Andreas Hillarp, Året som gått - APTT, AT och Fibrinogen

• ÅRET SOM GÅTT
• APTT-ANTITROMBIN-FIBRINOGEN
Equalis 2014: APTT
Aktiverad partiell tromboplastintid
A. Hillarp ([email protected])
Reaktioner som påverkar APTT
Intrinsic pathway
HMWK
PK
XII
Extrinsic pathway
XIIa
XI
TF
VIIa
XIa
IX
TF
VII
IXa
VIIIa
X
Xa
Va
Protrombin
Trombin
Fibrinogen
Fibrin
APTT: utförande
 1 del plasma
• Mäter summan av alla
faktorer i ”intrinsic-vägen”
 1 del ”aktivator”(ej Ca2+)
• Normal tid ca. 30-40 s
Inkubation 3-5 min, 37 ˚C
• Går ej att kalibrera!
 1 del kalciumklorid
Bestäm tiden till koagelbildning
• Påvisa faktorbrist, mäta
heparin, lupus
antikoagulans, inhibitorer
etc.
Equalis: APTT
Youden plot 2015:01
APTT: uppdelat på material och metoder
Material
APTT-SP
Actin FSL
STA PTT
Alla
Koag 96
31,4 sek
CV = 2,5 %
28,5 sek
CV = 1,5 %
35,3 sek
CV = 4,5 %
33,7 sek
CV = 9,7 %
Koag 97
48,6 sek
CV = 5,6 %
63,9 sek
CV = 4,7 %
61,9 sek
CV = 4,0 %
60,6 sek
CV = 8,2 %
Koag 98
55,1 sek
CV = 6,3 %
63,5 sek
CV = 4,3 %
63,7 sek
CV = 3,9 %
62,5 sek
CV = 8,2 %
CV (%)
Equalis: APTT 2014
Equalis utskick 2014
Equalis 2014: Antitrombin
Equalis: Två metodgrupper för antitrombin
Xa och IIa (trombin) baserade reagens
Indirekt substratmetod baserad på
trombininhibition
1. Antitrombin + heparin
2. [AT-heparin] + trombin (överskott)
3. Substrat (peptid-pNA)
[AT-heparin]
[AT-heparin-trombin] + trombin (rest)
peptid + pNA (färg)
• Antitrombin (AT) binder heparin och inaktiverar trombin.
• Rest-trombin klyver substratet. Frisättning av pNA ger upphov
till färgutveckling vilket detekteras spektrofotometriskt.
• Absorbansen blir omvänt proportionell mot AT-koncentrationen
Indirekt substratmetod baserad på
Xa-inhibition
1. Antitrombin + heparin
2. [AT-heparin] +Xa (överskott)
3. Substrat (peptid-pNA)
[AT-heparin]
[AT-heparin-Xa] + Xa (rest)
peptid + pNA (färg)
• Antitrombin (AT) binder heparin och inaktiverar faktor Xa
• Rest-Xa klyver substratet. Frisättning av pNA ger upphov
till färgutveckling vilket detekteras spektrofotometriskt.
• Absorbansen blir omvänt proportionell mot AT-koncentrationen
Equalis: Antitrombin
Kommersiella reagens för antitrombin:
A.
Inhibition av bovint/humant faktor Xa, NPU21557
Coamatic® Antithrombin (Chromogenix)
HemosIL™Antithrombin (IL)
Innovin® Antithrombin (Siemens)
B.
Inhibition av bovint trombin, NPU21558
Berichrom® Antithrombin III (Siemens)
Stachrom® AT III (Stago)
m.fl. reagenstillverkare...
Samtliga reagens innehåller heparin (ofta av okänd typ
och konc.).
