד ו ת מ צ י ת מת •י! י‬
‫ראה " ש י ט ו ת " ‪.‬‬
‫‪t‬‬
‫<‬
‫־ ‪ 3 9‬־‬
‫שינויי‬
‫ג‪.‬‬
‫פ ל ו ר ו ס נ צ י ה כ ח ו ל ה ת ל ו י ה ב א ו ר באצווז שלמות‬
‫עם הארת ס ו ם פ נ ם י ת תאים שלמים של‬
‫נראית‬
‫ע ל י ה מ ח ז ו ר י ת ב פ ל ו ר ו ם נ צ י ה בחולה עד לרמה קבועה ו ה ח ז ר ה לרמת החושך ה ר א ש ו נ י ת‬
‫עם כ י ב ו י ה א ו ר‬
‫ציור‬
‫‪ D. parva‬באור אפקטיבי‬
‫לפוטוטינטזה‬
‫) צ י ו ר ‪.(15‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫ש י נ ו י י פ ל ו ר ו ס נ צ י ה כ ח ו ל ה ב א ו ר בתאים שלמים של‬
‫מ ס ‪;15‬‬
‫‪NaCI,25‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס י ר‬
‫תערובת הראקציה ) ‪ 3‬מ ל י ( ה כ י ל ה ‪ 1.5‬מ ו ל ר‬
‫‪ D. p a r v a‬ה מ כ י ל י ם ‪ 30‬מ י ק ר ו ג ך ם כ ל ו ר ו פ י ל ל מ ל מ ת א רי'|‬
‫‪ 7.4pH‬ו ת א י‬
‫^ ^‪x3.5 10‬‬
‫ע‬
‫‪RG‬‬
‫הארת האצות ב א ו ר מעל ‪ nm645‬דרך פ י ל ט ר‬
‫‪ . S c h o t l‬מתאר כ י ב ו י ה א ו ר ‪.‬‬
‫א ר ג י ם ל ם " ‪ 2‬ל ש נ י ה ‪ ,‬תוצרת‬
‫‪,‬‬
‫ב‬
‫פ‬
‫ו‬
‫צ‬
‫מ‬
‫ה‬
‫ ‪- 40‬‬‫ז ו כבר‬
‫תופעה‬
‫וכפי‬
‫מאחר‬
‫מעניין‬
‫מראים‬
‫כמדד‬
‫ה ו ב ח נ ה באצות שלמות‬
‫שראינו‬
‫ל ב ד ו ק האם‬
‫שינויי‬
‫לחיזור‬
‫‪SI(70-‬‬
‫‪P‬‬
‫בולט ב י ן שני‬
‫ניחן‬
‫ח ו פ ש י ו ת מתאים של‬
‫לעקוב אחר‬
‫פלורוםנציה כחולה‬
‫חיזור‬
‫לחיזור‬
‫‪ NADP‬באור‬
‫ט י פ ו ס י י ם ע ו ר ר ה השגות‬
‫אינן‬
‫באצות‬
‫ולחימצונו‬
‫‪NADP‬ב‪K‬ור‬
‫מחזרות‬
‫שלמות‪.‬‬
‫ל ג ב י שיטת‬
‫ה ע ו ב ד ה שתאי‬
‫הפלורוםנציה‬
‫ציור‬
‫האצות‬
‫הוארו‬
‫מס י‬
‫באור‬
‫הכחולה‬
‫בציור‬
‫(‬
‫‪,‬‬
‫‪15DCMU‬‬
‫עיכבו‬
‫המעכבים‬
‫ו‪-‬‬
‫ל ג מ ר י את‬
‫)ציור ‪,(16‬‬
‫‪,DBMIB‬‬
‫העליה‬
‫המעכב מעבר‬
‫אלקטרונים‬
‫ב פ ל ו ר ו ם נ צ י ה ‪ ,‬אך תאור‬
‫בעוד ש‪DBMIB-‬‬
‫מראה עקומה‬
‫פוטוםנטטי‬
‫עקומות‬
‫נורמלית‬
‫ב י ‪PS I I 7‬‬
‫ה ר י כ ו ז י ם מראה הבדל‬
‫מטיפוס‬
‫‪S‬‬
‫) ‪DCMU,DBMIB ( M‬‬
‫‪:16‬‬
‫היה‬
‫‪•N A D P‬‬
‫כמתואר‬
‫‪68‬‬
‫פרפרציות‬
‫שונות‬
‫ויוחסה‬
‫‪NADP‬‬
‫באור‬
‫בחושך‬
‫)‪.(41‬‬
‫השפעת‬
‫תאי‬
‫תערובת‬
‫‪640‬‬
‫לפרטים‬
‫‪DCMU‬‬
‫או‬
‫‪ D B M I B‬על רמת‬
‫העליה‬
‫בפלורוםנציה‬
‫ה ב ת ו ל ה בהארת‬
‫ה ר א ק צ י ה כ מ ת ו א ר ב צ י ו ר מ ם ' ‪ 15‬ע ם ר י כ ו ז י ה מ ע כ ב י ם ה נ ת ו נ י ם ‪.‬‬
‫ארגיט לס״מ״ לשניה‪.‬‬
‫‪x‬‬
‫‪7.5‬‬
‫ב ע ו צ מ ה של '‪10‬‬
‫‪nm‬‬
‫נ ו ס פ י ם ראה " ש י ט ו ת "‬
‫י‬
‫‪DCMU^n‬‬
‫ ‪11‬׳ ‪-‬‬‫בריכוזים‬
‫האור‬
‫ג ב ו ה י ם הישרה ה י פ ו ך פזת ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה ל י ר י ד ה ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה עם הדלקת‬
‫)ציור ‪.(17‬‬
‫אפקס דומה התקבל עם הקרנת א ו ר א ד ו ם ‪ -‬ר ח ו ק של‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫ש י נ ו י י ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה ה כ ח ו ל ה ב א ו ר א ד ו ם ו ב א ו ר א ד ו ם ‪ -‬ר ת ו ק בחאי‬
‫צ י ו ר מ ם ‪;17‬‬
‫בעוצמה של‬
‫‪nm‬‬
‫‪640‬‬
‫האצות ה ו א ר ו ב א ו ר‬
‫תערובת הראקציה כמו ב צ י ו ר ‪.15‬‬
‫‪x‬‬
‫‪2.8‬‬
‫א ר ג י ם ל ם ״ מ ל ש נ י ה ‪ ,‬או באורוזזוו ‪ 715‬בעוצמה של ‪1 0‬‬
‫‪x‬‬
‫‪7.5‬‬
‫ארגים ן י ״ ‪ 2‬לשניה‪.‬‬
‫‪,‬‬
‫‪4‬‬
‫‪10‬‬
‫ווווו‪ ,715‬כאשר ה י ר י ד ה‬
‫‪2‬‬
‫ס‬
‫בפלורוםנציה‬
‫‪4‬‬
‫מ‬
‫הכחולה מעוכבת על י ד י‬
‫‪ ) DBMIB‬צ י ו ר‬
‫‪.(18‬‬
‫‪-‬‬
‫)‪(M‬‬
‫ציור‬
‫הוארו‬
‫‪DCMU , DBMIB‬‬
‫השפעת ‪ D C M U‬או‬
‫מ ם ‪:18‬‬
‫‪715‬באור ‪nm‬‬
‫תערובת הראקציה כמו ב צ י ו ר ‪ 15‬בתוספת‬
‫‪x‬‬
‫‪2.8‬‬
‫בעוצמה ל ‪104‬‬
‫‪nm‬‬
‫‪715‬‬
‫‪ D B M I B‬על רמת ה י ר י ד ה‬
‫‪,‬‬
‫באור‬
‫ש‬
‫תופעה‬
‫ז ו של השרית‬
‫‪DCMU‬‬
‫ירידה‬
‫א י נ ה תואמת את ההנחה כ י‬
‫ל‪-‬‬
‫‪?I‬כמו‬
‫צ י ט ו כ ר ו ם ‪f (49‬‬
‫לדעתנו‬
‫בלתי‬
‫שינויי‬
‫י ד ו ע ה הממוקמת‬
‫מתארת‬
‫חימצונה‬
‫הכחולה‬
‫)ציור ‪.(17‬‬
‫ר י כ ו ז י המעכבים ה נ ת ו נ י ם ‪.‬‬
‫ארגים ל «י ‪ 2‬לשניה‪.‬‬
‫ס‬
‫האצות‬
‫ם‬
‫שינויי‬
‫ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה מתארים ח ז ו ר ‪. N A D P‬‬
‫(‬
‫‪.‬‬
‫‪PS I I‬‬
‫ל ‪. PS I -‬‬
‫ו א י ל ו הקרנת א ו ר‬
‫העל‪,‬יה‬
‫אין‬
‫ו ח י ז ו ר של‬
‫קומפוננםה‬
‫ב פ ל ו ר ו ם נ צ י ה ה כ ח ו ל ה עם הארת א ו ר א ד ו ם‬
‫א ד ו ם ‪ -‬ר ח ו ק או א ו ר א ד ו ם ב נ ו כ ח ו ת‬
‫הקושי ה ב ו ל ט בהנחה ז ו מתבטא ב ע י כ ו ב‬
‫ו ה ן של ה י ר י ד ה בה‪.‬‬
‫לעומת זאת בדיקת‬
‫ק ו מ פ נ נ ם ו ת במערכת מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם ב י ן ‪PS II‬‬
‫ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה מתארים ה צ ב י ח י מ צ ו ן‬
‫בין‬
‫ח י ז ו ר הקומפוננטה‬
‫ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה בהאררו אצות‬
‫ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה כ ח ו ל ה עם הארת א ו ר א ד ו ם ‪ -‬ר ח ו ק או א ו ר א ד ו ם ב נ ו כ ח ו ת‬
‫התוצאות מראה התאמה רבה ב ת ג ו ב ו ת ל א ו ר של‬
‫‪5‬‬
‫‪- 42‬‬
‫‪ D C M U‬מתארת‬
‫‪ D B M I B‬הן של ה ע ל י ה ב פ ל ו ר ו ם נ צ י ה‬
‫זה ס ב י ר כי מעכב ס פ צ י פ י לאתר במעבר ה א ל ק ט ר ו נ י • ה פ ו ט ו ט י נ ט * ! •‬
‫יעכב גם את צר ה ח י ז ו ר ו ג ם את צד ה ת י מ צ ו ן על תרכובת אחת‪.‬‬
‫ב פ ל ו ר ו ט נ צ י ה הכחולה על י ד י‬
‫צ י ו ר ‪ 19‬מראה כי‬
‫‪ DBMIB‬מבוטל עם ע י ר ב ו ב חמצן בסוספנטית האצות‪.‬‬
‫ע י כ ו ב העליה‬
‫הםבר אפשרי‬
‫צ י ו ר מ ם ‪ ;19‬השפעת חמצן על ב י ט ו ל ע י כ ו ב העליה ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה ב נ ו כ ח ו ת ‪DBMIB‬‬
‫ה י כ ן ש מ צ ו י ן הוסף תמצן תוך ביעבוע‬
‫תערובת הראקציה כמו ב צ י ו ר ‪.15‬‬
‫‪x‬‬
‫למשך ‪ 2‬רקות‪ .‬האצות הוארו באור מעל ‪ nm645‬בעוצמה של ‪3.5 -*10‬‬
‫ארגים לם״מ לשניה‪.‬‬
‫‪,‬‬
‫‪2‬‬
‫הוא בקבלת מצב ח י ז ו ר מלא של כל ה ק ו מ מ ו נ נ ט ו ת ב י ן‬
‫ב נ ו כ ח ו ת המעכב ה מ ו נ ע ח י ז ו ר נוסף בהארה‪.‬‬
‫חיזור‬
‫באור של התרכובת ה פ ל ו ר ו ס נ צ ט י ח ‪.‬‬
‫‪ PS II‬לאתר ה ע י כ ו ב של ‪DBMIB‬‬
‫תוספת החמצן מחמצנת אחת ה ק ו מ פ ז נ נ ט ו ת ומאפשרת‬
‫לעומת זאת הוספת חנקן לםומג׳נסיח האצות אי פשרה‬
‫העלאת רמח ה י ר י ד ה ב פ ל ו ר ו ם נ צ י ה באור א ד ו ח ‪ -‬ר ח ו ק כתוצאה מקבלת מצב ח י ז ו ר ר א ש ו נ י גבוה י ו ת ר ‪.‬‬
‫ ‪- 44‬‬‫כל התוצאות הללו מראות כי ש י נ ו י י הפלורוםנציה הכחולה בהארה נ י ג ר מ י ס על י ד י תרכובת‬
‫בלתי ידועה המתחזרת ע״י‬
‫‪PS II‬‬
‫ומתחמצנת ע״י‬
‫‪.PS I‬‬
‫מאחר ושברי אצות או בלורופלסטית לא‬
‫הראו ש י נ ו י י ם אלו סביר להניח כי התרכובת הפלורוםנצטית אינה תלק ממערכת מעבר האלקטרונים‬
‫בכל מקרה א י ן‬
‫הטוםוסנטטית עצמה אלא נמצאת בתמיסה בשווי משקל עם אחת הקומפוננטות שלה‪.‬‬
‫להניח כי ש י נ ו י י הפלורוםנציה הכחולה באור מורים על מצבי ח י מ צ ו ן ו ח י ז ו ר של‬
‫‪.4‬‬
‫השפעת מלת על פ ע י ל ו י ו ת‬
‫‪in v i t r o‬‬
‫ב‪-‬‬
‫כפי שכבר הוזכר ) צ י ו ר ‪ , ( 1‬היכולת של תאי‬
‫מוחלט בשמירה על אוסםולריות גבוהה במדיום‪.‬‬
‫‪ N A D P‬באצות‪.‬‬
‫‪ D. parva‬לבצע פ ו ט ו ס י נ ט ז ה תלויה באופן‬
‫בהקבלה ל א נ ז י מ י ם מבודדים מחידקים ה ל ו פ י ל י י ם‬
‫הדורשים ר י כ ו ז י מלח גבוהים לפעילות אופטימלית ) ‪ , ( 2‬היה מ ע נ י י ן לבדוק האם חלק מהפעילויות‬
‫של האצה יראו בדומה תלות באוסמולריות של המדיום‪.‬‬
‫‪in vitro‬‬
‫צ י ו ר ‪ 20‬מראה כי ר ו ב ראקציות האור הנעשות בשברי‬
‫‪u‬‬
‫‪e‬‬
‫‪200‬‬
‫לא הושפעו או עוכבו‬
‫‪PMS‬‬
‫‪o‬‬
‫‪Phosphorylation‬‬
‫‪E‬‬
‫‪400‬‬
‫‪A s c •••DCIP—Diquat‬‬
‫‪in‬‬
‫‪c‬‬
‫‪o‬‬
‫‪tn‬‬
‫‪o‬‬
‫‪E‬‬
‫>‪a‬‬
‫‪300‬‬
‫‪(0‬‬
‫>‪a‬‬
‫‪O‬‬
‫‪4.‬‬
‫‪5‬‬
‫‪£‬‬
‫‪O‬‬
‫‪100‬‬
‫‪reduction‬‬
‫‪*-‬י‬
‫‪a.‬‬
‫<‬
‫‪phosphorylation‬‬
‫‪3000‬‬
‫‪2000‬‬
‫\‬
‫‪ £‬י \‬
‫‪A‬‬
‫»_‬
‫‪o‬‬
‫‪E‬‬
‫‪2 0 0 5:‬‬
‫*‬
‫‪100‬‬
‫‪-fc‬‬
‫‪o‬‬
‫‪A‬‬
‫‪UJ‬‬
‫‪1000‬‬
‫‪25‬‬
‫)‪NaCI concentration (mM‬‬
‫צ י ו ר מם' ‪:20‬‬
‫השפעת מלת על מעבר אלקטרונים ו ס ו ם פ ו ר י ל צ י ה באור בשברי ‪D. parva‬‬
‫• ‪pH 7‬‬
‫‪NaCI,20‬מ י ל י מ ו ל ר ט י י ם י ז ‪,‬‬
‫אצות מרוכזות ב‪ 1.5-‬מולר‬
‫נמהלו םי ‪ 50 -‬בתערובת הראקציה ) ר י כ ו ז מלח סופי ‪ 25‬מ י ל י מ ו ל ר ( ולאחר מכן‬
‫‪ N a C I‬הוסף עד ל ר י כ ו ז ה מ צ ו י ן ‪ .‬יתר התנאים כמתואר בטבלה מם׳ ‪ .1‬היכן‬
‫‪ CCCP‬הוסף ל ‪ 0 . 8 -‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ‪.‬‬
‫שמצוין‪.‬‬
‫‪4‬‬
‫־‬
‫ע״י‬
‫א ו ס מ ו ל ר י ו ת ג ב ו ה ה ב א ו פ ן ד ו מ ה ל ז ה המתואר ל ג ב י כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם מצמחים ע ל א י י מ ) ‪. ( 7 1‬‬
‫יוצא‬
‫נראית‬
‫ציור‬
‫‪- 43‬‬
‫הדופן‬
‫‪ DCIP‬ל‬
‫ה י ח י ד היתה הראקציה מאםקורבט ‪+‬‬
‫‪Diquat‬‬
‫ו ג ם במקרה זה ר ו ב ההשפעה‬
‫ת ל ו י ה באפקט הפרת צ י מ ו ד מאתר ו ה ו א נ ע ל ם עמ תוספת מפר צ מ י ד ו ת‬
‫‪ 21‬מתאר כ י‬
‫‪.CCCP‬‬
‫פ ע י ל ו ת א נ ז י מ י ם מ ס י ס י ם לא קשורים לממברנת התא‪ ,‬במו לקטט ד ה י ד ר ו ג נ ז‬
‫‪I 0 0 0«o—o‬‬
‫‪C‬‬
‫‪a‬‬
‫‪Lactate dehydrogenase‬‬
‫‪o‬‬
‫^\‬
‫>‪a‬‬
‫‪a.‬‬
‫־‪50‬‬
‫‪o‬‬
‫‪o‬‬
‫‪£‬‬
‫‪N‬‬
‫‪C‬‬
‫‪6 phosphate‬־‪Glucose-‬‬
‫‪dehydrogenase‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪2.5‬‬
‫‪2.0‬‬
‫^‬
‫‪1‬‬
‫‪1.5‬‬
‫‪1.0‬‬
‫‪0.5‬‬
‫‪0‬‬
‫)‪NaCI concentration (M‬‬
‫צ י ו ר מ ם ‪ ;21‬השפעת מלת על פ ע י ל ו ת לקטט ד ה י ד ר ו ג נ ז ו ג ל ו ק ו ז ‪ - 6 -‬פ ו ם פ ט ד ה י ד ר ו ג נ ז בשבריה‬
‫‪, pH 7.4‬‬
‫תערובת ראקציה ללקטט ד ה י ד ר ו ג נ ז ה כ י ל ה ‪ 25 :‬מ י ל י מ ו ל ר מ ר י ם י ן ‪,‬‬
‫‪ , N A D H‬אצות‬
‫פירובט‪,40‬‬
‫‪ 2MgCI ,‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‪0.2‬‬
‫ה מ כ י ל ו ת ‪ 40‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ל־־‪ 3‬מ ל ׳ ומלח ב ר י כ ו ז ה נ ה ו ן ‪.‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪,‬‬
‫‪4‬‬
‫ל ג ל ו ק ו ז ‪ 6 -‬־ ם ו ם פ ט ד ה י ד ר ו ג נ ז ה כ י ל ה ‪ 25 :‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ם י ן ‪7 . 4 ,‬‬
‫‪ 2MgCI ,‬מ י ל י מ ו ל ר ג ל ו ק ו ז ‪ - 6 -‬פ ו ם פ ט ‪ 50 ,‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ‪ , | \ ^ ? 0‬שברי אצות‬
‫‪1.0‬‬
‫פ ע י ל ו ת של ‪100?0‬‬
‫ה מ כ י ל י ם ‪ 40‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ל ‪ 3 -‬מ ל ׳ ומלח ב ר י כ ו ז ה נ ת ו ן ‪.‬‬
‫מתיחםת ל ‪ 1 5 -‬מ י ק ר ו מ ו ל י ם ‪ N A D P‬שהתחזרו ל מ ג ׳ כ ל ו ר ו פ י ל לשעה או ל ‪ 1 0 -‬מ י ק ר ו מ ו ל י ם‬
‫‪ N A D H‬שהתחמצנו ל מ ג י כ ל ו ר ו פ י ל לשעה‪.‬‬
‫‪,‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫־‪46‬־‬
‫או‬
‫ג ל ו ק ו ז ‪ - 6 -‬פ ו ס פ ט ד ה י ד ר ו ג נ ז ‪ ,‬ע ו כ ב ה חזק ו ל א‬
‫כל‬
‫ה א נ ז י מ י ם האחרים ש נ ב ד ק ו הראו אפקט ע י כ ו ב ד ו מ ה ‪,‬‬
‫התלויים‬
‫רדוקטז‬
‫וכי‬
‫‪.5‬‬
‫‪ N A D - o‬או‬
‫ואחרים‪.‬‬
‫‪NaCI‬‬
‫‪,NADP‬‬
‫ניטריט רדוקטז‬
‫זורזה ע״י‬
‫)‪,(72‬‬
‫ר י כ ו ז י מלח ה ד ר ו ש י ם ל ג י ד ו ל ה ת א י ם ‪.‬‬
‫ביניהם‪:‬‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוספט דהידדוגנזות‬
‫ר י ב ו ל ו ז דיפוספט ק ר ב ו ק ס י ל ז ‪,‬‬
‫דיהידדוכםיאצטון‬
‫כך נראה כי ת ו ך התאים מ ק י י ם ר י כ ו ז מלח נ מ ו ך בהרבה מ ז ה הנמצא ב מ ד י ו ם ה ח י צ ו נ י ‪,‬‬
‫א י נ ו ח ו ד ר ב א ו פ ן ח ו פ ש י דדך ממברנת התא‪.‬‬
‫ג ל י צ ר ו ל כחוצר פוטוםינטמי עיקרי ב‪-‬‬
‫על מ נ ח ל ק ב ו ע אח ג ו ר ל ו של ד ו ‪ -‬ת ח מ ו צ ח הפחמן ב פ ו ט ו ם י נ ט ז ה ב ‪-‬‬
‫‪ D. parva‬נעשו מספר‬
‫‪14‬‬
‫נ ס י ו נ ו ת של ק י ב י ע‬
‫‪02C‬‬
‫ב ז מ נ י ם ש ו נ י ם ו ה ת ו צ ר י ם ה ו פ ר ד ו על פלטות‬
‫מתאר א ו ט ו ר ד י ו ג ר ם נבתר של ת ו צ ר י‬
‫^•‪2‬ןצלולוז‪.‬‬
‫צילום‬
‫ק י ב ו ע ד ו ‪ -‬ת ח מ ו צ ת הפחמן לאתר ‪ 5‬דקות הארה‪.‬‬
‫‪ p a r v a‬ל[ לאתר ‪ 5‬דקות הארה‬
