Lymfocytpopulationer, Kvantifiering Med Flödescytometri (FCM)

1 (3)
2015-04-15
Klinisk immunologi/transfusionsmedicin
Lymfocytpopulationer, Kvantifiering Med
Flödescytometri (FCM)
Följande standardpaneler av lymfocytanalyser utförs vid Klinisk
immunologi, Huddinge:
BASAL LYMFOCYTANALYS
Lymfocytprofil: CD3, CD19 och CD16/56
Används för att få en allmän uppfattning om nivåerna av T-, B-lymfocyter
och NK-celler vid misstänkt immunbrist, efter behandling med biologiska
läkemedel som t.ex. Rituximab eller när man önskar följa rekonstitutionen
av immunsystemet efter en stamcellstransplantation.
T-lymfocyter: CD3, CD4, CD8 samt kvot CD4/CD8
Analysen används bl.a. för att följa behandling och sjukdomsaktivitet vid
HIV-infektion, där framför allt mängden och andelen CD4+ lymfocyter är
viktiga. CD3 uttrycks på alla T lymfocyter, CD4+ lymfocyter tillhör Thjälparpopulationen (TH) och CD8+ lymfocyter är huvudsakligen
cytotoxiska T-lymfocyter (TC).
UTVIDGAD T-LYMFOCYTANALYS
Aktiverade T-lymfocyter: HLA-DR, CD4 och CD8
Analysen används för att uppskatta graden av aktivering av TH- och TC lymfocyter. HLA-DR är ett transplantationsantigen, klass II, som
uppregleras vid aktivering av immunsystemet.
Naiva/minnes T-lymfocyter: CD45RA/CD45RO, CD4 och CD8
CD45RA är en markör för naiva T-lymfocyter, CD45RO är en markör för
minnes T-lymfocyter. Dessa markörer kombineras med markörer för THoch TC -lymfocyter för att få information om balansen mellan naiva och
minnes-lymfocyter i de båda populationerna.
2 (3)
Regulatoriska T-lymfocyter: CD25Hi, CD127, CD3 och CD4
Analysen avser att detektera populationen CD4+ T regulatoriska celler
som uttrycker transkriptionsfaktorn FOXP3, med flödescytometrisk analys
av ytproteiner. CD25 används som en surrogatmarkör för denna
population, där de CD4-positiva T-celler som uttrycker den högsta nivån
av interleukin-2 receptorn, approximativt, utgör Treg populationen. För att
öka analysens specificitet, används även CD127, vilken Treg-celler
uttrycker i låg nivå.
FITMAN
FITMAN är en internationellt standardiserad panel för immunfenotypning
av T-lymfocyter. CD4+ (TH) respektive CD8+ (TC) T-lymfocyter delas in i
naiva, effektor- samt två typer av minnesceller, baserat på uttrycket av
ytmarkörerna CD45RA/CD45RO och CCR7. CD4-positiva minnesceller
delas dessutom in i Th1, Th2 och Th17-celler, baserat på uttrycket av
kemokinreceptorerna CCR6 och CXCR3. Slutligen analyseras uttrycket av
två aktiveringsmarkörer (HLA-DR och CD38) på både CD4+och CD8+ Tlymfocyter.
UTVIDGAD B-LYMFOCYTANALYS
B-lymfocyter: CD19 CD27, CD21, CD38, IgM och IgD
Analysen används bl.a. för att bidra till klassifikationen av immundefekter
särskilt s.k. Common Variable Immunodeficiency (CVID) som
karaktäriseras av nedsatt antikroppsproduktion. Följande subpopulationer
av CD19+ B-lymfocyter analyseras:
−
−
−
−
−
−
−
Naiva B: IgD+, CD27Marginal zons B: IgD+, CD27+
Klass-switchade minnes B: IgD-, CD27+
IgM+CD21-: IgM+, CD21IgM+CD21+: IgM+, CD21+
Transitionella B: CD38++, IgM++
Plasmablaster: CD38+++, IgM-
3 (3)
Vid CVID kan avsaknad av switchade B-lymfocyter ses som ett tecken på
defekt utmognad och differentiering. Aktiverade B-lymfocyter ger normalt
upphov till antikroppsproducerande plasmaceller, vars förstadier kan
observeras i blodet som plasmablaster. Transitionella B-lymfocyter är
omogna celler som nyligen lämnat benmärgen. Marginal zons Blymfocyter är T cells-oberoende B-lymfocyter som kan producera IgM och
lågaffina IgG antikroppar som svar på t.ex. polysackarider.
Tilläggsanalyser
Ett antal flödescytometriska specialanalyser finns uppsatta i klinisk rutin
och utförs i första hand vid misstanke om vissa specifika
immunbristsyndrom:
Hyper IgM syndrom typ I: analys av CD40L på T-celler efter aktivering.
ICOS-defekt: analys av ICOS på T-celler efter aktivering.
Hyper IgE (Jobs) syndrom: analys av Th17-celler.
Autoimmunt lymfoproliferativt syndrom (ALPS): analys av α/β och γ/δ Tceller, med bestämning av andelen CD4- CD8- ("dubbelnegativa") α/β+ Tceller av populationen CD3+ lymfocyter.
MHC klass I defekt: analys av HLA-ABC (klass I) på lymfocyter.
Bare Lymphocyte Syndrome (MHC klass II defekt): analys av HLA-DR på
lymfocyter.
T cell receptor-Vβ repertoar: För att undersöka om det skett en expansion
av specifika T-lymfocytkloner som kan ses vid superantigenaktivering
(Toxic shock syndrome) eller vid misstanke om att T-lymfocytrepertoaren
är begränsad, som t.ex. vid Omenn’s syndrom. Analysen utförs med
specifika Vβ antikroppar och flödescytometri.