FC Milieu Kligler Hajna

FICHE MILIEU DE
CULTURE
MILIEU KLIGLER HAJNA
I- BUT
C’est un milieu combiné pour l’identification rapide des bacilles Gram –. Il permet la lecture directe de différents caractères :
 utilisation du glucose
 utilisation du lactose (et recherche de la -galactosidase voire aussi de la LDC)
 production de gaz
 production d’H2S
II- COMPOSITION ET ROLE DES CONSTITUANTS
Constituants
Rôle
Peptones (15g)
Source d’azote
Extraits de levure et de viande (6g)
Source de facteurs de croissance
Chlorure de sodium (5g)
Source de minéraux – maintien de la pression osmotique
Glucose (1g)
Source de carbone et d’énergie (faible concentration)
Lactose (10g)
Source de carbone et d’énergie (forte concentration)
Rouge de phénol (25mg)
Indicateur pH
Thiosulfate de sodium (0,3g)
Précurseur de la production d’H2S
Citrate de fer III (0,2g)
Révélateur de la production d’H2S
Agar (11g)
Agent gélifiant
Eau
Solvant
pH= 7,4
III- MODE OPERATOIRE
Le milieu est habituellement présenté en culot devant avoisiner 3 cm et en pente de 5 cm.
 Ensemencer le culot par piqûre centrale avec une pipette Pasteur boutonnée chargée de suspension bactérienne
 Puis ensemencer la pente sans recharger la pipette en faisant des stries serrées
 Dévisser en partie la capsule du tube pour permettre une incubation 24h à 37°C en aérobiose (et pour éviter également
la surpression du tube dans le cas des bactéries fortement gazogènes)
IV- LECTURE
 observation du culot : (en zone anaérobie)
 Bactérie Glu + Lac + : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis du lactose 
le culot devient jaune
 Bactérie Glu + Lac – : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis faible
utilisation des peptones (alcalinisation faible du milieu en anaérobie)  le culot reste jaune
 Bactérie Glu – Lac – : pas d’utilisation des glucides  le culot reste rouge
 observation de la pente : (en zone aérobie)
 Bactérie Glu + Lac + : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis du lactose 
la pente devient jaune
 Bactérie Glu + Lac – : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis forte
utilisation des peptones (alcalinisation forte du milieu en aérobie)  la pente devient rouge
 Bactérie Glu – Lac – : pas d’utilisation des glucides  la pente reste rouge
 observation de la jonction pente-culot pour la recherche de production d’H2S
 observation d’un soulèvement éventuel du culot pour la recherche de production de gaz.
Remarque :
Une bactérie utilisant le lactose (lactose +) utilisera obligatoirement le glucose (glucose+)
Une bactérie glucose – sera obligatoirement lactose –
ZONE DU TUBE
Culot
(anaérobiose)
Pente
(aérobiose)
CARACTERE
RECHERCHE
ASPECT
INTERPRETATION
CONCLUSION
LECTURE
Pas de virage de l’indicateur coloré  absence
d’acide dans le milieu
GLUCOSE –
Virage de l’indicateur coloré  accumulation
d’acides dans le milieu : le glucose a été
fermenté
GLUCOSE +
Pas de virage de l’indicateur coloré  absence
d’acides dans le milieu
LACTOSE –
Virage de l’indicateur coloré  accumulation
d’acides dans le milieu : le lactose a été utilisé
LACTOSE +
Pas de production de gaz
GAZ –
glucose
lactose
Gaz en
glucose
La production de gaz lors de la fermentation du
glucose provoque une fragmentation de la
gélose
GAZ +
Culot
ou jonction
pente-culot
Absence d'un précipité noir de sulfure de fer.
La bactérie n’a pas réduit les sulfates en sulfure.
H2S –
Présence d'un précipité noir de sulfure de fer.
La bactérie a réduit les sulfates en sulfure.
H2S +
H2S
LAC-, GLU+, H2S+, GAZ-
LAC+, GLU+, H2S-, GAZ+
LAC-, GLU+, H2S+, GAZ-