‫בתאי‬
‫ה ת ו צ ר י ם ה ע י ק ר י י ם של ק י ב ו ע ‪C O g‬‬
‫צ י ל ו ם מסי ‪:2‬‬
‫תערובת הראקציה ה כ י ל ה ‪ :‬מ ד י ו ם ג י ד ו ל בתוספת ‪ 0.4‬מ י ל י מ ו ל ר ב י ק ר ב ו נ ט ה מ כ י ל‬
‫מלי‬
‫‪. 5‬‬
‫ו א צ ו ת ה מ כ י ל ו ת ‪ 120‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל בנפח כ ו ל ל של‬
‫‪y c l^C100‬‬
‫לאחר ‪ 5‬דקות הארה ב נ ו כ ח ו ת המסמן האצות נ ק צ ר ו ע ״ י פ י ל ט ר צ י ה ו נ ב ד ק ו כמתואר‬
‫‬‫ההפרדה‬
‫•י‬
‫סוכר‬
‫ה כ ר ו מ ו ט ו ג ר פ י ת מראה ב ע י ק ר ‪ :‬ח ו מ צ ו ת א מ י נ י ו ת כ מ ו ‪ ,‬ח ‪.‬‬
‫פ ו ס פ ט י ם ‪ ,‬ו ס ו כ ר ו ז ‪ ,‬כאשר הכתם ה ב ו ל ט ה ע י ק ר י ה ו א של‬
‫‪ 30‬ש נ י ו ת ו כ מ ו ת ו ע ו ל ה ע ם ז מ ן‬
‫)ציור‬
‫‪8‬‬
‫‪- 47‬‬
‫ה ק י ב ו ע ‪ ,‬לעומת‬
‫‪ (22‬עד ל מ י נ י מ ו ם לאחר ‪ 10‬ד ק ו ת ‪.‬‬
‫‪( D u n a l i e l l a(10-‬‬
‫גלוטמיח‪,‬‬
‫גליצרול‪.‬‬
‫אלנין‪,‬‬
‫גליצין‬
‫וםרין;‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל מ ו פ י ע כבר לאחר‬
‫י ר י ד ה בכמות ה ס ו כ ר ו ז ב ת ק ו פ ו ת פ ו ט ו ם י נ ט ז ה א ר ו כ ו ת‬
‫ג ל י צ ר ו ל כתוצר פ ו ט ו ם י נ ט ט י עיקרי‬
‫ו כ נ ר א ה זה ת ו צ ר‬
‫) ‪( minutes‬‬
‫אופיני‬
‫וראשוני‬
‫נמצא ב מ י נ י ם‬
‫ל מ י נ י ם ה ה ל ו פ י ל י ם של ג נ ו ם ז ה ‪.‬‬
‫‪Time‬‬
‫ל ג ל י צ ר ו ל ו ל ם ו כ ר ו ז ב ‪D. parva -‬‬
‫‪2‬‬
‫צ י ו ר מם* ‪CQ :22‬קינטיקת א י נ ק ו ר פ ו ר צ י ת‬
‫לפרטים ראה " ש י ט ו ת " ‪.‬‬
‫תערובת הראקציה כמתואר ב צ י ל ו ם ‪. 2‬‬
‫‪.6‬‬
‫תפקיד ה ג ל י צ ר ו ל ב ר ג ו ל צ י ה ה א ו ם ט ו ט י ת של האצה‬
‫כפי‬
‫ש צ ו י ן קביע‬
‫הראתה ע י כ ו ב ו ל א‬
‫העובדה‬
‫שגלוקוז‬
‫ז ר ו ז ע״י‬
‫)‪,(73‬‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫ה ר ג י ש ו ת למלח ל ר א ק ג י ו ת ם ו ט ו ם י נ ט ט י ו ת‬
‫ר י כ ו ז י מלח נ מ ו כ י ם בהרבה מאלו‬
‫ו ‪PMS -‬‬
‫ו א נ ז י מ ט י ו ת בשברי האצה‬
‫ה ד ר ו ש י ם ל ג י ד ו ל האצה; ב נ ו ס ף‬
‫א י נ ם ח ו ד ר י ם דרך ממברנת התאים ר מ ז ו כי‬
‫פנים‬
‫התאים מ ק י י ם ר י כ ו ז מלח נ מ ו ך בהרבה מ י ה הנמצא ב מ ד י ו ם ו כ י ממברנת האצה א י נ ה ח ר י ר ה ב א ו פ ן‬
‫וזו פעי למלח‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫בפרק‬
‫הדרוש‬
‫סופי‬
‫ביצירה‬
‫זה‬
‫ריכוז‬
‫לאיזון‬
‫ו ב פ י ר ו ק של‬
‫א‪.‬‬
‫חישוב‬
‫כאשר‬
‫תתמוצת‬
‫אצות‬
‫ב‪-‬‬
‫הפתמן־‬
‫של טבלה ‪5‬‬
‫וכי‬
‫הרגולציה‬
‫וב‪-‬‬
‫הממשי של‬
‫)הנפח‬
‫מולר‬
‫ויותר‬
‫שאינו‬
‫מגיב‬
‫אקוולנטי‬
‫מבתינה‬
‫האוםמוטי‬
‫העיקרי‬
‫וכאמור‬
‫שווה‬
‫המחושבים‬
‫אוסמוטית ל ‪1 4 -‬‬
‫מולר‬
‫־‬
‫ע ל בם״יס‬
‫‪Q. p a r v a‬‬
‫ההלופילית־‬
‫שווה‬
‫מאתר‬
‫ההבדלים‬
‫תלויה‬
‫שימוש‬
‫ברור כי‬
‫גדול‬
‫במדידות‬
‫גידול‬
‫בתנאי‬
‫כ‪50-‬‬
‫ג ד ל ו ע ם ‪5%‬‬
‫תכולת‬
‫כמתואר‬
‫דו‪-‬‬
‫ה מ י ם במשקע‬
‫בעמודה‬
‫מאחד ו ‪ 1 -‬־ ‪ 2‬מ ו ל ר‬
‫הימנית‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל משמש כ מ ר כ י ב‬
‫ה כ ל ו ר ו פ י ל ל ת א בשתי‬
‫הגליצרול‪,‬‬
‫יותר‬
‫נמצאו‬
‫באצה ה י א‬
‫האצות‬
‫אוםמוטי(־‬
‫בתכולות‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל מ ת א ר י ם נ פ ח תא‬
‫התרבויות־‬
‫וכמות‬
‫טבלה ‪ 5‬מראה כ י‬
‫מ כ פ ל י י ם כאשר‬
‫באופן‬
‫!‪NaC‬‬
‫למיליגרס‬
‫תכולת‬
‫נקבע ת ו ך‬
‫ריכוז‬
‫ריכוז‬
‫האוםמוטית ב ־‬
‫‪ P. l u n d u i m‬־‬
‫ב מ ד י ו ם ה ו א ‪5‬־‪1‬‬
‫נאגר‬
‫האצות‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל ה ו א ‪1‬״‪ 2‬מ ו ל ד לשתי‬
‫באצה‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫בתוך תאי‬
‫לריכוז‬
‫הפנימי־‬
‫הםורביטול‬
‫באצה‬
‫ג ל י צ ר ו ל עד ל ‪6 0 -‬‬
‫המלח‬
‫הריכוז‬
‫ו ב נ פ ח של‬
‫החיצוני‪,‬‬
‫‪E. g r a c i l i s‬‬
‫ריכוז‬
‫הנוצר‬
‫הגליצרול ב‪-‬‬
‫ג ב ו ה ו ח של‬
‫‪ D. parva‬אך ל א‬
‫סטנדרטיים‬
‫המלח‬
‫ריכוז‬
‫תכולות‬
‫ב‪-‬‬
‫נראה כ י‬
‫‪48‬‬
‫באצות‬
‫המים‬
‫נמצאה‬
‫והמשקל היבש‬
‫ה ג ד ל ו ת עם‬
‫הפחמן־‬
‫ב־‬
‫השפעת‬
‫ציור‬
‫הוםפת‬
‫או‬
‫‪ 23‬מ ת א ר את‬
‫האפקט‬
‫‪ N a C I‬מ ע ל רמת המלח‬
‫האוסמולריות‬
‫ריכוזי‬
‫ריכוז‬
‫המלת‬
‫ב מ ד י ו ם על‬
‫של‬
‫ה נ י כ ר של‬
‫במדיום‬
‫המדיום מוקטנת‬
‫תכולת‬
‫תכולת‬
‫'מופרש‬
‫למדיום‬
‫בכמויות‬
‫ריכוז‬
‫הגידול‬
‫וגדולות‬
‫המלת ע ל‬
‫נצפית‬
‫מלח רתב ב י ן ‪ 6‬־ ‪ 0‬מ ו ל ר ל ‪ 1 -‬־ ‪ 2‬מ ו ל ר ־‬
‫הולכות‬
‫באצות‬
‫עליה‬
‫יורדת־‬
‫תכולת‬
‫בכמות‬
‫יחם‬
‫הגליצרול־‬
‫לינארי‬
‫מתחת ל ‪ 0 . 6 -‬מ ו ל ד מ ל ח ‪,‬‬
‫)ציור ‪(24‬־‬
‫על מ נ ת‬
‫בתאים־‬
‫כאשר‬
‫נשמר על‬
‫תחום‬
‫נוזל‬
‫ל ד ע ת את‬
‫תכולת‬
‫עם‬
‫י‬
49 ~
+
o
o
r»
& c
n
_0
_#
a
u
—*
a
a
K3
X
‫©י‬
‫ס־‬
‫ג‬
()
to
‫*י‬a
‫עי‬
_l
o
J
‫ן‬
-‫ ע‬C O
o
‫ם‬
_l
vT
_‫ע‬
‫ט‬
e
Ul
3
o
‫•י‬
‫וי‬
a
a
•a
w
_»
»->
.j
J
a
9
3
‫עי‬
13
‫ט‬
-*
U
%r
It
3
a
u
‫י‬0
u
‫י־‬3
L»
—1
j
n
w
_»
U
^>
*»
u
‫ם‬
‫עי‬
a
3
l*S
%
vT
-J
‫ט‬
•*
‫עי‬
a
‫ם‬
‫עי‬
3
U
3
3
~»
a
‫' עי‬
9:
3
3
VS
"3
3
u
vT
•vT
a
U‫עי‬
J
o
o
0
3
©
3
‫עי‬
3
c3
3
3
‫ט‬
‫^י‬
Q
$ ‫ ס־‬-H
o a> o
Ill
o
^
^ n
X
X
O
‫׳‬-:‫׳‬
‫׳‬D
‫ו•״‬
f
so
T)
—
—
CO
o
3
^
3
CO
—t-
:3‫־־‬
- I T
0
—i
0
-J
1
-a
0
OJ
W
‫ס‬
3‫"־‬
<D
ft
D
CD
•‫ן־‬
O
2.
<‫־‬,
CQ'P
-t 3
CO
5"
a
o
3
to
to
e
0
vT
U
3
=
C_
‫י־‬
rs
•
U
3
‫ט‬
fi
<‫>י‬
CO
‫ני‬
a
—
0
‫ט‬
3
vT
‫״‬
5
‫ *־‬S
a
vT
3
9
3
‫פ‬
u
‫עי‬
b.‫״‬
CO
—0
_/
U
3
-a
‫ט‬
‫~ם‬
1‫ ״‬f
£‫־‬
ON
O
_l
-a
‫ט‬
u
M
J
_v lT
‫עי‬
‫ט‬
3
3
‫״־‬a
p
a
u
a
3
U
vjl
O
^
1-/
_*
O
‫י‬#
J
a
•*
3
_/
n
VI
-J•
—j
u
Z
Q
7!
3
U
o
W
-‫י‬
o
5<S
a•‫ע‬
a
‫*ט‬
23.54
‫י‬#
a
a
j
‫»י‬
‫עי‬
42.33
•
U
‫ט‬
9
1
vs
3
s
O 0!
o «
3
31.25
‫ם‬
•J‫־‬
-I
9C
_l
z
‫יי‬
X
23.36
%
_(
J
-J
O
62.26
3
‫ט‬
T
_j
‫עי‬
3
Ul
a
u
^
‫•י־‬
$
a
‫ט‬
u
z
‫עי‬
3
W
‫ט‬
a
3
SI
—^
0
42.81
X
—k
0
VJ1
32.0
•‫ע‬
y
Ul
85.29
vT
‫עי‬
—^
0
‫ול‬
o
8
3
-1
j
z
CO
!
0
to
"‫וי‬
~‫ ״‬if
o
0
‫ס‬
a
13
If
O
O
ui
-1
0
NO
to
2:
•‫•י‬
3
a
2 »
Q -‫וו‬
2; o
—‫״‬
C
—-
o
o " ‫י־ ־‬
3
‫־ ‪ 5 0‬־‬
‫‪2.0‬‬
‫‪3.0‬‬
‫‪0‬‬
‫‪1.0‬‬
‫)‪Extracellular NaCI concentration (M‬‬
‫צ י י ר מ ס ‪123‬‬
‫‪,‬‬
‫תערובת‬
‫השפעת‬
‫ר י כ ו ז המלח‬
‫הכילה‪:5‬‬
‫הריכוז‬
‫בנפח‬
‫של ח ‪.‬‬
‫ב מ ד י ו ם על‬
‫מיליפולר‬
‫ה מ צ ו י ן של מ ל ח‬
‫כ ל ל י של ‪ 1‬מ ל י ‪.‬‬
‫טריכלורואצטית‪.‬‬
‫‪9‬‬
‫המופרשת‬
‫‪M‬‬
‫תכולת‬
‫פוספט‪,‬‬
‫ותאי‬
‫תכולת‬
‫ה ג ל י צ ר י ל בתאי‬
‫‪7.5‬‬
‫‪, 2‬‬
‫‪pH‬‬
‫ה מ כ י ל י ם ‪ 100‬מיקרו ג ר ם‬
‫לאחר ‪ 90‬דקות הופסקה הראקציה ע ״ י‬
‫‪o‬‬
‫©‬
‫וזכולת‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל ה פ נ י מ י ת המחושבת ע ״ י‬
‫ל מ ד י ו ם מתכולת‬
‫הכללית‪.‬‬
‫‪,2MgCI‬‬
‫תוספת ‪ 0 . 1‬מלי‬
‫הפנימית‪.‬‬
‫הפחתת‬
‫לפרטים‬
‫חכולח‬
‫נ ו ס פ י ם ראה‬
‫" ש י מ ו ת " וטקסט‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫)‪(M‬‬
‫ציור‬
‫מסי‬
‫ציור‬
‫‪,23‬‬
‫הנגרמים‬
‫‪,‬‬
‫‪:24‬‬
‫‪51‬‬
‫‪Extracellular NaCI concentration‬‬
‫נ ז י ל ת ה ג ל י צ ר ו ל מהתאים ל מ ד י ו • בתלות ב ר י כ ו ז המלח ה ח י צ ו נ י‬
‫תערובת הראקציה זהה עם ז ו המתוארת ב צ י ו ר ‪ 9 0 . 2 3‬דקות לאחר ה מ י ה ו ל ‪,‬‬
‫התאים ושברי התאים ה ו ר ת ק ו ו ת כ ו ל ת ה ג ל י צ ר ו ל נקבעה ב מ ד י ו ם ‪ 10(<;0 .‬מתיחס‬
‫ל פ ר ט י ם נ ו ס פ י ם ראה " ש י מ ו ת " ‪.‬‬
‫ל ‪ 6 0 -‬מ י ק ר ו מ ו ל י ם ג ל י צ ר ו ל למגי כ ל ו ר ו פ י ל ‪.‬‬
‫מחחח ל ‪ 0 . 6 -‬מ ו ל ר הפחתנו את כמות‬
‫הכללית‪.‬‬
‫מאחר‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל שהופרשה ל מ ד י ו ם בכל‬
‫ה ת כ ו ל ו ת המחושבות של ה ג ל י צ ר ו ל התוך תאי‬
‫ו ב ר י כ ו ז * מלח מעל ‪ 0 . 6‬מ ו ל ד ‪,‬‬
‫ע ״ י המלח ח י י ב י ם ל ה י ו ת ת ל ו י י ם ב י צ י ר ה‬
‫‪,1 , 6‬‬
‫כפי שהראנו‬
‫וכמות‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל שהשתחררה ל מ ד י ו ם ש ו ו ה ל כ מ ו ת‬
‫מולר‬
‫‪-‬‬
‫‪. NaCI‬‬
‫למעלה‪,‬‬
‫בלחצים א ו ם מ ו ט י י ם‬
‫אינו‬
‫מצוירות‬
‫נ ק ו ד ה מכמות‬
‫ב ע י ג ו ל י ם מ ל א י ם של‬
‫נ ו ז ל למדיום ש י נ ו י י‬
‫ו פ י ר ו ק מ ט ב ו ל י של‬
‫נ מ ו כ י ם התאים מ ת פ ו צ צ י ם ‪,‬‬
‫כמחואר‬
‫בציורים‬
‫פ י ר ו ק ה ג ל י צ ר ו ל נפסק‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל התוך תאי של אצות ה מ ו ר ח פ ו ת‬
‫ב‪1.5-‬‬
‫ציור‬
‫גם‬
‫היצירה וגם‬
‫‪ 25‬מ ת א ר א ת השפעת מ פ ר‬
‫ה פ י ר ו ק של‬
‫‪3.0‬‬
‫ציור מם‬
‫‪,‬‬
‫‪:25‬‬
‫תערובת‬
‫בריכוז‬
‫עוכבו‬
‫לגמרי ע״י ‪8‬‬
‫‪2.0‬‬
‫)‪(M‬‬
‫השפעת‬
‫הצמידות‬
‫‪ FCCP‬ע ל‬
‫שינויי‬
‫‪1.0‬‬
‫‪NaCI concentration‬‬
‫בתכולת‬
‫בתלות‬
‫‪ FCCP‬ע ל‬
‫המצוין‪.‬‬
‫והזמן‬
‫זהים‬
‫לאלו‬
‫המתוארים‬
‫‪ FCCP‬ו ר מ ת‬
‫‪0‬‬
‫‪Extracellular‬‬
‫השינויים‬
‫המושרים ע״י‬
‫ב צ י ו ר ‪23‬‬
‫מלח‪.‬‬
‫ב ר י כ ו ז המלח‬
‫במדיום‬
‫מ ל ב ד תוספת‬
‫‪FCCP‬‬
‫‪33 -‬׳‬
‫‪-‬‬
‫נשארה קבועה בכל תחום ר י כ ו ז י המלח כרמז לדרישה הכרחית ל ‪ ATP -‬ל מ ט ב ו ל י ז ם של ג ל י צ ר ו ל ‪.‬‬
‫ה ק י נ ט י ק ה של ש י נ ו י י תכולת ה ג ל י צ ר ו ל ה פ נ י מ י ה ת ל ו י י ם במלח ה ח י צ ו נ י מתוארת ב צ י ו ר ‪.26‬‬
‫הצד השמאלי של ה צ י ו ר מתאר 'את ה י ר י ד ה בתכולת ה ג ל י צ ר ו ל עם מ י ה ו ל ה מ ד י ו ם מ ‪ 1 . 5 -‬מ ו ל ד‬
‫מולד מלח‪,‬‬
‫והצד ה י מ נ י מתאר את ה ע ל י ה בתכולת ה ג ל י צ ר ו ל עם חוטפת מלח ל מ ד י ו ם ‪.‬‬
‫האצות מ ש י ג ו ת ש ו ו י משקל א ו ם מ ו ט י חדש לאחר ‪ 90‬ד ק ו ת ‪.‬‬
‫‪I.3MN0CI‬‬
‫~\•‬
‫ל‪0.6-‬‬
‫בשני המקרים‬
‫ה ת נ ה ג ו ת ק י נ ט י ת ז ו נראתה ב א ו ר או‬
‫‪0.6MN0CI‬‬
‫‪ISMNoOK‬‬
‫)‪Time (minutes‬‬
‫‪.‬‬
‫‬‫‪C‬‬
‫‪ D. parva‬בתגובה ל ש י נ ו י י ר י כ ו ז‬
‫ה ק י נ ט י ק ה של פ י ר ו ק ו י צ י ר ת ה ג ל י צ ר ו ל ב ‪-‬‬
‫צ י ו ר מסי ‪;26‬‬
‫‪NaCI,5‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫המלח ב מ ד י ו ם ‪ .‬אצות מ ר ו כ ז ו ת ו מ ו ר ח פ ו ת כ ‪ 1 , 5 -‬מ ו ל י‬
‫נ מ ה ל ו עד לקבלת ר י כ ו ז ט ו פ י‬
‫‪,‬‬
‫>‪2‬‬
‫‪,M‬‬
‫‪g‬‬
‫‪C‬‬
‫‪I‬‬
‫‪2‬‬
‫מילימולי־‬
‫‪pH 7‬‬
‫‪ 2 M g C I‬׳ ‪, pH 7 .‬‬
‫‪3‬‬
‫מ י ל י מ ו ל ר פוספט ו ‪ 2‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‬‫‪N‬‬
‫‪ 90‬דקות לאחר ה מ י ה ו ל מלח מ ו צ ק הוםף ל ר י כ ו ז ס ו פ י של ‪ 1 . 3‬מ ו ל ר ‪.‬‬
‫‪r‬‬
‫‪a‬‬
‫בחושך‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫ג‪.‬‬
‫השפעת ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם על ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל ב ‪-‬‬
‫השינויים‬
‫ל^‬
‫‪,‬‬
‫ב ח כ ו ל ו ת ה ג ל י צ ר ו ל ו ה מ י ם המושרים ע ״ י המלח ב ת נ א י ם לא מ ט ב ו ל י ם ‪,‬‬
‫לא מ ט ב ו ל י ם מתקבלים עם ק ר ו ר האצות ל ‪1 0 ° -‬‬
‫מיקרוגרס‬
‫‪- 54‬‬
‫)תנאים‬
‫‪ , 5 ° -‬א ו ב ס ו ם פ נ ם י ת אצות מ ר ו כ ז ו ת מעל ל ‪2 0 0 -‬‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל ל מ ל ' ( ‪ ,‬מתוארים ב צ י ו ר ‪.27‬‬
‫לא חל כל ש י נ ו י בתכולת ה ג ל י צ ר ו ל בתאים עם‬
‫‪ N a C I‬ב מ ד י ו ם על ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל באצות ב ת נ א י ם לא מ ט ב ו ל י ס‬
‫צ י ו ר מ ם ' ‪ ;27‬השפעת ר י כ ו ז‬
‫‪pH‬‬
‫‪,‬‬
‫‪10‬‬
‫‪7.5‬‬
‫‪ 25‬מ י ל י מ ו ל ר פ ו ס פ ט ‪,‬‬
‫תערובת הראקציה ה כ י ל ה ‪:‬‬
‫ב ר י כ ו ז ה נ ת ו ן ‪ ,‬אצות ה מ כ י ל ו ת כ ‪ 3 0 0 -‬מ י ת ך ו ג ר ‪ 0‬כ ל ו ר ו פ י ל ‪,‬‬
‫מגנזיום‪NaCI,‬‬
‫‪ ( j j c‬בנפח כ ו ל ל‬
‫)‬
‫‪C2‬‬
‫‬‫)‬
‫‪^H20‬‬
‫‪ O p e‬וסורביטול‬
‫ל פ ר ט י • נ ו ס פ י ם ראה " ש י ט ו ת " ‪.‬‬
‫של ‪ 1‬מ ל י ‪.‬‬
‫‬‫עינויי‬
‫עלית‬
‫ה א ו ס מ ו ל ר י ו ת ב מ ד י ו ם אך תכולת המים בתאים ע ו ל ה עם י ר י ד ת ה א ו ם מ ו ל ר י ו ת‬
‫ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם ‪.‬‬
‫והתכווצותם‬
‫לשלב בו‬
‫מטבולי•‬
‫ואילו‬
‫‪55‬‬
‫‪-‬‬