Antitrombin: uppdelat på material och metoder
Material
Anti-Xa-metoder
Anti-IIa metoder
Alla
Koag 96
0,83 kIE/L
CV = 5,8 %
0,85 kIE/L
CV = 6,7 %
0,83 kIE/L
CV = 6,2 %
Koag 97
0,33 kIE/L
CV = 10,7 %
0,36 kIE/L
CV = 10,2 %
0,33 kIE/L
CV = 11,3 %
Koag 98
0,39 kIE/L
CV = 9,1 %
0,41 kIE/L
CV = 10,8 %
0,40 kIE/L
CV = 9,8 %
Equalis: Antitrombin 2014
anti-FXa CV (%)
anti-IIa CV (%)
20
18
16
CV (%)
14
12
10
8
6
4
2
0
Equalis utskick 2014
Equalis: Fibrinogen
Equalis: Resultat för fibrinogen
Mätprincip Clauss fibrinogenmetod:
En standardiserad mängd trombin blandas med testplasman
och tiden till ett koagel bestäms.
Fibrinogen
Trombin
37˚C
Fibrinkoagel
Koagulationstiden är omvänt proportionell mot
fibrinogenkoncentrationen.
Kalibreras med en referensplasma som analyseras i en
spädningsserie (ställd mot IS).
Samtliga deltagare med fibrinogen
Metod/reagens
Utskick 2014:01 Utskick 2015:01
Dako polyklonal antikropp
1
1
Dade Thrombin
37
44
Fibrinogen C
5
5
Fibri-Prest
3
2
Multifibren U
2
-
QFA Fibrinogen
11
8
STA Fibrinogen
8
11
STA Liquid Fib
-
2
67
73
Totalt antal lab
Resultat fibrinogen 2014
CV (%)
(alla med Clauss-metod i samma metodgrupp)
Equalis utskick 2014
Fibrinogen, ”problem 1”
Metodberoende resultat
• Majoritetsreagenset får stor inverkan på
totalmedelvärdet (Dade Thrombin 44/73 lab)
• Mindre vanliga reagens ”avviker” >2SD (utan
möjlighet att korrigera - metodberoende)
• Vi borde kanske ha fler metodgrupper?
– Men vilka?
Fibrinogen: uppdelat på material och metod
Medelvärden (g/L) och medel-CV för samtliga användare och utskick
CV ej beräknat vid ≤5 lab
Material
Dade
Thrombin QFA Fib
STA Fib
Fib C
FibriPrest
STA
Liquid
Dako
(imm)
Koag 96
2,19
2,03
2,49
CV=5,0% CV=7,0% CV=5,0%
1,98
2,27
2,61
2,67
Koag 97
1,50
1,55
1,72
CV=6,4% CV=9,0% CV=3,9%
1,56
1,63
1,70
1,80
Koag 98
1,53
1,58
1,77
CV=6,6% CV=5,8% CV=4,5%
1,56
1,63
1,78
1,89
KOAG 96 är en kommersiell normalplasma med angiven fibrinogen på 2,64 g/L
(acceptansgränser på 2,38 – 2,90 g/L)
Resultat fibrinogen 2014:
tre största metodgrupperna (n>5)
Fibrinogen, ”problem 2”
Vad är korrekt referensintervall?
• Intervallet 2 – 4 g/L generellt accepterat
– Enkelt och bra, inte varit i fokus tidigare…
– Undre gräns nu av särskilt intresse – finns riktlinjer för
fibrinogensubstitution vid olika situationer…
• Tillverkarna egna ref. intervall kan variera
– Spänner över 1,7 – 4,2 g/L
– Rekommenderar lokalt etablerade intervall
• Om 2-4 g/L är allmänt accepterat i vårdprogram etc.
så stämmer det inte med verkligheten…
Summering: APTT, Antitrombin och Fibrinogen
• Tre material har använts 2014 (KOAG96, KOAG97 och KOAG98)
• APTT
– Tre metod/reagensgrupper
– CV mellan 2 – 6 % uppdelat på metod och material
• Antitrombin
– Sju olika reagens fördelat på två metodgrupper (IIa och Xa)
– Ingen skillnad på metodgrupper, CV 6 – 11 %
• Fibrinogen
–
–
–
–
En metodgrupp (”trombininducerad”), CV 8 – 11 %
CV mellan 4 – 9 % uppdelat på metod och material
Nya metodgrupper? (metodberoende resultat)
Referensintervallen?