‫ה ש י נ ו י י ם בתכולת המים מ ו ר י ם על התנפחות התאים ב ת נ א י • ה י פ ו ט ו נ י ם‬
‫בתנאים ה י פ ר ט ו נ י ם ‪.‬‬
‫ש ו ו י מ‪/‬טקל א ו ם מ ו ט י מתקבל כאשר ה ת א י • מ ת נ פ ת י • או מ ת כ ו ו צ י ם‬
‫ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל בתאים י ש ו ו ה א ו ם מ ו ט י ת ל ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם ‪.‬‬
‫ה מ ק י י מ י ם נשימה או‬
‫משקל א ו ס מ ו ט י חדש מתקבל בהתאם‬
‫אוםמוטי‬
‫עם העברת התאים ל ת נ א י ם‬
‫פ ו ט ו ם י נ ט ז ה משתנה תכולת ה ג ל י צ ר ו ל בתאים ל פ י‬
‫תכולת המים ח ו ז ר ת לרמה ה ר א ש ו נ י ת‬
‫בין‬
‫ו י ו ר ד ת עם‬
‫ל ע ל י ה או‬
‫)ציור ‪.(28‬‬
‫ש י נ ו י י המלח ב מ ד י ו ם‬
‫ה ת א י • ח ו ז ר י ם ל נ פ ח ה ר א ש ו נ י מאחר‬
‫ל י ר י ד ה בתכולת ה ג ל י צ ר ו ל הדרושה‬
‫לשווי‬
‫ושווי‬
‫ריכוזים‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל בתאים והמלח ב מ ד י ו ם ‪.‬‬
‫‪2.0‬‬
‫‪1.5‬‬
‫‪1.0‬‬
‫‪0.6‬‬
‫) ‪Eniracellulof NaCI concentration ( M‬‬
‫‪ N a C I‬ב מ ד י ו • על ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל באצות ב ת נ א י • מ ט ב ו ל י ם‬
‫צ י ו ר מטי* ‪ ; 2 8‬השפעת ר י כ ו ז‬
‫‪pH‬‬
‫‪,‬‬
‫‪10‬‬
‫‪ 25‬מ י ל י מ ו ל ר פ ו ס פ ט ‪7 . 5 ,‬‬
‫תערובת הראקציה ה כ י ל ה ‪:‬‬
‫‪ N a C I‬ב ר י כ ו ז ה נ ת ו ן ואצות המכילות כ‪ 450-‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל‬
‫מגנזיום‪,‬‬
‫לאחר ‪ 90‬דקות הארה הושקעו האצות ו ה ו ר ח פ ו‬
‫בנפח ס ו פ י ש ל ‪ 20‬מ י ל י ל י ט ר ‪.‬‬
‫ס ו ר ב י ט י ל ‪ ( 2 0 H‬וםורביטול‬
‫‪,3yc‬‬
‫^ )‬
‫‪5‬‬
‫ד י ו ם המכיל בנוסף‬
‫ל פ ר ט י ם נ ו ס פ י ם ראה " ש י ח ו ת " ‪.‬‬
‫‪ (ic‬בנפח כ ו ל ל של ‪ 1.5‬מ ל י ‪.‬‬
‫‪) Q\2‬‬
‫‪-‬‬
‫־‬
‫הביטוי‬
‫תיצוני‬
‫מתאר‬
‫בין‬
‫הפנוטיפי‬
‫‪ 0.6‬מולר‬
‫ס כ מ ט י ת את‬
‫האיכותי‬
‫לשינויים‬
‫ל‪ 2.1-‬מולר‬
‫שינויי‬
‫‪56‬‬
‫בקלות‬
‫נצפה‬
‫ה נ פ ת של ה ת א י ם ‪.‬‬
‫־‬
‫בתכולות‬
‫המים‬
‫בהסתכלות‬
‫עם ה ע ב ר ת‬
‫והגליצרול‬
‫באצות‬
‫האצות‬
‫בתחום‬
‫במיקרןסקופ‬
‫למדיום‬
‫ריכוזי‬
‫מלח‬
‫אור‪.‬‬
‫ציור‬
‫או‬
‫היפרטוני‬
‫היפוטוני‬
‫‪29‬‬
‫‪I.5M NaCI‬‬
‫‪0‬‬
‫•‪metabolic condition‬‬
‫‪(instantaneous) .‬‬
‫‪Non‬‬
‫‪0‬‬
‫‪0‬‬
‫‪2.1 M NaCI‬‬
‫‪0.6 M NaCI‬‬
‫•‪Metabolic condition‬‬
‫)•‪(90 minute‬‬
‫‪2.IM NaCI‬‬
‫‪0‬‬
‫‪0‬‬
‫‪0.6M NaCI‬‬
‫י‬
‫ציור‬
‫‪;29‬‬
‫מם־*‬
‫ם כ מ ט י של‬
‫תאור‬
‫מתוארים‬
‫בתנאים‬
‫לא‬
‫חוזרי•‬
‫התאים לנםתם‬
‫מטבנילים מ ת נ פ ח ו ת‬
‫מתחת‬
‫יחם‬
‫בו‬
‫חלה‬
‫)ציור‬
‫הירידה‬
‫‪.(6‬‬
‫האצות או‬
‫הראשוני‬
‫בתנאים‬
‫ל ר י כ ו ז מ ל ח של‬
‫הפנימי‬
‫בפליטת‬
‫מדידות‬
‫שינויי‬
‫שינויי‬
‫מקבילות‬
‫)ציור‬
‫במיקרוסקופ‬
‫בהסתכלות‬
‫מ ת כ ו ו צ ו ת ‪ ,‬בהתאמה‪ ,‬אך לאתר‬
‫האוםמוטים‬
‫‪ 0.6‬מולר‬
‫לחיצוני‬
‫חמצן‬
‫נפח תאי‬
‫נפת האצות‬
‫‪D. p a r v a‬‬
‫הנראים‬
‫בתנאים‬
‫‪.(30‬‬
‫פוטוםנטטי‬
‫)ציור‬
‫במדיום המכיל‬
‫‪(1‬‬
‫כולין‬
‫ומטבולי•‬
‫אור‪.‬‬
‫כ‪ 90-‬דקות‬
‫בתנאים‬
‫מטבולי •‬
‫השונים‪.‬‬
‫ע ו ל ה מ א ו ד הנפח הלא‬
‫תחום‬
‫אוםמוטיים‬
‫שוני •‬
‫ריכוזי‬
‫והחל‬
‫אוםטוטי‬
‫המלח בו‬
‫חיזור‬
‫כ ל ו ר י ד הראו‬
‫)נפח‬
‫חלים‬
‫ה ש י נ ו י י ם מתאים‬
‫תוצאות‬
‫הטורביטול(‬
‫ויורד‬
‫וזירחוןעם^אק‬
‫דומות‪.‬‬
‫לתחום‬
‫־ ‪ 5 7‬־‬
‫צ י ו ר מ ם ‪ :30‬השפעת ר י כ ו ז ‪-‬המלח ב מ ד י ו ם על פ י ז ו ר ה ג ל י צ ר ו ל ו ה נ פ ח הלא א ו ם מ ו ט י במשקע תאי‬
‫‪7.5pH,‬מ י ל י מ ו ל ר‬
‫‪10‬‬
‫מ י ל י מ ו ל ר פוספט‪,‬‬
‫הכילה‪:25‬‬
‫‪ N a C I‬ב ר י כ ו ז ה נ ת ו ן ‪ ,‬אצות ה מ כ י ל ו ת ב‪ 300-‬מ י ק ר ו ג ר ם כ ל ו ר ו פ י ל ‪,‬‬
‫מגנזיום‪,‬‬
‫( בנפח‬
‫‪C‬‬
‫‪-2‬ו ם ו ר ב י ט ו ל‬
‫‪c) 1 4‬‬
‫(‬
‫)‪0 H,3pc‬‬
‫ס ו פ י של ‪ 1‬מ ל י ‪ .‬ל פ ר ט י ם נ ו ס פ י ם ראה " ש י ט ו ת " ‪.‬‬
‫‪,‬‬
‫ו ר ב י ט ו ל‬
‫‪3‬‬
‫‪2‬‬
‫השפעת‬
‫ג ל י צ ר ו ל על‬
‫כפי‬
‫לכן‬
‫ע״י‬
‫‪M‬‬
‫שצוין‪,‬‬
‫פ ע י ל ו י ו ת ‪i n v i t r o 7.‬‬
‫‪ D . parva‬צוברת ג ל י צ ר ו ל בתאים ל ר י כ ו ז י ם ג ב ו ה י • מ א ו ר ‪.‬‬
‫לבדוק הא• ר א ק צ י ו ת פ ו ט ו ט י נ ט ט י ו ת‬
‫ג ל י צ ר ו ל או‬
‫ב‪-‬‬
‫א ו ל י א פ י ל ו ידרשו‬
‫ו א נ ז י מ ט י ו ת של‬
‫ר י כ ו ז י ם ב ס י ס י ם של‬
‫צ י ו ר ‪ 31‬מראה כ י ר ו ב ר א ק צ י ו ת האור הנעשות על‬
‫יהיו‬
‫היה מ ע נ י י ן‬
‫עמידות לאינאקטיבציה‬
‫ג ל י צ ר ו ל ל פ ע י ל ו ת מלאה‪.‬‬
‫י ד י שברי‬
‫וכלורופלםטים‬
‫‪58 -‬‬
‫צ י ו ר מם* ‪:31‬‬
‫מחסה נת״‪-‬או‬
‫‪NADP‬‬
‫באור‬
‫ו פ ו ס פ ו ר י ל צ י ה ב א ו ר בשברי‬
‫השפעת ג ל י צ ר ו ל על מעבר א ל ק ט ר ו נ י ם‬
‫ו ב ב ל ו ר ו פ ל ט ט י ם »חסה‬
‫‪ N A D P‬ה כ י ל ה תערובת הראקציה‬
‫לחיזור‬
‫ת נ א י ה נ ם י ו ן כמתואר בטבלו; מ ם ' ‪.1‬‬
‫ה ב ל ו ר ו ם ל ס ט י ם מחסה ה כ י ל ו ‪ 30‬מ י ק ר ו ג ר מ י ם כ ל ו ר ו פ י ל‬
‫‪ 3‬מיקרומולר פרווקםין‪.‬‬
‫ל‪ 3-‬מ ל י ‪.‬‬
‫פעילות‬
‫בריכוזי‬
‫גליצרול גבוהיח‪.‬‬
‫ב כ ל ו ר ו ת ל ם ט י ט מחסה המעוכבת‬
‫צ י ו ר ‪ 32‬מראה פ ע י ל ו ת ג ב ו ה ה של‬
‫ריכוזי‬
‫ב יטו דה‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫ג ל י י צ ד ו ל רחב‪.‬‬
‫יוצא הרוטן‬
‫ה י ח י ד ה ו א הראקציה של ח ז ו ר‬
‫הריכוזים גבוהים‪.‬‬
‫אנזימי‬
‫ה פ ע י ל ו י ו ת לא נ מ צ א ו‬
‫ה ק ר ב ו כ ם י ל צ י ה ולקטט‬
‫דורשות‬
‫ד י ה ד ר ו ג נ ז בתהום‬
‫ג ל י צ ר ו ל וההתנהגות היא‬
‫גליצרוטולרנטיח‬
‫־ ‪ 5 9‬־‬
‫צ י ו ר מ ט ‪ :32‬הש‪6‬עת ג ל י צ ר ו ל על פ ע י ל ו י ו ת לקטט ד ה י ד ר ו ג נ ז ‪ .‬ר י ב ו ל ו ז ‪ . 5 -‬ו ‪ -‬ד י פ ו ם פ ט ק ר ב ו ק ס י ל ז‬
‫ו פ ו ס פ ו א נ ו ל פ י ר ו ב ט ק ר ב ו כ ס י ל ז בשברים של ‪D. p a r v a‬‬
‫תערובת הראקציה ללקטט ד ה י ד ר ו ג נ ז כמתואר ב צ י ו ר ‪.21‬‬
‫‪DTT‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪, 4‬‬
‫‪8.2‬‬
‫ל ק ר ב ו כ ם י ל צ י ה ה כ י ל ה ‪ 35 :‬מ י ל י מ ו ל ר בופר ט ר י ס ‪,‬‬
‫‪Q14‬׳‬
‫מ י ל י מ ו ל ר מ ג נ ז י ו ם כ ל ו ר י ד ‪ 2 0‬מ י ל י מ ו ל ר ם ו ד י ו ם ביקרבונט )המכיל‬
‫‪,‬‬
‫‪ 95‬מ י ק ר ו ג ר ת‬
‫‪,‬‬
‫‪c1\6 . 5‬ל ‪ 1 . 5 -‬מ ל י ( ‪ 8 ,‬מ י ל י מ ו ל ר ‪ N a C I‬ש ב ר י אצות ה מ כ י ל ו ת‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל ‪ ,‬ו ‪ 4 5 -‬מ י ק ר ו מ ו ל ר ר י ב ו ל ו ז ‪ , 5 -‬ו ‪ -‬ד י ם ו ט פ ט או ‪ 4 . 0‬מ י ל י מ ו ל ר פ ו ם פ ו א נ ו ל‬
‫פ י ר ו ג ט ו ‪ 1 0 -‬מ י ל י מ ו ל ר ס ו ד י ו ם ג ל ו ט מ ט בנפת ס ו פ י של ‪ 1.5‬מ ל י ‪ 100$ .‬מתיחם‬
‫‪ ^ 0 2 C‬נ צ ר ך ל מ ג י כ ל ו ר ו פ י ל לשעה‬
‫ל ‪ 1 0 5 - 8 0‬מיקרומולים‬
‫מ י ק ר ו מ ו ל י ם או‬
‫‪ N A D‬שהתחזרו ל מ ג י כ ל ו ר ו פ י ל לשעה‪.‬‬
‫בהתאמה‪ ,‬ו ל ‪ 4 0 -‬מ י ק ר ו מ ו ל י ם‬
‫‪,‬‬
‫‪.8‬‬
‫המסלול ה מ ט ב ו ל י ל י צ י ר ת ג ל י צ ר ו ל ב ‪-‬‬
‫התוצאות בפרק זה מתארות א ב ח ו ן‬
‫ידינו‬
‫ניקוי‬
‫ו ז י ה ו י של א נ ז י ם חדש ה מ ד ו ו ח ב ר א ש ו נ ה על‬
‫) ‪ ( 2 1‬ואשר ל ו א נ ו מ י ח ס י ם ת פ ק י ד מ ר כ ז י ב י כ ו ל ת האצה ה ה ל ו פ י ל י ת ל י צ ר‬
‫ג ב ו ה ו ת של‬
‫ג ל י צ ר ו ל בתאים‪.‬‬
‫ולאגור כמויות‬
‫‪-‬‬
‫‪ 60‬־‬
‫ה א נ ז י ם שנמצא מ ז ר ז את ה ר א ק צ י ה ‪8‬‬
‫‪+‬‬
‫ולכן‬
‫כ י נ י נ ו א ו ת ו בשם‬
‫‪Glycerol + N A D P‬‬
‫דיהידרוכסיאצטון רדוקטז י "‬
‫‪7 1‬‬
‫טבלה מסי ‪ 6‬מתארת את ה ד ר י ש ו ת של‬
‫‪. D. parva‬‬
‫מבלה מ ם ' ‪86‬‬
‫ב ר ו ר כ י בכל‬
‫כוון‬
‫מרכיבים הדרושים לפעילות‬
‫‪+‬‬
‫‪, 1‬‬
‫תיזוי‬
‫ק י י מ ת תלות מלאה בכל ה ק ו מ פ ו נ נ ט ו ת המשתתפות‪.‬‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ז ר ד ו ק ט ז ע ״ י תמצית חו‪.‬פשית‬
‫תיזור‬
‫תערובת ר א ק צ י ה‬
‫‪NAD(P)H‬‬
‫תערובת ראקציה‬
‫סיקרומולים‬
‫למג׳ כלורופיל‬
‫לשעה‬
‫‪42‬‬
‫מלאה‬
‫‪45‬‬
‫‪0‬‬
‫‪-NADP‬‬
‫‪0‬‬
‫מלאה‬
‫‪-NADPH‬‬
‫‪0‬‬
‫תמצית א צ ו ת‬
‫‪-‬‬
‫‪0‬‬
‫תמצית אצות‬
‫‪0‬‬
‫‪-‬‬
‫‪3‬‬
‫‪0‬‬
‫‪-NADP + NAD‬‬
‫‪4‬‬
‫‪-NADPH + NADH‬‬
‫הבדיקה ומהלך ה נ ם י ו ן כמתואר תחת " ש י ט ו ת " ‪.‬‬
‫הוספו‬
‫חימצון‬
‫דיהידרוכטיאצטון‬
‫ו‬
‫למגי כ ל ו ר ו פ י ל‬
‫לשעה‬
‫תהליך‬
‫ב‬
‫־‬
‫‪.NADP‬‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז ע ״ י תמצית ח ו פ ש י ה‬
‫חימצ ו ן גל י צ ר ו ל‬
‫)‪NAD(P‬‬
‫‪Dihydroxyacetone + N A D P H + H‬‬
‫כ ל ו ר ו פ י ל בנפח כ ו ל ל של ‪ 3‬מ ל י ־‬
‫במקום‬
‫‪NADP‬‬
‫או ‪. N A D P H‬‬
‫תמצית תאי‬
‫‬‫‪-‬‬
‫‪ D. parva‬מתאימה ל ‪5 0 -‬‬
‫ה י כ ן ש מ צ ו י ן ‪ 100 ,‬מ י ק ר ו מ ו ל ר‬
‫‪ N A D‬או ‪N A D H‬‬
‫־‬
‫‪ N A D H‬נמצאו‬
‫‪^ N A D‬‬
‫‪61‬־‬
‫בלתי פ ע י ל י ם כ מ ח ל י פ י ם ‪ NADP-V‬או ‪» N A D P H‬‬
‫נמצא פ ר ו פ ו ר צ י ו נ ל י לכמות התמצית המוםפת־‬
‫דיהידרוכסיאצטון‬
‫ניקוי‬
‫א־‬
‫שיעור חיפצון‬
‫לא נראתה כל פ ע י ל ו ת דומה של‬
‫‪. E. gracilis‬‬
‫ר ד ו ק ט ז בתמצית חופשיה מתאים ש ל א צ ה י ר ו ק ה אתרת‬
‫דיהידרובסיאצטוז רדוקטז‬
‫שברי אצות התקבלו ע ״ י‬
‫טבלה מסי ‪ 7‬מסכמת את ת ה ל י ך ה נ י ק ו י שהתבצע ב ‪.0 - 4 ° -‬‬
‫שוק א ו ס מ ו ט י של משקע תאים של ‪ 20‬ל י ט ר תרבות אצות ה מ כ י ל ‪ 0.2‬גרם כ ל ו ר ו פ י ל ״‬
‫!‬
‫נשטפו פעמים עם ‪ 1.5‬מ ו ל י‬
‫‪0‬‬
‫‪1‬‬
‫‪NaC‬‬
‫‪,‬‬
‫מילימולר טריסין‪,‬‬
‫התאים נמהל ‪ 1 / 3 0‬עם ‪ 5‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס י ן‬
‫מילימולר‪.‬‬
‫השוק ה א ו ם מ ו ט י של תאי‬
‫שבירה עדילנה י ו ת ר של התאים‪.‬‬
‫הנוזל‬
‫אחרים‬
‫‪. p H 7.4‬‬
‫נקשרים ה ר י זה שלב‬
‫אילוציה‬
‫לתמיסה‬
‫ז‬
‫י‬
‫ה ו ס‬
‫צ ל ו ל ו ז )‪ 20‬ס״מ‬
‫‪2‬‬
‫‪Sephadex (45‬‬
‫נלקחו‬
‫ם״מ‬
‫לקריאת ת ל ב ו ן‬
‫אמוניום‬
‫םולפט‬
‫פדקס ‪-25‬‬
‫לאחר כחצי שעה המשקע הורחק בהשקעה‬
‫‪x‬‬
‫ופעילות‬
‫ו נ ש מ ר ב ק ו ר ב־־^‪-20‬־‬
‫‪pH‬‬
‫) צ י ו ר ‪,(33‬‬
‫‪( ,‬‬
‫‪s‬‬
‫ו ר י כ ו ז ה א מ ו נ י ו ם םולפט‬
‫התמיסה הושארה למשך ‪12‬‬
‫‪G‬‬
‫ם ״ מ ( שטופה מראש עם א ו ת ו‬
‫עד ל‪40%-‬‬
‫המשקע המתקבל הו רחף בנפח‬
‫ו ה ו ע ל ה על ק ו ל ו נ ת‬
‫ם ו ל פ ט )‪ 68»4‬ג ר ם ל‪ 100-‬מ ל י ( ‪.‬‬
‫‪)15x1‬‬
‫‪7.5‬‬
‫‪2.5‬‬
‫‪x‬‬
‫ם ״ מ ( השטופה מראש‬
‫‪ ( 4 N H ) 2 $ 0 4‬מ ו צ ק ח ו ך בחישה ושמירת ‪p H 7 . 5‬‬
‫שעות והמשקע נאסף בהשקעה ב ‪ OOOxg,38 -‬למשך ‪ 30‬ד ק ו ת ‪.‬‬
‫ימלישל‬
‫‪xg-o10,000‬‬
‫למשך‬
‫דקות‪.15‬‬
‫מאתר ו ה א נ ז י ם א י נ ו נקשר ל ק ו ל ו נ ה ב ע ו ד ח ל ב ו נ י ם‬
‫ה ו ע ל ה בתמיסת ה נ ו ז ל ה ע ל י ו ן עד ל‪ 54) 755&-‬גרם ל‪ 100-‬מ ל י ( ‪.‬‬
‫‪, pH‬‬
‫נ י ק ו י מאחר ו ה ו א מאפשר‬
‫נ י ק ו י ש ל י ל י המאפשר א י ס ו ף ה א נ ז י ם ב נ ו ז ל ה א ל ו צ י ה ה כ ל ל י ‪.‬‬
‫‪*1‬‬
‫)‪ 28.8‬גרם ל‪ 100-‬מ ל י ( ־‬
‫‪ D. parva‬ה ו א בעצמו שלב‬
‫‪DEAE‬‬
‫לאתר השקעה‪ ,‬משקע‬
‫‪5‬־‪ p H 7‬לקבלת ר י כ ו ז מלת ס ו פ י של כ‪50-‬‬
‫שברי התאים ה ו ר ח ק ו ע ״ י השקעה‬
‫ה ע ל י ו ן שהתקבל הועלה על ק ו ל ו נ ת‬
‫ב‪ 5-‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס י ן ‪,‬‬
‫‪9‬‬
‫‪7»5‬‬
‫‪.pH‬‬
‫התאים‬
‫בופר‪.‬‬
‫‪superfine200 -‬‬
‫פ ר ק צ י ו ת של ‪ 2 - 3‬מ ל י‬
‫ו ה פ ר ק צ י ו ת ה פ ע י ל ו ת נאספו‬
‫ו ר ו כ ז ו שוב עם ‪95$‬‬
‫המשקע הורחף בנפח מ י נ י מ ל י של ‪ 95$‬א מ ו נ י ו ם‬
‫להרתקת א מ ו נ י ו ם ם ו ל פ ט ‪ ,‬הועלתה תמיסת ה א נ ז י ם ה א ח ר ו נ ה‬
‫ם ״ מ ‪ G‬ש ט ו פ ה מראש ב‪ 5-‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ם י ן ‪,‬‬
‫והמיסה ה א נ ז י ם נאספה בנפח ה א י ל ו צ י ה ה ר א ש ו נ י ‪.‬‬
‫ ־‬6 2 ‫־‬
‫פז‬
‫גד‬
z
:‫״ב‬
Q
QCB
X
o
o
o
e
‫־‬c
m
NO
3
vT
>
m
o
ui
EI
o"
1/1
fl>
8
to
to
ir}
‫ט‬
3
U
3
0 0
3
a
‫ט‬
O
o
ON
0 0
o
ON
o
O
U I
JO
to
©
>
u>
NO
-a
8
‫ט‬
u
3
‫ט‬
‫ט‬
—1
o
o
e
-‫נ‬
ON
o
0 0
UI
o
(9
19
a
0 0
3
_i
‫ו‬
‫עי‬
3
3
‫עי‬
3
a
a
ON
O
ON
to
to
to
ON
0 0
NO
ON
to
to
ON
- »
O
ui
- *
‫)י־‬
‫ט‬
3
a
- J
e
to
a
3
9!
J
a
_1
a
-a
o
o
ON
ON
ON
e
0 0
NO
o
to
ON
«
to
-‫נ‬
to
‫ ם‬3
•j —/
-> ‫ט‬
w
U
‫־ ‪ 6 3‬־‬
‫‪ISO‬‬
‫;‬
‫ב‪.‬‬
‫‪SO‬‬
‫‪100‬‬
‫)‪Elution volume (ml‬‬
‫‪0‬‬
‫‪"33‬‬
‫מדידת נפח ה א י ל ו צ י ה החלה עם העלאת חמיםת ה א נ ז י ם ‪.‬‬
‫ן״שיטות"‪.‬‬
‫‪superfine200-SephadexG‬‬
‫לסרטים ראה טקסט‬
‫תכונות דיהידרוכטיאצטוז רדוקטז‬
‫י צ י ב ו ת‬
‫האנזים‬
‫ה נ ק י המורחף ב א ם ו נ י ו ם ם ו ל פ ט ר ו ו י שמר על פ ע י ל ו ת ו למשך ‪ 2‬ח ו ד ש י • ב־‪-20°‬‬
‫רק ‪ 50/0‬מ ה פ ע י ל ו ת נשמרה אם תכשיר ה א נ ז י ם הוקפא ו ה ו פ ש ר ל ע י ת י ם ת כ ו פ ו ת בתקופה‬
‫זו‪.‬‬
‫מקדם הבליעה‬
‫מקדם הבליעה של »‪ \°/‬ח ל ב ו ן ה מ נ ו ק ה ב י ו ת ר‬
‫באורך‬
‫גל‬
‫‪nm280‬‬
‫נמצא‬
‫‪* 1 9‬‬
‫־‬
‫‪EIO‬‬
‫‪280nm‬‬
‫ו מ ו ר ח ף ב‪ 5-‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס י ן ‪,‬‬
‫‪7.4‬‬
‫‪pH‬‬
‫־ ‪ 6 4‬־‬
‫האנזים‬
‫השפעת‬
‫ריכוז‬
‫בתנאי‬
‫הראקציה ה ס ט נ ד ר ט י ם ‪ ,‬ש י ע ו ר הראקציה נמצא ת ל ו י‬
‫של ‪ 0 . 2‬־ ‪ 0‬מ י ל י ג ר ם ח ל ב ו ן‬
‫‪pH‬‬
‫בציור‬
‫ש י ע ו ר י ראקצית‬
‫נ י ת ן לראוח כי‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן רדוקסז‬
‫חיזור‬
‫שהראקציה ההפוכה של ת י מ צ ו ן‬
‫כבופר‬
‫ר י כ ו ז י ם ג ב ו ה י ם י ו ת ר לא נ ב ד ק ו ‪.‬‬
‫אופטימלי‬
‫תלות‬
‫‪.34‬‬
‫למל'‪,‬‬
‫י ש י ר ו ת ב ר י כ ו ז ה א נ ז י ם בתחום‬
‫‪p H‬‬
‫אופטימום ה־‬
‫ג ל י צ ר ו ל בעלה‬
‫לחימצון‬
‫‪pH‬‬
‫‪7.5‬‬
‫בסביבות‬
‫א ו פ ט י מ ל י של כ ־ ‪. 9 . 2‬‬
‫‪,‬‬
‫‪pH‬‬
‫בעוד‬
‫עם ב י ק ר ב ו נ ט‬
‫ג ל י צ ר ו ל נ מ ו ר מעט ל ־ ‪. p H 8 . 9‬‬
‫‪Keg‬‬
‫משקל נקבע לראקצ׳יה‬
‫‪+‬‬
‫נ י כ ר ממשואה‬
‫ב־ ‪pH‬‬
‫דיהידרוכסיאצטןן אופטימלי‬
‫קבוע ש ו ו י המשקל ה ח ר מ ו ד י נ מ ׳‬
‫שווי‬
‫של ה מ ד י ו ם הנבדק מתוארת‬
‫ז ו כי ה ־ ‪pH‬‬
‫"‪D i h y d r o x y a c e t o n e + N A D P H + h‬‬
‫בו הראקציה נ ע ש י ח י ש פ י ע ב א ו פ ן‬
‫‪s==2s‬‬
‫‪+‬‬
‫‪Glycerol + N A D P‬‬
‫ב ר ו ר על ש ו ו י המשקל ה ס ו פ י ‪.‬‬
‫על מנת ל ק ב ו ע ב א ו פ ן כ מ ו ת י את השפעת ה פ ר ו ט ו נ י ם על ש ו ו י המשקל של הראקציה מ ד י ד ו ח ה פ ע י ל ו ת‬
‫נעשו‬
‫ב־‪ 30‬מ י ל י מ ו ל ר ס ר י ס י ן ב ־ ‪p H‬‬
‫מ ש י נ ו י י הבליעה ב ‪-‬‬
‫הבליעה‬
‫‪0‬‬
‫‪4‬‬
‫המולקולרי‪.‬‬
‫‪3‬‬
‫‪m‬‬
‫מאחר‬
‫‪-‬‬
‫‪n‬‬
‫ו ל כ ל מ ו ל ק ו ל ה של‬
‫לדיהידרוכטיאצטון‪,‬‬
‫‪NADP‬‬
‫ש ו נ י ם בחתום ‪ 8 . 0‬־ ‪. 6 . 5‬‬
‫תושבה כמות‬
‫ריכוז‬
‫ה ד ה י ד ד ו כ ט י א צ ט ו ן חושב כ ש ו ו ה ל ר י כ ו ז ה ‪. N A D P H -‬‬
‫ה י ה ‪ 2 . 4‬מ ו ל ד ה נ ה נ ו שנשאר למעשה ק ב ו ע ‪.‬‬
‫‪7.0‬‬
‫‪p‬‬
‫‪(Glycero‬‬
‫‪5‬־‬
‫‪,‬‬
‫ב־‪H‬‬
‫‪p‬‬
‫)‪(NADP+‬‬
‫‪12‬־‬
‫=‬
‫המוםפת‪.‬‬
‫^‪NADP‬‬
‫היות‬
‫ריכוז‬
‫וריכוז הגליצרול‬
‫עם נ ת ו נ י ם א ל ו חושב קבוע ש ו ו י המשקל ו נ מ צ א‬
‫‪5‬־‬
‫‪A‬‬
‫ה ‪ N A D P‬שהתה זרה ל פ י קבוע‬
‫‪ N A D P‬שהתהזרה התחמצנה מ ו ל ק ו ל ה אחת של‬
‫חושב מהפחתת כמוה ‪ N A D P H - n‬ה נ ו צ ר מכמות‬
‫‪10‬‬
‫הראקציה נעשתה ב ־ ‪2 5 °‬‬
‫ובתנאים‬
‫‪,‬‬
‫)‪( D H A ) (H+‬‬
‫)‪10x5.1+0.4‬‬
‫‪n‬‬
‫‪q‬‬
‫ו־‬
‫‪10‬‬
‫=‬
‫‪4‬־‬
‫־־־‬
‫)‪(NADPH‬‬
‫‪4.6 x‬‬
‫'‪Keq‬‬
‫״‬
‫‪4‬־‬
‫‪H‬‬
‫‪7‬‬
‫‪q‬‬
‫‪p‬‬
‫‪e‬‬
‫‪K‬‬
‫'•‪1.6x‬‬
‫ואילו‬
‫ב־‪9.0‬‬
‫‪pH‬‬
‫‪3‬־‬
‫היה‬
‫‪10‬‬
‫‪K e q ' " ' 5.1‬‬
‫בעיקר‬
‫‪x‬‬
‫יצירת ג ל י צ ך ו ל ב־‬
‫‪.‬‬
‫ב ד ו ר כי‬
‫ה ר א ק צ י ה ה מ ז ו ר ז ת על י ד י‬
‫‪ pH‬נ י ט ר ל י ‪.‬‬
‫ד ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן רדוקטז תעדיף‬
‫״‬
‫צ י ו ר מ ם ‪:34‬‬
‫‪,‬‬
‫‪10.5‬‬
‫‪-‬‬
‫‪9.0‬‬
‫‪65‬‬
‫‪-‬‬
‫חלות שיעור י צ ו ר ו פ י ר ו ק ה ג ל י צ ר ו ל ב ‪-‬‬
‫‪pH‬‬
‫הבאים‪:‬‬
‫ה כ ו פ ר י ם הבאים נ ב ד ק ו ב ר י כ ו ז ‪ 3 0‬מ י ל י ם ו ל ר ו ב ת ח ו מ י ה ‪p H -‬‬
‫ט ר י ם י ן ‪ ; p H 5 . 0 - 7 . 5 ,‬ט ר י ס י ן ‪ -‬ג ל י צ י ן ‪ p H 7 . 5 - 9 . 0 ,‬־‪ ,‬י ־ ‪CAPS‬‬
‫‪ NAuP‬שהתחזרו‬
‫מתיחם ל ‪ 2 . 2 4 -‬מ י ק ר ו מ ו ל י ם‬
‫‪pH‬‬
‫‪.‬‬
‫‪100$‬‬
‫חלבון‬
‫חלבון‬
‫לדקה‪.‬‬
‫ל ד ק ה ‪ ,‬או‬
‫ל— ‪1 . 1‬‬
‫‪ NADPH‬שהחחמצנו‬
‫ ‪- 66‬‬‫קביעת‬
‫‪Km‬‬
‫ל פ י שירטוט תאורי‬
‫נ ‪pH 9 . 2 -‬‬
‫‪1‬‬
‫‪ L i n e w e a v e r - B o r k‬חושבו ערכי ה ‪Km -‬‬
‫ו נ מ צ א ו ‪ 1.5‬מ ו ל ר י—‪ 15‬מ י ק ר ו מ ו ל ר בהתאמה‪.‬‬
‫"‪ NADPH‬ב‪pH 7.5-‬‬
‫ערכי ה ‪Km -‬‬
‫ו‪NADP-‬‬
‫נמצאו ‪ 0 . 6‬מ י ל י מ ו ל ר ו‪ !$-‬מ י ק ר ו מ ו ל ר בהתאמה‪.‬‬
‫משקל מ ו ל ק ו ל ר י‬
‫המשקל ה מ ו ל ק ו ל ר י של ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז נקבע ל פ י ה א י ל ו צ י ה על ‪Sephadex G - 2 0 0‬‬
‫לפי גרף חצי ל ו ג ר י ת מ י של המשקל ה ט ו ל ק ו ל ר י של ת ל ב ו נ י • י ד ו ע י ט כמו צ י ט ו כ ר ו ם ‪C‬‬
‫כ פ ו נ ק צ י ה של נפח ה א י ל ו צ י ה‬
‫)ציור ‪.(35‬‬
‫והמוגלובין‬
‫זה ה ו ב י ל למשקל מ ו ל ק ו ל ר י של ד י ה י ד ר ו כ ט י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז‬
‫מקביל ל ז ה של ה מ ו ג ל ו ב י ן של ‪.66000-0‬‬
‫‪r‬‬
‫‪1‬‬
‫‪3.01‬‬
‫‪Molecular Weight‬‬
‫צ י ו ר ממי ‪ :35‬הערכת המשקל ה מ ו ל ק ו ל ר י של ד י ה י ר ר ו כ ם י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז כפי שנקבקה על י ד י‬
‫‪Sephadex‬‬
‫כרומטוגרפית ‪G -200‬‬
‫ם ״ מ ( הושמו ה ת ל ב ו נ י ם‬
‫‪2.5200‬־‪Sephadex G) 45x superfine‬‬
‫על ג ב י ק ו ל ו נ ח‬
‫‪) Q‬משקל מ ו ל ק ו ל ר י ‪ , ( 1 2 . 0 0 0‬ה מ ו ג ל ו ב י ן )משקל מ ו ל ק ו ל ר י ‪(66.700‬‬
‫צימוכרום‬
‫‪. ( x‬‬
‫‪2‬‬
‫ו ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז עס המסמן דקםטרן כ ח ו ל )משקל מ ו ל ק ו ל ר י א‪10‬‬
‫כחול‬
‫אילוציו! צ י ט ו כ ר ו • ‪ ,C‬המוגלובין»דקסטרן‬
‫ההרצה נעשתה ע ‪ 0‬ט ר י ם י ן ‪. p H 7 . 5 ,‬‬
‫א י ל ו צ י ת ד י ה י ד ר ו כ ט י א צ ט ו ן רדוקטז נקבעה ל פ י ה פ ע י ל ו ת ‪.‬‬
‫נקבעה לפי הצבע‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫הספציפיות‬
‫‪- 67‬‬
‫לםובטטרט‬
‫טבלה מסי ‪ 8‬מסכמת את ה ת ו צ א ו ת המטפלות ב ס פ צ י פ י ו ת של ה א נ ז י ם לסובםטרט ש ל ו ‪.‬‬
‫ה ס פ צ י פ י ו ת לםובסטרט של ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז‬
‫טבלה מ ם ' ‪88‬‬
‫פעילות‬
‫תערובת ה ר א ק צ י ה הבילה?‬
‫יחסית‬
‫סובטטרט‬
‫‪Km‬‬
‫‪M‬‬
‫‪1.0‬‬
‫‪1.5‬‬
‫‪0.26‬‬
‫‪3.4‬‬
‫‪ - 1 ,2‬פ ר ו פ נ ד י א ו ל‬
‫‪0.18‬‬
‫‪2.3‬‬
‫‪ - 2,3‬ב ו ט נ ד י א ו ל‬
‫‪0.14‬‬
‫‪3.5‬‬
‫‪ - 1 , 2‬אחנדיאול‬
‫‪0.091‬‬
‫‪1.2‬‬
‫איזו‪-‬אריתריתול‬
‫‪0.068‬‬
‫‪1.2‬‬
‫מזו‪-‬אריתריתול‬
‫‪0‬‬
‫סורביטול‬
‫‪0‬‬
‫מניטול‬
‫‪ 30‬מ י ל י מ ו ל ר ט ר י ס י ן ‪ -‬ג ל י צ י ן ‪,‬‬
‫‪9.0‬‬
‫‪50‬‬
‫‪,‬‬
‫‪pH‬‬
‫מיקרומולר ‪NADP‬‬
‫‪/‬‬
‫‪ 11‬מ י ק ר ו ג ר ם ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז בנפת ט ו פ י של ‪ 1‬מ ל י ‪ .‬א ק ט י ב י ו ת הסובסטרטים נ י ת נ ת‬
‫ביתם‬
‫חלבון‬
‫ל פ ע י ל ו ת עם ג ל י צ ר ו ל ‪.‬‬
‫‪ 100$‬פ ע י ל ו ת מתיהם ל ‪ 0 . 6 5 -‬מ י ק ר ו מ ו ל י ם ‪ N A D P‬שהתתזרו ל מ ג י‬
‫לדקה‪.‬‬
‫כמתואר‪,‬‬
‫ה פ ע י ל ו ת היתה ג ב ו ה ה בהרבה עם ג ל י צ ר ו ל ל י ע ו מ ת הסובסטךט הטוב ב י ו ת ר א ח ר י ו ‪ ,‬שהראה‬
‫רק ‪ 26$‬מ ה פ ע י ל ו ת עם ג ל י צ ר ו ל ‪.‬‬
‫דיהידרוכסיאצטון(‬
‫סדוהפטולוז‬
‫הראקציה ההפוכה היתה מ א ו ד תלשה )פתות מ ‪ 5 $ -‬מ ה פ ע י ל ו ת עם‬
‫עם הסובסטרטים ה ב א י ם !‬
‫ומתיל‪-‬גליאוקסל‪.‬‬
‫גליצראלדהיד‪,‬‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן פוספט‪,‬‬
‫ריבולוז‪,‬‬
‫‪-‬‬
‫האנזים‬
‫באופן‬
‫של ח י ז ו ר‬
‫רדוקטז‬
‫ספציפי‬
‫ל‪-‬‬
‫‪- 68‬‬
‫‪NADI^-NAD• N A D P H‬־^‪™NADP‬ה י ו בלתי פ ע י ל י ם כ מ ח ל י פ י ם ‪.‬‬
‫מ ק ב י ל ל ד ה י ד ר ו ג נ ז ו ת אתרות ה ת ל ו י ו ת ב ־ ‪ N A D P‬ו ה מ ת ז י ק ו ת ב פ ע י ל ו ת‬
‫ד י ב ל ו ר ו פ נ ו ל ‪ -‬א י נ ד ו פ נ ו ל מ נ ו ק ל א ו ט י ד י ם פ י ר י ד י נ י ם מ ת ו ז ר י ם ) ‪ ( 3 5‬גם‬
‫הראה פ ע י ל ו ת של כ‪$-‬ם‪ 5‬של ח י ז ו ר‬
‫דיאפורז‬
‫ד י כ ל ו ר ו פ נ ו ל ‪ -‬א י נ ד ו פ נ ו ל ^ ‪ N A D P I -‬בהשואה ל ח י ז ו ר‬
‫דיהידרוכםיאצטו ן ‪0‬‬
‫מעכבים‬
‫ומזרזים‬
‫כמתואר בטבלה מסי ‪ 9‬דרישה‪ .‬ל ק ב ו צ ו ת‬
‫השפעת מעכבים על פ ע י ל ו ת‬
‫מבלה מסי ‪89‬‬
‫ע יכו ב‬
‫‪$‬‬
‫תערובת‬
‫בנפח‬
‫דיהידרוכםיאצמון רדוקמז‬
‫ריכוז‬
‫מ ע כ ב‬
‫‪50‬‬
‫‪0.6‬‬
‫‪p-chloromercuribenzoate‬‬
‫‪50‬‬
‫‪1.0‬‬
‫‪2‬‬
‫‪CuCI‬‬
‫‪45‬‬
‫‪1.0‬‬
‫‪2‬‬
‫‪ZnCI‬‬
‫‪0‬‬
‫‪- 10.0‬‬
‫‪0‬‬
‫‪5.0‬‬
‫‪0‬‬
‫‪10.0‬‬
‫הראקציה הכילה‪ 30 8‬מ י ל י מ ו ל ר מ ר י ס י ן ‪,‬‬
‫‪ - S H‬ת ו פ ש י ו ת ל פ ע י ל ו ת ה א נ ז י מ ט י ת של‬
‫דהידרוכסיאצטון‪,‬‬
‫כ ל ל י של ‪ 1‬מ ל י ‪.‬‬
‫‪Et-hylendiaminetetraacetate‬‬
‫‪Hydroxylamine‬‬
‫‪dipyridyl‬־‪a,a‬‬
‫‪7.5‬‬
‫ר י כ ו ז המעכב ה נ ת ו ן‬
‫‪pH,100‬מ י ק ר ו מ ו ל ר‬
‫ו‪ 10-‬מיקרוגרם‬
‫‪j NADPH‬‬
‫דיהידרוכםיאצטוך ר ד ו ק ט ז‬
‫־ ‪ 6 9‬־‬
‫ד י י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז מתבקשת מ ע י כ ו ב‬
‫י ו ת ר של ‪8‬‬
‫גבוהים‬
‫בראקצייז ח י מ צ ו ן‬
‫בתערובת‬
‫י־‬
‫דרישת‬
‫‪0‬‬
‫ילימילי‬
‫הגליצרול‪,‬‬
‫חומרים‬
‫הראקציה‪.‬‬
‫‪CuCI2‬‬
‫א י‬
‫ה א נ ז י ם ע ״ י מתכות כבדות‬
‫ריבוזים‬
‫ו ‪.pCMB -‬‬
‫‪ Z n C ! 2‬נ ד ר ש ו על מ נ ת לעכב את פ ע י ל ו ת ה א נ ז י ם‬
‫י ת כ ן מהשפעת ה ר י כ ו ז הגבוה של ג ל י צ ר ו ל כסובםטרט‬
‫י ו צ ר י קומפלכס א ו ר ג נ י ם‬
‫ו א י א ו ר ג נ י ם כמו‬
‫)‪ 2.4‬מולר(‬
‫‪EGTA‬‬
‫‪,EDTA‬‬
‫‪Ng~,‬‬
‫‪ d i p y n d y i‬־ ‪ , a‬לא השפיעו כלל על פ ע י ל ו ת ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז כ נ ר א ה מתוסר‬
‫‪a‬‬
‫ה א נ ז י ם להשתתפות מתכות ל פ ע י ל ו ת ‪.‬‬
‫את פ ע י ל ו ת ה א נ ז י ם ה ב ק ט ר י א ל י‬
‫רדוקטז‪.‬‬
‫היונים המונווולנטים‬
‫ג ל י צ ר ו ל ד ה י ד ר ו ג נ ז התלוי‬
‫גם המעכב ה י ד ו ע ל א ל כ ה ו ל‬
‫לא השפיע על פ ע י ל ו ת ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז‬
‫הקטיון‬
‫המונוולנטי‬
‫‪+‬‬
‫‪ Na‬ו‪-‬‬
‫ב ‪ ( . N A D ( 1 7 -‬לא ע י כ ב ו את פ ע י ל ו ת‬
‫דיהדרוגנז‪,‬‬
‫הידרוכםילאמין‬
‫)‪,(100‬‬
‫)טבלה ‪. ( 9‬‬
‫^ ‪ N H‬נמצא מ ז ר ז פ ע י ל ו ת ה א נ ז י ם ה ב ק ט ר י א ל י ג ל י ציר ויל‬
‫‪+‬‬
‫ה ת ל ו י ב ־ ‪ | \ ^ 0‬ב ת ע ר ו ב ת ר א ק צ י ה עם ב ו פ ר ב י ק ר ב ו נ ט ב ‪. ( p H (15 9 . 0 -‬‬
‫נראה ב ר א ש ו נ ה גם ב פ ע י ל ו ת ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז עם ב י ק ר ב ו נ מ כ ב ו פ ר‬
‫‪.4NH+‬‬
‫‪+‬‬
‫‪ L i‬המעכבים‬
‫ב ד י ק ה ק פ ד נ י ת י ו ת ר עם ה כ ו פ ר י ם‬
‫ש ו נ י ם הראתה כ י‬
‫הזריז ע״י‬
‫גבוהים‪.‬‬
‫ביקרבונט‬
‫ה ו א ‪ ,!8.9‬מ צ א נ ו כי‬
‫‪4 NH‬‬
‫מאחר ו כ פ י ש ר א י נ ו‬
‫תוספת התמיסה ה ת ו מ צ י ת‬
‫ש‬
‫‪pH‬‬
‫ב‪pH9.2-‬‬
‫ע״י‬
‫מ ו פ י ע רק ב נ ו כ ח ו ת ב י ק ר ב ו נ ט ב ר י כ ו ז י ם נ מ ו כ י ם ו נ ע ל ם‬
‫‪+‬‬
‫אופטימום ה‪-‬‬
‫הזרוז ע״י‬
‫ל‬
‫גליצין‪,‬‬
‫‪ CAPS‬ו ב י ק ר ב ו נ ט‬
‫ב‪9.2-‬‬
‫ז ר ו ז דומה‬
‫‪+‬‬
‫‪ p H‬לראקצית ח י מ צ ו ן ה ג ל י צ ר ו ל עם‬
‫^ ‪ N H‬נ ו ב ע מהורדת ה ‪p H -‬‬
‫מ ‪ 9 . 2 -‬ל ‪ 8 . 9 -‬עם‬
‫‪ (SC<NH4)24‬לתערובת הראקצלה ו ל א מאפקט י ש י ר של ה ק ט י ו ן‬
‫על פ ע י ל ו ת ה א נ ז י ם ‪.‬‬
‫ק ב ו ע ש ו ו י המשקל של ראקצית‬
‫האנזים‬
‫ל ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן לעומת ה א פ י נ י ו ת ה נ מ ו כ ה ל ג ל י צ ר ו ל נ ו ט י ם לאפשר ס נ ט ז ה ו צ ב י ר ה‬
‫של ג ל י צ ר ו ל ‪.‬‬
‫לפתות‬
‫ו ה א פ י נ י ו ת ה ג ב ו ה ה של‬
‫סביר לכן ל ה נ י ח כי‬
‫במסלול ם י נ ט ז ת ה ג ל י צ ר ו ל‬
‫ב‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז המחואר כאן משחק ת פ ק י ד ע י ק ר י‬
‫־‬
‫ ‪ 7 0‬־‬‫ד‬
‫הרגולציה האוםמוטית ב‪-‬‬
‫‪.1‬‬
‫תידקים‬
‫י‬
‫‪7‬‬
‫ו‬
‫ו א ו ר ג נ י ז מ י ם אחרים ה מ ס ו ג ל י ם ל ג ד ו ל בסביבה טבעית מ י מ י ת ה מ כ י ל ה ר י כ ו ז י‬
‫ז מ ן רב ) ‪, 7 4‬‬
‫ק ב ו צ ו ת ח י ד ק י ם מ ס ו י מ ו ת לא רק ס ו ב ל ו ת ר י כ ו ז י‬
‫‪.(2‬‬
‫מלח‬
‫ג ב ו ה י ם י ד ו ע י ם כבר‬
‫מלח‬
‫ג ב ו ה י ם אלא אף ד ו ר ש ו ח ר י כ ו ז י מלח א ל ו‬
‫לגידול‪.‬‬
‫את ה ח י ד ק י ם ה ס ו ב ל י ם או ה ד ו ר ש י ם‬
‫מלח מ כ נ י ם ה ל ו פ י ל י ם ו מ ת ל ק י ם אותם ל ‪ 3 -‬תת ק ב ו צ ו ת ‪.‬‬
‫‪.1‬‬
‫ה ה ל ו פ ו ב י ם או‬
‫ת י ד ק י ם א ל ו מתים או ס ו ב ל י ם בקושי תכולת‬
‫הרגישים למלח‪.‬‬
‫מלח עד ‪. 8 $‬‬
‫‪.2‬‬
‫‪ 0‬ועד ר ו ו י ה‬
‫)‬
‫‪$‬‬
‫‪2‬‬
‫הקבוצה ה ה ל ו ט ו ל ר נ ט י ח ‪.‬‬
‫‪( N a C I‬‬
‫‪3‬‬
‫ח י ד ק י ם ה ה ל ו פ י ל י ם ה ג ד ל י ם בחחום‬
‫פ י ל י ם הקלים‬
‫‪)2$‬‬
‫‪20$‬‬
‫‪-‬‬
‫‪5$‬‬
‫‪-‬‬
‫‪I‬‬
‫‪32$‬‬
‫‪C‬‬
‫‪I‬‬
‫לפי‬
‫‪-2.5$‬‬
‫ולרוב מעדיפים ר י כ ו ז י ם נמוכים ל ג י ד ו ל ‪.‬‬
‫‪2$‬‬
‫‪a‬‬
‫‪C‬‬
‫‪N‬‬
‫‪a‬‬
‫בקבוצה‬
‫ז ו ח י ד ק י ם ה י כ ו ל י ם ל ג ד ו ל ב ר י כ ו ז י מלח ב י ן‬
‫‪-‬‬
‫‪32$‬‬
‫‪,‬‬
‫הבינונים )‬
‫(‬
‫‪N‬‬
‫(‬
‫ומתחלקים ל ‪ 3 -‬ת ת ‪ -‬ח ל ו ק ו ח‬
‫‪NaCI‬‬
‫‪5$‬‬
‫‪-‬‬
‫‪.‬‬
‫קנה מ י ד ה ו מ י נ ו ת א ל ו ‪,‬‬
‫‪ D u n a l i e l l a‬ה י נ ה אצה ה ל ו פ י ל י ת‬
‫ס ב י ל ו ת מלח רחבה‪ ,‬האצה דורשת ר י כ ו ז י‬
‫‪NaCI‬‬
‫ל ג י ד ו ל של ‪12$‬‬
‫הדרישה ל ‪N a C I -‬‬
‫לגידול‬
‫‪32$‬‬
‫‪C‬‬
‫‪I‬‬
‫‪a‬‬
‫‪N‬‬
‫‪.‬‬
‫ל ה ח ל י ף את ה ק ט י ו ן בכל ק ט י ו ן אחר‪.‬‬
‫הכלוריד‬
‫אי‬
‫משכנע למהות ס פ צ י פ י ו ת‬
‫חמצן‬
‫‪KCI‬‬
‫פוטוםינטטי‬
‫זו‪.‬‬
‫ב י נ ו נ י ת בעלת‬
‫ ‪ 5$‬ו ס ו ב ל ת תחום רחב של‬‫היא ס פ צ י פ י ת‬
‫ב ר י כ ו ז י ם מקבילים‬
‫נ י ת ן ל ה ח ל י ף ב ר י כ ו ז י ם מ ק ב י ל י ם של נ י ט ר ט או‬
‫ה י כ ו ל ת ל ה ח ל י ף את ה נ ת ר ן‬
‫‪( N a C I 2 0 $‬‬
‫)‪.(1‬‬
‫לא נ י ת ן‬
‫ל ‪ N a C I -‬נמצא ט ו ק ם י ‪.‬‬
‫את‬
‫סולפט ללא הבדל ב ש י ע ו ר ה ג י ד ו ל ‪.‬‬
‫ל ג י ד ו ל נראתה גם ב ח י ד ק י ם ה ל ו פ י ל י ם אך א י ן ע ד י ן הסבר‬
‫מאתר ו התוצאות ש ל נ ו מראות כ י לפחות ל ג ב י הדרישה לפליטת‬
‫נ י ת ן ל ה ח ל י ף את‬
‫א ח ר י ם לקבלת ערבי פליטת חמצן‬
‫‪NaCI‬‬
‫דומים‪,‬‬
‫ב ר י כ ו ז י ם א ו ס מ ו ט י ם ש ו ו י ם של מ ל ח י ם‬
‫י ת כ ן ‪ ,‬כ י הדרישה ל ‪-‬‬
‫וסוכרים‬
‫‪ N a C I‬בריכוז גבוה ל ג י ד ו ל‬
‫התאים קשורה ל ת כ ו נ ה ס פ צ י פ י ת של שטח פ נ י החא הדרושה לתלוקת התאים‪.‬‬
‫־‬
‫הדרישה של ה ח י ד ק י ם ה ה ל ו פ י ל י ם‬
‫ע נ י ן בתכולת המלח ה פ נ י מ י‬
‫‪71‬‬
‫ו‪-‬‬
‫באופן‬
‫טבעי‬
‫ודומה‬
‫ל ז ו של ת י ד ק י ם או אצות לא ה ל ו פ י ל י ם‬
‫‪-‬‬
‫באורגניזמים אלו‪.‬‬
‫ל ז ה ש ב ם ד י ו ם לא ת ו ו צ ר הבעיה ה א ו ס מ ו ם י ת ‪.‬‬
‫תהיה נ מ ו כ ה‬
‫כיצד‬
‫הוא‬
‫ו ה מ נ ג נ ו ן המטבולי‬
‫אם תכולת המלח ה פ נ י מ י‬
‫נמוכה‬
‫י ו ו צ ר בהכרח ג ר ד י נ ט א ו ס מ ו ט י ת ל ו ל של מלח ב י ן‬
‫התאים ל מ ד י ו ם אשר י ד ר ו ש מ נ ג נ ו ן פ ע ו ל ה מ י ו ח ד ל ש מ י ר ת ו ‪.‬‬
‫יהיה‬
‫ל ר י כ ו ז י מלח ג ב ו ה י ם ל ג י ד ו ל העלתה‬
‫אך אם ר י כ ו ז המלח בתאים י ש ו ו ה‬
‫בכל מקרה א ק ט י ב י ו ת המים ב א ו ר ג נ י ז ם ה ה ל ו פ י ל י‬
‫נ ת ו ן ל ת נ א י ם ש ו נ י ם ו מ י ו ח ד י ם מאלו‬
‫שבאורגניזמים אחרים‪.‬‬
‫ממוגל ה מ נ ג נ ו ן המטבולי בחידקים ובאצות ה ה ל ו פ י ל י ם לפעול בתנאים ק י צ ו נ י ם אלו‬
‫ב נ ו י ? שאלות א ל ו‬
‫אך התשובות ה ב י א ו‬
‫מדידות‬
‫גבוה‬
‫ב א ו פ ן מפתיע‬
‫י ש י ר ו ת של ר י כ ו ז המלת התוך חאי‬
‫בתאים ל ד י כ ו ז ק ם אף ג ב ו ה י ם י ו ת ר מ נ ת ר ן ‪.‬‬
‫בחידקים‬
‫למנוע‬
‫ל כ ו ו נ י ם ש ו נ י ם בחידקים ובאצות‪.‬‬
‫ב ח י ד ק י ם ה ל ו פ י ל י ם הראו כ י ה ר י כ ו ז באמת‬
‫ומתקרב ל ע ר כ י ם ד ו מ י ם ל א ל ו ש ב מ ד י ו ם ) ‪ ( 2 , 7 4‬נמצא כי מלבד‬
‫מתרכז‬
‫‪ Na‬ו ‪-‬‬
‫תופעה ז ו של ר י כ ו ז‬
‫ה ל ו פ י ל י ם נ ר א י ת ט י פ ו ם י ח ל כ ל ל ה ח י ד ק י ם הללו‬
‫‪CI‬‬
‫גם‬
‫נ ת ר ן ‪ ,‬אשלגן‬
‫ה ג ד ל י ם ב ת נ א י מלח‬
‫‪K‬‬
‫וכלוריד‬
‫ק י צ ו נ י י ם ומיועדת‬
‫פ ל ס מ ו ל י ז ת החאים ו ד ה י ד ר ט צ י ה ‪.‬‬
‫מדידות‬
‫הראו‬
‫היוו‬
‫בסיס למחקר ד ו מ ה מקיף ב ח י ד ק י ם ה ל ו פ י ל י ם ו ב ‪-‬‬
‫וכיצד‬
‫י ש י ר ו ת של ה ר י כ ו ז י ם התוך תאים של‬
‫רמות מלח נ מ ו כ ו ת בהרבה מאלו של ה מ ד י ו ם‬
‫‪NaCI‬‬
‫שונות‬
‫והניחי‬
‫פ נ י מ י של‬
‫הראו כ י‬
‫כ‬
‫י‬
‫הריכוז‬
‫האוסמוטי‬
‫‪ D. parva‬ה מ ו ר ח פ י ם‬
‫ב‪-‬‬
‫‪ N a C I‬הוא המרכיב העקרי‬
‫הציטופלממטית‪.‬‬
‫יכולים‬
‫כ ‪ 0 . 1 / ^ -‬בתאי‬
‫במערכת תופשית מתאים‬
‫)‪,(73‬‬
‫ואי‬
‫‪K‬‬
‫מ ד י ד ו ת ר א ש ו נ י ו ת ש ל נ ו הראו‬
‫ב‪ 1.5-‬מולד‬
‫‪.NaCI‬‬
‫ריכוז‬
‫עם זאת ע ב ו ד ו ת‬
‫ג ב ו ה מ ז ה ה נ ג ר ם ל פ י רמת המלח ב מ ד י ו ם‬
‫)‪,(3‬‬
‫בתכולה התוך ת א י ת ‪ ,‬בעקבות ה ח ד י ר ו ת ה ג ב ו ה ה של הממברנה‬
‫במהלך העבודה ה ר א נ ו ת ו צ א ו ת מ נ ו ג ד ו ת להנחה‬
‫ל ה ח ל י ף את המלח לפליטת תמצן‬
‫הפוטוסינטטית‬
‫)‪.(6‬‬
‫‪,Na‬‬
‫ו־‬
‫‪CI‬‬
‫ב‪-‬‬
‫זו‪.‬‬
‫העובדה ש ג ל ו ק ו ז‬
‫וגליצין‬
‫ו ג ל ו ק ו ז א י נ ו ע ו ב ר א ס י מ י ל צ י ה בתאים שלטים אלא רק‬
‫ה י כ ו ל ת 'של מקבלי א ל ק ט ר ו נ י ם פ ו ט ו ס י נ ט ט י ם להשתתף במערכת‬
‫בתאים ש ל מ י ם ‪ ,‬מ ו ר י ם על ת כ ו נ ו ת ח ד י ר ו ת ר ג י ל ו ת‬
‫ו ד ו מ ו ת לאצות א ח ר ו ת ‪.‬‬
‫־ ‪73‬‬
‫התצפיות‬
‫גבוה‬
‫ש ל נ ו הראו כ י‬
‫גליצרול אינו‬
‫‪-‬‬
‫נ ו ז ל ל מ ד י ו ם כאשר ר י כ ו ז המלח ב מ ד י ו ם‬
‫מ ‪ 0 . 6 -‬מ ו ל ר ‪ ,‬נ ז י ל ת א ו הפרשת ג ל י צ ר ו ל המתוארת ב ע ב ו ד ו ת אחדות ל מ ד י ו ם ה ג י ד ו ל ) ‪, 1 1‬‬
‫נובעת‬
‫ל ד ע ת נ ו מתוסר ד ו פ ן תא ר י ג י ד י‬
‫פ י ל ט ר צ י ה על מ י ל י פ ו ר ‪.‬‬
‫ו ת כ ו נ ת ש ב י ר ו ת ה הקלה של‬
‫הזדקקנו לתנאי‬
‫ב נ ס י ו נ ו ת שלנו‬
‫‪,(8‬‬
‫בתנאי‬
‫פ י ל ט ר צ י ה ע ד י נ י ם ב י ו ת ר על מנת‬
‫לאסוף את האצות ללא ש ב י ר ה ‪.‬‬
‫מנגנון‬
‫‪76‬‬
‫‪-‬‬
‫המסלולים‬
‫מחחזר‬
‫)גליצרול‬
‫המטבולים ל י צ י ר ת‬
‫‪,NADH‬‬
‫פלבופרוטאין‬
‫ב נ ו כ ת ו ת ה א נ ז י ם המסיס‬
‫בחרקים נמצא‬
‫הממוקם‬
‫ב‪-‬‬
‫זו‬
‫אנימלים‬
‫בםיטוכונדריה‪.‬‬
‫ל ג ל י צ ד ו ל פוספט‪.‬‬
‫ג ל י צ ר ו ל מתקבל בדאקציה עוקבת‬
‫נ ו ס ף ה נ ב ד ל מהראשון ב ה י ו ת ו‬
‫פוטוםינטטי‬
‫‪ D u n a l i e l l a‬מתבטא בעובדה ש ג ל י צ ר ו ל פוטפט‬
‫עקרי‪.‬‬
‫ב פ ו ט ו ס י נ ט ז ה הוא‬
‫הקושי ה ב ו ל ט ל ק י ו ם‬
‫ד ה י ד ר ו ג נ ז מ ו פ י ע בתאים‬
‫ו א י ן כל מ י ד ע על פ ע י ל ו ת א נ ז י ם זה בצמחים ו ב א צ ו ת ‪,‬‬
‫ב‪NAD-‬‬
‫‪ ( W e g m a n n [ 9‬ה צ י ע ק י ו ם מערכת ר א ק צ י ו ת ד ו מ ו ת‬
‫ה פ ע י ל ו י ו ת של ג ל י צ ר ו ל פוטפט ד ה י ד ר ו ג נ ז‬
‫ליצירת‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ם י א ט ו ן פוספט‬
‫ג ל י צ ר ו ל ‪ -‬פ ו ס פ ט ד ה י ד ר ו ג נ ז התלוי‬
‫ג ל י צ ר ו ל כתוצר‬
‫כ ר ד ו ק ט נ ט כאשר ת ו צ ר ה ח י ז ו ר ה ע י ק ר י‬
‫בי‬
‫ליצירת‬
‫ג ל י צ ר ו ל פוספט ד ה י ד ר ו ג נ ז‬
‫‪ D u n a l i e l l a‬כהסבר ל י צ י ר ת‬
‫סכמה‬
‫ג ל י צ ר ו ל ה י ד ו ע י ם ה י ו ם הם מעטים ואף לא אתד עוםק‬
‫פוספט ‪ N A D -‬א ו ק ס י ד ד ו ק ט ז ( ‪,‬‬
‫של פ ו ם פ ט ז ‪.‬‬
‫ב‪-‬‬
‫ליצירת‬
‫גליצרול ב‪-‬‬
‫ה י ד ו ע ב י ו ת ר הוא המסלול ה ג ל י ק ו ל י ט י‬
‫ע״י‬
‫נמוך‬
‫ה מ ס ל ו ל המסבולי‬
‫בצמחים‪.‬‬
‫‪ i s o f l o r i d o s i d e‬בהשפעת ע ל י ה בלתץ ה א ו ס מ ו ט י‬
‫‪ , ( O c h r o m o n a s ( 7 8‬אך תחום הלתץ ה א ו ם מ ו ט י ה ח י צ ו נ י‬
‫בהרבה מ ז ה של‬
‫‪.2‬‬
‫דומה של י צ י ר ת‬
‫התיצוני‬
‫ו ב ד ר י ש ה של ה א נ ז י ם ל ־‬
‫‪•NADPH‬‬
‫ה נ ס י ו נ ו ת ש ל נ ו הראו‬
‫ו ‪ N A D‬־ ‪ N A D P H‬ט ר נ ס ה י ד ר ו ג נ ז בתמצית חופשית‬
‫‪ D . parva‬הן מ א ו ד נ מ ו כ ו ת ו כ ך שללו את האפשרות ל ק י ו ם מ ס ל ו ל מ ט ב ו ל י‬
‫גליצרול ב‪-‬‬
‫‪NADH‬‬
‫זה‬
‫‪- 74 -‬‬
‫בחידקים מהסוג‬
‫)‪(19‬‬
‫‪A e r o b a c t e r aerogens‬‬
‫‪(18‬‬
‫נמצא ה א נ ז י ם ג ל י צ ר ו ל ד ה י ד ד ו ג נ ז ה ת ל ו י ב ‪-‬‬
‫־ ‪ (14‬ו ב־‬
‫ס^)גליצרולז‬
‫‪ , ^ 6• 1 . 1 . 1‬ר ק מ ו ת י ו נ ק י ם מ כ י ל ו ת ג ל י צ ר ו ל ד ח י ד ד ו ג נ ז ה ת ל ו י‬
‫גליצראלדהיד‬
‫לא מ צ א נ ו כל מ ע י ל ו ת של א נ ז י מ י ם א ל ו‬
‫)‪.(20‬‬
‫התלוי‬
‫‪• D . parva‬‬
‫‪-aNADP.-o‬‬
‫את ה ס ו ו ג הסיסטמתי‬
‫)‬
‫כי‬
‫ה א נ ז י ם המתואר בעבודה ז ו‬
‫)‪1.1.1.7‬‬
‫‪ , ( E C‬השואת ה ת כ ו נ ו ת של‬
‫גליצרול דהידרוגנזות‬
‫ו א ל ד ו ז ר ד ו ק ט ז ו ת ) ‪(102 , 1 0 3‬‬
‫א י נ ו זהה עם אף אהד מ ה א נ ז י מ י ם ה ל ל ו ‪.‬‬
‫המתוארים מראים פעילות ח י ז ו ר כלפי‬
‫נ ת נ ו הוכחה ב ר ו ר ה‬
‫רוב האנזימים‬
‫ג ל י צ ר א ל ד ה י ד ומספר סובםטרטים א ח ר י ם ‪.‬‬
‫ר ד ו ק ט ז ס פ צ י פ י ו ת ל ד ה י ד ר ו כ ט י א צ ט ו ן ללא י כ ו ל ת התמרה עם ג ל י צ ר א ל ד ה י ד ‪.‬‬
‫וארבינוז‬
‫‪NADH‬כםובסטרט )‪.(18‬‬
‫אלכוהול ד ה י ד ר ו ג נ ז התלוי‬
‫)‪.(105‬‬
‫‪NADP-o‬‬
‫‪L e u c o n o s t o c mesenteroides‬‬
‫אך א נ ז י ם זה א י נ ו מחזר ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן או‬
‫מכל זאת נראה כי ה ס פ צ י פ י ו ת ל ם ו ב ם ט ר ט י ם של כל א נ ז י מ י ם ה ל ל ו‬
‫בהשוואה עט ד י ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז מ ‪-‬‬
‫אלדהיד רדוקטז‬
‫‪ D. parva‬מ ו צ י א ה מכלל אפשרות זהות ב י ן‬
‫ו ה א נ ז י ם מהאצה ה ה ל ו פ י ל י ת ‪.‬‬
‫ק ב ו ע ש ו ו י המשקל של ראקצית ד ה י ד ר ו כ ס י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז‬
‫של ג ל י צ ר ו ל בתאים‪.‬‬
‫בעבודה‬
‫)‪.(20‬‬
‫‪ A e r o b a c t e r a e r o g e n s‬מהזר ד ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ב ש י ע ו ר מהיר י ו ת ר‬
‫מ ג ל י צ ר א ל ד ה י ד אך מ ע ד י ף‬
‫אלו‬
‫מארנבת מ ח ז ר י ם ד ה י ד ר ו כ ם י א צ מ ו ן רק ב ש י ע ו ר של כ־־‪ 5$‬מ ז ה של ג ל י צ ר א ל ד ה י ד‬
‫דהידרוגנז מ‪-‬‬
‫גליצראלדהיד‬
‫לדיהידרובםי‪-‬‬
‫ה ת ל ו י ם ‪ N A D R o‬מלב ו מ ש ר י ר ח ו ל ד ה מ ח ז ר י ם ד ה י ד ר ו כ ט י א צ ט ו ן ב ש י ע ו ר של כ‪,30$-‬‬
‫ב ש י ע ו ר של כ ־ ‪ 4 0 $‬מ ה ש י ע ו ר עם ג ל י צ ר א ל ד ה י ד ) ‪. ( 1 0 4‬‬
‫מכיל‬
‫‪ D. parva‬עם א נ ז י מ י ם ד ו מ י ם כמו‬
‫‪ , ( 1 8 , 2 0‬אלכהול ד ה י ד ר ו ג נ ז ו ת )‪(12‬‬
‫אצטון‬
‫‪.Dunaliella ,‬‬
‫ל פ י ה נ ו מ ק ל ט ו ר ה ה א נ ז י מ ט י ת ) ‪ ( 7 9‬א נ ו מ צ י ע י ם לתת ל ו‬
‫ג ל י צ ד ו ל ‪ N A D P :‬או ק ס י ד ד ו ק ט ז‬
‫רדוקטז מ‪-‬‬
‫ס^אוקםירדוקטז‬
‫‪ N A D P - a‬ויחיוצד‬
‫ב‪-‬‬
‫ה ת ו צ א ו ת ש ל נ ו מראות על נ ו כ ח ו ת א נ ז י ם חדש ש כ י נ י נ ו‬
‫‪Escherichia c o ! i‬‬
‫ו ה א פ י נ י ו ת הגבוהה‬
‫ו ה נ מ ו כ ה ל ג ל י צ ר ו ל נ ו ט י ם לאפשר ם י נ ט ז ה ו צ ב י ר ה של כ מ ו י ו ת ג ד ו ל ו ת‬
‫נ י ת ן לכן להציע באופן‬
‫ז ו ממלא תפקיד עקרי‬
‫ה ג י ו נ י כי‬
‫ד י ה י ד ר ו כ ט י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז המתואר‬
‫ו ב ס י ס י במסלול י צ י ר ת ה ג ל י צ ר ו ל ב ‪-‬‬
‫‪• Dunaliella .‬‬
‫־ ‪ 75‬־‬
‫ציור‬
‫מתאר‬
‫‪36‬‬
‫סכמה‬
‫למסלול‬
‫מוצעת‬
‫ביוםינטזת‬
‫‪CYCLE‬‬
‫)‪H2CJ-0 (g‬‬
‫‪C=0‬‬
‫‪CALVIN‬‬
‫‪DHAP‬‬
‫® ‪0‬־‪H2<f‬‬
‫‪7‬‬
‫‪C=0‬‬
‫‪DHA‬‬
‫‪H20‬‬
‫זי‪7‬‬
‫‪0H‬־‪H C‬‬
‫‪HC-OH‬‬
‫‪RUDP‬‬
‫הגליצרול ב ‪-‬‬
‫המתחילה‬
‫‪2‬‬
‫‪HC-OH‬‬
‫‪Pi‬‬
‫‪0<£‬־‪H C‬‬
‫‪OH‬־‪H C‬‬
‫‪2‬‬
‫־ ‪C=0‬‬
‫‪H2C-0H‬‬
‫‪2‬‬
‫‪2‬‬
‫‪•C0‬‬
‫‪H 2 C - 0 <B‬‬
‫>‪ 0 (g‬־ ־ ‪H ( f‬‬
‫‪2‬‬
‫‪PI‬‬
‫‪HO-CH‬‬
‫ציור מ ם‬
‫‪,‬‬
‫‪<36‬‬
‫מגליצראלדהיד‪-3-‬פוספט‬
‫פוספט‬
‫איזומרז‬
‫הידרוליזה•‬
‫גבוהה‬
‫במיוחד‬
‫לביוסינמזת‬
‫במעגל‬
‫לדיהידרוכסיאצון‬
‫‪-(1) -‬‬
‫בתאי‬
‫‪(12‬‬
‫‪HC-OH‬‬
‫‪OH‬־־‪H C‬‬
‫‪2‬‬
‫‪Glycerol‬‬
‫‪NADPH‬‬
‫‪ATP‬‬
‫הנוצר‬
‫בנוכחות‬
‫‪2‬‬
‫‪3-P‬־‪Ga‬‬
‫‪PGA‬‬
‫סכמה‬
‫‪OH‬־‪H C‬‬
‫‪6H‬־־‪HO‬‬
‫‪HC=0‬‬
‫‪1‬‬
‫‪C02‬‬
‫מוצעת‬
‫־‪1‬‬
‫פוספטז‪.‬‬
‫קליין‬
‫פוספט‪.‬‬
‫)‪.(80‬‬
‫קבלת‬
‫בתאי‬
‫‪. ( D u n a l i e l l a‬‬
‫השלב‬
‫‪DunalieHa‬‬
‫תרכובת‬
‫זו‬
‫הופכת על י ד י‬
‫‪A n t i a and W a t t‬‬
‫האחרון‬
‫‪NADPH‬‬
‫מצאו‬
‫מתאפשרת‬
‫פעילות‬
‫ליצירת‬
‫פוםפטז‬
‫טריאוז‬
‫ע״י‬
‫חומצי‬
‫הגליצרול הוא‬
‫חיזור‬
‫־‬
‫דיהידרוכסיאצטיז‬
‫מטבילים‬
‫עמילן‪,‬‬
‫ע ״ י ‪ N A D P H‬־ ) ‪ ( 2‬־ ב נ ו כ ח ו ת ה א נ ז י ם המלוהד ל ‪-‬‬
‫התוצאותהמתוארות מ ו כ י ח ו ת כי‬
‫זאת מאחד‬
‫ו ג ל י צ ר ו ל מ ו פ י ע כתוצר‬
‫שונים ליצירת גליצרול‪.‬‬
‫חומר התשמורת באצח‪.‬‬
‫למטבוליזם‬
‫יצירת‬
‫)‬
‫רדוקטז‬
‫לקבלת ט ר י א ו ז פוספט״‬
‫פעילות‬
‫יצירת‬
‫פוטוסינטטי‬
‫האחד‬
‫ופירוק‬
‫ב‪-‬‬
‫תלוי‬
‫בתוצר פ ו ט ו ס י נ ט ט י‬
‫‪FCCP‬‬
‫וחשני‬
‫ב פ י ר ו ק מ ט ב ו ל י של‬
‫כ ר א י ה לדרישה הכרחית של‬
‫מ ס ל ו ל פ י ר ו ק ה ג ל י צ ר ו ל י כ ו ל להתחיל משלב ח י מ צ ו ן‬
‫טרם ד ו ו ח על פ ע י ל ו ת‬
‫‪A.‬‬
‫‪aerogens(16‬‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל כראיה לדרישה הכרחית של‬
‫עם‬
‫‪ D u n a l i e l l a‬ס ב י ר ל ה נ י ח ק י ו ם ש נ י מסלוליים‬
‫שני המסלולים עוכבו ע״י‬
‫חימצון‬
‫ה ג ל י צ ר ו ל באצה א י נ ן ת ל ו י ו ת ב א ו ר ‪.‬‬
‫ל ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ‪ ,‬מ ל ו ו ה ב פ ע י ל ו ת עוקבת של‬
‫כ ז ו נראתה ב ח י ד ק י‬
‫ע י כ ב את פ י ר ו ק‬
‫‪- 76‬‬
‫‪ATP‬‬
‫‪,‬‬
‫הגליצרול ע״י‬
‫דיהידרובסיאצטון‬
‫קינז ב‪-‬‬
‫‪ATP‬‬
‫קינז‬
‫וראה גם " מ ב ו א " ( ‪.‬‬
‫אך‬
‫‪FCCP‬‬
‫גם ל מ ט ב ו ל י ז ם פ י ר ו ק ה ג ל י צ ר ו ל ‪.‬‬
‫ד ו ר ש י ם כ מ ו ב ן מחקר? הרחבה‬
‫מטלולי‬
‫ביוםינטזת הגליצרול ופירוק הגליצרול ב‪-‬‬
‫ופירוט‬
‫נ ו ס פ י ם ב ע י ק ר ל ג ב י ה ר א ק צ י ו ת המשתתפות ובהשפעת ה ר ג ו ל צ י ה ה א ו ם מ ז ט י ת על רמת ה א נ ז י מ י ם‬
‫המשתתפים‪.‬‬
‫קביעת ה ר ג י ש ו ת למלח של‬
‫נמוכים‬
‫תאיים‬
‫אנזימים מ‪-‬‬
‫בהרבה מאלו ה ד ר ו ש י ם ל ג י ד ו ל ‪.‬‬
‫ל א ו ר ה ע ו ב ך ה שהאצות צ ו ב ר ו ת‬
‫ג ב ו ה י ם צ י פ י נ ו ל כ ן ש א נ ז י מ י ם מתאי‬
‫יהיו‬
‫ג ל י צ ר ו ל ל ר י כ ו ז י • תוך‬
‫ע מ י ד י ם ל א י נ א ק ט י בצי ה ע ״ י‬
‫ג ל י צ ר ו ל או‬
‫אפילו‬
‫האנזימטיות‬
‫ו ה פ ו ט ו ט י נ ט ט י ו ת שנבדקו לא הראו דרישה ס פ צ י פ י ת ל ג ל י צ ר ו ל אך‬
‫סבילות‬
‫שונות‬
‫מ‪-‬‬
‫ידרשו‬
‫הראתה כאמור ע י כ ו ב ב ר י כ ו ז י ם‬
‫ר י כ ו ז י ם ב ס י ס י ם של ג ל י צ ר ו ל ל פ ע י ל ו ת א נ ז י מ ט י ת מלאה־‬
‫ל ר י כ ו ז י • ג ב ו ה י ם של ג ל י צ ר ו ל ‪.‬‬
‫מאחר‬
‫כ ו ל ן הראו‬
‫ו ג ל י צ ר ו ל י ד ו ע כמיצב פ ע י ל ו י ו ת א נ ז י מ ט י ו ת‬
‫נ ר א י ת ס ב י ל ו ת ה ג ל י צ ר ו ל כ י ע ו ל תופעה ר ג י ל ה ו ל א כאדפטציה מ י ו ח ד ת של ה א נ ז י מ י ם‬
‫‪. Dunaliella‬‬
‫כגליצרוטולרנטי ות‪.‬‬
‫בהקבלה‬
‫למינות ההלופילי‬
‫נ כ נ ה את תופעת ה ס ב י ל ו ת ל ג ל י צ ר ו ל ב ‪D u n a l i e l l a -‬‬
‫‪ 7 7 -‬־‬
‫‪.3‬‬
‫פ ע י ל ו י ו ת פ ו ט ו ס י נ ט ט י ו ח של‬
‫באור‪,‬‬
‫ה פ ו ט ו כ י מ י ו ת של תאי‬
‫עוצמת האור הדרושה ל פ ל י ט ת חמצן‬
‫לאצות‬
‫ירוקות‬
‫של‬
‫‪ , D. parva‬ספקטרום ה ב ל י ע ה ‪ ,‬ספקטרום ההבדל‬
‫ו ר ג י ש ו ת למעכבים של מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם כ ו ל ם‬
‫ו ל כ ל ו ד ו פ ל ס ט י ם מצמחים ע ל א י י ם ‪.‬‬
‫עם ז א ת ‪ ,‬ח ו ס ר ד ו פ ן תא‬
‫טיפוסיים‬
‫והתכונות המיוחדות‬
‫‪ D . parva‬מאפשרות ל נ צ ל את השפעת ה ש י נ ו י י ם ב א ו ס מ ו ל ד י ו ת ה מ ד י ו ם להכנת ח ל ק י ק י ם‬
‫תת‪-‬תאיים‬
‫אצות‬
‫ה מ ס ו ג ל י ם לבצע ר א ק צ י ו ת פ ו ט ו ס י נ ט ט י ו ת ‪.‬‬
‫ח ד י ר ו ת למקבלי‬
‫הפחמן־‬
‫י ר י ד ה ב ר י כ ו ז ה א ו ס מ ו ט י של ה מ ד י ו ם י צ ר ה‬
‫ו מ ע ב י ר י א ל ק ט ר ו נ י ם ת ו ך שמירה על פ ע י ל ו ת חלקית של פליטת חמצן‬
‫וקיבוע‬
‫מצב ב י נ י ם זה י ו צ ר תכשיר אצות ד ו מ ה מ א ו ד ל ״ כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם ש ל מ י ם "‬
‫ה מ ב ו ד ד י ם מצמחים ע ל א י י ם ) ‪,81 , 8 2‬‬
‫‪.(47‬‬
‫ב ד ו מ ה ‪ ,‬פ ע י ל ו ת ג ב ו ה ה י ח ס י ת התקבלה ב מ ד י ו ם‬
‫ג ל י צ ר ו ל לעומת ה פ ע י ל ו ת ה נ מ ו כ ה ב ר י כ ו ז א ו ס מ ו ל ר י מ ק ב י ל של‬
‫‪ NaCI‬״‬
‫המכיל‬
‫ט ו ר ב י ט ו ל ‪ ,‬מ נ י ט ו ל או‬
‫ירידה‬
‫נ ו ס פ ת ב א ו ס מ ו ל ר י ו ת גרמה ל פ י צ ו ץ התאים ו ע י כ ו ב פליטת החמצן ה צ מ ו ד ל ק י ב ו ע ד ו ‪ -‬ת ח מ ו צ ת‬
‫הפחמן‪.‬‬
‫חימצון‬
‫התצפית ששברי‬
‫ח י ז ו ר נ מ ו ך כמו‬
‫‪Diquat‬‬
‫הראשונה‬
‫ו ה ש נ י ה פ ע י ל ו ת בתכשיר‬
‫זאת שברי‬
‫בתכשירים‬
‫תסרים‬
‫זה‪.‬‬
‫י כ ו ל י ם ל ח ז ר באור צ ב ע י‬
‫עם מ י ם כמוסר א ל ק ט ר ו נ י ם מראה כי שתי מערכות ה א ו ר‬
‫ת ו צ א ו ת אתרות מראות פ ע י ל ו ת כל מערכת א ו ר ב נ פ ר ד ‪.‬‬
‫‪ - N A D P -‬ר ד ו ק ט ז באצה‪.‬‬
‫לפוטוסינסזה‬
‫כמקובל להניח?‬
‫עם‬
‫כל פ ע י ל ו י ו ת של ר א ק צ י ו ת א ו ר ה ת ל ו י ו ת ב פ ר ד ו ק ס י ן א פ י ל ו‬
‫ה מ ח ז י ק י ם ב י כ ו ל ת לקבע ד ו ‪ -‬ת ח מ ו צ ת ה פ ח מ ן ‪,‬‬
‫השאלה האם המסלול פ ר ד ו ק ס י ן ־«‬
‫ו י ו ל ו ג ן בעלי‬
‫פוטנציאל‬
‫ולמרות נוכחות פרדוקםין‬
‫ופלבופרוטאין‬
‫ה נ ם י ו נ ו ת ה מ ת ו א ר י ם ב נ ו ש א זה העלו את‬
‫‪ - N A D P -‬ר ד ו ק ט ז * ‪ N A D P‬הכרחי‬
‫ב א ו פ ן מוחלט‬
‫‪-‬‬
‫התוצאות‬
‫הפלבופדוטאיז‪,‬‬
‫האמורים‪,‬‬
‫כמחזר‬
‫‪.C‬‬
‫‪- 78‬‬
‫המתוארות הראו כי מ ע כ ב י ם ל מ ס ל ו ל ז ה ‪ ,‬ש נ י ם ה פ ו ע ל י ם על פ ר ד ו ק ס י ן ואחד על‬
‫פ ו ט ו ס י נ ט ז ה ב ר י כ ו ז י ם אשד ע י כ ב ו‬
‫לא ע י כ ב ו‬
‫נ י ת ן לצפות ל כ ן כ י לפחות ב ת נ א י ם אלו ת ו צ ר מ ח ו ז ר של מערכת ה א ו ר ה ר א ש ו נ ה משמש‬
‫‪ 0 2‬ק י ו ם ת ו צ ר מ ח ו ז ר כ ז ה בעל פ ו ט ו נ צ י א ל ח י מ צ ו ן‬
‫)‪,84‬‬
‫ב א ו פ ן מלא את פ ע י ל ו ת ה ח ל ב ו נ י ם‬
‫‪(25 ,83‬‬
‫והצעות דומות ה ו פ י ע ו‬
‫א י נ ה מעוכבת< אר‬
‫)‪. ( 8 5 - 88‬‬
‫ח י ז ו ר נ מ י ר כבר ת ו א ר בהרחבה‬
‫עם הוספת‬
‫ל א צ ו ת שלמות‪,‬‬
‫‪DSPD‬‬
‫יתכן‬
‫י צ י ר ת ג ל י ק ו ל ט מועדפת על ז ו של ס ו כ ר י ם ) ‪. ( 6 2 , 9 1‬‬
‫פוטוסינטזה‬
‫ו ז ה שוב תוצאה‬
‫של צבירת ת ו צ ר מ ת ו ז ר ר א ש ו נ י של מערכת האור ה ר א ש ו נ ה ‪ ,‬אשר ק י ו מ ו ה ו צ ע כחומר ב י נ י ם הכרחי‬
‫;‬
‫יצירת ג ל י ק ו ל ט )‪,90‬‬
‫בזמן‬
‫‪,(89‬‬
‫‪Euglena‬‬
‫א נ ו ה ר א נ ו כ א ן כ י תוםפת ‪ DSPD‬לתאים שלמים של‬
‫ה ג ד ל י ם בחושך א י נ ה מ ו נ ע ת התפתחות ה פ ע י ל ו ת ה פ ו ם ו ס י נ ט ט י ת ב א ו ר ‪ ,‬אלא מעכבת חזק את י צ י ר ת ‪.‬‬
‫גליצראלדהיד‪-3-‬פוםפט‬
‫‪NADPH‬‬
‫ד ה י ד ד ו ג נ ז התלוי‬
‫ב‪.NADP-‬‬
‫ה א נ ז י ם ה א ח ר ו ן נחשב כ ח י ו נ י ל צ ר י כ ת‬
‫כמקור הכוח המחזר ב פ ו ט ו ם י נ ט ז ה ) ‪. ( 8 6‬‬
‫שינויי‬
‫‪v i v o (93, 92, 41‬‬
‫‪n‬‬
‫‪i‬‬
‫(‬
‫הבתולה עם הארת אצות שלמוח ה ו א ר ו כשיטה למדידת ח י ז ו ר‬
‫שתי‬
‫‪.‬‬
‫ע ו ב ד ו ת ע ק ר י ו ת ש ו ל ל ו ת הנחה‬
‫המהירה של ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה ה ת ל ו י ה במערכת האור ה ר א ש ו נ ה ‪.‬‬
‫הכחולה מתארים מצבי‬
‫חימצון‬
‫‪ -‬ח י ז ו ר של‬
‫התלוי‬
‫במערכת ה א ו ר ה ר א ש ו נ ה ‪.‬‬
‫למעבר‬
‫א ל ק ט ר ו נ י ם הפיך מ ס ו ג ז ה ‪.‬‬
‫בנזוקינון‬
‫אם א ו מ נ ם ש י נ ו י י‬
‫‪ , N A D P‬הרי תופעה זו תחשב כ ח י מ צ ו ן‬
‫הירידה‬
‫‪NADPH‬‬
‫ע ד י ן כל ב י ס ו ס‬
‫נסיוני‬
‫‪4‬ו‬
‫העובדה ה ש נ י ה התקבלה מ ע י כ ו ב ק י ב ו ע‬
‫בתאי‬
‫ב נ ז ו ק י נ ו ן ללא השפעה על העליה‬
‫ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הבתולה ) ‪. ( 9 4‬‬
‫מקבל א ל ק ט ר ו נ י ם ממערכת מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם מ פ ל ס ט ו ק י נ ו ן‬
‫‪ , ( 9 5‬או ‪, ( x " (97"-0‬‬
‫למרות שאתר ע י כ ו ב נ ו ס ף כמו במעגל ק ל ו י ן‬
‫חימצון‬
‫זו‪.‬‬
‫ב ע ק ר ו ן ר א ק צ י ה כ ז ו ת ת כ ן ‪ ,‬אך א י ן‬
‫‪ phorphyridium cruentum‬ע״י‬
‫הראשונה‪ ,‬לפי‬
‫‪NADP‬‬
‫‪ N A D P H‬הרי נצפה ל ע ל י ה ר צ י פ ה‬
‫לא ה ו ב ח ן כל ש י נ ו י‬
‫מעכב את ת י ז ו ר‬
‫הפוטוסינטטית‪,‬‬
‫ב ק י נ ט י ק ה של ש י נ ו י י‬
‫יתכן‪.‬‬
‫אם רק ה א ת ר ו ן‬
‫ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה‪,‬‬
‫ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה‬
‫)‪,96‬‬
‫י ת ק י י ם ב ת נ א י ם בהם גם י ע ו כ ב‬
‫מאתר‬
‫ובנוכתות‬
‫) ‪ , ( 9 4‬נראה כ י‬
‫‪ N A D P‬ב א ו פ ן תתרותי ע ״ י קליטת א ל ק ט ר ו נ י ם ממערכת מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם‬
‫ותופעת ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה א י נ ה מתארת‬
‫‪ N A D P ' ^ ' n n‬באצות ש ל מ ו ת ‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫‪ 79‬־‬
‫במהלך העבודה ה ע ל נ ו הנחה כי תופעת ש י נ ו י י‬
‫של תרכובת ב ל ת י‬
‫ושינויי‬
‫במערכת מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם אלא נמצאת ב ש ו ו י משקל עם אתד ה מ ר כ י ב י ם במערכת‪ .‬נראה ל נ ו כ י תרכובת‬
‫רציף‬
‫י ד ו ע ה המתחמצנת ע ״ י מערכת האור הראשונה וייתחזרת ע ״ י מערכת האור ה ש נ י ה ‪ .‬מאחר‬
‫ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה א י נ ם נ ר א י ם ב כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם נראה כ י תרכובת ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה א י נ ה‬
‫ממוקמת‬
‫באופן‬
‫חלקי‬
‫הכחולה נמצאת ב ש ו ו י משקל עם פ ל ס ט ו ק י נ ו ן מ ה נ י מ ו ק י ם ה ב א י ם ‪ ,‬רק כאשר פ ל ם ט ו ק י נ ו ן מ ח ו ז ר‬
‫נ צ פ י ת תופעת ה ע ל י ה ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה כ ל ו מ ר ב ת נ א י ם בהם מ ת ק י י ם מעבר א ל ק ט ר ו נ י ם‬
‫ממים ל פ ל ס ט ו ק י נ ו ן‬
‫ו פ ל ס ט ו ק י נ ו ן מתחמצן ע ״ י מקבל א ל ק ט ר ו נ י ם מ ל א כ ו ת י כמו‬
‫ע " י מקבל ה א ל ק ט ר ו נ י ם הטבעי‬
‫פלםטוקינון‪.‬‬
‫פלםמוקינון‬
‫נוטף‬
‫ל פ ו ט ו ט י נ ט ז ה ‪ N A D P‬ת ו ך שמירה על מצב ח י מ צ ו ן‬
‫ה פ ל ט ט ו ק י נ ו ן ע ״ י מערכת ה א ו ר הראשונה מ ע ו כ ב ע ״ י‬
‫ו מ כ א ן גם תרכובת ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הבתולה מ ת ח ז ר י ם ב א ו פ ן מלא‬
‫חוטפה‬
‫)‪.(94‬‬
‫מהשפעת‬
‫‪.DBMIB‬‬
‫‪ DBMIB‬ו א ו ר א ד ו ם ‪ -‬ר ח ו ק נראה כ א י ל ו‬
‫זה פ ל ס ט ו ק י נ ו ן ע צ מ ו ‪ ,‬אך‬
‫איפיון‬
‫ב א ו פ ן ב ר ו ר כ י א י ן זה כ ך ‪.‬‬
‫ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכחולה ומהותה ד ו ר ש י ם מחקר נ ו ט ף ‪.‬‬
‫‪ C‬במהלך‬
‫ה פ ו ט ו ם י נ ט ז ה‬
‫ת ו ך תאי‬
‫לריכוזים גבוהים‪.‬‬
‫מ י ו ח ד של אצה אשר א י נ ה מ ס ו ג ל ת ל נ צ ל י ש י ר ו ת‬
‫‪2‬‬
‫‪. 0‬‬
‫יתכן‬
‫ו ז ה קשור ל ע ו ב ד ה שהאצה י ו צ ר ח ו צ ו ב ר ת‬
‫ג ל י צ ר ו ל נמצא מעכב ח י ז ו ר‬
‫) צ י ו ר ‪ , ( 3 1‬אך מהות ה ע י כ ו ב ואתר פ ע ו ל ת ו טרם ב ו ר ד ו ‪.‬‬
‫הקומפלקס‬
‫הפרדוקסין‬
‫‪NADP‬‬
‫באור בכלורופלטטים‬
‫ע ב ו ד ו ת ש ו נ ו ת מתארות את‬
‫‪ -‬פ ל ב ו פ ר ו ט א י ן כאתר פ ע ו ל ה ר ג י ש ל ר י כ ו ז מלח ג ב ו ה ) ‪. ( 3 6 , 3 7 , 9 8 , 9 9‬‬
‫אם א כ ן מערכת מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם ה פ ו ט ו ס נ ט ט י בצד ה מ ת ו ז ר של‬
‫באתר‬
‫ו א י נ ם מראים ח י ז ו ר‬
‫נראה רק ח י מ צ ו ן תרכובת ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה ה כ ח ו ל ה המעוכב ע ״ י תוספת‬
‫‪ D. parva‬ע ש ו י ה ל י צ ג מקרה טבעי‬
‫מחסה‬
‫‪*DBMIB‬‬
‫כאשר מערכת האור ה ר א ש ו נ ה מעוכבת ע ״ י ‪ D C M U‬א ו בהארה‬
‫ספקטרום ה ב ל י ע ה ו ס פ ק ט ר ו ם הפליטה של ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הראו‬
‫לקיבוע‬
‫ח י ז ו ר מטו ים של‬
‫ה ת ו צ א ו ת ש ל נ ו ה ח א י מ ו להנחה כ י תרכובת ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה ה כ ח ו ל ה נמצאת ב ש ו ו י משקל‬
‫פלםטוקינון‪.‬‬
‫תרכובת‬
‫ב נ ז ו ק י נ ו ן או‬
‫ב נ ז ו ק י נ ו ן מחמצנת את ה פ ל ט ט ו ק י נ ו ן ומאפשרת החזרת ש י נ ‪ -‬ו י י‬
‫הכחולה בהארה‬
‫אדום‪-‬רחוק‪,‬‬
‫כל‬
‫עם‬
‫כאשר ח י מ צ ו ן‬
‫בתלות ב א ו ר ‪.‬‬
‫״פלורוםגציה‬
‫באור‬
‫ה פ ל ו ר ו ם נ צ י ה הכחולה מתארת מצבי ח י מ צ ו ן‬
‫‪-‬חיזור‬
‫‪ PS I‬ב ‪-‬‬
‫מעוכבת‬
‫י ח י י ב הדבר ש י מ ו ש י ש י ר בכוח המחזר של מערכת ה א ו ר ה ר א ש ו נ ה ל ת י ז ו ר ד ו ‪-‬‬
‫תחמוצת הפחמן במעגל ק ל ו י ן ‪.‬‬
‫־ ‪80‬‬
‫‪0‬‬
‫‪1‬‬
‫»‬
‫י‬
‫‪-‬‬
‫ו‬
‫ב‬
‫ם‬
‫‪ , D u n a l i e l l a parva‬אצה ה ל ו פ י ל י ת י ר ו ק ה ח ד ‪ -‬ת א י ת הראתה פ ע י ל ו י ו ת פ ו ט ו כ י מ י ו ת‬
‫של ספקטרום ב ל י ע ה ‪ ,‬ספקטרום הבדל ב א י ר ‪ ,‬תלות בעוצמת ה א ו ר לפליטת חמצן‬
‫מעבר א ל ק ט ר ו נ י ם פ ו ט ו ס י נ ט ט י‬
‫פולטת חמצן‬
‫ט י פ ו ס י ו ת לאצות י ר ו ק ו ת‬
‫ו ר ג י ש ו ת למעכבי‬
‫ו ל כ ל ו ר ו פ ל ס ט י ם מצמחים ע ל א י י ם ‪.‬‬
‫פ ו ט ו ס י נ ט ט י רק ב נ ו כ ת ו ת ר י כ ו ז י ם א ו ס מ ו ל ר י ם ג ב ו ה י ם אך ללא דרישה פ פ צ י פ י ת ל מ ל ח ‪.‬‬
‫ת כ ש י ר י ם ת ו פ ש י י ם מתאים התקבלו ע ״ י הדתפת התאים ב מ ד י ו ם בעל א ו ט מ ו ל ר י ו ת נ מ ו כ ה ‪.‬‬
‫שהתקבלו‬
‫הראו‬
‫פ ע י ל ו י ו ת ג ב ו ה ו ת של ח י ז ו ר‬
‫כל ר א ק צ י ו ת א ו ר ה ת ל ו י ו ת ב פ ר ד ו ק ם י ן ‪.‬‬
‫פעילות‬
‫א נ ז י מ ט י ת רחב‪.‬‬
‫אשר ה ח ז י ק ו‬
‫בהארה‬
‫ה נ ו ז ל ה ע ל י ו ן שהתקבל לאחר הרתקת השברים הראה פ ר ו פ י ל‬
‫הדתפת התאים ב מ ד י ו ם בעל א ו ס מ ו ל ר י ו ת ב י נ ו נ י ת • י צ ר ה תכשיר " כ ל ו ד ו פ ל ס ט י ם "‬
‫ב י כ ו ל ת חלקית ל פ ל ו ט חמצן‬
‫ו ל ק ב ע ד ו ‪ -‬ת ח מ ו צ ת ה פ ח מ ז ‪ ,‬ת ו ך שמידה על‬
‫‪ DSPD‬ו פ י ר ו פ ו ס פ ט נ ב ח ן ביתד ד י ו ק ו נ ק ב ע כ פ ר ד ו ק ס י ן ‪.‬‬
‫על מ ט ל ו ל מעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם ה פ ו ט ו ס י נ ט ט י‬
‫בתכשירים‬
‫ת ו פ ש י י ם מתאים של‬
‫ע ל י ה פ ו ע ל כל מעכב‪.‬‬
‫ב א ו ר של‬
‫הפוטוסינטזה‪,‬‬
‫חזרנו‬
‫‪,NADP‬‬
‫יכולתם לחזר‬
‫בין‬
‫שלשה מעכבים ה פ ו ע ל י ם‬
‫‪ N A D P‬לא השפיעו על פ ו ט ו ט י נ ט ז ה‬
‫‪Euglena g r a c i l i s‬‬
‫גליצדאלדהיד‪-3-‬פוספט ד ה י ד ד ו ג נ ז התלוי‬
‫יצירת כ ל ו ר ו פ י ל‬
‫‪- 1‬‬
‫אתר‬
‫‪ D . parva‬ב ר י כ ו ז י ם המעכבים ל ג מ ר י את ה פ ע י ל ו ת ה א נ ז י מ ט י ת‬
‫תוספת ‪ DSPD‬לתאי‬
‫ה ג ד ל י ם בחושך מ נ ע ה את ה י צ י ר ה‬
‫‪ , N A D P - o‬אך לא את התפתחות‬
‫וגליצראלדהיד‪-3-‬פוספט ד ה י ד ד ו ג נ ז התלוי‬
‫ב‪-‬‬
‫‪, NAD‬‬
‫על תופעת ה ע ל י ה ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה כ ח ו ל ה בהארת אצות שלמות‪ ,‬המיותםת ל ח י ז ו ר‬
‫ושללנו‬
‫י ת ו ס זה ל פ י תצפית ה י ר י ד ה ב פ ל ו ר ו ס נ צ י ה ה כ ח ו ל ה בהארת האצות ב א ו ר א ד ו ם ‪-‬‬
‫בדיקה מפורטת הראתה כ י‬
‫במעבר ה א ל ק ט ר ו נ י ם ה פ ו ט ו ס י נ ט מ י‬
‫ה ת ו צ א ו ת במסגרת‬
‫ה ק ו מ פ ו נ נ ט ה האתראית ל ש י נ ו י י ה פ ל ו ר ו ס נ צ י ה הכתולה ממוקמת‬
‫ב י ן מערכת האור ה ר א ש ו נ ה למערכת ה א ו ר ה ש נ י ה ‪.‬‬
‫ז ו הראו כ י לפחות ב ת נ א י ם מ ס ו י מ י ם ת ו צ ר מ ת ו ז ד של מערכת האוד‬
‫ה ר א ש ו נ ה הקודם ל פ ר ד ו ק ס י ן במעבד ה א ל ק ט ר ו נ י ם ה פ ו ט ו ם י נ ט ט י‬
‫הפחמן‬
‫יכולת לקיים‬
‫הצד ה מ ח ו ז ר של מערכת ה א ו ר ה ר א ש ו נ ה ב פ ו ט ו ס י נ ט ז ה נבדק ע ״ י פ ע י ל ו ת מ ע כ ב י ם ‪.‬‬
‫ה פ ע ו ל ה של‬
‫רחוק‪.‬‬
‫ו ז י ר ח ו ן ת ל ו י ו ת ב א ו ר ‪ ,‬אך ה י ו חסרי‬
‫השברים‬
‫פדיציאניד‪.‬‬
‫‪.2‬‬
‫התלויה‬
‫האצה‬
‫בפוטוסינטזה‪.‬‬
‫י כ ו ל לשמש כמחזר ל ד ו ‪ -‬ת ת מ ו צ ת‬
‫‪-‬‬
‫פעילויות פוטוםינטטיות‬
‫‪.3‬‬
‫עוכבו‬
‫הראו‬
‫ז ו ר ז ו ע״י‬
‫ולא‬
‫‪81‬‬
‫ו א נ ז י מ ט י ו ת של ת כ ש י ר י ם ח ו פ ש י י ם מתאים מ ‪D. parva -‬‬
‫ר י כ ו ז י מלח נ מ ו כ י ם בהרבה מאלו ה ד ר ו ש י ם ל ג י ד ו ל ה א צ ו ת ‪.‬‬
‫תוצאות אלו‬
‫כ י התאים מ ק י מ י ם ר י כ ו ז מלח ת ו ר תאי נ מ ו ך בהרבה מ ה ר י כ ו ז ה נ ו כ ח ב מ ד י ו ם ה ס ו ב ב ‪.‬‬
‫‪.4‬‬
‫מצאנו כי‬
‫בכמויות‬
‫ג ד ו ל ו ת בתוך ה א צ ו ח ‪.‬‬
‫ונמצא‬
‫מתמיד‬
‫שווה אוסמוטית‬
‫במדיום‬
‫הועלה או‬
‫יוצרת‬
‫וצוברת‬
‫ג ל י צ ר ו ל כ ת ו צ ר פ ו ט ו ס י נ ט ט י עקרי‬
‫ל פ י מ ד י ד ו ח של הנפח התוך תאי חושב ר י כ ו ז ה ג ל י צ ר ו ל בתאים‬
‫) כ ‪ 2 . 1 -‬מ י ל ר ( עם ר י כ ו ז ה מ ד י ו ם של ‪ 1.5‬מ ו ל ד‬
‫‪.NaCI‬‬
‫כאשר ר י כ ו ז המלת‬
‫ה ו ר ד ת כ ו ל ו ת ה ג ל י צ ד ו ל ו ה מ י ם בתאים השתנו ת ו ך שמירה על ש ו ו י משקל א ו ס מ ו ם י‬
‫ב י ן התאים ל מ ד י ו ם כאשר כ ‪ 9 0 -‬דקות נדרשות ל ג ל י צ ד ו ל ל ה ג י ע לדמתו החדשה‪.‬‬
‫נראתה‬
‫נ ז י ל ת ג ל י צ ר ו ל מהתאים מעל ‪ 0 . 6‬מ ו ל ד‬
‫ליצירה‬
‫באצות‬
‫‪-‬‬
‫ו פ י ר ו ק מ ט ב ו ל י ם של ג ל י צ ר ו ל ‪.‬‬
‫לפיו‬
‫ה א י ז ו ן האוסמוטי ת ל ו י‬
‫‪,NaCI‬‬
‫מאחר ולא‬
‫ה ש י נ ו י מ בתכולת ה ג ל י צ ר ו ל בתאים מ י ו ח ס י ם‬
‫ת ו צ א ו ת א ל ו הראו ק י ו ם ט י פ ו ס חדש של ר ג ו ל צ י ה א ו ס מ ו ט י ת‬
‫ב י צ י ר ה ו ב פ י ר ו ק של ג ל י צ ר ו ל ת ו ך תאי ב ת ג ו ב ה ל ר י כ ו ז המלח‬
‫החיצוני‪.‬‬
‫‪.5‬‬
‫‪+ NAD‬‬
‫בידדנו‪,‬‬
‫ניקינו‬
‫א נ ז י ם חדש מ ‪-‬‬
‫ה א נ ז י ם מ ז ר ז את ה ר א ק צ י ה ‪:‬‬
‫‪NADPDihydroxyacetone‬‬
‫קבוע ש ו ו י המשקל מ ע ד י ף את‬
‫ה נ מ ו כ ה מ א ו ד של ה א נ ז י ם‬
‫ואפינו‬
‫‪ D. parva‬א ו ת ו‬
‫כינינו‬
‫‪~* G l y c e r o l +‬‬
‫יצירת הגליצרול‬
‫לגליצרול)‪KmM1.5‬‬
‫ס ב י ר ל כ ן ל ה נ י ת כי‬
‫ב‪-‬‬
‫»‪-‬‬
‫••‬
‫)^‪10‬‬
‫״‬
‫‪2‬‬
‫(‬
‫‪x‬‬
‫יאפשרו‬
‫»־‬
‫‪.(Keq‬‬
‫זאת י ח ד עם ה א פ י נ י ו ת‬
‫ם י נ ט ז ה ו א ג י ד ה של כ מ ו י ו ת ג ד ו ל ו ת של‬
‫ל ד י ה י ד ר ו כ ם י א צ ט ו ן ר ד ו ק ט ז ת פ ק י ד עקרי במסלול ה מ ט ב ו ל י ל י צ י ר ת‬
‫מתוארת הצעה ל מ ס ל ו ל ה מ ט ב ו ל י‬
• 8 2 -
REFERENCES
1.
M . K . J o h n s o n , E.J. J o h n s o n , R.D. M a c e l o r y , H.L. S p e e r , a n d B.S. Bruff,
J . B a c t e r i d . 95 (1968) 1 4 6 1 .
2.
H. L a r s e n , i n : A d v a n c e s i n M i c r o b i o l . P h y s i o l . V o l . I , eds. A . H . Rose a n d
J . F . W i l k i n s o n , ( A c a d e m i c Press, N e w Y o r k 1967), p. 97.
3.
E. M a r re a n d O . S e r v a t t a z , A t t i i a c c a d .
n a z l . L i n c c i Rend Classe s c i . f i s .
mat. e t n a t . 2 6 (1959) 2 7 2 .
4.
M . G i n z b u r g , B i o c h i m . Biophys. A c t a 173 (1969) 3 7 0 .
5.
M . T r e z z i , G . G a l l i , a n d E. B e l l i n i , G i o r n B o t a n . I t a l . 7 2 (1965) 2 5 5 .
6.
H. O k a m o t o a n d Y . S u z u k i , Z . A l l g e m . M i c r o b i o l . 4 (1964) 3 5 0 .
7.
A . B e n - A m o t z a n d M . A v r o n , P l a n t P h y s i o l , i n press.
8.
J . S . C r a i g i e a n d J . M c L a c h l a n , C a n . J . Bot. 42 (1964) 7 7 7 .
9.
K. W e g m a n n , B i o c h i m . Biophys. A c t a 2 3 4 (1971) 3 1 7 .
10.
F. W i n k e n b a c h , B.R. G r a n t a n d R . G . S . B i d w e l l , C a n . J . Bot. 5 0 (1972) 2 5 4 5 .
11.
K. W e g m a n n , Progress i n P h o t o s y n t h e t i c Research V o l . I l l (1969) 1559.
12.
N . J . A n t i a a n d A . W a t t , J . Fisheries Res. Board C a n a d . 22 (1965) 7 9 8 .
13.
L . A . U n d e r k o f l e r a n d E . I . F u l m e r , J . A m . C h e m . Soc. 5 9 (1937) 3 0 1 .
14.
R . M . Burton a n d N . O . K a p l a n , J . A m . C h e m . Soc. 75 (1953) 1005.
15.
E.C. L i n a n d B. M a g a s a n i c , J . B i o l . C h e m . 2 3 5 ( I 9 6 0 ) 1820.
16.
E.C. L i n , A . P . L e v i n a n d B. M a g a s a n i c , J . B i o l . C h e m . 2 3 5 ( I 9 6 0 ) 1824.
17.
J . E . S t r i c k l a n d a n d O . N . M i l l e r , B i o c h i m . Biophys. A c t a 159 (1968) 2 2 1 .
18.
R . M . Burton i n : M e t h o d s i n E n z y m o l o g y , V o l . I , eds. S.P. C o l l o w i c k a n d
N . O . K a p l a n ( A c a d e m i c Press, N e w Y o r k 1955) p. 3 9 7 .
19.
R.E. Asnis a n d A . F . B r o d i e , J . B i o l . C h e m . 2 0 3 (1953) 153.
20.
A . W . K o r m a n n , R . O . Hurst a n d T . G . F l y n n , B i o c h i m . Biophys. A c t a 2 5 8
(1972) 4 0 .
21.
A . B e n - A m o t z a n d M . A v r o n , FEBS Letters 2 9 (1973) 153.
22.
M . A v r o n i n : C u r r e n t T o p i c s i n B i o e n e r g e t i c s V o l . I I , e d . D.R. S a n a d i ( A c a d e m i c
Press, N e w Y o r k 1967) p. 1 .
- 83 23.
B. Rumberg, £ . N a t u r f o r s c h . B19 (1964) 7 0 7 ,
24.
B. C h a n c e , A . San P i e t r o , M . A v r o n a n d W . W . H i l d r e t h i n : N o n - h e m e i r o n
p r o t e i n s , e d . A . San P i e t r o ( A n t i o c h Press 1965) p. 2 2 5 .
25.
G . Z w e i g a n d M . A v r o n , B i o c h e m . Biophys. Res. Communs 19 (1965) 3 9 7 .
26.
R. M a I k m a n d A . J . B e a r d e n , B i o c h e m . Biophys. Res. Communs 46 (1972) 1299.
27.
J . S . L e i g h a n d P.L. D u h ‫ ־‬o n , B i o c h e m . Biophys. Res. Communs 46 (1972) 4 1 4 .
28.
T. H i y a m a a n d B. K e , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 147 (1971) 9 9 .
29.
C . F . Y o c y m a n d A . San P i e t r o , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 140 (1970) 152.
30.
Y . F u j i t a a n d J . M y e r s , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 119 (1967) 8.
31.
G . R e g i t z , R. Berzborn a n d A . T r e b s t , Planter B e r l . 91 (1970) 8.
32.
H.E. D a v e n p o r t , i n : N o n - h e m e i r o n p r o t e i n s , e d . A . San P i e t r o ( A n t i o c h Press
1965) p. 115.
33.
E. T e l - O r S. Fuchs a n d M . A v r o n , FEBS Letters 2 9 (1973) 156.
34.
A . Trebst a n d M . B u r b a , Z . P f l a n z e n p h y s i o l . 57 (1967) 4 1 9 .
35.
G . Z a n e t f i a n d G . F o r t i , J . B i o l . C h e m . 241 (1966) 2 7 9 .
36.
G . F o r t i , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 140 (1970) 107.
37.
G . F o r t i a n d E . M . M e y e r , P l a n t P h y s i o l . 4 4 (1969) 1 5 1 1 .
38.
L . N . M . Duysens, S c i e n c e 121 (1955) 2 1 0 .
39.
B. C h a n c e , B r o o k h a v e n Symp. B i o l o g y 11 (1958) 7 4 .
40.
B. C h a n c e a n d L. S m i t h , N a t u r e 175 (1955) 8 0 3 .
41.
J . Amesz a n d L . N . M . Duysens, B i o c h i m . Biophys. A c t a 6 4 (1962) 26.1.
42.
A . B e n - A m o t z a n d M . A v r o n , Plant P h y s i o l . 4 9 (1972) 2 4 0 .
43.
A . B e n - A m o t z a n d M . A v r o n , Plant P h y s i o l . 4 9 (1972) 2 4 4 .
44.
S . H . H u t n e r , M . K . Bach a n d G . I . M . Ross, J . P r o t o z o o l . 21 (1956) 1 0 1 .
45.
J . B i g g i n s , Plant P h y s i o l . 42 (1963) 1442.
46.
M . A v r o n , A n a l . B i o c h e m . 2 (1961) 5 3 5 .
47.
D.A.Walker,
48.
D . I . A r n o n , Plant P h y s i o l . 2 4 (1949) 1 .
49.
M . A v r o n a n d B. C h a n c e , B r o o k h a v e n Symp. B i o l . 19 (1966) 149.
Plant P h y s i o l . 4 0 (1965) 1157.
‫ ־‬84 50.
G . A . H u d o c k a n d R.C. F u l l e r , Plant Physiol 40 (1965) 1205.
51.
H. R o t t e n b e r g , T. G r u n w a l d a n d M . A v r o n , Eur. J . B i o c h e m . 2 5 (1972) 5 4 .
52.
D. W i e l a n d
i n : M e t h o d s o f E n z y m i c A n a l y s i s , Ed. H . U . Bergmeyer ( A c a d e m i c
Press, N e w Y o r k 1963) p. 2 1 1 .
53.
M . L a m b e r t a n d A . C . N e i s h , C a n . J . Res. 28 (1950) 8 3 .
54.
O . H . L o w r y , N . J . Rosebrough, A . L . Farr a n d R.J. R a n d a l l , J . B i o l . C h e m . 193
(1951) 2 6 5 .
55.
H . H . S t r a i n a n d W . A . S v e c , i n : The C h l o r o p h y l l s , e d s . L.P. V e r n o n a n d G . R . S e e l y
( A c a d m i c Press, N e w Y o r k , 1966) p. 2 1 .
56.
H.T. W i t t , B. R u m b e r g , P. S c h m i d t - M e n d e , U . S i g g e l , B. S h e r r a , J . V a t e r a n d
J . W e i k a n d , A n g e w . C h e m . Inst. Ed. E n g l . 4 (1965) 7 9 9 .
57.
A . S h n e y o u r , a n d M . A v r o n , FEBS Letters 8 (1970) 164.
58.
C . C a r m e l i a n d M . A v r o n i n : M e t h o d s o f E n z y m o l o g y V o l . 2 4 , e d . A . San P i e t r o
( A c a d e m i c Press, N e w Y o r k , 1972) p. 9 2 .
59.
E. L a t z k o a n d M . G i b b s , Plant P h y s i o l . 4 4 (1969) 2 9 5 .
60.
M . D . H a t c h a n d C.R. S l a c k , B i o c h e m . J . 112 (1969) 5 4 9 .
61.
R.A. L a z z a r i n i a n d A . San P i e t r o , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 106 (1964) 6.
62.
H. G i m m l e r , W . U l l r i c h , J . D o m a n s k i - K a d e n a n d W . U r b a c h , Plant C e l l P h y s i o l .
10 (1969) 103.
63.
W . C o c k b u r n , D . A . W a l k e r a n d C . W . B a l d r y , Plant P h y s i o l . 43 (1968) 1415.
, 6 4 . W . C o c k b u r n , C . W . B a l d r y a n d D . A . W a l k e r , B i o c h i m . Biophys. A c t a 143 (1967) 6 1 4 .
65.
R . G . Jensen a n d J . A . Bassham, B i o c h i m . Biophys. A c t a 153 (1968) 2 1 9 .
66.
G . B e n ‫ ־‬H a y y i m , A . H o c h m a n a n d M . A v r o n , J . B i o l . C h e m . 2 4 2 (1967) 2 8 3 7 .
67.
G . Brawerman a n d N . K o n i g s b e r g , B i o c h i m . Biophys. A c t a 43 ( I 9 6 0 ) 3 7 4 .
68.
A . T r e b s t , E. H a r t h a n d W . D r a b e r , Z . N a t u r f o r s c h g . 2 5 b (1970) 1157.
69.
H. Bohme, S. Reimer a n d A . T r e b s t , Z . N a t u r f o r s c h g . 26b (1971) 3 4 1 .
70.
H. G i m m l e r a n d M . A v r o n , l l n d I n t . Congress o n Photosynthesis, Stresa (1971) p. 7 8 9 .
71.
N . S h a v i t a n d M . A v r o n , B i o c h i m . Biophys. A c t a 131 (1967) 5 1 6 .
7 2 . Y . H i e m e r , Personal c o m m u n i c a t i o n .
• 8 5 •
73.
Y . M . K w o n a n d B.R. G r a n t , Plant C e l l P h y s i o l . 12 (1971) 2 9 .
74.
H. Larsen i n : The B a c t e r i a , V o l . 4,eds. I.C. Gusalus a n d R.Y. S t a n i e r ,
( A c a d e m i c Press, N e w Y o r k , 1962) p. 2 9 7 .
75.
B . J . D . M e e u s e , i n : Physiology a n d B i o c h e m i s t r y o f A l g a e , e d . R.A. L e w i n
76.
H. Kauss, N a t u r e 2 1 4 (1967) 1129.
77.
H. Kauss, a n d B. S c h o b e r t , FEBS Letters 19 (1971) 1 3 1 .
78.
B. S c h o b e r t , E. U n t n e r a n d H. Kauss, Z . P f l a n z e n p h y s i o l . Bd. 6 7 (1972) 3 8 5 .
79.
Enzyme N o m e n c l a t u r e ‫ ־‬Recommendations (1964) o f the I n t e r n a t i o n a l U n i o n o f
B i o c h e m i s t r y , E l s e v i e r , A m s t e r d a m , 1965.
80.
M . C a l v i n a n d J . A . Bassham. The Photosynthesis o f C a r b o n Compounds
( W . A . B e n j a m i n , I n c . N e w Y o r k 1962).
81.
R . G . J e n s e n , a n d J . A . Bassham, Proc. N a t l . A c a d . S c i . (Wash) 5 6 (1965) 1095.
82.
P.P. K a l e n b e r e r , B.B. Buchanan a n d D . I . A r n o n , Proc. N a t l . A c a d . S c i . (Wash)
5 7 (1967) 1542.
83.
C . C . B l a c k , B i o c h i m . Biophys. A c t a 120 ( I 9 6 0 ) 3 3 2 .
84.
B. K o k , H . J . R u r a i n s k y , O . O w e n s , B i o c h i m . Biophys. A c t a 109 (1965) 3 4 7 .
85.
C . Y . B a l d r y , C . Bucke a n d J . C o o m b s , B i o c h e m . Biophys. Res. Communs 37 (1969)
828.
86.
J . A . Bassham a n d M . C a l v i n , The Path o f C a r b o n o f Photosynthesis ( P r e n t i c e H a l l ,
EngIewood C l i f f s , N . J . 1957).
87.
O . K a n d l e r a n d M . G i b b s , P l a n t P h y s i o l . 31 (1956) 4 1 1 .
88.
E.I. R a b i n o w i t e h , Photosynthesis ( I n t e r s c i e n c e Publishers, I n c . , N e w Y o r k 1956)
p. 1630.
8 9 . W . A . Jackson a n d J . V o l k , A n n . Rev. Plant P h y s i o l . 21 (1970) 3 8 5 .
90.
Z . Plaut a n d M . G i b b s , P l a n t P h y s i o l . 45 (1970) 4 7 0 .
91.
H. G i m m l e r , W . U r b a c h , W . D . Jeschke a n d W . S i m o n i s , Z . P f l a n z e n p h y s i o l .
Bd. 58 (1968) 3 5 3 .
92.
L . N . M . Duysens a n d J . A m e s z , B i o c h i m . Biophys. A c t a 2 4 (1957) 19.
• 8 6 •
93.
J . M . O l s o n a n d J . A m e s z , B i o c h i m . Biophys. A c t a 37 ( I 9 6 0 ) 14.
94.
H. G i m m l e r , Personal c o m m u n i c a t i o n .
95.
N . I . Bishop i n : B i o c h e m . Dimensions o f Photosynthesis, eds. D . W . K r o g m a n n
a n d W . H . Powers ( W a y n e S t a t e U n i v e r s i t y Press, D e t r o i t , 1965) p. 2 1 .
96.
H. G i m m l e r a n d M . A v r o n , Z . N a t u r f o r s c h . 26 (1971) 5 8 5 .
97.
A . Trebst a n d H. E c k , Z . N a t u r f o r s c h g . 16 (1961) 4 4 .
98.
G . P . Foust, S . G . M a y h e w a n d V . M a s s e y , J . B i o l . C h e m . 2 4 4 (1969) 9 6 4 .
99.
N . N e l s o n a n d J . N e u m a n n , J . B i o l . C h e m . 2 4 4 (1969) 1932.
100.
H. Sund a n d H. T h e o r e l l i n : The Enzymes, V o l . 7 , eds. P.D. B o y e r , H. L a r d y
a n d K. M y r b a c k ( A c a d e m i c Press, N e w Y o r k , 1963) p. 2 5 .
101.
A . D . W i n e r , A c t a C h e m . S c a n . 12 (1958) 1695.
102.
S. Hayman a n d J . H . K i n o s h i t a , J . B i o l . C h e m . 2 4 0 (1965) 8 7 7 .
103.
H . G . Hers, B i o c h i m . Biophys. A c t a 37 ( I 9 6 0 ) 120.
104.
C . J . T o e w s , B i o c h e m . J . 105 (1967) 1067.
105.
B . M . S c h e r a n d B.L. H o r e c k e r , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 116 (1966) 117.
106.
B. M o l l a n d R.P. L e v i n e , Plant P h y s i o l . 46 (1970) 5 7 6 .
107.
O . W a r b u r g a n d W . C h r i s t i a n , B i o c h e m . Z . 310 (1941) 3 8 4 .
108.
B.B. Buchann
a n d D . I . A r n o n , i n : M e t h o d s i n E n z y m o l o g y , e d . A . San P i t e r o
II
3.
E n z y m i c a n d p h o t o s y n t h e t l c r e a c t i o n s o f c e l l - f r e e p r e p a r a t i o n s f r o m D. parva w e r e
i n h i b i t e d , rather than s t i m u l a t e d , by the s a l t c o n c e n t r a t i o n o p t i m a l f o r g r o w t h .
These
results suggested t h a t D. parva c e l l s m a i n t a i n a c o n s i d e r a b l y l o w e r i n t e r n a l s a l t c o n c e n t r q t i o n t h a h t h a t present i n the surrounding m e d i u m .
4.
D. p a r v a was f o u n d to p r o d u c e g l y c e r o l as a m a j o r p r o d u c t o f p h o t o s y n t h e s i s , a n d t o
a c c u m u l a t e v e r y l a r g e amounts o f i n t r a c e l l u l a r g l y c e r o l .
Through measurements o f the
i n t r a c e l l u l a r v o l u m e the i n t e r n a l c o n c e n t r a t i o n o f g l y c e r o l was c a l c u l a t e d , a n d f o u n d to
be
isoosmotic (around 2.1 M ) w i t h the m e d i u m c o n c e n t r a t i o n o f 1.5 M N a C I . W h e n the
e x t r a c e l l u l a r salt c o n c e n t r a t i o n o f an a l g a l suspension was increased o r decreased the
i n t r a c e l l u l a r w a t e r c o n t e n t i m m e d i a t e l y v a r i e d so as t o k e e p an osmotic e q u i l i b r i u m
b e t w e e n the c e l l s a n d the medium. A b o u t 90 minutes w e r e r e q u i r e d f o r changes i n g l y c e r o l
c o n t e n t t o reach its new l e v e l .
S i n c e no l e a k a g e o f i n t r a c e l l u l a r g l y c e r o l was<.observed
a b o v e 0 . 6 M N a C I , these a l t e r a t i o n s i n g l y c e r o l content
a r e i n t e r p r e t e d as d u e to
metabolic formation and degradation of intracellular g l y c e r o l .
These results i n d i c a t e
t h e e x i s t e n c e o f a new t y p e o f a l g a l o s m o r e g u l a t i o n , i n w h i c h t h e osmotic b a l a n c e
depends o n the synthesis o r d e g r a d a t i o n o f i n t r a c e l l u l a r g l y c e r o l in response t o the
external salt concentration.
5.
W e i s o l a t e d , p u r i f i e d a n d c h a r a c t e r i z e d a new e n z y m e f r o m D. parva a n d c a l l e d i t
d i h y d r o x y a c e t o n e reductase.
The e n z y m e c a t a l y z e d the r e a c t i o n :
Dihydroxyacetone + N A D P H + H
+
^ ‫ ^ = ־‬Glycerol + N A D P
The e q u i l i b r i u m constant favors t h e f o r m a t i o n o f g l y c e r o l ( K e q = 2 x 1 0 " ) .
+
This c o u p l e d
w i t h the v e r y l o w a f f i n i t y o f the e n z y m e f o r g l y c e r o l ( K m = 1.5 M ) w i l l tend to promote
t h e synthesis a n d a c c u m u l a t i o n o f l a r g e amounts o f g l y c e r o l .
It i s , t h e r e f o r e ,
reasonable
t o suggest t h a t the d i h y d r o x y a c e t o n e r e d u c t a t e plays a major r o l e i n t h e p a t h o f g l y c e r o l
synthesis i n D. p a r v a .
A proposed scheme o f g l y c e r o l synthesis i n D u n a l i e l l a is suggested.
SUMMARY
1.
D u n a l i e l l a p a r v a , a g r e e n u n i c e l l u l a r h a l o p h i l i c a l g a , showed p h o t o c h e m i c a l
a c t i v i t i e s , absorption spectrum, l i g h t induced difference spectrum, l i g h t intensity
d e p e n d e n c e o f o x y g e n e v o l u t i o n a n d s e n s i t i v i t y to e l e c t r o n transport i n h i b i t o r s . t y p i c a l
o f o t h e r g r e e n a l g a e a n d o f h i g h e r plants.
The a l g a e e v o l v e o x y g e n p h o t o s y n t h e t i c a l l y
o n l y i n the presence o f h i g h osmolar c o n c e n t r a t i o n s , w i t h no s p e c i f i c r e q u i r e m e n t for
NaCI.
C e l l f r e e p r e p a r a t i o n s w e r e o b t a i n e d by p l a c i n g the c e l l s i n a medium o f l o w
osmolarity.
The fragments o b t a i n e d showed h i g h p h o t o r e d u c i n g a n d p h o t o p h o s p h o r y l a t i n g
a c t i v i t i e s , but were unable to c a t a l y z e a l l ferredoxin dependent photoreactions.
P l a c i n g the c e l l s i n a medium o f i n t e r m e d i a t e o s m o l a r i t y p r o d u c e d a " c h l o r o p l a s t "
p r e p a r a t i o n w h i c h m a i n t a i n e d some c a p a c i t y for C 0
2
f i x a t i o n , w h i l e possessing the
a b i l i t y to c a t a l y z e the p h o t o i n d u c e d r e d u c t i o n o f f e r r i c y a n i d e .
2.
The r e d u c i n g side o f photosystem I was f u r t h e r i n v e s t i g a t e d by t h e e f f e c t o f i n h i b i t o r s .
The site o f a c t i o n o f d i s a l i c y l i d e n e p r o p a n e d i a m i n e a n d pyrophosphate was more c l o s e l y
d e f i n e d as a c t i n g on f e r r e d o x i n . Three i n h i b i t o r s w h i c h a c t on the e l e c t r o n p a t h b e t w e e n
f e r r e d o x i n a n d N A D P had no e f f e c t on photosynthesis i n c e l l f r e e p r e p a r a t i o n s o f D. parva
a t c o n c e n t r a t i o n s w h i c h c o m p l e t e l y i n h i b i t e d the e n z y m i c a c t i v i t y on w h i c h e a c h
i n h i b i t o r acts.
The a d d i t i o n o f DSPD t o d a r k g r o w n E. g r a c i l i s
c e l l s p r e v e n t e d the l i g h t
induced formation of NADP-dependent glyceraldehyde‫־‬3‫־‬phosphate dehydrogenase,
b u t n o t o f photosynthesis, o r N A D - d e p e n d e n t g l y c e r a l d e h y d e ‫ ־‬3 ‫ ־‬p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s e .
W e c o n f i r m e d the phenomenon o f the increase in b l u e f l u o r e s c e n c e on i l l u m i n a t i o n
o f w h o l e a l g a l c e l l s , b u t showed t h a t c o n t r a r y t o p r e v i o u s i n t e r p r e t a t i o n i t d i d n o t
r e f l e c t the r e d u c t i o n o f N A D P i n v i v o .
A d e t a i l e d a n a l y s i s showed t h a t the site o f the
b l u e f l u o r e s c i n g compound i n the e l e c t r o n transport p a t h was b e t w e e n photosystem II
a n d photosystem I.
The a b o v e results i n d i c a t e t h a t , a t least under some c o n d i t i o n s , a r e d u c e d p r o d u c t
o f photosystem I p r e c e d i n g f e r r e d o x i n i n t h e e l e c t r o n transport p a t h , can serve as t h e
r e d u c t a n t o f C O « in photosynthesis.
PHOTOSYNTHETIC AND OSMOREGULATION MECHANISMS
IN THE HALOPHILIC ALGA
DUNALIELLA
PARVA
Thesis s u b m i t t e d f o r t h e D e g r e e
of
Doctor of Philosophy
by
AMI BEN-AMOTZ
S u b m i t t e d t o t h e Scientific
Rehovot
C o u n c i l of t h e W e i z m a n n Institute o f S c i e n c e
April 1973
PHOTOSYNTHETIC AND OSMOREGULATION MECHANISMS
IN THE HALOPHILIC ALGA
DUNALIELLA
PARVA
Thesis s u b m i t t e d f o r t h e D e g r e e
of
Doctor of Philosophy
by
AMI BEN-AMOTZ
S u b m i t t e d t o t h e Scientific C o u n c i l o f t h e W e i z m a n n Institute of S c i e n c e
Rehovol
April 1973

Ph.D. Fulltext - Weizmann Institute of Science

Transcription

Similar documents

ד^מת א^ןת - ליאורה גולדברג

ייצור פוספט - ICL Fertilizers

להורדת חוברת הדרכה והתקנה לחץ כאן!

Ph.D. Fulltext - Weizmann Institute of Science

דוח תקופתי